Orientador: Vladimir Araujo Opromolla / Resumo: O presente estudo teve como objetivo testar o modelo experimental murino, o camundongo BALB/c, inoculado com o L. loboi, para sua utilização em ensaios terapêuticos, através da determinação de índices de viabilidade, número de fungos, análise histopatológica e aparecimento de leões macroscópicas nos diferentes períodos pós-tratamento. Os medicamentos antifúngicos utilizados nesse trabalho foram itraconazol, terbinafina e terbinafina formulada com a ßciclodextrina. Inocularam-se 128 camundongos BALB/c com o L. loboi por via intradérmica, em ambos coxins plantares posteriores. Os animais foram divididos em quatro grupos de 32 animais. O tratamento com as três drogas foi iniciado 45 dias pós-inoculação e teve duração de 13 meses. Os medicamentos foram administrados por via oral, misturando-se à ração comercial moída. Os medicamentos foram utilizados nas doses de quatro mg/kg do itraconazol e cinco mg/kg da terbinafina. Oito animais de cada grupo foram sacrificados aos quatro, sete, dez e quinze meses após a inoculação. Em cada momento de sacrifício, os coxins plantares foram avaliados clinicamente a procura de alterações macroscópicas e, após essa verificação, coletados para análise histopatológica e determinação do número de fungos e índices de viabilidade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of the present study was to test the murine model, the BALB/c mice inoculated with the Lacazia loboi, for its use in therapeutic essays, using the viability index of the fungi, the number of fungi, the histopathological examination and the appearance of microscopic lesions, as evaluation parameters at different times post-treatment. Itraconazol, terbinafine and terbinafine formulated with ß-cyclodextrin, were the antifungal medications tested. One hundred twenty eight BALB/c mice were intradermally inoculated with L. loboi, into both hind foot pads. The animals were divided in four groups of 32 animals. Treatment was started 45 days post-inoculation and lasted 13 months. The medications were administered orally, mixed to the powdered commercial feed. The itraconazol was used at the dose of 4 mg/kg and the terbinafine at 5 mg/kg. Eight animals of each group were randomly sacrificed at four, seven, ten and fifteen months after inoculation. At each time, both foot pads were clinically evaluated for development of macroscopic lesions and then excised for histopathological examination, viability index determination... (Complete abstract click electronic address below) / Doutor

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014 / Introdução: A doença de Jorge Lobo (DJL) é infecção fúngica crônica de acometimento da pele e há uma prevalência inusitada entre os índios Caiabi, povo que habita a região central do Brasil. Objetivos: 1) Descrever e revisar a epidemiologia da DJL entre os índios Caiabi desde os primeiros relatos até o presente momento. 2) Avaliar e comparar os aspectos histopatológicos e a resposta imune tecidual nas diferentes lesões cutâneas de um mesmo doente, assim como nos nódulos de doentes com formas localizadas e disseminadas. Métodos: 1) Realizada revisão da literatura indexada, de livros e registros de todos os casos da DJL entre os índios Caiabi, desde os primeiros relatos até os dias de hoje. 2) Numa amostra de 24 índios Caiabi com DJL, foram realizados os exames histopatológicos e imunohistoquímicos com marcadores de respostas imunológicas em amostras de diferentes lesões cutâneas num mesmo doente e de nódulos de doentes com formas localizadas e disseminadas. Resultados: 1) O número total de casos da DJL entre os índios Caiabi, desde os primeiros relatos até o presente momento, é de 63. A forma localizada foi significantemente mais presente no sexo feminino e a forma disseminada significantemente mais presente no sexo masculino. 2) Nas diferentes lesões cutâneas (nódulo, úlcera e atrofia), os dados que apresentaram significância estatística (p<0,05) foram: maior presença de células CD68+, CD3+, CD54+ e maior número de fungos no nódulo que na atrofia; maior presença de células CD3+, CD8+, CD20+ e CD25+ na úlcera que na atrofia; maior presença de células CD25+ na úlcera que no nódulo; maior presença de células CD8+ nas formas localizadas que nas formas disseminadas. Discussão e Conclusões: 1) A DJL apresenta uma única e impressionante prevalência entre os índios Caiabi, além de um comportamento distinto entre os sexos, predominando formas disseminadas nos homens e localizadas nas mulheres. 2) A atrofia parece representar uma regressão da atividade da doença e a úlcera parece representar maior atividade imunológica de padrão Th1. Há maior expressão de linfócitos T CD8+ nas formas localizadas, sendo uma das possíveis diferenças de resposta imunológica do hospedeiro que justificam essa apresentação clínica em alguns doentes / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Orientador: Diltor Vladimir Araujo Opromolla / Resumo: A doença de Jorge Lobo é uma micose causada pelo fungo Lacazia loboi (L.loboi), o qual se assemelha filogenética e antigenicamente ao Paracoccidioides brasiliensis (P.brasiliensis). Devido às características epidemiológicas e aos poucos estudos relacionados aos aspectos imunológicos dessa doença, o objetivo desse trabalho foi pesquisar a freqüência dos antígenos