Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-04-29T16:31:02Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3735449 bytes, checksum: aa20d55ef3b80cac2cc56637e94639c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-29T16:31:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3735449 bytes, checksum: aa20d55ef3b80cac2cc56637e94639c9 (MD5) Previous issue date: 2013-10-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Brachypodium distachyon (L.) P. Beauv. (Poaceae: Poideae) tem se destacado como planta modelo para gramíneas de clima temperado e espécies usadas para a produção de biocombustíveis. A linhagem Bd21 de Brachypodium distachyon tem um genoma completamente seqüenciado e montado, além de protocolos de genômica e de transformação bem estabelecidos com base em calos embriogênicos. No entanto, as informações sobre a origem e as alterações celulares que ocorrem durante a diferenciação de embriões somáticos nos estágios iniciais não foi documentada para B. distachyon. Também não há relatos sobre o uso de abordagens moleculares para investigar o processo de embriogênese somática nesta espécie. Portanto, os objetivos deste trabalho foram: (1) caracterizar as alterações morfológicas, anatômicas e histoquímicas que ocorrem durante a indução de embriogênese somática a partir de embriões zigóticos imaturos (EZI) da B. distachyon linhagem de referência Bd21 usando microscopia de luz e de varredura em associação com testes histoquímicos e, (2), realizar a clonagem e caracterização de genes SERK (SOMATIC EMBRYOGENESIS RECEPTOR-LIKE KINASE) e analisar sua expressão na indução de embriogênese somática utilizando hibridização in situ para monitorar os processos morfogenéticos in vitro. Culturas embriogênicas de B. distachyon (BD21) foram estabelecidas usando EZI 15 dias após a antese, em meio Murashige e Skoog (1962) contendo ácido 2,4- diclorofenoxiacético. A regeneração in vitro de plântulas derivadas de embriões somáticos ocorreu pela embriogênese somática através da via indireta. Os embriões somáticos tiveram uma origem multicelular e originaram-se de calo embriogênico formado a partir de células da epiderme na região do nó escutelar que se estenderam para a periferia do EZI. A ordem de acumulação de reservas nos embriões somáticos foi semelhante a dos embriões zigóticos. Nas culturas embriogênicas, proteínas e lipídios foram utilizados nos primeiros 2 dias em meio de indução. O teor de amido aumentou nos primeiros 2 dias em meio de indução e diminuiu em seguida em número de grânulos que se tornaram maiores e apareceram principalmente nas células vacuoladas adjacentes às massas pró-embriogênicas. Pequenos grânulos de amido começaram a acumular nos pró-embrioides após 4 dias em meio de indução e tornaram- se maior e mais abundantes em células do escutelo aos 12 dias em meio de indução. A diferenciação do embrião somático seguiu a mesma sequência de desenvolvimento verificado em outros membros da família Poaceae, ou seja, a passagem pelos estádios globular, escutelar e coleoptilar. O gene SERK tem sido usado como um marcador para as células competentes na embriogênese somática de várias espécies. Neste estudo, utilizando iniciadores degenerados, uma sequência específica homóloga de um fragmento do gene SERK foi amplificada de B. distachyon Bd21. A análise da sequência do fragmento de SERK (766 bp) revelou altos níveis de similaridade com genes SERK relatados em outras espécies. A análise de hibridização in situ mostrou que o gene SERK estava presente nos tecidos embriogênicos de B. distachyon antes do desenvolvimento de embriões somáticos e continuou sendo expresso nos estágios globular e escutelar. Estes resultados sugerem que a expressão do gene SERK de B. distachyon pode estar associada com a indução da embriogênese somática. Este estudo faz a primeira descrição de mudanças morfoanatômicas e histoquímicas durante o processo de embriogênese somática em B. distachyon linhagem Bd21. Este é também o primeiro relato sobre a clonagem e expressão de um gene SERK para a espécie e sugere que este gene pode servir como um marcador molecular para monitorar a transição de células somáticas em células competentes e embriogênicas também em B. distachyon. / Brachypodium distachyon (L.) P. Beauv. (Poaceae: Poideae) has been proposed as a new model for temperate and biofuel grasses. Brachypodium distachyon inbred line Bd21 has a fully sequenced and assembled genome, a series of genomics resources, and well-established somatic embryogenesis-based transformation protocols. However, information about origin and cellular changes occurring during the early differentiation of somatic embryos has not been documented for B. distachyon. There are also no reports on the use of molecular approaches to investigate somatic embryogenesis in B. distachyon. Therefore, the objectives of this study were (1) to characterize the morphological, anatomical and histochemical changes occurring during the induction of somatic embryogenesis from immature zygotic embryos (IZE) of B. distachyon community standard line Bd21 using light and scanning electron microscopy in association with histochemical tests and, (2), to carry out the cloning and characterization of SOMATIC EMBRYOGENESIS RECEPTOR-LIKE KINASE (SERK) genes and analysis of its expression in somatic embryogenesis induction using in situ hybridization for monitoring the morphogenetic processes in vitro. Somatic embryogenic cultures of B. distachyon (Bd21) were established following culture of IZE, 15 days post anthesis, on Murashige and Skoog (1962) medium containing 2,4- dichlorophenoxyacetic acid. In vitro regeneration of plantlets derived from somatic embryos occurred by the indirect somatic embryogenesis pathway. Somatic embryos had a multicellular origin and originated from embryogenic callus formed from cells of the epidermis in the region of the scutellar node and extended to the periphery of IZE. The order in accumulation of storage reserves in somatic embryos was similar to that of zygotic embryos. In the embryogenic cultures, storage proteins and lipids were used up in the first 2 days after