Orientador : Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-09-11T20:48:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Palomari_DeniseMadalena_M.pdf: 3176985 bytes, checksum: 76118d403e3be573a806e42857073b65 (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: Com o proposito de se aplicar a tecnica de eletroforese em gel de poliacrilamida como contribuiçao aos estudos de identificação e caracterização de Streptococcus orais. amostras de culluras do grupo mutans.. idenlificadas bioquimicamenle. foram analisadas alravés da técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida. empregando-se metodologias distinlas na oblençao de proteinas intracelulares. Os resultados obtidos na determinação dos perfis proteicos das amostras microbianas. analisadas pela técnica de solubilização direta. permitiram detectar diferenças entre as mesmas quando comparadas. Esses resultados demonstraram. que a ressuspensão diretà de células normais em mistura solubilizante. permite a possibilidade de se distinguir duas espéci.s como. mutans e S.sobrinus. ou descrever como semelhantes. cepas microbianas supostamente diferentes ou nao relacionadas como XI-3. XII-5. XII-3 e 1-4B / Abstract: As a contribuition to the identi:f'ication and caracterization o:f'oral 5treptococc'US. cul ture sampl es o:f' the mutans group identi:f'iedbyochemically. were analysed through the pol yacr yl ami de gel electrophoresis technique. using distinct methods to isol ate their intracellular proteins. These resul tS showed that the di rect resuspensi on o:f' the whole cell proteins in bu:f':f'ered solubilizing solution. allows to distinguish between species o:f'5. mutans and 5. sobrin'US. or to describe as similar. microbian strains supposely different not related. / Mestrado / Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental

Orientador : Carmen Silvia Bertuzzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T02:12:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_VaniaAparecidada_M.pdf: 13368648 bytes, checksum: eca403fb65f796da1239e2b47f6894a4 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Persistência hereditária de hemoglobina fetal (PHHF)é uma condição clinicamente benigna caracterizada pela síntese contínua da HbF na vida adulta, sem alterações hematológicas. A PHHF funciona como um modulador de gravidade em várias hemoglobinopatias ,sendo assim, torna-se importante conhecera sua freqüência em nosso meio. Desse modo, através da análise de 1.846 doadores voluntários de sangue da região de Bragança Paulista, procuramos contribuir para o levantamento dessa frequência populacional. Realizou-se uma análise qualitativa das hemoglobinas pela eletroforese em gel de agarose.A análise qualitativa das cadeias ?G e ? A foi realizada pela eletroforese em gel de poliacrilamida-Triton-Uréia. Foram encontrados 2 indivíduos com alto índice de fetal . Em um dos indivíduos encontramos um percentual de HbF de 17% e no outro de 18%. Nos dois casos a eletroforese de cadeias mostrou uma ausência da cadeia gama G. Os casos triados indicaram pelas características laboratoriais, pertencerem ao grupo de Persistência hereditária Pancelular do tipo Gama A, por mutação de ponto. Portanto, a freqüência encontrada em nossa amostra foi de 1/1000 indivíduos / Abstract: Hereditary persistence of fetal hemoglobin (HPFH) is a benign clinical condition which is characterized by the synthesis of HbF and continues without hematological changes during adult life.Aslhe function of HPFH in many hemoglobinopathies is that of a severity modulator, it is important to find out its frequency. In order to obtain this information, a study was conducted on 1,846 blood donors from Bragança Paulista. The hemoglobin was qualitatively analyzed by having hemolytic electrophoresis in the agarose gel tapes. The qualitative analysis of the ? G and ? A chains was performed by electrophoresis in polyacrylamide-triton - urea. Two individuaIs were found to have a high fetal index (O.l%).The percentage of FHbin one individual was 17% and in the other 18%. The gamma A chain was found to be missing in both electrophoretic chains. The cases screened according to laboratory characteristics were of the hereditary persistence type Gamma A Pancellular due to mutation. Therefore, the frequency