Fungos da espécie Trichoderma harzianum são estudados como agentes de controle biológico de fitopatógenos que habitam o solo, sendo sua estratégia um processo complexo que pode ocorrer por diferentes mecanismos ou uma combinação deles, incluindo micoparasitismo. Neste trabalho, foram analisadas consequências da deleção do gene que codifica a proteína Epl-1, descrita como elicitora de resistência em plantas nos processos de: modulação da expressão de genes envolvidos no processo de micoparasitismo de T. harzianum contra o fungo fitopatogênico Sclerotinia sclerotiorum; estabelecimento do processo de micoparasitismo; interação entre T. harzianum e plantas de feijão comum. Os resultados mostram que a deleção do gene epl-1 alterou a modulação da expressão de todos os genes relacionados ao processo de micoparasitismo analisados. Além disso, Epl-1 apresentou um papel no processo de modulação de expressão desses genes em T. harzianum, no reconhecimento da própria parede celular e da parede de diferentes hospedeiros, na interação com fitopatógenos hospedeiros, no processo de formação de estruturas de micoparasitismo, bem como na indução de resistência local e sistêmica em plantas de feijão comum / Fungal species Trichoderma harzianum, are studied as soilborne plant pathogens biological control agent and its strategy is a complex process, which can occur by different mechanisms or a combination thereof, including mycoparasitism. In this work, the consequences of epl-1 gene deletion, which encoding for Epl-1 protein, described as plants resistance elicitor, were analyzed on: modulation of gene expression involved in T. harzianum mycoparasitism process against phytopathogenic fungus Sclerotinia sclerotiorum; mycoparasitism establishment process and T. harzianum interaction with bean plants. The results showed that epl-1 encoding gene deletion altered the expression modulation of all analyzed genes related to mycoparasitism process. Furthermore, Epl-1 presented a role in modulating expression of these genes in the process of self and host cell wall recognition; the interaction with host plant pathogens in formation of mycoparasitism structures as well as local and systemic resistance in beans plants

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4498.pdf: 2023528 bytes, checksum: b6d98480ef338423f24d2704afae90bd (MD5) Previous issue date: 2012-06-29 / Universidade Federal de Minas Gerais / The use of alternative and renewable fuels is vital to solve the problems derived from the dependence of fuels, and the vegetal biomass is the only renewable source available in large scale that can be converted in energy. The bioethanol production has demonstrated a huge potential to minimize the environmental changes resultant from fossil fuels consumption. Nevertheless, the production costs of cellulolytic complexes lays out one of the major obstacle of the economical viability of the second generation ethanol. Therefore, the bioprospection and the understanding of enzymes involved in the process can improve the complexes productivity. Xylanases are enzymes used in several biotechnological processes, primordially for biopulping and biobleaching in papel industries. However, current surveys have investigated these enzymes due to an accessory role for bioethanol production. In this study, an endoxylanase (xyn3) gene from Trichoderma harzianum was cloned into Pichia pastoris. The constitutive vector pGAPZαA was used, changing the α-factor by the native signal peptide of the enzyme, and with a 6xHisTag at C-terminus. The recombinant protein were expressed in two majority forms, one with a molecular mass of 35 kDa (non-glycosylated) and the other with 60 kDa (glycosylated). Both forms showed xylanolytic activity in zymogram and were biochemically analyzed. The enzymes present optimal temperature of 40°C and pH 6.5, and stable activity until 30°C. The glycosylation plays important role in the enzymatic kinects of the recombinant enzyme, showing a catalytic efficiency twice higher of glycosylated form, in comparison with the activity of the non-glycosylated form. Even in this study, the effects of cellulose and xylan on the regulation of expression of the xyn2, xyn3 and egl3 genes were investigated to T. harzianum. All studied genes were overexpressed under all induction conditions and the results indicate a higher and earlier expression of these genes in fungus induction using a mixture of cellulose and xylan. Furthermore, an advance in the period of induction was observed while the fungus was cultivated with steam explosed bagasse supplemented with endoxylanase 3, when compared with the pure bagasse utilization. These findings enhance the vii understanding of enzymatic mode of action involved in deconstruction of plant cellular wall, whick can be used in the second generation ethanol production. / A utilização de combustíveis alternativos e renováveis é vital para resolver os problemas derivados da dependência de combustíveis fosseis, e a biomassa vegetal é a única fonte renovável disponível em larga escala que pode ser convertida em energia. A produção de bioetanol tem demonstrado um enorme potencial para minimizar as alterações ambientais resultantes do consumo de combustíveis fósseis. No entanto, os custos de produção de complexos celulolíticos constituem um dos maiores obstáculos da viabilidade econômica do etanol de segunda geração. Portanto, a bioprospecção e a compreensão das enzimas envolvidas no processo podem melhorar a produtividade dos complexos. Xilanases são enzimas usadas em vários processos biotecnológicos, primordialmente para biopolpação e biobranqueamento nas indústrias de papel e celulose. No entanto, as pesquisas atuais têm buscado por estas enzimas devido a um papel acessório na produção de bioetanol. Neste estudo, uma endoxilanase (xyn3) de Trichoderma harzianum foi clonada em Pichia pastoris. O vetor de expressão constitutivo pGAPZαA foi usado, alterando-se o factor-α pelo peptídeo sinal nativo da enzima, e com uma sequência 6xHisTag no C-terminal. A proteína recombinante foi expressa em duas formas majoritárias, uma com uma massa molecular de 35 kDa (não-glicosilada) e a outra com 60 kDa (glicosilada). Ambas as formas mostraram atividade xilanolítica em zimograma e foram analisadas bioquimicamente. As enzimas mostraram temperatura ótima de 40°C e pH 6,5, e com atividade estável até aproximadamente 30°C. A glicosilação apresentou um papel importante na cinética enzimática da enzima recombinante, que mostrou uma eficiência catalítica duas vezes mais elevada em sua forma glicosilada, em comparação com a atividade da forma não-glicosilada. Ainda neste estudo, foram investigados os efeitos de celulose e xilana na regulação da expressão dos genes xyn2, xyn3 e egl3 no T. harzianum. Todos os genes estudados foram superexpressos sob todas as condições de indução e os resultados indicaram uma expressão mais elevada e precoce destes genes utilizando-se uma mistura de celulose e xilana. Além disso, um avanço no período de indução foi observado quando o fungo foi cultivado com bagaço explodido suplementado com endoxilanase 3, quando comparado com a utilização do bagaço v puro. Estes resultados contribuem para o entendimento do mecanismo de ação do sistema enzimático envolvido na desconstrução da parede celular vegetal, o qual pode ser utilizado na produção do etanol de segunda geração.

Considerando o potencial biotecnológico do fungo Trichoderma harzianum no processo de metabolização de compostos xenobióticos e sua resistência a metais pesados, o presente trabalho teve como finalidade estabelecer conhecimentos bioquímicos e ultraestruturais associados ao processo de remoção de cádmio. O microrganismo foi cultivado em meio contendo diferentes concentrações de cádmio: 1mM, 2mM e 3mM. O perfil de crescimento foi estabelecido em função da biomassa produzida, do consumo de glicose e fosfato, conteúdo intracelular de polifosfato, atividade das enzimas fosfatases ácida e alcalina, perfil de proteínas totais e remoção do metal. Os resultados obtidos sugerem efeitos do metal sobre o crescimento do organismo em diferentes meios de cultura. O crescimento em meio padrão revela a tolerância do organismo frente a altas concentrações de cádmio, e que tal cultivo induz variações no consumo de glicose e atividade das fosfatases. A utilização da microscopia óptica revelou variação na morfologia do organismo como resposta a variação do meio de cultivo e da presença e ausência do metal. Modificações relativas a processo de ramificação, textura e espessura das hifas foram visualizadas. Os aspectos ultraestruturais através de varredura demonstraram que T. harzianum cultivado na presença de cádmio apresentou variações associadas a eletrondensidade, densidade micelial, maior ramificação e menor número de clamidósporos. A análise do perfil de proteínas totais revelou que o cultivo em cádmio induziu a diminuição do conteúdo de proteínas dependendo da concentração. O isolado foi capaz de acumular polifosfato, e a presença do metal induziu a degradação do polímero em função da concentração. A remoção de cádmio do meio foi avaliada, revelando variação em função da concentração. Os resultados demonstram o efeito do cádmio sobre T. harzianum, pela primeira vez, e demonstram o potencial do microrganismo em acumular polifosfato e sua possível aplicação na remediação de metais pesados / Considering the biotechnological potential of Trichoderma harzianum in the xenobiotic metabolization and its resistance to heavy metals, the aim of this work was to evaluate the utrastructural and biochemical behavior related to cadmium tolerance and removal. The microorganism was grown in different media, containing 1mM, 2mM and 3mM of cadmium. Aspects of the growth profile was obtained by biomass production, glucose consumption, acid and alkaline phosphatase activities, morphology by optical microscopy, ultrastructure by scanning electron microscopy, total protein profile, polyphosphate acumulation and metal removal were evaluated. The results obtained revealed the inhibitory effects of the heavy metal on the microbial growth and the aspects of the tolerance to cadmium. The glucose consumption and the enzymes activities were also affected by cadmium and its different concentrations. The morphological analysis revealed variations related to hyphae thickness, branching pattern, texture and homogenity, electrondensity, and presence of granular structures. The ultrastructural aspects revealed alterations related to cell electrondensity, mycelia density, branching pattern and reduced chlamidospores number. The grown in presence of the metal induced a reduction in the total protein content related to cadmium concentration. The isolate was able to accumulate polyphosphate, and its grown in cadmium induced the polymer degradation. The cadmium removal was observed and revealed variations related to metal concentrations. The results for the first time revealed the effects of cadmium on T. harzianum polyphosphate accumulation and its potential application in the metal remediation

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:02:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 6663.pdf: 3464569 bytes, checksum: 56765698cbf2bedabdd5b1e555a404ae (MD5) Previous issue date: 2015-03-20 / Financiadora de Estudos e Projetos / Currently the great challenge for the production of second generation ethanol is to reduce thecost of the enzymes. It is possible to reduce part of this cost by carrying out an optimization ofthe process fermentation using sources of cellulase-induction that allow further growth of fungalbiomass, and increased secretion of proteins. The use of a mutant strain with overexpression ofhemicelulolytics activators could increase expression of the enzymes of interest and therebycontribute to cost reduction. This work aimed to study the