Orientador: Lizandra Amoroso / Resumo: A urolitíase é enfermidade com importância econômica para a ovinocultura, que causa a saída prematura de ovinos machos destinados à reprodução, custos com tratamento e morte. A associação entre avaliação hemogasométrica, pesquisa de proteínas de fase aguda (PFA) como biomarcadores precoces e o estudo morfométrico do trato urinário pode ser empregada como método de auxílio diagnóstico precoce para a doença. Com esse objetivo, foram utilizados 14 ovinos hígidos, machos (não castrados), da raça Santa Inês com idade aproximada de 90 dias. Os ovinos receberam dieta experimental hiperfosfórica durante todo o período experimental, foram examinados semanalmente e após desenvolvimento da urolitíase, reorganizados em dois grupos experimentais distintos D1 (sem urolitíase) e D2 (com urolitíase) para análise comparada dos dados. No período pré-experimental e no dia do abate foram coletadas amostras de sangue venoso para avaliação hemogasométrica. Para mensurar as imunoglobulinas (A e G) e as PFA, analisaram-se as amostras dos ovinos que desenvolveram a urolitíase (D2). As coletas de sangue foram realizadas semanalmente até a manifestação clínica da enfermidade, totalizando 16 amostras. Ao término do experimento foi realizado o abate e necropsia dos ovinos, para descrição das alterações patológicas e a análise morfométrica. Fragmentos do trato urinário e fígado foram coletados e submetidos à rotina histológica e as lâminas histológicas foram descritas, seguindo-se a histomorfometria. Embo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Urolithiasis is an economically important disease for male sheep production that causes the premature calving of sheep for breeding, treatment costs and death. The association between hemogasometric evaluation, acute phase protein (APP) research as early biomarkers and urinary tract morphometric study can be employed as an early diagnostic aid for the disease. For this purpose, 14 healthy male (non-castrated) Santa Inês sheep, approximately 90 days old, were used. Sheep received a hyperphosphoric experimental diet throughout the experimental period, were examined weekly and after development of urolithiasis, reorganized into two distinct experimental groups D1 (without urolithiasis) and D2 (with urolithiasis) for comparative analysis of the data. In the pre-experimental period and on the day of slaughter, venous blood samples were collected for hemogasometric evaluation. To measure immunoglobulins (A and G) and APP, samples from sheep that developed urolithiasis (D2) were analyzed. Blood samples were collected weekly until the clinical manifestation of the disease, totaling 16 samples. At the end of the experiment, sheep were slaughtered and necropsied to describe the pathological changes and the morphometric analysis. Urinary tract and liver fragments were collected and submitted to histological routine and histological slides were described, followed by histomorphometry. Although blood pH was not different (P < 0.05) between groups, sheep that developed urolithiasis had com... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Juliana Regina Peiró / Banca: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Carlos Augusto Araújo Valadão / Resumo: A eficiência reprodutiva em éguas é geralmente baixa, sendo que 43% de éguas puro-sangue falham em conceber um potro vivo. Infecção bacteriana no lúmen uterino é uma das principais causas de infertilidade em éguas. O exame citológico do endométrio é o mais importante método auxiliar no controle da saúde genital da égua devido ao seu baixo custo, fácil emprego e a possibilidade de rápido diagnóstico de processos inflamatórios, mesmo que subclínicos. A indução experimental de endometrite por inóculos de E. coli em éguas promoveu um aumento significativo nas proteínas de fase aguda (APPs) sistemicamente demonstrado pelo aumento nas concentrações da proteína amiloide sérica A (SAA) e fibrinogênio, leucopenia transitória e aumento da expressão de mRNA de citocinas e SAA no endométrio (METTE et al., 2010). Os objetivos do presente estudo foram correlacionar os achados de exames ultrassonográficos e hematológicos com culturas microbiológicas, citologia e histopatologia endometrial de éguas que apresentam endometrite ou histórico reprodutivo insatisfatório, avaliar a influência das lavagens uterinas no ambiente uterino e determinar qual(is) proteína(s) de fase aguda poderia(m) ser utilizada(s) como marcador(es) da resposta inflamatória sistêmica. Doze éguas da raça Quarto de Milha, divididas em dois grupos: controle e com endometrite (n=6), foram avaliadas quanto aos parâmetros hematológicos, swab uterino para cultivo microbiológico, citologia endometrial, biópsia uterina, e eletroforese do soro para determinação das concentrações de proteínas de fase aguda, antes e após o processo de lavagem uterina. Os resultados do presente estudo mostraram que a cultura microbiológica associada ao exame citológico do endométrio possibilitaram a fácil identificação e classificação da endometrite já instalada...