HLA de classe I e classe II em 21 pacientes portadores da doença de Jorge Lobo e comparar com população controle. As tipagens HLA de classe I foram realizadas pela técnica de microlinfocitotoxicidade e as de classe II pelo método de PCR-SSP. Como controles, utilizaram-se duas populações: uma do Estado do Acre e outra da população brasileira, segundo os dados publicados no 11th IHW no Japão. Esse trabalho sugere a primeira associação proposta entre antígenos e doença de Jorge Lobo, especificamente com o HLA-DQ3, quando comparados os dados entre pacientes e população brasileira. Contudo, não mostra qualquer tipo de associação quando se comparam pacientes e população do Acre. Acredita-se que, com o aumento do número de pacientes estudados e com a utilização de metodologia para identificação dos diferentes alelos que codificam o fenótipo DQ-3, poderão ser obtidos melhores resultados. / Abstract: Jorge Lobo's disease is a rare mycosis whose causative agent is the Lacazia loboi (L. loboi), a fungi antigenically and philogenetically similar to the Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis). Due to its epidemiological characteristics and the lack of studies related to the immunological aspects of this disease, our objective was to perform HLA class I and II typing in 21 Jorge Lobo's disease patients and compare their frequency with the healthy population. The Class I HLA typing was done through the lymphotoxicity technique, and the class II HLA determined by the PCR-SSP method. Two control populations were used, one from the state of Acre and the Brazilian population data published at the 11 (IHW) in Japan. Our work suggests the first association proposed between antigen and Jorge Lobo's disease, specifically the DQ3-HLA, when patients were compared with Brazilian population. However, no association could be demonstrated when patient were compared with the population from Acre. We believe that a larger sample and the use of a method for identification of phenotype DQ-3 encoding allele would give us more detailed results. / Mestre

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:23:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-30. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:39Z : No. of bitstreams: 1 000853880.pdf: 1851862 bytes, checksum: 828711480dc6e6cc9c37d4388711ad29 (MD5) / A doença de Jorge Lobo é uma infecção crônica, que afeta a pele e tecidos subcutâneos, cujo agente etiológico é o fungo Lacazia loboi. Dependendo da localização das lesões, pode ser classificada como localizada, multifocal ou disseminada e no que diz respeito aos aspectos imunológicos, estudos relatam predominância do perfil Th2 nos pacientes, além de maior frequência de células positivas para TGF-β e IL-10 no infiltrado inflamatório presente nas lesões. Porém, com a descoberta de outros perfis como Treg e Th17, outras subpopulações podem estar envolvidas na imunopatogênese da doença. Diante disso, com o intuito de explicar a imunorregulação entre estas subpopulações, este estudo teve por objetivo avaliar o papel das células Treg, Th1, Th2 e Th17, por meio da expressão de mRNA. No total, 114 amostras [pacientes portadores de lesão única (55), pacientes portadores de lesões múltiplas (47) e controles saudáveis (12)] foram avaliadas quanto a expressão gênica de alvos relacionados aos perfis Th1 (T-bet, IFN-γ), Th2 (GATA3, IL-5, IL-4, IL-13, IL-33), Th17 (IL-17F) e T regulatório (TGF-β1, FoxP3, CTLA4, IL-10). Os resultados obtidos neste estudo demonstraram expressão significativamente maior de TGF-β1, IL-10, CTLA4, FoxP3, T-bet e IL-17F, e significativamente menor de GATA3 e IL-4 em todos os portadores da doença avaliados. Adicionalmente, ao avaliar a expressão entre os grupos de lesão única (forma localizada) e lesões múltiplas (formas multifocais e disseminadas), TGF-β1 e IL-5 apresentaram expressão significativamente maior nos pacientes com lesão única e múltiplas, respectivamente. Em resumo, constatamos que a ação desta população está relacionada à capacidade de inibir a resposta antifúngica modulando principalmente a expressão de citocinas envolvidas na proteção, tais como, IFN-γ e IL-17F / Jorge Lobo's disease is a chronic disease that affect the skin and subcutaneous tissues, whose etiologic agent is the fungi Lacazia loboi. Depending on localization of lesions, it can be classified as localized, multifocal or disseminated. In respect to immunologic aspects, previous studies show the predominance of Th2 profile in patients, in addition to more frequent TGF-β and IL-10 positive cells in the inflammatory infiltrate present in lesions. However, the increased understanding about T regulatory (Treg) and Th17profiles suggest that other subpopulation of cells can be involved in the immunopathogenesis of Jorge Lobo's disease. Aiming at explaining the immunoregulation caused by these subpopulations, this study had as objective to evaluate the role of Treg, Th1, Th2 and Th17, through mRNA expression. A total of 114 samples [single lesion patients (55), multiple lesion patients (47) and healthy controls (12)] were evaluated by gene expression of targets associated to Th1 (T-bet, IFN-γ), Th2 (GATA3, IL-5, IL-4, IL-13, IL-33), Th17 (IL-17F) and T regulatory (TGF-β1, FoxP3, CTLA4, IKZF2, IL-10) profiles. The results obtained in this study demonstrated significant higher expression of TGF-β1, IL-10, CTLA4, FoxP3, T-bet and IL-17F, and significant lower expression of GATA3 and IL-4 in all patients. Additionally, the expression comparing single lesions (localized form) and multiple lesions (multifocal and disseminated forms) patients showed significant higher levels of TGF-β1 and IL-5, respectively, in single and multiple lesions patients. In summary, the role of the Treg population is associated with inhibition of the antifungal activity, thus modulating mainly the expression of cytokines associated protection against fungal infection, such as IFN-γ and IL-17F

