Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-23Bitstream added on 2014-06-13T20:21:52Z : No. of bitstreams: 1 carvalho_am_dr_botfmvz_parcial.pdf: 86138 bytes, checksum: d515fed4a55e2525dda1d5a656ecfe36 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-02-04T11:39:27Z: carvalho_am_dr_botfmvz_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-02-04T11:40:12Z : No. of bitstreams: 1 000712006.pdf: 483818 bytes, checksum: c5b2ca06d97c52e38a0b52ec53856bd6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A lesão do tendão flexor digital superficial (TFDS) é uma importante causa de claudicação em equinos. Embora existam diversos tratamentos descritos, poucos são eficazes na melhora significativa da qualidade da matriz extracelular. Recentemente, diversos experimentos vêm focando no potencial terapêutico das células-tronco mesenquimais (CTMs) e do plasma rico em plaquetas (PRP) em casos de lesões de difícil cicatrização. O objetivo geral deste estudo foi a obtenção, cultivo e caracterização das células tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo (AdCTMS), a adoção de uma nova técnica de indução de lesão tendínea utilizando colagenase em gel e a avaliação da reparação tendínea após terapia com a associação terapêutica de AdCTMs e PRP através da análise clínica, ultrassonográfica, histopatológica, imunoistoquímica (colágeno tipo III e fator VIII) e da expressão gênica (COL1A1, COL3A1, TNC, TNMD, SCX). Foi possível isolar e cultivar as AdCTMs, concluir sua caracterização através da diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica, além da confirmação da expressão destas células aos marcadores CD44, CD90 e CD105 na citometria de fluxo. A indução da lesão do TFDS foi realizada com sucesso, sendo observado na avaliação clínica e ultrassonográfica o desenvolvimento de tendinite focal similar a lesão de ocorrência natural. O uso das AdCTMs associadas ao PRP demonstrou ser viável e resultou na prevenção da progressão da área da lesão no grupo tratado na avaliação ultrassonográfica, maior fluxo sanguíneo do grupo tratado na avaliação com Power Doppler, e melhora da organização cicatricial, com diminuição do infiltrado inflamatório na avaliação histopatológica. Não foram observadas diferenças entre os grupos... / Superficial digital flexor tendon (SDFT) lesion is an important cause of lameness in horses. Although there are many treatments described, few are effective in maintain the quality of the extracellular matrix. Recently several studies have focused on the therapeutic potential of mesenchymal stem cells (MSCs) and platelet-rich plasma (PRP) in some damage tissues. The aim of this study was to perform the isolation, cultivation and characterization of mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (AdMSCs), the adoption of a new tendon lesion induction technique using collagenase in gel, and evaluation of tendon repair after treatment with the AdMSCs and PRP association by clinical, ultrasonographic, histopathological, immunohistochemical (collagen type III and factor VIII) and gene expression (COL1A1, COL3A1, TNC, TNMD, SCX) analysis. It was possible to isolate, cultivate and perform the characterization of AdMSCs by adipogenic, osteogenic, chondrogenic differentiation, and to confirm the expression of CD44, CD90 and CD105 cell markers on flow cytometry. The SDFT injury induction was successful observed in clinical and ultrasonographic evaluation, with development of focal lesion similar to naturally occurring. The use of AdMSCs and PRP association proved to be feasible and resulted in preventing the progression of the lesion area in the treated group on ultrasound evaluation, increased blood flow on the Power Doppler evaluation and decreased inflammatory infiltrate and improved the organization on histopathological evaluation. No differences were observed between the groups regarding the immunohistochemistry evaluation and the expression of the tested genes. It can be concluded based on the results observed: (1) that the AdMSCs were properly processed and characterized with the methods employed; (2) tendon.. (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-12-11Bitstream added on 2014-06-13T20:50:47Z : No. of bitstreams: 1 mattos_lhl_me_botfmvz.pdf: 829995 bytes, checksum: 73939ace7310759bbb3cd6221db93211 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este projeto teve como objetivo avaliar os efeitos da fototerapia na cicatrização do tendão usando diodos superluminosos fixados em 890nm. Foram induzidas lesões cirúrgicas de 0,2cm de largura x 0,5cm de comprimento, realizadas no segundo terço do Tendão Flexor Digital Superficial de 10 ovelhas saudáveis que foram divididos em dois grupos: grupo tratado com diodos superluminosos com o comprimento de onda acima mencionado e grupo controle, tratado com placebo. A Cinesioterapia foi realizada em ambos os grupos. Os exames ultrassonográficos Modo B e Doppler foram realizados durante os primeiros 14 dias após a cirurgia e, em seguida, nos dias 21 e 28, a fim de avaliar o processo de cicatrização do tendão. A biópsia foi realizada no dia 28 para avaliar a neovascularização e o padrão tendão de fibra no exame histopatológico. Ausência de claudicação e uma melhoria significativa (p < 0,05) na dor após palpação foram observadas no grupo tratado. Além disso, no modo B foi evidenciada uma redução significativa do edema (p < 0,05) nestes animais. Não foi encontrada diferença estatística em relação à evolução da lesão. Houve diferença histológica (p < 0,05) para a neovascularização no grupo tratado. Fototerapia com diodos superluminosos de 890nm minimiza os efeitos do processo inflamatório / This project aimed to evaluate the effects of phototherapy on tendon healing using