EHV-1 is a double-stranded DNA virus whereas EAV is a positive sense, single-stranded RNA virus. Therefore, genetically, they are very different from one another. However, both these viruses are endotheliotropic and thus, infect and replicates in equine endothelial cells resulting in vasculitis. Vasculitis is central to the pathogenesis of these two viruses. Thus, the main objective of this thesis was to investigate the inflammatory and innate immune responses of EECs that contribute towards the development of vasculitis following infection with EHV-1 and EAV in-vitro. Since proinflammatory cytokines and chemokines produced by endothelial cells play a significant role in the development of vasculitis, we investigated their gene expression as well as secretion. Results from this study showed that the proinflammatory response of EECs induced by EAV is relatively less when compared with the corresponding results from EHV-1 infected EECs. Furthermore, EAV elicits a lower type I interferon response in EECs when compared with EHV-1. Further investigations revealed an active role played by TLR 3 in inducing the proinflammatory response in EHV-1 infected EECs during the first 6 hours of infection but not in EAV infected EECs. Analyzing the whole transcriptome of EHV-1 and EAV infected EECs revealed a complex pattern of gene regulation and cellular pathways related to cellular immune, inflammatory and apoptotic responses. Finally, we investigated host genetic factors associated with EHV-1 induced myeloencephalopathy but found no evidence for a recessive allele influencing the development of EHM following EHV-1 infection for any genetic locus was identified. However, more complex host-pathogen interactions are possible.

The events that trigger an autoimmune disease remain largely unknown. To study these events animal models are necessary because symptoms of autoimmune diseases are preceded by a long asymptomatic period in humans. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the best characterized model for cell mediated autoimmunity and an animal model for the human disease multiple sclerosis. EAE is induced in rodents by immunization with myelin antigens (Ags) together with adjuvants. After immunization, T cells are primed in the periphery by Ag presenting cells and subsequently invade the central nervous system where they mediate parenchymal inflammation, resulting in demyelination and clinical symptoms of an ascending paralysis. It is now generally recognised that the main cell type mediating EAE is the T helper type 17 (Th17) cell. Tolerance to EAE can be attained by DNA vaccination, but how the immune response against the myelin Ags is abrogated after DNA vaccination is not known. By employing short interfering RNA technology, induction of the innate immune signalling molecule interferon (IFN) -β was found to be necessary for the protective effect of DNA vaccination in EAE. In addition, DNA vaccination inhibited subsequent autoimmune Th17 cell responses. The Toll-like receptors (TLRs) of the innate immune system have evolved to recognise conserved molecular structures on microbes and signalling through them almost exclusively converge on the molecule MyD88. Signalling via MyD88 was found to be required for induction of EAE since mice deficient in this molecule did not develop disease. Upstream signalling via TLR4 and TLR9 had tolerogenic properties. In studies of Ag presentation in EAE, two major subtypes of dendritic cells (DCs) were examined. Plasmacytoid DCs were found to have a promoting role in the induction of EAE, partly via type 1 IFNs. Myeloid DCs had a redundant role in the induction phase of EAE, neither disease severity nor encephalitogenic Th17 responses were affected by their absence during priming. These studies further demonstrate that the cells and molecules of the innate immune system exhibit a crucial role in controlling the adaptive immune system which mediates tissue damage in autoimmune diseases.