Orientador: Ida Maria Foschiani Dias Batista / Coorientador: Andrea de faria FernandesBelone / Coorientador: Ana Paula Fávaro Trombone Garlet / Banca: Luciane Dias-Melicio / Resumo: A doença de Jorge Lobo é uma infecção crônica, que afeta a pele e tecidos subcutâneos, cujo agente etiológico é o fungo Lacazia loboi. Dependendo da localização das lesões, pode ser classificada como localizada, multifocal ou disseminada e no que diz respeito aos aspectos imunológicos, estudos relatam predominância do perfil Th2 nos pacientes, além de maior frequência de células positivas para TGF-β e IL-10 no infiltrado inflamatório presente nas lesões. Porém, com a descoberta de outros perfis como Treg e Th17, outras subpopulações podem estar envolvidas na imunopatogênese da doença. Diante disso, com o intuito de explicar a imunorregulação entre estas subpopulações, este estudo teve por objetivo avaliar o papel das células Treg, Th1, Th2 e Th17, por meio da expressão de mRNA. No total, 114 amostras [pacientes portadores de lesão única (55), pacientes portadores de lesões múltiplas (47) e controles saudáveis (12)] foram avaliadas quanto a expressão gênica de alvos relacionados aos perfis Th1 (T-bet, IFN-γ), Th2 (GATA3, IL-5, IL-4, IL-13, IL-33), Th17 (IL-17F) e T regulatório (TGF-β1, FoxP3, CTLA4, IL-10). Os resultados obtidos neste estudo demonstraram expressão significativamente maior de TGF-β1, IL-10, CTLA4, FoxP3, T-bet e IL-17F, e significativamente menor de GATA3 e IL-4 em todos os portadores da doença avaliados. Adicionalmente, ao avaliar a expressão entre os grupos de lesão única (forma localizada) e lesões múltiplas (formas multifocais e disseminadas), TGF-β1 e IL-5 apresentaram expressão significativamente maior nos pacientes com lesão única e múltiplas, respectivamente. Em resumo, constatamos que a ação desta população está relacionada à capacidade de inibir a resposta antifúngica modulando principalmente a expressão de citocinas envolvidas na proteção, tais como, IFN-γ e IL-17F / Abstract: Jorge Lobo's disease is a chronic disease that affect the skin and subcutaneous tissues, whose etiologic agent is the fungi Lacazia loboi. Depending on localization of lesions, it can be classified as localized, multifocal or disseminated. In respect to immunologic aspects, previous studies show the predominance of Th2 profile in patients, in addition to more frequent TGF-β and IL-10 positive cells in the inflammatory infiltrate present in lesions. However, the increased understanding about T regulatory (Treg) and Th17profiles suggest that other subpopulation of cells can be involved in the immunopathogenesis of Jorge Lobo's disease. Aiming at explaining the immunoregulation caused by these subpopulations, this study had as objective to evaluate the role of Treg, Th1, Th2 and Th17, through mRNA expression. A total of 114 samples [single lesion patients (55), multiple lesion patients (47) and healthy controls (12)] were evaluated by gene expression of targets associated to Th1 (T-bet, IFN-γ), Th2 (GATA3, IL-5, IL-4, IL-13, IL-33), Th17 (IL-17F) and T regulatory (TGF-β1, FoxP3, CTLA4, IKZF2, IL-10) profiles. The results obtained in this study demonstrated significant higher expression of TGF-β1, IL-10, CTLA4, FoxP3, T-bet and IL-17F, and significant lower expression of GATA3 and IL-4 in all patients. Additionally, the expression comparing single lesions (localized form) and multiple lesions (multifocal and disseminated forms) patients showed significant higher levels of TGF-β1 and IL-5, respectively, in single and multiple lesions patients. In summary, the role of the Treg population is associated with inhibition of the antifungal activity, thus modulating mainly the expression of cytokines associated protection against fungal infection, such as IFN-γ and IL-17F / Mestre

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-05-06T22:29:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_ImunomarcacaoTecidualFator.pdf: 3413572 bytes, checksum: 17a3bd5713e19d62a5349c8272cdc173 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-05-08T13:34:31Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_ImunomarcacaoTecidualFator.pdf: 3413572 bytes, checksum: 17a3bd5713e19d62a5349c8272cdc173 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-08T13:34:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_ImunomarcacaoTecidualFator.pdf: 3413572 bytes, checksum: 17a3bd5713e19d62a5349c8272cdc173 (MD5) Previous issue date: 2010 / A doença de Jorge Lobo (DJL) é uma infecção fúngica profunda, causada pelo Lacazia loboi, que acomete preferencialmente homens agricultores, com forma clínica queloidiana e localização nos membros inferiores. A maior incidência é encontrada na Amazônia brasileira. Há