Submitted by Rosana Amâncio (rosana.amancio@ufcg.edu.br) on 2018-07-12T22:11:47Z No. of bitstreams: 1 ERICA RENATA NOGUEIRA SÁ CAETANO - DISSERTAÇÃO PPGCNBio 2016..pdf: 2506925 bytes, checksum: 2aee1b855d59914fe68902bb6ec5b3fe (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-12T22:11:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ERICA RENATA NOGUEIRA SÁ CAETANO - DISSERTAÇÃO PPGCNBio 2016..pdf: 2506925 bytes, checksum: 2aee1b855d59914fe68902bb6ec5b3fe (MD5) Previous issue date: 2016-07-14 / CNPq / Miraculina é uma glicoproteína que possui uma incrível propriedade de converter o sabor amargo em doce. Como a miraculina não apresenta sabor algum e tem um baixo teor calórico, esta proteína pode ser usada como adoçantes direcionados para pacientes com doenças relacionadas ao consumo excessivo de açúcar. Estudos comprovaram que membros da família de proteínas miraculinas também possuem atividade de inibidor de tripsina do tipo Kunitz, atuando como agentes naturais de defesa da planta contra pragas e predadores. Diante disso, proteínas do tipo miraculina são de grande relevância para aplicações biotecnológicas. Esse estudo teve como objetivo geral realizar a caracterização estrutural e funcional comparativa de duas miraculinas de Citrus sinensis, por meio de modelagem e docking molecular. Modelos 3D foram gerados e validados para as miraculinas CsMir1 e CsMir4, tripsina de Acryrthosiphon pisum e para os receptores de sabor doce mT1R2 e T1R3 de Mus musculus. Modelos homodiméricos foram gerados para CsMir1 e CsMir4 e modelo heterodimérico foi gerado para mT1R2-T1R3. Estudos da atividade de inibidor de tripsina foram feitos para CsMir1 e CsMir4 por interação com tripsina. Para analisar a atividade de modificação de sabor doce, foi realizada a interação das miraculinas com o receptor mT1R2-T1R3. Como resultados, os modelos dos monômeros e dímeros criados foram considerados bons modelos, válidos e confiáveis, com representações muito próximas das estruturas nativas dessas proteínas. A miraculina CsMir1, na forma monomérica ligou-se a tripsina de A. pisum e na sua forma dimérica ligou-se ao receptor heterodimérico mT1R2-T1R3 através do domínio ATD da subunidade T1R2, entretanto o potencial para as atividades de inibição de proteases e de indução ou inibição a modificação de sabor amargo/azedo em doce é menor do que para a CsMir4. A miraculina CsMir4, na sua forma monomérica ligou-se a tripsina de A. pisum, possivelmente apresentando atividade de inibição de proteases. CsMir4, na sua forma dimérica, ligou-se ao receptor heterodimérico mT1R2-T1R3, através do domínio ATD da subunidade T1R2, potencialmente apresentando atividade de indução ou inibição a modificação de sabor amargo/azedo em doce em M. musculus. / Miraculins are glycoproteins that displays a remarkable property in bitter to sweet taste conversion. As miraculin does not have any taste and has a low calorie, this protein can be used as sweeteners targeted to patients with diseases related to excessive sugar consumption. Studies have shown that members of miraculins protein family also display inhibitor activity against the Kunitz trypsin, acting as natural agents of plant defense against pests and predators. In this context, miraculin proteins are of great relevance for biotechnological applications. The aim of this research was to characterize structurally and functionally two miraculins of Citrus sinensis using in silico tools. Tridimensional models were built and validated for CsMir1 and CsMir4 miraculins, Acryrthosiphon pisum trypsin and for Mus musculus mT1R2-T1R3 receptor. Homodimeric and hetrodimeric models were generated for miraculins (CsMir1, CsMir4) and mT1R2-T1R3, respectively. Molecular docking simulations were performed to investigate the trypsin inhibitory activity and taste conversion activity of CsMir1 and CsMir4. The results showed that the predicted models were reliable and presented good quality parameters. The monomeric CsMir1 miraculin bound to A. pisum trypsin, while its dimeric form bound to ATD domain of the mT1R2-T1R3, although its potential as trypsin inhibitor and bitter/sweet taste modifier were minor than that presented by its homologous CsMir4. The dimeric form of CsMir4 bound to mT1R2-T1R3 receptor in the ATD domain, which strongly suggests bitter/sweet taste modifier activity in M. musculus.