obtained in this sample was 1/1000 individuais / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:37:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Higa_TatianaTakahashi_D.pdf: 7037768 bytes, checksum: 33246873053ff36625590ad0122d9364 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: o termo Persistência Hereditária de Hemoglobina Fetal (PHHF) é usado para descrever um grupo heterogêneo de doenças hereditárias, caracterizadas por níveis aumentados de HbF na vida adulta, sem outros distúrbios hematológicos significativos.Do ponto de vista das alterações moleculares podem ser caracterizadaspor deleções gênicas ou por mutações de ponto...Observação: O resumo, na integra, podera ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: We report an in vitro expression study ofthe Ay-globin gene promoter containing the Ay-195 C-7G mutation that causes the Brazilian Type ofHereditary Persistence of Fetal Hemoglobin (HPFH). To demonstrate that this mutation results in increased promoter strength, we evaluated the mutant promoter linked to the Hypersensitive Site-2 (HS2) ofthe Locus Control Region (LCR) with the luciferase reporter gene system and examined protein interactions by eletrophoretic mobility shift assay....Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Clínica Médica

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / laboratório e dessa forma caracterizar a evolução filogenética do clone de P. aeruginosa produtor da MβL SPM-1; comparar o poder discriminatório e a reprodutibilidade desta técnica com as técnicas de PFGE e ribotipagem automatizada para tipagem molecular de P. aeruginosa e avaliar a capacidade do MLST de discriminar amostras que foram classificadas sob ribogrupos distintos, mas com padrões de PFGE idênticos. Métodos: Um total de 50 amostras de P. aeruginosa produtoras de SPM-1 foram coletadas de nove centros brasileiros. Três amostras de P. aeruginosa produtoras de IMP-1 e duas amostras de P. aeruginosa n„o produtoras de MβL foram incluídas no estudo. A técnica de MLST foi padronizada conforme descrito por Curran et al. As seq¸Íncias obtidas foram comparadas com as existentes no banco de dados mundial de MLST para P. aeruginosa (www.pubmlst.org/paeruginosa) para que dessa forma fosse determinado o perfil alélico e, subsequentemente, o tipo de sequência (ST). Para a análise filogenética foi utilizado o método de Jukes-Cantor e Neighbor-Joining. Um total de cinco STs foram identificadas entre as 55 amostras de P. aeruginosa estudadas. Todos os isolados de P. aeruginosa produtores de SPM-1 apresentaram perfil alélico idêntico e, dessa forma, receberam a mesma ST (ST277), com exceção de uma amostra proveniente de Belo Horizonte, a qual recebeu a ST235. As três amostras de P. aeruginosa produtoras de IMP-1 foram classificadas sob a mesma ST (ST593), enquanto que as amostras não produtoras de MβL apresentaram perfis alélico ainda não existentes no banco de dados, e assim, duas novas STs foram criadas para estas amostras (ST594 e ST595). O clone endêmico brasileiro de P. aeruginosa produtor de SPM-1 (ST277) mostrou perfil alélico idêntico ao de uma cepa isolada na Áustria (ID 275), em setembro de 2006. Variação em um ˙nico lócus da ST277 foi encontrada em uma amostra proveniente da Áustria (ID279), isolada em janeiro 2007. Similaridade entre cinco dos sete alelos foi encontrada entre as amostras deste estudo pertencentes a ST277 e uma amostra isolada no Canadá· (ID 148), em 1990. Conclusão: Nossos dados sugerem que as amostras de P. aeruginosa produtoras de SPM-1 descendem de um ancestral comum e que podem possuir relação ancestral com os isolados da Áustria e mais remotamente com a amostra do Canadá. / FAPESP: 2005/57496-1 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-26T02:56:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_JanainaAparecidadeOliveira_M.pdf: 11814842 bytes, checksum: 131ebe5dbb1bb898e4f87e20dfe60fa3 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O projeto de pesquisa teve como objetivo a avaliação de métodos bioquímicos e sorológicos na caracterização de espécies de Candida isoladas da cavidade bucal de humanos, com ênfase na Taxonomia, Sistemática e estudos epidemiológicos. As linhagens empregadas são representativas de 5 espécies de Candida: 97-a, F-72, E-37, 