production of enzymes involved inthe degradation of biomass by the newly isolated strain of Trichoderma harzianum P49P11focusing on the improvement of the submerged fermentation processes and on the use molecularbiology tools to improve the fungal strain. Regarding the fermentation process, the effects ofdifferent inducing sources were evaluated in flasks and bioreactor using statistical experimentaldesign tools and strategies to enhance biomass in the pre-culture step. For fungal strainimprovement, it was used molecular biology tools for the overexpression of two activators ofcellulases (xyr1 and lae1). A proteomic analysis of the T. harzianum enzymatic extract obtainedusing sugarcane bagasse pretreated by steam explosion followed by delignification (BED) wasperformed. The results showed that the best source for inducing cellulase was BED + sucrose(3: 1), reaching values of 1.21 FPU/mL 80.0U/mL of xylanase and 17.30 U/mL of β-glucosidase. The proteomic analyis identificated 24 different glycoside hydrolases and fourCBM proteins, within 12 different CAZy families. From this study, the enzymatic cocktailproduced "on site" could be supplemented using two accessory enzymes, pectinase and α-Larabinofuranosidase,leading to an increase of 100% of the hydrolysis yield. Regarding thestudy of carbon sources in the pre-culture step, it was possible to increase cellulases productionin 2 times using glycerol as the initial carbon source, followed by inducing carbon source(BED). The xyr1 and lae1 overexpression influencied positively the FPase, CMCase, xylanaseand β-glucosidase production, representing a new approach to increase production of theseenzymes. / Atualmente o grande desafio para a produção de etanol de segunda geração consiste emdiminuir o custo das enzimas degradantes da fibra lignocelulósica. Uma alternativa quepode levar a redução de parte desse custo é a otimização do processo fermentativoutilizando fontes indutoras das enzimas (hemi)celulolíticas que permitam um maiorcrescimento da biomassa fúngica e maior secreção de proteínas. A utilização de umalinhagem mutante com a superexpressão dos ativadores dessas enzimas também podecontribuir nesse sentido. Portanto, o objetivo deste trabalho foi estudar a produção deenzimas envolvidas na degradação da biomassa pelo fungo recém-isolado Trichodermaharzianum P49P11 com foco no melhoramento dos processos fermentativos submersose no uso de ferramentas de biologia molecular para o melhoramento da linhagemfúngica. Em relação ao processo fermentativo foi avaliado o efeito de diferentes fontesindutoras em frascos agitados e em biorreator utilizando ferramentas estatísticas deplanejamento de experimentos e estratégias de aumento de biomassa na fase de préinóculo.Em relação ao melhoramento da linhagem fungica foram utilizadas ferramentasde biologia molecular para a superexpressão de dois ativadores de celulases (xyr1 elae1). Para um melhor entendimento das proteínas produzidas em cultivo submerso foirealizado o proteôma do extrato enzimático secretado pelo fungo selvagem em bagaçode cana pré-tratado. Os resultados mostraram que a melhor fonte de carbono indutora decelulases foi o bagaço de cana explodido e deslignificado (BED) + sacarose naproporção 3:1, alcançando valores de 1,21 FPU/mL, 80.0U/mL de xilanse e 17,30 U/mL de β-glicosidase. O proteôma do extrato enzimático de T. harzianum resultou naidentificação de 24 hidrolases glicosídicas diferentes, 4 proteínas CBM dentro de 12diferentes famílias do CAZy. A partir deste estudo pode-se suplementar o coquetelenzimático on site com duas enzimas acessórias, pectinase e α-L-arabinofuranosidaseque aumentaram o rendimento de hidrólise em mais de 100%. Em relação ao estudo dasfontes de carbono na fase de pré-inóculo foi possível aumentar a produção de celulasesem 130% utilizando o glicerol como fonte de carbono inicial, seguida de fonte de18carbono indutora (BED). A aplicação de técnicas de biologia molecular para a mutaçãodo T. harzianum visando a superexpressão de xyr1 e lae teve influência positiva naprodução das enzimas FPase, CMCase, xilanase e β-glicosidase, representando umanova abordagem para aumentar a produção dessas enzimas.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao andrei.pdf: 2548450 bytes, checksum: dedf19335cba3686a528075fb5da8300 (MD5) Previous issue date: 2010-02-26 / Species of Trichoderma are commercially applied as biological control agents against plant fungal pathogens. Their action is based on a set of events, such as the production of antifungal metabolites, competition for space and nutrients and mycoparasitism. However the biocontrol mechanism of the interaction between Trichoderma harzianum and Fusarium solani is not yet understanded at the transcriptome level. This study aimed to initiate the preliminary development of an expressed sequence tag (EST) database for Trichoderma harzianum and thereby gain potentially useful information on Trichoderma gene sequences in order to elucidate the integrated biocontrol mechanism. Partial sequencing of anonymous cDNA clones is a widely used technique for gene identification. A directional cDNA library has been constructed from mycelium of Trichoderma harzianum grown on cell wall isolated from Fusarium solani. 3984 clones have been randomly selected, subjected to single-pass sequencing from the 5 end of the vector, and identified by sequence similarity searches against gene sequences in GenBank fungal database. Of the 3984 mycelium clones, 40.8% exhibit similarity to known genes. Analysis of the identified clones indicated sequence similarity to a broad diversity of genes encoding proteins such as enzymes, structural proteins, and regulatory factors. A significant proportion of genes identified were involved in processes related to mycoparasitism (3,81%), as would be expected in biocontrol fungus. These results present the successful application of EST analysis in the interaction of Trichoderma harzianum and Fusarium solani to provide a preliminary indication of gene expression. / Espécies do gênero Trichoderma são comercialmente aplicadas como agentes de controle biológico contra fungos patógenos de plantas. Sua ação é baseada em diferentes mecanismos como a produção de antibióticos voláteis e não-voláteis, competição por espaço e nutrientes e micoparasitismo. O mecanismo de biocontrole da interação entre Trichoderma harzianum e Fusarium solani ainda não foi explorado ao nível de transcriptoma. Este estudo buscou iniciar o desenvolvimento de uma base de dados de EST (Expressed Sequence Tags) para assim obter informações úteis nas sequências de Trichoderma harzianum e entender melhor as vias integradas do mecanismo de biocontrole. Uma biblioteca direcional de cDNA foi construída a partir do micélio de Trichoderma harzianum crescido em parede celular isolada de Fusarium solani. 3984 clones foram selecionados aleatoriamente, submetidos ao seqüenciamento da região 5 do vetor e identificados por similaridade contra a base de dados de seqüências de fungos GenBank. Dentre os 3984 clones, 40,8% mostraram similaridade com genes conhecidos e descritos na literatura. Análises dos genes identificados indicam similaridade com uma grande diversidade de genes que codificam para enzimas, proteínas estruturais e fatores de regulação. Uma proporção significante dos genes identificados está envolvida com processos relacionados ao icoparasitismo (3,81%), como esperado para um fungo envolvido no controle biológico. Estes resultados mostram uma aplicação bem sucedida da análise de ESTs na interação entre Trichoderma harzianum e Fusarium solani e dar uma sugetão da expressão gênica.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-11-01T18:52:54Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Karina Roterdanny Araújo dos Santos - 2017.pdf: 1875951 bytes, checksum: b8afa2140cacad832c547e18a95b2b41 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-11-06T09:46:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Karina Roterdanny Araújo dos Santos - 2017.pdf: 1875951 bytes, checksum: b8afa2140cacad832c547e18a95b2b41 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-06T09:46:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Karina Roterdanny Araújo dos Santos - 2017.pdf: 1875951 bytes, checksum: b8afa2140cacad832c547e18a95b2b41 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-07-31 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The presence of heavy metals in the soil has increased, causing many problems of an agricultural nature. Trichoderma are a species which is among the most well know and used biocontrol agents wordwide, as well as possessing qualities such tha parasitism and antibiosis, they have great resistance to metals and can also absorb them. Therefore, it is necessary for more detailed studies of the resistance of this fungus to metals and to research further the processes involved. In this work, we aimed to better understand the tolerance of T. harzianum to aluminum chloride, though a series of experiments performed in BDA, MEX e MYG, as well Bradford tests for quantification of proteins. In addition, we evaluated the gene response to metal stress through the sequencing RNA samples obtained when the fungus was created in BDA medium and submitted to concentrations of 1.5 and 3.0 mg / mL of aluminum chloride, 1.5 mg / mL, the fungus showed significant inhibition. It was observed that T. harzianum showed higher mycelial growth when grown in BDA medium compared to MEX and MYG, presenting levels of protein secretion inversely proportional to increasing concentrations of aluminum. The amount of transcriptionspecific factors of the stress response was increased, as well as the induction of genes involved in G-mediated cell signaling and increase in genes involved in vacuolar transport and carrier proteins. A repression of genes encoding proteins associated with cellular processes important for the growth of T. harzianum was also observed. These results show that T. harzianum is resistant to aluminum since it is able to tolerate and absorb large concentrations of this metal, which is commonly harmful to agriculture. / A presença de metais pesados no solo tem sido cada vez mais frequente, aumentando dentre vários problemas, os de cunho agrícola. Espécies de Trichoderma estão entre os agentes de biocontrole mais conhecidos e empregados mundialmente, pois além de possuir ações como parasitismo e antibiose, possui grande resistência a metais, podendo também absorvê-los. Sendo assim, faz-se necessário, estudos mais aprofundados a cerca da resistência desse fungo a metais, envolvendo pesquisas que esclareçam melhor os processos envolvidos. Neste trabalho, objetivamos melhor compreensão a cerca da tolerância de Trichoderma harzianum ao alumínio, através do seu crescimento em diferentes meios de cultura com variadas concentrações do metal. Avaliamos também a secreção de proteínas quando o fungo crescia na presença de alumínio. Além disso, analisamos a resposta gênica ao estresse pelo metal através do sequenciamento de amostras de RNA obtidas quando o fungo foi crescido em meio BDA e submetido às concentrações de 1,5 e 3,0 mg/mL de cloreto de alumínio. Foi possível constatar que T. harzianum apresenta maior crescimento micelial quando crescido em meio BDA, comparado aos meios MEX e MYG, apresentando níveis de secreção de proteínas inversamente proporcionais às concentrações crescentes de alumínio. Foi observada alteração na expressão gênica através do aumento da quantidade de determinados fatores de transcrição de resposta a estresse, além da indução de genes envolvidos em sinalização celular mediada por proteína G e aumento em genes envolvidos com transporte vacuolar e proteínas transportadoras. A repressão de genes que codificam proteínas associadas a processos celulares importantes para o crescimento de T. harzianum também foi observada. No entanto, nossos resultados evidenciam que T. harzianum apresenta resistência significativa ao alumínio, uma vez que se mostra capaz de tolerar e absorver grandes concentrações deste metal, comumente prejudicial à agricultura.

Fungos da espécie Trichoderma harzianum são estudados como agentes de controle biológico de fitopatógenos que habitam o solo, sendo sua estratégia um processo complexo que pode ocorrer por diferentes mecanismos ou uma combinação deles, incluindo micoparasitismo. Neste trabalho, foram analisadas consequências da deleção do gene que codifica a proteína Epl-1, descrita como elicitora de resistência em plantas nos processos de: modulação da expressão de genes envolvidos no processo de micoparasitismo de T. harzianum contra o fungo fitopatogênico Sclerotinia sclerotiorum; estabelecimento do processo de micoparasitismo; interação entre T. harzianum e plantas de feijão comum. Os resultados mostram que a deleção do gene epl-1 alterou a modulação da expressão de todos os genes relacionados ao processo de micoparasitismo analisados. Além disso, Epl-1 apresentou um papel no processo de modulação de expressão desses genes em T. harzianum, no reconhecimento da própria parede celular e da parede de diferentes hospedeiros, na interação com fitopatógenos hospedeiros, no processo de formação de estruturas de micoparasitismo, bem como na indução de resistência local e sistêmica em plantas de feijão comum / Fungal species Trichoderma harzianum, are studied as soilborne plant pathogens biological control agent and its strategy is a complex process, which