Orientador: Solange Maria de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-12T20:06:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ramos-Perez_FlaviaMariadeMoraes_D.pdf: 18641113 bytes, checksum: 5055d5d8d9b1947dfaf2861818df0340 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O objetivo nesse trabalho foi avaliar a taxa de erupção dentária, a birrefringência da matriz orgânica do esmalte, a morfologia dos tecidos odontogênicos e a ultraestrutura do ameloblasto secretor em incisivos de ratos submetidos à altas doses de radiação X. Para isso foram utilizados, no total, sessenta ratos machos, sendo os primeiros trinta divididos em três grupos experimentais: Controle, Irradiado 15Gy e Irradiado 25Gy, grupos nos quais os animais receberam doses únicas de 15Gy e 25Gy de radiação X, respectivamente, localizada na região de cabeça e pescoço. A mensuração da taxa de erupção dentária foi realizada a cada dois dias, perfazendo o tempo total do experimento (seis dias e meio). Com o objetivo de acompanhar o desenvolvimento dentário por um período maior, utilizou-se mais trinta animais que foram submetidos ao mesmo tipo de tratamento e, portanto, divididos nos três grupos supracitados. Os valores da taxa de erupção foram submetidos à análise de variância e teste de Tukey (p<0,05). Todos os animais sacrificados aos seis dias e meio foram perfundidos, as hemimaxilas removidas, adequadamente fixadas e processadas de acordo com o protocolo de histologia da FOP-UNICAMP. Para birrefringência, mediu-se o valor do retardo óptico da área de maior brilho utilizando microscópio de polarização. Os dados foram encaminhados à análise estatística de variância e teste de Tukey (p<0,05). Para avaliação da morfologia dos tecidos odontogênicos e ultraestrutura celular foi realizada análise descritiva. Foi possível observar, nos grupos irradiados, uma redução significativa da taxa de erupção a partir do quarto dia. Uma diminuição no brilho de birrefringência foi encontrada nos grupos irradiados em relaçao ao controle, porém esta só foi significante para o grupo Irradiado 25Gy. A avaliação dos tecidos odontogênicos revelou, no grupo controle, região odontogênica com aspecto de normalidade e camada de odontoblastos e ameloblastos preservados. Nos grupos irradiados foi possível constatar desorganização das células da região odontogênica, camada de pré ameloblastos com redução na sua altura e odontoblastos muitas vezes ausentes ou pobremente organizados. A análise ultraestrutural revelou em todos os grupos, a presença de organelas íntegras, assim como processo de Tomes bem preservados. Evidenciou-se também a presença de filamentos em contato com as organelas citoplasmáticas. Entretanto, nos grupos irradiados, foram visualizadas diversas áreas de degeneração e a presença dos autofagossomas, sugerindo um processo de morte celular. Baseados nesses resultados, pôde-se concluir que altas doses de radiação X foram capazes de retardar a erupção dentária a partir do quarto dia; reduzir a birrefringência da matriz orgânica do esmalte na fase de secreção da amelogênese; alterar significativamente a morfologia dos tecidos odontogênicos e causar agressão, modificando a ultraestrutura celular. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the dental eruption rate, the organic enamel matrix birefringence, the odontogenic tissue morphology and the ultrastructure of secretory ameloblasts in incisor of rats submitted to high radiation doses. For this purpose, sixty male rats were used, the first thirty divided into three experimental groups: Control, 15Gy and 25Gy irradiated groups, which received single doses of 15 and 25Gy of X-rays, respectively, localized in the head and neck region. The measurement of the eruption rate was performed every two days, until the total experimental time was reached (six days and half). As an attempt of analyzing the dental development for a longer period, thirty other animals were used, divided into the same three experimental groups and submitted to the same procedure described above. The eruption rate values were submitted to ANOVA and Tukey test (p<0.05). All the animals tested in the sixth day and half were perfused, their hemimaxilla removed, adequately fixed and processed according to the histological protocol of FOP-UNICAMP. For birefringence analysis, the optical retardation was measured in the highest birefringence brightness area, using a polarizing microscope. Data were submitted to statistical analysis (ANOVA) and Tukey test (p<0.05). A descriptive analysis was performed for morphologic and ultrastructural evaluation. It was possible to observe, in irradiated groups, a significant reduction in the eruption rate from the fourth day. A reduction in the birefringence brightness was encountered in the irradiated groups in relation to control; this difference was, however, only significant to 25Gy irradiated group. The odontogenic tissue morphology analysis showed, in control group, odontogenic region with normal features and preserved layer of odontoblasts and ameloblasts. Both irradiated groups presented odontogenic cells disorganization, preameloblasts layer reduced in height and odontoblasts absent or poorly organized. The ultrastructural evaluation showed, in all the examined groups, the presence of organelles and Tomes process preserved. The presence of filaments in contact with the cytoplasmatic organelles was also found. However, in the irradiated groups several degeneration areas and autophagosomes were observed, suggesting a cell death process. Based on these results, it was possible to conclude that high radiation doses were capable to delay the eruption rate from the fourth day; to reduce the birefringence brightness of the organic matrix in the secretory stage of amelogenesis; to alter significantly the odontogenic tissues morphology and to cause aggression, modifying the cellular ultrastructure. / Doutorado / Radiologia Odontologica / Doutor em Radiologia Odontológica

