O conhecimento dos estágios iniciais do desenvolvimento embrionário de peixes é de extrema importância para o estudo de espécies nativas com potencial para a piscicultura, uma vez que permite o estabelecimento de diretrizes para a criação destes animais. Este projeto estudou o desenvolvimento embrionário da piapara (Leporinus elongatus), um peixe de grande importância na pesca esportiva e profissional na bacia dos rios Pardo e Jequitinhonha, visando compreender as fases desse animal em diversos estágios de desenvolvimento, utilizando marcadores ósseos que possibilitaram visualizar o desenvolvimento ósseo da espécie. As Proteínas Ósseas Morfogenéticas (BMP-2 e BMP-4) são consideradas moléculas essenciais reguladoras no desenvolvimento embrionário e na formação óssea, sendo ainda pouco estudadas em peixes; tais proteínas puderam ser observadas apenas no estádio larval até o período juvenil, não sendo evidenciadas nos estágios anteriores. Foram utilizadas também técnicas de Microscopia Eletrônica de Varredura e histológicas, onde foi possível visualizar as fases principais do desenvolvimento embrionário, entre elas, clivagens, diferenciação do embrião, formação dos órgãos principais, abertura de boca, pigmentação dos olhos, surgimento das nadadeiras e sistema branquial, dados estes que facilitam a compreensão sobre a ontogenia; além de criar dados embriológicos e anatômicos dessa espécie ainda pouco explorada, conhecimentos estes, imprescindíveis à biologia pesqueira e cultivo das mesmas, sendo também um auxiliar a novas pesquisas. / The knowledge of the early stages of embryonic development in fish is of great importance for the study of native species with potential for aquaculture, since it allows the establishment of guidelines for the breeding of these animals. This project studied the embryonic development of piapara (Leporinus elongatus), a fish of great importance in professional and amateur fishing from the basin of the Pardo and Jequitinhonha rivers, aiming to understand the various stages of development, using bone markers that allowed observation of the bone development in this species. The Bone Morphogenetic Proteins (BMP-2 and BMP-4) are known as key regulatory molecules in embryonic development and bone formation, and information on this subject is scarce in fish. Results shown these proteins could be observed only between the larval to the juvenile stage, not being seen at earlier stages. Scanning electron microscopy and histological techniques, where it was possible to observe the main stages of embryonic development , including , cleavage , embryo differentiation , development of major organs , mouth opening , eye pigmentation , appearance of fins and gills system. This data contributed for the understanding of ontogeny, and provided embryological and anatomical data that may help other studies like reproductive biology of this species that surely will improve reproductive techniques, important goal for raising the piapara.

Espécies silvestres com grande potencial zootécnico devem ser exploradas de forma racional a fim de se evitar a extinção das mesmas. Assim se dá a importância de pesquisas voltadas à reprodução daquelas criadas em cativeiro, como a cutia (Dasyprocta sp.). Este animal é um mamífero e roedor vivente, em sua maioria, na Caatinga brasileira. A ultraestrutura é a base para determinar os estágios celulares e, assim, facilitar as comparações dos processos entre cutias e roedores silvestres ou outros mamíferos. As enzimas P450 aromatase e P450c17 são responsáveis pela regulagem da produção de estrógenos e andrógenos, respectivamente. Considerando a hipótese de que o comportamento de expressão das enzimas do complexo citocromo P540 permanece o mesmo no testículo e na via espermática de cutias durante as fases de desenvolvimento sexual, objetivou-se observar a atuação das enzimas P450 aromatase e P450c17 (17-α-hidroxilase/17,20-liase) nas diferentes fases do desenvolvimento sexual, detalhar a ultraestrutura dos componentes desta via e constatar o desenvolvimento do processo espermatogênico. Segmentos do ducto deferente, epidídimo e testículo de 28 cutias machos em diferentes idades (um dia, 2-14 meses) foram fixados em paraformoldeído e glutaraldeído. O material foi coletado no Centro de Multiplicação da Universidade Federal Rural do Semiárido, Mossoró, RN (Autorização IBAMA nº 2028236/2008). Foram feitos: histologia, seguindo o protocolo padrão para hematoxilina e eosina; processamento para corte semifino (azul de toluidina); microscopia eletrônica de transmissão e varredura; e imunohistoquímica. Este trabalho foi pioneiro ao observar que o epidídimo de cutias é composto por células basais, células principais, células haloides e, quando impúbere, por células \"limpas\", e por células apicais, quando a partir da puberdade. O ducto deferente de cutias antes da puberdade era caracterizado por duas camadas musculares, possivelmente devido à falta de trânsito espermático. No epitélio germinativo foram encontradas, em sua maioria, células em prófase I, principalmente em paquíteno. A espermiogênese é completa quando na pré-puberdade, entretanto, a espermiação ocorre a partir dos 9 meses de idade. A expressão da enzima P450 aromatase variou ao longo do desenvolvimento sexual, sendo na puberdade seu pico de atividade. A P450c17 não mostrou nenhuma ação em qualquer fase sexual. Pode-se concluir que o epitélio