Trypanosoma cruzi is endemic in the U.S., infecting humans, dogs, and wildlife. This study identified a new geographic distribution for triatomine species within Texas based on 2,449 records obtained from published data and new field studies. Triatomine vectors of T. cruzi were reported from 97 counties covering all ecological zones. Triatoma gerstaeckeri was the most commonly collected species followed by T. sanguisuga. New field collections resulted in 233 specimens from 37 counties and a 52% T. cruzi infection rate. A second trypanosome, Blastocrithida triatomae was found in two specimens from different locations. A habitat suitability model for T. gerstaeckeri was developed using GIS and remote sensing applications. Forest and rangeland were the predominant land cover classes found within T. gerstaeckeri habitat, where as water and agriculture proved to have little influence on habitat suitability. Genetic variation of seven triatomine species from Texas was evaluated using cytochrome b DNA sequences from 61 new specimens. This is the first study of the taxonomic status of T. gerstaeckeri, T. indictiva, and T. neotomae using molecular markers. Intraspecific variation for T. sanguisuga and T. gerstaeckeri suggests significant gene flow across their ranges within Texas. Genetic variation of T. cruzi isolates from Texas was evaluated using SSU rRNA gene sequences. Included were 63 new sequences from five triatomine species, canine, baboon, and human isolates. Sequences partitioned into two groups in agreement with previous studies on U.S. isolates. Genetic variation of T. cruzi did not occur according to host, geographic location, or collection site. The extent of Chagas disease in domestic canines of Texas is described by geographic distribution, signalment, and clinical presentation and histopathology. Based on data from 553 cases, the geographic distribution in Texas is widespread (46 counties) and closely matches the distribution of the Triatomine vectors. Chagas disease was diagnosed in 33 breeds, primarily sporting/working dogs. This study represents the most comprehensive characterization of components of the Chagas disease transmission cycle in the U.S. to date. These findings should raise awareness among physicians, veterinarians, and public health practitioners regarding T. cruzi, its vectors, canine infection, and human risk for Chagas disease in Texas.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst. / Härtill 7 uppsatser. Karolinska International Research Training Program (KIRT).

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2006. / Härtill 5 uppsatser.

Thesis (Ph. D. in Chemistry)--Vanderbilt University, Dec. 2008. / Title from title screen. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--University of Texas at El Paso, 2008. / Title from title screen. Vita. CD-ROM. Includes bibliographical references. Also available online.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2016. / Texto liberado parcialmente pelo autor. Conteúdo liberado: resumo/abstract. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-05-18T18:45:40Z No. of bitstreams: 1 2016_ThaísTâmaraCastroeSouzaMinuzzi_Parcial.pdf: 3601274 bytes, checksum: 9befef0356375dfb586a6c49fc449ac1 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2016-05-27T12:35:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_ThaísTâmaraCastroeSouzaMinuzzi_Parcial.pdf: 3601274 bytes, checksum: 9befef0356375dfb586a6c49fc449ac1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-27T12:35:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_ThaísTâmaraCastroeSouzaMinuzzi_Parcial.pdf: 3601274 bytes, checksum: 9befef0356375dfb586a6c49fc449ac1 (MD5) / O conhecimento atualizado da distribuição e infecção natural de triatomíneos sinantrópicos é fundamental para vigilância e controle da doença de Chagas. No Brasil, a detecção de Trypanosoma cruzi em triatomíneos é realizada por microscopia óptica (MO) do conteúdo intestinal, que pode apresentar diversas limitações quanto à sua sensibilidade e especificidade. Objetivos: Analisar a ocorrência de triatomíneos e suas taxas de infecção natural por T. cruzi e outros tripanossomatídeos no estado de Goiás (GO) e Distrito Federal (DF), estimar a sensibilidade da MO para detecção de T. cruzi em triatomíneos e analisar a transmissão de T. cruzi em ambientes onde colônias de triatomíneos infectados forem detectadas. Métodos: Os espécimes (adultos e ninfas) capturados no intra e peridomicílio e resultados dos exames parasitológicos a fresco e lâminas coradas foram obtidos por meio do LACEN/SES/GO e DIVAL/DF. O DNA foi extraído de amostras do intestino para realização das PCRs (cPCR e qPCR) utilizando quatro