17-b e CBS-562T (C. albicans), FCF405 e FCF-152 e CBS-566T (C. guilliermondii), 21-c, 7-a e CBS-604T (C. parapsilosis), 1M-90, 4-c e CBS-573T (C. krusei), 1-b, FCF-430, Ct-4 e CBS-94T (C. tropicalis). Como controle negativo foi empregada a linhagem IZ-1339 (Kluyveromyces marxianus). Os métodos bioquímicos e sorológicos utilizados, se basearam no cultivo em meio cromogênico CHROMagar Candidaâ, ensaio imunoenzimático (ELISA indireto) e eletroforese de proteínas SDS-P AGE. Os resultados obtidos nos testes com CHROMagar Candida@ revelaram especificidade para as espécies C. albicans, C. tropicalis e C. krusei; as espécies C. guilliermondii e C. parapsilosis apresentaram coloração rosa e creme respectivamente, o que não é especifico para essas espécies. O método SDS- P AGE revelou diferenças significativas nos perfis eletroforéticos dos extratos protéicos intracelulares obtidos, apresentando diminuição no número de bandas protéicas em relação ao aumento do tempo de centrifugação. Os ensaios imunoenzimáticos (ELISA) não revelaram diferenças na reatividade para os extratos, expressa em densidade ótica (D. O.), quando comparados. Em ordem decrescente de especificidade o SDSP AGE mostrou-se mais eficiente na caracterização dos isolados agrupando-os em espécies, seguida do uso do CHROMagar Candidaâ que apresentou maior especificidade para C. albicans, C. tropicalis e C. krusei, mas não para as demais espécies. O método de ELISA utilizando anticorpos policlonais, se mostrou pouco efetivo na identificação das espécies por apresentar um alto grau de reação cruzada com outras leveduras / Abstract: This work had the purpose to evaluate biochemistry and serological methods to characterize Candida species from human oral cavity, emphasizing taxonomy, systematic and epidemiological studies. The strains used represent the five Candida species: 97-a, F-72, E-37, 17-b and CBS-562T (C. albicans), FCF-405 and FCF-152 and CBS-566T (C. guilliermondii), 21-c, 7-a and CBS604T (C. parapsilosis), IM-90, 4-c and CBS-573T (C. krusei), l-b, FCF-430, Ct-4 and CBS-94T (C. tropicalis). As negative control the strain IZ-1339 (Kluyveromyces marxianus) were used. The biochemical and serological methods used were based upon the growth in cromogenic medium CHROMagar Candidaâ, ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) and protein electrophoresis (SDS-PAGE). The method CHROMagar Candidaâ showed specificity for the C. albicans, C. tropicalis and C. krusei species but it was not able to identify the C. guilliermondii e C. parapsilosis species, since it showed rose and vanilla color, respectively, which is not specific for these two species. The SDS-PAGE showed significative differences in the electrophoretic pattems from the proteic cellular extracts, showing a decrease of the number of bands compared to the increase of the centrifugation time. The ELISA could not present differences among the cell extracts, expressed in O.D., when compared. In an increasing order of specificity, the SDS-PAGE seemes to be the more efficient for the strains characterization being able to group the species, followed by the CHROMagar Candidaâ which showed specificity for the C. albicans, C. tropicalis and C. krusei, but not for the remaining species studied. The ELISA using polyclonal antibodies was ineflective to identify species due to the high level of cross-reaction / Mestrado / Mestre em Biologia Buco-Dental

Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-26T17:30:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Boriollo_MarceloFabianoGomes_M.pdf: 3800617 bytes, checksum: 80d09e21425e702b4878942993acc893 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Um total de setenta e cinco amostras de Cândida albicans isoladas da cavidade oral de escolares saudáveis, do município de Piracicaba, estado de São Paulo, região sudeste do Brasil, com idades variando entre seis e nove anos, provenientes de cinco classes socioeconômicas e oito escolas, foram estudadas. Com base nos dados da literatura, o propósito da presente pesquisa foi analisar os graus de associação (similaridade) entre esses isolados, através da técnica de eletroforese de proteínas intracelulares em gel de poliacrilamida, em sistema descontínuo (SDS-PAGE), com ênfase nos estudos de caracterização