germinativo testicular e intersticial, bem como o epitélio pseudoestratificado estereociliado do epidídimo e do ducto deferente de cutias criadas em cativeiro sofrem mudanças morfológicas e funcionais ao longo do desenvolvimento sexual. As atividades androgênicas preponderantes em cutias criadas em cativeiro ocorrem no período da puberdade. / Wild species with great potential livestock should be explored rationally in order to prevent the extinction of the same. Thus is the importance of research aimed at reproducing those bred in captivity, such as agouti (Dasyprocta sp.). This animal is a mammal and rodent living mostly in the Brazilian Caatinga. The ultrastructure is the basis for determining the stages and thus facilitates comparisons of cases between agouti and wild rodents or other mammals. The enzymes P450 aromatase and P450c17 are responsible for regulating the production of estrogens and androgens, respectively. On the assumption that the behavior of expression of the enzymes of complex cytochrome P540 remains the same in the testis and excurrent canals of the agouti during the stages of sexual development, aimed to observe the activity of the enzymes P450 aromatase and P450c17 (17-α- hidroxilase/17,20-lyase) in different stages of sexual development, detail the ultrastructure of the components of this pathway and observe the development of spermatogenesis. Segments of the vas deferens, epididymis and testis of 28 agouti males at different ages (1 day, 2-14 months) were fixed in glutaraldehyde and paraformoldehyde. The material was collected on Center of Multiplication of Federal Rural University of the Semi-arid, Natal, RN (IBAMA Authorization No. 2028236/2008). Were made: histology following the standard protocol for hematoxylin and eosin; processing to semithin (blue toluidine), electron microscopy of transmission and scanning; and immunohistochemistry. This work was pioneered by observing that the epididymis is composed by basal cells, principal cells, haloids cells; and for clean cells when impubertal and apical cells after puberty in agoutis. The vas deferens before puberty was characterized by two muscle layers, possibly due to the lack of sperm transit. In the germinal epithelium were found mostly cells in prophase I, mainly in pachytene. Spermiogenesis is complete when prepubertal phase; however, spermiation takes place from 9 months of age. The expression of enzymes of the cytochrome complex varied over sexual development and peak activity of P450 aromatase was at puberty. The P450c17 showed no action at any stage of sexual development. It can be concluded that the testicular germinal epithelium and interstitial epithelium as well as the pseudostratified estereociliated epithelium of the epididymis and vas deferens undergo morphological and functional changes during the sexual development. Androgenic activities prevalent in agoutis kept in captivity occur during puberty.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-12Bitstream added on 2014-06-13T19:19:45Z : No. of bitstreams: 1 nunes_et_dr_rcla.pdf: 1685568 bytes, checksum: fc39ac0ad20fd32933d7b0fda0680782 (MD5) / O hepatopâncreas dos crustáceos, também conhecido como glândula digestiva, passa por modificações morfo-funcionais em resposta a fatores como dieta, variações de temperatura, ciclo de muda, estágio reprodutivo e contaminação. Este trabalho objetivou analisar, morfologicamente, através de técnicas de microscopia eletrônica e de luz, o hepatopâncreas de fêmeas adultas do camarão-rosa Farfantepenaeus brasiliensis, em dois diferentes estágios de desenvolvimento gonadal, coletadas em Guarapari, Espírito Santo, Brasil, bem como relacionar esta espécie às condições ambientais, comparativamente ao camarão Xiphopenaeus kroyeri. A microscopia eletrônica de varredura evidenciou hepatopâncreas de tamanhos semelhantes nas fêmeas com gônadas desenvolvidas (DE) e naquelas esgotadas (ES), apresentando-se como um órgão não-lobado e recoberto por tecido conjuntivo com poros. Histologicamente, foram identificados cinco tipos celulares nos túbulos: células E (embrionárias), R (reabsortivas), F (fibrilares), B (vesiculares) e M (basais). Comparado às DE, o epitélio hepatopancreático das fêmeas ES mostrou-se mais escamoso, acidófilo, delimitando um amplo lúmen que contem partes das células B e R; nestas, ainda, as células M estiveram mais evidentes. As células R mostraram escassez em organelas, mitocôndrias apicais, vacúolos marcados para polissacarídeos ácidos, além de gotas lipídicas vistas principalmente nas fêmeas ES. As células F, fortemente marcadas pelo azul de bromofenol, apresentaram vesículas de secreção próximas às microvilosidades, retículo endoplasmático rugoso bem desenvolvido, em arranjo circular ou com cisternas dilatadas. As células B foram marcadas pela presença de grandes corpos digestivos com conteúdo polissacarídico neutro, sendo eliminado, posteriormente... / The hepatopancreas of crustaceans, also known as the digestive gland, undergoes morphological and functional changes in response to factors such as diet, temperature variations, moult cycle, reproductive stage and contamination. This study aimed to analyze, morphologically, by means of electron and light microscopies, the hepatopancreas of adult females of the pink shrimp Farfantepenaeus brasiliensis at two different stages of gonadal development, collected in the southern coast