marcadores moleculares (TCZ, kDNA, rDNA 18S e rDNA24sα). Também, foi avaliada a infecção por T. cruzi em colônia de P. megistus (nestedcPCR) e em amostras sanguíneas provenientes de primatas neotropicais não-humanos (nestedqPCR) encontrados no Zoológico de Brasília (ZooB). Resultados: Foram analisados 2715 triatomíneos provenientes de 12/30 regiões administrativas do DF e 95/246 municípios de GO. Houve predomínio de T. sordida em GO e no DF P. megistus foi mais frequente, com taxas de infecção por flagelados similares a T. cruzi de 4,6% e 1,6%, respectivamente. A MO revelou 144/841 triatomíneos positivos para tripanossomatídeos, resultando em uma taxa de infecção de 17,1%. A qPCR, específica para T. cruzi, revelou 347 positivos (41,2%). A sensibilidade da MO para T. cruzi, tendo como referência a TCZ qPCR, foi estimada em 23,6% e a da rDNA24sα cPCR foi estimada em 58,5%. Blastocrithidiatriatomae e T. rangeli foram detectadas nos triatomíneos assim como infecções mistas por T. cruzi e B. triatomae. As taxas de infecção por T. cruzi nas espécies de triatomíneos variaram de 19 a 67% sendo maiores para T. pseudomaculata e em triatomíneos vivos e frescos. O sequenciamento revelou TcI em P. megistus e T. sordida e TcII em P. megistus e T. pseudomaculata. No ZooBT. cruzi foi encontrado em P. megistus (44/50) e em primatas (17/26) de seis gêneros e oito espécies, sendo que um Mico chrysoleucus e um Saguinusniger apresentaram alta parasitemia. Discussão e Conclusão:Os resultados mostram uma baixa sensibilidade da MO para a detecção de tripanosomatídeos em triatomíneos e infecções por pelo menos três espécies de tripanossomatídeos, o que reforça a necessidade de métodos de alta especificidade para o desenvolvimento de estratégias de vigilância adequadas dos vetores da doença de Chagas. O método de TCZ qPCR pode ser considerado um padrão referência para detecção de T. cruziem triatomíneos. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The current knowledge of the distribution and natural infection of synanthropictriatomines is essential for surveillance and control of Chagas disease. In Brazil, optical microscopy (OM) has been used to detect Trypanosoma cruzi in triatomines, but this technique can present several limitations in terms of sensitivity and specificity. Objectives: Analyze the occurrence of triatomines and their natural infection rates for Trypanosoma cruzi in state of Goiás (GO) and the Federal District (DF),estimate the sensitivity of OM to detect T. cruzi in triatomines, and analyze T. cruzi transmission foci in environments where infected triatomine colonies were detected. Methods: The specimens (adults and nymphs) captured in the intra and peridomicile and results of parasitological fresh and stained slides were obtained from LACEN/SES/GO and DIVAL/DF. DNA was extracted from the intestine samples for the PCRs (cPCR and qPCR) using four molecular markers (TCZ, kDNA, 18S and rDNA24sα). Also, T. cruzi infections were assessed in a Panstrongylusmegistuscolony and from blood samples of nonhuman primates found in the Brasilia Zoo (ZooB). Results:2715 triatomines were analyzed from 12/30 administrative regions of the DF and 95/246 municipalities of GO. In GO, T. sordida predominate while in the DF P. megistus was more frequent, with infection rates by flagellates similar to T. cruzi of 4.6% and 1.6%, respectively. OM revealed 144/841 trypanosomatid-positive triatomines, resulting in a 17.1% infection rate. The T. cruzi TCZ qPCR, showed 347 positive (41.2%). The sensitivity of T. cruzi-OM with reference to TCZ qPCR was estimated at 23.6% and rDNA24sα cPCR was estimated at 58.5%. Triatomines were infected by Blastocrithidiatriatomae and T. rangeli. However, mixed infections with T. cruzi and B. triatomae were found. Infection rates by T. cruzi in triatomine species ranged 19-67% and were higher for T. pseudomaculata and alive and fresh triatomines. The sequencing of some samples confirmed the identification of B. triatomae and revealed TcI in P. megistus and T. sordida, and TcII in P. megistus and T. pseudomaculata. In ZooB, T. cruzi was found in 44/50 P. megistus and 17/26 primates (six genera and eight species); one Micochrysoleucus and one Saguinusniger showed high parasitaemia. Discussion and Conclusion: The results show a low sensitivity of OM for trypanosomatids detection in triatomines and infections for at least three trypanosomatid species, which reinforces the need for highly specific methods for the development of appropriate surveillance strategies of the vectors of Chagas disease. It also suggests that the TCZ qPCR method could be considered as a reference standard for detection of T. cruziin triatomines.