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The reproductive efficiency of mares is generally low, and 43% of Thoroughbred mares fail to conceive a live foal. Bacterial infection of the uterine lumen is a major cause of infertility in mares. The cytological examination of the endometrium is the most important method to assist in controlling the genital health of the mare due to its low cost, is easy to use and provides a rapid diagnosis of inflammatory processes. Experimental induction of endometritis by an inoculum of E. coli in mares caused a significant increase in acute phase proteins (APPs) systemically demonstrated by increased concentrations of serum amyloid A protein (SAA) and fibrinogen, transient leucopenia and increased mRNA expression of cytokines and SAA in the endometrium.The aim of this study was to correlate the ultrasonographic and hematological findings with results of the microbiological cultures, endometrial cytology and histopathology in mares with endometritis or poor reproductive history, assess the influence of uterine flushings in the uterine environment and determine which acute phase protein(s) might be used as a marker of systemic inflammatory response and evaluate the influence of uterine lavages on the uterine environment. Twelve Quarter Horse mares were divided into 2 groups: control and with endometritis (n=6) and were evaluated for hematological variables, uterine swab for microbiological culture, endometrial cytology, uterine biopsy and serum electrophoresis for determination of acute phase proteins concentrations before and after uterine lavage. The results of this study showed that the microbial culture associated with endometrial cytology allowed easy identification and classification of endometritis, and the histopathology was necessary to identify subclinical and/or chronic... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luiz Claudio Nogueira Mendes / Coorientadora: Fernanda Bovino / Banca:Francisco Leydson Formiga Feitosa / Banca:Marcio Carvalho da Costa / Resumo: Ao final da gestação o neonato deve estar preparado, por meio de modificações funcionais e estruturais de órgãos e sistemas para dar início à vida extra-uterina. Os animais prematuros nascem antes deste processo estar completo, apresentando falhas na maturação. O objetivo deste estudo foi tentar identificar por meio da técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida em dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) proteínas de fase aguda, dentre elas, albumina, ceruloplasmina, transferrina, haptoglobina, glicoproteína ácida e imunoglobulinas A e G, que possam indicar a maturação no neonato prematuro. Os cordeiros foram divididos em seis grupos experimentais (parto normal, cesárea a termo, cesárea prematura, cesárea prematura com administração pré-parto materna de dexametasona, cesárea com administração de surfactante nos prematuros e cesárea prematura com administração pré-parto materna de dexametasona e surfactante ao neonato). Os resultados indicaram que após a administração de colostro, independente do tratamento, os valores séricos de proteína total e imunoglobulinas G aumentaram, indicando que há transferência de imunidade passiva através do trato gastrointestinal. A transferrina tem seus teores superiores em animais com idade gestacional superior, demonstrando potencial para ser utilizado como marcador de maturação neonatal. / Abstract:At the end of gestation the neonate should be prepared, with functional and structural modifications of organs and systems to initiate extrauterine life. Premature animals are born before this process is complete, presenting maturation failures. The aim of this study was to identify an acute phase protein, such as a lbumin, ceruloplasmin, transferrin, haptoglobin, acid glycoprotein and immunoglobulins A and G, that demonstrates that different treatments indicate a maturation in the premature neonate using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis technique (SDS - PAGE) . The lambs were divided into six experimental groups (normal birth, full - term cesarean section at norma l time of gestation, premature cesarean section, premature cesarean section whose mothers received prepartum dexamethasone, cesarean section giving surfactante to the prematures and premature cesarean giving prepartum dexamethasone to the mothers and surfactant to the n eonate). The results indicated that after administration of colostrum, regardless of treatment, total serum protein and immunoglobulins increased, showing the transfer of passive immunity through the gastrointestinal tract. Transfer rin has higher levels in animals with higher gestational age, demonstrating potential as a marker of neonatal maturation / Mestre