culture (DAC). The levels of starch increased in the first 2 DAC and then decreased in number of granules that became larger and appeared mainly in the vacuolated cells subtending the proembryonic masses. Small starch granules started accumulating in proembryoids after 4 DAC and became larger and abundant in scutellar cells 12 DAC. Somatic embryo differentiation in B. distachyon proceeded through globular, scutellar and coleoptilar stages, following the morphological pattern of development of that reported in other members of the Poaceae. The SERK gene has been used successfully as a marker for competent cells in somatic embryogenesis of several species. In this study, using degenerate primers, it was possible to amplify a specific homologous sequence of a SERK gene fragment from B. distachyon Bd21. Sequence analysis of the SERK fragment (766 bp) revealed high levels of similarity to other reported SERKs. In situ hybridization analysis showed that the SERK gene was present in embryogenic tissues of B. distachyon before somatic embryo development and continued expressing through globular and scutellar stages. These results suggest that the expression of the B. distachyon SERK gene was associated with induction of somatic embryogenesis. This study provides the first description of morphoanatomical and histochemical changes underlying the embryogenic process in B. distachyon reference line Bd21. It is also the first report on the cloning and expression of a SERK gene for the species, suggesting that it could serve as a molecular marker to monitor the transition of IZE cells into competent and embryogenic cells also in B. distachyon line Bd21.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:54:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 330549.pdf: 2250244 bytes, checksum: 52aafb6ef597f19f359fe112a89bcdc1 (MD5) Previous issue date: 2014 / Glifosato é um dos herbicidas mais usados no Brasil, sendo altamente solúvel em água e quando aplicado em ambiente terrestre e aéreo pode ocorrer a sua infiltração no solo e a percolação para os corpos d'água, atingindo diferentes organismos aquáticos não-alvos, como invertebrados e vertebrados. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do glifosato, na concentração de 65 µg/L, sobre a organização estrutural e ultraestrutural, bem como sobre os parâmetros bioquímicos de toxicidade nos ovários do peixe Danio rerio. Esta concentração foi estabelecida pelo CONAMA como a máxima permitida para os rios do Brasil. As células germinativas foram caracterizadas em quatro fases: ovogônia, ovócito pré-vitelogênico I, ovócito pré-vitelogênico II e ovócito vitelogênico, baseado em critérios morfológicos já estabelecidos na literatura. Verificou-se um aumento significativo no diâmetro dos ovócitos pré-vitelogênicos I e nos ovócitos vitelogênicos, assim como um aumento significativo no índice gonadossomático (IGS) em ovários de peixes expostos ao glifosato por um período de 15 dias (exposição subcrônica). Na análise estrutural das células germinativas não foram identificadas alterações morfológicas, porém na análise ultraestrutural, observou-se no citoplasma dos ovócitos formações membranosas concêntricas tipo myelin-like, associadas aos grânulos de vitelo periféricos, além de alterações nas cisterna dos corpos de Golgi. Houve também redução do número de mitocôndrias e cristas mitocondriais nas células foliculares. Constatou-se maior expressão de SF-1, em ovários expostos ao glifosato. Identificou-se também um aumento significativo no número de células imunomarcadas com o anticorpo anti-Bak, porém um número significativamente menor de células imunomarcadas com o anticorpo anti-Bcl2. Na exposição dos peixes ao glifosato por um período de 96 h (exposição aguda), identificou-se redução nos níveis de tióis não proteicos (NPSH) e um aumento significativo nos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), caracterizando estresse oxidativo. Na exposição por um período de 360 h (15 dias), não houve a caracterização de estresse oxidativo. Mesmo na concentração de glifosato regulamentada para os rios do Brasil, efeitos subletais foram identificados nos ovários, sendo reconhecidos usando ferramentas bioquímicas e ultraestruturais. Desta forma, estas análises devem ser realizadas em testes toxicológicos na avaliação de parâmetros reprodutivos. Os efeitos adversos do glifosato sobre os ovócitos e as células foliculares demonstradas aqui representam um importante risco para a reprodução de peixes.<br> / Abstract: Glyphosate is one of the most commonly used herbicides in Brazil, being highly soluble in water and when applied in aerial and terrestrial environment can occur its infiltration into the soil and the percolation to the bodies of water, reaching different non-target aquatic organisms, such as invertebrates and vertebrates. The main goal of this study was to evaluate the effects of glyphosate, at a concentration of 65 µg/L, on structural and ultra-structural organization, as well as on the biochemical parameters of toxicity on the ovaries of the fish Danio rerio. This concentration was established by CONAMA as the maximum allowable for the Brazilian rivers. The germ cells were characterized in four stages: oogonia, previtellogenic I oocyte, previtellogenic II oocyte and vitellogenic oocyte, based on morphological criteria previously established on the literature. A significant increase on the diameter of the previtellogenic I and vitellogenic oocytes was verified, as well as a significant increase in the gonadosomatic index (GSI) in the ovaries of the fish exposed to the glyphosate for a 15 days period (sub-chronic exposure). In the structural analysis of the germ cells, morphologic changes were not identified. However, in ultrastructural analysis, concentric membranous formation of myelin-like kind were observed on the cytoplasm of the oocytes, associated to the peripheral yolk granules, and also morphological change Golgi cisterns. In follicular cells reduction on the number of mitochondria and mitochondrial cristae observed. In this analysis, it was also observed with. It was observed