Orientador: Shirlei Maria Recco-Pimentel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-14T15:41:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Introini_GiseleOrlandi_D.pdf: 4339953 bytes, checksum: 12ffc20df8da4d8930c265634e22d822 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Aplicações de Microscopias Eletrônicas de Transmissão (TEM) e Varredura (SEM) têm contribuído para a sistemática de moluscos bivalves e classificações de táxons mais abrangentes. Em muitos casos, os resultados dessas ferramentas metodológicas têm notavelmente complementado os estudos comparativos da anatomia interna e dos caracteres conquiliológicos, contribuindo para uma ampla compreensão das relações filogenéticas entre os representantes da classe Bivalvia. A morfologia dos espermatozóides de inúmeros táxons importantes das subclasses Pteriomorphia e Heterodonta permanece pouco ou nada estudada. A análise de espécies dessas subclasses pode corroborar estudos que abordam taxonomia e filogenia. No presente trabalho, foi realizado o estudo da ultraestrutura dos espermatozóides de espécies de bivalves das famílias Veneridae, Donacidae, Tellinidae (Ordem Veneroida, Subclasse Heterodonta,), Mytilidae (Mytiloida), Isognomonidae (Pterioida) e Ostreidae (Ostreoida) (pertencentes à Subclasse Pteriomorphia). Os espermatozóides de todas as espécies de bivalves analisadas, com exceção da espécie Tellina lineata, apresentaram uma morfologia típica de animais marinhos que liberam seus gametas fertilizando seus ovos na água do mar. A microscopia eletrônica de transmissão forneceu importantes caracteres que auxiliaram na diferenciação entre os espermatozóides das espécies Isognomon bicolor e I. alatus (única coletada em território estrangeiro); Donax hanleyanus e D. gemmula; Macoma biota e M. constricta. A célula gamética masculina de Tellina lineata foi considerada modificada, portadora de acrossomo cônico e curto, núcleo longo e helicoidal, mitocôndrias alongadas que se estendiam sobre a periferia da base nuclear, estruturas longas que se dispunham ortogonalmente (mas que não apresentavam o padrão convencional dos centríolos) e um flagelo simples. Na literatura acerca dos Bivalvia, considerase a cabeça alongada mais eficiente na penetração de óvulos que possuem ampla camada gelatinosa. O espermatozóide de Tivela mactroides (em comparação com aquele produzido por Anomalocardia brasiliana) possibilitou a descrição de determinadas características que podem contribuir para vantagens adaptativas nos ambientes nos quais os bivalves ocorrem. Uma característica interessante da cabeça alongada dos espermatozóides dos membros da família Veneridae é a presença de curvatura. Populações de Mytella podem ocorrer tanto em costões rochosos quanto em bancos de sedimento areno-lamoso. Não houve diferença entre essas populações e foi sugerido que ambas se tratam de M. charruana. A presença de perforatorium no espermatozóide de Mytella charruana permite sua alocação na subfamília Mytilinae. As descrições disponíveis na literatura sobre a morfologia do gameta masculino de ostras mostram uma significativa semelhança entre as espécies investigadas, corroborando o status monofilético da família Ostreidae. Segundo os resultados apresentados é possível afirmar que a espécie Crassostrea brasiliana ocorre na região de Cananéia. Conclui-se que os dados da tese mostraram-se especialmente importantes por revelarem os detalhes internos mais sutis dos espermatozóides, ampliando o crescente entendimento da estrutura, biologia e desenvolvimento dos espermatozóides de bivalves das famílias Isognomonidae, Veneridae, Donacidae, Tellinidae, Mytilidae e Ostreidae. / Abstract: The ultrastructure of bivalve spermatozoa can be species-specific and often provide valuable taxonomic traits for systematic reviews and phylogenetic reconstructions. Transmission and scanning electron microscopy was an efficient tool to differentiate the spermatozoan structure of species sharing many conchological characters, which could lead to equivocal identification. We analyzed sperm ultrastructural features that were useful for taxonomic issues with regard to Isognomon bicolor and Isognomon alatus (Isognomonidae); Macoma constricta, Macoma biota and Tellina lineata (Tellinidae); Donax hanleyanus and Donax gemmula (Donacidae). The data revealed that the bivalve species studied here, except T. lineata, produce primitive-type spermatozoa, typical of marine invertebrates in which eggs are fertilized in the surrounding water. We, also, compared the ultrastructure of spermatozoa from the bivalves Anomalocardia brasiliana and Tivela mactroides (Veneridae). The spermatozoa of both species contain a curved nucleus with a short cone-shaped acrosome. There were six mitochondria and glycogen clusters in the middle piece of the T. mactroides sperm cell. Possibly, the glycogen clusters and the higher mitochondria number correspond to an adaptive advantage in turbulent waters. Increasing the sperm life expectance also increases the odds of finding the eggs and accomplishing fertilization. Oysters of the genus Crassostrea and mussels of the genus Mytella, commercially important in Brazil, were also investigated in this thesis. The sperm ultrastructure of the specimens described herein and molecular studies, confirm the presence of Crassostrea brasiliana (Ostreidae) in Cananéia. Spermatozoa of mussel specimens of the genus Mytella, from two populations living in distinct habitats (muddy-sand sediment and rocky shores), were examined by transmission electron microscopy. The spermatozoa of all specimens shared the same ultrastructural pattern suggesting that the analyzed specimens, which live in distinct habitats, indeed belong to a same species, which was identified as M. charruana (Mytilidae) based on conchological analysis. The presence of an axial rod in sperm cells upholds the inclusion of M. charruana in the subfamily Mytilinae. In conclusion the electron microscopy was an efficient method to solve some particular taxonomic issues. The present spermatozoan ultrastructural studies have provided new and welcome data about the families Isognomonidae, Veneridae, Tellinidae, Donacidae, Ostreidae and Mytilidae. The results showed in this thesis could be valuable in future phylogenetic analyses. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Capítulo 1: Dimorfismo sexual em aberturas glandulares das pernas de três subfamílias de Gonyleptidae (Arachnida: Opiliones: Laniatores) Glândulas sexualmente dimórficas podem não apenas ser informativas taxonomicamente como podem ainda trazer informações importantes sobre a comunicação entre os sexos. Nesse trabalho estudamos a evolução de aberturas glandulares sexualmente dimórficas nas pernas I (basitarso) e pernas IV (presença/ausência de intumescimento e quantidade de poros no metatarso) em uma linhagem monofilética pertencente ao clado K92 composta pelas subfamílias Progonyleptoidellinae, Sodreaninae e parte de Gonyleptinae. Utilizamos Microscopia Eletrônica de Varredura para descrever as aberturas glandulares e compará-las entre exemplares das três subfamílias analisadas. Encontramos aberturas glandulares sexualmente dimórficas na perna I de uma espécie em Progonyleptoidellinae (de seis analisadas), de uma espécie de Gonyleptinae (de quatro analisadas) e em três espécies de Sodreaninae (de seis analisadas). Com relação às aberturas da perna IV, todos os machos estudados possuem maiores quantidades de poros na perna IV do que as fêmeas exceto uma espécie de Gonyleptinae e uma de Sodreaninae. Os machos de todas as espécies estudadas possuem o