can occur by different mechanisms or a combination thereof, including mycoparasitism. In this work, the consequences of epl-1 gene deletion, which encoding for Epl-1 protein, described as plants resistance elicitor, were analyzed on: modulation of gene expression involved in T. harzianum mycoparasitism process against phytopathogenic fungus Sclerotinia sclerotiorum; mycoparasitism establishment process and T. harzianum interaction with bean plants. The results showed that epl-1 encoding gene deletion altered the expression modulation of all analyzed genes related to mycoparasitism process. Furthermore, Epl-1 presented a role in modulating expression of these genes in the process of self and host cell wall recognition; the interaction with host plant pathogens in formation of mycoparasitism structures as well as local and systemic resistance in beans plants

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcelo Ramada -.pdf: 3086154 bytes, checksum: d8d600492d75495c63dd916423b6e86b (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 / Trichoderma harzianum is a saprophytic fungus, known for its potential as a biological control agent of different phytopathogens that causes losses in crops. Its action is based on different mechanisms like volatile and non-volatile antibiotics production, competition for nutrient and space, production of hydrolytic enzymes and mycoparasitism. Fusarium solani is the agent of bean dry root rot, and is responsible for significant losses. This work sought to analyze and identify secreted proteins from T. harzianum grown in the presence of F. solani cell wall, in an attempt to obtain new insights on biocontrol.In the dual culture test, T. harzianum proved to be a potent antagonist of F. solani. Some differences in the secreted proteins profile and final medium pH were observed when T. harzianum was grown in TLE medium containing glucose and in TLE and Minimum medium containing the cell wall of the phytopathogen. 33 proteins from 18 different genes were identified. The protein Sm1 was identified and secreted in all growth conditions. Many hydrolytic enzymes related to mycoparasitism, like endochitinases, β-1,3, β-1,6-glucanases, proteases and α-1,3-glicanases, were identified and among the proteases, a hypothetical metalocarboxipeptidase and a serine subtilisin-like never described for T. harzianum. Some enzymes with unkown roles in the mycoparasitism, such as β-1,3-glucanosyltransferase, secreted only in MM growth medium supernatant, were also identified. / Trichoderma harzianum é um fungo saprofítico, conhecido devido ao seu grande potencial como agente de controle biológico de diferentes fitopatógenos. Sua ação é baseada em diferentes mecanismos como a produção de antibióticos voláteis e não-voláteis, competição por espaço e nutrientes, produção de enzimas hidrolíticas e o micoparasitismo. Fusarium solani causa a podridão radicular seca no feijoeiro, resultando em perdas significativas. Este trabalho buscou analisar e identificar as proteínas secretadas por T. harzianum quando crescido na presença de parede celular de F. solani, em uma tentativa de obter novas informações sobre o biocontrole. Nos testes de pareamento, T. harzianum provou ser um potente antagonista de F. solani. Foi observada uma variação tanto no perfil de proteínas secretadas quanto no pH final, quando T. harzianum foi crescido em meio TLE contendo glicose e em meio TLE e Mínimo (M.M.) contendo parede celular do fitopatógeno. No total, 33 proteínas de 18 genes diferentes foram identificadas neste trabalho. A proteína Sm1 foi identificada e secretada em todas as condições de crescimento. Várias enzimas hidrolíticas relacionadas ao micoparasitismo, como endoquitinases, β-1,3, β-1,6-glicanases, proteases e α- 1,3-glicanases, foram identificadas e dentre as proteases, uma hipotética metalocarboxipeptidase e uma serina subtilisin-like nunca descritas em T. harzianum. Foram identificadas, também, enzimas que não possuem função conhecida no micoparasitismo, como a β-1,3-glicanosiltransferase, presente somente no sobrenadante do crescimento realizado em MM.