Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-05-03T09:51:23Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2217558 bytes, checksum: 38b38a8cc0f205eb07ffd9d86237b38a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-03T09:51:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2217558 bytes, checksum: 38b38a8cc0f205eb07ffd9d86237b38a (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O palmito de pupunha (Bactris gasipaes Kunth) é o mais indicado para o processamento mínimo, pois não apresenta escurecimento enzimático. No entanto, outros fatores podem resultar em alterações e mudança da cor dos tecidos. Objetivou- se com este trabalho caracterizar a(s) possível (eis) causa(s) do amarelecimento superficial das regiões mediana e basal de hastes de palmito de pupunha minimamente processadas e conservadas sob refrigeração. Essa investigação foi realizada em quatro etapas: Etapa 1- Foi avaliado o efeito de duas concentrações de cloro ativo, 20 e 200 mg L -1 , sobre a intensificação do amarelecimento superficial dos tecidos das regiões mediana e basal da haste de palmito de pupunha; Etapa 2- O conteúdo de compostos fenólicos foi quantificado na bainha externa e raque da região mediana e nas regiões externa e interna da região basal durante a conservação refrigerada; Etapa 3: Avaliou-se o efeito de injúrias mecânicas sobre alterações na cor e qualidade dos tecidos das regiões mediana e basal e Etapa 4- Alterações metabólicas dos tecidos das regiões mediana e basal foram acompanhadas durante o período de refrigeração. Em todas as etapas foi realizado o processamento mínimo das hastes de palmito, com algumas modificações quando necessário: lavagem e retirada das bainhas de proteção, corte (separação das regiões mediana e basal), sanitização, drenagem e embalagem. As regiões foram conservadas a 5 oC, por 12 dias. Observou-se que os tecidos das regiões mediana e basal apresentaram coloração amarelada durante 12 dias de conservação refrigerada. No entanto, esse amarelecimento superficial não ocorreu de maneira homogênea nos tecidos. Além disso, as alterações na cor original dos tecidos não se correlacionaram negativamente com as concentrações de cloro ativo utilizadas, bem como não foi observado aumento do teor de compostos fenólicos após o período de refrigeração. Verificou-se diferença qualitativa na organização das camadas de tecidos fundamentais e de revestimento do palmito que podem influenciar a cor superficial dos tecidos. Observou-se alterações no perfil de metabólitos durante a conservação refrigerada. Em resumo, os resultados sugerem que o amarelecimento superficial dos tecidos pode ser causado por uma interação dos fatores estudados. Ademais, outros fatores tais como pré-colheita, estado hídrico da planta e condições climáticas de cultivo poderiam atuar no amarelecimento superficial dos tecidos. / Palm of peach palm (Bactris gasipaes Kunth) is the most suitable for the minimal processing because does not display enzymatic browning. However, other factors may lead to changes and color variation in the tissues. This study aimed to identify the possible causes of superficial yellowing of the median and basal regions of peach palm stems minimally processed and stored under refrigeration. This research was conducted in four stages: Stage 1- The effect of two active chlorine concentrations, 20 and 200 mg L -1 on improving the superficial yellowing of tissues median and basal regions of the peach palm stem; Stage 2- The content of phenolic compounds was quantified in the outer sheath and rachis of the median region and the outer and inner regions of the basal region during cold storage; Stage 3: It was evaluated the effect of mechanical injuries on changes in the color and quality of tissues from the median and basal regions and Stage 4- Metabolic changes of the tissues of the median and basal regions were accompanied during the cooling period. At every stage we performed the minimal processing of palm stems, with some modifications as needed: washing and removal of the protective sheaths, cutting (separating the median and basal regions), sanitization, drainage and packaging. The regions were stored at 5 °C for 12 days. It was observed that the tissues of the median and basal regions showed yellowing after 12 days of cold storage. However, this superficial yellowing did not occur evenly in the tissue. In addition, changes in the original color of the tissues were not associated negatively with the active chlorine concentrations and was not observed increased content of phenolic compounds after cold storage period. It is qualitative difference in the organization of the layers of core and coating material tissue's palm that can influence the color of the surface tissues. Observed changes in metabolite profile during cold storage. In summary, the results suggest that the surface yellowing of the fabrics can be caused by an interaction of the factors studied. In addition, other factors such as pre-harvest water status of the plant and climatic growing conditions could impact surface yellowing of tissues.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-07T10:20:44Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1642997 bytes, checksum: a9190cecf7b70ea7e238c98b99466014 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-07T10:20:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1642997 bytes, checksum: a9190cecf7b70ea7e238c98b99466014 (MD5) Previous issue date: 2014-09-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os membros da família de fatores de transcrição NAC (acrônimo de NAM, ATAF e CUC) são específicos de plantas e são conhecidos por atuarem tanto no desenvolvimento quanto na regulação da resposta a estresse. Dentre os genes NAC envolvidos em respostas contras estresses bióticos e abióticos já identificados em soja (Pinheiro et al., 2009, Le et al., 2011),o gene GmNAC081 é induzido pela expressão de NRPs (Faria et al., 2011) e por diferentes condições de estresses fisiológicos (Pinheiro et al., 2009) portanto, é possível que elementos em cis presentes no seu promotor promovam a integração de diferentes sinais que resultem em morte celular mediada por GmNAC081.A presente investigação teve como objetivos principais confirmar a presença de