astrágalo das pernas IV intumescidos, exceto uma espécie em Progonyleptoidellinae. Portanto as aberturas glandulares sexualmente dimórficas na perna I nos machos mostram-se variáveis na linhagem interna ao clado K92 estudada nesse trabalho. Por outro lado, o intumescimento e quantidade de poros na perna IV dos machos parecem ser conservados na linhagem estudada. Capítulo 2: Morfologia interna das glândulas sexualmente dimórficas de Progonyleptoidellus striatus Roewer 1913 (Opiliones: Laniatores: Gonyleptidae) Apesar de diversos trabalhos sugerirem a presença de glândulas sexualmente dimórficas nas quatro subordens de Opiliones, há poucos trabalhos que investigam essas glândulas histologicamente. Morfologia interna fornece importantes informações sobre o funcionamento e composição das secreções. Para isso, utilizamos técnicas histológicas e ultraestruturais para estudar a morfologia interna de duas glândulas de Progonyleptoidellus striatus (Progonyleptoidellinae): uma no basitarso das pernas I e a outra no metatarso das pernas IV. Adicionalmente, investigamos a composição histológica e ultraestrutural da área glandular no metatarso IV. Encontramos diferenças entre os sexos, tanto na morfologia interna como externa: machos possuem intumescimentos das áreas glandulares e internamente possuem células glandulares ausentes nas fêmeas. Encontramos abundantes retículos endoplasmáticos rugosos, lisos e mitocôndrias, além de Complexo de Golgi bem desenvolvido na perna I dos machos. Diferentemente da perna I, não encontramos retículos endoplasmáticos lisos na perna IV, o que pode implicar em composições de produtos secretórios diferentes para as pernas. Nas duas pernas encontramos abundância de vesículas secretoras / Sexually dimorphic glands may not only be taxonomically informative but can also bring important information about communication between the sexes. In this work we studied the evolution of sexually dimorphic glandular openings on legs I (basitarsus) and legs IV (presence/absence of swollen area and quantity of pores on metatarsus) in a monophyletic lineage belonging to clade K92 that include the subfamilies Progonyleptoidellinae, Sodreaninae and part of Gonyleptinae. We used Scanning Electron Microscopy to describe the glandular openings and compare them among specimens of the three subfamilies analyzed. We found sexually dimorphic glandular openings on legs I of one species in Progonyleptoidellinae (out of six analyzed), one specie of Gonyleptinae (out of four analyzed) and three species of Sodreaninae (out of six analyzed). Concerning glandular openings on legs IV, all males studied have more pores than females except for one species in Gonyleptinae and another in Sodreaninae. Males of all species studied have a swollen astragalus IV, except for one species in Progonyleptoidellinae. Therefore, the glandular openings in leg I in males are shown to be variable for the internal lineage to the Clade K92 studied in this work. On the other hand, the swollen area and the greater quantity of pores on legs IV of males seem to be conserved in the lineage studied. Although several studies suggest the presence of sexually dimorphic glands in the four suborders of Opiliones, there are few studies that investigate these glands histologically. Internal morphology provides important information about the functioning of the glands and the composition of secretions. Here we used histological and ultrastructural techniques to study the internal morphology of two glands of Progonyleptoidellus striatus (Progonyleptoidellinae): one in the basitarsus of legs I and another in the metatarsus of legs IV. We found differences between the sexes, both in internal and external morphology, in which males have swollen of the glandular areas and internally the males have glandular cells, absent in females. We found abundant rough, smooth endoplasmic reticulum and mitochondria, as well as Golgi Complex well developed in legs I of males. In contrast, we did not find smooth endoplasmic reticulum in legs IV, which may result in different compositions of glandular products in each leg. In both legs we found abundance great number of secretory vesicles

Orientador: Shirlei Maria Recco-Pimentel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T09:25:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SiqueiraJunior_Sergio_D.pdf: 45553042 bytes, checksum: e8a175ee3eabcc8492c6fdbca5adf69a (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Terrarana é atualmente o maior táxon da ordem Anura, possuindo cerca de 900 espécies. Recentemente, esse grupo de anuros foi alvo de uma série de modificações taxonômicas. Primeiramente essas espécies foram removidas da família Leptodactylidae e colocadas na sinonímia de Brachycephalidae, e mais tarde alocadas em um novo táxon chamado Terrarana. Atualmente as espécies deste grupo estão distribuídas nas famílias, Eleutherodactylidae, Craugastoridae, Strabomantidae e Brachycephalidae. Embora tenha sido bastante estudado, alguns dos relacionamentos inter- e intragenéricos permanecem não esclarecidos. Devido ao baixo número de espécies amostradas nos estudos filogenéticos, os clados da América do Sul, Strabomantidae e Brachycephalidae, são os grupos que têm as relações filogenéticas menos desvendadas. Neste trabalho foram realizados estudos citogenéticos e da ultra-estrutura dos espermatozóides de algumas espécies de Terrarana dos gêneros, Pristimantis, Ischnocnema, Barycholos, Haddadus e Brachycephalus. As metáfases foram obtidas por suspensão do epitélio intestinal e coradas com Giemsa ou submetidas a técnicas de impregnação por prata (Ag-NOR) e hibridação in situ (FISH) para a detecção das regiões organizadoras do nucléolo e bndamento-C, para a localização da heterocromatina. Os dados da ultra-estrutura dos espermatozóides foram analisados ao microscópio eletrônico de transmissão. As espécies estudadas foram Pristimantis fenestratus (Borba e Manaus, Reserva Florestal Adolfo Ducke, Amazonas e Rio Branco, Acre), P. dundeei (Chapada dos Guimarães, Rondonópolis e Aripuanã, Mato Grosso), P. crepitans (Chapada dos Guimarães e São Vicente, Cuiabá, Mato Grosso), Ischnocnema paulodutrai (Ilhéus, Bahia); I. juipoca (Atibaia e Campos do Jordão, São Paulo), I. guentheri e I. parva (Mogi das Cruzes, São Paulo), Brachycephalus ephippium (Mogi das Cruzes e Atibaia, São Paulo, Barycholos ternetzi (Uberlândia, Minas Gerais e Porto Nacional, Tocantins), e Haddadus binotatus (Mogi das Cruzes e Ilhabela, São Paulo). Os dados citogenéticos foram importantes na caracterização cromossômica das espécies P. fenestratus 2n=34 cromossomos, P. crepitans 2n=22, P. dundeei 2n=28 e I. paulodutrai 2n=30 e ainda B. ternetzi e I. juipoca 2n=22. Os dados citogenéticos revelaram diferenças no bandamento-C e Ag-NOR, sugerindo