Introdução: Recentemente muitas são as funções atribuídas ao colágeno V em condições fisiológicas normais e em algumas doenças, como na esclerodermia. Esta proteína apresenta características estruturais singulares de regulação do diâmetro das fibrilas heterotípicas, e imunogenicidade, sendo capaz de desencadear uma resposta imune independente. Em descobertas recentes, desenvolvidas por nosso grupo, ficou evidenciado que o colágeno V apresenta histoarquitetura anômala, aumentando a sua imunoexpressão na pele e pulmão em estágios iniciais da doença, assim como, aumento do RNAm de suas cadeias, principalmente alfa2(V). Por esta razão e com o intuito de entender sobre os processos moleculares e ultraestruturais que correlacionam o COL V à fibrose na ES, a proposta do presente estudo foi realizar análise morfológica e ultraestrutural das cadeias, alfa1(V) e alfa2(V), da pele de pacientes com ES, assim como avaliar a influência do gene COL5A2 na fibrilogênese. Pacientes e Métodos: As análises foram desenvolvidas utilizando fragmento de pele obtidas de biópsia, tanto de pacientes como controles, sob aprovação do comitê de ética (CAPPesq 0331/10) e de acordo com Declaração de Helsinque. Participaram do estudo 7 pacientes (homens=3, mulheres=4) diagnosticados com ES há dois anos ou menos, e indivíduos voluntários saudáveis (n=7) utilizados como grupo controle. A biópsia das peles foi dividida para dois grupos de análises: estudos histológicos e cultura de fibroblastos; sob solução de formol a 10%, foram realizadas análises histomorfométricas [coloração de Hematoxilina e Eosina (H e E), Tricrômico de Masson, imunofluorescência (IM) para cadeias alfa1(V) e alfa2(V), e reconstrução tridimensional (Zeiss LSM 510 META/UV)], e em solução de glutaraldeído 2% para análise ultraestrutural (microscopia eletrônica de transmissão com imunomarcação com ouro coloidal). A quantificação das cadeias foi realizada por histomorfometria, através de análise de imagem utilizando o software Image Pro-Plus 6.0. Já a cultura de fibroblastos foi desenvolvida para avaliar: distribuição e perfil das cadeias alfa1(V) e alfa2(V) [reconstrução 3D (Zeiss LSM 510 META/UV)],expressão gênica COL5A1, COL5A2 e ITGA2 [qRT-PCR (Applied Biosystems)], e inibição temporária do gene COL5A2. Resultados: Na análise morfológica (H&E e Masson) observou-se modificação da histoarquitetura da pele dos pacientes, com espessamento e retificação da epiderme devido ao aumento na densidade das fibras colágenas, com projeções das papilas dérmicas em direção à derme papilar. Esse resultado foi confirmado na quantificação das cadeias (IM), evidenciado por perda acentuada da cadeia alfa1(V) na derme papilar [12,77 ± 1,344 vs 66,84± 3,36 (p < 0,0001)] e aumento significante da expressão da cadeias alfa1(V) e alfa2(V) na derme reticular alfa1(V) [7,657 ± 0,2133 vs 13,75 ± 0,958 ( p < 0,0001)] e alfa2(V) [5,072 ± 0,4117 vs 21,07 ± 0,790 (p=0,001)] dos pacientes quando comparados ao controle. Assim como visto na imunomarcação com ouro coloidal das cadeias do COLV, houve ausência de expressão linear da cadeia alfa1(V) na derme papilar, contrastando com a expressão da mesma na pele de controles, se contrapondo a forte imunoexpressão das cadeias alfa1(V) e alfa2(V) com uma maior evidência da cadeia alfa2(V) na região espessada pela junção lâmina basal e derme reticular. A reconstrução 3D em cultura de fibroblastos dérmicos demonstrou grande atividade das células de pacientes com ES, confirmado na expressão gênica dos COL5A1, COL5A2 e ITGA2, que se mostraram aumentados significantemente nos pacientes em relação ao controle. Por fim, após inibição do COL5A2 houve uma tendência ao aumento na expressão do COL5A1, e superexpressão da ITGA2. Conclusão: A alteração dérmica observada em pacientes com ES esta correlacionada com a modificação na distribuição das cadeias alfas do COLV, principalmente por perda acentuada da alfa1(V)3 homotrímera na derme papilar e superexpressão da alfa2(V) em capilares e vasos, interferindo na formação de matriz extracelular normal, sugerindo uma alteração pós traducional desta proteína, e que maiores estudos sobre a inibição da cadeia alfa2(V) são importantes para uma futura terapia gênica para atenuar os sintomas desencadeados nesta patologia / Introduction: Recently many functions are attributed to type V collagen in normal physiological conditions and in some diseases, such as scleroderma. This protein presents unique structural features for regulating the diameter of fibrils heterotypic and immunogenicity being capable of eliciting an immune response independent. In recent discoveries, developed by our group, it was evident that collagen V presents anomalous histoarchitecture, increasing the immunoexpression in the skin and lung in the early stages of the disease, as well as increased mRNA of his chains, mainly alpha2(V). For this reason and in order to understand the molecular and ultrastructural processes that correlate COL V fibrosis in SSc, the purpose of this study was to perform morphological and ultrastructural analysis of the chains alpha1(V) and alpha2(V) of the patient´s skin with ES, as well as to assess the influence of the COL5A2 gene in fibrillogenesis. Patients and Methods: The analyses were developed using skin fragment obtained from biopsy, both of patients and controls, under the approval of the ethics committee (CAPPesq 0331/10) and in accordance with the Declaration of Helsinki. The study included 7 patients (male = 3, female = 4) diagnosed with ES for two years or less, and healthy volunteers (n = 7) used as a control group. The biopsy of the skin was divided in two groups of analyzes: histological studies and cultured fibroblasts; Under formaldehyde solution 10%, histomorphometric analysis [staining with hematoxylin and eosin (H e E), Masson\'s trichrome, immunofluorescence (IM) to alpha1(V) and alpha2(V) chains, and three-dimensional reconstruction (Zeiss LSM 510 META were performed/UV), and in a solution of 2% glutaraldehyde