domínios discretos no promotor do gene GmNAC081 responsivos a estresses osmótico, induzido por PEG, e do retículo endoplasmático, induzido por tunicamicina e avaliar a expressão basal e tecido- específica do promotor em condições de cultivo in vitro e em casa de vegetação. Além disso, foi avaliado a atividade do promotor GmNAC081 durante o desenvolvimento. Para isso, foram utilizadas plantas transgênicas contendo o promotor GmNAC081 na extensão de 1000 pb, 750 pb e 500 bp fusionadas ao gene repórter GUS. Análises fluorimétricas quantitativas de GUS revelaram a presença de elementos em cis responsivos a PEG na regiao contida pelas posições -1000 a -750. Pelo menos dois elementos responsivos a tunicamincina devem estar contidos nas regioes -1000 a -750 e -750 a -500. Os resultados da presente investigação revelaram que a atividade do promotor de 1000pb de GmNAC081 está relacionada às condições de cultivo de plantas trangênicas de Nicotiana tabacum, sendo fortemente induzido durante a senescência. Estes resultados foram confirmados por meio de análises histoquímicas. De fato, a região 5’ de -1000pb que flanqueia o gene GmNAC081 é induzível por estresses osmótico e do retículo endoplasmático em diferentes orgãos e tecidos (Rosado, 2012). As sequências de 1000pb do promotor de GmNAC081 foram capazes de direcionar a expressão de GUS no tecido vascular em plantas cultivadas in vitro. Além disso, as análises histoquímicas de atividade de GUS confirmaram que o promotor de GmNAC081 é fortemente induzido em tecidos em estádios avançados de desenvolvimento. Coletivamente, estes resultados demonstram que a inducão do gene GmNAC081 por estresses e durante a senescência ocorre no nível transcricional por meio de elementos cis-regulatórios presentes em regiões discretas do promotor. Além disso, os resultados de atividade do promotor GmNAC081 substanciam o argumento de que GmNAC081 esteja envolvido em resposta a estresse e no processo de senescência natural. / The members of the NAC (NAM, ATAF and CUC acronyms) family are plant- specific transcriptional factors, which are involved in development and stress responses. Among the abiotic and biotic stress response NAC genes already identified in soybean, GmNAC081 is induced by NRP expression and different conditions of physiological stresses; hence it is possible that cis-regulatory elements on its promoter cause the integration of different stimuli that result in GmNAC081 mediated cell death. The present investigation aimed at confirming the presence of discrete domains on the GmNAC081 promoter, which are responsive to osmotic stress, induced by PEG, and endoplasmic reticulum stress, induced by tunicamycin as well as at evaluating the basal and tissue-specific expression of the promoter under in vitro and greenhouse growth conditions. In addition, the GmNAC081 promoter activity was evaluated during development under greenhouse conditions. For this, we used transgenic plants harboring different extensions (up to positions -1000, -750 and -500) of the GmNAC081 promoter fused to the GUS reporter gene. Quantitative fluorometric analyses of GUS revealed the presence of cis-elements responsive to PEG in the region delimitated by the positions -1000 to -750. At least two responsive cis-elements to tunicamycin may be present in the regions -1000 to -750 and -750 to -500. The results of the present investigation also revealed that the GmNAC081 promoter (1000bp) activity is related to the cultivation conditions of Nicotiana tabacum transgenic plants and it is strongly induced during natural senescence. These results were further confirmed through histochemical analyses. In fact, the 1000-bp 5’ flanking sequences of GmNAC081 is induced by osmotic stress and reticulum endoplasmic stress in different organs and tissues. The 1000-bp sequences of the GmNAC081 promoter were capable of directing GUS expression in the vascular tissue of in vitro cultivated plants. Furthermore, the histochemical analyses of GUS activity confirmed a strong induction of the GmNAC081 promoter in tissues under advanced stages of development. Taken together, these results demonstrate that the induction of GmNAC081 expression by stresses and during senescence occurs at the transcriptional level through positive cis-regulatory elements presents in discrete regions of the promoter. In addition, the pattern of the GmNAC081 promoter activity substantiates the argument that GmNAC081 is involved in the process of natural senescence.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-14T14:45:50Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1569480 bytes, checksum: 2b16255390fa4111e3e91949230348f7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-14T14:45:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1569480 bytes, checksum: 2b16255390fa4111e3e91949230348f7 (MD5) Previous issue date: 2008-08-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Apesar de o Brasil ser o maior produtor mundial de maracujá, a produtividade nacional é muito baixa. A incidência de várias doenças nos pomares de maracujá, aliada à inexistência de cultivares resistentes, tem contribuído para a redução da área plantada. Dentre as doenças que afetam a cultura, destaca-se a murcha de Fusarium que é causada pelo fungo Fusarium oxysporum. A seleção in vitro de plantas resistentes a espécies de Fusarium utilizando toxinas fúngicas como agentes seletivos tem sido descrita com êxito para várias espécies. Assim, no presente trabalho foram realizadas adaptações das metodologias de seleção in vitro utilizadas em outras espécies para obtenção de plantas de maracujazeiro-amarelo insensíveis à fusariose. Para tanto, foram estabelecidos protocolos para a micropropagação de plantas do maracujazeiro-amarelo através de explantes de segmentos nodais utilizando-se doses de BAP (1,0; 1,5 e 2,0 mg L-1) e água de coco (0, 5 e 10 % v/v) suplementados ao meio de cultura MS. Foram avaliados os efeitos de doses de ácido fusárico na germinação de sementes (0; 0,10; 0,20; 0,30 e 0,40 mM) e no desenvolvimento de plantas (0,0; 0,10; 0,20 e 0,30 mM), in vitro. As plantas insensíveis ao ácido fusárico selecionadas foram então submetidas a doses do filtrado de um isolado do fungo (0, 20, 30, 40 ou 50 % (v/v)) para verificação da