superluminous diodes set at 890nm. Surgical lesions were induced by 0.2 cm wide x 0.5 cm long, made in the second third of the superficial digital flexor tendon of 10 healthy sheep were divided into two groups: group treated with superluminous diodes with the wavelength mentioned above and control group treated with placebo. The Kinesiotherapy was performed in both groups. The B mode ultrasound examination and Doppler were performed during the first 14 days after surgery and then on days 21 and 28, to evaluate the healing of the tendon. A biopsy was performed on day 28 to evaluate neovascularization and tendon fiber pattern on histopathological examination. No lameness and a significant improvement (p <0.05) in pain after palpation were observed in the treated group. Furthermore, in the mode B was observed a significant reduction in edema (p <0.05) in these animals. No statistical difference was found in relation to the evolution of the lesion. Significant difference was seen (p <0.05) for neovascularization in the treated group. Phototherapy with 890nm superluminous diodes minimizes the effects of the inflammatory process

Resumo: Nas últimas três décadas muitas pesquisas têm sido realizadas com o objetivo de compreender o processo cicatrização dos tendões flexores e ainda hoje, a reabilitação envolve processos complexos e não compreendidos totalmente. As incertezas em colocar a sutura central na face dorsal vascularizada ou na face palmar avascularizada, persistem ainda na prática clínica e nos experimentos das técnicas de reparo dos tendões flexores dos dedos da mão na região da bainha digital. O objetivo deste estudo foi analisar as propriedades mecânicas e histopatológicas da colocação de um ponto de sutura simples no tendão flexor profundo dos dedos do pé de coelhos, verificando os efeitos na interface sutura-tendão e comparar a colocação deste ponto na região do tendão fibroso, vascularizada e na região do tendão fibrocartilaginoso avascular. Foram estudados 88 coelhos machos divididos em dois grupos de acordo com o local de colocação do ponto de sutura e em mais três subgrupos de acordo com o tempo de seguimento pós- operatório de sete, 14 e 21 dias. O procedimento cirúrgico consistiu na colocação de um único ponto na região de tendão fibroso (Grupo TF) e na região de tecido fibrocartilaginoso (Grupo TFC) no tendão flexor profundo dos dedos do pé do coelho. Em ambos os grupos, os tendões estavam íntegros, sem lesão e os animais permaneceram livres de imobilização. As propriedades mecânicas estudadas foram carga máxima, tensão na carga máxima, módulo de elasticidade, energia na carga máxima e energia por área. Três tendões de cada grupo foram submetidos à análise histológica descritiva por meio de microscopia óptica com ênfase no progresso das etapas da cicatrização tendinosa. A análise das propriedades mecânicas demonstrou comportamento semelhante em ambos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the last three decades many studies have been undertaken with the aim of understanding the process of flexor tendon healing and even now, the rehabilitation involves a complex and not fully understood process. The doubts concerning placing the core suture in the vascularized dorsal region than of the palmar avascularized region remain in clinical practice and in the experimental techniques in the repair of flexor tendons of the finger in the digital sheath. The aim of this study was to evaluate the mechanical and histopathologic properties of placing a single suture on the deep flexor tendon in rabbit toes, examining the effects on suture-tendon interface and compare the placement of this point at normal vascularized tendon as well as at the avascular fibrocartilagenous tendon. Eighty-eight male rabbits were studied and divided into two groups according to the local of the point of suture and in three subgroups according to the time of postoperative segment of seven, fourteen and twenty-one days. The surgical procedure was inserting a single point in the region of fibrous tendon (TF Group) and the region of fibrocartilagenous tissue (TFC Group) in deep flexor tendon in rabbit toes. In both groups, the tendons were intact without injury and the animals were allowed free movement. The mechanical properties were maximum load, stress at maximum load, elasticity modulus (Young modulus), energy at maximum load and energy per area. Three tendons from each group were subjected to descriptive histological analysis by an optical microscopy emphasizing the process of tendon healing stages. The analysis of mechanical properties showed similar trend in both groups, with increasing values in accordance with the periods of seven, fourteen and twenty-one days in most of the variables. The control group showed relative similarity than operated group except in TFC twenty one days group that operated... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Sérgio Swain Muller / Coorientador: Trajano Sardenberg / Banca: Ivan Chakkour / Banca: Antonio Carlos da Costa / Banca: Gilberto Hiroshi Ohara / Banca: Paulo Roberto de Almeida Silvares / Doutor

Orientador: Ana Liz Garcia Alves / Coorientador: Carlos Alberto Hussni / Banca: Alexandre Secorun Borges / Banca: Elenice Deffune / Banca: Anna Paula Balesdent Barreira / Banca: Rafael Resende Faleiros / Resumo: A lesão do tendão flexor digital superficial (TFDS) é uma importante causa de claudicação em equinos. Embora existam diversos tratamentos descritos, poucos são eficazes na melhora significativa da qualidade da matriz extracelular. Recentemente, diversos experimentos vêm focando no potencial terapêutico das células-tronco mesenquimais (CTMs) e do plasma rico em plaquetas (PRP) em casos de lesões de difícil cicatrização. O objetivo geral deste estudo foi a obtenção, cultivo e caracterização das células tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo (AdCTMS), a adoção de uma nova técnica de indução de lesão tendínea utilizando colagenase em gel e a avaliação da reparação tendínea após terapia com a associação terapêutica de AdCTMs e PRP através da análise clínica, ultrassonográfica, histopatológica, imunoistoquímica (colágeno tipo III e fator VIII) e da expressão gênica (COL1A1, COL3A1, TNC, TNMD, SCX). Foi possível isolar e cultivar as AdCTMs, concluir sua caracterização através da diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica, além da confirmação da expressão destas células aos marcadores CD44, CD90 e CD105 na citometria de fluxo. A indução da lesão do TFDS foi realizada com sucesso, sendo observado na avaliação clínica e ultrassonográfica o desenvolvimento de tendinite focal similar a lesão de ocorrência natural. O uso das AdCTMs associadas ao PRP demonstrou ser viável e resultou na prevenção da progressão da área da lesão no grupo tratado na avaliação ultrassonográfica, maior fluxo sanguíneo do grupo tratado na avaliação com Power Doppler, e melhora da organização cicatricial, com diminuição do infiltrado inflamatório na avaliação histopatológica. Não foram observadas diferenças entre os grupos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Superficial digital flexor tendon (SDFT) lesion is an important cause of lameness in horses. Although there are many treatments described, few are effective in maintain the quality of the extracellular matrix. Recently several studies have focused on the therapeutic potential of mesenchymal stem cells (MSCs) and platelet-rich plasma (PRP) in some damage tissues. The aim of this study was to perform the isolation, cultivation and characterization of mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (AdMSCs), the adoption of a new tendon lesion induction technique using collagenase in gel, and evaluation of tendon repair after treatment with the AdMSCs and PRP association by clinical, ultrasonographic, histopathological, immunohistochemical (collagen type III and factor VIII) and gene expression (COL1A1, COL3A1, TNC, TNMD, SCX) analysis. It was possible to isolate, cultivate and perform the characterization of AdMSCs by adipogenic, osteogenic, chondrogenic differentiation, and to confirm the expression of CD44, CD90 and CD105 cell markers on flow cytometry. The SDFT injury induction was successful observed in clinical and ultrasonographic evaluation, with development of focal lesion similar to naturally occurring. The use of AdMSCs and PRP association proved to be feasible and resulted in preventing the progression of the lesion area in the treated group on ultrasound evaluation, increased blood flow on the Power Doppler evaluation and decreased inflammatory infiltrate and improved the organization on histopathological evaluation. No differences were observed between the groups regarding the immunohistochemistry evaluation and the expression of the tested genes. It can be concluded based on the results observed: (1) that the AdMSCs were properly processed and characterized with the methods employed; (2) tendon.. (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Objetivo: comparar fixação transversa de enxertos tendinosos solidarizados versus não-solidarizados e entre duas posições rotacionais diferindo 90 graus entre si em túnel ósseo. Métodos: trinta e seis sistemas de fixação de tendões quádruplos bovinos em osso porcino foram confeccionados e divididos em quatro grupos de acordo com duas posições rotacionais de enxerto (diferindo 90◦) e presença ou não de solidarização. Em ensaio de tração, os dados de força e deslocamento nos pontos de falha (força máxima Fmax e primeiro pico válido Fp) e ponto de medida 445N foram medidos, comparados e utilizados para o cálculo de rigidez. Foram contabilizados os picos intermediários válidos. Resultados: os grupos “à cavaleiro” apresentaram maior força de ponto de falha com todos os parâmetros (p < 0,05) e maior rigidez com o uso de ponto de força máxima (P < 0,05). Nos grupos transfixantes, o grupo com solidarização apresentou maior Fmax e Fp (Fmax de 1555,4N ± 408 versus 1135,2 ± 448,7, Fp de 1539,9N ± 400,8 versus 950,5N ± 599,8). A quantidade de picos intermediários foi maior no grupo transfixante sem solidarização. Conclusão: A posição “à cavaleiro” apresentou maior Fmax, Fp e rigidez. Com a solidarização, o grupo transfixante obteve melhor resposta à tração. / Purpose: To make comparison between sewed and not sewed and between two different rotational positions of transverse fixed tendon graft inside bone tunnel. Methods: Thirty-six quadrupled bovine tendon grafts fixation systems in porcine femurs models were divided into four groups concerning rotational positioning inside de bone tunnel and the presence of sewing through the tendon sections. By measuring displacement and load at the resistance limit, first validated peak and 445N point, the groups were compared and the rigidity was achieved. The intermediate validated peaks were observed. Results: looped positioned groups showed higher fail points levels than the transfixed groups using all parameters (p<0,05), as well as greater rigidity when using the maximum load as fail parameter. In transfixed tendons groups, the sewed tendon group showed greater Fmax and Fp (Fmax 1555,4N ± 408 versus 1135,2N ± 448,7 and Fp 1539,9N ± 400,8 versus 950,5N ± 599,8), p<0,05. Intermediate peaks incidence was greater in the not-sewed/not-looped (transfixed) group Conclusion: looped positioned group gave better results: greater Fmax, Fp, and rigidity. The transfixed tendons group had better response to tensile load when sewed.