Vitiligo is an autoimmune skin disease in which the pigment producing cells of the epidermis, melanocytes, are targeted for destruction by CD8+ T cells specific for melanocyte/melanoma-shared antigens. Previous work has identified IFNg as the central cytokine driving disease pathogenesis in both human patients and in our mouse model of vitiligo. IFNg signaling induces production of the chemokines CXCL9 and CXCL10, which trigger autoreactive T cell migration into the epidermis where effector T cells can target and destroy melanocytes. However, both IFNg and type I IFN signaling through activation of STAT1 proteins can induce transcription of the chemokines CXCL9 and CXCL10. Therefore, it seems reasonable that type I IFN signaling may also contribute to disease pathogenesis. The role of type I IFN in vitiligo is still unclear. Genome wide association studies identified multiple genes within the type I IFN pathway including TICAM1 and IFIH1 as susceptibility loci in vitiligo. One additional study reported increased epidermal staining of CD123, a marker expressed by pDCs, and the type I IFN induced gene MX1 in vitiligo patient skin. However, this study did not show any functional data to support the role of type I IFN signaling in vitiligo pathogenesis. Since the role of type I IFN in vitiligo is ill-defined, we used two different mouse models of vitiligo to functionally determine the role of type I IFN in disease by inducing vitiligo in hosts which lack the type I IFN receptor (IFNaR). In the first model, we induced vitiligo by adoptive transfer of melanocyte-specific CD8 T cells, which are activated in vivo by infection with recombinant vaccinia virus (VACV) expressing their cognate antigen. Vitiligo induction in IFNaR-deficient mice led to the development of severe disease compared to wild type mice. Acceleration and severity of disease was characterized by increased early recruitment of melanocyte-specific CD8 T cells to the skin, increased production of effector cytokines TNFa and IFNg, and reduced PD-1 expression. Increased production of IFNg by CD8 T cells in the skin of IFNaR-deficient mice led to increased expression of the chemokines CXCL9 and CXCL10 driving disease progression. IFNaR-deficient mice also displayed significantly increased VACV titters compared to wild type hosts. This data reveals a role of type I IFN in the clearance of recombinant VACV. This data also suggests that persistent VACV infection and prolonged antigen exposure in IFNaR deficient hosts is likely driving enhanced activation of melanocyte specific CD8 T cells and the subsequent development of severe vitiligo. Since melanocytes and melanoma cells express shared antigens that can be recognized by CD8 T cells, and because the development of vitiligo after melanoma immunotherapy is a positive prognostic factor for patients, we asked whether VACV vaccine therapy in IFNaR deficient mice would enhance the anti-tumor response to melanoma. B16-F10 inoculated wild type and IFNaR-deficient mice received adoptive transfer of melanocyte-specific CD8 T cells in combination with vaccinia virus expressing their cognate antigen to activate the cells in vivo. Treatment of adoptive T cell transfer and infection with VACV in IFNaR-deficient mice revealed significantly reduced tumor burden compared to wild type mice. Improved tumor regression in IFNaR-deficient hosts was characterized by increased infiltrating cytotoxic T lymphocytes and reduced PD-1 expression. These results further demonstrate that in the absence of type I IFN, hosts mount a robust cytotoxic CD8 T cell response against melanocyte/melanoma antigens and this is likely a result of persistent VACV that leads to prolonged CD8 T cell priming. As a result, IFNaR deficient hosts kill tumor cells more efficiently. To determine whether type I IFN regulates disease pathogenesis in the absence of virus infection, we generated a model of vitiligo in which bone marrow derived dendritic cells (BMDCs) pulsed with the cognate antigen were used to prime melanocyte-specific T cells in place of the viral vector. Induction of vitiligo in IFNaR-deficient hosts using BMDCs revealed no significant differences in disease score compared to wild type hosts. This data clearly demonstrates that type I IFN, in contrast to IFNg, is not required during the effector stage of vitiligo pathogenesis in mice. However, since we intentionally activate transferred melanocyte-specific CD8 T cells with VACV or BMDCs expressing their cognate antigen, our mouse models may circumvent the role of type I IFNs in initiating activation of autoreactive cells and driving autoimmunity. Type I IFN is critical for providing innate immune signals that drive the priming of autoreactive T cells through maturation of DCs by inducing antigen presentation, co-stimulatory molecule expression, and migration to the lymph nodes to encounter naïve T cells. Our mouse models of vitiligo may not capture this process. We have addressed this question by using a TLR ligand to activate BMDCs before transfer into hosts. In fact, activation of BMDCs before transfer leads to significantly enhanced vitiligo in mice and this is partially a result of type I IFN signaling on host cells. Thus, we provide evidence that type I IFNs can enhance the activation of melanocyte-specific CD8 T cells and drive autoimmunity. Collectively, our results show that type I IFN signaling has disparate effects on autoreactive T cell priming in a context dependent manner. We reveal that although type I IFN is not required for the effector phase of vitiligo in mice, maturation of DCs and subsequent type I IFN production can enhance the priming of autoreactive T cells and enhance vitiligo severity. Our studies also reveal that type I IFN is required to clear recombinant attenuated VACV infection and vaccine administration in IFNaR deficient hosts led to a robust autoreactive and anti-tumor response. These insights describing the role of type I IFN in autoimmunity and tumor immunology could have important implications for T cell dependent tumor immunotherapy.