greater SF-1 expression in ovaries exposed to glyphosate. It was also identified a significant increase in the number of immunostained cells with the anti-Bak antibody, but a significantly lower number of immunostained cells with antibody anti-Bcl2. On exposure of fish to glyphosate for 96 hours (acute exposure), it was identified a reduction in levels of non-protein sulfhydryl (NPSH) and a significant increase in levels of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), featuring oxidative stress. On exposure of a period of 360 hours (15 days), there was no characterization of oxidative stress. Even with the glyphosate concentration regulated to Brazil's rivers, sublethal effects were identified on the ovaries, being recognized using biochemistry and ultrastructural tools. In this way, these analyses should be carried out in toxicological evaluation of reproductive parameters. The adverse effects of glyphosate on the oocytes and follicular cells shown here represent a major risk for the reproduction of fish.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-09-15T04:08:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334387.pdf: 2427839 bytes, checksum: d0ccfb04524cf81de776204eccbf0b9c (MD5) Previous issue date: 2015 / Os metais pesados, como cádmio, cobre e chumbo estão entre os poluentes mais comuns encontrados nos efluentes industriais e urbanos. Altas concentrações destes metais podem causar efeitos tóxicos graves, especialmente para os organismos que vivem nos ecossistemas aquáticos. Estes metais são encontrados com maior frequência no meio aquático e são considerados contaminantes ambientais que podem afetar o desenvolvimento, o crescimento, a fotossíntese e a respiração, organização celular e a morfologia de algas. As algas G. floridanum, H. musciformis e P. flagellifera possuem importância econômica por produzirem ágar, carragenana e compostos secundários halogenados, respectivamente. O presente estudo avaliou os efeitos fisiológicos, estruturais e ultraestruturais de Cd, Cu e Pb em G. floridanum, Cu e Pb em H. musciformis e Pb sob duas irradiâncias em P. flagellifera. Os experimentos com G. floridanum e H. musciformis foram realizados com PAR de 80 µmol fótons m-2.s-1 durante sete dias. Para G. floridanum foram utilizadas as concentrações de 50 e 100 ?M de Cd, Cu e Pb. Para H. musciformis e 0,05 e 0,1 mg.Kg-1 de Cu e 3,5 e 7 mg.Kg-1 de Pb. Para os experimentos com P. flagellifera foram realizados tratamentos e 0,5; 2,5 e 12,5 mg.Kg-1 de Pb sob as PAR de 50 e 100 µmol fótons m-2.s-1. As amostras de G. floridanum expostas ao Cd, Cu e Pb mostraram despigmentação do talo, alteração do cloroplasto, degeneração dos tilacóides, e diminuição em pigmentos fotossintéticos, tais como clorofila a e ficobiliproteínas, em amostras tratadas com Cd e Cu. Além disso, a espessura da parede da célula e a quantidade de plastoglóbulos aumentou. A microanálise de raios X (EDS) detectou Cd, Cu e Pb absorvidos pelas paredes celulares. Já nas amostras de H. musciformis, observou-se várias alterações intracelulares decorrentes da exposição ao chumbo e cobre, incluindo diminuição da ficobiliproteínas, bem como danos aos tilacóides. Além disso, a quantidade de carotenóides, flavonóides e compostos fenólicos foram diminuídos, como um reflexo aparente da mudança de rota metabólica para a produção de antioxidantes contra espécies reativas de oxigênio. A exposição ao cobre e chumbo também causou um aumento do número de grãos de amido das florídeas. Observou-se ainda, uma diminuição das taxas de crescimento de H. musciformis. Quanto ao experimento com P. flagellifera a PAR de 100 µmol fótons m-2.s-1 promoveu uma diminuição na quantidade de ficobiliproteínas, aumento na quantidade de clorofila a e carotenóides, promoveu leve aumento da viabilidade celular quando comparado com a irradiância de 50 µmol fótons m-2.s-1. Com maior intensidade de PAR, os tratamentos com Pb tiveram respostas mais intensas, como maior diminuição de taxa de crescimento. Os tratamentos com metais indicaram que tanto o Cd como Pb afetam negativamente o desempenho metabólico e a ultraestrutura celular de G. floridanum e porém o mais tóxico foi Cu. Para H. musciformis, no entanto, os resultados indicaram diferente susceptibilidade a diferentes concentrações de cobre e chumbo, sendo o Cu também o mais tóxico para esta espécie. Quanto ao efeito de Pb em P. flagellifera, os resultados se mostraram mais intensos no tratamento com maior concentração de Pb tratado sob PAR de 100 µmol fótons m-2.s-1.<br> / Abstract : Heavy metals such as cadmium, copper and lead are among the most common pollutants found in both industrial and urban effluents. High concentrations of these metals cause serious toxic effects, especially for organisms living in the aquatic ecosystem. These metals are most often found as environmental contaminants, and they have been shown to cause to affect the development, growth, photosynthesis and respiration, cellular organization and morphological algae. Algae G. floridanum, H. musciformis and P. flagellifera have economic importance for producing agar, carrageenan and halogenated compounds side, respectively. This study evaluated physiological and ultrastructural effects of Cd, Cu and Pb in G. floridanum, Cu and Pb in H. musciformis and Pb in two irradiances in P. flagellifera. The experiments with G. floridanum and H. musciformis were performed with PAR 80 ?mol photons m-2.s-1 for seven days. For G. floridanum were used concentrations of 50 and 100 ?M of Cd, Cu and Pb. For H. musciformis and 0.05 and 0.1 mg.Kg-1 Cu and 3.5 to 7 mg.Kg-1 Pb. For the experiments with P. flagellifera treatments were performed and 0.5, 2.5 and 12.5 mg.Kg-1 of Pb under the PAR 50 and 100 ?mol photons m-2.s-1. G. floridanum samples exposed to Cd, Cu and Pb shown depigmentation of the stem, change the chloroplast thylakoid degeneration, and decrease in photosynthetic pigments such as chlorophyll and phycobiliproteins, in samples treated with Cd and Cu. Furthermore, the thickness of the cell wall and the amount of plastoglobuli increased. The X-ray microanalysis (EDS) found Cd, Cu