correlação das reações das plantas aos dois agentes seletivos. Após, as plantas selecionadas foram transferidas para substrato composto de areia autoclavada contendo a suspensão de esporos do fungo e mantidas em câmara de crescimento para avaliação da resistência das plantas in vivo. Foram testadas também doses de radiação gama (0, 10, 15, 20, 25, 30, 45 e 60 Gy) para obtenção de variantes em segmentos nodais de P. edulis f. flavicarpa sob condições in vitro e analisados os efeitos da radiação sobre o incremento da resistência de P. edulis f. flavicarpa ao fungo. O meio de cultura suplementado com 1 mgL-1 de BAP foi o mais adequado para a micropropagação de plantas de Passiflora edulis f. flavicarpa a partir de explantes de segmentos nodais. O ácido fusárico e o filtrado da cultura fúngica foram eficientes na seleção de genótipos de maracujazeiro-amarelo insensíveis ao fungo. Recomenda-se a dose de radiação gama de 20 Gy para obtenção de variantes mutantes de maracujazeiro-amarelo a partir de segmentos nodais. Através da radiação com raios gama foi possível obter plantas de maracujazeiro-amarelo insensíveis às toxinas de Fusarium oxysporum f. sp. passiflorae, in vitro. / Although Brazil is the largest producer of passionfruit in world, the national productivity is very low. The incidence of several diseases in the passion fruit orchards, as well as the inexistence of resistant cultivars have been contributing for reduction in the planted area. Among the diseases affecting the crop, the Fusarium wilting caused by the Fusarium oxysporum fungus is distinguished. The in vitro selection of plants that are resistant to Fusarium species, by using fungous toxins as selective agents has been successfully described for several species. So, some adaptations were accomplished in the in vitro selection methodologies used in other species for obtainment of the yellow passionfruit plants that are tolerant to fusariosis. So, protocols for the micropropagation of the yellow passionfruit plants through explants of nodal segments, by using some BAP doses (1.0; 1.5 and 2.0 mg L-1) and coconut water (0, 5 and 10% v/v) supplemented to the MS culture medium. The effects of the fusaric acid doses (0,0; 0,10; 0,20 and 0,30mM) were evaluated either on seed germination and the plant development in vitro. Then, the selected plants that were tolerant to the fusaric acid were submitted to filtrate doses of one isolate of the fungus (0, 20, 30, 40 or 50% (v/v)) in order to verify the correlation of the plant reactions to both selective agents. Following, the selected plants were transferred to the substratum composed by autoclaved sand containing the suspension of the fungus spores and were kept in growth chamber for evaluation of the resistance of the plants in vivo. The gamma-radiation doses (0, 10, 15, 20, 25, 30, 45 and 60 Gy) were also tested for obtaining the variants in nodal segments of P. edulis f. flavicarpa under in vitro conditions, and the effects from radiation on the increase of the P. edulis f. flavicarpa resistance to the fungus. The culture medium supplemented with 1 mgL-1 BAP was most appropriate to micropropagation of the Passiflora edulis f. flavicarpa plants from the explants of nodal segments. The fusaric acid and the fungus culture filtrate were efficient in selecting the yellow passionfruit genotypes that were insensible to the fungus. The gamma radiation dose of 20 Gy is recommended for obtaining the mutants of the yellow passionfruit mutants from the nodal segments. Through radiation with gamma rays, it was possible to obtaining in vitro the yellow passionfruit plants that were insensible to the toxins of Fusarium oxysporum f. sp. passiflorae.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-20T15:06:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 676315 bytes, checksum: a451bf2e2060adec62ba8c114611d497 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T15:06:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 676315 bytes, checksum: a451bf2e2060adec62ba8c114611d497 (MD5) Previous issue date: 2009-12-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Há uma grande demanda por técnicas de laboratório mais simples e de menor custo e por procedimentos mais acessíveis a orquidófilos que não têm o embasamento teórico necessário à utilização de métodos usuais de produção seminífera e clonal de orquídeas in vitro. Neste trabalho, três experimentos foram conduzidos com os objetivos de avaliar a desinfestação química com hipoclorito de sódio (NaClO) de sementes e de tecidos de orquídeas para a produção de mudas in vitro, e testar a utilização de seringa descartável para o cultivo de tecidos, de modo a dispensar, em todos os casos, o uso de câmara de fluxo laminar. No primeiro experimento, sementes de Cattleya intermedia foram tratadas com seis concentrações de NaClO, variando de 1,2 a 4.800 mg L-1 de NaClO e semeadas utilizando-se dois métodos de cultivo: inoculação de sementes em frascos via seringa descartável, através de um furo em tampa de frascos de vidro, ou, abrindo-se o frasco, retirando-se a tampa, e colocando as sementes sobre o meio. Em ambos os métodos, as sementes foram inoculadas via 2 mL de suspensão semente-NaClO. Estes métodos foram comparados com o tradicional (controle), conduzido em câmara de fluxo laminar; com as sementes previamente desinfestadas com NaClO na concentração de 2.400 mg L -1 , corresponde a 100 mL L -1 de água sanitária comercial (ASC), e enxaguadas em H 2 O, mas sem a aplicação de NaClO aos meios nos frascos com as sementes. No segundo experimento, estudou-se a eficiência de concentrações de NaClO, variando de 1.200 a 6.000 mg L -1 (50 a 250 mL L -1 de ASC) aplicadas nos meios de cultura, na ausência ou presença de carvão ativado, em comparação à utilização de câmara de fluxo laminar sem a aplicação, neste caso, de NaClO nos meios, com os tecidos (explantes). Foram utilizados explantes de duas espécies de orquídeas: Arundina bambusifolia e Epidendrum ibaguenses. No terceiro experimento, estudou-se a utilização de seringa descartável, em substituição à câmara de fluxo laminar, utilizando três meios (MS1/2, GB5 e VW) e duas concentrações de três reguladores de crescimento (TDZ, ANA e BAP), para a obtenção de mudas de Phalaenopis spp. e