No description available.

Streptococcus pneumoniae ist die häufigste Ursache für ambulant erworbene Pneumonien weltweit. Daher müssen die Wirts-Pathogen-Interaktionen erforscht werden, um neue Therapiestrategien zu entwickeln. In dieser Studie habe ich 1. den Typ I Interferon (IFN)-stimulierenden Signalweg des angeborenen Immunsystems in Pneumokokken-infizierten Wirtszellen sowie 2. dessen Bedeutung in der Pneumokokkenpneumonie untersucht. Humane und murine Makrophagen, aber nicht alveolare Epithelzellen, produzierten Typ I IFNs nach Infektion mit S. pneumoniae. Dieses war abhängig vom Virulenzfaktor Pneumolysin und erforderte sowohl die Phagozytose der Bakterien als auch die Ansäuerung der Endosomen. Die Induktion der Typ I IFNs wird durch einen zytosolischen Signalweg vermittelt, welcher wahrscheinlich DNA erkennt und sowohl das Adapterprotein STING als auch den Transkriptionsfaktor IRF3 aktiviert. Typ I IFNs, welche von infizierten Makrophagen gebildet wurden, regulierten die Expression von IFN-stimulierten Genen (ISGs) und Chemokinen in Makrophagen und co-kultivierten alveolaren Epithelzellen in vitro und in Mauslungen in vivo. In einem murinen Pneumoniemodell hatten die Typ I IFNs jedoch einen negativen Effekt für den Wirt. Mäuse mit einem Defekt im Typ I IFN-Rezeptor oder mit einem Knockout im Typ I und Typ II IFN-Rezeptor hatten eine signifikant geringere Bakterienlast in der Lunge und eine verminderte Reduktion der Körpertemperatur und des Körpergewichtes als wild-typ Mäuse. Diese Effekte waren nicht durch Änderungen in der Zellrekrutierung oder durch Änderungen der Zytokin-/Chemokinexpression erklärbar. Zusammenfassend lässt sich feststellen, dass Typ I IFNs durch Pneumokokken induziert werden, aber dass sie trotz einiger positiver Effekte auf die Expression von ISGs einen negativen Gesamteffekt in einem murinen Pneumoniemodell aufweisen. Ein detailliertes Verständnis der Typ I IFN-Antwort während der Pneumokokkeninfektion kann die Entwicklung neuer Therapiestrategien unterstützen. / Streptococcus pneumoniae is the leading cause of community-acquired pneumonia world-wide. A detailed understanding of the host-pathogen interactions is required in order to foster the development of new therapeutic strategies. Here, I (I) characterized an innate immune recognition pathway that senses pneumococcal infection and triggers the production of type I interferons (IFNs), and (II) examined the role of type I IFNs in pneumococcal pneumonia in mice. Human and murine macrophages, but not alveolar epithelial cells, produced type I IFNs after infection with S. pneumoniae. This induction was dependent on the virulence factor pneumolysin, the phagocytosis of the bacteria, and the acidification of the endosome. Moreover, it appeared to be mediated by a cytosolic DNA-sensing pathway involving the adaptor molecule STING and the transcription factor IRF3. Type I IFNs produced by S. pneumoniae-infected macrophages positively regulated the expression of IFN-stimulated genes (ISGs) and chemokines in macrophages and co-cultured alveolar epithelial cells in vitro and in mouse lungs in vivo. However, in a murine model of pneumococcal pneumonia, type I IFN signaling was detrimental to the host defense. Mice deficient in the type I IFN signaling or double deficient in type I and type II IFN signaling had a significantly reduced bacterial load in the lung and a diminished reduction of body temperature and body weight compared to wild-type mice. The decreased susceptibility of the knockout mice was unlikely to be attributable to alterations in cell recruitment or cytokine/chemokine production. In conclusion, type I IFNs are induced during pneumococcal infection. However, despite their positive effects on the expression of some ISGs and chemokines, they negatively affect the outcome of pneumococcal pneumonia in an in vivo mouse model. Targeting the type I IFN system could potentially be an effective way in enhancing the immune response in patients with S. pneumoniae pneumonia.

L’infection par le VIH induit une activation immunitaire chronique qui est suspectée d’être un des moteurs de la pathogénèse du SIDA. L’identification des mécanismes de contrôle de cette activation immunitaire, ainsi qu’une meilleure compréhension du contrôle spontané de l’infection chez certains patients, sont des étapes essentielles vers la conception de thérapies innovantes. Nous avons utilisé le modèle d’infection du macaque cynomolgus (Macaca fascicularis) par le virus de l’immunodéficience simienne (SIV) pour étudier ces deux points fondamentaux de la physiopathologie de l’infection.Il est proposé que l’induction précoce de l’activation immunitaire chronique soit une conséquence de la surexpression des gènes induits par les interférons (ISG) en réponse aux interférons de type I (IFN-I). Ces IFN-I ( et ) sont notamment produits par les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) en réponse aux virus. Notre premier objectif a été d’étudier la dynamique de production des IFN-I et celle des pDC durant l’infection, en parallèle de celle de l’activation immunitaire chronique et de la virémie. Nos résultats montrent que les pDC sont activées dans les tissus et qu’elles sont responsables de la production d’IFN-I observée transitoirement au cours de la primo-infection. La dynamique des pDC (apoptose, activation, renouvellement) entraîne un épuisement de la capacité des pDC à produire de l’IFN-I, qui pourrait rendre compte à la fois de l’altération fonctionnelle des pDC et de l’arrêt de la production d’IFN-I. De manière surprenante, ce contrôle de la production d’IFN-I n’est pas suivi d’un contrôle de la surexpression des ISG, ce qui suggère l’existence d’autres mécanismes inducteurs des ISG et souligne l’origine multifactorielle de l’activation immunitaire chronique.Dans une seconde étude, nous avons analysé l’impact d’une déplétion in vivo des lymphocytes exprimant le CD8 chez des animaux contrôlant spontanément la réplication virale sur le long terme. Quatre des cinq animaux de l’étude n’expriment pas de complexe majeur d’histocompatibilité (CMH) précédemment associé au contrôle, et aucun d’entre eux ne présente de forte réponse LT CD8. La déplétion transitoire des cellules CD8 entraîne chez quatre des contrôleurs une augmentation transitoire de la virémie qui se stabilise ensuite à des valeurs similaires aux niveaux pré-déplétion lors du retour des cellules CD8+. Un de ces animaux contrôle sa virémie avant la restauration des LT CD8. Chez le cinquième animal, la déplétion des CD8 n’a pas été accompagnée d’une élévation de virémie. Globalement, le contrôle de la virémie après l’élévation transitoire n’a pas été accompagné d’une augmentation de leur fonction antivirale. En revanche, une expansion et une activation des LT CD4 consécutive à la déplétion des CD8 ont été remarquées et corrélées positivement avec la virémie plasmatique. Ces résultats suggèrent que les réponses LT CD8 ne sont pas les principales responsables du contrôle à long terme de la virémie chez ces animaux. Dans notre modèle, d’autres mécanismes, tels qu’un réservoir de virus limité ou un meilleur contrôle de l’activation immunitaire, semblent participer à ce phénotype de contrôle.En conclusion, ces résultats éclairent la contribution des pDC, des IFN-I et des LT CD8 dans la physiopathologie du VIH, et permettent de proposer un nouveau modèle d’étude des mécanismes immunologiques précoces mis en place chez les patients contrôleurs de la virémie à long terme. / HIV infection induces a chronic immune activation, which is suspected to be a driving force in the pathogenesis of AIDS. Identifying control mechanisms of this immune activation, and a better understanding of the spontaneous control observed in some patients, are essential steps towards the development of innovative therapies. We used the model of cynomolgus macaques (Macaca fascicularis) infected by the simian immunodeficiency virus (SIV) to study these two fundamental fields of HIV pathogenesis.It is proposed that early induction of chronic immune activation is a consequence of an interferon-induced genes (ISG) overexpression in response to type I