poucos relatos sobre a resposta imune tecidual nas lesões dos pacientes. Este estudo objetiva avaliar uma possível participação na patogenia da doença, dos dendrócitos dérmicos fator XIIIa (DD FXIIIa) em lesões cutâneas, através da técnica da imuno-histoquímica. Foram analisados 33 biopsias cutâneas de pacientes com DJL. O grupo controle foi representado por 10 biopsias de pele normal procedente de pacientes sem doenças dermatológicas e por 61 biopsias de pacientes com paracoccidioidomicose (PCM). Os resultados obtidos com a análise dos prontuários revelaram que a DJL acomete principalmente homens (84,8%), agricultores (72,7%), com 46-65 anos (51,5%), procedentes da região nordeste do estado do Pará (51,5%), com forma clínica queloidiana (81,8%) e localização preponderante das lesões nos membros inferiores (45,5). Os valores da contagem de DD FXIIIa nas lesões cutâneas de DJL não foram influenciados pelas variantes de gênero, idade, profissão, procedência, forma clínica e localização das lesões. A quantidade de DD FXIIIa nos pacientes com DJL foi maior do que a encontrada no grupo controle de pacientes com pele sã e no grupo de pacientes com PCM, tanto no aspecto histopatológico de granuloma frouxo (GF), como granuloma bem organizado (GBO). Em virtude dos DD FXIIIa serem considerados precursores das células de Langerhans (CLs), pode-se sugerir que o aumento deles na DJL represente um reservatório dérmico para as CLs epidérmicas e se transformariam nelas continuamente, não permitindo sua diminuição. Já foi demonstrado o aumento de citocinas do perfil Th2 (TGF-β) na DJL e o aumento de DD FXIIIa que é capaz de secretar o fator de TNF-α, observado neste estudo, mostra um predomínio do perfil Th1. Quando há uma coexpressão de citocinas de ambos os perfis na mesma doença, sugere-se a existência de padrões mistos. Então, os resultados obtidos neste trabalho sugerem que a DJL é uma doença espectral, com pólos de resistência e suscetibilidade. O que talvez explique a existência de casos localizados mesmo com longa evolução da doença e casos disseminados como manifestação precoce da DJL. / Jorge Lobo's disease (DJL) is a deep fungal infection caused by Lacazia loboi which mainly affects males farmers, with the clinical form keloid and location of the lower limbs. The highest incidence is found in the Brazilian Amazonia. There are few reports on immune tissue lesions of patients. This study aims to evaluate a possible role in the pathogenesis of the disease by factor XIIIa dermal dendrocytes (FXIIIa DD) in skin lesions, using the technique of immunohistochemistry. 33 skin biopsies were analyzed from patients with DJL. The control group consisted of 10 normal skin biopsies originating from patients without dermatological diseases and 61 biopsies from patients with paracoccidioidomycosis (PCM). The results obtained by records analyzing patients' revealed that DJL affects mainly men (84.8%), farmers (72.7%) with 46-65 years old (51.5%), coming from the northeastern Pará state (51.5%) with clinical form keloid (81.8%) and predominant location of lesions in the lower limbs (45.5). The values of the count of FXIIIa DD in skin lesions of DJL were not affected by variations in gender, age, occupation, origin, clinical manifestation and localization of lesions. The amount of FXIIIa DD in patients with DJL was higher than that found in the control group of patients with healthy skin and in the group of patients with PCM to both the histopathology of loose granuloma (GF) and organized granuloma (GBO). Because of FXIIIa DD be considered precursors of Langerhans cells (LCs) can be suggested that their increase in DJL reflects a reservoir for the LCs and transform them time and again, don’t allowing their decrease. It has been demonstrated the increase in the levels of Th2 cytokines (TGF-β) in the DJL, and the increase of FXIIIa DD that is able to secrete the factor TNF-α, observed in this study, shows a dominance of Th1. Whereas there is a co expression of cytokine profiles of both, the study suggests the existence of mixed patterns. So, the results obtained in this work suggest that DJL is a spectral disease, with a tendency of resistance or susceptibility. What might explain the existence of focal cases even with long duration of disease and disseminated cases like early manifestation of DJL.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-05-08T22:12:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_DoencaJorgeLobo.pdf: 6407530 bytes, checksum: dac9276d508da9a94a0823ad66d8420d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-05-09T14:36:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_DoencaJorgeLobo.pdf: 6407530 bytes, checksum: dac9276d508da9a94a0823ad66d8420d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-09T14:36:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_DoencaJorgeLobo.pdf: 6407530 bytes, checksum: dac9276d508da9a94a0823ad66d8420d (MD5) Previous issue date: 2010 / Doença de Jorge Lobo (DJL) ou lacaziose é infecção crônica granulomatosa da pele e tecido subcutâneo causada pelo fungo Lacazia loboi. As lesões cutâneas em geral são polimorfas, sendo mais comum o tipo nodular de aspecto queloidiano envolvendo principalmente pavilhão auricular e membros. O exame histopatológico constitui o padrão ouro para o diagnóstico. São escassos os estudos sobre correlação clinicopatológica nesta doença. O presente trabalho apresenta como objetivo estudar casos diagnosticados como DJL pelo laboratório de dermatopatologia do Serviço de Dermatologia da Universidade Federal do Pará, no período de 1967 a 2009. Foi realizada a revisão dos prontuários médicos e estudadas as características demográficas, histológicas, clínicas e localização das lesões. 