and Pb absorbed by the cell walls. Already in the samples of H. musciformis, several intracellular changes was observed from exposure to lead and copper, including decreased phycobiliproteins as well as damage to the thylakoids. Furthermore, the amount of carotenoids, flavonoids and phenolic compounds were decreased as a reflection of apparent change in the metabolic pathway for the production of antioxidants against reactive oxygen species. The copper and lead exposure also caused an increase in the number of florideans starch grains. There was also a decrease in the growth rates of H. musciformis. As to experiment with P. flagellifera the PAR 100 ?mol photons m-2.s-1 promoted a reduction in the amount of phycobiliproteins, increasing the amount of chlorophyll carotenoids, promoted a slight increase in cell viability compared to irradiance 50 ?mol photons m-2.s-1. With higher intensity of PAR in Pb treatments had stronger responses as greater reduction in growth rate. Metal treatments indicated that both Cd and Pb adversely affect the metabolic performance and cell ultrastructure of G. floridanum and yet most toxic was Cu. H. musciformis, however, the results showed different susceptibility to different concentrations of copper and lead, and Cu also more toxic for this this species. As for Pb effect in P. flagellifera, the results were more intense in the treatment with 12.5 mg.Kg-1 Pb treated under PAR 100 ?mol photons m-2.s-1.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia de Fungos, Algas e Plantas, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:07:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334511.pdf: 2300650 bytes, checksum: 6747c7df4c3183ffa477f50adaa3eda4 (MD5) Previous issue date: 2015 / Passiflora setacea e P. tenuifila são espécies silvestres de maracujás endêmicas do Brasil, com importantes propriedades medicinais. A P. setacea apresenta também potencial para o mercado consumidor devido à qualidade de seus frutos e a P. tenuifila tem sido indicada para o melhoramento genético. A produção de metabólitos secundários via cultura de tecidos in vitro tem sido investigada como uma alternativa à utilização de plantas produzidas no campo, pois oferece ferramentas para promover a otimização da produção. Assim, os objetivos deste estudo foram: analisar a histologia de calos de P. setacea induzidos em 2,4-D; determinar efeitos de diferentes concentrações de ANA e fontes de Carbono, quanto à morfo-histologia, ultraestrutura e teores de metabólitos de calos de P.tenuifila e; caracterizar, com base na ultraestrutura, como a Matriz Extracelular (ME) determina a desintegração das células dos calos friáveis de espécies de Passilfora. Para o estudo sobre indução e histologia, amostras de calos de P. setacea e P. tenuifila, obtidos a partir de diferentes tipos de explantes e meios de cultivo in vitro, foram fixadas em glutaraldeído 2,5% com tampão fosfato de sódio 0,1M, pH 7,2 e desidratadas. Para MO, amostras foram infiltradas em hidroxietilmetacrilato, seccionadas em micrótomo, coradas com azul de toluidina ou submetidas à reação com vermelho de rutênio, para identificar substâncias pécticas. Para análise em MEV, amostras foram secas em ponto crítico de CO2 e, para análise em MET, amostras de calos de P.tenuifila foram pós-fixadas em tetróxido de ósmio, infiltradas em resina Spurr, seccionadas em ultramicrótomo, contrastadas com Acetato de Uranila e Citrato de Chumbo. Calos de P. tenuifila com 45 dias foram coletados para determinar: percentagem de explantes que induziram calos, teor de água, acúmulo de biomassa, análise de metabólitos, atividade antioxidante por DPPH e a dosagem de clorofila. A percentagem mais elevada de explantes que formaram calos de P. setacea foi observada em 2,5 e 5,0 µM de 2,4-D. Calos obtidos a partir de segmentos de hipocótilo em 5,0 µM de 2,4-D e de segmento nodal foliar em 2,5 µM de 2,4-D mostraram características histológicas indicando grande potencial para morfogênese e produção de metabólitos secundários. Em estudo com calos de P. tenufila, todas as fontes de carbono e concentrações de ANA permitiram altas22percentagens de produção de calos, sem diferenças entre os tratamentos. Todos os calos apresentaram textura friável e características histológicas similares. Compostos fenólicos, flavonóides e carotenóides (luteína, zeaxantina e a-caroteno) foram detectados em calos de P. tenuifila. Atividade antioxidante não foi registrada. As características histológicas observadas sugerem que os calos de P.tenuifila, com 45 dias de cultivo, estavam em estádio inicial. No estudo sobre a ME verificamos sua constituição péctica. A superfície dos calos estava revestida com ME membranosa, com aspecto liso externamente e granular ou fibrilar internamente. O aspecto granular ou fibrilar decorre da desconexão entre células. A presença de golgi, vesículas na periferia da célula e evidências da liberação de substâncias e dissociação intercelular foram registradas ultraestruturalmente e sugerem que a consistência friável dos calos de Passiflora é resultante da desconexão das células periféricas.<br> / Abstract : Passiflora setacea and P. tenuifila are wild species of endemic passion fruit in Brazil, with important medicinal properties. P. setacea has also potential for the consumer market due to the quality of its fruit and P. tenuifila has been used for the genetic improvement. The production of secondary metabolites through in vitro tissue culture has been investigated as an alternative to the use of plants produced in the field, it provides tools for promoting the production optimization. The objectives of this study were to analyze the histology of P. setacea callus induced in 2,4-D; examine the effects of different concentrations of NAA and carbon sources in the morphological- histology, ultrastructure and level of metabolites in P.tenuifila callus and; to characterize, based on ultrastructure, how the Extracelular Matrix (EM) determines the disintegration of cells in friable callus of Passilfora species. For the study of induction and histology, samples of P. tenuifila and P. setacea