interferons (IFN-I). These I IFN (α and β) are preferentially produced by plasmacytoid dendritic cells (pDC) in response to the virus. Our first objective was to study the dynamics of pDC and IFN-I production during infection, together with chronic immune activation and viremia analysis. Our results indicate that pDCs are activated in tissues and are responsible for the transient IFN-I production observed during primary infection. The dynamics of pDCs (apoptosis, activation, renewal) induces an impaired IFN-I production by pDC, which could account both the functional defect of pDCs and the arrest of IFN-I production. Surprisingly, control of IFN-I production is not followed by down-regulation of ISG, which suggests the existence of other mechanisms that induce ISG and emphasizes the multifactorial origin of chronic immune activation.In a second study, we analyzed the impact of a in vivo CD8 T cells depletion in animals which spontaneously control viral replication in the long term. Importantly, four of the five animals in the study do not express major histocompatibility complex (MHC) previously associated with control, and none of them display strong CD8 response. The transient depletion of CD8 cells results in four controllers in a transient increase in viremia, which then stabilizes at values similar to pre-depletion levels when CD8+ cells come back. One of these animals controls their viremia before the restoration of CD8. In the fifth animal, CD8 depletion was not followed by a rise in viremia. Overall, the control of viremia after the transient increase was not associated to an increase of the antiviral function of CD8 T cells. In contrast, CD4 T cells expansion and activation were noticed and positively correlated to plasma viremia. These results suggest that CD8 responses are not the main cause of long-term control of viremia in these animals. In our model, other mechanisms, such as smaller reservoir or better control of immune activation, seem to be involved in this controller phenotype.In conclusion, these results shed light on the contribution of pDCs, IFN-I and CD8 T cells in the pathogenesis of HIV, and allow us to propose a new model for studying early immunological mechanisms in HIV controllers.

Les monocytes classiques (cMo) sont des phagocytes mononucléés circulant dans le sang et capables de migrer vers les tissus enflammés pour s’y différencier en monocytes inflammatoires, cellules dendritiques dérivées de monocytes (MoDC), macrophages (MoM) ou cellules myéloïdes suppressives. Selon le contexte physiopathologique, les cellules dérivées de cMo peuvent être bénéfiques ou néfastes. Dans l’infection par le cytomégalovirus murin (MCMV) leur rôle est controversé. Les divergences apparentes dans la littérature pourraient s’expliquer par l’utilisation de souches distinctes de souris ou de virus, l’étude d’organes différents, et la confusion existante sur l’identité et la plasticité de différents sous-types de cellules dérivées de cMo. Par des analyses transcriptionnelles, morphologiques et fonctionnelles, mon travail de thèse montre que, dans la rate de souris infectées par MCMV, les cMo se différencient simultanément en monocytes inflammatoires, MoDC et MoM. Cette différenciation est abrogée lorsque les cMo sont incapables de répondre aux interférons de type I (IFN-I), massivement produits dans les infections virales, qui boostent l’immunité intrinsèque antivirale et promeuvent l’activation des cellules immunitaires innées et adaptatives. La déplétion des cMo compromet le contrôle de l’infection et les réponses des cellules Natural Killer et des lymphocytes T CD8+. Mon travail montre que, dans les souris infectées par MCMV, les cMo se différencient, de manière dépendante de l’IFN-I, en trois sous-types cellulaires distincts qui contribuent à la fois au contrôle de la réplication virale et à la promotion de réponses immunitaires innées et adaptatives protectrices. / Classical monocytes (cMo) are mononuclear phagocytes mainly localized in the blood at steady state. Upon inflammation cMo migrate into inflamed tissues where they can differentiate in inflammatory monocytes, monocyte-derived