Objetivo: comparar fixação transversa de enxertos tendinosos solidarizados versus não-solidarizados e entre duas posições rotacionais diferindo 90 graus entre si em túnel ósseo. Métodos: trinta e seis sistemas de fixação de tendões quádruplos bovinos em osso porcino foram confeccionados e divididos em quatro grupos de acordo com duas posições rotacionais de enxerto (diferindo 90◦) e presença ou não de solidarização. Em ensaio de tração, os dados de força e deslocamento nos pontos de falha (força máxima Fmax e primeiro pico válido Fp) e ponto de medida 445N foram medidos, comparados e utilizados para o cálculo de rigidez. Foram contabilizados os picos intermediários válidos. Resultados: os grupos “à cavaleiro” apresentaram maior força de ponto de falha com todos os parâmetros (p < 0,05) e maior rigidez com o uso de ponto de força máxima (P < 0,05). Nos grupos transfixantes, o grupo com solidarização apresentou maior Fmax e Fp (Fmax de 1555,4N ± 408 versus 1135,2 ± 448,7, Fp de 1539,9N ± 400,8 versus 950,5N ± 599,8). A quantidade de picos intermediários foi maior no grupo transfixante sem solidarização. Conclusão: A posição “à cavaleiro” apresentou maior Fmax, Fp e rigidez. Com a solidarização, o grupo transfixante obteve melhor resposta à tração. / Purpose: To make comparison between sewed and not sewed and between two different rotational positions of transverse fixed tendon graft inside bone tunnel. Methods: Thirty-six quadrupled bovine tendon grafts fixation systems in porcine femurs models were divided into four groups concerning rotational positioning inside de bone tunnel and the presence of sewing through the tendon sections. By measuring displacement and load at the resistance limit, first validated peak and 445N point, the groups were compared and the rigidity was achieved. The intermediate validated peaks were observed. Results: looped positioned groups showed higher fail points levels than the transfixed groups using all parameters (p<0,05), as well as greater rigidity when using the maximum load as fail parameter. In transfixed tendons groups, the sewed tendon group showed greater Fmax and Fp (Fmax 1555,4N ± 408 versus 1135,2N ± 448,7 and Fp 1539,9N ± 400,8 versus 950,5N ± 599,8), p<0,05. Intermediate peaks incidence was greater in the not-sewed/not-looped (transfixed) group Conclusion: looped positioned group gave better results: greater Fmax, Fp, and rigidity. The transfixed tendons group had better response to tensile load when sewed.