O ferro é um elemento chave em muitos processos metabólicos, como transporte de oxigênio, síntese de hormônios esteróides, respiração celular, transporte de elétrons, síntese de DNA, proliferação e diferenciação celular e regulação gênica. A deficiência de ferro é a desordem nutricional mais comum afetando aproximadamente um terço da população mundial. Pequenos déficits no compartimento funcional de ferro têm sérias conseqüências sobre o sistema imune, principalmente na imunidade mediada por células. A abordagem dos pais ou responsáveis, as exigências éticas e a aderência de crianças da mesma faixa etária e sem outros problemas que afetem o metabolismo do ferro e o sistema imune são as principais dificuldades enfrentadas no desenvolvimento de pesquisas com seres humanos, sendo necessário o estabelecimento de modelos experimentais. Este trabalho teve como objetivo estabelecer um modelo de indução e recuperação de deficiência de ferro em camundongos, visando a sua utilização em estudos sobre alterações do sistema imune induzidas por esta deficiência. A deficiência de ferro foi induzida por ingestão de uma ração com baixo teor de ferro (5 mg /kg de ração) por 4 e 8 semanas. No termino deste período foram determinados: concentração de hemoglobina (colorimetrico), hematócrito (microhematócrito), estoques de ferro hepático (espectrometria de absorção atômica) e fenotipagem (citometria de fluxo) dos linfócitos presentes no sangue periférico e em suspensão de células do baço dos animais dos grupos controle (C) e deficiente em ferro (DF), sendo avaliado a porcentagem de células T CD4+ e CD8+, bem como a expressão do receptor de transferrina (CD71+) nessas subpopulações. Não houve diferenças na concentração de hemoglobina e no valor do hematócrito entre os animais dos grupos DF e C, porém os estoques de ferro estavam significantemente reduzidos nos animais do grupo DF de quatro (p<0,05) e oito (p<0,01) semanas. Não houve diferenças na porcentagem de linfócitos T CD4+ e T CD8+ entre os animais dos grupos DF e C, porém os animais deficientes em ferro apresentaram maior porcentagem de linfócitos T CD8+ do baço expressando CD71+ (p< 0,001). Este trabalho sugere que a depleção nos estoques de ferro não altera a proporção dos subtipos de linfócitos, porem as células T CD8 + do baço são mais sensíveis à deficiência de ferro. / Iron have a crucial role in several metabolic pathways, such oxygen transport, steroid hormone synthesis, cellular respiration, electron transport, DNA synthesis, cellular proliferation and differentiation and genic regulation. The iron deficiency is most common disorder nutrition, affecting about 30% world population. Deficits in iron functional compartment have serious delays about immunity systems, especially in the cellular immunity. Because of environmental problems, age, deficiency of nutrients other than iron, prevalence of infection, which may make human studies difficult, we used an animal model. This work aimed established iron deficiency induction and recuperation in mouse, for study about immune systems alteration. Iron deficiency was induced by feeding mice a diet that contained only 5 mg Fe/Kg for 4 and 8 weeks. After this period were determined: hemoglobin (colorimetry), hematocrit (microhematocrit), liver iron stores (atomic absorption spectrophotometer) and we performed a flow cytometry analyses in peripheral blood and spleen lymphocytes in control (C) and iron deficient (ID) mouse. We defined the effects of iron deficiency on T-cell subset and expression of cell-surface transferrin receptor (CD71+) in these cells. Hemoglobin concentration and hematocrit of ID mice were not difference those of C mice, but iron stores of ID mice (4 and 8 weeks) were reduced (p< 0,05 and p< 0,01; respectively). Although T-cells subsets in peripheral blood and spleen were not altered, iron deficiency significantly increased the number of spleen T CD8+ cells that express CD 71+ (p< 0,001). Data suggest that depletion of iron storage not alter T-cells subsets and spleen T CD8+ is the most sensible subset in iron deficiency.