dendritic cells (MoDC), monocyte-derived macrophages (MoM) or myeloid derived suppressor cells (MDSC). Depending on the physiopathological context, cMo-derived cells can be beneficial or detrimental. There are major discrepancies between published reports on the role of cMo during MCMV infection. This may be due to the use of distinct strains of mice or of virus, to the study of different organs, or to the confusion existing in the field regarding the identity and the plasticity of the different types of cMo-derived cells. During my PhD, by combining gene expression profiling, morphological, phenotypical and functional studies, I have shown that splenic cMo in MCMV-infected mice encompass cells that had simultaneously differentiated in vivo into either inflammatory monocytes, MoDC or MoM. This cMo differentiation is abrogated in the absence of responsiveness to type I interferons (IFN-I), which are highly produced during viral infections and boosting cell-intrinsic anti-viral immunity as well as promoting the activation of innate and adaptive immune responses. cMo depletion compromises the control of MCMV replication and the antiviral responses of Natural Killer cells and CD8+ T lymphocytes. My PhD work demonstrates that, in MCMV-infected mice, cMo differentiate, via an IFN-I-dependent pathway, into three distinct cell subtypes that are involved both in the control of MCMV replication and in the induction of protective innate and adaptive immunity.

L'objectif de cette thèse a été d'étudier le mécanisme de la coopération entre les voies de signalisation du TCR et de l'interféron de type I qui est responsable de l'augmentation d'expression de la cytokine anti-inflammatoire IL-10 dans les lymphocytes T CD45RA+CD4+ humains. En utilisant une approche transcriptomique et d'interférence d'ARNm, j'ai observé que les voies IFN et TCR contrôlent différemment l'expression des STATs et que les BATFs sont induits par l'IFN et augmentés par la costimulation TCR/IFN. STAT3 a été identifié comme régulateur majeur de l'IL-10 et il est recruté à proximité d'un site de liaison pour BATF au locus IL-10. Sur la base d'essais de co-silencing des trois BATFs, nous avons proposé que les BATFs contrôlent l'amplitude de la réponse IFN en agissant comme facteurs de transcription " pionniers ". D'autres résultats obtenus par une étude transcriptomique d'environ 200 gènes, montrent des contributions uniques et combinées des voies TCR et de l'IFN dans le programme d'expression de gènes des lymphocytes CD45RA+CD4+ activés et indiquent que d'autres facteurs de transcription pourraient réguler l'IL-10. Cette étude est susceptible d'apporter une connaissance plus large de mécanismes impliqués dans la régulation croisée entre les voies TCR et IFN. / In CD4 T cells several transcription factors (TFs) regulate expression of the anti-inflammatory cytokine IL-10. I investigated how type I interferon (IFN) cytokines and T cell receptor (TCR) pathways cooperate toward early upregulation of IL-10 in human CD45RA+ CD4+ T cells. I interrogated the role of the STAT and BATF family by transciptomics and RNAi-mediated gene-silencing. IFN and TCR induced STAT2 and STAT3 expression, respectively, while the BATFs were induced early by IFN and further enhanced by TCR/IFN together. STAT3 was the major regulator of TCR- and TCR/IFN-mediated IL-10 while STAT2 contributed to the latter. STAT3 was recruited adjacent to a BATF-binding site at the IL-10 locus early in response to TCR/IFN. Co-silencing of the three BATFs led to a marked decrease in TCR- and TCR/IFN-mediated IL-10. We propose that the BATFs control the magnitude of the IFN response as pioneer factors. Additional results of transcriptional profiling of ± 200 genes, including TFs downstream of TCR and IFN and TFs involved in IL-10 regulation, revealed that TCR and IFN provide unique and combined contributions to the early CD45RA+CD4+ T cell gene activation program and identified other potential TFs involved in TCR/IFN-mediated IL-10 transcription. This study may provide broad mechanistic bases for crosstalk between the TCR- and IFN-pathways.

No description available.