Este estudo avaliou a efetividade de uma nova membrana bioabsorvível com propriedades mecânicas e químicas mais adequadas para o uso em tendões. A avaliação foi realizada em coelhos submetidos a reconstrução da porção gastrocnêmia do tendão calcâneo. Foi feita uma avaliação prévia das propriedades mecânicas da membrana com uso de dinamômetro digital que demonstrou capacidade de deformação elástica mínima de 100%. Todos os coelhos foram submetidos a tenotomia e reparo da porção gastrocnêmia do tendão direito, após isso foram randomicamente separados em grupos envelopado com membrana e controle. A extração foi realizada nos seguintes períodos: sete, 14 e 28 dias. A avaliação foi realizada através da macroscopia, histologia, mensuração objetiva do colágeno à luz polarizada pelo image-J®, mensuração de glicosaminoglicanos sulfatados e expressão gênica de proteoglicanos. Na avaliação macroscópica o grupo com membrana apresentou menos aderência e melhor direcionamento das fibras e tecido mais homogêneo em 14 e 28 dias, p=0,02 e 0,03 respectivamente. Na histologia a Classificação de Watkins modificada apresentou as seguintes médias: 14,67±0,42 membrana e 12,67±0,56 sem membrana, p=0,03 em 14 dias, e 19,88±0,83 membrana e 17,25±0,62 sem membrana, p=0,02 em 28 dias. Na mensuração do colágeno as médias dos valores de cinza(mvc) o colágeno tipo III foram de 17,97±1,83 membrana e 12,63±1,07 sem membrana p=0,03 em 14 dias. Para o colágeno tipo I as médias foram de 2,41±0,33mvc membrana e 1,31±0,18mvc sem membrana p=0,01 em 14 dias e 7,30±0,63mvc membrana e 2,92±0,32mvc sem membrana p < 0,0001 em 28 dias. A média dos GAGs foi avaliada em três porções do tendão, proximal, central e distal, em ug/mg de tecido seco. Em sete dias apresentou diferença significativa apenas na porção distal 0,80±0,04 com e 0,38±0,04 sem membrana para condroitin-sulfato em 14 dias não apresentou diferenças entre os grupos. O dermatan-sulfato apresentou diferença estatisticamente significante em 7 dias apenas na porção central 0,42±0,09 com membrana e 1,29±0,67 sem membrana p=0,02. Em 14 dias não foram observadas diferenças entre os grupos. Houve grande variabilidade na expressão gênica no teste das amostras com beta-Actina e GAPDH levando a resultados inconclusivos ou não variação entre os grupos que pode sugerir não variabilidade na expressão gênica dos GAGs no período de 28 dias. Os dados fornecidos por esse trabalho mostram que a envelopagem com a membrana bioabsorvível promoveu aceleração dos processos cicatriciais da porção gastrocnêmia do tendão calcâneo de coelhos / This study assessed the effectiveness of a new absorbable membrane, that presents mechanical and chemical features more suitable to tendons, in rabbit tendons. Before the animal model assessments a mechanical study of the membrane was carried out demonstrating that the minimal capability for elastic deformation of the membrane was more than 100%. All rabbits underwent to tenotomy and reconstruction of the right gastrocnius tendons, thereafter they were randomly divided in tendon wrapped by the membrane and control groups. Extraction was performed in the following periods of time: seven, 14 and 28 days. Assessments used macroscopy, histology, objective collagen assessment by using polarized light and Image-J® program in mean of gray values(mgv), sulphated glycosaminoglycans, genetic expression of proteoglycans. In the macroscopic 14 and 21-day assessments the membrane group presented less adherences p=0.02 and p=0.03 respectively. The modified Watkins classification: 14,67±0,42 membrane and 12,67±0,56 without membrane p=0,03 for 14 days; 19,88±0,83 membrane and 17,25±0,62 without membrane p=0,02 for 28 days. The type III collagen were 17,97±1,83 membrane and 12,63±1,07 without membrane p=0,029 for 14 days. For type I collagen were 2,41±0,33 membrane and 1,31±0,18 without membrane p=0,01 for 14 days and 7,30±0,63 memebrane and 2,92±0,32 without membrane p < 0,0001 for 28 days. The glycosaminoglycans were measured in 3 tendon portions, distal, central and proximal, by using ug/mg of dry tissue. In seven days just the distal part presented statistical differences 0,80±0,04 membrane and 0,38±0,04 without membrane, for 14 days no differences were found for Chondroitin-Sulphate. For Dermatan-Sulphate the central part of the tendon 0,42±0,09 and 1,29±0,67 p=0,02, for 14 days no differences were found. There was high variability for beta-actin and GAPDH for the samples in 28 days with inconclusive results that may mean no variability in gene expression of GAGs at this time period. Results as mentioned above demonstrated that the wrapped tendons by the new membrane presented acceleration in the healing processes for gastrocnemius tendons of New Zealand Rabbits