of Espirito Santo, Brazil, as well as to relate this species to the environmental conditions, compared to Xiphopenaeus kroyeri shrimp. The scanning electron microscopy revealed similar size in the hepatopancreas of females with developed gonads (DE) and those with exhausted gonads (ES). It presents as a non-lobed organ covered by connective tissue with pores. Histologically, five cell types were identified in tubules: E (embryonic), R (reabsorptive), F (fibrillar), B (vesicular) and M (basal). Compared to those DE females, the hepatopancreas from ES females showed a more flattened epithelium, acidophilus and delimiting a large lumen which contains parts of R and B cells; in these, also, the M cells were more evident. R cells showed shortage in organelles, apical mitochondria, vacuoles marked for acid polysaccharides, and lipid droplets seen mainly in female ES. F cells were strongly marked by bromophenol blue and presented secretory vesicles near the microvilli, well-developed rough endoplasmic reticulum in circular arrangement, or even with dilated cistern. B cells were marked by the presence of large digestive bodies with neutral polysaccharide content, being later eliminated inside the tubular lumen. The observed features also allowed us to infer the possible stages of moult in which the shrimps were. Although some... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Cristiane Chim (cristiane.chim@ucpel.edu.br) on 2017-07-07T14:16:29Z No. of bitstreams: 1 JOICE BRIÃO GÖEBEL PINTO.pdf: 19247694 bytes, checksum: cc15a0e40c8252bf08b1221e8593be95 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-07T14:16:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JOICE BRIÃO GÖEBEL PINTO.pdf: 19247694 bytes, checksum: cc15a0e40c8252bf08b1221e8593be95 (MD5) Previous issue date: 2016-12-07 / Anetoderma is a rare cuteaneous disorder characterized by focal loss of dermal elastic tissue due to unclear mechanisms. It has two forms: primary and secondary. Primary anetoderma develops on clinical normal skin, without any preceding dermatosis and it can be associated to autoimmune abnormalities. Secondary anetoderma develops on exactly the same area of a previous specific pathology, such as infectious, neoplastic or inflammatory diseases. We report on a case of a 37 years old female with herniations on the trunk. Analytical findings showed FAN in a homogeneous pattern. Staining for elastic fibers (Weigert) on optical microscopy showed fragmentation and loss of elastic fibers, an important finding. Transmission electron microscopy showed small fragmentation, that was confirmed by scanning electron microscopy. Collagen was preserved. / Anetodermia é uma desordem cutânea rara caracterizada pela destruição focal das fibras elásticas dérmicas por mecanismos ainda desconhecidos. É classificada como primária e secundária. Na forma primária, as lesões originam-se sem a necessidade de uma dermatose pré-existente. Na forma secundária, as lesões surgem em áreas de pele já acometidas por dermatoses inflamatórias, infecciosas ou neoplásicas. Relatamos o caso de uma paciente de 37 anos, a qual apresentou as típicas lesões herniadas no tronco. De exames alterados, apresentava somente FAN de padrão homogêneo. A microscopia óptica com coloração Weigert observou diminuição e ausência do tecido elástico. Fragmentação das fibras foi um achado importante. A microscopia eletrônica de transmissão demonstrou degeneração granular das fibras elásticas e também fragmentação. O colágeno estava preservado. O exame tridimensional da derme com a microscopia eletrônica de varredura confirmou a fragmentação do tecido elástico

Submitted by Cristiane Chim (cristiane.chim@ucpel.edu.br) on 2018-10-08T12:04:48Z No. of bitstreams: 1 Felipe Simões Lopes Quintana.pdf: 77300691 bytes, checksum: ee08226cb6940ec6c50e71b9ec852ebe (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-08T12:04:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Felipe Simões Lopes Quintana.pdf: 77300691 bytes, checksum: ee08226cb6940ec6c50e71b9ec852ebe (MD5) Previous issue date: 2017-10-10 / . / Descrever dois dermatofibromas, analisando seus aspectos clínicos, histológicos e ultraestruturais. 3.2 ESPECÍFICOS a) Descrever os achados da microscopia óptica com a coloração com hematoxicilina e eosina. b) Descrever os achados da microscopia óptica com a coloração Weigert. c) Descrever aspectos ultraestruturais tridimensionais com microscopia eletrônica de varredura. d) Descrever os aspectos clínicos do dermatofibroma.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-30Bitstream added on 2014-06-13T19:46:41Z : No. of bitstreams: 1 bution_ml_dr_rcla.pdf: 2579345 bytes, checksum: d33353301f6a8da2b554a3ec7b12d3f7 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Foram realizados estudos comparados do proventrículo, ventrículo, íleo e túbulos de Malpighi de três espécies pertencentes ao gênero Cephalotes: C. atratus, C. pusillus e C. clypeatus, objetivando buscar relações entre elas, assim como, diferenças histoquímicas e ultra-estruturais tanto da parede como do conteúdo destas porções do trato digestivo, que pudessem ser utilizadas para a melhor compreensão da função intestinal, bem como esclarecer quais e como os recursos alimentares são aproveitados em cada parte do trato digestivo. As características ultra-estruturais do ventrículo de Cephalotes atratus, C. clypeatus e C. pusillus, mostram que o epitélio do ventrículo repousa sobre uma lâmina basal contínua e é formado basicamente por três tipos celulares, sendo estas as células digestivas, as células regenerativas e as goblet cells. Nestas formigas, o retículo endoplasmático rugoso além de atuar na produção de enzimas digestivas também está envolvido na estocagem de íons em vacúolos especializados presentes no ventrículo. Estas concreções são os esferocristais e podem estar contribuindo com a estabilização do pH e permanência das bactérias simbiontes presentes por entre as microvilosidades. Secções realizadas ao longo do íleo revelaram diferenças entre três principais regiões: proximal, mediana e distal. As especializações estruturais presentes no íleo destas três espécies de formigas resultam em implicações especialmente relacionadas com as bactérias simbiontes aí hospedadas. Também foram realizados testes para verificar a diversidade da microbiota intestinal das porções em questão, usando a técnica DGGE. Assim sendo, o perfil molecular dos simbiontes do ventrículo e íleo de Cephalotes atratus, C. clypeatus e C. pusillus foi obtido analisando a região variável V3 do gene 16S do rDNA bacteriano... / This study compared the proventriculus midgut, ileum, and Malpighian tubules of three ants of the genus Cephalotes: C. atratus, C. pusillus, and C. clypeatus, by examining histochemical and ultrastructural differences in the wall and the content of these portions that could be used to better understand the intestinal function, as well as clarify which and how food resources are used in each part of the digestive tract. The ultrastructural analysis of the midgut of Cephalotes atratus, C. clypeatus, and C. pusillus reveled that the epithelium of the midgut lays on a basal lamina and is composed basically of three cell types: digestive cells, generative cells, and goblet cells. In these ants, the rough endoplasmic reticulum, in addition to producing digestive enzymes, is involved in ion storage in specialized vacuoles present in the midgut. These concretions are spherocrystals and may contribute to stabilize the pH and to maintain symbiotic bacteria found in between microvilli. Sections along the ileum revealed differences among the three main regions: proximal, medial, and distal. The structural specializations present in the ileum of these three ants have implications especially to the symbiotic bacteria. The DGGE method was also performed to assess the diversity of the intestinal microbiota of the portions of the digestive tract. The molecular profile of the symbionts of the midgut and ileum of Cephalotes atratus, C. clypeatus, and C. pusillus was obtained using the variable region V3 of the bacterial 16S rDNA gene sequence. Two samples of C. atratus, three of C. clypeatus, and six of C. pusillus were analyzed. The results showed similarity indices from 80% to 94% between the samples of symbionts from C. atratus and C. clypeatus, despite being collected in sites geographically distant. The variability of symbionts found in the samples of C. pusillus ranged from 45%... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-06-10Bitstream added on 2014-06-13T21:08:01Z : No. of bitstreams: 1 jesus_cm_dr_rcla.pdf: 5009514 bytes, checksum: ebcdbcc7d94f909d06c62d92fa2387e4 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Uma característica típica das formigas e algumas vespas é a presença das glândulas pós-faríngeas, estrutura que se encontra somente nesses grupos de organismos, fato que deve ter contribuído para o seu sucesso evolutivo. Apesar dos primeiros estudos com as glândulas pós-faríngeas existirem há mais de 100 anos, somente nos últimos 20 elas tem recebido maior atenção dos pesquisadores. Assim, a presente pesquisa teve por objetivo realizar uma análise comparativa da morfologia das glândulas pós-faríngeas e verificar sua participação na utilização de lipídeos ingeridos por três espécies de formigas com padrões alimentares distintos. Para tal, foi realizado análise ultramorfologica e ultraestrutural das glândulas pós-faríngeas; quantificação da ingestão de lipídeos e carboidratos, e verificação do trajeto destes compostos pelo sistema digestório das operárias; análise autorradiográfica do processo de incorporação do ácido oléico marcado radioativamente pelas glândulas pósfaríngeas das operárias. Os resultados encontrados sugerem que cada uma das espécies apresenta uma particularidade: as glândulas pós-faríngeas de Camponotus vittatus podem ser um sítio de reserva energética para o indivíduo; as operárias de Atta laevigata deslocam parte dos lipídeos ingeridos para o intestino médio, evitando o seu acúmulo nas glândulas pós-faríngeas, ao passo que foram encontradas pela primeira vez dois tipos de células nas glândulas pósfaríngeas de Pachycondyla villosa. Além disso, o trajeto percorrido pelos alimentos hidrossolúveis no interior do sistema digestório das operárias compreende a cavidade infrabucal, papo e ventrículo. Enquanto que os lipídeos passam pela cavidade infrabucal, glândulas pós-faríngeas e papo, mas não atingem o ventrículo; com exceção de A. laevigata em que foram encontrados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaix / A typical gland found only in ants and some wasps species is the postpharyngeal gland, which could have contributed to the evolutionary success of these social insects. The first studies regarding the morphology and function of the postpharyngeal glands were conducted about 100 years ago, and only in the last 20 years researches gave more attention to its importance. Thus, this study aimed at comparing the morphology of postpharyngeal glands and to verify their participation in the use of lipids ingested by three ant species. For this purpose, we performed: 1- Ultrastructural and Ultramorphology analysis of the postpharyngeal glands; 2 – the flow of lipids and carbohydrates inside the digestory systeam; 3 - the incorporation of radiolabeled oleic acid by the postpharyngeal using autoradiografic methods. Our results suggest that each species has a particularity: the postpharyngeal glands of Camponotus vittatus may be act as a site of food reserve, the workers of Atta laevigata prevent the accumulation of oleic acid in the postpharyngeal glands by sending lipids ingested to midgut. On the other hand, Pachycondyla villosa has specialized cells to eliminate of lipids from the postpharyngeal glands. Moreover, water-soluble diets were found in infrabucal pockets, crop and ventriculi, while lipid-soluble diets were found in infrabucal pockets, postpharingeal glands and crop; except for A. laevigata, which also had lipids in their midgut. Autorradiografic analysis showed that oleic acid is absorbed by the epithelium of... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Rodney Kozlowiski de Azevedo / Resumo: Os parasitos do filo Myxozoa são endoparasitas obrigatórios que infectam peixes, anfíbios, répteis, mamíferos, aves aquáticas em diversas regiões do mundo, com mais de 2180 espécies descritas, estando entre os mais importantes patógenos de peixes, porém, pouco se conhece deste parasito em peixes do Brasil. Neste estudo foram realizadas coletas entre março e setembro de 2016, na qual foram coletados 30 exemplares de curimba (Prochilodus lineatus) e dezessete exemplares de lambari (Astyanax altiaparanae), oriundos do rio Batalha, em dois locais de coleta, um ponto de coleta no município de Reginópolis e outro ponto no município de Agudos, estado de São Paulo. Foram utilizadas análises morfológicas (microscopia de luz, histologia e análise ultraestrutural), técnicas de biologia molecular (PCR e sequenciamento) na descrição de duas espécies de Henneguya Duas espécies foram documentadas neste estudo, uma delas foi encontrada infectando o filamento primário da brânquia de P. lineatus e é descrita neste estudo como Henneguya prochilodus e outra espécie encontrada infectando o filamento secundário da brânquia de A. altiparanae, a qual foi proposto uma descrição expandida da Henneguya chydadea Barassa et al. (2003), previamente descrita utilizando análises morfológicas e histopatologia. Análise filogenética do gene 18S rDNA foi realizada para avaliar a relação filogenética dessas duas espécies de Henneguya com outras espécies de mixosporídeos da América do Sul e de outras regiões do m... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Myxozoa parasites are obligate endoparasites that infect fish, amphibians, reptiles, mammals, waterfowl in several regions of the world, with more than 2180 described species, being among the most important fish pathogens, but little is known of this parasite in fish from Brazil. In this study were collected from March to September 2016, where 30 specimens of Curimba (Prochilodus lineatus) and seventeen specimens of lambari (Astyanax altiaparanae) from the Batalha River, in two collection sites, a collection point in the municipality of Reginópolis and another point in the municipality of Agudos, state of São Paulo. Morphological analyzes (light microscopy, histology and ultrastructural analysis), molecular biology techniques (PCR and sequencing) were used to describe two species of Henneguya. Two species were documented in this study, one of which was found infecting the primary filament of the gill of P. lineatus and is described in this study as Henneguya prochilodus and another species found infecting the secondary filament of the gill of A. altiparanae, which has been proposed an expanded description of Henneguya chydadea Barassa et al. (2003), previously described using morphological analysis and histopathology. Phylogenetic analysis of the 18S rDNA gene was performed to evaluate the phylogenetic relationship of these two species of Henneguya with other species of myxosporids from South America and other regions of the world. / Mestre

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-04-18T04:12:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 344486.pdf: 18193868 bytes, checksum: 7ecbdb40a13855e053a7f241ef18cf0c (MD5) Previous issue date: 2016 / Os combustíveis fósseis são responsáveis por uma fração considerável da poluição que atinge os ecossistemas marinhos, sendo a gasolina e o óleo diesel são os mais consumidos no mundo. As macroalgas possuem grande importância ecológica em muitos ecossistemas marinhos, porém poucas pesquisas têm sido realizadas objetivando elucidar os efeitos de hidrocarbonetos derivados do petróleo sobre estes organismos, em comparação ao número de publicações que utilizam microalgas, invertebrados e vertebrados como objeto de estudo. Ulva lactuca (Chlorophyta) foi escolhida como modelo biológico neste estudo por ser uma espécie cosmopolita, conhecida por sua tolerância a ambientes impactados por efluentes domésticos e industriais e capacidade de bioacumular metais pesados. Os efeitos do óleo diesel e da gasolina, em combinações de concentrações (0,001%, 0,01%, 0,1%, 1,0%) e tempo de exposição (30 min, 1 h, 12 h, 24 h), foram investigados sobre a ultraestrutura, bioquímica e metabolômica de U. lactuca. A microscopia eletrônica de varredura (MEV) revelou que 1 h de exposição ao óleo diesel e à gasolina já é suficiente para provocar alterações drásticas na mucilagem dos talos, um efeito que se mantém após 12 h e 24 h de exposição. Com a análise citoquímica com Azul Brilhante de Coomassie (CBB) observou-se que a exposição à gasolina provoca desorganização e aglutinação da porção proteica citoplasmática, possivelmente atingindo sistemas enzimáticos das membranas das organelas, um efeito menos intenso nos talos expostos ao diesel. Flutuações nos conteúdos de clorofilas a e b e no perfil de carotenoides foram detectadas em talos expostos ao óleo diesel, embora tais diferenças não foram relacionadas à concentração do combustível ou ao tempo de exposição. A exposição ao diesel também causou redução no conteúdo de polifenóis em relação ao grupo controle e aumento dos conteúdos de açúcares solúveis e de amido, principalmente após 12 h. Talos expostos à gasolina também apresentaram alterações nos conteúdos de clorofilas a e b. Constatou-se que a redução dos teores de carotenóides e de polifenóis, e o aumento dos conteúdos de açúcares solúveis e de amido é função direta em relação ao tempo de exposição a este combustível. O conjunto de resultados obtidos por MEV, citoquímica e bioquímica indica que a exposição aguda de U. lactuca à gasolina causa danos mais intensos à estrutura celular do que a exposição ao diesel, possivelmente devido à alta permeabilidade dos hidrocarbonetos aromáticos e do etanol presentes na gasolina brasileira. Adicionalmente, verificou-se que os pigmentos fotossintetizantes e suas rotas biossintéticas são menos suscetíveis às agressões dos combustíveis. O aumento dos teores de açúcares solúveis e de amido nos talos expostos aos xenobióticos sugere que os hidrocarbonetos podem ser metabolizados via Ciclo do Ácido Cítrico, conferindo a esta espécie um papel importante desta espécie na biorremediação dos ecossistemas. Ademais, especula-se que os conteúdos de polifenóis, açúcares solúveis, amido, associados à citoquímica com CBB, podem ser usados em conjunto como biomarcadores para poluição por óleo diesel e gasolina em U. lactuca. O estudo do metaboloma via espectroscopia vibracional de infravermelho (FTIR) e análise multivariada de dados (HCA, PCA, k-means) permitiu discriminar a maioria das amostras segundo o xenobiótico de interesse. Quando os grupos expostos ao diesel e à gasolina foram analisados separadamente, a análise do intervalo espectral de absorbância das proteínas permitiu o melhor agrupamento das amostras. Os talos expostos ao óleo diesel foram melhor agrupados de acordo com a concentração deste xenobiótico, enquanto aqueles expostos à gasolina foram melhor discriminados de acordo com o tempo de exposição ao combustível. A abordagem analítica ao estudo do metaboloma de U. lactuca mostrou-se eficiente para discriminar alterações bioquímicas consoante à exposição aguda aos xenobióticos. Por se tratar de uma metodologia simples, rápida, sensível e barata possui potencial para desenvolvimento de protocolo de rotina a estudos de biomonitoramento.<br> / Abstract : Fossil fuels, such as gasoline and diesel oil account for substantial share of pollution that affects marine ecosystems. Seaweeds have important ecological roles in many ecosystems, but a few researches have been carried out aiming at to unravel the effects of oil derivatives on these organisms, comparatively to the observed for microalgae, invertebrates, and vertebrates. Ulva lactuca (Chlorophyta) was chosen as a biological model for this study due to its cosmopolitan habits, ability to bioaccumulate heavy metals, and tolerance to polluted environments by domestic and industrial effluents. In the present study the effects of diesel oil and gasoline, in combinations of concentrations (0,001%, 0,01%, 0,1%, and 1,0%) and times of exposure (30 min, 1 h, 12 h, and 24 h) were investigated on U. lactuca's ultrastructure, biochemistry, and metabolomics. Scanning electron microscopy (SEM) images, just after 1 h of exposure to diesel oil or to gasoline revealed drastic alterations in thalli mucilage that persist after 12 h and 24 h of exposure. Coomassie Brilliant Blue (CBB) cytochemistry analysis indicated that exposure to gasoline led to disorganization and agglutination of the cytoplasm protein fraction, possibly affecting enzymes bound to organelles' membranes. This effect was lesser intense in thalli exposed to diesel oil, which exhibited little alterations in cytoplasm. Diesel oil-exposed thalli exhibited changes in chlorophyll a and b contents and in carotenoid profile not related to diesel oil concentrations or exposure times. Diesel oil also decreased the polyphenol content and increased the soluble sugars and starch amounts, specially after 12 h exposure, followed by a decrease in these metabolites after 24 h exposure. Chlorophyll a and b contents also were altered in a way not related to concentrations or times of exposure in gasoline-treated thalli. A decrease in the carotenoid and polyphenol amounts and an increase in soluble sugars and starch contents positively correlated to time of exposure were detected in gasoline-treated groups. SEM, cytochemical, and biochemical analyzes revealed higher toxicity to U. lactuca of gasoline than diesel oil, possibly due to the high permeability of mono-aromatic hydrocarbons and ethanol from the Brazilian gasoline blend. Importantly, results also showed that photosynthetic pigments and their biosynthetic pathways resist in a certain extension to injuries caused by gasoline and diesel oil. Besides, the augmented amounts of soluble sugars and starch suggest that hydrocarbons may have been metabolized and incorporated into U. lactuca's energetic pathways, e.g. citric acid cycle. These results indicate that U. lactuca plays an important role on bioremediation of natural habitats. From these results, we suggest that polyphenols, soluble sugars, and starch contents, along with CBB cytochemistry could be used as biomarkers of diesel oil and gasoline pollution in U. lactuca. FTIR-based metabolomics studies followed by multivariate statistical analysis (HCA, PCA, k-means) efficiently discriminated most of the the exposed groups according to the xenobiotic. When diesel oil- and gasoline-exposed groups were analyzed separately, the most accurate clusters were obtained using the spectral window corresponding to the proteins absorbances. Diesel oil-exposed thalli were better clustered according to the concentration of xenobiotic, whereas gasoline-exposed thalli were better grouped according to the time of exposure to this fuel. Since the analytical approach to metabolomics showed to be simple, fast, cheap, and sensible, it is thought to have potential for further development of protocols of routine analysis in biomonitoring studies.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-30T12:17:24Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6298113 bytes, checksum: d062e887b062b16684f43141310ca424 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-30T12:17:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6298113 bytes, checksum: d062e887b062b16684f43141310ca424 (MD5) Previous issue date: 2004-07-30 / O objetivo deste trabalho foi analisar a morfologia das glândulas salivares do predador Podisus nigrispinus (Dallas, 1851) (Heteroptera: Pentatomidae) e caracterizar a atividade bioquímico-enzimática dessas glândulas. P. nigrispinus apresenta um par de glândulas salivares principais e um de acessórias. Cada glândula principal é constituída por um lóbo anterior e um posterior sendo o anterior localizado na região do protórax. O lóbo posterior apresenta forma de saco alongado, translúcido com a porção próxima ao lóbo anterior dilatada. Entre esses lóbos existe uma forte constrição, caracterizando um hilo onde se inserem dois ductos, o excretor e o da glândula salivar acessória. As glândulas salivares principais e acessórias de P. nigrispinus são supridas por uma rede de traquéias. A ultraestrutura das glândulas salivares principais de P. nigrispinus mostrou que o epitélio do lóbo anterior está constituído por uma camada única de células achatadas com núcleo volumoso e predomínio de cromatina descondensada com porção apical apresentando microvilosidades curtas e irregulares. Mitocôndrias, retículo endoplasmático rugoso, inclusões lipídicas, figuras mielínicas e grânulos de secreção com diferentes eletrondensidades se acumulam no citoplasma. O conteúdo do lúmen das glândulas salivares de P. nigrispinus é muito eletrondenso, mas apresenta inclusões esféricas e eletrontransparentes. Na porção mediana da célula verificou-se retículo endoplasmático rugoso, elementos do complexo de Golgi, mitocôndrias e corpos densos tomados como lisossomos. A porção basal da célula apresenta invaginações da membrana plasmática basal, mitocôndrias e vacúolos eletrontransparentes. A membrana basal apresenta uma túnica formada por células musculares e elementos traqueais. O epitélio do lóbo posterior é achatado com vesículas eletrontransparentes e cisternas do retículo endoplasmático rugoso. A porção apical da célula apresenta eliminação de porções do citoplasma para o lúmen preenchido por secreção eletrondensa e homogênea, enquanto a basal apresenta invaginações da membrana plasmática basal. O núcleo é irregular com cromatina condensada. Externamente há células musculares e traqueais. A porção secretora das glândulas salivares acessórias de P. nigrispinus apresenta uma camada única de células colunares com cutícula espessa e lúmen vazio. A porção apical da célula secretora tem microvilosidades curtas e irregulares com acúmulo de grânulos eletrondensos e vacúolos. A porção basal da célula é rica em mitocôndrias, com retículo endoplasmático rugoso, vacúolos e alguns grânulos eletrondensos. O núcleo, caracteristicamente, apresenta cromatina descondensada. A célula está assentada sobre uma fina membrana basal, sem células musculares externas. O epitélio do ducto das glândulas salivares acessórias de P. nigrispinus é mais baixo que na porção secretora, com citoplasma vacuolizado. A caracterização bioquímico-enzimática do extrato de glândulas salivares de P. nigrispinus mostrou atividades das enzimas digestivas amilase, lipase e proteases. A atividade específica de amilase sobre o amido e aquela da lipase sobre o tributirato de ditiopropanol apresentaram aumento linear com o aumento da concentração do substrato. A atividade proteásica, determinada sobre a azocaseína em concentrações de 0 a 0,6 mg/mL, apresentou curva hiperbólica seguindo