59 biópsias de 45 pacientes foram avaliadas. A amostra foi composta de 37 homens e oito mulheres, com média de idade de 50 anos. A maioria dos pacientes era lavrador (55%), dos quais 93% eram do sexo masculino. O aspecto queloidiano correspondeu a 59% das lesões. Com menor freqüência foram observadas lesões verruciformes (8%), placa (3%), gomosa (1%) e lesão macular hipercrômica (1%). A maioria das lesões estava localizada nos membros inferiores (56%). Histopatologicamente, a camada córnea encontrava-se hiperceratósica em 71% das biópsias, com paraceratose em 37% e ortoceratose em 50%. A eliminação transepidérmica (ETE) do parasitas foi observada em 36% dos casos e nestes, a hiperceratose estava presente em 95% (p = 0,0121) e a paraceratose em 90% (p< 0,0001). A epiderme apresentava aspecto hiperplásico em 58%, atrófica em 29%, normal em 12% e ulcerada em 8%. Nos casos em que houve ETE a epiderme apresentava-se hiperplásica em 86% (p = 0,0054). Observou-se presença de parasitas na epiderme em 30%, das quais 89% apresentavam ETE associada (p< 0,0001). Não houve relação estatisticamente significante entre a ocorrência de ETE e o aspecto clínico da lesão (p = 0,4231). Linfócitos, macrófagos e células gigantes do tipo corpo estranho foram as células predominantes do infiltrado (100% dos casos). Plasmócitos foram observados em 35%, neutrófilos em 15% e eosinófilos em 11% dos casos. Houve relação estatisticamente significante entre a ocorrência de ETE e presença de neutrófilos no infiltrado (p = 0,0016). Em 10% esteve presente reação exsudativa e 11% áreas de necrose isoladas. Células gigantes do tipo Langhans foram observadas em 59% das biópsias, corpos asteróides em 5%, células pseudo-Gaucher em 69% e fibrose em 96%. O infiltrado se estendia à derme reticular em todos os casos e para a derme profunda em 88% (52/59). Em 10% (6/59) dos casos houve disseminação do infiltrado para a gordura subcutânea, com encontro do parasita em um caso. Quanto à distribuição por idade, sexo e profissão dos pacientes, os dados foram superponíveis aos da literatura. A análise dos resultados, portanto, permitiu avaliar o perfil epidemiológico, clínico e histopatológico da doença, que diferiram, em alguns aspectos, dos achados classicamente descritos na literatura, especialmente em relação às características da epiderme, infiltrado inflamatório e localização das lesões. / Jorge Lobo‟s disease (JLD) or lacaziosis is a chronic, granulomatous skin and subcutaneous tissue infection caused by the fungus Lacazia loboi. Clinical lesions are generally polymorphous, often presenting with a keloid-like aspect, and most often involving ears or limbs. Histopathology remains the “gold standard” exam to reach diagnosis. Few clinical-pathological correlation studies on this disease are available to date. Our goal was to systematically review cases of JLD diagnosed at the dermatopathology laboratory of the Dermatology Service of the Federal University of Pará, Brazil, from 1967 to 2009. After a thorough chart review, we could retrieve demographic and clinical data, as well as histopathological features from each case studied. 59 biopsies from 45 patients were evaluated. The sample consisted of 37 men and eight women, with a mean age of 50 years. Most patients were agricultural workers (55%), of which 93% were males. Fifty-nine percent of the lesions showed a keloid-like appearance. Verrucous (8%), plaque (3%), gummatous (1%), and hyperchromatic macular (1%) lesions were less frequently observed. Most skin lesions occurred on the lower limbs (56%). Histopathologically, the stratum corneum showed hyperkeratosis in 71% of the biopsies, associated with parakeratosis in 37% and with orthokeratosis in 50%. Transepidermal elimination of parasites (TEP) was present in 36% of the cases in association with hyperkeratosis in 95% (p=0.0121) and with parakeratosis in 90% (p<0.0001). The epidermis showed a hyperplastic appearance in 58% of the specimens, was atrophic in 29%, normal in 12%, and ulcerated in 8% of them. There was a hyperplastic epidermis (86%, p=0.0054) in sites where TEP took place. We could also observe the presence of parasites in the epidermis in 30% of the biopsies, in which an association with TEP occurred in 89% (p<0.0001). There was no statistically significant relationship between the occurrence of TEP and the clinical aspect of the lesion (p=0.4231). Lymphocytes, macrophages and giant cells of the foreign-body type were predominant in the infiltrate, being observed in 100% of the cases. Plasma cells were seen in 35%, neutrophils in 15%, and eosinophils in 11% of the cases. There was a statistically significant relationship between the occurrence of TEP and the presence of neutrophil infiltration (p=0.0016). An exudative reaction pattern was present in 10% of the biopsies, and 11% exhibited focal areas of necrosis. Langhans giant cells were observed in 59% of the biopsies, and asteroid bodies in 5%. Pseudo-Gaucher cells were present in 69% of the cases, and fibrosis in 96%. The infiltrate showed extension to the reticular dermis in all cases, and to the deep dermis in 88%. A subcutaneous spread of the infiltrate occurred in 10% of the cases, with identification of parasites within the fat tissue in one of them. As for age distribution, sex and profession of the patients, the data overlapped those of the literature. The results allowed us to evaluate epidemiological, clinical and histopathological profiles of the disease, which in certain respects differed from the classically described ones of the literature, especially concerning characteristics of the epidermis, inflammatory cell infiltrate, and location of lesions.