Orientador: Ida Maria Foschiani Dias Batista / Coorientador: Andrea de faria FernandesBelone / Coorientador: Ana Paula Fávaro Trombone Garlet / Banca: Luciane Dias-Melicio / Resumo: A doença de Jorge Lobo é uma infecção crônica, que afeta a pele e tecidos subcutâneos, cujo agente etiológico é o fungo Lacazia loboi. Dependendo da localização das lesões, pode ser classificada como localizada, multifocal ou disseminada e no que diz respeito aos aspectos imunológicos, estudos relatam predominância do perfil Th2 nos pacientes, além de maior frequência de células positivas para TGF-β e IL-10 no infiltrado inflamatório presente nas lesões. Porém, com a descoberta de outros perfis como Treg e Th17, outras subpopulações podem estar envolvidas na imunopatogênese da doença. Diante disso, com o intuito de explicar a imunorregulação entre estas subpopulações, este estudo teve por objetivo avaliar o papel das células Treg, Th1, Th2 e Th17, por meio da expressão de mRNA. No total, 114 amostras [pacientes portadores de lesão única (55), pacientes portadores de lesões múltiplas (47) e controles saudáveis (12)] foram avaliadas quanto a expressão gênica de alvos relacionados aos perfis Th1 (T-bet, IFN-γ), Th2 (GATA3, IL-5, IL-4, IL-13, IL-33), Th17 (IL-17F) e T regulatório (TGF-β1, FoxP3, CTLA4, IL-10). Os resultados obtidos neste estudo demonstraram expressão significativamente maior de TGF-β1, IL-10, CTLA4, FoxP3, T-bet e IL-17F, e significativamente menor de GATA3 e IL-4 em todos os portadores da doença avaliados. Adicionalmente, ao avaliar a expressão entre os grupos de lesão única (forma localizada) e lesões múltiplas (formas multifocais e disseminadas), TGF-β1 e IL-5 apresentaram expressão significativamente maior nos pacientes com lesão única e múltiplas, respectivamente. Em resumo, constatamos que a ação desta população está relacionada à capacidade de inibir a resposta antifúngica modulando principalmente a expressão de citocinas envolvidas na proteção, tais como, IFN-γ e IL-17F / Abstract: Jorge Lobo's disease is a chronic disease that affect the skin and subcutaneous tissues, whose etiologic agent is the fungi Lacazia loboi. Depending on localization of lesions, it can be classified as localized, multifocal or disseminated. In respect to immunologic aspects, previous studies show the predominance of Th2 profile in patients, in addition to more frequent TGF-β and IL-10 positive cells in the inflammatory infiltrate present in lesions. However, the increased understanding about T regulatory (Treg) and Th17profiles suggest that other subpopulation of cells can be involved in the immunopathogenesis of Jorge Lobo's disease. Aiming at explaining the immunoregulation caused by these subpopulations, this study had as objective to evaluate the role of Treg, Th1, Th2 and Th17, through mRNA expression. A total of 114 samples [single lesion patients (55), multiple lesion patients (47) and healthy controls (12)] were evaluated by gene expression of targets associated to Th1 (T-bet, IFN-γ), Th2 (GATA3, IL-5, IL-4, IL-13, IL-33), Th17 (IL-17F) and T regulatory (TGF-β1, FoxP3, CTLA4, IKZF2, IL-10) profiles. The results obtained in this study demonstrated significant higher expression of TGF-β1, IL-10, CTLA4, FoxP3, T-bet and IL-17F, and significant lower expression of GATA3 and IL-4 in all patients. Additionally, the expression comparing single lesions (localized form) and multiple lesions (multifocal and disseminated forms) patients showed significant higher levels of TGF-β1 and IL-5, respectively, in single and multiple lesions patients. In summary, the role of the Treg population is associated with inhibition of the antifungal activity, thus modulating mainly the expression of cytokines associated protection against fungal infection, such as IFN-γ and IL-17F / Mestre

Orientador: João Tadeu Ribeiro Paes / Banca: Edislaine Barreiros de Souza / Banca: Márcia Zilioli Bellini / Resumo: As pesquisas com células-tronco têm avançado expressivamente e ocupam um papel de destaque no contexto do novo ramo terapêutico que se convencionou denominar de medicina regenerativa. A abundância e facilidade de obtenção do tecido muscular têm permitido a ampliação dos estudos acerca de seu potencial como fonte de células-tronco mesenquimais. Neste sentido, diferentes metodologias têm sido propostas para a obtenção de células-tronco mesenquimais oriundas do tecido muscular (CTDM), objetivando cultivo e aplicação clínica em medicina humana e veterinária. Um aspecto importante a ser considerado nos diversos protocolos de isolamento de células-tronco mesenquimais refere-se ao emprego rotineiro da colagenase de origem bacteriana (Clostridium histolyticum). O emprego de reagentes xenobióticos, como a colagenase, rotineiramente empregados, obedecem às recomendações da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA - Brasil), que preconiza a não utilização desses produtos no cultivo de células destinadas à terapia celular em pacientes humanos, uma vez que podem conter agentes infecciosos e contaminantes capazes de desencadear severas reações imunológicas. Neste contexto, objetivou-se, neste estudo, a proposição de novas metodologias a fim de substituir o emprego de xenobióticos no processo de obtenção CTDM. Para tanto, foram comparados os métodos