callus, obtained from differents types of explants and in vitro culture media were fixed in 2.5% glutaraldehyde in sodium phosphate buffer 0, 1M, pH 7.2 and dried. For OM, the samples were infiltrated in methacrylate, sectioned with a microtome, stained with toluidine blue or subjected to reaction with ruthenium red to identify pectic substances. For SEM analysis, samples were dried in a critical point of CO2, and for TEM analysis, samples P.tenuifila callus were post-fixed in osmium tetroxide, infiltrated in Spurr resin, sectioned with ultramicrotome, contrasted with uranyl acetate and lead citrate. P.tenuifila calllus were collected with 45 days to determine: percentage of explants that to induced callus, water content, biomass accumulation, analysis of metabolites, antioxidant activity and measurement of chlorophyll. The highest percentage of explants that to induced P. setacea callus was observed at 2.5 and 5.0 uM of 2,4-D. Callus from hypocotyl segment in 5.0 µM 2,4-D and from leaf nodal segment in 2.5 µM 2,4-D showed histological characteristics indicate great potential for morphogenesis and secondary metabolite production. In the study with P. tenufila callus, all sources of carbon and NAA concentrations allowed high induction percentages, without differences between treatments. All callus showed friable texture and similar histological characteristics. Phenolic compounds, flavonoids and carotenoids (lutein, zeaxanthin and a-carotene) were detected in P. tenuifila callus.24Antioxidant activity wasn`t recorded. The histological characteristics suggest that P.tenuifila callus with 45 days were in inicial stage. In the study about the EM we found your pectic constitution. The surface of the callus was coated with EM membranous, with smooth appearance externally and granular or fibrillar internally. The granular or fibrillar aspect stems from the disconnect between cells. The presence of Golgi, vesicles at the periphery of the cell and evidence of release of substances and intercellular dissociation were recorded by ultrastructure study and suggest that the Passiflora friable callus is the result of disconnection of peripheral cells.

Resumo: Os carrapatos Rhipicephalus sanguineus são popularmente conhecidos como carrapatos do cão, por ser este, seu hospedeiro mais freqüente, podendo, no entanto, também ser encontrados em outros mamíferos, inclusive no homem. O controle químico de carrapatos tem sido amplamente utilizado, porém com altos custos e apresentando pontos negativos como a incidência de indivíduos resistentes, além dos impactos ambientais. Devido a isso, muitos estudos têm buscado novas formas de aumentar a eficiência do seu controle e ao mesmo tempo de reduzir a contaminação ambiental. Formas de controle químico natural, como a utilização de ésteres sintetizados a partir do ácido ricinoléico do óleo de mamona (Ricinus communis) têm merecido especial atenção, uma vez que os resultados da sua eficácia têm sido comprovados. Além disso, este método pode reduzir os custos do controle, uma vez que seus compostos podem ser fornecidos para os hospedeiros via alimentação não havendo necessidade de manejo. A forma de ação exata deste método no combate dos carrapatos ainda não está totalmente esclarecida e sendo assim, o presente estudo visou identificar nas células germinativas dos ovários de fêmeas de carrapatos R. sanguineus a forma de ação dos ésteres sintetizados a partir do ácido ricinoléico, por meio da aplicação de técnicas histológicas e de microscopia eletrônica de transmissão. Para tanto, coelhos virgens de infestação foram divididos em dois grupos: grupos controle (GC1 e GC2) e grupos tratamento (GT1 e GT2), que foram alimentados respectivamente com ração comum + sal (NaCl) sem adição de ésteres e com ração comum + sal enriquecido com ésteres do óleo de mamona. Cada coelho foi infestado com 30 casais de carrapatos R. sanguineus. Dos hospedeiros de ambos os grupos foram coletadas 15 fêmeas com 4 dias de alimentação... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The tick Rhipicephalus sanguineus are popularly known as the brown dog ticks, because those are the most frequently host of this ectoparasite, but may also be found in other mammals, including humans. The chemical control of ticks has been widely used, however with high costs and showing negative points such as the incidence of resistant individuals, as well as environmental impacts. However, many studies have sought new ways to increase the efficiency of its control and at the same time reduce the environmental contamination. Natural chemical control, such as the use of synthesized esters of ricinoleic acid from castor oil (Ricinus communis) have deserved special attention, since the results of its effectiveness has been proven. In addition, this method can reduce the costs of control, since its compounds can be supplied for the hosts via feed. The exact form of action of this method in the combat of ticks is not yet fully clarified and therefore, this study aimed to identify in the germ cells of the ovaries of R. sanguineus female ticks the action form of esters of ricinoleic acid onwards, through the application of histological techniques and transmission electron microscopy. To this end, rabbits never infested before were divided into two groups: control groups (GC1 and GC2) and treatment groups (GT1 and GT2), that were fed respectively with common salt (NaCl) ration without addition of esters and with common ration salt enriched with esters of castor oil. Each rabbit was infested with 30 R. sanguineus ticks couples. The hosts of both groups were collected 15 females with 4 days of feeding (semi-ingurgitadas) and 15 females with 6 to 7 days of feeding (fully-engorged) of which the ovaries were removed for analysis of cellular changes resulting from the action of esters in these organs. The results obtained from the histochemical... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria Izabel Camargo Mathias / Coorientador: Pablo Henrique Nunes / Banca: Solange Aparecida Rossini de Oliveira / Banca: Gilberto Orivaldo Chierice / Mestre