Orientador: Edson Rosa Pimentel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T05:39:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aro_AndreaAparecidade_D.pdf: 5514361 bytes, checksum: 938312e7fcf5c6bdd9bba11064c61b15 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A utilização de extratos vegetais com atividades farmacológicas pode ser promissora no tratamento de lesões tendíneas, considerando a presença de princípios ativos que estimulam a síntese de componentes da matriz extracelular (MEC). Portanto, o presente estudo teve como objetivo investigar após 7, 14 e 21 dias da lesão, os efeitos da aplicação tópica dos extratos de A. vera e A. chica sobre tendões parcialmente transeccionados de ratos. Os grupos tratados com o extrato da A. chica foram denominados A7, A14 e A21 (controles S7, S14 e S21), e após tratamento com a A. vera foram denominados Av7, Av14 e Av21 (controles B7, B14 e B21). Foram realizadas análises bioquímicas tais como Western blotting, zimografia e dosagens de hidroxiprolina, de proteínas não colagênicas (PNCs) e de glicosaminoglicanos (GAGs); assim como análises estruturais, ultraestruturais e funcionais. Após aplicação do extrato da A. chica, a concentração de PNCs foi menor em A7 e a de hidroxiprolina foi maior em A7 e A21, em relação aos controles. Considerando a MMP-9, menor quantidade foi detectada no grupo A14 comparado ao grupo S14. As isoformas latente, intermediária e ativa da MMP-2 foram observadas em todos os grupos, porém maiores quantidades das isoformas latente e intermediária foram encontradas em A21. Os resultados de Western blotting mostraram menor quantidade de colágenos tipos I e III em A7 comparado ao controle. Maior quantidade de dermatan sulfato (DS) foi detectada em A14, e quantidade inferior de DS e condroitin sulfato (CS) foi observada em A21 comparada ao S21. As medidas de birrefringência detectaram maior organização das fibras de colágeno no grupo A21 em relação ao controle, e as análises ultraestruturais mostraram muitos fragmentos de colágeno na região transeccionada nos grupos S7 e A7. A análise do CatWalk mostrou que os animais tratados com A. chica, exibiram maior pressão de contato das patas durante a marcha no 7° dia. Considerando a aplicação de A. vera, foi observada em SDS-PAGE banda menos intensa referente ao colágeno em Av14, confirmado por Western blotting. O grupo Av21 apresentou maior concentração de PNCs comparado ao seu controle. Na dosagem de hidroxiprolina, os grupos Av7 e Av14 apresentaram maiores concentrações, ao passo que Av21 apresentou valor inferior ao controle. O grupo Av14 apresentou maior concentração de GAGs sulfatados e menor quantidade de DS em relação ao controle. Menor quantidade de MMP-9 foi encontrada em Av14, e menores quantidades das isoformas latente e intermediária da MMP-2 foram observadas em Av7 e Av14 em relação aos controles. Maior quantidade da isoforma ativa da MMP-2 foi observada em Av21 comparado a B21. As medidas de birrefringência detectaram maior organização das fibras de colágeno em Av14 em relação ao controle. Ao passo que as medidas de dicroísmo linear realizadas nos cortes corados com azul de toluidina, mostraram menor organização dos GAGs em Av14 comparado ao controle. Nossa conclusão é que a aplicação tópica dos extratos da A. chica e da A. vera é efetiva na síntese e organização de componentes da MEC durante o processo de reparo / Abstract: The use of plant extracts bearing pharmacological activities may be promising in the treatment of tendon injuries, considering the presence of active principles that stimulate the synthesis of extracellular matrix components (ECM). Therefore, this study aimed to investigate after 7, 14 and 21 days of injury, the effects of topical application of extracts of A. vera and A. chica on the healing of partially transected tendons of rats. The groups treated with the extract of A. chica were called A7, A14 and A21 (controls S7, S14 and S21), and after treatment with A. vera were called Av7, Av14 and Av21 (controls B7, B14 and B21). Biochemical analysis were performed such as Western blotting, zymography and quantification of hydroxyproline, non-collagenous proteins (NCPs) and glycosaminoglycans (GAGs); as well as structural, ultrastructural and functional analysis. After application of the extract of A. chica, the concentration of non-collagenous proteins (NCPs) was lower in A7 and hydroxyproline was higher in A7 and A21, compared to controls. Considering the MMP-9, lower amount was found in A14 compared to S14. The latent, intermediate and active isoforms of MMP-2 were observed in all groups, but larger quantities of latent and intermediate isoforms were found in A21. The results of Western blotting showed a lower amount of collagen types I and III compared to the control A7. Higher amount of dermatan sulphate (DS) was detected in A14 and lower amounts of DS and chondroitin sulfate (CS) were observed in A21 compared to S21. The birefringence measurements showed a higher organization of collagen fibers in the A21 group compared to control, and ultrastructural analysis showed many fragments of collagen in the transected region of groups S7 and A7. Analysis of the Catwalk showed that animals treated with A. chica exhibited a higher contact pressure of the legs during walking on the 7th day. Considering the application of A. vera, less intense band related to collagen was observed on SDS-PAGE in Av14, confirmed by Western blotting. The group Av21had a higher concentration of NCPs compared to the control. In the dosage of hydroxyproline, Av7 and Av14 groups had higher concentrations in relation to their controls, while Av21 showed lower value than control group. The group Av14 had a higher concentration of glycosaminoglycans and lower amount of DS compared to control. Lower amount of MMP-9 was found in Av14, and lower amounts of intermediate and latent isoforms of MMP-2 were observed in Av7 and Av14 compared to controls. A higher amount of the active isoform of MMP-2 was observed in Av21 compared to B21. The birefringence measurements showed a higher organization of collagen fibers in Av14 compared to control. While linear dichroism measurements performed on sections stained with toluidine blue, showed lower organization of glycosaminoglycans in Av14 compared to control. Our conclusion is that the topical application of extracts of A. chica and A. vera is effective in the synthesis and organization of ECM components during the repair process / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito dos tempos de aplicação 3, 4 e 5 minutos por ERA do ultrassom terapêutico (UST) na organização das fibras de colágeno em lesão do tendão do calcâneo de ratos. Foram utilizados quarenta ratos machos Wistar, dos quais 32 sofreram tenotomia total do tendão do calcâneo e foram divididos em 5 grupos: GC, sem tenotomia e tratamento; GT, com tenotomia e sem tratamento; UST3, UST4 e UST5 submetidos à tenotomia e tratados com UST nos tempos de 3, 4 e 5 minutos por área de radiação efetiva respectivamente. Os animais foram submetidos à primeira aplicação do UST foi 24 horas após a cirurgia de tenotomia. A irradiação ultrassônica foi aplicada com os seguintes parâmetros: 1 MHz, modo pulsado com 20% do ciclo de trabalho (2 ms de emissão / 8 ms de intervalo), frequência de 100 Hz, 0,5 W / cm² de intensidade e ERA de 0,5 cm². A aplicação foi realizada 1x/dia. Os animais foram sacrificados após a 10ª sessão de tratamento, no 12º dia pós-operatório. Os tendões foram retirados cirurgicamente para análise da organização das fibras colágenas através do método de birrefringência (retardo óptico - OR). As fibras colágenas mostraram melhor agregação e organização no grupo UST3, UST4 e UST5 quando comparado ao GT (p<0.05) e o UST5 apresentou melhor resposta na comparação intergrupos. Conclui-se que o UST, aplicado no tempo de 5 minutos por área de radiação efetiva, apresentou a melhor dose-resposta quanto à organização das fibras colágenas no reparo tecidual de tendões de ratos / The aim of this study was to evaluate the effect of application times 3, 4 and 5 minutes ERA of therapeutic ultrasound in the organization of the collagen fibers in rat calcaneal tendon injury. Forty male Wistar rats were used, of which 32 underwent complete tenotomy of the calcaneal tendon and were divided into 5 groups: GC without tenotomy and treatment; GT tenotomy with and without treatment; UST3, UST4 UST5 and submitted to tenotomy treated with therapeutic ultrasound at times 3, 4 and 5 minutes per effective radiating area respectively. The animals were submitted to the first application of therapy US tenotomy 24 hours after surgery. Ultrasonic irradiation was applied with the following parameters: 1 MHz, pulsed mode at 20% duty cycle (2ms transmission / 8 ms interval), frequency 100 Hz, 0.5 W / cm² intensity and ERA 0.5 cm². The application was performed 1x / day. The animals were sacrificed after the 10th treatment session, on the 12th postoperative day. The tendons were surgically removed for analysis of the organization of the collagen fibers through birefringence method (optical delay - OR). The collagen fibers showed better aggregation and organization in group UST3, UST4 and UST5 when compared to the GT (p <0.05) and UST5 showed better response in the intergroup comparison. We conclude that the UST, applied in time of 5 minutes for effective radiation area, presented the best dose-response as the organization of the collagen fibers in tissue repair of rat tendons

A literatura a respeito da capacidade da ressonância magnética em avaliar as afecções do tendão da cabeça longa do bíceps é escassa, a despeito da importância destas condições na gênese da dor e da disfunção do ombro. O objetivo primário deste estudo foi analisar o desempenho diagnóstico da ressonância magnética na detecção de roturas e de instabilidade na porção intra-articular deste tendão, comparando os achados de imagem com os dados de cirurgia artroscópica (padrão de referência). Foram objetivos secundários determinar as reprodutibilidades intraobservador e interobservador, avaliar a capacidade da ressonância magnética em classificar os tipos de rotura, avaliar a acurácia da associação entre alterações tendíneas e roturas do manguito rotador na instabilidade, além de pesquisar fatores preditores da acurácia da ressonância magnética. Foi realizado estudo transversal, com segmentos retrospectivo e prospectivo. Os critérios de inclusão foram indicação de cirurgia artroscópica do ombro para reparo do manguito rotador e exame de ressonância magnética préoperatória. Os critérios de exclusão foram: manipulação cirúrgica pregressa no ombro estudado; exames com imagens de má qualidade; intervalo entre exame pré-operatório e procedimento cirúrgico superior a um ano; indicação de técnica cirúrgica por via aberta. Foram estudados 100 ombros de 98 pacientes, operados consecutivamente de abril de 2013 a março de 2017 (47 meses). Todos os pacientes realizaram ressonância magnética de 1,5 Tesla em nossa instituição, sem utilização de contraste intra-articular. Todas as cirurgias foram realizadas pelos mesmos 3 cirurgiões, com 10 a 12 anos de experiência em cirurgia do ombro e cotovelo. Dois radiologistas, com 4 e 8 anos de experiência na área musculoesquelética, avaliaram as imagens de todos os exames, de forma independente e sem conhecimento prévio dos resultados intra-operatórios. Os mesmos casos foram revistos por um dos radiologistas, 4 meses após a primeira análise. Nossos resultados demostraram desempenho diagnóstico moderado da ressonância magnética para detecção de roturas do bíceps, com sensibilidades entre 71,1% a 73,3%, especificidades de 72,7% e acurácia entre 72 e 73%. A reprodutibilidade interobservador foi substancial (coeficiente Kappa de 0,62 a 0,69) e a reprodutibilidade intraobservador foi substancial ou quase perfeita na avaliação das roturas (coeficiente Kappa de 0,74 a 0,82). Houve correlação moderada entre os métodos para classificar o tipo de rotura (coeficiente Kappa de 0,38 a 0,47). Quando consideradas roturas completas, foram calculadas especificidades entre 75,0% e 95,7%, porém sensibilidades de 55,6% a 66,7%. Para o diagnóstico de instabilidade, observa-se sensibilidade de 52,4% a 59,1%, especificidade de 70,5% a 84% e acurácia de 64,4% a 69,5%. A avaliação combinada do deslocamento tendíneo e das roturas do manguito rotador resultou em sensibilidades de 17,5% a 47,7% e especificidades de 72,7% a 90,7%. A reprodutibilidade interobservador foi substancial (coeficiente Kappa de 0,59 a 0,7) e a reprodutibilidade intraobservador foi substancial ou quase perfeita (coeficiente Kappa de 0,76 a 0,80) para avaliação de instabilidade. Não identificamos fatores preditores para acurácia da ressonância magnética na pesquisa dessas afecções / There is paucity of literature regarding the performance of magnetic resonance imaging to assess long head of the biceps tendon disorders, despite the importance of such disorders in the genesis of pain and shoulder dysfunction. The primary objective of this study was to analyze the diagnostic performance of magnetic resonance imaging in the detection of tears and instability of the intra-articular portion of this tendon, comparing imaging findings with data from arthroscopic surgery (reference standard). Secondary objectives were to determine intraobserver and interobserver reproducibility; to evaluate the capability of MRI to classify types of tears; to evaluate the accuracy of the association between tendon displacement and rotator cuff tears to predict instability; to investigate predictive factors of magnetic resonance accuracy. A cross-sectional study was carried out, with retrospective and prospective segments. Inclusion criteria were indication of arthroscopic shoulder surgery for rotator cuff repair and preoperative magnetic resonance imaging. Exclusion criteria were: previous surgical manipulation in the studied shoulder; poor quality images; interval between preoperative examination and surgical procedure above one year; and indication of open surgical technique. We studied 100 shoulders of 98 consecutively operated patients from April 2013 to March 2017 (47 months). All patients underwent magnetic resonance imaging at our institution, using a 1.5 Tesla scanner, without use of intra-articular contrast. All surgeries were performed by the same 3 surgeons, with 10 to 12 years of experience in shoulder and elbow surgery. Two radiologists, with 4 and 8 years of experience in musculoskeletal radiology, evaluated the images independently and without previous knowledge of the intraoperative results. The same cases were reviewed by one of the radiologists, 4 months after the first analysis. Our results demonstrated a moderate diagnostic performance of MRI to detect biceps tears, with sensitivities between 71.1% and 73.3%, specificities of 72.7% and accuracy between 72 and 73%. Interobserver reproducibility was substantial (Kappa coefficient ranged from 0.62 to 0.69), and intraobserver reproducibility was substantial or almost perfect (Kappa coefficient ranged from 0.74 to 0.82). There was moderate correlation between the methods when classifying the type of tear (Kappa coefficient ranged from 0.38 to 0.47). Regarding full-thickness tears, specificities were calculated between 75.0% and 95.7%, but sensitivities from 55.6% to 66.7%. For the diagnosis of instability, sensitivity was from 52.4% to 59.1%, specificity was from 70.5% to 84% and accuracy was from 64,4% to 69,5%. The combined evaluation of tendon displacement and rotator cuff tears resulted in sensitivities from 17.5% to 47.7% and specificities from 72.7% to 90.7%. Interobserver reproducibility was substantial (Kappa coefficient ranged from 0.59 to 0.7), and intraobserver reproducibility was substantial or almost perfect (Kappa coefficient ranged from 0.76 to 0.80) for instability assessment. We did not identify predictive factors for magnetic resonance imaging accuracy in the assessment of these conditions