epidemiológica desses microrganismos. As amostras foram inoculadas em 50 mL de meio de cultura YPD. Decorrido o tempo de incubação, as amostras foram centrifugadas a 3.000 x g, por 5 minutos. Os sedimentos obtidos foram ressuspensos em água destilada gelada, lavados e fracionados em alíquotas de 0,5mL, os quais foram submetidos ao processo de extração de proteínas por pérolas de vidro. As concentrações de proteínas das amostras foram padronizadas para 800ug/500uL, as quais foram mantidas a - 75 °C até o momento de uso. Os extratos celulares obtidos, foram submetidos à técnica de SDS-PAGE. Após a corrida eletroforética os géis foram revelados. As bandas de proteínas, indicativas do perfil eletroforético de cada amostra, receberam valores 1 (um) para a presença de bandas e 0 (zero) para a ausência das mesmas, numa comparação entre os "lanes". O conjunto desses dados permitiu a confecção de matrizes de dados binários com intervalo de confiança de ±1,245, as quais foram plotadas no pacote estatístico NTSYS-pc 1.70 aplicando o coeficiente de associação (similaridade) de Dice. Essas matrizes de similaridade foram tratadas pelo algoritmo UPGMA, que gerou os dendrogramas que possibilitaram as análises dos graus de similaridade existentes entre os isolados de Cândida albicans. Os resultados obtidos mostraram a formação de vários "clusters", presentes nos dendrogramas UPGMA, com características heterogêneas, contendo as amostras de escolares provenientes de diferentes classes socioeconômicas e escolas. Essa heterogeneidade sugere a existência de polimorfismo nessa espécie. A aplicação de proteínas intracelulares para análise numérica de Cândida albicans, permite a determinação preliminar dos agrupamentos desses isolados, independentemente de suas origens. A diversidade e heterogeneidade dos "clusters", detectáveis nos diversos dendrogramas, obtidos pela análise do perfil eletroforético dos extratos proteicos dessa espécie, sugerem que a caracterização infraespecífica mais apurada deve envolver marcadores menos sujeitos a interferências de expressão, como por exemplo, aqueles que exploram o polimorfismo de ácidos micléicos / Abstract: A total of seventy five samples of Candida albicans, isolated from the oral cavities of healthy scholars living in Piracicaba city, São Paulo state, southeast area of Brazil, with ages varying from six to nine year-old, and coming from five distinct socioeconomic levels and eight schools, were studied. Based on the literature data, the purpose of the present research was to analyze the association (similarity) degrees existing among those isolates, through the whole-cell polyacrylamide gel electrophoresis technique (SDS-PAGE), with emphasis in to ascertain the possible epidemiological relationships among such microorganisms. The samples were inoculated in YPD culture medium, and after the incubation, they were centrifuged at 3,000 x g for 5 minutes. The obtained sediments were washed in cold distilled water and the whole-cell proteins were extracted by disruption with glass beads. The protein concentration of the samples was standardized for 800mg/500mL, which were maintained at -75°C, until the moment of use. The obtained cell extracts were submitted to SDS-PAGE technique. After the electrophoresis, the gels were revealed and the protein bands received values 1 for the presence of bands and 0 for the absence of the same ones, in a lanes' comparison. The collection of those data allowed the confection of several binary data matrices with a confidence interval of ±1,245, which were plotted on the NTSYS-pc 1.70 version statistical package applying the association coefficient of Dice, which generated similarity (So) matrices. Those similarity matrices were treated by the UPGMA algorithm, that allowed the analyses of similarity levels among Candida albicans isolates by dendrograms. The results showed the formation of several clusters with heterogeneous composition, including samples not related to their respective socioeconomic levels or schools. These heterogeneity suggests the high degree of polymorphism in such species. The application of whole-cell proteins for Candida albicans numerical analysis allows the preliminary determination of groupings of those isolates, independently of their origins. The clusters' diversity and heterogeneity detected in the several dendrograms suggest that, a more accurate infraspecific characterization should involve markers less subject to expression interference, as for example, those that explore the nucleic acids' polymorphism / Mestrado / Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental

Orientador: Maria Luiza Moretti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T09:55:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bratfich_OrlandoJose_D.pdf: 1128343 bytes, checksum: 5a4d981849f245636703326e9af0c8ad (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Isolados clínicos de Staphylococcus epidermidis provenientes de infecções de corrente sangüínea do hospital de clínicas HC ¿ UNICAMP, Campinas foram analisados. Os isolados foram caracterizados por análises fenotípicas e genotípicas. Os testes de susceptibilidade aos antimicrobianos foram realizados para comparar os métodos de disco difusão, concentração inibitória mínima e diluição em Agar, para determinar a relevância clínica da resistência aos antimicrobianos. Foram analisados a presença do gene mecA por PCR, produção de biofilme, genotipagem por PFGE com enzima SmaI. Dados epidemiológicos dos pacientes foram analisados para detectar a importância clínica dessas cepas. Para oxacilina 82 isolados foram resistentes, sendo que 78 (95,12%) apresentaram reação de PCR positiva para o gene mecA, dois isolados apresentaram-se como hiperprodutores de ß-lactamases. Para teicoplanina os testes de CIM apresentaram 52 isolados sensíveis, 35 isolados intermediários e 13 isolados resistentes e, quando comparado com os testes de disco difusão foram observadas discordâncias em 43% dos isolados, onde o teste de disco difusão não foi capaz de identificar isolados intermediários e resistentes (P < 0,001). Para vancomicina um único isolado apresentou resultado intermediário com CIM de 8,0 µg/mL. Isolados vancomicina resistentes não foram observados. Analises dos dados epidemiológicos, através de regressão logística, as variáveis estatisticamente significantes foram neutropenia (P = 0,002) e quimioterapia (P = 0,015). As análises genotípicas por PFGE demonstraram a disseminação clonal de S. epidermidis no ambiente hospitalar e verificou-se que testes dilucionais são necessários quando se estudam glicopeptideos. A análise filogenética demonstrou grande estabilidade e adaptabilidade genética do gene mecA responsável pela resistência a oxacilina / Abstract: Clinical strains of Staphylococcus epidermidis taken from bloodstream infection from UNICAMP (teaching hospital in Campinas São Paulo State, Brazil) were analyzed. The strains were characterized by phenotypic and genotypic analysis. The antimicrobial susceptibility tests were made to compare the disk diffusion tests, MIC, and agar-salt screening-test to determine the relevant clinical antimicrobial resistance. There were also made PCR assays for mecA detection, biofilm production, genotypic by SmaI-digested and pulsed-field gel electrophoresis. Patients epidemiological data were employed to determine the major clinical importance of these strains. For oxacillin 82 strains were resistant, and 78 (95.12%) had positive PCR assay for mecA gene, and two strains presented characteristics of ß-lactamases hyperproduction. In the MIC tests for teicoplanin, 52 strains were susceptible; 35 strains intermediate and 13 strains were resistant, and when compared to the results obtained by disk diffusion tests, MIC, were observed discordant results in 43% of the strains where the disk diffusion test was not able to identify strains intermediate and resistant (P < 0.001). MIC test had only one intermediate of 8.0 µg/mL for vancomycin. Strains vancomycin-resistant were not observed. The variable data statistically significant in the logistic regression analysis related to the treatment of the BSI by S. epidermidis were: neutropenia (P = 0.002) and chemotherapy (P = 0.015). The genotyping analysis of isolates demonstrated a clonal distribution of S. epidermidis in the hospital environment and it was checked that dilution tests are necessary when glycopeptides are being studied.. The phylogenetic analysis showed great genetic stability and adaptability of the mecA gene responsible for the oxacillin resistance / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Este trabalho recebeu a Menção Honrosa no Prêmio Capes de Teses 2014 / Made available in DSpace on 2014-09-09T12:30:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 16.pdf: 6304996 bytes, checksum: 71c341f48f8e1ace48b22de15c0ccb89 (MD5) Previous issue date: 2013 / Acinetobacter baumannii é um patógeno oportunista com crescente importância em infecções relacionadas a assistência em saúde. No Brasil é particularmente problemático devido à sua alta prevalência e multirresistência, com as carbapenemases tipo OXA representando o principal mecanismo responsável por esta resistência. Esse trabalho teve como objetivo determinar a diversidade genética, caracterizar fenotípica e molecularmente a resistência a antimicrobianos e avaliar fatores de virulência em Acinetobacter baumannii isolados de 10 hospitais públicos e privados no Rio de Janeiro no período de 2005 a 2007. Durante este período foram estudados 141 isolados de A. baumannii coletados de pacientes internados em UTIs ou enfermarias cirúrgicas. A identificação da espécie foi confirmada através da detecção do gene intrínseco blaOXA-51.Os 110 isolados de A. baumannii resistentes ao imipenem apresentaram perfil de multirresistência com taxas superiores a 98,2% para 8 dos 10 antimicrobianos testados e 98(87,3%) produziram a carbapenemase OXA-23. Não houve produto de amplificação para os genes blaOXA-24, blaOXA-58, blaIMP, blaVIM e Int1 pela técnica de PCR. As drogas com atividade in vitro foram a polimixina B e tigeciclina. Observou-se uma diversidade clonal, com a presença de 5 genótipos tipados por PFGE, com prevalência dos genótipos A (71,8%) e B(22,7%), presente em 7 e 5 hospitais, respectivamente. Dentre os 96 isolados produtores de OXA-23, fori selecionada uma cepa representativa de cada genótipo que foram submetidos a métodos de tipagem baseados em sequenciamento... / Acinetobacter baumannii is an opportunistic pathogen with increasing importance in hospital infections. In Brazil, it is particularly problematic because of its high prevalence and multidrug resistance, with the OXA-type carbapenemases representing the main mechanism responsible for such resistance. This study aimed to determine the genetic diversity, as well as phenotypic and molecular characterization of antimicrobial resistance and evaluation of virulence factors in Acinetobacter baumannii isolated from 10 public and private hospitals in Rio de Janeiro from 2005 to 2007. During this period 141 isolates of A. baumannii collected from patients admitted to ICUs or surgical wards have been studied. Species identification has been confirmed by detection of gene intrinsic blaOXA-51. The 110 isolates of A. baumannii resistant to imipenem showed multidrug resistance profile with rates above 98.2% for 8 of the 10 antibiotics tested and 98 (87.3%) produced the carbapenemase OXA-23. There was no amplification product for genes blaOXA-24, blaOXA-58, blaIMP, blaVIM and Int1 by PCR. The drugs with in vitro activity were polymyxin B and tigecycline. There was a clonal diversity, the presence of five genotypes typed by PFGE, with a prevalence of genotypes A (71.8%) and B (22.7%), present in 7 and 5 hospitals, respectively. Among the 96 strains producing OXA-23, one representative for each genotype that were subjected to typing methods based on sequencing was selected. By MLST (related to the database Oxford) four new STs were detected: ST131, ST132, ST133 and ST134 and when using the MLST-IP (developed by Institut Pasteur) the ST79, ST15 and two new allelic profiles were detected. Four SGs (SG1, SG4 and two new profiles) have been identified, allowing the association of 70% of isolates with the European Clone II. Sequencing of the blaOXA-51-like gene revealed the presence of blaOXA-66, blaOXA-95 and blaOXA-132. The blaOXA-23 gene was consistently found associated with the transposon Tn2006 and was chromosomally encoded in all isolates. Of 31 isolates susceptible to imipenem, 5 showed the blaOXA-23 gene and the insertion sequence ISAba1. However, the association of this sequence to the gene blaOXA-23 was detected only in isolates resistant to imipenem used as controls. The ISAba4 insertion sequence was not found in any isolated. These isolates were susceptible to imipenem