Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / En el presente estudio se evaluó el efecto de la inclusión de dos hidrolizados proteicos de pescado, solos y con distintas fuentes de proteína vegetal en la dieta de preinicio de pollos broiler machos sobre los rendimientos productivos y económicos. Para ello, se utilizaron 630 pollos broiler machos (Ross 308) de 1 día de edad a los que se les ofreció sólo para el período de preinicio (1-14 días) dos dietas con hidrolizados proteicos de pescado (BioCp® y BioSH®) al 3,4% de inclusión, dos dietas con BioSH® al 1,6% de inclusión más dos fuentes de proteína vegetal (Gluten de Maíz A y B al 2% de inclusión). Además, se utilizó una dieta en base Maíz-Soya como dieta control. El resto de las dietas fue la misma para los distintos tratamientos según período productivo y se ajustaron a los requerimientos de la línea genética y del NRC (1994). Al final del ciclo productivo se encontraron diferencias significativas (p<0,05) para el peso vivo promedio al día 35 y 43. No hubo diferencias estadísticamente significativas (p>0,05) en el consumo promedio de alimento y conversión alimenticia para los distintos períodos parciales y acumulativos del estudio. La mortalidad tanto de los distintos períodos como para la totalidad del estudio se consideró dentro de los rangos esperables para los estándares de la línea genética utilizada y de un manejo productivo comercial. Tanto el Índice de Eficiencia Europeo, como los índices económicos: Costo Alimentario de la Ganancia de Peso y el Margen Bruto, calculados al final del estudio fueron numéricamente mejores para el tratamiento BioSH 1,6% + 2% Gluten Maíz B en comparación con los demás tratamientos y el tratamiento control Maíz-Soya. Palabras Clave: Pollos broiler, hidrolizados proteicos de pescado, proteína vegetal, dieta de preinicio, rendimientos productivos y económicos / Proyecto INNOVA (CORFO empresa) Nº 204-4285 (2006)

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Salmonella Enteritidis (S. Enteritidis) continúa siendo un enteropatógeno de importancia en la industria avícola y en salud pública, debido a su condición zoonótica. Pese a los esfuerzos realizados en ambos sectores para su control, la bacteria continúa generando brotes de salmonelosis en la población humana, asociados principalmente al consumo de huevos inadecuadamente preparados. Debido a la limitada eficacia de las medidas de control actualmente aplicadas, el uso de bacteriófagos líticos muestra un potencial uso como medida de biocontrol de S. Enteritidis en la industria avícola. No obstante, a pesar de los exitosos resultados obtenidos tras su aplicación en pollos broiler y pollas de reposición, su uso aún no ha sido evaluado en aves de postura adultas. El objetivo de este trabajo fue determinar la eficacia de una terapia preventiva con bacteriófagos, para el control de la colonización intestinal de S. Enteritidis, en gallinas de postura experimentalmente infectadas. Para esto, gallinas Hy–Line Brown de 22 semanas de edad libres de Salmonella, fueron tratadas durante 3 días seguidos con una mezcla de 3 bacteriófagos líticos, a una dosis de 1011 UFP/cada fago/ave y, un día después de la última dosis de bacteriófagos, fueron desafiadas con S. Enteritidis nalr rifr (2,4 x 108 UFC/dosis/ave). Además, se consideró un grupo control de infección, el cual sólo recibió la cepa desafío. Diez días post infección bacteriana, las aves fueron sacrificadas, obteniéndose muestras individuales de ambos ciegos, las cuales fueron sometidas a bacteriología cualitativa y cuantitativa (recuento bacteriano). Adicionalmente, los huevos ovipuestos durante la experiencia por el grupo control de infección y el grupo sometido a fagoterapia, fueron recolectados y procesados para detectar la presencia de S. Enteritidis (bacteriología cualitativa). Los resultados de la bacteriología cualitativa de ciegos fueron iguales entre el grupo tratado con bacteriófagos y el grupo control de infección, lográndose en ambos una incidencia de infección cecal del 96,67%. Por otra parte, los recuentos bacterianos a nivel cecal fueron menores en el grupo que recibió la fagoterapia (2,402 log10 UFC/g), respecto al grupo control de infección (2,978 log10 UFC/g), pero no se hallaron diferencias significativas entre estos resultados (p = 0,0961). Durante la experiencia, no fue posible el aislamiento de S. Enteritidis en los huevos frescos recolectados de los grupos experimentales. No obstante, se logró su aislamiento a partir de una muestra de huevos internos (presentes en el oviducto al momento de la eutanasia) del grupo control de infección. Adicionalmente, el porcentaje de postura gallina/día, promediado durante los 10 días post infección, fue estadísticamente menor en el grupo control de infección, respecto al grupo de aves que recibió la fagoterapia (p = 0,0054). Los resultados del presente estudio demuestran que, bajo el modelo experimental utilizado, los bacteriófagos no fueron capaces de reducir en forma significativa la colonización cecal de S. Enteritidis en gallinas de postura. Sin embargo, dado los buenos resultados obtenidos a nivel nacional e internacional en aves jóvenes, sería importante investigar los posibles factores que determinaron la falta de efectividad del tratamiento en aves adultas, con el objetivo de mejorar los resultados de la fagoterapia en este modelo animal. De este modo, en la medida que la fagoterapia en aves adultas sea perfeccionada, podría proyectarse como una herramienta adicional para el control de la salmonelosis en la industria avícola. / Proyecto FONDECYT 1080291