O ferro é um elemento chave em muitos processos metabólicos, como transporte de oxigênio, síntese de hormônios esteróides, respiração celular, transporte de elétrons, síntese de DNA, proliferação e diferenciação celular e regulação gênica. A deficiência de ferro é a desordem nutricional mais comum afetando aproximadamente um terço da população mundial. Pequenos déficits no compartimento funcional de ferro têm sérias conseqüências sobre o sistema imune, principalmente na imunidade mediada por células. A abordagem dos pais ou responsáveis, as exigências éticas e a aderência de crianças da mesma faixa etária e sem outros problemas que afetem o metabolismo do ferro e o sistema imune são as principais dificuldades enfrentadas no desenvolvimento de pesquisas com seres humanos, sendo necessário o estabelecimento de modelos experimentais. Este trabalho teve como objetivo estabelecer um modelo de indução e recuperação de deficiência de ferro em camundongos, visando a sua utilização em estudos sobre alterações do sistema imune induzidas por esta deficiência. A deficiência de ferro foi induzida por ingestão de uma ração com baixo teor de ferro (5 mg /kg de ração) por 4 e 8 semanas. No termino deste período foram determinados: concentração de hemoglobina (colorimetrico), hematócrito (microhematócrito), estoques de ferro hepático (espectrometria de absorção atômica) e fenotipagem (citometria de fluxo) dos linfócitos presentes no sangue periférico e em suspensão de células do baço dos animais dos grupos controle (C) e deficiente em ferro (DF), sendo avaliado a porcentagem de células T CD4+ e CD8+, bem como a expressão do receptor de transferrina (CD71+) nessas subpopulações. Não houve diferenças na concentração de hemoglobina e no valor do hematócrito entre os animais dos grupos DF e C, porém os estoques de ferro estavam significantemente reduzidos nos animais do grupo DF de quatro (p<0,05) e oito (p<0,01) semanas. Não houve diferenças na porcentagem de linfócitos T CD4+ e T CD8+ entre os animais dos grupos DF e C, porém os animais deficientes em ferro apresentaram maior porcentagem de linfócitos T CD8+ do baço expressando CD71+ (p< 0,001). Este trabalho sugere que a depleção nos estoques de ferro não altera a proporção dos subtipos de linfócitos, porem as células T CD8 + do baço são mais sensíveis à deficiência de ferro. / Iron have a crucial role in several metabolic pathways, such oxygen transport, steroid hormone synthesis, cellular respiration, electron transport, DNA synthesis, cellular proliferation and differentiation and genic regulation. The iron deficiency is most common disorder nutrition, affecting about 30% world population. Deficits in iron functional compartment have serious delays about immunity systems, especially in the cellular immunity. Because of environmental problems, age, deficiency of nutrients other than iron, prevalence of infection, which may make human studies difficult, we used an animal model. This work aimed established iron deficiency induction and recuperation in mouse, for study about immune systems alteration. Iron deficiency was induced by feeding mice a diet that contained only 5 mg Fe/Kg for 4 and 8 weeks. After this period were determined: hemoglobin (colorimetry), hematocrit (microhematocrit), liver iron stores (atomic absorption spectrophotometer) and we performed a flow cytometry analyses in peripheral blood and spleen lymphocytes in control (C) and iron deficient (ID) mouse. We defined the effects of iron deficiency on T-cell subset and expression of cell-surface transferrin receptor (CD71+) in these cells. Hemoglobin concentration and hematocrit of ID mice were not difference those of C mice, but iron stores of ID mice (4 and 8 weeks) were reduced (p< 0,05 and p< 0,01; respectively). Although T-cells subsets in peripheral blood and spleen were not altered, iron deficiency significantly increased the number of spleen T CD8+ cells that express CD 71+ (p< 0,001). Data suggest that depletion of iron storage not alter T-cells subsets and spleen T CD8+ is the most sensible subset in iron deficiency.