and meropenem, with MICs ε 4 mg / mL for both antimicrobials. These isolates producing blaOXA-23 have been grouped into four distinct genotypes (B, C, G and I). Most isolates included in this study had plasmid (83.7%), with profiles ranging from 1 to 4. In search of biofilm production by colorimetric assay using crystal violet it was possible to observe the production of biofilm in 96.5% of isolates. Two representative isolates of the prevalent genotypes were evaluated for the degree of association at monolayer of A-549 cells by flow cytometry, and fluorescence optical microscopy. The adhesion was observed in all methodologies, with low rates of association for genotype A (11.9%) and genotype B (9.7%). The search for quorum-sensing carried out with representative isolates of the same prevalent genotypes were negative for the production of AHL inducer using Agrobacterium tumefaciens strain NT1. While the extract of the supernatant of the positive control of P. aeruginosa PAO1 and the reference standard AHL-C8 and AHL -C12 were positive. Data from this study are relevant to public health because they allow the knowledge of the molecular epidemiology of this species, as well as some of the virulence factors, which have been rarely described in Brazil, thus enhancing the monitoring and implementing control measures.

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-04. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:38Z : No. of bitstreams: 1 000820042_20170105.pdf: 432472 bytes, checksum: 08e4755bdb655578ffb7bb04d02a9c1b (MD5) Bitstreams deleted on 2017-01-06T13:21:19Z: 000820042_20170105.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-01-06T13:22:02Z : No. of bitstreams: 1 000820042.pdf: 1098934 bytes, checksum: 899c7c3dd733d16d32b9ed613fb157f1 (MD5) / O uso de novas tecnologias como, por exemplo, peptídeos sintéticos para o desenvolvimento de novas drogas é uma estratégia promissora no campo da biotecnologia. Peptídeos com efeito antimicrobiano derivados de toxinas bacterianas intracelulares, produzidas por sistemas de morte pós-segregacional (PKS) tais como CcdB são exemplos dessa estratégia. Resultados promissores têm sido obtidos em relação à inibição da atividade das enzimas bacterianas topoisomerase IV e DNA girase por derivados peptídicos de toxinas antimicrobianas, isto pode ser visto através de ensaios in vitro, como eletroforese em gel de agarose. Porém, drogas com estrutura peptídica derivadas de toxinas bacterianas apresentam sérios problemas na aplicação terapêutica, pois, têm baixa solubilidade e difícil permeabilidade em membranas bacterianas. Portanto, o objetivo desse estudo consiste no desenvolvimento e aprimoramento de sistemas nanoestruturados (lipossomas) que permita a encapsulação de análogos peptídicos da toxina CcdB e sua consequente translocação no citosol bacteriano, permitindo que os mesmos atinjam seus alvos celulares, que são as enzimas bacterianas DNA girase e Topoisomerase IV. Lipossomas do tipo SUV (Small unilamellar vesicles) de 100 nm de diâmetro, foram preparados pela técnica de extrusão e evaporação variando-se a composição química de suas formulações. Desta forma, foi avaliada a eficiência de encapsulação dos peptídeos através de técnicas de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e espectroscopia de UV-Vis e fluorescência. Após testes de eficiência de encapsulação, os lipossomas contendo os análogos peptídicos da toxina CcdB encapsulados, foram submetidos a ensaio de inibição de crescimento em meio líquido para diferentes espécies bacterianas. Os resultados mostraram que os valores de eficiência para o análogo CdBSG-2 ficaram entre 62 e 75% e... / The new technologies, like synthetic peptides, for the development new drugs is a promising in biotechnology. Peptides with antibiotic properties, from Intracellular toxins produced by systems of post-segregational killer (PSK) in bacteria such as CcdB are recent examples of this strategy. Promising results have been obtained with respect to inhibition of the activity of the bacterial enzyme DNA gyrase and topoisomerase IV by toxins antimicrobial peptide derivatives that can be seen through in vitro assays such as electrophoresis in agarose gel. However, drugs formed by peptide structures, based on bacterial toxins, have