de um híbrido de Dendrobium nobile, via cultura de tecidos. Como tratamento controle, utlizou-se o meio MS1/2 com 1,0 mg L -1 de TDZ em tubos de ensaio, com os explantes cultivados em condições normais, utilizando-se de câmara de fluxo. Não houve contaminação dos meios de cultura inoculados com a suspensão semente – NaClO. A presença do NaClO nas menores concentrações promoveu maior taxa de germinação e crescimento das plantas, em relação à sua não utilização (tratamento controle). A câmara de fluxo laminar mostrou-se desnecessária em relação à desinfestação feita com NaClO no meio de cultura. A aplicação de NaClO sobre o meio de cultura inoculado com os tecidos das plantas promoveu eficiente controle da contaminação. As maiores concentrações de NaClO causaram redução no crescimento das plantas. O uso de carvão ativado promoveu melhores resultados em termos de produção de plantas mas, por outro lado, a contaminação foi maior em sua presença. A utilização de seringa descartável mostrou-se viável para a propagação vegetativa das plantas. Embora, com alguns efeitos médios significativos, a diferença entre meios de cultura, reguladores de crescimento e suas concentrações apresentaram tendência geral para a similaridade dos dados de crescimento das plantas, evidenciando a possível simplificação dos procedimentos de desinfestação e cultivo. / There is a great demand for simpler and less costly laboratory techniques and for more accessible procedures for orchid breeders who do not have the necessary theoretical basis to use the traditional seed and clone production methods of orchids in vitro. In this study, three experiments were conducted with the purpose of evaluating chemical disinfection with sodium hypochlorite (NaClO) of orchid seeds and tissues for seedling production in vitro, and to test the use of disposable syringes for tissue culture, to dispense with the use of laminar flow in all cases. In the first experiment, seeds of Cattleya intermedia were treated with six NaClO concentrations between 1.2 and 4,800 mg L -1 NaCl, seeded by two methods: seed inoculation in glass jars with a disposable syringe through a hole in the lid, or by opening the jar, removing the lid, and placing the seeds on the medium. In both methods, seeds were inoculated in 2 mL seed – NaClO suspension. These methods were compared with the traditional (control) method, using laminar flow. After previous disinfection with NaClO at a concentration of 2400 mg L -1 , corresponding to 100 mL L -1 commercial bleach (CB), the seeds were rinsed in H 2 O, but without NaClO application to the media in the jars with the seeds. In the second experiment the effectiveness of NaCl concentrations between 1200 and 6,000 mg L -1 (50–250 mL L -1 CB) for the tissues (explants) was tested, applied to culture media in the absence or presence of activated carbon, in comparison with the use of laminar flow without the NaClO application to the media. Explants of two orchid species, Arundina bambusifolia and Epidendrum ibaguenses, were used. The third experiment tested the use of disposable syringes, instead of laminar flow, in three media (MS1/2, GB5 and VW) and with two concentrations of three growth regulators (TDZ, NAA and BAP) for obtaining Phalaenopis spp. seedlings and a Dendrobium nobile hybrid by tissue culture. In the control treatment, the MS1/2 medium was used with 1.0 mg L -1 TDZ in test tubes, and the explants were cultured under normal conditions, using a flow chamber. No contamination was observed in the culture media inoculated with seed – NaClO suspension. At low NaClO concentrations the germination and plant growth rates were higher than in absence of NaClO (control). In comparison, it was found that the application of NaClO dispensed with the use of laminar flow. The contamination control with NaClO application to the culture medium inoculated with the plant tissues was efficient. The highest NaClO concentrations resulted in reduced plant growth. The use of activated carbon led to the best results in terms of plant production while on the other hand, contamination was higher in their presence. The use of disposable syringes was feasible for the vegetative propagation of plants. However, with some significant mean effects, the difference between culture media, growth regulators and their concentrations generally tended to data similarity regarding plant growth, suggesting a possible simplification of the sterilization and cultivation procedures.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-22Bitstream added on 2014-06-13T19:33:23Z : No. of bitstreams: 1 santos_rb_me_jabo.pdf: 1467164 bytes, checksum: 5cce9136001027d260fc80ff1c5229f4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os objetivos do presente trabalho foram (i) identificar uma cultivar de soja (Glycine max) com melhor resposta in vitro para indução de calos e regeneração; (ii) otimizar o processo de transformação genética via biobalística em embriões oriundos de cotilédone maduros de soja. Os experimentos de indução de calos e transformação genética foram realizados com as cultivares IAS-5, BR16 e MSOY6101. Para indução de calos foram utilizadas altas doses de auxinas [5 mg/L 2,4D (2,4-diclorofenoxiacético- 2,4D), 5 mg/L 2ip (2-isopenteniladenina) e 10 mg/L ANA (ácido-naftalenacético)] e para regeneração de 0 a 2 mg/L de BAP (6-benzylaminopurine), adicionando-se 0,5 mg/L de ANA em todos os tratamentos. Vários parâmetros foram testados na transformação: concentração do tungstênio; BAP (0 a 5 mg/L) no co-cultivo e a concentração de canamicina para seleção de plantas. A construção utilizada foi constituída pelo vetor pCAMBIA 2301, contendo o gene repórter GUS, regulado pelo promotor constitutivo 35SCaMV e adição do gene de seleção NPTII que confere resistência a canamicina. Foram observadas diferenças para a indução e regeneração via embriogênese somática entre as cultivares de soja, resultando na seleção da cultivar 'IAS-5' para avaliação do potencial embriogênico quanto à diferenciação e regeneração de plantas. Essa cultivar apresentou alta taxa de indução, proliferação e regeneração estável. Os resultados mostraram que a adição de 0,5 mg/L de BAP ao meio de regeneração e 5 mg/L de 2,4D ao meio de indução aumentaram as taxas de diferenciação dos embriões de 0 para 27,77%. A partir dos resultados observados na transformação genética em N. benthamiana, adotou-se 24 mg/μL de tungstênio por membrana para as três cultivares de soja. Para regeneração em embrião maduro de soja o melhor resultado... / The present work aimed to (i) identify the best soybean (Glycine max) cultivar for in vitro response for callus induction and plant regeneration; (ii) optimize genetic transformation of soybean mature cotyledon embryo via biobalistic. The callus induction and genetic transformation experiments were performed using IAS- 5, BR16 and MSOY6101 soybean cultivars. High auxin levels (5 mg/L 2,4- diclorofenoxiacetic, 5 mg/L 2-isopenteniladenine and 10 mg/L acid-naftalenacetic) were used for callus induction and to regeneration, adding 0,5 mg/L of acid-naftalenacetic and 0 to 2 mg/L of 6-benzylaminopurine (BAP), in all the treatments of regeneration. The following parameters were tested in order to optimize the transformation: tungsten concentration; BAP concentration (0 to 5 mg/L) in the co-cultivation medium and Kanamycin concentration in the selection medium. The genetic construction used was comprised of pCAMBIA2301 vector, containing gusA gene reporter, under the regulation of 35SCaMV constitutive promoter and NPTII selection gene that provides resistance to Kanamycin. Some differences were observed at the induction and regeneration of somatic embryogenesis among the three cultivars and only IAS-5 cultivar was selected for the assessment of embryogenic potential regarding plant differentiation and regeneration. This cultivar presented high level of callus induction, stable proliferation and stable regeneration. The results showed that the addition of 5 mg/L of 2,4D to the induction medium and 0,5 mg/L of BAP to the regeneration medium increased the levels of differentiation of the IAS-5 soybean embryos from 0 to 27,77%. Based on the results observed in the genetic transformation in N. benthamiana, 24 mg/μL of tungsten per membrane is now being used in the bombardment for the three soybean cultivars... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-06-23Bitstream added on 2014-06-13T20:23:47Z : No. of bitstreams: 1 bordayepez_cc_me_botfca.pdf: 605083 bytes, checksum: 56a87160ec1d63940d534d9e6a51cff7 (MD5) / O presente trabalho teve como objetivo estabelecer o protocolo de desinfestação de estacas e sernentes e germinação de Pothomorphe umbeilata (L) e adaptar o protocolo de micropropagação de Pothomorphe umbeilata (L), incluindo a produção de calos e organogênese, além de comparar o teor de carotenóides entre calos e plântulas. O experimento foi conduzido no Laboratório de Biotecnologia Vegetal do Departamento de Química e Bioquímica, do Instituto de Biociências da UNESP - Botucatu, SP e o material vegetal (sementes e estacas) foi obtido no município de Adrianópolis-PR. Semente germinadas de P. umbeilata foram inoculadas em diferentes concentrações de BAP (0,5 mg.L ; 1,0 mgL ; 1,5 mg.L) e NAA (0,4 mg.L 0,6 mg.L ; 0,6 mg.L ) respectivamente, visando estimular a produção de calos e dosar o carotenóides. Após 60 dias do cultivo, os calos contendo algumas brotações, foram transferidos para meio de diferenciação das plântulas (GA3 0,1 mg.L , BAP 0,5 mgL ) por um período de 40 dias, para logo serem transferidos para meio de diferenciação de plântulas. Calos (coletados aos 60 dias) e plântulas (coletadas aos 140 dias) foram congelados em nitrogênio líquido e mantidos em freezer a 80°C para posteriores análises de carotenóides. O melhor tratamento para a produção de calos e formação de gemas foi NAA 0.6 mgL em combinação com BAP 10 mg.L . Nas plântulas sem adição de reguladores vegetais foi encontrada uma maior concentração de carotenõides, em comparação aos calos. / The present research aimed at establishing a protocol of stalks and seed desinfectation, and seed germination of Pothomorphe umbeilata (L.). A protocol of micropropagation including the induction of callus formation and organogenesis was adapted. Besides, it was compared the carotenoids quantity between Porhomorphe umbeliata calius and plantlets. This experiment was carried out iii Biotechnology Vegetal Laboratory of the Chernistr and Biochemistry Department at the Instituto de Biociências of Universidade Estadual Paulista, Botucatu campus. The vegetal matenal (seed and stalks) was obtained from Adranópolis - PR. Pothomorphe umbeilata germinated seeds were inoculated in different concentrations of BAP (0,5 mg.L-l; 1,0 mg.L.-l; 1,5 mg.L-l) and NAA (0,4 mg.L-l; 0,6 mg.L-1; 0,6 mg.L-l) respectively, in order to stimulate calius induction and increase quantity of earotenoids. Afler 60 days, calius which contained shoots were inoculated in plantlets diferenciation medium GA3 0,1 mg.L4, BAP 0,5 mg.U ) during 40 days and transferred to plantlets growth medium. Plantlets were acclimatized Calius collected after 60 days and plantlets were collected afier 140 days. There were frozen in liquid nitrogen and maintained in freezer 80°C to be used in further carotenoids test. The best treatment for callus production and shoots elongation was NAA 0.6 mg.L in association with BAP 1.0 mg.L . The higher carotenoids coneentration was in plantlets without growth regulators, compared with calius.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, 2013. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2015-06-01T17:28:27Z No. of bitstreams: 1 2013_ZanderluceGomesLuis_Parcial.pdf: 34890 bytes, checksum: 9f02054584e14f10afbab2d1181a4db9 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2015-06-01T20:49:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_ZanderluceGomesLuis_Parcial.pdf: 34890 bytes, checksum: 9f02054584e14f10afbab2d1181a4db9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-01T20:49:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_ZanderluceGomesLuis_Parcial.pdf: 34890 bytes, checksum: 9f02054584e14f10afbab2d1181a4db9 (MD5) / O presente trabalho objetivou estabelecer estratégias para a clonagem por embriogênese somática e conservação ex situ de macaúba (Acrocomia aculeata). Para a embriogênese somática a partir de embriões zigóticos (EZ), foram avaliados o efeito das auxinas 2,4-D, dicamba e picloram nas concentrações de 0, 1,5 e 3,0 mg L-1, assim como os meios de cultura de MS e Y3. Na diferenciação de embriões somáticos (ES) as concentrações das auxinas foram reduzidas para 0,5 e 1,0 mg L-1. A regeneração de plantas foi realizada em meio de cultura desprovido de auxina. A formação de calos embriogênicos (CE) foi observada em todas as auxinas e concentrações testadas e, entre os meios de cultura foi observado resultados significativos com o uso de meio Y3. ES foram observados após 60 dias em meio de diferenciação e a frequência de regeneração de plantas atingiu valores de até 31,9%. Na embriogênese somática a partir de segmentos foliares de plantas in vitro, EZ foram germinados em meio Y3 contendo 0 e 225 μM de 2,4-D (pré-tratamento). A parte aérea das plantas foi dividida e seccionada em quatro regiões: meristemática, basal, mediana e apical. Os segmentos de cada região foram inoculados em meio contendo 450 μM de picloram para a indução de calos. Neste experimento, a diferenciação de ES ocorreu em meio com 40 e 80 μM de picloram. O uso do pré-tratamento de indução aumentou a capacidade de formação de CE e de ES. A região meristemática foi a que apresentou os melhores resultados. Em ambos os meios de diferenciação observou-se ES formados. Para aquisição da competência para formação de calos a partir de folhas e ovários imaturos de plantas adultas, foram avaliados o efeito das auxinas 2,4-D, dicamba e picloram, os meios de cultura de MS e Y3, as regiões basal e apical do palmito, quatro tipos de explantes provenientes de ovários imaturos e três classes quanto ao estádio de desenvolvimento das inflorescências. A auxina picloram associada à concentração de 450 μM proporcionou resultados superiores na indução de CE, em ambos os explantes testados. O meio Y3 aumentou a formação de calos em explantes foliares, porém, não teve influência nos explantes provenientes de flores femininas. Para a conservação de germoplasma de macaúba a médio-longo prazo, as sementes foram avaliadas quanto a tolerância à dessecação por até 168 horas. Após a determinação da melhor umidade para o armazenamento (5% de umidade), as sementes foram armazenadas a -196, -20, 6 e 25 °C por períodos de 0, 90, 180 e 360 dias. Para avaliar a viabilidade e germinação após cada período de armazenamento, as sementes foram desinfestadas e os EZ excisados e cultivados in vitro. Os resultados indicaram que as sementes de macaúba podem ser dessecadas para valores de até 4,3% de umidade, sem perda da viabilidade e com germinabilidade superior a 90%. As sementes armazenadas apresentaram perda da viabilidade ao longo dos períodos de avaliação em todas as temperaturas de conservação testadas, indicando que a categoria subortodoxa seja mais adequada para classificar as sementes desta espécie. No experimento de criopreservação de embriões zigóticos, esses foram extraídos de sementes e reidratados por 15 h em meio contendo 3% de sacarose. Em seguida, os EZ foram submetidos a dessecação por até 8 horas. Para cada período, parte dos embriões foi inoculada em meio de germinação e parte foi colocada em criotubos estéreis e imersos diretamente em nitrogênio líquido por até 360 dias. Após os período de armazenamento, foi realizado o descongelamento rápido dos criotubos em banho-maria a 40 °C por 90 segundos. Os resultados revelaram que há diminuição da germinabilidade com o aumento do tempo de dessecação dos EZ, com médias de 97 e 75% para 0 horas e 8 horas de dessecação, respectivamente. Para os embriões zigóticos criopreservados, a maior percentagem de germinação (81%) foi obtida após 6 horas de dessecação, quando os embriões apresentavam 11% de umidade. O presente trabalho contribui com informações relevantes tanto para a propagação vegetativa quanto para a conservação dessa espécie. Verificou-se que a embriogênese somática pode ser obtida a partir de diferentes fontes de explantes e a criopreservação pode representar uma nova estratégia para a conservação de germoplasma de macaúba por longos períodos. ______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study aimed to establish strategies for cloning by somatic embryogenesis from different explants and evaluate the desiccation tolerance and medium to long term storage of seeds and zygotic embryos of macaw palm (Acrocomia aculeata) for ex situ conservation. For the somatic embryogenesis from zygotic embryos (ZE) the effect of the auxin 2,4-D, dicamba and picloram at concentrations of 0, 1.5, and 3.0 mg L -1 and culture media MS and Y3, were evaluated. For the differentiation of somatic embryos (SE), the concentrations of auxin was reduced to 0.5 and 1.0 mg L- 1. Plant regeneration was performed in culture medium without auxin. The formation of embryogenic calli (EC) was higher in Y3 medium. SE were observed after 60 days in differentiation medium. The frequency of plant regeneration reached values of up to 31.9%. In somatic embryogenesis from leaf segments of in vitro plants, the effect of using a pre-induction treatment on calli and somatic embryo formation and was evaluated and more responsive explants characterized. For this, ZE were germinated in Y3 containing 0 and 225 μM of 2,4-D (pre-treatment). The aerial part of the plant was sectioned into four regions: meristematic, basal, median and apical. The segments from each region were inoculated in medium containing 450 μM of picloram for calli induction. The differentiation of SE occurred in medium with 40 and 80 μM of picloram. The use of the pretreatment increased the ability to induce the formation of EC as well as SE. The meristematic region showed superior results in the induction of EC and SE compared to the other regions tested. In both differentiation media we observed differentiated SE. In the acquisition of competence for calli formation from young imature and ovaries, we evaluated the effect of auxins 2,4-D, dicamba and picloram, the culture media MS and Y3, the basal and apical foliar regions of the palmetto tree, four types of explants from ovaries and three inflorescence development stage classes. The auxin, picloram associated with concentration of 450 μM, showed superior results in the induction of EC in both explants tested. The Y3 medium increased calli formation in leaf explants, however, it did not influence explantes from ovaries. For the conservation of macaw palm seed germplasm over the medium to long term, the seeds were evaluated for tolerance to desiccation for up to 168 hours. After determining the best moisture content for storage (5% moisture), seeds were stored at -196, -20, 6, and 25° C for 0, 90, 180 and 360 days. To assess the viability and germination after each storage period, the seeds were desinfested and ZE excised and cultivated in vitro. The results indicated that the macaw palm seeds can be desiccated to up to 4.3% moisture, without loss of viability and with a germination rate above 90%. Seeds stored for 360 days showed loss of viability over the evaluation periods at all storage temperatures tested, indicating that the suborthodox category is more appropriate to classify the seeds of this species. Based on the seed conservation results obtained, cryopreservation of zygotic embryos presents a viable alternative for the germplasm conservation of this species. For this experiment, ZE were extracted from seeds and rehydrated for 15 h in medium containing 3% sucrose. The ZE were then subjected to drying in a laminar flow chamber 0, 2, 4, 6 and 8 hours. For each period, a portion of the embryos was inoculated in germination medium and a portion was placed in sterile vials and immersed directly into liquid nitrogen for up to 360 days. After each storage period, rapid thawing of the cryotubes was conducted in a water bath at 40° C for 90s. The desiccation results showed that germinability decreases with increased drying time, averaging 97 and 75% for 0 hours and 8 hours of desiccation, respectively. For cryopreserved zygotic embryos, the highest germination percentage (81%) was obtained after 6 hours of desiccation, when the embryos had 11 % moisture. Embryos cryopreserved with 11% moisture content for up to 360 days showed 75% survival. This study contributes information relevant to both vegetative propagation and for the conservation of genetic resources of this species. Somatic embryogenesis can be obtained from different explant sources, and cryopreservation of zygotic embryos may represent a new strategy for the conservation of macaw palm germplasm for long periods.

Orientador: Aparercida Conceição Boliani / Co-orientador: Flávia Dionísio Pereira / Banca: José Luis Susumu Sasaki / Banca: Sonia Maria Nalesso Marangoni / Resumo: O tamarindeiro (Tamarindus indica L., Fabaceae) é uma árvore comum em países tropicais e possui grande potencial para exploração, devido ao seu elevado valor nutritivo e suas importantes características farmacêuticas, justificando assim, sua potencialidade como uma cultura promissora. O objetivo deste trabalho foi desenvolver métodos de propagação vegetativa para produção de mudas de tamarindeiro. Foram avaliados os meios de cultivo Murashige e Skoog (MS) e Woody Plant Medium (WPM), adicionados ou não de 2g L-1 de carvão ativado, nas concentrações de macronutrientes e micronutrientes em 0, 25, 50, 75 e 100% no estabelecimento de segmentos nodais e na germinação e crescimento de embriões zigóticos de tamarindeiro; o enraizamento de alporques utilizando como substrato composto orgânico, esfagno, bagaço de cana e fibra de coco de textura fina e concentrações de AIB (0, 500, 750, 1000 e 1250mg L-1) e o enraizamento de estacas herbáceas, semi-lenhosas e lenhosas, submetidas a cinco concentrações de AIB (0, 500, 1000, 1500 e 2000mg Kg-1) nas estações de primavera, verão, outono e inverno. A cultura de tecidos é um método viável para produção de mudas, o meio MS + carvão ativado e a concentração de sais em 25% proporcionam melhores resultados na regeneração de segmentos nodais e na germinação de embriões zigóticos de tamarindeiro. A alporquia é um método viável para produção de mudas, o esfagno favorece a porcentagem de alporques enraizados mesmo sem aplicação de regulador vegetal. A estaquia não é um método de propagação viável para a produção de mudas de tamarindeiro nas condições testadas / Abstract: The tamarind (Tamarindus indica L., Fabaceae) is a common tree in tropical countries and has great potential for exploitation due to their high nutritional value and its major pharmaceutical characteristics, thus justifying its potential as a promising culture. The aim of this work was to develop methods for propagating seedlings of tamarind. The culture medium Murashige and Skoog (MS) and Woody Plant Medium (WPM) , added to 2 g L-1 activated charcoal, the concentrations of macronutrients and micronutrients at 0, 25, 50, 75 and 100% were evaluated establishment of nodes and the germination and growth of zygotic embryos of tamarind, the rooting of air layers as substrate using organic compost, sphagnum , bagasse and coconut fiber and fine texture IBA concentrations (0, 500, 750, 1000 and 1250 mg L-1) and rooting of semi-hardwood and hardwood softwood cuttings, received five IBA concentrations (0 , 500, 1000, 1500 and 2000 mg kg-1) in the spring, summer, autumn and winter. Tissue culture is a viable method for the production of seedlings, MS medium plus charcoal and salt concentration by 25% provide better results in the regeneration of nodal segments and germination of zygotic embryos of tamarind. The layering is a viable method for producing seedlings, sphagnum favors the percentage of rooted air layers without application of plant growth regulator. Cutting is not a viable method for propagating seedlings of tamarind in the conditions tested / Mestre