de digestão enzimática (colagenase), dissociação mecânica e explante, em diferentes meios de cultura. O conjunto de resultados mostra que as técnicas de dissociação mecânica e explante são metodologias... / Abstract: The researches with stem cells have advanced significantly and take a prominent role in the context of the new treatment branch that has been conventionally called of regenerative medicine. The abundance and ease of obtaining muscle tissue have allowed the expansion of studies on its potential as a source of mesenchymal stem cells. In this sense, different methodologies have been proposed for obtaining mesenchymal stem cells derived of muscle tissue (SCDM), aiming cultivation and clinical application in human and veterinary medicine. An important aspect to be considered in the various protocols of isolation of mesenchymal stem cells refers to the routine use of bacterial collagenase (Clostridium histolyticum). The use of xenobiotic reagents, such as collagenase, contrasts with the recommendations of the National Health Surveillance Agency (ANVISA - Brazil), which recommends the avoidance of the use of these products in the cultivation of cells destined for cell therapy in human patients, since which may contain infectious agents and contaminants that are capable of triggering severe immunological reactions. In this context, we aimed in this study to propose new methods to replace the use of xenobiotics in the process of obtaining SCDM. For this end, the methods of enzymatic digestion (collagenase), mechanical dissociation and explant were compared in different culture media. The set of results shows that the techniques of mechanical dissociation and explant are viable methodologies for replacement of collagenase procedures for obtaining SCDM. These new methodological... / Mestre

Orientador: Maria das Graças Sajo / Coorientador: Fábio de Barros / Banca: Sandra Maria Carmello Guerreiro / Banca: Adelita Aparecida Sartori Paoli / Resumo: A família Orchidaceae compreende cerca de 25.000 espécies distribuídas em cinco subfamílias. Os representantes terrícolas constituem cerca de 20% das orquídeas e encontramse incluídos principalmente na subfamília Orchidoideae, dentro da qual se encontra a tribo Cranichideae. No Brasil a tribo Cranichideae possui representantes das subtribos Cranichidinae, Goodyerinae e Spiranthinae. No presente estudo foram analisados os órgãos vegetativos das seguintes espécies: Cranichis candida e Prescottia oligantha (Cranichidinae), Microchilus arietinus e Zeuxine strateumatica (Goodyerinae), Cyclopogon apricus, C. congestus, C. variegatus, Mesadenella cuspidata, Pteroglossa roseoalba e Sauroglossum nitidum (Spiranthinae), visando apontar caracteres estruturais relacionados ao hábito terrestre e potencialmente úteis na delimitação taxonômica do grupo. As raízes estudadas constituem, proporcionalmente, o órgão mais desenvolvido da planta e apresentam características que podem auxiliar na absorção/retenção de água, como a ocorrência de um sistema velame/exoderme, bem como a presença de tilossomos nas Cranichidinae e Spiranthinae. As folhas são portadoras de mesofilos estreitos e homogêneos, recobertas por epiderme unisseriada e revestidas por cutículas finas. Os feixes condutores da nervura central são envolvidos por células parenquimáticas e as células do xilema se dispõem ao pares ou em forma de V invertido, como nas demais orquídeas da tribo Cranichideae / Abstract: Orchidaceae comprises ca. 25.000 species currently divided in five subfamilies. Terrestrial species constitute almost 20% of the family and are included mainly in the subfamily Orchidoideae, to which belong the tribe Cranichideae. In Brazil Cranichideae is represented by species of subtribes Cranichidinae, Goodyerinae and Spiranthinae. In this study, vegetative organs of the following species were analised: Cranichis candida and Prescottia oligantha (Cranichidinae), Microchilus arietinus and Zeuxine strateumatica (Goodyerinae), Cyclopogon apricus, C. congestus, C. variegatus, Mesadenella cuspidata, Pteroglossa roseoalba and Sauroglossum nitidum (Spiranthinae). The aims were to find structural features related to the terrestrial habit and potentially useful in the taxonomic delimitation of the group. The roots are, proportionally, the most developed organ of the plant, showing characteristics that might help in absorbing or retaining water, such as: velamen/exoderm system, in all species, and tilossomes, in the Cranichidinae and Spiranthinae representatives. Leaves possess an one-layered epidermis covered by a thin cuticle and a narrow and homogeneous mesophyll. Vascular bundles of the midrib are enclosed by parenchymatic cells and the xylem conducting cells are organised in pairs or "inverted V", as in other Cranichideae / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-28Bitstream added on 2014-06-13T20:00:29Z : No. of bitstreams: 1 llanos_jc_dr_botfm.pdf: 970022 bytes, checksum: 2c47a2f1805ca2c263974e2473ecb5a7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Para melhor compreender as alterações hidro-eletrolíticas, metabólicas e nutricionais em animais de grande porte submetidos a ressecções intestinais extensas e transplante intestinal, propusemos o presente estudo no intuito de se estabelecer