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2018-09-06T18:21:23Z No. of bitstreams: 1 2017 - Carlos Ant?nio dos Santos.pdf: 1589290 bytes, checksum: fbf16019cb63898c65e615c045d17094 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-06T18:21:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017 - Carlos Ant?nio dos Santos.pdf: 1589290 bytes, checksum: fbf16019cb63898c65e615c045d17094 (MD5) Previous issue date: 2017-02-17 / CAPES / CNPq / FAPERJ / The search for efficient strategies to reduce the losses caused by clubroot (Plasmodiophora brassicae) in cauliflower is essential due to the economic and social importance of this culture. Thus, the present study was developed with the objective of evaluating the effect of different treatments in the control of the disease, root development, biomass and inflorescences production under field and greenhouse conditions. The study consisted of three trials carried out in a family farmer's area in the municipality of Nova Friburgo, RJ, Brazil. In the first trial, it was tested the residual effect of four doses of calcined limestone (0, 1.0, 2.0 and 4.0 Mg.ha-1) associated to the application of Trichoderma harzianum biofungicide under field conditions. In the second trial, it was tested the effect of the liming associated to the application of T. harzianum and cyazofamid, under greenhouse conditions. In the third one, two ways of applying limestone were tested, in the planting pit, and applied by hand. The use of gypsum was evaluated in the field. The increase of the limestone doses promoted higher pH levels, and Ca+2 contents, and reduction of the toxic Al + 3 contents in the soil. There was also a reduction of root volume with galls, greater root development, and productivity in cauliflower. The use of T. harzianum was not effective to control the disease and did not favor the root development, either in field or in greenhouse conditions. The fungicide cyazofamid reduced the volume roots with galls, the severity, and the progression of the disease. The third rial revealed a discrete reduction in the severity of the disease when using limestone and gypsum combined. Although there was no effect of the treatments on the root system, limestone applied to the pit and by hand resulted in greater accumulations of fresh mass of inflorescence and productivity. The application of limestone by hand, in the pit, and combined with gypsum favored the accumulation of calcium in the plants. The application of limestone in the pit was equivalent to the hand application in terms of soil chemical attributes improvement, reduction of disease severity, and increase of productivity and accumulation of nutrients. / A busca por estrat?gias eficientes na redu??o das perdas causadas pela h?rnia das cruc?feras (Plasmodiophora brassicae) em couve-flor ? essencial devido ? import?ncia econ?mica e social dessa cultura. Com isso, desenvolveu-se o presente estudo com o objetivo de avaliar, em condi??es de campo e casa de vegeta??o, o efeito de diferentes tratamentos no controle da doen?a, desenvolvimento das ra?zes e produ??o de biomassa e infloresc?ncias em couve-flor. O trabalho foi constitu?do de tr?s ensaios realizados em ?rea de produtor familiar no munic?pio de Nova Friburgo, RJ. No primeiro ensaio, avaliou-se o efeito residual de quatro doses de calc?rio calcinado (0; 1,0; 2,0 e 4,0 Mg.ha-1), associado ? aplica??o de biofungicida a base de Trichoderma harzianum, em condi??es de campo. No segundo, avaliou-se o efeito da calagem associada ? aplica??o de T. harzianum e ciazofamida, em casa de vegeta??o. No terceiro, avaliou-se em campo duas formas de aplica??o de calc?rio, na cova e ? lan?o, e o uso de gesso agr?cola. O aumento das doses de calc?rio promoveu eleva??o do pH e dos teores de Ca+2 e redu??o do teor de Al+3 t?xico no solo. Ainda, houve redu??o do volume de ra?zes com h?rnias e maior desenvolvimento radicular e produtividade em couve-flor. O uso de T. harzianum n?o foi eficaz no controle da doen?a e n?o favoreceu o desenvolvimento radicular das plantas, seja nas condi??es de campo ou de casa de vegeta??o. O fungicida ciazofamida reduziu o volume de ra?zes doentes, a severidade e a progress?o da doen?a. Constatou-se no terceiro ensaio discreta redu??o da severidade da doen?a com o uso de calc?rio combinado com gesso. N?o houve efeito dos tratamentos sobre o sistema radicular, entretanto, calc?rio aplicado na cova e ? lan?o resultaram em maiores ac?mulos de massa fresca de infloresc?ncia e produtividade. A aplica??o de calc?rio ? lan?o, na cova, e calc?rio combinado com gesso favoreceram o ac?mulo de c?lcio nas plantas. O uso de calc?rio na cova foi equivalente ? sua aplica??o ? lan?o quanto a melhorias dos atributos qu?micos do solo, redu??o da severidade da doen?a, aumento da produtividade e ac?mulo de nutrientes.

Zugl.: Hohenheim, Univ., Diss., 2008