been shown serious problems in therapeutic application due to their poor solubility and low biological membrane permeabilization. The aim of this study is the development and enhancement of nanostructured systems (liposomes) that allows the encapsulation of analogues peptides based on CcdB toxin and its consequent bacterial translocation in the cytosol, allowing them to reach their cellular targets, which are bacterial enzymes DNA gyrase and topoisomerase IV. Liposomes of the SUV type (Small unilamellar vesicles) of 100 nm diameter were prepared by extrusion and evaporation technique by varying the chemical composition of their formulations.Thus, we evaluated the encapsulation efficiency of the peptides through techniques of high performance liquid chromatography (HPLC) and UV-Vis spectroscopy and fluorescence. After efficiency of encapsulation tests the liposomes containing the peptides have been tested for growth inhibition in a liquid medium to different bacterial species. The results showed that the efficiency values for the analog CdBSG-2 were between 62 and 75% and the CcdBET-2 analogue values were between 52 and 71% Furthermore, the results of bacterial growth inhibition tests showed liposomal system that is effective, to inhibit 82% of gram positive Staphylococcus aureus...

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-18. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:21Z : No. of bitstreams: 1 000866910.pdf: 1935220 bytes, checksum: e56b37e9050493f55dcf68e77d76d9ee (MD5) / A microbiota intestinal das aves exerce papel fundamental no desenvolvimento de seu potencial produtivo por garantir o bom funcionamento do trato gastroentérico e do sistema imunológico a ele intimamente ligado. Por isso diversos aditivos já foram utilizados para favorecer o desenvolvimento de uma microbiota saudável, entretanto, ainda não temos informações sobre o perfil desejável para ela. Sendo assim, nos propusemos a utilizar a Eletroforese em Gel com Gradiente de Temperatura (TGGE), para avaliar a microbiota do ceco de aves alimentadas com dietas acrescidas de halquinol, ácido caprílico e Lactobacillus, e posteriormente desafiadas com Salmonella Enteritidis (SE). Aos 10, 20, 30 e 42 dias de vida foram quantificadas as imunoglobulinas IgA, IgM, IgY e interleucinas 17 e 8, avaliada a colonização cecal de SE (UFC/mL), observação histopatológica de tonsila cecal, e esses resulatados relacionados com a microbiota cecal avaliada pelo método TGGE. O tratamento com ácido caprílico foi igualmente eficaz ao halquinol na diminuição da colonização por SE, seguidos do grupo tratado com Lactobacillus. As concentrações de Il-8 e IgM demonstraram relação com a maturação e desenvolvimento imune local e sistêmico das aves, porém, não identificamos relação com o aumento da complexidade da microbiota, entre os diferentes trtamentos e nos grupos desafiados. No presente estudo também nao foi possível reproduzir a técnica de TGGE / The intestinal microbiota of birds plays a fundamental role in the development of their production potential to ensure the proper functioning of a gastrointestinal tract and immune system closely linked to it. So many additives have been used to encourage the growth of a healthy microbiota, however, we still have no information about the desired profile for her. So we set out to use the Gel Electrophoresis with Temperature Gradient (TGGE) to assess the cecal microbiota of birds fed diets plus halquinol, caprylic acid and Lactobacillus, and subsequently challenged with Salmonella Enteritidis (SE). At 10, 20, 30 and 42 days old were quantified immunoglobulins IgA, IgM, IgY and interleukins 17:08 assessed cecal colonization IF (CFU / ml), cecal tonsil histopathological observation, and those related to resulatados cecal microbiota evaluated by TGGE method. The treatment with caprylic acid was equally effective in reducing the halquinol colonization by IF, followed by the group treated with Lactobacillus. IL-8 and IgM concentrations shown maturation and compared with the local and systemic immune development of the poultry, however, we do not identify relationship with the increased complexity of the microbiota between different trtamentos and challenged groups. In this study it was also not possible to reproduce the TGGE