um modelo experimental para a Síndrome do Intestino Curto e transplantes intestinais em suínos. MÉTODO: Quarenta e dois porcos Landrace - Large White foram ressecados e divididos em cinco grupos: Grupo 1 (n = 6) 80 %ressecção intestinal; Grupo 2 (n = 6), ressecção intestinal total; Grupo 3 (n = 6) ressecção intestinal total e de cólon parcial incluindo válvula ileocecal; Grupo 4 (n =7) ressecção intestinal total e transplante intestinal sem imunossupressão e Grupo 5 (n = 5) ressecção intestinal total e transplante intestinal com utilização de tacrolimo e micofenolato de sódio como imunossupressores. O tacrolimo foi administrado por via oral na dose de 0,2 mg/kg/dia e o micofenolato sódico na dose de 15 mg/kg/dia. O nível sérico do tacrolimo foi ajustado para 15-20 ng/ml. O tempo de acompanhamento dos grupos 1 e 2 foi de 84 dias, enquanto nos grupos 3, 4 e 5 foi de aproximadamente 3 semanas. A avaliação pós-operatória incluiu peso semanal, avaliação clinica e análise bioquímica (sódio, potássio, cálcio, glicemia, uréia, creatinina, triglicérides, colesterol total, proteínas totais, albumina e leucograma). Foi realizada endoscopia convencional com biópsia de enxerto semanal para avaliar a rejeição. RESULTADOS: Grupo 1 ganhou peso corpóreo sugerindo adaptação intestinal, os grupos 2 e 3 perderam peso mostrando inadequada adaptação à ressecção intestinal. Os porcos do grupo 4 e 5 morreram de rejeição celular aguda grave e sepse, respectivamente. Só 1 animal no grupo 5 foi à óbito por intussuscepção... / Large animals were submitted to extensive small bowel resection and intestinal transplant in the intention of establishing an experimental model for the Short bowel Syndrome and small bowel transplantation in swine. METHOD: Forty - two Landrace - Large White pigs were resected and divided in five groups: Group 1 (n = 6) 80% intestinal resection; Group 2 (n = 6), total intestinal resection; Group 3 (n = 6) total intestinal resection including ileocecal valve; Group 4 (n = 7) total intestinal resection and small bowel transplantation without immunosuppression and Group 5 (n = 5) total intestinal resection and small bowel transplantation with the use of immunosuppressant. Tacrolimus and mycophenolic acid was administered orally in the dose of 0,2 mg/kg/day and mycophenolic in the dose of 15 mg/kg/day. The level of tacrolimus was adjusted to 15-20 ng/ml. The follow-up of groups 1 and 2 was of 84 days, while in groups 3, 4 and 5 it was approximately 3 weeks. The postoperative evaluation included weekly control weight, clinical status and biochemical analysis (sodium, potassium, calcium, glycemia, urea, creatinine, triglycerides, total cholesterol, total proteins, albumin, and leukocyte count). Conventional endoscopies were performed weekly for graft biopsies to assess rejection. RESULTS: Group 1 gained weight suggesting small bowel adaptation, groups 2 and 3 lost weight, showing inadequate adaptation after resection. The pigs of group 4 and 5 died of acute cellular rejection and sepses, respectively. Only one animal in group 5 died by intussusception. Overall survival in groups 1, 2, 3, 4 and 5 at 30 days was 100 %, 100 %, 0 %, 0 % and 20 %, respectively. The medium survival in group 4 and 5 was 14 and 16 days, respectively. CONCLUSION: The evaluation of the groups allowed the following conclusions: 80% of small bowel resection did not allow the induction of short bowel syndrome... (Complete abstract click electronic access below)

A insuficiência hepática aguda resulta da perda súbita das funções vitais do fígado em conseqüência da perda maciça do tecido hepático. Em muitos casos, o transplante de fígado de urgência é o tratamento definitivo, apesar da capacidade regenerativa do fígado. Os mecanismos da regeneração envolvem intricadas vias de regulação, com ativação de fatores de crescimento e citocinas. A terapia celular com hepatócitos e células tronco da medula óssea tem sido proposta como alternativa terapêutica, mas seu emprego permanece no campo experimental. O presente estudo teve por objetivo investigar os efeitos da terapia com células imobilizadas em microcápsulas de alginato de sódio na sobrevivência e na regeneração hepática em ratos Wistar machos adultos submetidos à insuficiência hepática aguda. Na primeira fase foi realizada a padronização de modelo de insuficiência hepática aguda por hepatectomia de 85% ou 90% com janela terapêutica adequada ao estudo da terapia celular. A segunda fase teve por objetivo avaliar os efeitos da terapia com células HepG2 e células da medula óssea total (MOT) e fração mononuclear (FM), contidas em microcápsulas de alginato de sódio colocadas no peritônio, sobre os níveis de glicose e lactato sanguíneos e sobre a sobrevida em 10 dias. Na fase 3, foram avaliados os efeitos da terapia celular com MOT e FM sobre a proliferação hepatocitária e os níveis séricos de citocinas e de fatores de crescimento nas primeiras 72 horas após hepatectomia de 90%. Na fase 1, mesmo utilizando ketamina e xilazina como anestésico e independentemente da suplementação de glicose, hepatectomia de 85% resultou em sobrevida de 50% em 72 horas, não adequada a um modelo de insuficiência hepática aguda. Hepatectomia de 90% sob anestesia com ketamina e xilazina determinou aumento da mortalidade, com