a existência de espécies ainda não descritas de Pristimantis nas localidades de Manaus, Rio Branco, e Aripuanã, e de Barycholos (Tocantins) identificadas incorretamente como P. fenestratus, P. dundeei e B. ternetzi. A análise citogenética indicou ainda que o baixo número cromossômico em P. crepitans é único dentro do gênero e sugere que esta a mesma não seja proximamente relacionada a espécies congenéricas. As similaridades cariotípicas entre I. paulodutrai e P. dundeei indicam que estas espécies podem ser proximamente relacionadas. Além disso, foi encontrado um caso incomum de variação intra-individual cromossômica no número fundamental de células somáticas de P. fenestratus, que pode estar relacionada com a segregação anômala de cromatides irmãs durante a mitose. A ultra-estrutura dos espermatozóides das espécies brasileiras de P. fenestratus, P. dundeei, P. crepitans, B. ternetzi, B. ephippiun, I. guentheri, I. parva, I. juipoca e H. binotatus revealaram diferenças na estrutura básica do acrossomo, peça intermediária e flagelo, apresentando características distintas dentro da família Brachycephalidae e subfamília trabomantinae, assim como dentro do gênero Pristimantis. Como característica marcante da ultra estrutura dos espermatozóides, observou-se a presença de um bastão paraxonemal em H. binotatus, B. ephippium, B. ternetzi e P. crepitans e a ausência desta estrutura em P. fenestratus, P. dundeei e todos os Ischnocnema amostrados. A divergência ultra-estrutural no bastão paraxonemal é coerente com dados recentes de filogenia molecular, que suportam transferência de H. binotatus do gênero Ischnocnema para um novo táxon e também agrupa as espécies I. guentheri, I. parva e I. juipoca em um mesmo clado. Além disso, a ultra-estructura dos espermatozóides indicou que B. ephippium não é proximamente relacionado as espécies de Ischnocnema, e que a taxonomia das espécie de Brachycephalidae deve ser reexaminada. As análises da ultra-estructura dos espermatozóides também corroboram os dados cromossômicos que indicam que P. crepitans estão erroneamente alocados no gênero Pristimantis e que as espécies I. paulodutrai e P. dundeei são proximamente relacionadas. Apesar do pequeno número de espécies amostradas, os dados citogenéticos e da ultra-estrutura dos espermatozóides de espécies das três famílias dos Terrarana do Brazil, apresentaram características inter- e intragenéricas não conservadas, levantamento de novos questionamentos e fortes evitências da existência de novas espécies. / Abstract: The Terrarana is the largest taxon of the Anura order, comprising 900 species. Recently this anuran group has undergone a series of taxonomical rearrangements. At first, these species were removed from the Leptodactylidae family and transferred to the synonymy of Brachycephalidae, and lately they were placed into a new taxon named Terrarana. Currently, the Terrarana species are distributed in the families, Eleutherodactylidae, Craugastoridae, Strabomantidae and Brachycephalidae. Despite being intensively studied, many aspects of their inter- and intrageneric relationships remain unclear. The South American Strabomantidae and Brachycephalidae are the least known clades regarding molecular phylogeny. In the present work, Brazilian Terrarana species of Pristimantis, Ischnocnema, Barycholos, Haddadus and Brachycephalus were studied by means of cytogenetical and sperm ultrastructural characteristics. Metaphases obtained from suspensions of intestinal epithelium were stained with Giemsa or submitted to silver staining (Ag- NOR) and fluorescence in situ hybridization (FISH) techniques, in order to detect the nucleolus organizing region, and to C-banding for heterochromatin localization. Sperm ultrastructure was analyzed by transmission electron microscopy. The studied species were P. fenestratus (Borba and Manaus at Reserva Florestal Adolfo Ducke, Amazonas, and Rio Branco, Acre), P. dundeei (Chapada dos Guimarães, Rondonópolis, and Aripuanã, Mato Grosso), P. crepitans (Chapada dos Guimarães and São Vicente, Cuiabá, Mato Grosso), Ischnocnema paulodutrai (Ilhéus, Bahia), I. juipoca (Atibaia and Campos do Jordão, São Paulo), I. guentheri and I. parva (Mogi das Cruzes, São Paulo), B. ephippium (Mogi das Cruzes and Atibaia, São Paulo), Barycholos ternetzi (Uberlândia, Minas Gerais, and Porto Nacional, Tocantins), and Haddadus binotatus (Mogi das Cruzes and Ilhabela, São Paulo). The cytogenetical analyses allowed chromosomal characterization of the species P. fenestratus 2n=34 chromosomes, P. crepitans 2n=22, P. dundeei 2n=28 and I. paulodutrai 2n=30, which have not been previously analyzed in phylogenetical studies, in addition to B. ternetzi and I. juipoca 2n=22. The data revealed differences in C-banding and Ag-NOR, which indicated the existence of not yet described Pristimantis species in the Manaus, Rio Branco, and Aripuanã localities, and of Barycholos (from Tocantins) uncorrectly identified as P. fenestratus, P. dundeei and B. ternetzi. The cytogenetical analysis also indicates that the low chromosome number in P. crepitans is unique within this genus and suggests that this species is not closely related to its congeneric species. The karyotypical similarities between I. paulodutrai and P. dundeei indicate that these species could be close relatives. Moreover, an unusual case of intra-individual chromosomal variation in the fundamental number of several somatic cells was found in the P. fenestratus species, which may be a consequence of anomalous segregation of sister chromatids during mitosis. The sperm ultrastructure of the Brazilian species P. fenestratus, P. dundeei, P. crepitans, B. ternetzi, B. ephippiun, I. guentheri, I. parva, I. juipoca and H. binotatus revealed differences in the basic structures of the acrosome, midpiece and flagellum, showing distinct characteristics within the family Brachycephalidae and subfamily Strabomantinae, as well as within the genus Pristimantis. The most remarkable sperm characteristic was an axonemal fiber in H. binotatus, B. ephippium, B. ternetzi and P. crepitans, which has not been observed in P. fenestratus, P. dundeei and in all of the analyzed Ischnocnema specimens. The ultrastructural divergence in the axonemal fiber is in accordance with recent molecular data, which supported the transfer of H. binotatus from the Ischnocnema genus to a new taxon and also grouped the species I. guentheri, I. parva and I. juipoca in a same clade. In addition, the sperm ultrastructure showed that B. ephippium is not closely related to the Ischnocnema species, and that the taxonomy of the Brachycephalidae species should be reexamined. Furthermore, the sperm ultrastructure analysis corroborated chromosomal data indicating that P. crepitans is misallocated in the Pristimantis genus and that the I. paulodutrai and P. dundeei species are close relatives. Despite the small number of studied species, the cytogenetical and ultrastructural data on sperm ultrastructure of the three Brazilian Terrarana families revealed inter- and intrageneric non-conservative characteristics that generate new taxonomic questions within this anuran group and provide strong evidence of the existence of undescribed species in this taxon. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Irani Quagio Grassiotto, Luiz Roberto Malabarba / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-24T19:44:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Baicere-Silva_ClariannaMartins_D.pdf: 11314225 bytes, checksum: beda03a1ee3e0b2d960e66de41e95061 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A família Characidae apresenta 16 subfamílias e noventa e dois gêneros não assinalados a nenhuma subfamília e, portanto, considerados incertae sedis. Neste grupo são inúmeros os problemas taxonômicos/filogenéticos. A maior parte destes gêneros encontravam-se alocados na subfamília Tetragonopterinae, mas dada à falta de evidências de que Tetragonopterinae constitui um grupo monofilético, manteve-se na subfamília apenas o gênero Tetragonopterus. Os gêneros incertae sedis, em Characidae, constituem um grupo imenso e heterogêneo de peixes, predominantemente pequenos, abundantes nos rios e em outros habitats aquáticos da região neotropical. O conhecimento das relações de parentesco entre os Characidae e, consequentemente, entre os antigos Tetragonopterinae, tem por base principalmente características osteológicas, de anatomia de partes moles e, mais recentemente, dados de seqüência molecular. Sabe-se que as características reprodutivas podem conter importantes sinais filogenéticos. Portanto, procedeu-se uma análise filogenética a partir de dados reprodutivos como a estrutura testicular, o tipo de espermiogênese e a ultraestrutura dos espermatozoides de representantes de alguns dos gêneros incertae sedis em Characidae, anteriormente alocados em Tetragonopterinae e outros Characiformes utilizados como grupo externo. A topologia da árvore obtida, foi parcialmente congruente com as hipóteses existentes para o grupo, comprovando a utilidade deste tipo de dado no que se refere à elucidação dos padrões evolutivos em Characidae / Abstract: The family Characidae presents 16 subfamilies and ninety-two genera not reported to any subfamily and therefore considered incertae sedis. In this group there are numerous taxonomic / phylogenetic problems. Most of these genera were allocated in the subfamily Tetragonopterinae, but given the lack of evidence that Tetragonopterinae constitute a monophyletic group, remains the only genus Tetragonopterus in the subfamily. Genera incertae sedis in Characidae are a vast and heterogeneous group of fish, mostly small, abundant in rivers and other aquatic habitats of the Neotropics. Researches of relationships among the Characidae and consequently between the old Tetragonopterinae is based mainly in external morphollogical and osteological features and, more recently, molecular sequence data. It is known that reproductive characteristics may contain significant phylogenetic signals. So we proceeded from a phylogenetic analysis of reproductive data such as testicular structure, the type of spermiogenesis and sperm ultrastructure of representatives of some of the genera incertae sedis in Characidae, previously allocated to Tetragonopterinae and other Characiformes used as outgroup. The tree topology obtained was parcially congruent with the hypotheses exist for the group proving the usefulness of this type of data in relation to elucidate the evolutionary patterns in characid / Doutorado / Biologia Tecidual / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

O conhecimento dos estágios iniciais do desenvolvimento embrionário de peixes é de extrema importância para o estudo de espécies nativas com potencial para a piscicultura, uma vez que permite o estabelecimento de diretrizes para a criação destes animais. Este projeto estudou o desenvolvimento embrionário da piapara (Leporinus elongatus), um peixe de grande importância na pesca esportiva e profissional na bacia dos rios Pardo e Jequitinhonha, visando compreender as fases desse animal em diversos estágios de desenvolvimento, utilizando marcadores ósseos que possibilitaram visualizar o desenvolvimento ósseo da espécie. As Proteínas Ósseas Morfogenéticas (BMP-2 e BMP-4) são consideradas moléculas essenciais reguladoras no desenvolvimento embrionário e na formação óssea, sendo ainda pouco estudadas em peixes; tais proteínas puderam ser observadas apenas no estádio larval até o período juvenil, não sendo evidenciadas nos estágios anteriores. Foram utilizadas também técnicas de Microscopia Eletrônica de Varredura e histológicas, onde foi possível visualizar as fases principais do desenvolvimento embrionário, entre elas, clivagens, diferenciação do embrião, formação dos órgãos principais, abertura de boca, pigmentação dos olhos, surgimento das nadadeiras e sistema branquial, dados estes que facilitam a compreensão sobre a ontogenia; além de criar dados embriológicos e anatômicos dessa espécie ainda pouco explorada, conhecimentos estes, imprescindíveis à biologia pesqueira e cultivo das mesmas, sendo também um auxiliar a novas pesquisas. / The knowledge of the early stages of embryonic development in fish is of great importance for the study of native species with potential for aquaculture, since it allows the establishment of guidelines for the breeding of these animals. This project studied the embryonic development of piapara (Leporinus elongatus), a fish of great importance in professional and amateur fishing from the basin of the Pardo and Jequitinhonha rivers, aiming to understand the various stages of development, using bone markers that allowed observation of the bone development in this species. The Bone Morphogenetic Proteins (BMP-2 and BMP-4) are known as key regulatory molecules in embryonic development and bone formation, and information on this subject is scarce in fish. Results shown these proteins could be observed only between the larval to the juvenile stage, not being seen at earlier stages. Scanning electron microscopy and histological techniques, where it was possible to observe the main stages of embryonic development , including , cleavage , embryo differentiation , development of major organs , mouth opening , eye pigmentation , appearance of fins and gills system. This data contributed for the understanding of ontogeny, and provided embryological and anatomical data that may help other studies like reproductive biology of this species that surely will improve reproductive techniques, important goal for raising the piapara.