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente estudio se evaluó el efecto de inclusión en la dieta de Preinicio (1-15 días de edad) de pollos broiler con distintos hidrolizados proteicos de pescado (Activium®), sobre características de la canal y crecimiento de músculos seleccionados de pechuga y muslos. Este estudio fue llevado a cabo durante 35 días con 630 pollos broiler machos divididos aleatoriamente en 30 corrales de piso con 21 pollos cada uno. Se formuló y usó una dieta control en base a Maíz-Soya (M-S).Todas las dietas experimentales fueron formuladas isoproteicas e isoenergéticas, sólo se diferenció en la incorporación de distintos hidrolizados proteicos de pescado (BioCP®, EP-119, EP-120, EP-125 y EP-129). Los pollos fueron alimentados con las dietas experimentales desde la eclosión hasta los 15 días de edad. Luego, todos fueron alimentados con las mismas dietas según período (Inicio, Intermedio y Final) y requerimientos nutricionales de la línea genética utilizada (Ross 308). Los pollos fueron mantenidos con un régimen de alimentación ad-libitum y consumo de agua a discreción. Tanto a los 15 como a los 35 días se muestrearon y sacrificaron 15 aves por tratamiento, procediéndose luego a remover el trutro largo derecho y la pechuga de cada ave y registrándose su peso. Posteriormente, se removieron los músculos pectoralis, gastrocnemius y fibularis longus, de los cuales también se registró el peso. Estos datos fueron utilizados para calcular los distintos rendimientos. Para el análisis estadístico se llevó a cabo una ANDEVA y, ante diferencias significativas (p ≤ 0,05), una prueba de Tukey. Como resultado, todos los grupos con hidrolizados incluidos, se diferenciaron del control Maíz-Soya, con valores superiores. Cuando se comparan los tratamientos con los distintos hidrolizados para la variable peso de sacrificio, se aprecia la superioridad del EP-120 y EP-129, que a pesar de no diferenciarse del EP-119 y del control BioCP, muestran valores de peso vivo algo mayores estadísticamente (p<0,05) del tratamiento control. Sin embargo, cuando se expresan los pesos de pechuga y trutro como porcentaje del peso vivo, desaparecen todas las diferencias estadísticas entre los diferentes tratamientos, haciendo difícil señalar alguna ventaja de los hidrolizados probados sobre rendimientos porcentuales de las piezas anatómicas de mayor valor comercial, en relación al peso de su correspondiente canal. El impacto positivo del empleo de los hidrolizados proteicos fue entonces sobre el crecimiento total del ave en peso vivo. A los 35 días no se alcanzaron diferencias estadísticas entre tratamientos para ninguno de los músculos en estudio. Así, nuevamente se aprecia que el efecto favorable de los hidrolizados proteicos apreciados a los 15 días del ensayo, desaparece con la edad. Por lo tanto, se concluye que más estudios son necesarios con respecto al uso de hidrolizados proteicos de pescado, como ingrediente en las dietas para pollos broiler / Financiamiento: Proyecto Innova Bio Bio No. 06-IE-SI-86 (2007)