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-10-24T21:35:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_ImunopatogeniaInteracaoMacrofagos.pdf: 5397575 bytes, checksum: 2c99e1a73897916e41a071df86efe34a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-10-30T11:47:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_ImunopatogeniaInteracaoMacrofagos.pdf: 5397575 bytes, checksum: 2c99e1a73897916e41a071df86efe34a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-30T11:47:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_ImunopatogeniaInteracaoMacrofagos.pdf: 5397575 bytes, checksum: 2c99e1a73897916e41a071df86efe34a (MD5) Previous issue date: 2014 / A lobomicose é uma infecção subcutânea crônica, granulomatosa, causada pela implantação traumática do fungo Lacazia loboi nos tecidos cutâneo e subcutâneo. Ocorre predominantemente na região Amazônica e atinge qualquer grupo populacional. Histologicamente, observa-se reação inflamatória crônica caracterizada por intensa histiocitose e fibroplasia, abundante número de macrófagos, células gigantes multinucleadas do tipo corpo estranho e presença de considerável número de células leveduriformes. Os macrófagos são células fagocíticas que participam do reconhecimento e da resposta a patógenos através da fagocitose, da apresentação de antígenos aos linfócitos T e da produção de citocinas. As células de Langerhans (LC) são um grupo de Células dendríticas (CD) derivadas da medula óssea situadas principalmente em uma camada suprabasal da epiderme. Estudos envolvendo a interação fungo-hospedeiro na doença de Jorge Lobo são escassos. Assim, Este estudo é um passo importante para o melhor entendimento da biologia e patogenia do L. loboi, e para o estudo da imunopatologia da interação patógeno versus hospedeiro desta doença emergente e pouco conhecida. O objetivo do presente trabalho foi analisar a interação in vitro entre macrófagos peritoneais não ativados e/ou LC, isolados de camundongos BALB/c, com L. loboi recém-isolado de pacientes com doença de Jorge Lobo, bem como determinar os índices de infecção, fagocitose e fusão, e medir a produção das citocinas TNF-α, IL-4, IL-6, IL-10 e IL-12. Os resultados demonstraram que L. loboi é fagocitado por macrófagos, mas não por LC. O índice de infecção na interação entre macrófagos e L. loboi foi semelhante à interação entre macrófagos, LC e L. loboi em todos os tempos analisados. A média do número de fungos por macrófago também foi praticamente igual entre as interações e ao longo do tempo, variando de 1,2 a 1,6 fungos/macrófagos. Não houve a formação de células gigantes em macrófagos cultivados ou LC cultivadas isoladamente e em nenhum dos co-cultivos. Não houve diferença significante na produção de IL-4, IL-2 e IL-10 nas interações estudadas. Os níveis de TNF-α diminuem ao longo do tempo na interação entre macrófagos e L. loboi, enquanto a adição de LC induz aumento da produção de TNF-α, principalmente após 48 horas. LC modulam negativamente a produção de IL-6 por macrófagos e L. loboi também inibem essa produção por macrófagos isoladamente ou em co-cultivo com LC. L. loboi estimulam significativamente a produção de IL-12 por macrófagos co-cultivados com LC, mas não em LC ou macrófagos isoladamente. / Lobomycosis is a chronic, granulomatous, fungal infection of the skin and subcutaneous caused by the fungus Lacazia loboi. This mycosis occurs predominantly in Amazon region and affect all populations groups. Histologically, there is a chronic inflammatory reaction characterized by the intense fibroplastia and histiocytosis, abundant number of macrophages, multinucleated giant cells and presence of large numbers of yeast. Macrophages are phagocytic cells that participate in the recognition and response to pathogens through phagocytosis, antigen presentation to T lymphocytes and cytokine production. Langerhans cells (LC) are a group of dendritic cells (DC) derived from bone marrow, which are located mainly in the suprabasal layer of the epidermis. Studies on hostfungal interaction in Jorge Lobo's disease are scarce. Therefore, this study constitutes an important step towards a better understanding of L. loboi biology and pathogenesis, enabling in vitro culture of this organism endemic in Amazon region and study of their antigenic properties, as well as new therapeutic approaches. The objective of this study was to analyze the in vitro interaction between non-activated peritoneal macrophages and/or Langerhans cells isolated from BALB/c mice and L. loboi, calculating infection, phagocytosis and cellular fusion rates; also measuring the production of TNF, IL-4, IL-6, IL-10 and IL-12. Results showed that L. loboi is phagocytosed by macrophages but not by LC. Phagocytosis and infection rates in the interaction between macrophages and L. loboi was similar to interaction between macrophages, Langerhans cells and L. loboi at all times analyzed. The mean number of yeast cell per macrophage was almost equal among interactions and over time, with mean variation from 1.2 to 1.6 yeast/macrophages. No giant cells formation in coculture studied. No significant difference occurred in IL-4, Il-2 and IL-10 production between interactions studied. TNF levels decrease in interaction between macrophages and L. loboi while adding LC induces increased production of TNF-α, especially after 48 hours. LC negatively modulate IL-6 production by macrophage and L. loboi also inhibits this production by macrophages alone or cocultured with LC. L. loboi stimulated significantly IL-12 production by macrophages co-cultured with LC, but not for LC alone or macrophages.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-22T12:43:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_IsolamentoCultivoInVitro.pdf: 7451005 bytes, checksum: 8c9ae311eb9271931e6c82463c94e76b (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-03-27T11:47:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_IsolamentoCultivoInVitro.pdf: 7451005 bytes, checksum: 8c9ae311eb9271931e6c82463c94e76b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-27T11:47:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_IsolamentoCultivoInVitro.pdf: 7451005 bytes, checksum: 8c9ae311eb9271931e6c82463c94e76b (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / FADESP - Fundação de Amparo e Desenvolvimento da Pesquisa / A Doença de Jorge Lobo é uma infecção crônica, granulomatosa, que se desenvolve após a implantação traumática do fungo na pele. Manifesta-se com lesões nodulares, verrucosas e/ou queloidiformes, localizadas principalmente nos membros inferiores e pavilhões auriculares. Doença prevalente na região Amazônica e, atualmente considerada como emergente, com casos novos em outros continentes em humanos e golfinhos. Pouco se conhece sobre o agente etiológico da doença de Jorge Lobo, principalmente pela impossibilidade do cultivo in vitro, dificultando a caracterização correta do agente. Este trabalho teve como objetivo isolar, cultivar e caracterizar cepas do agente etiológico da doença de Jorge Lobo provenientes de pacientes atendidos na Unidade de Referência em Dermatologia Sanitária do Estado do Pará Dr. Marcello Candia, Marituba no estado do Pará. Durante alguns anos foram acompanhados 23 pacientes, a maioria lavradores do sexo masculino, entre 14 e 80 anos de idade, com material biológico coletado por raspado dérmico e biópsia, para confirmação do diagnóstico pelo exame micológico direto e histopatologia, com posterior tratamento. O material biológico coletado foi processado para o isolamento, com a obtenção de células leveduriformes características do agente etiológico da doença de Jorge Lobo após 7 a 14 dias em meio RPMI com a enzima dispase II. Depois de 2 a 6 meses em RPMI (5% CO2, 37ºC) observamos a fragmentação das células-mãe provenientes das lesões e a presença de células leveduriformes, variando de 1 a 7 μm de diâmetro. A partir deste momento, foi possível manter as cepas do agente etiológico da doença de Jorge Lobo em meio líquido RPMI ou em ágar Sabouraud-dextrose à temperatura ambiente, onde formaram colônias pastosas, branco-acastanhadas, cerebriformes, por vezes lanuginosas. Células destas cepas foram analisadas por diferentes técnicas de microscopia óptica e eletrônica, bioquímicas e genéticas, culminando com a descrição do genoma da cepa de um paciente, logo após o isolamento enzimático e antes da diferenciação em cultura, definindo aseguinte identificação taxonômica:Eukaryota; Fungi; Dikarya; Ascomycota; Saccharomycotina; Saccharomycetes; Saccharomycetales; Debaryomycetaceae; Candida/Lodderomyces clade; Candida; Candida sp. LDI48194. A apresentação de características clínicas peculiares, associada a aspectos morfológicos únicos, propriedades fisiológicas e genéticas, que não permitem a definição de uma espécie já identificada, indicam que o agente da doença de Jorge Lobo é, na realidade, uma nova espécie, para a qual propomos a nomenclatura de Candida loboi. / Jorge Lobo’s disease is a chronic granulomatous infection developing after traumatic implantation of the fungus in the skin. It presents with nodular, verrucous or keloid-like lesions mainly on legs and ears. The highest prevalence is at Amazon Region and it has been considered an emergent disease, presenting new cases on other continents in both, humans and dolphins. Little is known about L. loboi, and the absence of in vitro culture impairs the correct characterization of the fungus. This work had as the main goal to isolate, culture and characterize strains of the etiological agent of Jorge Lobo´s disease, obtained from patients attended at the Dr Marcello Candia Reference Unit in Sanitary Dermatology of the State of Pará, in Marituba, Pará, Brazil. During many years 23 patients were diagnosed and followed by our team. Most of them were male farmers, with age varying from 14 to 80 years-old. After biopsy of the lesion for confirming the diagnosis, the patients initiated