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-12Bitstream added on 2014-06-13T20:37:31Z : No. of bitstreams: 1 castoldi_r_me_jabo.pdf: 271551 bytes, checksum: 70eaecbffef73c494f584a13c0f4a3d6 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se avaliar o desempenho de cinco genótipos de soja-hortaliça, quanto às características agronômicas, funcionais e antinutricionais. O experimento foi conduzido em campo, no Setor de Olericultura e Plantas Aromático-Medicinais na UNESP-FCAV. O delineamento experimental adotado foi o de blocos ao acaso com cinco tratamentos (genótipos) e quatro repetições, sendo que cada parcela experimental foi constituída por quatro linhas de plantio com seis metros de comprimento e 0,60 m entrelinhas, considerando-se para avaliação 20 plantas por parcela, das duas linhas centrais. Para a formação das mudas, utilizou-se do sistema de semeadura em bandejas de poliestireno expandido, com capacidade para 128 células, contendo substrato Plantmax Hortaliças® HT. As mudas foram transplantadas aos 10 dias após a semeadura. Avaliaram-se os genótipos JLM003, JLM004, JLM010, JLM024 e JLM030 quanto às características: precocidade; altura de inserção da primeira vagem (cm); número de vagens por planta; número de sementes por vagem; massa fresca das vagens por planta (g); massa fresca de 100 sementes (g); produtividade total estimada de grãos imaturos (kg ha-1); teor de umidade; proteínas; lipídeos; cinzas; carboidratos; isoflavonas e inibidores de tripsina Kunitz (KSTI). Na avaliação das principais características agronômicas, funcionais e antinutricionais, nas condições deste experimento, pode-se concluir que o genótipo de soja-hortaliça JLM010 é o mais recomendado para a região de Jaboticabal-SP, por apresentar melhores características agronômicas para produção como hortaliça (136,04 g para massa fresca das vagens por planta, 92,52 g para massa fresca de 100 sementes e 11.121,22 kg ha-1para produtividade total estimada de grãos imaturos) e também se destacar quanto às propriedades funcionais. / The aim of this study was to evaluate the performance of five genotypes of vegetable soybean with respect to agronomic, functional and antinutritional characteristics. The experiments were conducted in the field, in the Sector of Vegetable Crops and Aromatic Medicinal Plants, in the UNESP-FCAV. The experimental design adopted was a randomized block design with five treatments (genotypes) and four repetitions. Each experimental parcel comprised four planting rows of six meters in length and 0.60 m between rows, and 20 plants per parcel, from the two center rows, were evaluated. Seedlings were started in Polystyrene trays with 128 cells containing the substrate Plantmax Hortaliças® HT. The seedlings were transplanted at 10 days after planting. The genotypes JLM003, JLM004, JLM010, JLM024 and JLM030 were evaluated with respect to the following characteristics: precocity, height to first pod (cm), number of pods per plant, number of seeds per pod, fresh weight of pods per plant (g), fresh weight of 100 seeds (g), estimated total productivity of immature seeds, moisture content, proteins, lipids, ash, carbohydrates, isoflavones and Kunitz trypsin inhibitor (KSTI). In the evaluated of principals characteristics agronomic, functional and antinutritional, in the conditions this study, conclude that: 1) the genotype JLM010 was found to be the most recommended for the region of Jaboticabal-SP, as it showed better agronomic characteristics for production as a vegetable (136,04 g for fresh weight of pods per plant, 92,52 g for fresh weight of 100 seeds and 11.121,22 kg ha-1 for estimated total productivity of immature seeds) and displayed better functional characteristics and also highlight on the functional properties.