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La resistencia bacteriana a antimicrobianos y su diseminación son una de las mayores epidemias del mundo en la actualidad. Hoy en día, el uso masivo, y en algunos casos, el mal uso de los antimicrobianos, han generado una presión de selección en los microorganismos, creando nuevos y mejores mecanismos de resistencia tanto en cepas bacterianas comensales como en cepas patógenas, generando un grave problema de salud pública que no cesa de aumentar de forma alarmante en todo el mundo. El objetivo de este trabajo fue caracterizar los perfiles de resistencia genotípica frente a macrólidos y aminoglucósidos en cepas indicadoras de Enterococcus spp. y Escherichia coli fenotípicamente resistentes a estos fármacos, que fueron aisladas de la microbiota intestinal de gallinas de postura. Se determinaron los genes de resistencia a eritromicina ermB, ermA, mefA, msrA/B y msrC en 37 cepas de Enterococcus spp. resistentes fenotípicamente a eritromicina y los genes de resistencia a estreptomicina aadA1, aadA2, aadE, strA y strB en 26 cepas de E. coli resistentes fenotípicamente a estreptomicina. Se utilizó la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). El gen de resistencia a eritromicina más frecuente en cepas de Enterococcus spp. fue ermB encontrándose en 48,6% de las cepas. Los genes ermA, mefA, msrA/B y msrC no fueron encontrados en ninguna de las cepas del estudio. En cuanto a los genes de resistencia a estreptomicina, los genes más frecuentes encontrados fueron strA y strB, encontrándose en un 57,7% de las cepas de E. coli del estudio. Estos genes se encontraron siempre juntos. Los genes aadA1, aadA2 y aadE no fueron encontrados en ninguna de las cepas del estudio. Los resultados de este estudio entregan información actualizada de la situación de resistencia bacteriana en cepas indicadoras aisladas de animales productores de alimentos de alto consumo en nuestro país. Finalmente se puede señalar que los datos presentados en este trabajo podrían servir de base junto a otros estudios, para promover el desarrollo de un programa de monitoreo de la resistencia bacteriana en medicina veterinaria

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Escherichia coli es una bacteria comensal presente en la microbiota intestinal normal de las aves, la cual, es utilizada como bacteria indicadora de resistencia antimicrobiana en los programas de vigilancia. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la terapia con florfenicol sobre los patrones de susceptibilidad en cepas de E.coli provenientes de la microbiota intestinal de aves de postura. Se utilizaron 14 pollas raza Leghorn de 1 día de edad, las que fueron sometidas a un muestreo inicial para analizar sus niveles basales de susceptibilidad bacteriana; dicho grupo se denominó Grupo control I (GCI). Posteriormente, se asignaron a dos grupos: Grupo Control II (GCII), sin tratamiento y Grupo Florfenicol (GF), que recibió tratamiento con florfenicol (dosis: 30mg/kg p.v. durante 7 días, mediante sonda gástrica). Se aislaron a partir de muestras cloacales, 112 cepas en el GCII y 86 cepas en el GF. Se analizó, mediante pruebas de Concentración Inhibitoria Mínima la sensibilidad de E. coli frente a florfenicol, tilosina, eritromicina, ciprofloxacino, amikacina, gentamicina, ampicilina, tetraciclina y cloranfenicol. Se registraron altos niveles de resistencia en ambos grupos a florfenicol, tilosina y eritromicina, mientras que amikacina y gentamicina presentaron bajos niveles de resistencia. Hubo una asociación significativa (p ≤0,05) entre el uso de florfenicol y la modificación de los patrones de susceptibilidad en cepas de E. coli, específicamente frente a amikacina (χ²=5,43), tetraciclina (χ²=16,8), gentamicina (χ²=6,35), ciprofloxacino (χ²=24,1) y cloranfenicol (χ²=3,91)