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-08Bitstream added on 2015-04-09T12:48:01Z : No. of bitstreams: 1 000814587.pdf: 233099 bytes, checksum: 86c73283cfc6d5c2954be91ce17d3f29 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Endotoxins are often found in high concentration in the peritoneal fluid from horses with acute gastrointestinal disease and blood of septicemic foals. The conditions mentioned earlier can lead to inflammatory processes and cause changes in the concentrations of acute phase proteins. The objectives of this study were to determine by means of polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), the concentrations of acute phase proteins (transferrin, ceruloplasmin, albumin, haptoglobin and acid glycoprotein) in serum and peritoneal fluid of horses submitted to experimental endotoxemia and evaluate the possible effects of the administration of lidocaine on the production of these proteins after intraperitoneal injection of endotoxin in these animals. To this end, 12 animals were distributed in two groups, control which was treated with 0.9% NaCl solution and the experimental which was treated with continuous infusion for 6 hours of 2% lidocaine solution. It is concluded that in this experimental model the intraperitoneal administration of endotoxin caused an increase in the concentrations of peritoneal transferrin, ceruloplasmin and haptoglobin in the control group, of albumin in both groups, and the acid glycoprotein in the group treated with infusion of lidocaine. However, the absence of changes in the concentrations of serum ceruloplasmin, serum albumin, haptoglobin and acidic glycoprotein indicate that the amount of the circulatory endotoxin was not enough to alter serum concentrations of these proteins. The continuous infusion of lidocaine interfered in peritoneal acute phase proteins values and had an anti-endotoxemic effect / FAPESP: 2009/15683-0

Resumo:As endotoxinas são frequentemente detectadas em alta concentração no líquido peritoneal de equinos com doença gastrintestinal aguda e no sangue de potros septicêmicos. As condições citadas anteriormente podem levar a processos inflamatórios e provocar alterações nas concentrações de proteínas de fase aguda. Os objetivos deste estudo foram determinar, por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), as concentrações de proteínas de fase aguda (transferrina, ceruloplasmina, albumina, haptoglobina e glicoproteína ácida) no soro e no líquido peritoneal de equinos submetidos à endotoxemia experimetal, e avaliar os possíveis efeitos da administração da lidocaína sobre a produção destas proteínas depois da injeção intraperitoneal de endotoxina nestes animais. Para tanto, foram utilizados 12 animais distribuídos em dois grupos, o controle, tratado com solução de NaCl a 0,9%, e o experimental, tratado com infusão contínua de solução de lidocaína a 2% por 6 horas. Conclui-se que neste modelo experimental a administração intraperitoneal de endotoxina causou o aumento nas concentrações peritoneais de transferrina, ceruloplasmina e haptoglobina no grupo controle, da albumina em ambos os grupos, e da glicoproteína ácida no grupo tratado com infusão de lidocaína. Porém a ausência de alterações nas concentrações séricas de ceruloplasmina, albumina, haptoglobina e glicoproteína ácida indicam que a quantidade de endotoxina que chegou à corrente circulatória não foi suficiente para alterar as concentrações séricas destas proteínas. A infusão contínua de lidocaína interferiu nos valores peritoneais das proteínas mensuradas, tendo efeito anti-endotoxêmico / Abstract:Endotoxins are often found in high concentration in the peritoneal fluid from horses with acute gastrointestinal disease and blood of septicemic foals. The conditions mentioned earlier can lead to inflammatory processes and cause changes in the concentrations of acute phase proteins. The objectives of this study were to determine by means of polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), the concentrations of acute phase proteins (transferrin, ceruloplasmin, albumin, haptoglobin and acid glycoprotein) in serum and peritoneal fluid of horses submitted to experimental endotoxemia and evaluate the possible effects of the administration of lidocaine on the production of these proteins after intraperitoneal injection of endotoxin in these animals. To this end, 12 animals were distributed in two groups, control which was treated with 0.9% NaCl solution and the experimental which was treated with continuous infusion for 6 hours of 2% lidocaine solution. It is concluded that in this experimental model the intraperitoneal administration of endotoxin caused an increase in the concentrations of peritoneal transferrin, ceruloplasmin and haptoglobin in the control group, of albumin in both groups, and the acid glycoprotein in the group treated with infusion of lidocaine. However, the absence of changes in the concentrations of serum ceruloplasmin, serum albumin, haptoglobin and acidic glycoprotein indicate that the amount of the circulatory endotoxin was not enough to alter serum concentrations of these proteins. The continuous infusion of lidocaine interfered in peritoneal acute phase proteins values and had an anti-endotoxemic effect / Orientador: Francisco Leydson Formiga Feitosa / Banca: Marcos Pinheiro Franque / Banca: Taciana Rabelo Ramalho Ramos / Banca: Paulo Sérgio Patto dos Santos / Banca: Juliana Regina Peiró / Doutor