Submitted by Isac Macêdo (isac@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-29T13:11:14Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado - Carolina C B Gruszkowski.pdf: 2705318 bytes, checksum: f07dc28b794bcd1bd613cf1fad937d4a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-29T13:11:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado - Carolina C B Gruszkowski.pdf: 2705318 bytes, checksum: f07dc28b794bcd1bd613cf1fad937d4a (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Os métodos de diagnóstico usados hoje para a Doença de Chagas, embora simples e de baixo custo, podem apresentar baixas sensibilidade e especificidade ou reações cruzadas com outros patógenos. Da mesma forma, os medicamentos usados no tratamento apresentam severos efeitos colaterais. Dentre os vários alvos metabólicos sugeridos, as proteases têm sido apontadas como moléculas candidatas devido às suas particularidades.Recentemente o nosso grupo identificou duas aspartil proteases em T. cruzi: uma solúvel (Cruzipsina-Il) e outra membranar (Cruzipsina-I); entretanto, suas funções biológicas permaneceram desconhecidas. Os nossos resultados demonstram, pela 1 a vez, a existência de um complexo proteolítico membranar em T. cruzi com propriedades similares ao complexo y-secretase de outras células eucarióticas. Usando ferramentas de bioinformática localizamos em banco de dados as seqüências primárias de 3 das 4 proteínas do complexo (presenilina, nicastrina e Aph-l). Esta informação foi importante para caracterizarmos através de síntese paralela de peptídeos os epitopos B lineares das 3 proteínas usando soros de pacientes. A presenilina apresentou 10 epitopos majoritários, a nicastrina, 5 e a Aph-l, 10. Alguns epitopos foram selecionados por vários critérios e anticorpos anti-peptídeos obtidos em coelhos. O soro anti-peptídeo PRE-2 de presenelina identificou por immunoblotting a banda de 48 kDa na fração CZP-I como sendo presenelina, enquanto o soro anti-peptideo NIC-l de nicastrina apresentou também uma marcação na mesma posição. A análise por microscopia confocal em epimastigotas localizou as proteínas predominantemente nas regiões anterior e mediana das células. Além disso, as marcações mostraram-se mais fortes em células permeabilizadas, sugerindo a co-localização de ambas as proteínas nas membranas internas da célula. Um teste de ELISA empregando 4 peptídeos sintéticos da presenilina e nicastrina de T. cruzi apresentou sensibilidade e especificidade de 71,59% e 70,53%, respectivamente. Utilizando a extração diferencial com detergente e análise por EGPA-SDS após cromatografia de afinidade, confirmamos na cepa CL Brener de T. cruzi o perfil de bandas presentes na cepa Y, de 240, 56, 48 e 34 kDa na fração CZP-I (detergente) e 56, 52, 37 e 34 kDa na fração CZP-I1 (solúvel). Ensaios enzimáticos usando o inibidor L-685,458 e moduladores alostéricos DAPT e Composto XXIIE da presenilina humana sugeriram que aparentemente o sítio catalítico da presenilina de T. cruti possui uma constituição semelhante. ao da presenilina humana, enquanto diferenças significativas puderam ser observadas no sitio alostérico. O inibidor de sítio ativo L-685,458 foi capaz de inibir 100% da atividade enzimática em 5!-lM, enquanto os moduladores DAPT e Composto XXIIE não apresentaram uma inibição significativa. Portanto, os nossos estudos sugerem que devido as suas funções enzimáticas e localização celular a presenilina do T. cruzi é um bom alvo quirnioterapêutico e imunológico. / The diagnostic methods used today for Chagas disease, although simple and unexpensive, may present low sensitivity and specificity or cross-reactions with other pathogens. Likewise, drugs used nowadays to treat Chagas disease show severe side effects. Among the various metabolic targets suggested, proteases have been identified as candidate molecules due to its particularities. Recently our group identified two aspartyl proteases in T. cruzi: a soluble (Cruzipsin-I1) and a membrane-bound (Cruzipsin-l); however, their biological functions remained unknown. Our results demonstrate for the 1 st time, the existence of a membrane proteolytic complex in T. cruzi with