Em bovinos, o desenvolvimento embrionário é caracterizado pelo surgimento de duas camadas de células distintas, o trofectoderma e a massa celular interna. Esta última sofrerá diferenciação para formar o disco embrionário constituído pelo epiblasto e hipoblasto. Os trabalhos de caracterização morfológica do epiblasto e hipoblasto em bovinos são necessários uma vez que podem ajudar a elucidar as causas de perdas gestacionais, principalmente nos casos de embriões derivados de produção in vitro. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar ultraestruturalmente o embrião bovino em diferentes fases do desenvolvimento com ênfase nas células do hipoblasto. Para isso, os embriões bovinos com 7, 14 e 16 dias de gestações derivados de técnicas de produção in vitro foram fixados para processamento e realização de microscopia eletrônica de transmissão. De acordo com os resultados obtidos observou-se que os embriões derivados de transferência nuclear de células somáticas e de partenogênese apresentaram grandes modificações na estrutura macro e microscópica. Nestes embriões, o tamanho estava reduzido, a massa celular interna não se apresentou de forma definida. Além disso, as organelas destes embriões, responsáveis por processos de absorção, comunicação, crescimento e metabolismo celular estavam em menor quantidade e tinham modificações quanto à forma, quando comparados aos resultados vistos nos embriões derivados de fertilização in vitro. Assim, verificamos que os blastocistos D7 derivados de transferência nuclear e partenogênese apresentaram graves modificações morfológicas, assim como verificou-se também nas células do hipoblasto dos embriões D14 e D16. / In cattle, the embryo development is characterized by the apperance of two distinct cell layers, the trophectoderm and the inner cell mass. This latter one will siffer a differentiation to form the embryonic disc constituted by the epiblasto and hypoblast. The works on the morphological characterization of the epiblasto and hypoblast in cattle are needed because they may help to elucidate the causes of pregnancy loss, especially in cases of embryos derived from in vitro production. Considering this, the objective of this study was to characterize ultrastrcturally the bovine embryo at different stages of development with emphasis on the hypoblast cells. To do so, bovine embryos at 7, 14 and 16 days of pregnancies derived from in vitro production techniques were fixed for processing and performing transmission electron microscopy. According to the results observed that embryos derived from the nuclear transfer of somatic cells and from parthenogenesis showed significant changes in the macroscopic and microscopic structure. In these embryos, the size was reduced, the inner cell mass has not show a defined shape. Furthermore, the organelles from such embryos, responsible for the absorption processes, communication, growth and cellular metabolism were fewer in number and have changes in shape, when compared to the results seen in embryos derived from in vitro fertilization. Thus, we observed that the blastocyst D7 derived from nuclear transfer and from the parthenogenesis, showed severe morphological changes, as well as for the hypoblastic cells in the D14 and D16 embryos.

Orientador : Sonia Nair Bao / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-31T18:44:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandes_AdriennedePaiva_D.pdf: 14435897 bytes, checksum: bea44487f87ecfb27ba8f5e1dd5f2ee9 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Percevejos fitófagos (Hemiptera, Pentatomidae) são as principais pragas de colheitas economicamente importantes ao redor do mundo, como por exemplo soja, arroz, coco, café, entre outras. Apesar da grande quantidade de informação sobre as espécies-praga, seu dano potencial nas plantas de importância econômica e as formas de controle usadas, fazem com que o impacto dessas pragas na produção de colheitas permaneça em níveis indesejáveis. A caracterização ultra-estrutural da espermiogênese desses insetos poderá, possivelmente, ser importante para direcionar e programar um controle bioquímico e a manipulação genética através de machos estéreis ou semiestéreis. Estudos ultra-estruturais e citoquímicos foram desenvolvidos elucidando as mudanças nucleares e a formação do acrosoma durante a espermiogênese de percevejos fitófagos. Além do mais, foi realizada a detecção ultra-estrutural de cálcio e a imunolocalização de calmodulina e de diferentes formas de tubulinas. A espermiogênese envolve elongação nuclear, condensação cromatínica, formação do acrosoma e desenvolvimento flagelar, com a formação do axonema e dos derivados mitocondriais. O desenvolvimento do núcleo envolve mudanças na forma e no grau de condensação da cromatina que apresenta padrão fibrilar em alguns estágios de diferenciação. O acrosoma é formado pelo complexo de Golgi e pode apresentar características morfológicas pouco comuns aos outros Heteroptera durante o seu desenvolvimento, que conta com a participação de resíduos específicos de carbohidratos e de enzimas como fosfatase ácida, glicose-6-fosfatase e tiaminopirofosfatase. A detecção / localização de cálcio e a imunolocalização de calmodulina indicam uma possível ação conjunta desses dois elementos como reguladores de vários eventos celulares durante a espermiogênese dos percevejos. Ainda, utilizando a imunocitoquímica foram detectados vários isotipos de tubulina durante o período de diferenciação celular. Esses dados indicam que deve existir alguma diferença estrutural e funcional entre os microtúbulos citoplasmáticos e axonemais. Além das modificações morfofuncionais que ocorrem durante a espermiogênese foram descritas as modificações enzimáticas sofridas pelo espermatozóide 20 h e 40 h após à cópula, O processo de espermiogênese também foi analisado durante a diapausa adulta de duas espécies de percevejos fitófagos. Os resultados indicam que durante esse período a espermiogênese é descontinuada e para isso conta com a participação de eventos com padrão apoptótico e fagocítico / Abstract: Phytophagous stink bugs (Hemiptera, Pentatomidae) are the main pests of economically important crops throughout the world, such as soybean, rice, cocoa and coffee among others. Despite the amount of information regarding pest species, their damage potential to economically important plants, and control measures used, the pests impact on the production of crops remains at undersirable levels. The ultrastructural characterization of these insects spermiogenesis would be important to programs directed towards the biochemical control of these insect pests and genetic manipulation through sterile and semisterile males. Ultrastructurals and cytochemical studies were carried out on nuclear changes and acrosome formation during spermiogenesis of the