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-03-28T13:13:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Cabral Filho, PE Tese - PPGCB.pdf: 40667296 bytes, checksum: 0fe805957d5ab95d53bed853da61deb5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-28T13:13:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Cabral Filho, PE Tese - PPGCB.pdf: 40667296 bytes, checksum: 0fe805957d5ab95d53bed853da61deb5 (MD5) Previous issue date: 2016-07-15 / CAPES / Os pontos quânticos ou quantum dots (QDs) são nanocristais fluorescentes de semicondutores com propriedades ópticas únicas, tendo como principais vantagens: (1) alta resistência à fotodegradação, possibilitando o acompanhamento de eventos biológicos em tempo real e, (2) superfície ativa, permitindo a conjugação a biomoléculas que vão propiciar especificidade às marcações, além de possibilitar também sua ligação a outras nanopartículas. Com isso, é possível quantificar uma variedade de biomoléculas em células e tecidos e desenvolver nanossondas bimodais (magnético-fluorescentes) baseadas em QDs. O desenvolvimento de nanopartículas bimodais pode aliar as vantagens das técnicas baseadas em fluorescência com as de imagem por ressonância magnética (IRM). Entretanto, a obtenção de sondas bimodais é ainda um desafio, pois durante a conjugação devem ser mantidas as propriedades fluorescentes e magnéticas das nanopartículas, e com isso ainda há poucos trabalhos que façam aplicações em sistemas biológicos. O objetivo desta tese se caracteriza pelo desenvolvimento de sondas com propriedades multimodais baseadas em QDs de Telureto de Cádmio (CdTe) associadas a nanopartículas magnéticas de óxido de ferro como marcadores sítio-específicos em células cancerígenas. Inicialmente os QDs foram conjugados covalentemente à transferrina (Tf) [QDs-Tf] para a quantificação específica de seus receptores (TfRs) em células HeLa e em duas linhagens de glioblastoma (U87 e DBTRG). Através de ensaios de saturação do TfR, foi possível inferir sobre a taxa de renovação deste receptor nessas células. Os resultados mostraram que as células HeLa e as DBTRG possuem uma maior quantidade do TfR quando comparadas às U87. As DBTRG apresentaram maior taxa de renovação do TfR, quando comparadas aos outros dois tipos, demonstrando que os conjugados QDs-Tf são potenciais ferramentas para o estudo da biologia celular do câncer. Posteriormente, nanossondas bimodais (QDsMNPs), baseadas em QDs associados a nanopartículas magnéticas de óxido de ferro, foram obtidas por conjugação covalente. De acordo com as caracterizações, QDs-MNPs mantiveram suas propriedades ópticas e magnéticas e apresentaram-se como potenciais sondas inespecíficas para fluorescência e para aquisição de imagens por RM ponderadas em T2 (tempo de relaxação nuclear transversal). A conjugação prévia dos QDs a Tf, além de fornecer informações sobre a biologia do câncer, auxiliou também na padronização da marcação específica do TfR em células cancerígenas e no estabelecimento de protocolos de conjugação das sondas bimodais a Tf. Por fim, as QDs-MNPs foram conjugadas covalentemente a Tf e essa nova sonda multimodal [(QDs-MNPs)-Tf] reconheceu especificamente os TfR em células HeLa. As caracterizações indicaram que o sistema multimodal não apresentou alteração significativa nas propriedades ópticas e exibiu uma maior relaxividade transversal (r2), se mostrando igualmente potencial sonda para análise por fluorescência e IRM ponderada em T2. Neste trabalho foram obtidas nanossondas promissoras para serem aplicadas na compreensão da biologia celular do câncer, além de auxiliar em métodos diagnósticos e terapêuticos para essa doença. / Quantum dots (QDs) are fluorescent semiconductor nanocrystals with unique optical properties, which have as major advantages: (1) the high resistance to photobleaching, making possible to monitor biological events in real-time and, (2) active surface, allowing the conjugation not only with biomolecules for specific labeling, but also to other nanoparticles. Thus, it would be possible to quantify a variety of biomolecules in cells and tissues, as well as to develop bimodal nanoprobes (fluorescent-magnetic) [BNPs] based on QDs. The development of BNPs can help to combine the advantages of the fluorescence with the resonance magnetic imaging techniques. However, the preparation of bimodal probes can still be considered a challenge, since the fluorescent and magnetic nanoparticles’ properties need to be preserved after conjugation. Therefore, there are still few works applying BNPs in biological studies. The aim of