Orientador: Janete Aparecida Desidério / Coorientador: Sandra Helena Unêda Trevisoli / Banca: Newton Cavalcante de Noronha Junior / Banca: Sônia Marli Zingaretti / Resumo: Os objetivos do presente trabalho foram (i) identificar uma cultivar de soja (Glycine max) com melhor resposta in vitro para indução de calos e regeneração; (ii) otimizar o processo de transformação genética via biobalística em embriões oriundos de cotilédone maduros de soja. Os experimentos de indução de calos e transformação genética foram realizados com as cultivares IAS-5, BR16 e MSOY6101. Para indução de calos foram utilizadas altas doses de auxinas [5 mg/L 2,4D (2,4-diclorofenoxiacético- 2,4D), 5 mg/L 2ip (2-isopenteniladenina) e 10 mg/L ANA (ácido-naftalenacético)] e para regeneração de 0 a 2 mg/L de BAP (6-benzylaminopurine), adicionando-se 0,5 mg/L de ANA em todos os tratamentos. Vários parâmetros foram testados na transformação: concentração do tungstênio; BAP (0 a 5 mg/L) no co-cultivo e a concentração de canamicina para seleção de plantas. A construção utilizada foi constituída pelo vetor pCAMBIA 2301, contendo o gene repórter GUS, regulado pelo promotor constitutivo 35SCaMV e adição do gene de seleção NPTII que confere resistência a canamicina. Foram observadas diferenças para a indução e regeneração via embriogênese somática entre as cultivares de soja, resultando na seleção da cultivar 'IAS-5' para avaliação do potencial embriogênico quanto à diferenciação e regeneração de plantas. Essa cultivar apresentou alta taxa de indução, proliferação e regeneração estável. Os resultados mostraram que a adição de 0,5 mg/L de BAP ao meio de regeneração e 5 mg/L de 2,4D ao meio de indução aumentaram as taxas de diferenciação dos embriões de 0 para 27,77%. A partir dos resultados observados na transformação genética em N. benthamiana, adotou-se 24 mg/μL de tungstênio por membrana para as três cultivares de soja. Para regeneração em embrião maduro de soja o melhor resultado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present work aimed to (i) identify the best soybean (Glycine max) cultivar for in vitro response for callus induction and plant regeneration; (ii) optimize genetic transformation of soybean mature cotyledon embryo via biobalistic. The callus induction and genetic transformation experiments were performed using IAS- 5, BR16 and MSOY6101 soybean cultivars. High auxin levels (5 mg/L 2,4- diclorofenoxiacetic, 5 mg/L 2-isopenteniladenine and 10 mg/L acid-naftalenacetic) were used for callus induction and to regeneration, adding 0,5 mg/L of acid-naftalenacetic and 0 to 2 mg/L of 6-benzylaminopurine (BAP), in all the treatments of regeneration. The following parameters were tested in order to optimize the transformation: tungsten concentration; BAP concentration (0 to 5 mg/L) in the co-cultivation medium and Kanamycin concentration in the selection medium. The genetic construction used was comprised of pCAMBIA2301 vector, containing gusA gene reporter, under the regulation of 35SCaMV constitutive promoter and NPTII selection gene that provides resistance to Kanamycin. Some differences were observed at the induction and regeneration of somatic embryogenesis among the three cultivars and only IAS-5 cultivar was selected for the assessment of embryogenic potential regarding plant differentiation and regeneration. This cultivar presented high level of callus induction, stable proliferation and stable regeneration. The results showed that the addition of 5 mg/L of 2,4D to the induction medium and 0,5 mg/L of BAP to the regeneration medium increased the levels of differentiation of the IAS-5 soybean embryos from 0 to 27,77%. Based on the results observed in the genetic transformation in N. benthamiana, 24 mg/μL of tungsten per membrane is now being used in the bombardment for the three soybean cultivars... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-13Bitstream added on 2014-06-13T19:39:03Z : No. of bitstreams: 1 000750164.pdf: 3296303 bytes, checksum: 4a72535207b1a5cfbb7095f2924f77e7 (MD5) / O tamarindeiro (Tamarindus indica L., Fabaceae) é uma árvore comum em países tropicais e possui grande potencial para exploração, devido ao seu elevado valor nutritivo e suas importantes características farmacêuticas, justificando assim, sua potencialidade como uma cultura promissora. O objetivo deste trabalho foi desenvolver métodos de propagação vegetativa para produção de mudas de tamarindeiro. Foram avaliados os meios de cultivo Murashige e Skoog (MS) e Woody Plant Medium (WPM), adicionados ou não de 2g L-1 de carvão ativado, nas concentrações de macronutrientes e micronutrientes em 0, 25, 50, 75 e 100% no estabelecimento de segmentos nodais e na germinação e crescimento de embriões zigóticos de tamarindeiro; o enraizamento de alporques utilizando como substrato composto orgânico, esfagno, bagaço de cana e fibra de coco de textura fina e concentrações de AIB (0, 500, 750, 1000 e 1250mg L-1) e o enraizamento de estacas herbáceas, semi-lenhosas e lenhosas, submetidas a cinco concentrações de AIB (0, 500, 1000, 1500 e 2000mg Kg-1) nas estações de primavera, verão, outono e inverno. A cultura de tecidos é um método viável para produção de mudas, o meio MS + carvão ativado e a concentração de sais em 25% proporcionam melhores resultados na regeneração de segmentos nodais e na germinação de embriões zigóticos de tamarindeiro. A alporquia é um método viável para produção de mudas, o esfagno favorece a porcentagem de alporques enraizados mesmo sem aplicação de regulador vegetal. A estaquia não é um método de propagação viável para a produção de mudas de tamarindeiro nas condições testadas. / The tamarind (Tamarindus indica L., Fabaceae) is a common tree in tropical countries and has great potential for exploitation due to their high nutritional value and its major pharmaceutical characteristics, thus justifying its potential as a promising culture. The aim of this work was to develop methods for propagating seedlings of tamarind. The culture medium Murashige and Skoog (MS) and Woody Plant Medium (WPM) , added to 2 g L-1 activated charcoal, the concentrations of macronutrients and micronutrients at 0, 25, 50, 75 and 100% were evaluated establishment of nodes and the germination and growth of zygotic embryos of tamarind, the rooting of air layers as substrate using organic compost, sphagnum , bagasse and coconut fiber and fine texture IBA concentrations (0, 500, 750, 1000 and 1250 mg L-1) and rooting of semi-hardwood and hardwood softwood cuttings, received five IBA concentrations (0 , 500, 1000, 1500 and 2000 mg kg-1) in the spring, summer, autumn and winter. Tissue culture is a viable method for the production of seedlings, MS medium plus charcoal and salt concentration by 25% provide better results in the regeneration of nodal segments and germination of zygotic embryos of tamarind. The layering is a viable method for producing seedlings, sphagnum favors the percentage of rooted air layers without application of plant growth regulator. Cutting is not a viable method for propagating seedlings of tamarind in the conditions tested.