similar properties to the y-secretase complex of other eukaryotic cells. Using bioinformatics tools, the primary sequences of three of four complex proteins (presenilin, nicastrin and Aph-l) where localized at a protein database. This information was important for parallel synthesis of peptides and the identification of linear epitopes of proteins using sera from eight patients. Presenilin presented 10 major epitopes, nicastrina,5 and Aph-l, 10. Some epitopes were selected by different criteria and anti-peptide sera were obtained in rabbits. Serum anti-peptide PRE-2 of presenelin .identified by immunoblotting a 48 kDa band in fraction CZP-I as presenelin, while the anti-peptide NIC-I of nicastrin also presented a marking in the same position. Analysis by confocal microscopy of epimastigotes localized the proteins mainly at anterior and middle portions of the cells. ln addition, the markings were found to be stronger in permeabilized cells, suggesting co- localization of both proteins in the inner membranes of the cell. An ELISA employing four synthetic peptides for T. cruzi presenilin and nicastrin presented sensitivity of 71.59% and specificity and 70.53%. USlng differential detergent extraction and analysis by SDS-PAGE after affinity chromatography confirmed that the profile bands present in the strain CL Brener were like those of strain Y: 240, 56, 48 and 34 kDa in fraction CZP-I (detergent), and 56, 52, 37 and 34 kDa in CZP-I1 fraction (solub1e). Enzyme assays using the inhibitor L-685,458 and allosteric modulators DAPT and Compound XXI/E of human presenilin apparently suggested that the catalytic site of T. cruri presenilin has a constitution similar to the human presenilin, while significant differences were observed in the allosteric site. The active site inhibitor L-685,458 was able to inhibit 100% of enzyme activity at 5 !J.M, while the modulators DAPT and Compound XXI/E showed no significant inhibition. Therefore, our studies suggest that due to their enzymatic functions and cellular localization the presenilin of T. cruzi is a good target for chemotherapeutic and for immune system.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2013-11-04T12:15:31Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado Felipe Leprevost.pdf: 8130365 bytes, checksum: 2af7aa9ac89832c8e4c552a4d889c5e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-04T12:15:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Mestrado Felipe Leprevost.pdf: 8130365 bytes, checksum: 2af7aa9ac89832c8e4c552a4d889c5e9 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Atualmente novas abordagens e metodologias de pesquisa nos permitem iniciar projetos de caracterização de um conjunto de proteínas de um determinado organismo em escalas superiores aos realizados há algum tempo. Novas tecnologias para seqüenciamento, clonagem e expressão protéica permitem a geração de uma quantidade grande de novas informações numa fração de tempo relativamente curta. Organismos como o Trypanosoma cruzi, que possuem praticamente metade de seu genoma sem função conhecida, necessitam que estudos sejam realizados para que se consiga atribuir às proteínas de função desconhecida características funcionais. Em um esforço para se conhecer melhor os genes de função desconhecida deste parasita, um grupo de 10 genes foi selecionado com base na sua expressão diferencial durante a metaciclogênese, consistindo de genes anotados como ‘proteína hipotética’ em banco de dados públicos, com domínio identificado pelo banco de famílias protéicas PFAM e com ortólogos em outros organismos. Os 10 genes selecionados foram amplificados e clonados na plataforma de clonagem Gateway e as proteínas recombinantes foram expressas em Escherichia coli. Dos 10 genes destinados à expressão protéica, 8 expressaram proteínas insolúveis as quais foram utilizadas para obtenção de soro policlonal. Os soros obtidos foram utilizados em ensaios de Western Blot para averiguação da expressão protéica ao longo da metaciclogênese do parasita e ensaios de localização celular por microscopia ótica e eletrônica. Foram realizados também ensaios de transfecção em T. cruzi para a expressão das proteínas fusionadas com GFP, visando à determinação da localização celular, utilizando um vetor compatível com a plataforma Gateway, e foram realizados ensaios de imunoprecipitação para todas as 8 proteínas expressas. Os resultados obtidos no presente trabalho auxiliam na atribuição de informações experimentais a genes e proteínas anotados como ‘proteína hipotética de função desconhecida’ e avaliam a possibilidade de implementação de um estudo sistemático com este para uma aplicação em média/larga escala / Recent research approaches and methodologies allow us to develop projects for the characterization of proteins of a given organism in scales greater than possible some time ago. New technologies for sequencing, cloning and protein expression allow the generation of large amounts of new information in relatively short time. Organisms such as Trypanosoma cruzi, which have nearly half of its genome with no known function, require studies to assign functions to proteins of unknown function. In an effort to characterize the genes of unknown function of this parasite, a group of 10 genes was selected based on their differential expression during metacyclogenesis. The genes were annotated as 'hypothetical protein' in public databases, with domains identified in the PFAM database and with orthologs in other organisms. The 10 selected genes were amplified and cloned in Gateway cloning platform and the recombinant proteins were expressed in Escherichia coli. Eight of the 10 genes expressed insoluble proteins which were used to obtain polyclonal serum. The sera were used in Western Blot analysis to verify protein expression throughout the parasite metacyclogenesis as well as cellular localization by optical and electron microscopy. To determine cellular localization, transfection experiments were conducted in T. cruzi for the expression of proteins fused with GFP using a vector compatible with the Gateway platform. Immunoprecipitation assays were also performed for the 8 expressed proteins. The results obtained in this work uncover experimental information of genes annotated as 'hypothetical protein of unknown function' and assess the possibility of implementing a systematic approach with this methodology in medium to large scale

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas congénita es causada por el parásito hemoflagelado Trypanosoma cruzi que alcanza al feto atravesando la barrera placentaria. Durante la invasión tisular T. cruzi induce destrucción de la matriz extracelular (MEC) mediante secreción de proteasas como Cruzipaína (Cz) e inducción de la expresión y activación de proteasas propias del tejido como las metaloproteinasas de la matriz (MMPs). La posible participación de estas proteasas en placenta humana durante la transmisión congénita no ha sido estudiada. Se analizó la expresión y actividad de las MMP 2 y 9 durante la infección ex vivo de vellosidades coriónicas placentarias humanas con el parásito. Se determinó la participación de estas MMPs y de Cz en la degradación de moléculas glicosiladas y del colágeno tipo I del tejido conectivo fetal. Adicionalmente se evaluó el efecto de inhibidores para ambos tipos de proteasas tanto sobre los efectos tisulares de la invasión parasitaria como sobre su infectividad. Se obtuvieron tripomastigotes de la cepa Dm28c a partir de células Vero infectadas y placentas de término de madres sanas. Se incubaron trozos de tejido placentario (0,5 cm3) durante 24 horas en presencia y ausencia de 105 y 106 tripomastigotes y en presencia y ausencia de inhibidores para Cz (E-64) y para MMP (doxiciclina). La infección placentaria se comprobó mediante detección del parásito por PCR. Las MMP se analizaron mediante Western Blot, Inmunohistoquímica y Zimografía. Las modificaciones estructurales de colágeno I se determinaron histoquímicamente mediante la tinción de picro rojo sirio y las alteraciones de moléculas glicosiladas mediante tinción de ácido periódico de Schiff. La expresión y activación de las MMPs depende de la cantidad de parásitos usados. La inhibición de la actividad proteolítica de Cz y las MMP previene la destrucción de colágeno tipo I y alteraciones de moléculas glicosiladas inducida por T. cruzi. La inhibición de la actividad de las proteasas no previene la infección ex vivo del parásito. Se concluye que tanto proteasas parasitarias así como propias del tejido a infectar constituyen parte de los mecanismos de infección tisular de T. cruzi / Proyectos Bicentenario Anillo 112 y FONDECYT 11080166

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os tripomastigotas metacíclicos de Trypanosoma cruz; expressam as glicoproteínas de superfícies GP82 e GP90 de maneira estágio-específica, as quais estão implicadas na invasão da célula hospedeira. Embora as proteínas não sejam expressam e os RNAm GP82 e GP90 fracamente detectáveis em epimastigotas, ensaios de transcrição em núcleos isolados mostraram que eles são transcritos constitutivamente nos dois estágios. Este resultado indica que o acúmulo de transcritos nas formas metacíclicas não é devido a um aumento na transcrição dos genes GP82 e GP90. Para investigar se a estabilidade dos RNAm seria a responsável pelas diferenças nos níveis destes RNAm, parasitas foram tratados com actinomicina D ou cicloheximida. Quando tratados com actinomicina D, as meia-vidas dos transcritos GP82 e GP90 foram maiores que 8 h em tripomastigotas metacíclicos e menor que 0,5 h e 2 h em epimastigotas, respectivamente. Na presença de cicloheximida, os níveis de RNAm GP82 e GP90 caíram levemente, enquanto que em epimastigotas os níveis destes RNAm aumentaram após 8 h de tratamento. Este efeito sugere um mecanismo de estabilização atuando em tripomastigotas metacíclicos e de desestabilização em epimastigotas, os quais parecem ser mediados por elementos presentes na 3' -UTR destes transcritos. Nós mostramos que a 3'-UTR da GP82 gera uma expressão maior do gene repórter GFP em tripomastigotas metacíclicos do que em epimastigotas. Consistente com este achado, análises de "northern blot" mostram que os RNAm GP82 e GP90 são mobilizados para os polissomas e conseqüentemente traduzidos apenas em tripomastigotas metacíclicos. Estes resultados sugerem que a estabilidade destes RNAm envolve interações com elementos regulatórios positivos e negativos na 3' -UTR. Estudos para melhor compreensão dos mecanismos envolvidos na estabilidade dos RNAm GP82 e GP90 estão em progresso em nosso laboratório. / Trypanosoma cruzi metacyclic trypomastigotes express the developmentally regulated GP82 and GP90 glycoproteins, which are implicated in host cell invasion. Although GP82 and GP90 mRNAs and proteins are not present and the mRNAs barely detectable in epimastigotes, nuclear run-on analysis showed that they are transcribed in both stages. This result indicates that accumulation of transcripts in metacyclic forms is not due to increased transcription of the GP82 and GP90 genes. To investigate whether mRNA stability may be responsible for the differences in the steady-state levels of these mRNAs, parasites were treated with actinomycin D or cycloheximide. When treated with actinomycin D, the half-lives estimated for GP82 and GP90 transcripts were longer than 8 h in metacyclic trypomastigotes and less than 0.5 h and 2 hours in epimastigotes, respectively. In the presence of cycloheximide, the levels of GP90 and GP82 mRNA decayed slightly after 8 h in metacyclic trypomastigotes, whereas in epimastigotes the levels of these mRNAs increased. This effect suggests a stabilizing mechanism acting in metacyclic trypomastigotes and a destabilizing mechanism in epimastigotes which could be mediated by an element present in the 3’-UTR of the transcripts. We show that the 3’-UTR of GP82 causes higher expression of the green fluorescent protein reporter gene in metacyclic trypomastigotes than in epimastigotes. Consistent with this finding, northern blot analysis showed that GP82 and GP90 mRNAs were mobilized to polysomes and consequently translated, but only in metacyclic trypomastigotes. These results suggest that the stability of these mRNAs involves interactions between positive and negative regulatory elements in the 3’-UTR. Work is ongoing to better understanding the mechanisms involved in changes in GP82 and GP90 mRNA stability. / BV UNIFESP: Teses e dissertações