this thesis was to develop nanoprobes, with multimodal properties, based on cadmium telluride (CdTe) QDs conjugated with iron oxide magnetic nanoparticles (MNPs), for site-specific labeling in cancer cells. For this, initially, QDs were covalently coupling to transferrin (Tf) [QDs-Tf] and used to quantify the transferrin receptor (TfRs) in HeLa cells as well as in two glioblastoma lines (U87 and DBTRG). Furthermore, by a TfR saturation assay, it was possible to study the recycling rate of this receptor in cells studied. The results showed that HeLa and DBTRG cells present a higher amount of TfRs when compared to U87. DBTGR showed a higher TfR recycling rate, when compared to the other two lineages, demonstrating that QDs-Tf conjugates are potential tools to study the cancer cell biology. BNPs, based on the conjugation of QDs with MNPs (QDs-MNPs), were obtained by covalent coupling. According to characterizations, the BNPs remained with their optical and magnetic properties preserved and showed to be potential unspecific probes for fluorescence analysis and for T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) acquisition. The conjugation of QDs to Tf, performed previously, was a valuable step not only to provide us information about the biology of cancer cells, but also for the standardization of TfR specific labeling and the establishment of protocol to conjugate the BNPs with Tf. Therefore, QDs-MNPs were also covalently coupling to Tf and this new multimodal nanotool [(QDs-MNPs)Tf] was also able to recognize specifically TfRs in HeLa cells. The multimodal nanosystems presented their fluorescent properties practically unchanged and also exhibited a higher transversal relaxivity (r2), when compared to bare BNPs, showing likewise potential to be used for fluorescence and T2-weighted MRI analyses. In this work, it was developed promising nanoprobes, able to be applied for the cancer cell biology comprehension, and with potential for helping in the improvement of diagnostic and therapeutic methods for this disease.

Orientador: Jörg Kobarg / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T05:39:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_AlineMonticelli_M.pdf: 19291466 bytes, checksum: 5920430c506c4670ca04da10ad934398 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A Stanniocalcina-1 (STC1) humana é uma glicoproteína homóloga a Stanniocalcina (STC) originalmente identificada como um hormônio regulador da homeostase de cálcio em peixes. A STC1 humana secretada atua em diferentes processos fisiológicos incluindo a angiogênese, a hipóxia e, principalmente, a carcinogênese, demonstrando assim uma atividade abrangente. Atualmente não se conhece o receptor da STC1 e pouco se sabe sobre o mecanismo de ação e de entrada nas células dessa proteína. Assim, o objetivo desse trabalho foi investigar um candidato a receptor de membrana dessa proteína, o receptor de transferrina (TfR1), uma proteína transmembrana responsável pela absorção de ferro nas células. Esse receptor é provavelmente expresso por todas as células em diferentes níveis, em destaque em células do sistema hematopoiético, em células em divisão celular e células neoplásicas. Assim, avaliou-se por citometria de fluxo o efeito do tratamento com STC1 em células não transfectadas e células transfectadas superexpressando o receptor de transferrina. Células tratadas com STC1 demonstraram um efeito semelhante ao tratamento com transferrina, um conhecido ligante desse receptor, no qual ambos diminuíram o número de células positivas para a marcação da superfície com transferrina conjugada com fluorocromo (transferrina-Alexa Fluor® 488 - Life Technologies). Em outro conjunto de experimentos de Western Blot foi demonstrado que a STC1 adicionada no sobrenadante das culturas de células é internalizada nas células e detectável no lisado celular, principalmente as células transfectadas para a superexpressão do receptor de transferrina. Complementarmente, em experimentos de localização subcelular por imunofluorescência a STC1 foi detectada em uma forma pontual e espalhada no citoplasma. Em conjunto, todos esses experimentos sugerem que STC1 e transferrina interferem na localização do receptor de transferrina na superfície celular e que possivelmente esse receptor está envolvido em mecanismos de internalização da própria STC1 / Abstract: Human Stanniocalcin 1 (STC1) is the mammalian homologue of STC, which was originally identified as a calcium-regulating hormone in bony fishes. The human secreted Stanniocalcin acts on different physiological processes, including angiogenesis, hypoxia and especially carcinogenesis, facts that demonstrate their activity is wide. Currently there are