a maioria dos óbitos ocorrendo nas primeiras 6 horas do pós-operatório. A troca do regime anestésico para isoflurano reduziu o tempo de recuperação anestésica e aumentou a sobrevida imediata permitindo uma janela terapêutica adequada. A sobrevida foi de 26,7% às 72 horas e de 6,7% aos 10 dias. Na fase 2 foram administradas microcápsulas contendo células em ratos submetidos a hepatectomia de 90%. O transplante de células da medula óssea aumentou a sobrevida em 10 dias de forma significativa em relação ao grupo sem células (MOT 1x106 células: 63,6%, P=0,002; FM 1x106: 57,1%, P=0,001 e FM 3x107: 54,5%, P=0,003). A sobrevida (30,8%) dos animais tratados com HepG2 não foi diferente do grupo sem células. Na terceira fase, às 72 horas após a hepatectomia, o grupo sem células apresentou peso dos lobos remanescentes e razão de massa hepática significativamente superiores aos dos animais que receberam MOT (P=0,001 e P=0,020) e FM (P=0,002 e P=0,008). Não houve diferença estatística significativa no número de hepatócitos em mitose e nos níveis de IL-6 entre os grupos em todos os momentos avaliados. Somente às 12 horas houve diferença significativa dos níveis de TGF-beta entre os grupos, sendo maiores no grupo sem células (P=0,036). Os valores do PDGF-BB às 48 horas do grupo sem células foram significativamente inferiores aos dos ratos tratados com FM (P=0,017). Esses resultados nos permitem concluir que hepatectomia de 90% de ratos Wistar anestesiados com isoflurano possibilita janela terapêutica adequada ao estudo da terapia celular. A terapia com células da medula óssea, imobilizadas em microcápsulas de alginato de sódio resulta em aumento da sobrevida de ratos submetidos à hepatectomia de 90%. Essa terapêutica reduziu o ganho de massa dos lobos remanescentes, mas não modificou a regeneração hepatocitária e os níveis de IL-6, de TGF-beta e de PDGF-BB durante as primeiras 72 horas após o procedimento. / Acute liver failure is caused by the sudden loss of liver vital functions due to massive loss of hepatic tissue. In most cases, emergency liver transplant is the curative treatment, despite liver’s regenerative capacity. Mechanisms of liver regeneration involve intricate regulatory pathways, with the recruitment of growth factors and cytokines. Cell therapy, either with hepatocytes or with bone marrow cells, has been proposed as a therapeutic option but remains in the experimental area. The present study aimed to investigate the effects of the therapy with cells immobilized in alginate microcapsules on the survival and hepatic regeneration of adult male Wistar rats with acute liver failure. On the first phase the acute liver failure model by 85% or 90% hepatectomy was standardized to achieve an adequate therapeutic window to study the mechanisms and effects of cell therapy. The second phase aimed to evaluate the effects of therapy using Hep G2 cells and bone marrow cells, either whole bone marrow (WBM) or mononuclear fraction (MF), in alginate microcapsules implanted in the peritoneum, on glucose and lactate levels, and 10-day survival. On phase 3, the effects of cell therapy with WBM and MF on hepatocyte proliferation and serum levels of cytokines and growth factors were evaluated in the first 72 hours after 90% hepatectomy. On phase 1, using ketamine and xylazine as anesthetic, despite glucose supplementation, 85% hepatectomy resulted in 50% survival at 72 hours, which is not adequate for a model of acute liver failure. Ninety-percent hepatectomy under ketamine and xylazine anesthesia resulted in increased mortality, although in the first 6 hours postoperatory. The change in anesthetic regimen for isofluorane reduced recovery time and increased early survival, allowing for an adequate therapeutic window. Survival was 26.7% at 72 hours and 6.7% at 10 days. On phase 2 microcapsules containing cells were implanted in rats after 90% hepatectomy. Bone marrow cell transplantation significantly increased 10-day survival over empty capsules group (WBM 1x106 cells: 63.6%, P=0.002; MF 1x106: 57.1%, P=0.001 and MF 3x107: 54.5%, P=0.003). Survival of animals treated with HepG2 (30.8%) was not different from empty capsules group. On the third phase, 72 hours after hepatectomy, empty capsules group showed significantly increase in the weight of remnant liver lobe and hepatic mass ratio compared to WBM (P=0.001 and P=0.020) and MF (P=0.002 and P=0.008). There was not statistic difference in the number of mitotic hepatocytes and in the serum levels of IL-6 between groups in any of the time points analyzed. Serum levels of TGF-beta were higher in the empty capsules group at 12 hours only (P=0.036). Serum levels of PDGF-BB in this group were significantly lower (P=0.017) than those from the MF group at 48 hours posthepatectomy. These findings suggest that 90% partial hepatectomy in Wistar rats anesthetized with isoflurane provides an adequate therapeutic window to study the effects and mechanisms of cell therapy. Cell therapy with bone marrow cells microencapsulated in alginate beads leads to increased survival in rats with 90% partial hepatectomy. This therapy reduced the weight of remnant lobes but did not changed hepatocyte regeneration and serum levels of IL-6, TGF-beta and PDGF-BB in the first 72 hours after surgery.

A associação das células-tronco (CT) com os biomateriais prometem ser os protagonistas para o futuro da medicina regenerativa no tratamento de lesões de tecidos e órgãos. No presente trabalho, as células-tronco foram cultivadas em matrizes construídas pela técnica de electrospinning, usando o polímero poli-D,L-ácido láctico (PDLLA) associado ou não à biomassa da microalga Spirulina (PDLLA/Sp), que possui componentes bioativos de interesse para a engenharia de tecidos (ET). As análises físico-químicas realizadas foram a avaliação da morfologia, do diâmetro das fibras, da degradabilidade, da rugosidade, do teor de solvente residual, do ângulo de contato com água, entre outros. A adesão e a proliferação celular, bem como a citotoxicidade do biomaterial também foram avaliados. As nanofibras obtidas apresentaram-se sem beads e com características semelhantes às da matriz extracelular natural (MEC) em termos de propriedades mecânicas e topográficas. Nos testes biológicos, verificou-se que as CTs aderiram mais e tiveram maior viabilidade nos scaffolds de PDLLA/Sp, quando comparado com as matrizes de nanofibras de PDLLA. Ambos os biomateriais mostraram-se atóxicos para as CTs. Pode-se concluir que as matrizes desenvolvidas neste trabalho apresentam as características necessárias de um novo biomaterial adequado para uso na ET. / The association of stem cells (SCs) with biomaterials promises to be the protagonist for future regenerative medicine in the treatment of tissue and organ lesions. Stem cells were cultivated in scaffolds constructed by the electrospinning technique, using poly-D,L-lactic acid (PDLLA) associated or not with Spirulina biomass (PDLLA/Sp), which has bioactive components of interest for tissue engineering (TE). Physicochemical analyses were performed, such as morphology, fiber diameter, degradability, residual solvent, roughness, contact angle with water, among others. SC adhesion and proliferation and scaffold cytotoxicity were also evaluated. Nanofibers without beads and with characteristics similar to the natural extracellular matrix (ECM) in terms of mechanical and topographical properties were obtained. In biological tests it was found that SCs adhered more and had greater viability in the PDLLA/Sp molds, when compared to the PDLLA scaffolds. The scaffolds were shown to be atoxic for the SCs. It can be concluded that the scaffolds developed in this work have the characteristics to be a new biomaterial suitable for use in TE.

A doação de órgãos e tecidos para pesquisa é fundamental para uma melhor compreensão das doenças que afetam o sistema nervoso central. No estudo das doenças mentais, a pesquisa com tecido cerebral humano tem se tornado essencial para a investigação de patologias centrais através de métodos de pesquisa cada vez mais sofisticados. Mesmo assim, pouco se sabe sobre o que as pessoas que sofrem destas doenças pensam sobre a doação de órgãos e tecidos para pesquisa. Portanto, nosso objetivo foi descobrir quais são as opiniões e atitudes de pessoas que sofrem de transtorno bipolar – e seus familiares – sobre a doação de órgãos, especialmente quando a finalidade é pesquisa. Com o objetivo de investigar o que já se sabia sobre o comportamento do brasileiro frente à prática da doação de órgãos e tecidos para pesquisa, a primeira parte deste trabalho compreende uma revisão sistemática sobre o tema nas principais bases de dados (Scopus, Medline, Lilacs, Web of Science). Na segunda, foi conduzido um estudo qualitativo com entrevistas semiestruturadas em profundidade sobre doação de órgãos e tecidos para pesquisa. Os participantes possuíam diagnóstico de transtorno bipolar e estavam sendo tratados em um serviço terciário de saúde no sul do Brasil. Foi utilizada amostragem teórica. Após atingir saturação, dois casos discrepantes e os familiares dos pacientes foram incluídos para controle de qualidade. A grounded theory de Strauss & Corbin foi o método de análise de dados escolhido. Considerando os resultados da revisão sistemática, não foi possível localizar estudos que abordassem atitudes, opiniões ou conhecimento que o brasileiro pudesse ter sobre doação de tecidos e órgãos para pesquisa no Brasil nas principais bases de dados especializadas. Em relação ao estudo qualitativo, embora todos os participantes tivessem conhecimento sobre doação de órgãos para transplante, eles ficavam surpresos com a ideia da doação para pesquisa. Mesmo assim, após conversar sobre o tema e adquirir um melhor entendimento, a maioria se declarou a favor da doação. Mesmo que os participantes não tivessem conhecimento prévio sobre a doação de órgãos e tecidos para pesquisa, eles manifestaram o desejo de saber mais sobre o tema, sendo o desejo de ajudar outras pessoas e ajudar no avanço da medicina as principais razões para considerar uma doação. Acreditamos que facilitar o acesso do público em geral à doação para pesquisa é fundamental para a construção de um processo de doação ético e racional para os estudos post mortem que utilizam amostras biológicas humanas. / Organ and tissue donation for research is fundamental for the comprehension of central nervous system disorders. In mental illness, brain donation is essential for the biological investigation of central pathology through an ever increasing and progressively sophisticated availability of research means. Nevertheless, little is known regarding the thoughts of people with mental disorders regarding organ and tissue donation for research. Here, our objective was to understand attitudes and opinions of people treated for bipolar disorder – and their relatives – regarding donation in general and especially donation for research. The first part of this dissertation is dedicated to a systematic review focusing organ and tissue donation for research purposes in Brazil in main databases. The second part is a qualitative study using in-depth interviews through a semi-structured guide to gather attitudes and opinions regarding organ and tissue donation for research. Participants had a diagnosis of bipolar disorder, for which they were being treated in a tertiary facility in the south of Brazil. Theoretical sampling was used for recruitment. After we reached saturation, two outliers as well as family members of the participants treated for bipolar disorder were recruited for quality control. Strauss & Corbin’s grounded theory was used as framework for content analyses of the interviews. Considering data provided by the systematic review, there were no studies focusing population knowledge, attitudes or opinions about organ and tissue donation for research purposes in Brazil. Reflecting about data provided by the qualitative part of this dissertation, although all participants were aware of organ donation for transplant, they were surprised that tissue could be donated for research. Nevertheless, once they understood the concept they were usually favorable to the notion. While participants demonstrated a general lack of knowledge on donation for research, they were willing to learn more, with the desire to help others and to help further our knowledge about medical science often cited as motives for donation. We speculate that bridging this knowledge gap in the public can be a fundamental step towards a more ethical postmortem tissue donation process and ultimately for the investigation of central nervous system disorders.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-13T18:57:43Z No. of bitstreams: 1 2014_BrunoAlvarengadosSantos.pdf: 1158725 bytes, checksum: 3089de3267aeb5693a90073be70f3624 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-10-14T12:48:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_BrunoAlvarengadosSantos.pdf: 1158725 bytes, checksum: 3089de3267aeb5693a90073be70f3624 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-14T12:48:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_BrunoAlvarengadosSantos.pdf: 1158725 bytes, checksum: 3089de3267aeb5693a90073be70f3624 (MD5) / Este trabalho comparou seis cadáveres de cães, sem predileção por raça, idade ou sexo, com peso entre 2 e 10 kg, provenientes da Diretoria de Vigilância Ambiental do Distrito Federal, divididos em três grupos aleatórios, cujos sistemas vasculares foram limpos respectivamente com solução salina supersaturada, solução de Larssen modificada e água comum, seguido da conservação com solução de Larssen modificada na proporção de 10% de seu peso corporal,objetivando determinar a durabilidade como modelo para o treinamento cirúrgico. Após seis sucessivos congelamentos e descongelamentos, onde foram realizadas cirurgias visando avaliar a resistência, cor, odor, maleabilidade e grau de autólise tecidual através de análises histológicas de coração, fígado, baço, intestino e encéfalo, ficou determinado que todos os grupos apresentaram boa qualidade para treinamento cirúrgico, permitindo cirurgias de órgãos cavitários até o terceiro descongelamento, cirurgias da conjuntiva bulbar por até quatro descongelamentos e cirurgias ortopédicas por até seis descongelamentos, ficando inviáveis à partir deste ponto, devido ao elevado grau de autólise tecidual. O grupo conservado com solução salina supersaturada se destacou por quase não desprender odor desagradável, além do encéfalo e do coração serem os únicos órgãos que praticamente não apresentarem alterações macro e microscópicas nos três primeiros descongelamentos. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study compared six dog cadavers, with no predilection for breed, age or sex, weighing between 2 and 10 kg, from the Environ mental Monitoring Directory of the Federal District, Brazil. Animals were divided into three random groups, whose vascular systems were cleaned with super saturated saline, modified Larssen solution and common water, respectively, followed by preservation with modified Larssen solution at 10% of body weight, aiming to determine the durability as a model for surgical training. Surgeries were performed in the period between six successive freezing and thawing cycles to evaluate the resistance, color, odor, flexibility and degree of tissue autolysis through histological analysis of heart, liver, spleen, intestine and brain. All the groups showed a good quality for surgical training, allowing cavity organs surgeries until the third thawing, bulbar conjunctiva surgeries until the fourth thawing, 2 orthopedic surgeries for up to the sixth thawing, becoming unworkable from this point, due to the high degree of tissue autolysis. The group of cadavers preserved with super saturated saline solution stood out by hardly giving off unpleasant smell, in addition to the brain and heart are the only organs that practically did not show macroscopic and microscopic changes in the first three thawing cycles.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Ciências Animais, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-05-04T13:47:00Z No. of bitstreams: 1 2014_ThiagoAntoniodeSouzaNascimentoSilva.pdf: 1265182 bytes, checksum: bc533b4f6609c21bd035b31047a5ae61 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2015-05-04T13:57:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_ThiagoAntoniodeSouzaNascimentoSilva.pdf: 1265182 bytes, checksum: bc533b4f6609c21bd035b31047a5ae61 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-04T13:57:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_ThiagoAntoniodeSouzaNascimentoSilva.pdf: 1265182 bytes, checksum: bc533b4f6609c21bd035b31047a5ae61 (MD5) / A qualidade do sêmen é influenciada por diversos fatores tais como os inerentes aos indivíduos, a frequência de coletas, o meio ambiente, a estação do ano, a temperatura, precipitação pluviométrica. Interferindo, diretamente, na qualidade das amostras criopreservadas com reflexos diretos nos índices de concepção das fêmeas inseminadas. Estudos têm demonstrado que o plasma seminal pode favorecer a viabilidade e heterogeneidade da membrana plasmática, motilidade e a fertilidade do sêmen ovino criopreservado. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar o perfil proteico do plasma seminal de carneiros com diferentes níveis de congelabilidade de sêmen e o efeito da adição de plasma seminal de carneiros de alta congelabilidade de sêmen no sêmen de carneiros de baixa congelabilidade de sêmen antes da criopreservação. No capitulo 2 observou-se uma superioridade (P<0,05) do carneiro 1 de alta congelabilidade de sêmen em relação ao carneiro 18 de baixa congelabilidade de sêmen após a descongelação e teste de termo resistência (TTR), baseado nos parâmetros de motilidade, integridade de membrana e integridade de acrossoma. Na avaliação do sêmen fresco não foi observada diferença (P>0,05) em nenhum dos parâmetros analisados entre os dois carneiros. Da mesma forma para a avaliação da fertilidade em monta natural não houve diferença (P>0,05) entre os dois carneiros. Selecionados os carneiros de alta e baixa congelabilidade de sêmen foram caracterizados os perfis proteicos do plasma seminal dos mesmos, determinado por eletroforese bidimensional e a identificação das proteínas foi realizada por espectrometria de massa. Com um total de 23 spots foram identificadas com sucesso. Proteínas como RSVP14, RSVP20, clusterina, glutationa peroxidase, albumina e lipocalina foram exclusivas ou mais expressas no carneiro de alta congelabilidade. Proteínas como as espermadesina Z13, bodesina 2 foram mais expressas no carneiro de baixa congelabilidade. Essas proteínas se apresentam como potenciais marcadores para qualidade do sêmen criopreservado. No capitulo 3 com o objetivo de avaliar a adição do plasma seminal de carneiro de alta congelabilidade no sêmen de carneiros de baixa congelabilidade antes da criopreservação, observou que a adição de plama seminal de carneiros de alta congelabilidade incrementou a qualidade do sêmen criopreservado nos carneiros de baixa congelabilidade (P<0,05), após a coleta do sêmen. Avaliou-se também a forma de adicionar o plasma seminal ao sêmen após a coleta, sua concentração e forma de sua obtenção. O melhor momento para adição do plasma seminal foi ao meio de pré-diluição. Independentemente da sua concentração adicionado ao sêmen, todas as concentrações utilizadas foram superiores (P<0,05) ao tratamento controle (sem adição de plasma seminal). Com relação à sua obtenção, quando adicionado o plasma seminal proveniente de carneiro vasectomizado no sêmen após a coleta, este se mostrou (P<0,05) melhor que o tratamento controle (sem adição de plasma seminal) e de plasma seminal de carneiro inteiro. Os dados apresentados nesse trabalho evidenciam a importância do plasma seminal na criopreservação do sêmen e servem referência para o avanço da criopreservação do sêmen ovino. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The seminal quality vary with many factors like individuality, collections frequency, environment, season of the year, temperature, rainfall. Interfering, directly, in the quality of cryopreserved samples with reflex at conception indices of inseminated females. Studies have demonstrated that seminal plasma can favor the viability and heterogeneity of plasmatic membrane, motility and fertility of cryopreserved ram semen. In this way, the aim of the present work was characterize the protein profile of seminal plasma of rams with different levels of semen congelability and the effect of the addition of seminal plasma of high freezability rams semen in the low freezability semen before cryopreservation. In chapter 2, was observed a superiority (P<0.05) of ram 1 of high freezability semen in relation with ram 18 of low freezbility semen after thawed and TRT, based at motility, membrane integrity and acrosomal integrity. In fresh semen evaluation wasn’t observed difference (P>0.05) in none of analyzed factors between two rams. In the same way to fertility with natural mating wasn’t difference (P>0.05) between the two rams. Selected rams of high and low freezability semen hade theirs characterized protein profile, determined by two-dimensional electrophoresis and the protein identified by mass spectrometry. A total of 23 spots were sucessfully identified. Proteins like RSVP14, RSVP20, clusterin, glutathione peroxidase, albumin e lipocalin were exclusively or more expressive in the high freezability rams semen. Proteins like espermadhesin Z13, bodhesin 2 were more expressive in the low freezability rams semen. Those proteins are like potencial markers to quality of frozen semen. In chapter 3 the aim was evaluate the addition of seminal plasma of high freezability ram semen in semen of low freezability rams semen before cryopreservation, observed that the addition of seminal plasma of high freezability semen increased the quality of cryopreserved semen of low freezability semen (P<0.05), after semen collection. Evaluated also how the seminal plasma was add to the semen after the collection, your concentration and how was obtained. The better moment to add the seminal plasma was at pre-dilution extender. Regardless of concentration, all concentration tested were higher (P<0.05) than control treatment (without seminal plasma). The seminal plasma when collected from vasectomized rams and added to semen after collection showed better (P<0.05) than control treatment (without seminal plasma) and seminal plasma from whole ram. The data presented in this work show the importance of seminal plasma in semen cryopreservation and serve as reference to advance at ram semen cryopreservation.