L’activation des lymphocytes T nécessite un double signal. Le premier est antigénique et permet la reconnaissance d’un peptide spécifique présenté à la surface de cellules présentatrices d’antigène (APC). Le second signal est co-stimulateur et implique l’interaction avec des molécules activatrices exprimées par les APC et la présence de cytokines proinflammatoires. Les cellules dendritiques (DC) sont les uniques APC capables de délivrer ce double signal et d'activer les lymphocytes T naïfs, initiant ainsi les réponses immunes primaires. L’immaturité du système immunitaire du nouveau-né est responsable d’une plus grande susceptibilité aux maladies infectieuses ainsi qu’une faible réponse vaccinale. Des déficiences tant au niveau de l’immunité innée que de l’immunité acquise participe à une faible défense face aux agressions. A la naissance, les DC expriment des niveaux faibles de molécules co stimulatrices et présentent un défaut majeur de synthèse d'IL 12, cytokine cruciale pour l’établissement de réponses de type Th1. Le but de ce travail est d’évaluer la capacité des DC du nouveau-né humain à activer les lymphocytes T CD8+.<p>Dans une première approche, nous avons utilisé un modèle unique d’induction de réponse primaire in vitro qui permet d'étudier l'activation de lymphocytes T CD8+ spécifiques de l’antigène Melan-A, une protéine du soi exprimée par les mélanocytes. Ces lymphocytes existent à des fréquences particulièrement élevées chez les individus sains HLA-A2 et présentent les caractéristiques de lymphocytes T naïfs. Dans ce modèle, nous avons d’abord analysé les capacités immunostimulatrices de différentes populations de DC différenciées in vitro. Nous avons observé que les DC différenciées par la culture de monocytes purifiés en présence d'IL-3 et d’IFN-beta sont capables d’initier une réponse fonctionnelle des lymphocytes T CD8+, analogue à celle induite par les DC différenciées en présence de GM-CSF et d’IL-4. Ce même modèle nous a permis de démontrer que, en dépit de leur défaut de production d’IL 12, les DC du nouveau-né sont capables d'induire efficacement une réponse lymphocytaire T CD8+ cytotoxique.<p><p>Afin dévaluer la relevance in vivo de nos observations, nous avons étudié le phénotype et la fonction des DC circulantes chez des nouveau-nés infectés par le cytomégalovirus (CMV). L’infection par le CMV au cours de la vie fœtale représente une situation clinique où le nouveau-né développe une réponse mature et fonctionnelle des lymphocytes T CD8+, alors que celle des lymphocytes T CD4+ est déficiente. Ces expériences ont montré que le phénotype, la fonction et la réponse à différents stimuli des APC présentes en périphérie ne sont pas affectés par l’infection congénitale par le CMV. Ces résultats suggèrent que l’observation des DC circulantes des nouveau-nés infectés par le CMV ne permet pas d’analyser l’influence du virus sur la fonction des DC néonatales. Dans ce but, nous avons reproduit un modèle d’infection in vitro de DC par une souche primaire du CMV. L’utilisation de micropuces à ADN nous a permis de comparer l’expression de gènes différentiellement induits par l’infection des DC d’adultes et de nouveau-nés. Nous avons ainsi révélé une proportion importante de gènes différentiellement induits, parmi lesquels celui de l’IFN-beta. Nous avons confirmé ce défaut au niveau protéique et mis en évidence une production d’IL 12 déficiente en réponse à l’infection par CMV.<p>L’ensemble de nos résultats indique que malgré leur immaturité, les DC du nouveau-né sont capables, dans certaines circonstances, d’induire une réponse lymphocytaire T CD8+ cytotoxique. Cependant, le défaut de production de certaines cytokines co-stimulatrices pourrait être impliqué dans la faible réponse des lymphocytes T CD4+ à l’infection par CMV. Ces observations ont d’importantes implications pour la compréhension de l’induction de réponses cytotoxiques au cours d’infections virales et pour l’élaboration de stratégies vaccinales en début de vie.<p> / Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques / info:eu-repo/semantics/nonPublished