few data on the mechanism of action of this protein or how it enters the cell. Thus, the aim of this study was to investigate transferrin receptor (TfR1) as a candidate to membrane receptor protein of STC1. This receptor is a membrane protein responsible for the iron uptake in cells. This receptor is probably expressed by all cells especially by cells in division and cancer cells, but its expression level may vary. We evaluated by flow cytometry the effect of STC1 treatment in non-transfected cells and cell with TfR1 overexpression. The treatment with STC demonstrated a similar effect to treatment with transferrin, a known ligand for receptor, which decreased the number of positive cells for staining with fluorochrome (transferrin conjugated to Alexa Fluor® 488 - Life Technologies). We also demonstrated by Western Blot that STC1 added to the supernatant of cultures of cells, especially cells that overexpress transferrin receptor, is internalized into the cells and detectable in the cell lysate. Additionally, in subcellular localization experiments by immunofluorescence STC1 was detected in a timely manner and scattered in the cytoplasm. Together all this information suggests that STC1 and transferrin interferes with the localization of the transferrin receptor in the cellular surface and perhaps this receptor is involved in the mechanism of internalization of STC1 / Mestrado / Bioquimica / Mestra em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Rogério Martins Amorim / Coorientador: Ana Liz Garcia Alves / Banca: Rui Seabra Ferreira Junior / Banca: Fernanda da Cruz Landim / Resumo: Estudos demonstram o grande potencial do uso das células estromais mesenquimais multipotentes (MSCs) como terapia celular. Seu uso em lesões neurológicas, que usualmente apresentam difícil regeneração, tem sido estudado pelo fato das MSCs apresentarem baixa imunogenicidade efeitos imunomoduladores e neuroregenerativos. Nesse contexto, o presente estudo avaliou a viabilidade e a segurança do transplante de MSCs alogênicas provenientes do tecido adiposo, medula óssea e cordão umbilical de equinos, pela via intratecal através do espaço intervertebral C1-C2, por meio de exame neurológico seriado, análises hematológicas e determinação dos níveis séricos de proteínas de fase aguda. Foram utilizados 16 equinos saudáveis, divididos em quatro grupos: grupo SHAM (SHAM) que recebeu o transplante de salina tamponada com fosfato (PBS); grupo tecido adiposo (GTA), recebeu MSCs de origem do tecido adiposo; grupo medula óssea (GMO), recebeu MSCs de origem da medula óssea; e grupo cordão umbilical (GCU), recebeu células de origem da matriz do cordão umbilical. Foram realizadas três aplicações com intervalo de 30 dias em cada grupo, e coletou-se amostras de sangue, nos momentos que antecederam os transplantes, M0, M30 e M60 e 24 horas, após o transplante, M1, M31, M61. E por último foi realizada uma coleta 30 dias após M60, caracterizando M90. Não foram observadas alterações do exame clinico, hematológico e nas proteínas de fase aguda relacionadas aos sucessivos transplantes intratecais de MSC... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Studies demonstrate the great potential of using multipotent mesenchymal stromal cells (MSCs) as cell therapy. Its use in neurological lesions, which usually present difficult regeneration, has been studied because MSCs have low immunogenicity and immunoregulatory and neuroregenerative effects. In this context, the present study evaluated the viability and safety of transplantation of allogeneic MSCs from the adipose tissue, bone marrow and umbilical cord of horses, through the intrathecal route through the C1-C2 intervertebral space, through serial neurological examination, hematological analyzes and determination of serum levels of acute phase proteins. Sixteen healthy horses were used, divided into four groups: SHAM group (SHAM) that received phosphate buffered saline (PBS) transplantation; adipose tissue group (GTA), received adipose tissue MSCs; bone marrow group (GMO), received MSCs from bone marrow origin; and umbilical cord (UGC) group, received cells from the umbilical cord array. M0, M30 and M60 were collected at the time of the transplantation, M1, M31 and M61 and 24 hours after transplantation. And finally a collection was performed 30 days after M60, characterizing M90. There were no changes in the clinical, hematological and acute phase-related proteins related to successive intrathecal transplantations of MSCs, nor were there alterations that contra indicated the use of any of the cellular sources, demonstrating that the protocol used, as well as any of cellula... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre