La esquizofrenia es una enfermedad mental que afecta al 1% de la población mundial. Los pacientes esquizofrénicos reciben fármacos antipsicóticos (APs) para tratar la sintomatología de la enfermedad. Uno de los efectos secundarios causado por el consumo de estos fármacos consiste en un grupo de alteraciones motoras conocidas como síntomas extrapiramidales o EPS.Factores genéticos determinan, en parte, tanto el riesgo de sufrir esquizofrenia como el de desarrollar EPS en pacientes tratados con APs. Una de las teorías fisiopatológicas de la esquizofrenia defiende la existencia de un exceso de actividad dopaminérgica en los cerebros de estos pacientes, dado que el principal mecanismo de acción de los APs es el bloqueo de los receptores dopaminérgicos. No obstante, este mismo bloqueo a nivel del estriado sería lo que desencadenaría la aparición de EPS. La homeostasis de la dopamina en la sinapsis se lleva a cabo mediante su recaptación por parte del transportador de dopamina (DAT) y mediante su metabolismo por parte de las enzimas Catecol-O-Metiltrasferasa (COMT) y Monoamino Oxidasa (MAO). Polimorfismos genéticos que den lugar a una menor actividad de COMT, MAO y DAT, y que por lo tanto determinarían una mayor disponibilidad de dopamina, darán lugar a un mayor riesgo de esquizofrenia y a un menor riesgo de EPS.Los objetivos principales de esta tesis han sido realizar un estudio de asociación entre polimorfismos de COMT (G158A y -278 A/G), MAO-A (30bp-VNTR y 941T/G), MAO-B (A/G intrón 13) y DAT (40bp-VNTR y -67A/T), y de sus respectivos haplotipos, tanto con el riesgo de esquizofrenia como con el riesgo de aparición de síntomas extrapiramidales inducidos por antipsicóticos. Los objetivos secundarios fueron realizar un estudio descriptivo de las frecuencias genotípicas de estos polimorfismos en nuestra población general de referencia, y diseñar y poner a punto un método de genotipado multiplex para el análisis de los polimorfismos VNTR de MAO-A y DAT.Para ello se reclutaron 500 pacientes del Servicio de Psiquiatría del Hospital Clínico de Barcelona entre los años 2002 y 2004. 243 fueron diagnosticados con esquizofrenia y trastornos relacionados, que junto con 291 controles de base hospitalaria, permitieron realizar el estudio de riesgo de esquizofrenia. 270 pacientes esquizofrénicos y con trastorno bipolar tratados con terapia antipsicótica se incluyeron en el estudio de riesgo de EPS. 81 casos desarrollaron extrapiramidalismo (Simpson Angus > 3) y 189 controles no desarrollaron esta sintomatología (Simpson Angus ≤ 3). A partir de una muestra de sangre entera de todos los participantes realizamos el aislamiento de ADN genómico. Los polimorfismos seleccionados se genotiparon mediante diferentes métodos validados incluyendo PCR-RFLP, ASO-PCR y PCR multiplexelectroforesis capilar.En el estudio de riesgo de esquizofrenia, observamos que los individuos heterocigotos AG para el polimorfismo COMT -278A/G reducían el riesgo de sufrir la enfermedad en un 60% (OR: 0.4, p=0.009). Además detectamos al alelo G del polimorfismo MAO-B A/G intrón 13 como un factor de riesgo de esquizofrenia (OR:2.3 p=0.006). Cuando realizamos el análisis estratificando por sexo, el alelo G fue un factor de riesgo únicamente en mujeres (Alelo G, OR:2.6; homocigotas GG, OR:6.7; p=0.01). En cuanto al estudio de riesgo de EPS, el haplotipo A-A mostró ser un factor de protección pero únicamente en los pacientes bipolares (p=0.006).Nuestros resultados sugieren que los polimorfismos COMT -278 A/G y and MAO-B A/G intrón 13 pueden contribuir al riesgo de desarrollar esquizofrenia. Además, este es el primer trabajo donde se encuentra una asociación entre polimorfismos en la COMT y la susceptibilidad a los EPS. Este resultado es especialmente interesante si tenemos en cuenta el incremento del uso de fármacos antipsicóticos en pacientes bipolares. / Schizophrenia is a multifactorial disease with an important genetic factor. Schizophrenic patients are treated with antipsychotic drugs (APs), which may cause extra pyramidal symptoms (EPS). Genetic factors may also predispose patients to develop this adverse effect. Both schizophrenia risk and EPS risk depend, partly, on brain dopamine levels. The homeostasis of this neurotransmitter is carried out by the action of the dopamine transporter (DAT) and the action of the Catechol-O-Methyltrasferase (COMT) and Monoamine Oxidase (MAO) enzymes. According to this, the aim of this research was to examine the relationship between the COMT (G158A and -278 A/G), MAO-A (30bp-VNTR and 941T/G), MAO-B (A/G intrón 13) and DAT (40bp-VNTR and -67A/T) polymorphisms, and their corresponding haplotypes, and the risk of schizophrenia as well as the risk of EPS.243 patients with schizophrenia and related disorders and 291 controls were included in the study of schizophrenia risk. 270 patients receiving AP therapy (81 cases and 189 controls) were included in the study of EPS risk. Selected polymorphisms were genotyped following various validated methods, including PCR-RFLP, ASO-PCR and multiplex PCR-Capillary electrophoresis.In the study of schizophrenia, the heterozygotes for the COMT -278A/G polymorphism had a reduced risk of suffering the disease (OR: 0.4, p=0.009). We also identified allele G of the MAO-B A/G intron 13 polymorphism as a risk factor for schizophrenia (OR:2.3 p=0.006). When we carried out a sex-specific analysis, the allele G was a risk factor only in women (Allele G, OR:2.6; homozygotes GG, OR:6.7; p=0.01). In the study of EPS risk, the A-A haplotype of COMT showed to be a protective factor, but only in the bipolar patients (p=0.006). These results suggest that the COMT -278 A/G and MAO-B A/G intron 13 polymorphisms may contribute to the risk of developing schizophrenia. Moreover, this is the first study of an association between COMT polymorphisms and EPS susceptibility. This result is especially interesting if we take into account the increased use of AP drugs in bipolar patients.

El EDS es un sistema liberador de fármacos antitumorales compuesto por una AuNP recubierta de ácido hialurónico tiolado (HASH). El HASH, además de proteger las nanoparticulas metálicas, es reconocido por el receptor CD44, proteína sobreexpresada en células tumorales. Durante esta tesis se han estudiado diferentes candidatos, trabajando tanto la síntesis de diferentes tamaños de AuNPs, como la tiolación de HASH de diferentes pesos moleculares. Además se han puesto a punto las técnicas necesarias para la correcta caracterización físico-química y biológica de los candidatos. Mediante experimentos in vitro se concluyó que la internalización y la eficacia fue mayor con el sistema formado por AuNPs de 12 nm de diámetro y HASH con un tamaño de 30-50 kDa (EDS1). Los fármacos escogidos para validar el sistema EDS1 fueron el cisplatino, el oxaliplatino y el 5-fluorouracilo. Se conjugaron al EDS1 mediante diferentes vías de síntesis. Se utilizaron ligandos específicos o incluso síntesis directas al ácido hialurónico, donde el enlace con el fármaco era sensible al cambio de pH. La caracterización físico-química y biológica confirmaron que el EDS1 conjugado a cisplatino y oxaliplatino mejoraba el leso de los fármacos en células tumorales de páncreas (Panc-1). Sin embargo, con el 5-fluorouracilo no se encontró un sistema para validar el EDS. / EDS is an antitumor drug delivery system consisting of an AuNP coated with thiolated hyaluronic acid (HASH). HASH protects the metal nanopartides in physiological media but also it is recognized by CD44 receptor. which is a protein overexpressed in tumour cells. In this thesis different candidates, having different AuNPs particle size and different HASH molecular weight, were studied. It was also necessary to tune up proper physico-chemical and biological characterization techniques. In vitro experiments concluded that the internalization and efficacy were better in the system formed by 12 nm diameter of AuNPs and 30•50 kDa size of HASH (EDS1). The drugs chosen to validate the EDS1 system were cisplatin, oxaliplatin and 5-fluorouracil. EDS1 was conjugated to drug via different synthesis routes. Specific ligands sensitive to pH change or even directly to hyaluronic acid were used to link the drug. The physicochemical and biological characterization confirmed that EDS1 conjugated with cisplatin and oxaliplatin improved the IC50 of the drug in pancreatic tumour cells (Panc-1). However, with S-fluorouracil, the conjugation was not obtained.

Objetivos. Objetivo General: Evaluar la efectividad de una intervención mixta (con componentes educativos, de retroinformación, y de reformas organizativas) para la reducción de errores en la conciliación de la medicación al alta hospitalaria en el Servicio de Cirugía General del Hospital General Universitario Reina Sofía (HGURS) de Murcia. Objetivos específicos: Describir los tipos de discrepancias y errores de conciliación de la medicación. Evaluar la efectividad de una intervención mixta en la reducción de discrepancias y errores de conciliación de la medicación al alta hospitalaria. Identificar los factores asociados a las discrepancias y los errores de conciliación de la medicación al alta hospitalaria en el Servicio de Cirugía General. Predecir el riesgo de discrepancias y errores de conciliación de la medicación. Estimar la frecuencia anual de errores de conciliación al alta con daño potencial para el paciente, en el Servicio de Cirugía General, si no se implanta un programa de conciliación de la medicación al alta hospitalaria. Material y Método Estudio cuasi-experimental de series temporales interrumpidas de diseño secuencial con reversión simple. El estudio se desarrolló en un Hospital General Universitario Reina Sofia, de Murcia, de referencia del Área , en el Servicio de Cirugía General. Se realizó en 3 fases (preintervención, intervención y reversión). Se estudiaron los errores de conciliación de la medicación prescrita en los informes de alta de los pacientes ingresados un mínimo de 48 horas en el Servicio de Cirugía que cumplieron los criterios de inclusión. Se realizaron 30 observaciones 8dias) en cada fase del mismo, lo que al final supuso, unos 90 días de observación. Se realizó un muestreo consecutivo. La variable principal del estudio fueron los Errores de Conciliación de Medicación. Los datos fueron recogidos por los farmacéuticos que participaron en el estudio, de forma concurrente con la estancia del paciente, en la planta de hospitalización de Cirugía General. Se utilizaron los siguientes instrumentos para su recogida:1.- Cuestionario con preguntas abiertas para recoger la historia clínica y farmacoterapéutica del paciente. 2.- Formulario electrónico de la historia farmacoterapéutica (HFT) que se adjuntó a la historia clínica electrónica del paciente antes del alta hospitalaria, sólo en la 2ª fase del estudio o periodo de intervención. El médico responsable del alta visualiza esta información cuando realiza el informe de alta pudiéndola incorporar al informe. Para el análisis el modelo que más se ha utilizado y que hemos empleado en este estudio es el denominado modelo ARIMA (Autorregressive, Integrated, Moving Average) desarrollado fundamentalmente por Box y Jenkins. Resultados El porcentaje medio de discrepancias en la medicación por paciente, ha sido superior al 95% en los periodos preintervención y reversión, con una reducción de las mismas casi a la mitad en el periodo de intervención. El porcentaje medio de errores de conciliación por paciente, al alta hospitalaria, ha sido superior al 66% en los periodos preintervención y reversión, reduciéndose a menos del 25% en el de intervención. Se han producido uno o más errores, como mínimo en el 90% de los pacientes dados de alta durante los periodos sin intervención, disminuyendo al 52% en el de intervención. El tipo de error mas frecuente en la conciliación de la medicación al alta hospitalaria, en los periodos preintervención y reversión, ha consistido en la omisión de medicamentos, seguido por la prescripción incompleta. La categoría de gravedad más frecuente en los errores de conciliación al alta, en los periodos preintervención y reversión ha sido el error con gravedad de categoría B. El porcentaje medio de medicamentos con error de conciliación con daño potencial o que requiera monitorización por paciente, al alta hospitalaria, fue inferior al 20% en los periodos preintervención y reversión, disminuyendo a un 7% en el periodo de intervención. Este tipo de error afectó al 40% de los pacientes en los periodos sin intervención. Los factores de riesgo significativamente asociados a los errores de conciliación con daño potencial o que requieren monitorización, al alta hospitalaria, en el Servicio de Cirugía General, durante los periodos de preintervención y reversión han sido la edad del paciente, el tipo de ingreso, el día de ingreso, la edad del medico y la procedencia al ingreso. Las ecuaciones y modelos, obtenidos mediante Regresión Logística Multivariante, para predecir el riesgo de error de conciliación, adolecen de una escasa eficacia predictiva. El número anual de los errores de conciliación al alta con daño potencial o que requieran monitorización se estima en unos 1.900, y afectarán a unos 675 pacientes en el Servicio de Cirugía General, si no se implanta un programa de conciliación de la medicación. Conclusiones Considerando las anteriores conclusiones, que se deducen directamente de los resultados obtenidos tras una rigurosa aplicación de la metodología descrita, recomendamos a las administraciones sanitarias implementar, de manera generalizada y sistemática, estrategias eficientes como la descrita en nuestro estudio, que conducirán a una sensible disminución de los errores de conciliación de la medicación. Ello contribuirá, de manera objetiva y efectiva, al logro de una mayor calidad asistencial, lo que constituye un imperativo ético inexcusable. / Objectives. General Objective: To assess the effectiveness of a mixed intervention (educational components, feedback, and organizational reforms) to reduce errors in medication reconciliation at hospital discharge in the Department of Surgery of the Hospital General Universitario Reina Sofía (HGURS) of Murcia. Specific objectives: Describe the types of discrepancies and errors in medication reconciliation. To assess the effectiveness of a joint intervention in reducing discrepancies and errors Medication reconciliation at hospital discharge. Identify factors related to discrepancies and errors of medication reconciliation at discharge in General Surgery. Predicting the risk of discrepancies and reconciliation errors medication. To estimate the annual frequency of reconciliation errors at high potential harm to the patient, in the Department of General Surgery, if a program of medication reconciliation is not implanted at discharge. Material and Methods Quasi -experimental interrupted time series study of sequential design with single reversal. The study was conducted in a General Hospital Universitario Reina Sofia, Murcia, reference area, in the Department of Surgery . Was performed in 3 phases (pre-intervention, intervention and reversal) . Reconciliation errors in the prescribed discharge reports of patients admitted medication at least 48 hours in the Department of Surgery who met the inclusion criteria were studied. 8days 30 observations) were performed in each phase of it, which ultimately led to about 90 days of observation. A consecutive sampling was performed. The primary outcome was the Medication Reconciliation Errors. Data were collected by pharmacists who participated in the study, concurrently with the patient's stay in the hospital ward of General Surgery. Questionnaire with open questions to collect clinical and medication history of the patient - 1: The following instruments were used for collection. 2 - . Electronic form pharmacotherapeutic history (HFT ) that was attached to the electronic patient record prior to discharge only in the 2nd phase of the study or intervention period . The physician responsible for the high displays this information when making the report to incorporate high pudiéndola report. To analyze the model that has been used and we have used in this study is the so-called ARIMA (Autorregressive , Integrated , Moving Average) mainly developed by Box and Jenkins. Results The average percentage of discrepancies in medication per patient was higher than 95 % in the pre-intervention and reversal periods with a reduction thereof by almost half in the intervention period. The average percentage of reconciliation errors per patient at discharge, has been above 66% in the pre-intervention period and reversal, falling to less than 25% in the intervention group. There have been one or more errors, at least in 90 % of patients discharged during periods without intervention, decreasing to 52% in the intervention group. The most frequent error type in the medication reconciliation at hospital discharge in the pre-intervention and reversal periods consisted of the omission of medications, followed by incomplete prescription. The most frequent category of severity in reconciliation errors at discharge, in the pre-intervention period and reversal error was gravely category B. The average percentage of drug reconciliation error or potential damage that requires monitoring per patient at hospital discharge was less than 20 % in the pre-intervention and reversal periods, decreasing to 7% in the intervention period. This type of error affecting the 40 % of patients during periods without intervention. Risk factors significantly associated with reconciliation errors or potential harm that require monitoring at the hospital, in the Department of Surgery , during periods of pre-intervention and reversal were patient age , type of admission, day of admission , age and origin of the physician income . The equations and models, obtained by Multivariate Logistic Regression to predict the risk of error reconciliation, suffer from poor predictive power. The annual number of reconciliation errors with high potential to damage or requiring monitoring is estimated at about 1,900, and will affect about 675 patients in the General Surgery Service, if a program of medication reconciliation is not implanted. Conclusions. Considering the above findings, which follow directly from the results obtained after a rigorous application of the above methodology, we recommend implementing health administrations, of widespread and systematic, efficient strategies as described in our study, which will lead to a significant reduction errors medication reconciliation. This will help to objectively and effectively, to achieve a higher quality of care, which is an inexcusable ethical imperative.

DE LA TESI:Les vasculitis són processos clínico-patològics caracteritzats per la inflamació dels vasos sanguinis. Poden presentar-se com una entitat primària o complicar el curs d'una altra malaltia, especialmente infeccions, neoplàsies o malalties del teixit connectiu (artritis reumatoide, lupus eritematós sistèmic, malaltia de Sjögren). Com a conseqüència de la lesió dels vasos sanguinis pot aparèixer isquèmia i/o hemorràgia en els òrgans irrigats pels vasos afectats. L'espectre clínic de les vasculitis és molt ampli, ja que depèn del teixit o òrgan afectat i de l'extensió del procés. Aquesta varietat clínica comporta dificultats en el diagnòstic, amb el subsegüent retard en la instauración del tractament. De la mateixa manera, el pronòstic també és molt variable, tant entre els diferents tipus de vasculitis com a nivell individual.El maneig de les vasculitis és complex, ja que el tractament que actualmente s'utitlitza és agressiu i inespecífic, i s'ha de valorar el risc d'efectes indesitjats i el benefici que es pot obtenir. Tot i que els corticoids i els fàrmacs immunosupresors han suposat una gran millota en el pronòstic d'aquests malalts, les complicacions del tractament (bàsicament infeccions, neoplàsies, osteoporosis, diabetes i hipertensió arterial) comporten una morbilitat important. A més, els malalts no sempre reponen al tractament i sovint apareixen recidives en abandonar-lo. Per tot plegat, el que es vol aconseguir és un tractament el màxim d'específic i individualitzat en cada cas, però això no és possible sense un coneixement precís i profund de la patógena d'aquestes malalties. Justament, l'objectiu de la present tesi ha estat aportar nous coneixements sobre els mecanismes que contribuyesen al desenvolupament d'infiltrats inflamatoris en les vasculitis, amb la idea que en un futur contribueixin a millorar el tractament i el pronòstic dels malalts afectats per aquestes patologies. L'estudi està centrat en la poliarteritis nudosa (PAN) i l'arteritis de cèll.lules gegants (ACG) perquè són representatives de dos tipus diferents de vasculits (de vas mitjà i vas gran respectivamente) i perquè l'expressió de les molècules d'adhesió cel.lular, que és el que s'estudia en la present tesi, mai no s'ha investigat anteriorment en grups grans i homogenis d'aquestes vasculitis.

La resistencia bacteriana a los antimicrobianos, y en particular la producción de ß- lactamasas plasmídicas de espectro extendido (BLEE), es un grave problema descrito principalmente en cepas de origen clínico. Sin embargo, no existen muchos datos sobre la prevalencia y la capacidad de difusión de estas resistencias en otros ambientes. Por ello, los objetivos de esta Tesis se enmarcan en un amplio proyecto coordinado cuya finalidad ha sido el estudio de la prevalencia de BLEE, cefamicinasas y carbapenemasas en diversos ambientes, determinar la transmisibilidad de estas resistencias y, finalmente, identificar y caracterizar los plásmidos que las codifican. En este trabajo, en primer lugar se han estudiado 107 cepas procedentes de granjas de aves, de cerdos y de conejos, siendo todas ellas Escherichia coli, a excepción de una cepa de Enterobacter cloacae. No se ha encontrado ninguna cepa portadora de la resistencia a carbapenémicos, aunque si se describe la presencia de la ß-lactamasa plasmídica CMY-2 y de una gran diversidad de enzimas BLEE. Además, el 93% de las cepas fueron resistentes a dos o más de los antibióticos no ß-lactámicos probados. En las granjas de aves, la enzima CTX-M-14 y la cefamicinasa CMY-2 han sido las más frecuentes. Por el contrario, en las de cerdos la enzima CTX-M-1 ha sido la más prevalente. Se describe, por primera vez, la presencia de las enzimas TEM-52 y SHV-2 en las granjas de aves, la enzima SHV-5 en las de cerdos y la enzima CMY-2 en las de conejos. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que las granjas de animales actúan como un reservorio de genes de BLEE y CMY-2. Asimismo, se ha determinado el grupo filogenético y el estatus ExPEC de las 106 cepas de E. coli aisladas de granjas de animales. La mayoría de las cepas han sido definidas como comensales al pertenecer a los filogrupos A y B1. Aunque una proporción significativa de cepas procedentes de granjas de aves pertenece a los filogrupos B2 y D, ambos vinculados a cepas patógenas. Por el contrario, en granjas de cerdos las cepas mayoritarias han sido las pertenecientes al filogrupo A. Del total de las cepas estudiadas, sólo 10 se han caracterizado como ExPEC, presentando éstas una media de nueve factores implicados en la virulencia. La gran mayoría de estas cepas proceden de granjas de aves, pertenecen al filogrupo D y codifican la enzima CMY-2. Además, cabe enfatizar el hecho no descrito hasta el momento, de que dos de las tres cepas aisladas de conejos han sido caracterizadas como ExPEC.En segundo lugar, se han seleccionado 111 cepas de enterobacterias, aisladas de granjas de animales, de alimentos, de muestras clínicas, de muestras fecales de portadores sanos, de brotes alimentarios y de aguas residuales y se ha estudiado la transmisibilidad de las BLEE y CMY-2. Más del 70% de dichas cepas transfirieron por conjugación estas resistencias. Además, un 29,2% de las cepas transconjugantes obtenidas presentaron resistencias a los antibióticos no ß-lactámicos. Por otra parte, las enzimas CTX-M-1, CTX-M-32, CTX-M-14a, familia SHV y CMY-2 fueron las que se transfirieron con una mayor frecuencia.Finalmente, se han caracterizado los plásmidos conjugativos, presentes en las 111 cepas que codificaban BLEE y CMY-2. Para ello, se ha determinado su peso molecular mediante electroforesis en campo pulsante, y se ha identificado el grupo de incompatibilidad al cual pertenecen. Esta identificación se ha llevado a cabo mediante hibridación con sondas frías por dot blot y Southern blot y por PCR y secuenciación. Los resultados obtenidos indican que hay una clara concordancia entre los plásmidos que, aún procediendo de diversos ambientes, presentan características muy similares como son la enzima que codifican, el grupo de incompatibilidad al que pertenecen y, en ciertos casos su tamaño. Así, la extensa mayoría de los plásmidos que codifican de la enzima CTX-M-14a, pertenece al grupo IncK. De igual forma, las enzimas del grupo CTX-M-1 se han localizado en plásmidos IncN. La enzima CMY-2 se ha transferido en plásmidos de alto peso molecular portadores de dos replicones, IncQ e IncA/C2. En cambio, la enzima CTX-M-9 se ha vehiculizado en plásmidos con grupos Inc muy variados, aunque cabe destacar el hecho de que tres de ellos pertenecen al IncHI2. / Bacterial resistance mediated by extended spectrum ß-lactamases (ESBL) is a great concern that has been described mainly in clinical strains. However, there is no so much data about the prevalence and capacity of diffusion of this type of resistances in other environments.Therefore, the objectives of the present Thesis have been to study the prevalence of ESBL, plasmidic class C ß-lactamase and carbapenemases in diverse environments, to determine the transmissibility of these resistances and, finally, to identify and characterize the plasmid that codify these resistances. First of all, in this work it have been studied 107 strains from poultry, pig and rabbit farms, being all of them Escherichia coli but one Enterobacter cloacae strain. None strains have carried resistance to carbapenemics, although it have been described the CMY-2 enzyme and a great variety of ESBL. Moreover, the 93% of the strains showed resistance to two o more non-ß-lactam antibiotics tested. In poultry farms, the enzymes CTX-M-14 and CMY-2 were the most frequent. By the contrary, in pig farms, the enzyme CTX-M-1 was the most prevalent. To the best of our knowledge, this is the first time that it is described the enzymes TEM-52 and SHV-2 in poultry farms, the enzyme SHV-5 in pig farms and the CMY-2 in rabbit farms. The results obtained here; show that animal farms act as a reservoir or ESBL and CMY-2 genes. Moreover, it have been determined the phylogenetic group and the ExPEC status of the 106 E. coli strains. The majority of the strains have been identified like commensal even though they belong to the groups A and B1. However, a high percentage of the strains coming from poultry farms belong to the phylogenetic groups B2 and D, being both groups associated to pathogenic strains. By the contrary, in pig farms the majority of the strains derive from the phylogenetic group A. Only, ten strains have been characterized as ExPEC, carrying these strains nine virulence markers of average. The majority of the ExPEC strains derived form poultry farms been associated to the phylogenetic group D and codifying the enzyme CMY-2. It is important to denote that two of the three strains isolated from rabbit farms are ExPEC.Secondly, it has been selected 111 strains from Enterobacteriaceae, isolated from several environments: animal farms, food, food-borne outbreaks, community, clinical patients and human sewage and it has been studied the transmissibility of the ESBL and CMY-2. More than 70% of these strains transferred by conjugation these resistances. Moreover, a 29.2% of the transconjugant strains showed resistance to non-ß-lactam antibiotics. The enzymes CTX-M-1, CTX-M-32, CTX-M-14a, the family SHV and CMY-2 were the most transferable.Finally, it have been characterized the conjugative plasmids carrying ESBL of CMY-2 of the 111 strains. To do that, it have been determined the molecular weight of the plasmids by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) and their incompatibility group have been identified. The identification of the incompatibility group have been done by dot blot, Southern blot, PCR and sequencing. The results obtained show that there are a high degree of correlation among the Inc group to which the plasmids belong, the enzyme that they encode, and their size. So, the majority of plasmids that codify the enzyme CTX-M-14a belong to IncK group. Similarly, the enzymes of the group CTX- M-1 have been located in IncN plasmids. The plasmidic class C ß-lactamase, CMY-2, have been transferred in plasmids with high molecular weigh carrying the replicons IncQ and IncA/C2. By contrast, conjugative plasmids codifying of the enzyme CTX-M- 9 belong to different Inc groups, although three of them pertain to IncHI2.

INTRODUCCIÓ:El diagnòstic precoç del càncer de pròstata actualment es realitza amb la valoració del tacte rectal (TR) i l'antigen prostàtic específic (PSAt), havent de considerar habitualment la biòpsia prostàtica en els casos de PSA elevat i/o TR sospitós. Aquests mètodes són poc específics, el que suposa un alt ràtio de biòpsies negatives, sobretot en un determinat interval de PSA, en el que es sobreposen l'hiperplàsia benigna de pròstata i el càncer prostàticOBJECTIUS:1)Avaluar la utilitat clínica de la ressonància magnètica endorectal amb espectroscòpia (RME) i determinar la seva aportació i millora en el diagnòstic del càncer de pròstata comparativament amb el PSAt, ràtio de PSA, tacte rectal (TR) i ressonància magnètica sense espectroscòpia (RM). 2) Objectivar la capacitat de la RME per reduir el nombre de biòpsies en pacients candidats a estudi per càncer de pròstata. 3) Valorar el comportament metabòlic de la pròstata en la glàndula perifèrica i central amb o sense càncer de pròstata.METODOLOGIA:S'han analitzat prospectivament amb RME 54 pacients amb PSA total (PSAt) > 3ng/ml i/o PSA ràtio <20. S'ha realitzat estudi de RME amb bobina endorectal realitzant seqüències potenciades en T2 i posterior seqüència específica amb espectroscòpia. Posteriorment s'ha realitzat biòpsia prostàtica transrectal sota guia ecogràfica en tots els pacients i cirurgia en els casos indicats per càncer de pròstata. S'han analitzat les variables tacte rectal (TR), PSAt, PSA ràtio, RM, RME i índex metabòlic colina+creatina/citrat (CC/Ci) en la pròstata de forma global i per octants comparativament amb el resultat de la biòpsia o la prostatectomia en la zona perifèrica i central.Els poders predictius de les diferents variables -tant considerades individualment com combinades entre elles mitjançant models de regressió logística binària- s'han valorat a partir de l'estimació de les àrees sota les corresponents corbes ROC (Receiver Operating Characteristic).RESULTATS:La mitjana de PSA ràtio de 16.44 dels pacients amb biòpsia negativa és significativament major (p<0.01) que la mitjana de 11.14 dels pacients amb biòpsia positiva.L'estimació de l'índex de validesa del TR, PSAt, PSA ràtio, RM i RME per a la diagnosi del càncer de pròstata de la unitat prostàtica, calculat a partir de l'àrea sota la corba ROC, va resultar de 0.57, 0.66, 0.82, 0.86 i 0.90 respectivament. El model predictiu basat en afegir les variables PSA ràtio, RM i el quocient CC/Ci va mostrar l'índex de validesa major de 0.95, estimat a partir de l'àrea sota la corba ROC. Per aquest model predictiu de les tres variables s'hagués estalviat el 44% de les biòpsies amb l'11% de biòpsies innecessàries i amb un 100% de sensibilitat (p=0.20).L'estimació de l'índex de validesa de la RM i RME per a la diagnosi del càncer de pròstata de la glàndula perifèrica, calculat a partir de l'àrea sota la corba ROC, va resultar de 0.76 i 0.91 respectivament. El model predictiu basat en afegir la RME a la RM va mostrar l'índex de validesa de 0.92 estimat a partir de l'àrea sota la corba ROC en la glàndula perifèrica. La mitjana de CC/Ci de 0.5 dels pacients amb biòpsia negativa és significativament menor (p<0.01) que la mitjana de 1.0 dels pacients amb diagnosi positiva de la glàndula perifèrica. L'estimació de l'índex de validesa de la RM i RME per a la diagnosi del càncer de pròstata de la glàndula central, calculat a partir de l'àrea sota la corba ROC, va resultar de 0.66 i 0.89 respectivament. El model predictiu basat en afegir la RME a la RM va mostrar l'índex de validesa de 0.92 estimat a partir de l'àrea sota la corba ROC en la glàndula central. La mitjana de CC/Ci de 0.6 dels pacients amb biòpsia negativa és significativament menor (p<0.01) que la mitjana de 1.3 dels pacients amb diagnosi positiva de la glàndula central.CONCLUSIONS:La RM amb espectroscòpia és una tècnica útil per detectar el càncer de pròstata en pacients amb PSA elevat i millora de forma significativa la seva detecció respecte a la RM convencional i els paràmetres convencionals del TR i PSAt. La utilització de la RME conjuntament amb la RM i els paràmetres clínics del ràtio de PSA permeten millorar el valor predictiu en la detecció del càncer de pròstata, i pot ser una eina útil per poder ser inclosa en l'algoritme de diagnòstic en pacients amb sospita de càncer de pròstata.La RME permet estalviar un nombre significatiu de biòpsies innecessàries quan el resultat de la tècnica és negatiu de sospita de càncer de pròstata.L'índex metabòlic CC/Ci és significativament superior en el càncer de pròstata que en la glàndula normal, tant en la zona central com la perifèrica. / "Usefulness of magnetic resonance with spectroscopy for the early diagnosis of prostate cancer"INTRODUCTION:The current methods used for the diagnosis of prostate cancer are digital rectal examination (DRE) and prostate specific antigen (PSA). Prostatic biopsy is commonly performed in patients with elevated PSA and/or abnormal DRE. Those methods have low specificity, which represents a high rate of negative biopsies, especially within a certain PSA range, as prostate cancer and benign prostatic hyperplasia overlaps.OBJECTIVES:Evaluate the clinical role of magnetic resonance with spectroscopy (MRSI) and estimate the incremental value for the early diagnosis of prostate cancer comparing MRSI with the PSA, PSA ratio, DRE and conventional MR. 2) Analyze the ability of MRSI to reduce the number of biopsies for patients candidates to be evaluated for prostate cancer. 3) Estimate the metabolic behavior of the peripheral and central gland in patients with and without prostate cancer. METHOD:Fifty four consecutive patients with PSA > 3ng/ml and/or PSA ratio <20 were prospectively studied with MRSI. MR spectroscopy was performed with endorectal coil using T2-weighted images and a specific spectroscopy sequence, followed by transrectal biopsy guided with ultrasound in all patients and elected surgery in patients diagnosed with prostate cancer. The variables DRE, PSA, PSA ratio, MR, MRSI and the metabolic ratio choline+creatine/citrate (CC/Ci) for the prostate as a whole unit and by octants were analyzed and compared with the biopsy or prostatectomy results for the peripheral and central gland.Predictive values of the different variables -either considered individually as combined between them on a model of binary logistic regression- have been evaluated from the estimated areas under the ROC (Receiver Operating Characteristic) curves RESULTS:The mean PSA ratio of 16.44 for patients with negative biopsy results is statistically higher (p<0.01) than the mean of 11.14 for patients with positive biopsy.The estimated probability of DRE, PSA, PSA ratio, MR and MRSI for the diagnosis of prostate cancer for the prostate as a whole unit, calculated with the areas under the ROC curves, was 0.57, 0.66, 0.82, 0.86 and 0.90 respectively. The predictive model incorporating together the variables PSA ratio, MR and the CC/Ci ratio resulted with the higher area under the ROC curve of 0.95. For this predictive model with the three variables, 44% of the biopsies would be avoided with 11% of unnecessary biopsies would be performed and with a 100% of sensitivity (p=0.20). Estimated probability of MR and MRSI for the diagnosis of prostate cancer for the peripheral gland, calculated with the areas under the ROC curves, was 0.76 and 0.91 respectively. The predictive model incorporating together the variables MR and MRSI resulted with an area under the ROC curve of 0.92 for the peripheral gland. The mean CC/Ci ratio of 0.5 for patients with negative biopsy results is statistically lower (p<0.01) than the mean of 1.0 for patients with positive biopsy in the peripheral gland.Estimated probability of MR and MRSI for the diagnosis of prostate cancer for the central gland, calculated with the areas under the ROC curves, was 0.66 and 0.89 respectively. The predictive model incorporating together the variables MR and MRSI resulted with an area under the ROC curve of 0.92 for the central gland. The mean CC/Ci ratio of 0.6 for patients with negative biopsy results is statistically lower (p<0.01) than the mean of 1.3 for patients with positive biopsy in the central gland.CONCLUSIONS:MR with spectroscopy is a useful technique to detect prostate cancer in patients with elevated PSA and improves significantly its detection related to MR and the current methods of PSA and DRE. The combined use of MRSI with the PSA ratio allows to improve the predictive value for prostate cancer detection; and could be a useful technique to be included in the diagnosis algorithm for patients suspected for prostate cancer.MRSI allows to avoid a significant number of unnecessary biopsies whenever there is a negative result for suspected prostate cancer using the technique.The metabolic CC/Ci ratio is significantly higher for prostate cancer than in the normal gland, both in the central and in the peripheral gland.

En la práctica clínica diaria, la vía de administración más utilizada es la vía oral. No obstante, esta vía presenta ciertos inconvenientes, dificultad de deglución en algunos casos, pero principalmente, la potencial presencia de un efecto de primer paso tanto a nivel gástrico, duodenal y mayoritariamente hepático. Los fármacos administrados por vía oral y que sufren un efecto de primer paso, conlleva una disminución de su biodisponibilidad en magnitud que repercute en el rendimiento terapéutico del mismo. Este hecho unido a la dificultad de obtener principios activos nuevos capaces de que con ellos se obtengan mejoras terapéuticas dentro de un grupo farmacológico, ha llevado a la industria farmacéutica a diseñar nuevas formas farmacéutica que puedan administrarse por una vía alternativa a la vía oral. Dentro de este marco de actuación, la vía bucal constituye una muy buena alternativa a la vía oral, principalmente, porque está muy bien irrigada, lo que facilita la absorción del fármaco, y porque evita el efecto de primer paso que pueden sufrir los fármacos administrados por vía oral. De acuerdo con la bibliografía publicada sobre este tema, la mucosa de cerdo es la más representativa en lo que a absorción de fármacos se refiere, a la mucosa humana. No obstante, la metodología experimental requiere controlar una serie de factores para obtener resultados que sean un fiel reflejo del proceso (manipulación de la mucosa, temperatura de conservación, integridad de la pieza anatómica, etc.). El control de estos factores forma parte también del objetivo de la presente tesis. La comprobación práctica de la utilidad del modelo que se pretende desarrollar para estudiar el paso de fármacos a través de mucosa bucal, se llevará a cabo empleando como fármacos una serie de betabloqueantes debido a que está demostrado que estos fármacos sufren un efecto de primer paso. Se pone de manifiesto que se presentan diferencias estadísticamente significativas entre las cantidades de fármaco permeadas a los tiempos prefijados, y entre los parámetros de permeación. A fin de hacer más operativos los estudios de permeación de fármacos a través de mucosa de cerdo, también se ha llevado a cabo un estudio comparativo empleando mucosa fresca y congelada. El fármaco estudiado ha sido el propranolol por ser uno de los betabloqueantes más empleados en la práctica clínica. Los perfiles de permeación del propranolol a través de mucosa fresca y congelada resultaron ser muy similares, no presentándose diferencias estadísticamente significativas en el proceso de permeación. En otro orden de cosas, de acuerdo con los resultados obtenidos, ningún betabloqueante proporciona un flujo que logre alcanzar las concentraciones plasmáticas de fármaco en estado de equilibrio estacionario. No obstante, si se adiciona a la formulación una sustancia con acción penetrante, por ejemplo, un 5% de ácido oléico que permite aumentar aproximadamente 10 veces el valor del flujo, probablemente, con el metoprolol, oxprenolol y propranolol, se alcanzarían concentraciones terapéuticas en estado de equilibrio estacionario. Del trabajo realizado en esta Tesis, se pone de manifiesto que la vía bucal es una buena alternativa a la vía oral y que mediante una formulación apropiada se aumentaría el rendimiento terapéutico de los fármacos. / In recent decades, biopharmaceutical and pharmacokinetic studies have been focused on the investigation of new routes of drug delivery. This would be the case of buccal administration which provides direct access of the drug into the systemic circulation. That route of administration avoids the first-pass hepatic effect and also produces much better patient compliance. The present study focuses on the transmucosal penetration of a series of beta blockers because these drugs, in general, have a high first-pass effect. Different experiments were carried out with porcine buccal mucosa, because of its similarity with human buccal mucosa. Results of the studies reflect statistically significant differences between the permeated amounts of the assayed beta blockers and their permeation parameters. Other important aspect, investigated during the work was the comparison of drug permeation through buccal mucosa using fresh and frozen mucosa, with the aim of facilitating the operational methodology. In those experiments, propranolol was used as a reference drug for being one of the most widely used beta-blockers in clinical practice. The permeation profiles of propranolol through fresh and frozen mucosa were very similar. No statistically significant differences could be demonstrated in the permeation process. According to the results, and the pharmacokinetic characteristics of each drug, no betablocker achieved therapeutic plasma concentrations after transmucosal penetration. However, and according the bibliography, the addition of an enhancer to the formulation, for example 5% of oleic acid, could increase about 10 times the flow rate, and that increase, would allow to some betablockers to reach therapeutic steady state plasma concentrations. The present work shows that buccal administration could be a good alternative to the oral route if an appropriate formulation is developed and would enhance the therapeutic performance of drugs.

The study deals with the synthesis and biological activity of 4 different antitumours: Tetrahydro-[1,4]-dioxanisoquinolines, combretastatin A-4, dioxancarbazoles and resveratrol analogues. This study describes the synthesis strategy and multi-step synthesis of these potential antitumour compounds. Various tetrahydroisoquinolines were synthesized, five of which were biologically tested and have a promising K-Ras inhibition activity. Two of them show a high antiangiogenesis activity, one of which also presents antiosteoporosis properties. Two pirazolone derivatives were synthetized and biologically tested, one of which shows a very high K-Ras inhibition, antiangiogenesis and antiosteoporosis activity and inhibits the G2 cell cycle phases and subphases. Two azoledione combretastatin A-4 derivatives were also synthesized and will be biologically tested. Two dioxancarbazoles were prepared and biologically tested, one of which shows a high K-Ras and angiogenesis inhibition. Finally, four resveratrol analogues were synthesized and biologically tested. Their biological results show a moderate and selective K-Ras inhibition on the studied cell lines. In the future, the rest of the synthesized compounds are to be biologically tested. Further CDKs and topoisomerase II inhibition trials as well as toxicity studies will be carried out. / El estudio trata de la síntesis y la actividad biológica de 4 antitumorales diferentes: Análogos de tetrahidro-[1,4]-dioxanisoquinolinas, de combretastatina A-4, de dioxancarbazol y del resveratrol. El estudio describe la estrategia sintética y la síntesis multietapas de esos compuestos potencialmente antitumorales. Varias tetrahidroisoquinolinas fueron sintetizadas, cinco de ellas fueron probadas biológicamente y presentan una actividad de inhibición de la proteína K-Ras prometedora. Dos de esos compuestos presentan una actividad anti antiangiogénica elevada y uno presenta actividades de antiosteoporosis. Dos derivados de pirazolona fueron sintetizados y probados biológicamente, uno de ellos muestra una inhibición muy elevada de la K-Ras, de antiangiogénesis y de antiosteoporosis e inhibe la fase G2 del ciclo celular y sus subfases. Se han preparado dos derivados de azolediona combretastatina A-4 que se evaluarán biológicamente. Se sintetizaron dos derivados de dioxancarbazol, uno de ellos presenta una actividad alta de la K-Ras y de antiangiogénesis. Finalmente, se prepararon y evaluaron biológicamente cuatros análogos del resveratrol. Los resultados biológicos muestran una inhibición moderada y selectiva de la K-ras en las líneas celulares estudiadas. Próximamente, el resto de los compuestos sintetizados se evaluarán biológicamente. Ensayos adicionales de inhibición de CDKs, de topoisomerasa II y de toxicidad serán llevados a cabo.

Tesi realitzada a l'Institut de Química Avançada de Catalunya (IQAC-CSIC) / En los últimos años, se han dedicado numerosos esfuerzos al desarrollo de nuevos fármacos inhibidores de la entrada del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (HIV-1) en la célula huésped. La principal ventaja de este tipo de inhibidores es que actúan como profilácticos, es decir pueden evitar la infección primaria y la integración del genoma viral en el genoma de la célula huésped. Esto implica una reducción del riesgo de sufrir efectos secundarios, y además, se evita el establecimiento y el mantenimiento de reservorios virales latentes. Estudios recientes han demostrado que pacientes coinfectados por los virus GBV-C y HIV-1, tienen una progresión más lenta de la enfermedad del SIDA (Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida) así como una mayor supervivencia. Los estudios realizados, hasta el momento, indican que existe un mecanismo múltiple por el que la infección del GBV-C ejerce un “efecto protector” en los pacientes infectados con HIV-1. Empleando un modelo de co-infección, se ha observado que el virus GBV-C puede inhibir la replicación del HIV-1 así como la entrada de este último en las células. Según los estudios publicados ciertas regiones peptídicas de las glicoproteínas estructurales E1 y E2 del GBV-C presentan un efecto inhibidor frente al virus del HIV-1, y parece ser que interaccionan con el péptido de fusión de la glicoproteína de envoltura gp41 del virus (PF-HIV-1). Teniendo en cuenta dichos resultados, uno de los objetivos de esta tesis doctoral es el diseño y la síntesis de derivados peptídicos pertenecientes a la región (22-39) de la proteína de envoltura E1 del virus GBV-C (E1P8), la cual en estudios previos ha mostrado una cierta actividad inhibitoria del virus del HIV-1. Se pretende mejorar la actividad antiviral del dominio peptídico E1P8 y así abordar el diseño de nuevos péptidos inhibidores de la entrada del virus del HIV-1. Se pretende evaluar el efecto de los diferentes aminoácidos en la estructura primaria de la secuencia nativa, y de su carga neta, en la actividad anti-HIV-1 del péptido E1P8. Con esta finalidad, se ha realizado un “scanning” posicional mediante la síntesis de 23 péptidos lineales, análogos del E1P8, en los que se ha sustituido cada uno de los aminoácidos de la secuencia original por alanina, y cambiado la carga neta del péptido mediante la sustitución de aminoácidos cargados por aminoácidos neutros. A continuación, se ha llevado a cabo el diseño y la síntesis de nuevas formas de presentación peptídica (varios lipopéptidos y un péptido cíclico). El estudio de la interacción entre los derivados peptídicos del E1P8 y el PF-HIV-1 se ha realizado mediante ensayos biofísicos, utilizando modelos de membrana. Para ello, se han utilizado técnicas fluorimétricas, Balanza de Langmuir, Microscopia de fluorescencia, Dicroísmo Circular y Resonancia de Plasmón Superficial. La actividad biológica de los péptidos se ha estudiado utilizando ensayos celulares y ensayos de inhibición de replicación del virus HIV-1. Los resultados obtenidos permiten concluir que tanto la estructura primaria como la carga neta de E1P8 son esenciales para su actividad anti-HIV-1. Los lipopéptidos interaccionan con el PF-HIV-1 e inhiben la infección del HIV-1 con una mayor actividad que la secuencia nativa. El péptido E1P8 ciclado es el que presenta la mejor actividad inhibitoria del virus HIV-1, por lo que podría considerarse como punto de partida para el diseño de péptidos derivados del GBV-C con aplicación en futuras terapias anti-HIV-1. / Interest in the use of synthetic peptides as inhibitors of HIV-1 fusión and entry is growing significantly, given that they are applicable in combined therapies or when resistance to other antiretroviral drugs is seen and that they act before the virus enters the cell. Recently it has been shown that the coinfection with GBV-C virus and HIV-1 has been associated with slower progression of the illness. Several studies have been published to propose different models of interaction between GBV-C and HIV-1. One of the proposed mechanisms by which GBV-C modulates HIV-1 infection involves inhibiting HIV-1 replication in vitro by GBV-C proteins. In our hands, certain peptide sequences of the E1 envelope protein of the GBV-C virus, as E1P8, inhibit HIV-1 entry, and appear to interact with HIV-1 fusion peptide (FP-HIV-1). Based on these findings, the aim of present thesis is to carry out the design and synthesis of peptides, derivatives of the P8 region of the envelope protein E1 GBV-C, as HIV-1 inhibitors. In order to perform a systematic trial on the structure-activity relationship of these sequences, E1P8 peptide analogues were analyzed in which each of the amino acid residues was replaced by L-Ala. The influence of the total net load of the peptides on the activity through the replacement of residues loaded with neutral amino acids was also studied. Then, the design and synthesis of new strategies of peptide presentation as lipopeptides and cyclic peptide also was performed. The study of interaction between peptide derivatives E1P8 GBV-C and FP-HIV-1 is carried out through biophysical assays with membrane models, cellular assays and finally testing with HIV-1 infection. The results indicate that the primary structure and the net charge of E1P8 influence the activity of the peptide. Lipopeptides interact with FP-HIV-1 and inhibit HIV-1 infectivity better than the native sequence. Although the cyclic E1P8 presents higher inhibitory activity of HIV-1, suggesting that this peptide could be best candidate for use in future antiviral therapies.