treatment and the material was processed with dispase II at liquid medium RPMI, 37º C, 5% CO2 for 1-2 weeks to isolate yeast cells from human tissue. After 2-6 months in the medium, we observed fragmentation of mother cells and the presence of new yeast cells with diameter varying from 1 to 7μm. From that moment, it was possible to grow the strains in different liquid or solid mediums at 37º C or RT, where creamy, whitish cerebriform, sometimes hairy colonies were observed. Cells from those strains were analyzed by different techniques of optical and electron microscopy, biochemistry and genetics, ending with the description of the genome of one patient just after isolation of the fungal cells from the lesional skin, defining the following taxonomic identification: Eukaryota; Fungi; Dikarya; Ascomycota; Saccharomycotina; Saccharomycetes; Saccharomycetales; Debaryomycetaceae; Candida/Lodderomyces clade; Candida; Candida sp. LDI48194. The peculiar clinical presentation associated to unique morphological, physiological and genetic characteristics that do not permit the definition of a known species indicate that the etiological agent of Jorge Lobo’s disease is a new species, for which we propose to use the name Candida loboi.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-10-17T14:11:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ImunoexpressaoCD1aLesoes.pdf: 5388631 bytes, checksum: 832a2c0425f1db42b004217b10f78121 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-10-30T11:58:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ImunoexpressaoCD1aLesoes.pdf: 5388631 bytes, checksum: 832a2c0425f1db42b004217b10f78121 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-30T11:58:39Z (GMT). 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Foram selecionados trinta e três prontuários com os respectivos blocos parafinados das biópsias de pele de pacientes com DJL, (grupo 1 ) registrados no serviço de dermatologia da Universidade Federal do Pará no período de 1955 a 2005. O grupo controle foi composto de 10 blocos parafinados de pele sem doença dermatológica (grupo 2 ) e 42 blocos de portadores de paracoccidioidomicose(PCM) (grupo 3). Na análise dos prontuários dos pacientes, foram coletados dados em relação à idade, sexo, procedência, profissão, localização e tipo clínico das lesões . As células de Langerhans foram identificadas por imuno-histoquímica utilizando anticorpo anti-CD1a (Serotec). Os pacientes eram em sua maioria homens (84, 8%), lavradores (72, 7%) com faixa etária entre 46-65 anos, com predominância de lesões queloidianas (81, 8%), nos membros inferiores (45, 5%). O número de células positivas foi analisada estatisticamente. As CL foram visualizadas ao longo da epiderme em todas as biópsias da DJL. A morfologia e o número de células, não diferiram em relação à pele normal (p>0, 05), e encontravam-se aumentadas quando comparadas com as de portadores de PCM (p<0, 05). As células de Langerhans estavam presentes nas lesões cutâneas da DJL e na pele sem doença dermatológica de maneira similar, não sofrendo alterações numéricas ou morfológicas, diferentemente do que ocorreu na PCM. Estes resultados sugerem que na DJL os fungos provavelmente apresentam algum mecanismo escapatório, que os livram da apresentação de antígenos pelas células de Langerhans. / Jorge Lobo’s disease (DJL) is a chronic infection caused by the fungus Lacazia loboi, endemic in South America, especially in the Brazilian Amazon region. The most common clinical presentation is parakeloidal lesion located mainly in the lower limbs in men who practice agricultural activity. The fungus can be identified by both mycological and anatomopathological examination. The main objective of this study was to investigate the possible role of Langerhans' cells (LC) in the pathogenesis of the disease in tissue samples from skin lesions, using immunohistochemical technique. Thirty-three medical records were selected with their respective paraffin blocks of skin biopsies from patients with DJL (group 1) registered in the dermatology service at the Federal University of Para in the period from 1955 to 2005. The control group consisted of 10 paraffin blocks from normal skin (group 2) and 42 blocks from patients with paracoccidioidomycosis (PCM) (Group 3). In the analysis of patient medical records data were collected regarding age, sex, origin, profession, location and clinical type of the lesions. Langerhans cells were identified by immunohistochemistry using anti-CD1a antibody (Serotec). Patients were mostly men (84, 8%), farmers (72. 7%) aged between 46-65 years, with predominance of parakeloidal lesions (81. 8%) in the lower limbs (45. 5%). The number of positive cells was statistically analyzed. The LC were visualized along the epidermis in all biopsies from Jorge Lobo's disease. The morphology and the number of cells, did not differ from normal skin (p> 0. 05), and was increased when compared to the PCM lesions (p <0. 05). Langerhans cells were present in Jorge Lobo’s disease skin lesions similarly to the way they are in normal skin, not suffering any numerical or morphological alterations, unlike what occurred in PCM. These results suggest that in DJL fungi probably present some escape mechanism of the local immune system to evade the antigen presentation by Langerhans’ cells.