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Ana Paula Coelho Ribeiro / Banca: Laura Satiko Okada Nakaghi / Banca: Idércio Luíz Sinhorini / Resumo: Este estudo foi desenvolvido com o intuito de avaliar comparativamente o efeito do estádio do ciclo estral, bem como a adição de hormônios aos meios de cultivo in vitro sobre a morfologia do complexo cumulus-oócito canino. Os oócitos foram coletados de 30 cadelas hígidas submetidas à ovariosalpingo-histerectomia, divididas em dois grupos de acordo com a condição reprodutiva (fase folicular e anestro). A avaliação foi feita por microscopia eletrônica de varredura e transmissão, antes e após o período de cultivo in vitro por 72h em dois diferentes meios: meio controle - A (TCM199) e meio B: TCM199 adicionado de 10UI/mL de LH, 2μg/mL de progesterona (P4) e 2μg/mL de Estradiol(E2). Os resultados revelaram que o diâmetro oocitário não é influenciado pela fase reprodutiva, assim como a comunicação intercelular, e os aspectos morfológicos relacionados à forma e arranjo das células do cumulus, in vivo. A fase do ciclo estral exerceu influência sobre a morfologia do complexo cumulus-oócito, de tal forma que oócitos pertencentes ao grupo folicular apresentaram-se com maior grau de maturidade nuclear e citoplasmática do que oócitos do grupo do anestro. A suplementação hormonal afetou positivamente a maturação nuclear, mas não exerceu efeito sobre a maturação citoplasmática. Com relação à ultra-estrutura a presença de hormônios nos meios de cultivo foi benéficas tanto para a comunicação entre as células do cumulus como para a manutenção da integridade oocitária / Abstract: This study was developed in order to comparatively evaluate the effects of stages of the estrous cycle, as well as the addition of hormones to culture media in vitro on the morphology of cumulus-oocyte complex canine. The oocytes were collected from 30 healthy bitches ovariosalpingo underwent hysterectomy were divided into two groups according to reproductive condition (follicular phase and anestrus). The evaluation was performed by scanning electron microscopy and transmission, before and after cultivation in vitro for 72h in two different media: control medium - A (TCM199) and medium B: TCM199 added 10IU/mL LH, 2μg / mL progesterone (P4) and 2μg/mL Estradiol (E2). The results revealed that the oocyte diameter is not influenced by reproductive stage, as well as intercellular communication, and morphological aspects related to the shape and arrangement of cumulus cells, in vivo. The estrous cycle phase influenced the morphology of cumulus-oocyte complex, such that follicular oocytes in the group presented with greater maturity than nuclear and cytoplasmic oocyte group of anestrus. The hormonal supplementation positively affected nuclear maturation, but had no effect on cytoplasmic maturation. Regarding the ultrastructural presence of hormones in culture media was beneficial both for communication between the cumulus cells as well as preserving the integrity of oocyte / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-24Bitstream added on 2014-06-13T19:08:40Z : No. of bitstreams: 1 sampieri_br_me_rcla.pdf: 5351700 bytes, checksum: 8e797979ee2f44cd01fe40ebaeaf2313 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os carrapatos Rhipicephalus sanguineus são popularmente conhecidos como carrapatos do cão, por ser este, seu hospedeiro mais freqüente, podendo, no entanto, também ser encontrados em outros mamíferos, inclusive no homem. O controle químico de carrapatos tem sido amplamente utilizado, porém com altos custos e apresentando pontos negativos como a incidência de indivíduos resistentes, além dos impactos ambientais. Devido a isso, muitos estudos têm buscado novas formas de aumentar a eficiência do seu controle e ao mesmo tempo de reduzir a contaminação ambiental. Formas de controle químico natural, como a utilização de ésteres sintetizados a partir do ácido ricinoléico do óleo de mamona (Ricinus communis) têm merecido especial atenção, uma vez que os resultados da sua eficácia têm sido comprovados. Além disso, este método pode reduzir os custos do controle, uma vez que seus compostos podem ser fornecidos para os hospedeiros via alimentação não havendo necessidade de manejo. A forma de ação exata deste método no combate dos carrapatos ainda não está totalmente esclarecida e sendo assim, o presente estudo visou identificar nas células germinativas dos ovários de fêmeas de carrapatos R. sanguineus a forma de ação dos ésteres sintetizados a partir do ácido ricinoléico, por meio da aplicação de técnicas histológicas e de microscopia eletrônica de transmissão. Para tanto, coelhos virgens de infestação foram divididos em dois grupos: grupos controle (GC1 e GC2) e grupos tratamento (GT1 e GT2), que foram alimentados respectivamente com ração comum + sal (NaCl) sem adição de ésteres e com ração comum + sal enriquecido com ésteres do óleo de mamona. Cada coelho foi infestado com 30 casais de carrapatos R. sanguineus. Dos hospedeiros de ambos os grupos foram coletadas 15 fêmeas com 4 dias de alimentação... / The tick Rhipicephalus sanguineus are popularly known as the brown dog ticks, because those are the most frequently host of this ectoparasite, but may also be found in other mammals, including humans. The chemical control of ticks has been widely used, however with high costs and showing negative points such as the incidence of resistant individuals, as well as environmental impacts. However, many studies have sought new ways to increase the efficiency of its control and at the same time reduce the environmental contamination. Natural chemical control, such as the use of synthesized esters of ricinoleic acid from castor oil (Ricinus communis) have deserved special attention, since the results of its effectiveness has been proven. In addition, this method can reduce the costs of control, since its compounds can be supplied for the hosts via feed. The exact form of action of this method in the combat of ticks is not yet fully clarified and therefore, this study aimed to identify in the germ cells of the ovaries of R. sanguineus female ticks the action form of esters of ricinoleic acid onwards, through the application of histological techniques and transmission electron microscopy. To this end, rabbits never infested before were divided into two groups: control groups (GC1 and GC2) and treatment groups (GT1 and GT2), that were fed respectively with common salt (NaCl) ration without addition of esters and with common ration salt enriched with esters of castor oil. Each rabbit was infested with 30 R. sanguineus ticks couples. The hosts of both groups were collected 15 females with 4 days of feeding (semi-ingurgitadas) and 15 females with 6 to 7 days of feeding (fully-engorged) of which the ovaries were removed for analysis of cellular changes resulting from the action of esters in these organs. The results obtained from the histochemical... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Vera Lucia Scatena / Banca: Aline Oriani / Banca: Marccus Vinicius da Silva Alves / Banca: Simone de Pádua Teixeira / Banca: Alessandra Ike Coan / Resumo: Foram realizados estudos anatômicos e ultraestruturais de espécies com anatomia Kranz e não Kranz, de Cyperoideae (Cyperaceae) buscando ampliar o conhecimento anatômico do grupo, uniformizar a terminologia empregada para as bainhas dos feixes vasculares, levantar homologias úteis para a taxonomia e filogenia e hipóteses sobre a origem da anatomia Kranz na família. Para tanto foram utilizadas técnicas anatômicas usuais para estudos estruturais e ultraestruturais em espécies de Cyperaceae. Através do desenvolvimento de espécies Kranz e não Kranz verifica-se a continuidade dos tecidos (endoderme e periciclo) em todos os órgãos vegetativos e a uniformização dos termos empregados para as bainhas dos feixes vasculares de folhas e escapos. Estudos ontogenéticos de espécies de Cyperaceae confirmam a ocorrência de epiderme multiestratificada nas folhas, ao invés de hipoderme, e caracterizam os quatro tipos de anatomia Kranz na família: clorociperoide, eleocaroide, fimbristiloide, rincosporoide. A análise ultraestrutural da bainha dos feixes vasculares mostra a ocorrência de padrões na estrutura dos cloroplastos para os tipos eleocaroide e rincosporoide e também para Cyperus e Pycreus no tipo clorociperoide. Foi verificada variação na ocorrência e no tipo de anatomia Kranz em Eleocharis minima, espécie aquática (anfíbia), nas diferentes regiões do escapo emerso e submerso do mesmo indivíduo, destacando a plasticidade desse caráter nas espécies aquáticas e sua uniformidade nas espécies terrestres. Com dados desses estudos, juntamente com os demais dados disponíveis na literatura, são apresentadas hipóteses sobre a origem da anatomia Kranz em Cyperaceae / Abstract: Anatomical and ultrastructural studies in Kranz and non-Kranz species of Cyperoideae (Cyperaceae) were performed searching to amply the anatomical knowledge of the group; standardize the terminology applied to the vascular bundle sheaths, to bring up homologies useful to taxonomy and phylogeny and hypotheses about the origin of the Kranz anatomy in the family. Anatomical techniques were performed to structural and ultrastructural studies of Cyperaceae species. Through the development of the Kranz and non-Kranz species it was verified the tissues continuity (endodermis and pericycle) in all vegetative organs and the standardization of the terms employed to the vascular bundle sheaths of leaves and scapes. Ontogenetical studies of the Cyperaceae species confirmed the occurrence of multiple epidermis in leaves, instead of hypoderm, and characterized the four Kranz anatomical types: chlorocyperoid, eleocharoid, fimbristyloid, rhynchosporoid. The ultrastructural analyses of the vascular bundle sheaths showed the occurrence of pattern in the chloroplast's structure to the eleocharoid and rhynchosporoid types and also to Cyperus and Pycreus species in the chlorocyperoid type. Variations in the occurrence and in the type of Kranz anatomy was verified in Eleocharis minima, aquatic species (amphibious), in different regions of emerged and submerged scapes of the same individual, detaching the plasticity of this character in aquatic species and its uniformity in terrestrial species. With data obtained in these studies, along with other available data in the literature, hypotheses about Kranz anatomy origin in the family were presented / Doutor

Orientador: Flávio Henrique Caetano / Banca: Mary Anne Heidi Dolder / Banca: Vera Nisaka Solferini / Banca: Fernando José Zara / Banca: Daniela de Oliveira Pinheiro / Resumo: Foram realizados estudos comparados do proventrículo, ventrículo, íleo e túbulos de Malpighi de três espécies pertencentes ao gênero Cephalotes: C. atratus, C. pusillus e C. clypeatus, objetivando buscar relações entre elas, assim como, diferenças histoquímicas e ultra-estruturais tanto da parede como do conteúdo destas porções do trato digestivo, que pudessem ser utilizadas para a melhor compreensão da função intestinal, bem como esclarecer quais e como os recursos alimentares são aproveitados em cada parte do trato digestivo. As características ultra-estruturais do ventrículo de Cephalotes atratus, C. clypeatus e C. pusillus, mostram que o epitélio do ventrículo repousa sobre uma lâmina basal contínua e é formado basicamente por três tipos celulares, sendo estas as células digestivas, as células regenerativas e as goblet cells. Nestas formigas, o retículo endoplasmático rugoso além de atuar na produção de enzimas digestivas também está envolvido na estocagem de íons em vacúolos especializados presentes no ventrículo. Estas concreções são os esferocristais e podem estar contribuindo com a estabilização do pH e permanência das bactérias simbiontes presentes por entre as microvilosidades. Secções realizadas ao longo do íleo revelaram diferenças entre três principais regiões: proximal, mediana e distal. As especializações estruturais presentes no íleo destas três espécies de formigas resultam em implicações especialmente relacionadas com as bactérias simbiontes aí hospedadas. Também foram realizados testes para verificar a diversidade da microbiota intestinal das porções em questão, usando a técnica DGGE. Assim sendo, o perfil molecular dos simbiontes do ventrículo e íleo de Cephalotes atratus, C. clypeatus e C. pusillus foi obtido analisando a região variável V3 do gene 16S do rDNA bacteriano... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study compared the proventriculus midgut, ileum, and Malpighian tubules of three ants of the genus Cephalotes: C. atratus, C. pusillus, and C. clypeatus, by examining histochemical and ultrastructural differences in the wall and the content of these portions that could be used to better understand the intestinal function, as well as clarify which and how food resources are used in each part of the digestive tract. The ultrastructural analysis of the midgut of Cephalotes atratus, C. clypeatus, and C. pusillus reveled that the epithelium of the midgut lays on a basal lamina and is composed basically of three cell types: digestive cells, generative cells, and goblet cells. In these ants, the rough endoplasmic reticulum, in addition to producing digestive enzymes, is involved in ion storage in specialized vacuoles present in the midgut. These concretions are spherocrystals and may contribute to stabilize the pH and to maintain symbiotic bacteria found in between microvilli. Sections along the ileum revealed differences among the three main regions: proximal, medial, and distal. The structural specializations present in the ileum of these three ants have implications especially to the symbiotic bacteria. The DGGE method was also performed to assess the diversity of the intestinal microbiota of the portions of the digestive tract. The molecular profile of the symbionts of the midgut and ileum of Cephalotes atratus, C. clypeatus, and C. pusillus was obtained using the variable region V3 of the bacterial 16S rDNA gene sequence. Two samples of C. atratus, three of C. clypeatus, and six of C. pusillus were analyzed. The results showed similarity indices from 80% to 94% between the samples of symbionts from C. atratus and C. clypeatus, despite being collected in sites geographically distant. The variability of symbionts found in the samples of C. pusillus ranged from 45%... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Mary Massumi Itoyama / Banca: Maria Tercília Vilela de Azeredo-Oliveira / Banca: Fernanda Cristina Alcântara dos Santos / Resumo: Heteroptera é uma Subordem da Ordem Hemiptera, que possui cerca de 40 mil espécies distribuídas em oitenta famílias, dentre elas está a família Pentatomidae que se destaca por ser uma das maiores famílias com cerca de 4.100 espécies, representando, aproximadamente, 11% do total de espécies de Heteroptera. As espécies de Pentatomidae Chinavia impicticornis, Edessa meditabunda, E. collaris e Thyanta perditor foram estudadas nesse trabalho devido ao sua importância econômica, tendo em vista que são espécies fitófagas que causam grandes perdas em diversas culturas. Os machos das espécies foram coletados na região de São José do Rio Preto, os testículos foram fixados e posteriormente processados para analise em microscopia eletrônica de transmissão, os blocos obtidos foram trimados, cortados, contrastados e analisados com microscópio eletrônico de transmissão Leo - Zeiss, do Centro de Microscopia e Microanálise (IBILCE-UNESP, São José do Rio Preto, SP) e com o microscópio eletrônico de transmissão Jeol JEM - 100 CXII da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP-USP). As eletromicrografias das espécies estudadas apresentaram características ultraestruturais semelhantes às encontradas para diversos indivíduos de diferentes ordens, dentre essas características estão a formação do acrossomo, a partir de uma grande vesícula secretada pelo complexo de Golgi e que se localiza na região apical/lateral do núcleo. O núcleo, também, sofre transformações semelhantes às relatadas para grande parte dos insetos passando de um estado grande e esférico com a cromatina dispersa para um estado pequeno e fusiforme e com a cromatina extremamente condensada. Outra estrutura observada foi o adjunto do centríolo que se mostrou uma estrutura eletrondensa na região basal do núcleo. Também foi observada a migração das mitocôndrias para um polo celular... / Abstract: Heteroptera is a suborder of the Hemiptera order, which has approximately 40,000 species distributed in eighty families, among them is the Pentatomidae family that stands out for being one of the largest families with approximately 4,100, representing approximately 11% of the total species of Heteroptera. The species of Pentatomidae Chinavia impicticornis, Edessa meditabunda, E. collaris and Thyanta perditor were studied in this work because of their economic importance, given that they are phytophagous species that cause great losses in several crops. Males of the species were collected in the region of São José do Rio Preto, the testes were fixed and then processed for analysis by transmission electron microscopy, the obtained blocks were trimmed, cut, contrasted and analyzed with transmission electron microscope Leo - Zeiss, of the Centro de Microscopia e Microanálise (IBILCE-UNESP, São José do Rio Preto, SP) and the transmission electron microscope Jeol JEM - 100 CXII of Faculdade de Medicina of Ribeirão Preto (FMRP-USP). The species have similar ultrastructural characteristics to those found in many individuals of different orders, among these features is the acrosome formation from a large vesicle secreted by Golgi apparatus and located in the apical/lateral area of the nucleus. The nucleus also undergoes changes similar to those reported for most insects, passing of a great and spherical state with chromatin dispersed to a small and fusiform state and highly condensed chromatin. Another structure was observed the centriolar adjunct that showed electrodense structure in the basal region of the nucleus. We also observe the migration of mitochondria for the cell and its subsequent fusion was observed forming the mitochondrial complex or "Nebenkern", which later splits to form two symmetrical mitochondrial derivatives, with the presence of paracrystalline structures / Mestre