La presente Tesis Doctoral, presentada como compendio de publicaciones, tiene como objetivo general la aplicación de diversas técnicas computacionales al estudio de los determinantes moleculares que subyacen en la interacción ligando-receptor. Para ello, se han definido dos líneas de investigación, una de desarrollo metodológico y otra de aplicación. En el capítulo metodológico se incluye un único manuscrito (Juárez-Jiménez et. al., J. Phys. Chem. B, 2014) en el que extiende la metodología Multinivel desarrollada por Forti et. al. (J. Chem. Theory Comput. 2012) al uso de campos de fuerza de mecánica clásica. Dicho estudio es relevante de cara a optimizar la exploración de las preferencias conformacionales de fármacos y otras pequeñas moléculas orgánicas. En concreto, se evalúa el uso de campos de fuerza clásicos para llevar a cabo un muestreo a bajo nivel de teoría de las preferencias conformacionales de moléculas tipo feniletilamina y se comprueba que los resultados obtenidos son consistentes con los datos experimentales descritos en la bibliografia y con los resultados obtenidos con la implementación original del método, donde se empleaba el hamiltoniano semiempírico RM1. En segundo lugar, la nueva implementación del método se utiliza para predecir las preferencias conformacionales del antibiótico estreptomicina, obteniéndose resultados similares a los obtenidos experimentalmente por resonancia magnética nuclear, si bien sugerentes de posibles mejoras en la metodología. El capítulo de aplicación incluye tres publicaciones (Bolea et. al. J. Med. Chem. 2011; Juárez Jiménez et. al. BBA Proteins and Proteomics, 2014 y Viayna et. al. J. Med. Chem. 2014), obtenidas a partir de una colaboración multidisciplinar entre diversos grupos de diseño, síntesis y evaluación farmacológica de compuestos de potencial interés en la enfermedad de Alzheimer. Concretamente, se describe el desarrollo de dos familias de fármacos multipotentes: compuestos iMAO-iAChE y compuestos iBACE-1-iAChE, centrándose la discusión en la elucidación de los modos de unión y las relaciones estructura-actividad de dos series de compuestos multipotentes a sus principales dianas terapéuticas mediante la combinación de técnicas de modelización molecular, tales como el docking y la dinámica molecular. En el primer caso, se describen modelos de unión a AChE y MAO de compuestos híbridos donepezilo-PFN9601, abordándose en detalle los determinantes moleculares de las relaciones estructura-actividad y proponiéndose las causas estructurales del diferente comportamiento cinético observado para el mismo inhibidor en MAO A y en MAO B. Con el fin de mejorar el perfil farmacológico de los inhibidores, también se describe, mediante el empleo de compuestos selectivos MAO A, los determinantes moleculares de la selectividad entre las isoformas A y B que muestran algunos inhibidores de MAO. En el segundo caso, la modelización molecular ha permitido proponer un modo de unión a BACE-1 de compuestos híbridos huprina Y-rheína. Dicho modo de unión, sitúa la unidad de huprina Y en el sitio catalítico, mientras que sugiere que la unidad de rheína quedaría acomodada en un sitio de unión diferente al sitio catalítico, que hasta la fecha no ha sido explorado mediante técnicas de diseño racional de fármacos. Ello abre la puerta al desarrollo de nuevos compuestos que interaccionen con BACE aprovechando dicho centro de unión. / The aim of this doctoral thesis is to use computational techniques to explore the molecular determinants that underlie the ligand-receptor interaction. To this end, it has been elaborated as a compendium of publications following two main research lines. First, the expansion of the Multilevel strategy previously developed in the research group (Forti et. al. J. Chem. Theo. Comput. 2012) to explore the conformational preferences of drug-like molecules. Second, the development of new multitarget directed ligands (MTDL) of potential therapeutic interest against Alzheimer’s disease. The extension of the Multilevel strategy is mainly focused in assessing the suitability of classical force fields as an alternative to the originally implemented RM1 semiempirical Hamiltonian and to investigate the performance of the technique for charged molecules. To this end, the conformational preferences of a set of phenylethyl amines are evaluated with both approximations and the results are compared with experimental data obtained by means of nuclear magnetic resonance techniques, reaching similar conclusions in both cases. Streptomycin is also used as a test case to further test the new implementation of the technique. The results are also consistent with experimental results, but also highlight some aspects that could be improved in future revisions of the methodology. The development of MTDL against Alzheimer’s disease is a multidisciplinary effort in the framework of collaborations with experimental research groups (Bolea et. al. J. Med. Chem. 2011; Juárez Jiménez et. al. BBA Proteins and Proteomics, 2014 y Viayna et. al. J. Med. Chem. 2014). Using several molecular modelling techniques, we disclose putative binding modes to their main therapeutic targets for two families of MTDL: iAChE-iMAO and iAChE-BACE-1. The discussion of structure-activity relationships allows us to rationalize the molecular determinants that justify the isoform selectivity between isoforms A and B of MAO. Furthermore, they also allow us to disclose how compounds bind to BACE-1 taking advantage of an exosite previously unexploited in rational drug design, which pave the way for the development of novel drug candidates.