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-11-03T11:20:58Z No. of bitstreams: 1 2006_Daniela Oliveira Brandao.pdf: 802866 bytes, checksum: b6d64ec9d9889cfa0f753bbc6743fa44 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-11-09T12:25:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Daniela Oliveira Brandao.pdf: 802866 bytes, checksum: b6d64ec9d9889cfa0f753bbc6743fa44 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-09T12:25:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Daniela Oliveira Brandao.pdf: 802866 bytes, checksum: b6d64ec9d9889cfa0f753bbc6743fa44 (MD5) Previous issue date: 2006-10-26 / Taxas de blastocisto aceitáveis são obtidas com os sistemas atuais de produção in vitro de embriões. Entretanto, o elevado índice de reabsorção embrionária e descontinuidade de gestação, bem como as variações dos resultados obtidos, diminuem de forma significativa a eficiência da técnica. Na tentativa de minimizar estes dois fatores foi focado nesta tese o desenvolvimento de novas formas de monitoramento dos embriões e simplificação da rotina diária. O primeiro trabalho, desenvolvido para o monitoramento do desenvolvimento embrionário, procura aprofundar o entendimento das perdas embrionárias no período de reconhecimento materno da gestação. Apesar de inúmeras investigações do desenvolvimento e caracterização embrionárias serem constantemente realizadas, estas estão restritas ao embrião até 7 dias de vida ou à gestação avançada. A maioria dos problemas, no entanto, está concentrada no período de reconhecimento materno, seguido da implantação no endométrio, sendo imprescindível a criação de métodos práticos e confiáveis que permitam o monitoramento do desenvolvimento embrionário pós-eclosão. Diante dessa necessidade, foi estabelecido um sistema de cultivo in vitro de embriões bovinos no período pós-eclosão denominado sistema PHD (post hatching development). Nele, embriões produzidos in vitro foram cultivados em túneis de gel de agarose em meio de cultivo modificado e os dados obtidos revelaram que o sistema de cultivo foi capaz de sustentar a diferenciação celular do embrião em trofoblasto, hipoblasto e epiblasto, inclusive com a formação da camada de Rauber, definindo assim o disco embrionário. Este sistema de cultivo representa o primeiro modelo experimental capaz de promover crescimento e diferenciação pós-eclosão in vitro, podendo ser utilizado com sucesso para monitorar o efeito tardio de tratamentos utilizados no sistema de cultivo. Dados preliminares de seu uso para monitorar substâncias tóxicas e expressão gênica foram obtidos e estão relacionados no corpo desta Tese. Adicionalmente ao sistema PHD, um segundo trabalho focou a simplificação e maior padronização da rotina da produção in vitro de embriões, sugerindo para isto, o congelamento e estoque de meios de cultivo prontos para uso. Os resultados obtidos com meios congelados em dois sistemas distintos de produção in vitro (DIAS-Dinamarca e Embrapa- Brasil), mostraram ser possível a produção de embriões em meios previamente congelados, sem que haja prejuízo nas taxas de blastocisto alcançadas. Além de facilitar a laboriosa rotina de produção de meios de cultivo, seu congelamento e estoque permitiram a existência de padronização entre manipulações, dado que a partida dos meios de cultivo utilizados é sempre a mesma. Em conclusão, os dois trabalhos desenvolvidos nesta Tese, um de contribuição científica e o outro aplicado, procuram contribuir em áreas pouco exploradas e deixam claro que existem lacunas a serem investigadas para melhoria dos sistemas atuais da produção in vitro de embriões. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Acceptable blastocyst rates are obtained with the actual systems of in vitro embryo production. However, the high rate of embryonic death and gestation interruption, as much as the broad variation in the obtained results, reduce significantly the technique efficiency. In a trial to minimize both factors, this thesis has focused on developing new monitoring systems and routine work simplification. The first work was developed for monitoring embryo development, in an effort to understand embryos loss in the maternal recognition of pregnancy period. Although several investigations have been focused in embryo development and characterization, these are restricted to the embryo up to 7 days, or to the late gestation. However, most of the problems are concentrated in the maternal recognition period, followed by endometrium implantation, so it is fundamental to create practical and trustable methods for monitoring the post-hatching embryo development. Considering this necessity, a post-hatching culture system denominated PHD (Post Hatching Development) system was established. In this system, in vitro produced embryos were cultured in agarose gel tunnels under a modified culture medium and the obtained data revealed that it was capable to sustain embryonic cell differentiation in trophoblast, hypoblast and epiblast, including the Rauber´s layer formation, defining the embryonic disc. This represents the first complete experimental model to promote rapid growing and post-hatching differentiation in vitro, able to be successfully used to monitor the late effect of treatments in the culture system. Preliminary data of its use to monitor toxic substances and gene expression were obtained and are described in this thesis. Additionally to the PHD system, a second work focused on the simplification and pattern of in vitro embryo production. For that, we suggested the freezing and stocking of ready-to-use medium. The results obtained in two different systems (DIAS-Dinamarca and Embrapa- Brasil) have shown that it is possible to produce embryos in previously frozen medium without affecting embryo rates. Besides facilitating the laborious routine of medium production, freezing aliquots has allowed to create a pattern among different manipulations, considering that the medium batch was always the same. In conclusion, both works developed in this thesis, one more scientific and the other more applied, try to contribute in non explored areas and clearly show that there are gaps to be investigated for enhancing the results in in vitro embryo production.