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La oxitetraciclina es un antimicrobiano perteneciente a la familia de las tetraciclinas ampliamente utilizada en animales productivos debido a sus características farmacológicas y adecuada relación costo/efectividad. Es utilizada en las aves productoras de carne y huevos, disminuyendo la incidencia de enfermedades infecciosas de origen bacteriano y las mortalidades relacionadas con éstas. Sin embargo, el uso terapéutico de este fármaco no está exento de riesgos para la salud pública. Estos riesgos se centran fundamentalmente en la generación de resistencia en bacterias zoonóticas y la presencia de residuos en los productos finales generando efectos adversos en la población humana. Con la finalidad de proteger la salud de los consumidores al evitar la presencia de residuos de medicamentos de uso veterinario en alimentos destinados al consumo humano, se han establecido los denominados períodos de resguardo, los cuales se determinan en base a los límites máximos residuales (LMR) definidos para cada principio activo, tejido y especie animal. Los períodos de resguardo son específicos para cada formulación farmacéutica y varían de acuerdo a la dosis administrada, vía de administración y duración de la terapia. En Chile, el Registro Sanitario de los Alimentos ha fijado en 200 μg/kg el LMR para oxitetraciclina en huevos, pero no se ha definido el período de resguardo de este medicamento en gallinas de postura. El objetivo de este trabajo fue evaluar el período de resguardo de una formulación de oxitetraciclina en los huevos obtenidos de gallinas de postura tratados con este fármaco considerando el LMR definido para Chile. Para esto, se validó una metodología analítica mediante HPLC-DAD para la determinación de oxitetraciclina según la normativa de la Unión Europea. Posteriormente, se realizó un estudio de depleción utilizando 12 gallinas ponedoras Leghorn, las que fueron tratadas con una dosis de 40 mg/kg día de oxitetraciclina por vía oral durante un periodo de 10 días consecutivos. Este estudio permitió señalar que la distribución del antimicrobiano se inicia desde el primer día de tratamiento en ambos compartimentos del huevo (clara y yema), sin embargo las concentraciones del antimicrobiano son inferiores en la clara, alcanzando un nivel constante en este compartimiento al tercer de tratamiento. En el caso de la yema, las concentraciones de oxitetraciclina fueron constantes desde el día 10 de tratamiento. Además, las concentraciones presentes en clara no superaron el LMR establecido, contrario a lo observado en yema, en la cual hacia el final del tratamiento se observaron niveles de hasta 1044 μg/kg. De esta manera, la yema corresponde al tejido a considerar como marcador para evaluar el período de resguardo en este alimento. El periodo de resguardo para oxitetraciclina en los huevos, fue de nueve días considerando a la yema como tejido marcador. Esto quiere decir, que posterior a este periodo, los huevos obtenidos de gallinas de postura tratados con este fármaco, pueden ser destinados al consumo humano constituyendo de esta forma un alimento seguro para la población

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas congénita es causada por el parásito hemoflagelado Trypanosoma cruzi (T. cruzi) que alcanza al feto atravesando la barrera placentaria. Los mecanismos de infección e invasión tisular del parásito T. cruzi son poco conocidos. La invasión celular de T. cruzi induce la activación de vías de transducción de señales, las que se cuentan las vías PLC- (Fosfolipasa C-) y ERK1/2 (Señal extracelular regulada por quinasas) MAPK (Proteína quinasa activada por mitógenos) en el hospedero. La activación de estas vías se relaciona con la infectividad del parásito. Para estudiar la participación de estas vías de transducción de señales en la infección tisular, se incubaron explantes de vellosidades coriónicas humanas sanas en presencia y ausencia del parásito y en presencia y ausencia de inhibidores específicos de cada una de las vías. La infección exitosa de los explantes de vellosidades coriónicas humanas fue determinada por detección del parásito mediante PCR. Los efectos de la infección del parásito respecto a la modulación de las vías de transducción de señales se determinaron mediante métodos de Western Blot e inmunofluorescencia. Bajas concentraciones de T. cruzi inducen la activación de las vías de transducción de señales PLC- y ERK1/2 MAPK. Altas concentraciones de parásitos activan a la vía PLC- e inhiben a la vía ERK1/2 MAPK. Ninguno de los inhibidores de las vías de transducción de señales fue capaz de impedir la infección ex vivo de las vellosidades coriónicas humanas con T. cruzi. Se concluye que ambas vías de transducción de señales son parte de una compleja “estrategia” de invasión celular de T. cruzi / Proyectos Bicentenario Anillo 112 y FONDECYT 11080166