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:33:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoycellaneANCR_DISSERT.pdf: 2345415 bytes, checksum: 891d1d3a4e1202d27cf8a25aff1812be (MD5) Previous issue date: 2013-02-19 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The seeds are excellent sources of proteinase inhibitors and have been highlighted owing to various applications. Among these applications are those in effect on food intake and weight gain that stand out because of the increasing number of obese individuals. This study evaluated the effects of trypsin inhibitor present in the seed of tamarind (Tamarindus indica L.) reduction in weight gain, biochemical and morphological alterations in Wistar rats. For this, we partially purified a trypsin inhibitor tamarind seed. This inhibitor, ITT2 at a concentration of 25 mg / kg body weight, over a period of 14 days was able to reduce food intake in rats (n = 6) by approximately 47%, causing a reduction in weight gain approximately 70% when compared with the control group. With the evaluation of the in vivo digestibility was demonstrated that the animals lost weight due to satiety, presented by the reduction of food intake, since there were significant differences between true digestibility for the control group (90.7%) and the group treated with inhibitor (89.88%). Additionally, we checked the deeds of ITT2 on biochemical parameters (glucose, triglycerides, total cholesterol, high-density lipoprotein, low-density lipoprotein, glutamic-pyruvic transaminase, glutamic oxaloacetic transaminase, gamma glutamyl transferase albumin, globulin, total protein and C-reactive protein) and these, when assessed in the study groups showed no statistically significant variations. We also evaluate the histology of some organs, liver, stomach, intestine, and pancreas, and showed no changes. And to evaluate the effect of trypsin inhibitor on food intake due to the satiety is regulated by cholecystokinin (CCK) were measured plasma levels, and it was observed that the levels of CCK in animals receiving ITT2 were significantly higher ( 20 + 1.22) than in animals receiving only solution with casein (10.14 + 2.9) or water (5.92 + 1.15). Thus, the results indicate that the effect caused ITT2 satiety, reducing food intake, which in turn caused a reduction in weight gain in animals without causing morphological and biochemical changes, this effect caused by the elevation of plasma levels CCK / As sementes s?o excelentes fontes de inibidores de proteinases, e a estes t?m sido atribu?do in?meras aplica??es. Dentre estas aplica??es est?o as com efeito sobre o consumo alimentar e o ganho de peso que se destacam devido o crescente aumento de indiv?duos obesos. Esse estudo avaliou os efeitos do inibidor de tripsina presente na semente de tamarindo (Tamarindus indica L.) sobre o ganho de peso e par?metros bioqu?micos e morfohistol?gicos de ?rg?os de ratos wistar. Para isso, foi parcialmente purificado um inibidor de tripsina de semente de tamarindo (ITT2). Este na concentra??o de 25 mg/Kg de peso, num per?odo de 11 dias, foi capaz de reduzir o consumo alimentar de ratos em cerca de 47%, ocasionando uma redu??o no ganho de peso de aproximadamente 70% quando comparado com o grupo controle. Com a avalia??o da digestibilidade proteica in vivo foi poss?vel demonstrar que os animais perderam peso devido ? saciedade, apresentada pela redu??o do consumo alimentar, visto que n?o houve varia??es significativas da digestibilidade verdadeira entre o grupo controle (90,7%) e o grupo tratado com inibidor (89,88%). Al?m disso, o sangue dos animais foi coletado a fim de serem avaliados os efeitos do ITT2, sobre par?metros bioqu?micos (glicose, triglicer?deos, colesterol total, lipoprote?nas de alta-densidade, lipoprote?na de baixa-densidade, alanina amino transferase, aspartato amino transferase, gama glutamil transferase, albumina, globulina, prote?nas totais e prote?na C reativa) e estes n?o apresentaram varia??es significativas. Os ?rg?os, f?gado, est?mago, intestino, al?m do p?ncreas, n?o apresentaram altera??es. Para avaliar se o efeito do ITT2 sobre o consumo alimentar devido ? saciedade seria acompanhado pelo aumento de colecistocinina (CCK), foram dosados os seus n?veis plasm?ticos, e observado que os n?veis de CCK nos animais que receberam ITT2 eram significativamente maiores (20 + 1,22) do que nos animais que receberam apenas case?na (10,14 + 2,9) ou ?gua (5,92 + 1,15). Dessa forma, os resultados obtidos, indicam que o ITT2 causou um efeito sacietog?nico, reduzindo o consumo alimentar, que por sua vez ocasionou uma redu??o no ganho de peso nos animais, por?m sem causar altera??es bioqu?micas ou morfohistol?gicas, efeito este acompanhado pela eleva??o nos n?veis plasm?ticos de CCK

Resumo: Objetivou-se avaliar o desempenho de cinco genótipos de soja-hortaliça, quanto às características agronômicas, funcionais e antinutricionais. O experimento foi conduzido em campo, no Setor de Olericultura e Plantas Aromático-Medicinais na UNESP-FCAV. O delineamento experimental adotado foi o de blocos ao acaso com cinco tratamentos (genótipos) e quatro repetições, sendo que cada parcela experimental foi constituída por quatro linhas de plantio com seis metros de comprimento e 0,60 m entrelinhas, considerando-se para avaliação 20 plantas por parcela, das duas linhas centrais. Para a formação das mudas, utilizou-se do sistema de semeadura em bandejas de poliestireno expandido, com capacidade para 128 células, contendo substrato Plantmax Hortaliças® HT. As mudas foram transplantadas aos 10 dias após a semeadura. Avaliaram-se os genótipos JLM003, JLM004, JLM010, JLM024 e JLM030 quanto às características: precocidade; altura de inserção da primeira vagem (cm); número de vagens por planta; número de sementes por vagem; massa fresca das vagens por planta (g); massa fresca de 100 sementes (g); produtividade total estimada de grãos imaturos (kg ha-1); teor de umidade; proteínas; lipídeos; cinzas; carboidratos; isoflavonas e inibidores de tripsina Kunitz (KSTI). Na avaliação das principais características agronômicas, funcionais e antinutricionais, nas condições deste experimento, pode-se concluir que o genótipo de soja-hortaliça JLM010 é o mais recomendado para a região de Jaboticabal-SP, por apresentar melhores características agronômicas para produção como hortaliça (136,04 g para massa fresca das vagens por planta, 92,52 g para massa fresca de 100 sementes e 11.121,22 kg ha-1para produtividade total estimada de grãos imaturos) e também se destacar quanto às propriedades funcionais. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the performance of five genotypes of vegetable soybean with respect to agronomic, functional and antinutritional characteristics. The experiments were conducted in the field, in the Sector of Vegetable Crops and Aromatic Medicinal Plants, in the UNESP-FCAV. The experimental design adopted was a randomized block design with five treatments (genotypes) and four repetitions. Each experimental parcel comprised four planting rows of six meters in length and 0.60 m between rows, and 20 plants per parcel, from the two center rows, were evaluated. Seedlings were started in Polystyrene trays with 128 cells containing the substrate Plantmax Hortaliças® HT. The seedlings were transplanted at 10 days after planting. The genotypes JLM003, JLM004, JLM010, JLM024 and JLM030 were evaluated with respect to the following characteristics: precocity, height to first pod (cm), number of pods per plant, number of seeds per pod, fresh weight of pods per plant (g), fresh weight of 100 seeds (g), estimated total productivity of immature seeds, moisture content, proteins, lipids, ash, carbohydrates, isoflavones and Kunitz trypsin inhibitor (KSTI). In the evaluated of principals characteristics agronomic, functional and antinutritional, in the conditions this study, conclude that: 1) the genotype JLM010 was found to be the most recommended for the region of Jaboticabal-SP, as it showed better agronomic characteristics for production as a vegetable (136,04 g for fresh weight of pods per plant, 92,52 g for fresh weight of 100 seeds and 11.121,22 kg ha-1 for estimated total productivity of immature seeds) and displayed better functional characteristics and also highlight on the functional properties. / Orientadora: Leila Trevizan Braz / Coorientadora: Mercedes Concórdia Carrão-Panizzi / Banca: Arthur Bernardes Cecílio Filho / Banca: Marcelo Álvares de Oliveira / Mestre

Os objetivos do presente trabalho foram: i) aprimorar o procedimento alternativo de mediação por íons metálicos da alcoólise da ligação peptidil-resina com vistas à obtenção de ésteres metílicos de peptídeos protegidos (Nα-acil-peptídeo protegido-OMe) em condição reacional branda e com alta eficiência; ii) investigar a aplicabilidade do procedimento para a preparação de Nα-acil-peptídeo protegido-SR e de Nα-acil-aminoácido-OR; iii) verificar se os Nα-acil-peptídeo-OMe obtidos atuariam como doadores de acila em reações de formação de ligação peptídica catalisadas por lipases. Para tanto, na busca da melhor condição de metanólise e comparação com os procedimentos usuais de alcoólise de ligação peptidil-resina, foram usados: o fragmento 22-24 da colecistocinina-33 humana (tripeptídeo modelo), Ca2+, Zn+2, Co+2 e Cu+2 (mediadores), as resinas oxima de Kaiser (KOR), p-hidroximetilfenil acetamidometil, ácido p-hidroximetilbenzóico e álcool p-benziloxibenzil (suportes poliméricos), misturas de MeOH com DCM, DMSO, NMP, THF ou DMF (solventes) e 25, 37, 50 ou 60°C. A condição ótima encontrada [KOR, Ca+2 (1 eq./eq. de peptídeo), 50% MeOH/DMF, 50°C] foi empregada com sucesso na preparação do Nα--acil-heptapeptídeo protegido-OMe, fragmento do peptídeo quimiotático M de Vespa mandarinia. Variações dessa condição foram usadas com sucesso nas preparações dos Nα-acil-tripeptídeo protegido-S(CH2)2COOEt e Nα-acil-Ala-OR (R: Me; Bzl), pois eles foram gerados com boas qualidades e rendimentos similares ou superiores aos obtidos via procedimentos usuais. Após desproteção de cadeias laterais, os Nα-acil-tripeptídeo-OMe e Nα-acil-heptapeptídeo-OMe foram usados em reações de acoplamento com Gly-NH2 em presença de preparações lipásicas comerciais. Estes ensaios inéditos também foram bem sucedidos, pois após adequação das condições reacionais, os Nα-acil-tetrapeptídeo-NH2 e Nα-acil-octapeptídeo-NH2 foram obtidos com boas qualidades e rendimentos de 65% (1 h) e 55% (24 h), respectivamente. / The present work aimed to: i) improve the alternative procedure based on mediation by metal ions of peptide-resin linkage alcoholysis to obtain fully protected peptide methyl esters (Nα-acyl-protected peptide-OMe) under mild reaction condition and with high efficiency; ii) investigate the usefulness of the alternative procedure for preparing Nα-acyl-protected peptide-SR and Nα-acyl-amino acid-OR; iii) verify whether the resulting Nα-acyl-peptide-OMe would act as acyl donors in peptide bond formation catalyzed by lipases. Thus, in the search for the best methanolysis condition and comparison with the usual procedures for that, we used: fragment 22-24 of human cholecystokinin-33 (model tripeptide), Ca+2, Zn+2, Co+2 and Cu+2 (mediators), Kaiser oxime resin (KOR), p-hydroxymethylphenylacetamido methyl resin, p-hydroxymethylbenzoic acid resin and p-benzyloxy benzyl alcohol resin (polymeric supports), mixtures of MeOH and DCM, DMSO, NMP, THF or DMF (solvents) and 25, 37, 50 or 60°C. The optimal condition found [KOR, Ca+2 (1 eq./eq. of peptide), 50% MeOH/DMF, 50°C] was used successfully for preparing Nα-acyl-protected heptapeptide-OMe, fragment 1-7 of the chemotactic peptide M produced by Vespa mandarinia. Variations of this condition were employed successfully for preparing Nα-acyl-protected tripeptide-SR and Nα-acyl-Ala-OR (R: Me, Bzl): indeed, these compounds were obtained in good quality and with similar or superior yields than those provided by usual procedures. After side chain deprotections, the Nα-acyl-tripeptide and Nα-acyl-heptapeptide methyl esters obtained were used in coupling reactions with Gly-NH2 in the presence of commercial lipase preparations. Those pioneer reactions were also successful, since after optimizing the conditions, Nalfa-acyl-tetrapeptide-NH2 and Nα-acyl-octapeptide-NH2 were obtained in good qualities with yields of 65% (1 h) and 55% (24 h), respectively.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:33:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A nanociência e a nanotecnologia vêm abrindo inúmeros desenvolvimentos de dispositivos e sistemas em escala nanométrica, com novas organizações moleculares, propriedades e funções distintas. Nesse contexto, as nanopartículas magnéticas poliméricas são compósitos formados por materiais magnéticos com tamanhos de partículas entre 1 e 100 nm combinados com polímeros funcionais. São materiais bem conhecidos e têm sido amplamente estudados devido às suas aplicações em diversas áreas tecnológicas. Nas áreas biológica e médica, as aplicações incluem separação e imobilização de enzimas e proteínas, melhoria nas técnicas de imagem de ressonância magnética para diagnóstico e sistemas de liberação controlada de fármacos. Neste trabalho, proteínas foram imobilizadas na superfície de um biopolímero combinado com partículas superparamagnéticas de magnetita para formar o compósito magnético. Utilizou-se o biopolímero quitosana, reticulada e funcionalizada com glutaraldeído, aplicável em ensaios biológicos. Obtiveram-se 3 tipos de compósitos magnéticos, os quais foram nomeados QM1Glu, QM2NaGlu e QM3Glu. Foram caracterizados por difratometria de raios X, microscopia eletrônica de varredura, magnetometria de amostra vibrante, calorimetria exploratória diferencial, termogravimetria e espectroscopia por infravermelho. Foram avaliados quanto à imobilização das proteínas albumina de soro bovino (SAB), colágeno e tripsina. A imobilização das proteínas no biopolímero ocorreu em 30 min de incubação. O compósito magnético de quitosana não funcionalizada (QM3) também foi avaliado. Para a tripsina verificou-se que QM3 apresentou maior potencial de imobilização do que QM3Glu. Após 30 dias, QM3-Trip e QM3Glu-Trip ainda apresentavam a tripsina ativada. Foram demonstradas a atividade e a cinética enzimática da QM3Glu-trip com o substrato BApNA. / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Orientadores: Maria Ligia Rodrigues Macedo, Goran Nesic / Dissertação (Mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T21:49:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_DesireeSoaresda_M.pdf: 1615013 bytes, checksum: e404c15f23a6cd6027750ac4c6e28c69 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: As sementes são ricas fontes de inibidores de proteinases, que prejudicam sua qualidade nutricional, reduzindo a digestibilidade das proteínas e sua absorção. Neste estudo, um inibidor de tripsina (ApTI) foi purificado a partir de sementes de Adenanthera pavonina e testado seu efeito no crescimento e desenvolvimento de dois lepidópteros. Larvas de Anagasta kuehniella alimentadas com ApTI 1% mostraram redução de 50% na sobrevivência e no peso médio. Larvas de Anticarsia gemmatalis alimentadas com dieta contendo ApTI 0,5% apresentaram diminuição de 31% na sobrevivência e de 22% no peso médio. O tempo de desenvolvimento larval e pupal de Anagasta kuehniella alimentadas com a dieta contendo ApTI 1% foi maior, enquanto a porcentagem de adultos sobreviventes diminuiu em relação ao grupo controle. A avaliação nutricional de ApTI sobre o desenvolvimento larval de A. kuehniella mostrou redução na eficiência de conversão do alimento ingerido (ECI) e alimento digerido (ECD), e aumento na digestibilidade aproximada (AD) e no custo metabólico (CM). Em relação as larvas de A. gemmatalis, não houve efeito na (ECI), porém foi observado redução na (ECD) e aumento na (AD) e no (CM). Para examinar o efeito in vivo de ApTI sobre os insetos, as atividades das proteinases intestinais das larvas que se alimentaram com dietas livres do inibidor e contendo o inibidor a 0,25 - 1% foram comparadas através de ensaios enzimáticos e eletroforese em gel de atividade enzimática. Larvas de quarto instar de A. kuehniella alimentadas com dieta contendo ApTI 1% apresentaram diminuição na atividade tríptica do intestino e manutenção dessa nas fezes. Larvas de A. gemmatalis alimentadas em dieta contendo ApTI 0,5% mostraram diminuição da atividade tríptica do intestino e das fezes. Estes resultados sugerem que ApTI possui efeitos anti-metabólicos quando ingeridos por A. kuehniella e A.gemmatalis. / Abstract: Seeds are a major source of proteinases inhibitors, which cause nutrition quality damage and reduce the absorption and digestibility of proteins. In this study, a trypsin inhibitor (ApTI) was purified from Adenanthera pavonina seeds and their effect on growth and development tested in two Lepidoptera. Anagasta kuehniella larvae were fed with ApTI 1% showing a significant decrease in survival and larval weight (50%). A. gemmatalis fed with 0.5% ApTI showed a survival of 31% and decrease in weight of 22%, when compared with the control group. Larval and pupal developmental time of Anagasta kuehniella larvae, fed on an ApTI diet at 1% was significantly longer, and the percentage of surviving adults decreased. The nutritional effect of ApTI on A. kuehniella larval development was to decrease the conversion of ingested food (ECI) and digested food (ECD) efficiency, and increase estimated digestibility (AD) and metabolic cost (CM). ApTI had no effect on A. gemmatalis conversion of ingested food efficiency. However, a decrease in the conversion of digested food efficiency (ECD) and increase in estimated digestibility (AD) and metabolic cost (CM) were observed. Enzymatic assays and electrophoreses were performed in order to evaluate the in vivo ApTI effect of larval intestinal proteinase activities between those that were not fed with the inhibitor and those fed with inhibitor (0.25 - 1%). A. kuehniella four instars larvae fed with 1% ApTI showed a reduction in intestinal tryptic activity and maintenance of feces tryptic activity. A. gemmatalis fed with 0.5% ApTI suffered a reduction in intestinal and feces tryptic activities. These results suggest that ApTI presents considerable anti-metabolic effects in A. kuehniella and A. gemmatalis. / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

This dissertation thesis composes of two parts; the first part focus on the characterization of trypsin, enzyme frequently used in proteomic research for the investigation and identification of protein sequences, and its peptide digestion kinetics. The second part is aimed to the enantioseparations of biologically active compounds. First part of this project focus on tryptic digestion of synthetic peptides and the development of HPLC method for the identification of synthetic peptides and their fragments. Using the in-solution digestion and HPLC method, relative kinetic constants were determined for problematic sequences. Amino acids responsible for the decrease in trypsin catalytic activity and their location towards the cleavage site were studied. Certain slight exopeptidase activity of trypsin was noted, especially at the end of peptide chain. Furthermore, three columns with immobilized trypsin used in HPLC were compared concerning their catalytic activity. The immobilization of enzymes on solid support is used to elevate the amount of enzyme present during digestion and to assure better repeatability and reproducibility of obtained results. Activity of a new trypsin column synthesized at the University of North Carolina at Chapel Hill was compared to two commercially available trypsin columns....

La fibrose kystique (FK) est caractérisée par une inflammation pulmonaire chronique. Cette dernière est définie entre autres par une augmentation importante de la production de mucus. Celui-ci s'accumule dans les bronches empêchant ainsi l'éventuel passage de l'air. De plus, le mucus forme une barrière protectrice pour les bactéries qui va causer l'inflammation des poumons. La protéase human airway trypsin-like (HAT) a été retrouvée dans les expectorations de patients atteints d'asthme et bronchite chronique, pathologies similaires à la FK. Elle semble jouer un rôle dans l'inflammation car elle augmente entre autres la production de MUC5AC, protéine composant majoritairement le mucus. Le but de cette étude était de synthétiser la HAT dans une conformation active dans un système eucaryote pour étudier ses propriétés biochimiques, enzymatiques ainsi que son potentiel pro-inflammatoire dans la lignée cellulaire pulmonaire Calu-3. L'ADNc codant pour la partie soluble de la HAT a été inséré dans le vecteur pMT-BiP V5-His. Cet ADN recombinant fut ensuite transfecté dans les cellules de Drosophile Schneider 2 (S2). La HAT recombinante a par la suite été purifiée et son activité protéolytique testée avec un substrat fluorogénique. Ses propriétés biochimiques et enzymatiques ont été étudiées ainsi que son effet sur la production d'IL-8 et sa détection dans les expectorations de patients. La HAT purifiée était «enzymatiquement» pure, donc l'effet protéolytique observé avec le substrat fluorogénique est dû à la protéase. Les analyses de ses propriétés biochimiques montrent que l'activité protéolytique de la HAT est inhibée par un pH acide (<6.5), certains inhibiteurs synthétiques (l'aprotinine, la leupeptine et le PEFABLOC) et endogène (i.e: alpha-2 anti-plasmine (a2-AP)) de protéases à sérine. D'un autre côté, les essais enzymatiques révèlent que la HAT a une préférence pour les substrats ayant une arginine en P4, P3 et Pl plutôt que ceux ayant un glutamate en P4, P2 et P1'. Finalement, l'étude sur l'implication physiologique de l'enzyme démontre que la protéase ne semble pas avoir d'effet ou au plus peu d'effet sur la production d' IL-8. [Symboles non conformes]