a cinética Michaeliana. A atividade específica tripsina-like, caracterizada com o substrato sintético L- BApNA em diferentes pH apresentou picos de atividade específica a pH 5,0 e 8,0, com maior atividade neste último. A atividade tripsina-like, a diferentes temperaturas, apresentou, picos de atividade a 25o C e 37,5o C. O efeito de inibidores, sobre a atividade esterásica, foi determinado em presença de benzamidina, um inibidor competitivo clássico de tripsina e do TLCK, inibidor irreversível desta enzima. Esses inibidores ocasionaram queda na atividade da tripsina-like com aumento da concentração dos mesmos, com redução de 65,2 e 70,9% nessa atividade, respectivamente. O gráfico de Michaelis-Mentem apresentou valor de Km 1,57 mM e Vmáx 0,166 μM.s-1. As glândulas salivares de P. nigrispinus contêm enzimas hidrolíticas, com pronunciada atividade catalítica que, possivelmente, estão envolvidas no processo de predação e fitofágico desse predador. / The objective of this investigation was to analyze the morphology of the salivary glands of the predator Podisus nigrispinus (Dallas, 1851) (Heteroptera: Pentatomidae) and to characterize biochemical-enzymatic activity of these glands. P. nigrispinus presents a pair of main salivary glands and one pair of ancillaries. Each main gland is constituted by an anterior and one posterior lobe being the anterior located in the protoraxial region. The posterior lobe exhibit the format of an oblong sac, translucid with the proximal portion of the lobe dilated. Between these lobes exists a strong constriction, characterizing a hilum where two ducts are inserted, the excretory and the one of the ancillary salivary gland. The main and ancillary salivary glands of the P. nigrispinus are supplied by a net of tracheas. The ultra structure of the main salivary glands of P. nigrispinnus shows that the epithelium of the anterior lobe is constituted by a single layer of flattened cells with a bulky nucleus and a predominance of descondensed chromatin with the apical portion presenting short and irregular microvilosides. Mitochondria, creasy endoplasmatic reticules, fatty inclusions, myelin images and secretion granules with different electron densities accumulates in the cytoplasm. The lumen content of the salivary glands of the P. nigrispinus is very electron dense, but exhibits spherical and electron transparent inclusions. In the median portion of the cell a creasy endoplasmatic reticule was detected, as well as elements of the Golgi complex, mitochondria and dense bodies considered as lisosomes. The basal portion of the cell exhibits invaginations of the basal plasmatic membrane, mitochondria and electron transparent vacuoles. The basal membrane presents a tunic formed muscular cells and tracheal elements. The epithelium of posterior lobe is flattened with electron transparent vesicles and cisterns of the creasy endoplasmatic reticule. The apical portion of the cell presents elimination of portions of the cytoplasm to the lumen filled by electron dense and homogeneous secretion, whereas the basal portion presents invaginations of the basal plasmatic membrane. The nucleus is irregular with condensed chromatin. Externally there are muscular and tracheal cells. The secretor portion of the ancillary salivary glands of the P. nigrispinus exhibits a single layer of columnar cells with thick cuticle and empty lumen. The apical portion of the secretor cell has short and irregular micromicrovilosides with accumulation of electron dense granules and vacuoles. The basal portion of the cell is rich in mitochondria, with creasy endoplasmatic reticule, vacuoles and some electron dense granules. The nucleus, characteristically, presents decondensated chromatin. The cell is settled on a thin basal membrane, with no external muscular cells. The epithelium of the ducts of the ancillary salivary glands of P. nigrispinus is lower than in the secretor portion, with vacuolated cytoplasm. The biochemical-enzymatic characterization of the extract of the salivary glands of P. nigrispinus exhibited activity of the digestive enzymes amylase, lipase and protease. The specific activity of the amylase on the starch and that of the lipase on dithiopropanol tributyrate exhibited linear increase with the concentration of the substrate. The protease activity, determined on azocaseine in concentrations from 0 to 0.6 mg/mL, exhibited a hyperbole curve following a Michaelian kinetics. The specific trypsine-like activity, characterized with the synthetic substrate L-BapNA at different pH’s exhibited peaks of specific activity at pH 5.0 and 8.0, with a higher activity with respect to the latter. The trypsine-like activity, at different temperatures, exhibited activity peaks at 25oC and 37.5 oC. The effect of inhibitors on the stereoastic activity was determined in the presence of benzamidyne, a classic competive inhibitor of trypsine and of TLCK, irreversible inhibitor of this enzyme. These inhibitors caused decrease in the activity of the trypsine-like with the increase of the concentrations of the same, with a reduction of 65.2 and 70.9 % of this activity, respectively. The Michaelis-Mentem graph exhibited a value of KM 1.57 mM and Vmax 0.166 mM.s-1. The salivary glands of P. nigrispinus contain hydrolytic enzymes, with prominent catalytic activity that, possibly, are involved in the predatory and phytophagic process of this predator.