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La resistencia bacteriana es una consecuencia de los procesos evolutivos propios de los microorganismos, que ha ido aumentando junto con el uso de los antimicrobianos. Una de las bacterias utilizadas en los programas de monitoreo de resistencia bacteriana en animales de producción es Escherichia coli, especie ubicua en el tracto intestinal y que puede además comportarse como bacteria patógena, tiene la capacidad potencial de actuar como reservorio de genes de resistencia que pueden ser transferidos a otro tipo de bacterias. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de la terapia con tilosina sobre la sensibilidad de cepas de E. coli aisladas de la microbiota intestinal de aves de postura. Se utilizaron 16 pollitas de un día de edad divididas en dos grupos iguales: grupo control (grupo I) y grupo tratado con tilosina (grupo II). Se tomaron muestras de heces semanales desde la primera a la octava semana de edad y se realizó el tratamiento con tilosina en el grupo II durante la segunda semana. De cada muestra se aislaron dos cepas para determinar las Concentraciones Mínimas Inhibitorias (CIM) frente a nueve antimicrobianos. Los resultados obtenidos en el grupo II mostraron un aumento significativo (p≤0,05) de la resistencia bacteriana frente a ampicilina, cloranfenicol, ciprofloxacino, amikacina y tetraciclina. Además, se encontró multiresistencia en las cepas aisladas de ambos grupos, siendo el patrón florfenicol/cloranfenicol/tilosina/ciprofloxacino/ tetraciclina/eritromicina el más observado en el grupo I y a éstos se sumó ampicilina en el grupo II. Los datos obtenidos en el grupo control, demostraron que existe un alto nivel de resistencia intrínseco en cepas de E. coli, el cual aumenta con el uso de tilosina en dosis terapéutica. Estos resultados podrían servir para instaurar programas de vigilancia de resistencia bacteriana y fomentar el uso prudente de estos fármacos en planteles de gallinas ponedoras, considerando fundamentalmente los niveles basales de sensibilidad bacteriana

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La composición de la microbiota de las aves depende de varios factores, entre los que se encuentra el uso de anitimicrobianos. Los antimicrobianos pueden influir en el equilibrio de la microbiota intestinal de las aves, así como también favorecen la aparición de cepas resistentes a este tipo de fármacos. En este estudio, el objetivo fue evaluar el efecto de la terapia con oxitetraciclina sobre algunas bacterias que componen la microbiota intestinal y la selección de cepas resistentes a los antimicrobianos en aves de postura. Se distribuyeron al azar treinta aves de postura de 25 semanas en dos grupos experimentales: grupo I (control) no recibió tratamiento y grupo II recibió oxitetraciclina por 10 días. Se realizó un análisis cuantitativo de los cambios producidos en las poblaciones de Lactobacillus spp, y de las bacterias indicadoras E. coli y Enterococcus spp. Para estas dos últimas bacterias, se establecieron patrones de resistencia a los antimicrobianos. Los resultados muestran que el tratamiento con oxitetraciclina afectó negativamente a las poblaciones de E. coli y Enterococcus spp, y no tuvo efectos significativos sobre los Lactobacillus spp. Ambos grupos experimentales presentaron elevados niveles de resistencia a tetraciclinas. El fenómeno de multiresistencia fue más frecuente en cepas de E. coli que en las de Enterococcus spp. De acuerdo a estos resultados, se puede concluir que el uso de tetraciclina disminuyó el número de E. coli y Enterococcus spp., y además que existe un importante porcentaje de resistencia previa en las cepas estudiadas, por lo que es aconsejable que estos estudios se realicen en aves que no hayan tenido exposición previa a antimicrobianos

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Los virus siempre necesitarán de la maquinaria metabólica de la célula infectada para replicar su material genético, produciendo numerosas copias del virus original. En dicho proceso, algunos virus poseen la capacidad de producir un efecto citopático denominado lisis celular. Dentro de los virus que producen este efecto se encuentran los virus Herpes, descritos en insectos, reptiles, anfibios y moluscos; como también en casi todas las especies de aves y mamíferos que se han investigado. Uno de los virus de interés veterinario es el Herpes Canino Tipo 1 (CaHV1), debido a que su persistencia en un criadero canino provoca pérdidas económicas considerables, que incluso pueden significar el cierre de este tipo de empresas. El CaHV1 provoca una alta cantidad de cuadros clínicos, en especial en cachorros menores de cuatro semanas, en donde se ha descrito una mortalidad cercana al 90% de la camada. Si bien en Chile su detección y caracterización biológica fue descrita hace algunos años, obteniéndose un aislado nativo denominado RP5, lamentablemente aún no existe un método diagnóstico rápido. Bajo este contexto, el objetivo de este estudio fue la detección simultánea de dos fragmentos del gen de la glicoproteína B del CaHV1 en un mismo PCR (variante múltiplex) a partir del aislado RP5. Así, al determinar las temperaturas y tiempos óptimos para las etapas de alineamiento y elongación, se pudo implementar una herramienta de diagnóstico molecular que podría ser utilizada y comparada con otros protocolos de PCR, que actualmente se están desarrollando en otras memorias de Título en la Unidad de Virología de nuestra Facultad