phytophagous bug. Indeed, was done the ultrastructural detection of calcium and the immunolocated of calmodulin as well as severaI tubulins isoforms. The spermiogenesis involves nuclear elongation, chromatin condensation, acrosomal formation and flagellar development along with formation of the axoneme as well as mitochondrial derivatives. The development of the nucleus involves changes in the shape and in degree of chromatin condensation which presents fibrillar pattern during some stages of differentiation. The acrosome is formed by the Golgi complex and can be present unusual morphological features with the other Heteroptera during its development, whose take the participation of specific carbohidrate residues and enzymes as acid phosphatase, glucose-6phosphatase and thiaminepyrophosphatase. The calcium detection and the immunolocated of calmodulin suggest that they act toghether as regulators of several cellular events during the bugs spermiogenesis. Moreover, using immunocytochemistry were detected several tubulins isotypes during this cellular differentiation period. These data suggest that could be exist some structural and funcional diferences between cytoplasmic and axonemal microtubules. Besides the morphofunctional modifications úndergone during spermiogenesis, we described the enzimatic modifications undergone to the spermatozoon 20 h and 40 h after copulation. The spermiogenesis process was analised during adult diapause of two phytophagous bugs species. The results indicate that during this period the spermiogenesis is discontinued and for this, takes off cellular events with apoptotic and phagocytic pattern / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Lea Rodrigues Simioni, Maria Alice Cruz-Hofling / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T06:55:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cogo_JoseCarlos_D.pdf: 14244533 bytes, checksum: f92b7d3b01d031de9913d42d8deaa4ea (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Duas frações com atividade fosfolipásica ('PLA IND. 2¿) foram isoladas do veneno total de Bothrops insularis através de 2 processos de fracionamento: gel de Sephadex G-75 em tampão formato de amônio 50 mM, pH 3,5 e gel de Sephadex G-150 em tampão fosfato salina (PBS) 0,1M, pH 7,2 seguido por cromatografia de troca iônica em DEAE Sephadex em tampão bicarbonato de amônio 0,01 M, pH 8,0. A fração isolada em pH ácido mostrou-se menos efetiva que a fração obtida em pH neutro. Esta última reproduziu todos os efeitos farmacológicos observados com o veneno total. Estes foram associados apenas à atividade ('PLA IND. 2¿) pois a fração é desprovida de atividades esterásica, coagulante e caseinolítica. Utilizando técnicas de eletrofisiologia, miografia, determinação dos níveis de creatino quinase (CQ) e estudos das alterações morfológicas (músculos incubados com r- a fração ('PLA IND. 2¿) ou injetados com o veneno e fração ('PLA IND. 2¿) e comparando nossos resultados com aqueles existentes na literatura, chegamos às seguintes conclusões: 1) Alterações miográficas induzidas pela fração ('PLA IND. 2¿) isolada em pH neutro,caracterizam-se pela facilitação da neurotransmissão (aumento da amplitude de contração muscular e aumento da freqüência dos potenciais em miniatura da placa terminal) seguida por bloqueio das contrações musculares. O bloqueio induzido por esta fração, mostrou-se dose-tempo dependente e irreversível após a lavagem da preparação. A ('PLA IND. 2¿) isolada em pH ácido promoveu a facilitação da neurotransmissão mas não promoveu o bloqueio das contrações musculares. 2) Os efeitos da redução da temperatura de incubação e da substituição de Ca2+por Sr2+ no meio nutritivo, inibindo o efeito bloqueador da fração ('PLA IND. 2¿), sugere a existência de uma relação entre as atividades enzimática e farmacológica. 3) A ('PLA IND. 2¿) foi capaz de liberar CQ dos músculos biventer cervicis incubados, em consonância com os efeitos observados diretamente nos músculos incubados tanto em microscopia óptica como nos músculos injetados, analisados com microscopia eletrônica. 4) O soro anti-botrópico (comercial) neutralizou apenas parcialmente a liberação de CQ e bloqueio das contrações musculares. A existência de componentes específicos, que não se encontram nos venenos botrópicos utilizados na imunização, põe novamente em destaque a alta especialização alcançada pela Bothrops insularis. 5) As alterações ultraestruturais induzidas pelo veneno bruto atingem a junção neuromuscular, os axônios mielínicos e as fibras musculares. Incluem também alterações vasculares e vasculotóxicas com conseqüente efeitos hemorrágicos. 6) As alterações ultraestruturais induzidas pela fração ('PLA IND. 2¿) são mais brandas. Atingem tanto a porção pré-sináptica, como a porção do músculo. No músculo afetam principalmente o retículo sarcoplasmático (distúrbio iônico provável), o túbulo T (em menor grau), e a organização miofibrilar. Células musculares mionecróticas são em menor número do que as afetadas pelo veneno bruto. Por outro lado, os efeitos hemorrágicos parecem ser mais proeminentes / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Ciências Biológicas

Introdução: Recentemente muitas são as funções atribuídas ao colágeno V em condições fisiológicas normais e em algumas doenças, como na esclerodermia. Esta proteína apresenta características estruturais singulares de regulação do diâmetro das fibrilas heterotípicas, e imunogenicidade, sendo capaz de desencadear uma resposta imune independente. Em descobertas recentes, desenvolvidas por nosso grupo, ficou evidenciado que o colágeno V apresenta histoarquitetura anômala, aumentando a sua imunoexpressão na pele e pulmão em estágios iniciais da doença, assim como, aumento do RNAm de suas cadeias, principalmente alfa2(V). Por esta razão e com o intuito de entender sobre os processos moleculares e ultraestruturais que correlacionam o COL V à fibrose na ES, a proposta do presente estudo foi realizar análise morfológica e ultraestrutural das cadeias, alfa1(V) e alfa2(V), da pele de pacientes com ES, assim como avaliar a influência do gene COL5A2 na fibrilogênese. Pacientes e Métodos: As análises foram desenvolvidas utilizando fragmento de pele obtidas de biópsia, tanto de pacientes como controles, sob aprovação do comitê de ética (CAPPesq 0331/10) e de acordo com Declaração de Helsinque. Participaram do estudo 7 pacientes (homens=3, mulheres=4) diagnosticados com ES há dois anos ou menos, e indivíduos voluntários saudáveis (n=7) utilizados como grupo controle. A biópsia das peles foi dividida para dois grupos de análises: estudos histológicos e cultura de fibroblastos; sob solução de formol a 10%, foram realizadas análises histomorfométricas [coloração de Hematoxilina e Eosina (H e E), Tricrômico de Masson, imunofluorescência (IM) para cadeias alfa1(V) e alfa2(V), e reconstrução tridimensional (Zeiss LSM 510 META/UV)], e em solução de glutaraldeído 2% para análise ultraestrutural (microscopia eletrônica de transmissão com imunomarcação com ouro coloidal). A quantificação das cadeias foi realizada por histomorfometria, através de análise de imagem utilizando o software Image Pro-Plus 6.0. Já a cultura de fibroblastos foi desenvolvida para avaliar: distribuição e perfil das cadeias alfa1(V) e alfa2(V) [reconstrução 3D (Zeiss LSM 510 META/UV)],expressão gênica COL5A1, COL5A2 e ITGA2 [qRT-PCR (Applied Biosystems)], e inibição temporária do gene COL5A2. Resultados: Na análise morfológica (H&E e Masson) observou-se modificação da histoarquitetura da pele dos pacientes, com espessamento e retificação da epiderme devido ao aumento na densidade das fibras colágenas, com projeções das papilas dérmicas em direção à derme papilar. Esse resultado foi confirmado na quantificação das cadeias (IM), evidenciado por perda acentuada da cadeia alfa1(V) na derme papilar [12,77 ± 1,344 vs 66,84± 3,36 (p < 0,0001)] e aumento significante da expressão da cadeias alfa1(V) e alfa2(V) na derme reticular alfa1(V) [7,657 ± 0,2133 vs 13,75 ± 0,958 ( p < 0,0001)] e alfa2(V) [5,072 ± 0,4117 vs 21,07 ± 0,790 (p=0,001)] dos pacientes quando comparados ao controle. Assim como visto na imunomarcação com ouro coloidal das cadeias do COLV, houve ausência de expressão linear da cadeia alfa1(V) na derme papilar, contrastando com a expressão da mesma na pele de controles, se contrapondo a forte imunoexpressão das cadeias alfa1(V) e alfa2(V) com uma maior evidência da cadeia alfa2(V) na região espessada pela junção lâmina basal e derme reticular. A reconstrução 3D em cultura de fibroblastos dérmicos demonstrou grande atividade das células de pacientes com ES, confirmado na expressão gênica dos COL5A1, COL5A2 e ITGA2, que se mostraram aumentados significantemente nos pacientes em relação ao controle. Por fim, após inibição do COL5A2 houve uma tendência ao aumento na expressão do COL5A1, e superexpressão da ITGA2. Conclusão: A alteração dérmica observada em pacientes com ES esta correlacionada com a modificação na distribuição das cadeias alfas do COLV, principalmente por perda acentuada da alfa1(V)3 homotrímera na derme papilar e superexpressão da alfa2(V) em capilares e vasos, interferindo na formação de matriz extracelular normal, sugerindo uma alteração pós traducional desta proteína, e que maiores estudos sobre a inibição da cadeia alfa2(V) são importantes para uma futura terapia gênica para atenuar os sintomas desencadeados nesta patologia / Introduction: Recently many functions are attributed to type V collagen in normal physiological conditions and in some diseases, such as scleroderma. This protein presents unique structural features for regulating the diameter of fibrils heterotypic and immunogenicity being capable of eliciting an immune response independent. In recent discoveries, developed by our group, it was evident that collagen V presents anomalous histoarchitecture, increasing the immunoexpression in the skin and lung in the early stages of the disease, as well as increased mRNA of his chains, mainly alpha2(V). For this reason and in order to understand the molecular and ultrastructural processes that correlate COL V fibrosis in SSc, the purpose of this study was to perform morphological and ultrastructural analysis of the chains alpha1(V) and alpha2(V) of the patient´s skin with ES, as well as to assess the influence of the COL5A2 gene in fibrillogenesis. Patients and Methods: The analyses were developed using skin fragment obtained from biopsy, both of patients and controls, under the approval of the ethics committee (CAPPesq 0331/10) and in accordance with the Declaration of Helsinki. The study included 7 patients (male = 3, female = 4) diagnosed with ES for two years or less, and healthy volunteers (n = 7) used as a control group. The biopsy of the skin was divided in two groups of analyzes: histological studies and cultured fibroblasts; Under formaldehyde solution 10%, histomorphometric analysis [staining with hematoxylin and eosin (H e E), Masson\'s trichrome, immunofluorescence (IM) to alpha1(V) and alpha2(V) chains, and three-dimensional reconstruction (Zeiss LSM 510 META were performed/UV), and in a solution of 2% glutaraldehyde for ultrastructural analysis (transmission electron microscopy with immunostaining with colloidal gold). Quantitation was performed by the chain histomorphometry by image analysis using Image Pro-Plus 6.0 software. Already a fibroblast culture was developed to assess: distribution and profile of the alpha1(V) and alpha2(V) chains, 3D reconstruction (Zeiss LSM 510 META / UV), gene expression of COL5A1, COL5A2 and ITGA2 [RT-qPCR (Applied Biosystems)], and temporary inhibition of the COL5A2 gene. Results: In the morphological analysis (H&E and Masson) was observed modification of histoarchitecture patient\'s skin, with thickening and rectification of the epidermis due to increased density of collagen fibers, with projections of dermal papillae toward the papillary dermis. This result was confirmed by quantification of the chains (IM), evidenced by marked loss of the alpha1(V) chain in the papillary dermis [12.77 ± 1.344 vs 66.84 ± 3.36 (p < 0.0001)] and significant increase in the expression of alpha1(V) and alpha2(V) chains, in the reticular dermis alpha1(V) chain [0.2133 ± 7.657 vs 0.958 ± 13.75 (p < 0.0001)] alfa2(V) chain [5.072 ± 0.4117 vs 21.07 ± 0.790 (p = 0.001)] of patients when compared to control. As seen in the immunostaining with colloidal gold chains of COLV, there was no linear expression of the alpha1(V) chain in the papillary dermis, contrasting with the same expression on the skin of controls, in contrast to strong immunoexpression of alpha1(V) and alpha2(V) chains, with a higher evidence of alpha2(V) chain in the junction region by a thickened basement membrane and reticular dermis. The 3D reconstruction of dermal fibroblasts in culture demonstrated large cell activity of patients with SSc, confirmed the gene expression of COL5A1, COL5A2 and ITGA2, which showed significantly increased in patients compared to control. Finally, after inhibition of COL5A2 there was a trend to increase in the expression of the COL5A1, and overexpression of ITGA2. Conclusion: The dermal alteration observed in SSc patients is correlated with the change in the distribution of the collagen alpha (V) chains, mainly by marked loss of alpha1(V)3 homotrimer the papillary dermis and overexpression of the alpha2(V) in capillaries and vessels, interfering with the normal extracellular matrix formation, suggesting a post-translational modification of this protein, and further studies on the inhibition of chain alpha2(V) are important for future gene therapy to attenuate the symptoms of this pathology triggered