for ultrastructural analysis (transmission electron microscopy with immunostaining with colloidal gold). Quantitation was performed by the chain histomorphometry by image analysis using Image Pro-Plus 6.0 software. Already a fibroblast culture was developed to assess: distribution and profile of the alpha1(V) and alpha2(V) chains, 3D reconstruction (Zeiss LSM 510 META / UV), gene expression of COL5A1, COL5A2 and ITGA2 [RT-qPCR (Applied Biosystems)], and temporary inhibition of the COL5A2 gene. Results: In the morphological analysis (H&E and Masson) was observed modification of histoarchitecture patient\'s skin, with thickening and rectification of the epidermis due to increased density of collagen fibers, with projections of dermal papillae toward the papillary dermis. This result was confirmed by quantification of the chains (IM), evidenced by marked loss of the alpha1(V) chain in the papillary dermis [12.77 ± 1.344 vs 66.84 ± 3.36 (p < 0.0001)] and significant increase in the expression of alpha1(V) and alpha2(V) chains, in the reticular dermis alpha1(V) chain [0.2133 ± 7.657 vs 0.958 ± 13.75 (p < 0.0001)] alfa2(V) chain [5.072 ± 0.4117 vs 21.07 ± 0.790 (p = 0.001)] of patients when compared to control. As seen in the immunostaining with colloidal gold chains of COLV, there was no linear expression of the alpha1(V) chain in the papillary dermis, contrasting with the same expression on the skin of controls, in contrast to strong immunoexpression of alpha1(V) and alpha2(V) chains, with a higher evidence of alpha2(V) chain in the junction region by a thickened basement membrane and reticular dermis. The 3D reconstruction of dermal fibroblasts in culture demonstrated large cell activity of patients with SSc, confirmed the gene expression of COL5A1, COL5A2 and ITGA2, which showed significantly increased in patients compared to control. Finally, after inhibition of COL5A2 there was a trend to increase in the expression of the COL5A1, and overexpression of ITGA2. Conclusion: The dermal alteration observed in SSc patients is correlated with the change in the distribution of the collagen alpha (V) chains, mainly by marked loss of alpha1(V)3 homotrimer the papillary dermis and overexpression of the alpha2(V) in capillaries and vessels, interfering with the normal extracellular matrix formation, suggesting a post-translational modification of this protein, and further studies on the inhibition of chain alpha2(V) are important for future gene therapy to attenuate the symptoms of this pathology triggered

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-10-03T18:43:06Z No. of bitstreams: 1 2016 - Jorge Ant?nio Casagrande Bretas.pdf: 2891351 bytes, checksum: 638557595a03b65975bc6e16746991f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T18:43:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016 - Jorge Ant?nio Casagrande Bretas.pdf: 2891351 bytes, checksum: 638557595a03b65975bc6e16746991f8 (MD5) Previous issue date: 2016-08-29 / CAPES / The fat body of insects is involved in very important functions. Thus, the fat body, besides acting as a reserve site and synthesis of proteins, carbohydrates and lipids participates in the production of substances with action on the immune system, detoxification, production of eggs, sperm and pheromone. However, the main function of the fat body is the reserve of lipids. The fat body of insects is usually divided into two regions, the visceral fat body, located near the digestive tract, and the parietal fat body, located near the cuticle. The cell types found in the fat body of insects vary, being found only one type in some and more than ten kinds in others. The main cell types found in the fat body of insects are trophocytes, urocytes and oenocytes. The morphology and biochemistry of fat body Lutzomyia longipalpis, the main vector of visceral leishmaniasis in the Americas, was examined by light microscopy, electron microscopy and high-performance thin layer chromatography. Thus, cuts through the abdomen of adult males and females showed that the fatty body is divided into two main components, in accordance with the spatial distribution in the insect's body: one parietal part which is located just under the cuticle and other visceral which is distributed suspended lobes and often associated with tracheas in hemocele. The fat body of L. longipalpis contains only one cell type, trophocyte, which has a large amount of lipid droplets, protein and glycogen granules in their cytoplasm rosettes. The lipid composition varies according to the physiological and insect species. The neutral lipid stored in fat body found more insects is the triacylglycerol. In addition, small amounts of diacylglycerol, steroids, free fatty acids, carotenoids and monoglycerides are carried by lipoforina (major lipoprotein of the insects). The diacylglycerol is derived from triglycerides stored in fat body and is the main form of fatty acid which are recruited to sites of utilization such as flight muscles, for example. Biochemical analysis of the abdominal tergites L. longipalpis males, by high-performance thin layer chromatography, showed the presence of different classes of neutral lipid (mono-, di- and triacylglycerols, fatty acids, cholesterol and esterified cholesterol) and phospholipids (phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol, lysophosphatidylcholine) in the fat body. Furthermore, the lipid composition of the abdominal tergites varied, with the highest amount of lipids extracted from the fourth tergite, which has pheromone producing gland. Finally, the main neutral lipid extracted from the fat body of L. longipalpis was the triacylglycerol and the main phospholipid was phosphatidylethanolamine. / O corpo gorduroso dos insetos est? envolvido em fun??es de grande import?ncia. Assim, o corpo gorduroso, al?m de atuar como s?tio de reserva e s?ntese de prote?nas, carboidratos e lip?dios participa da produ??o de subst?ncias com a??o no sistema imune, detoxifica??o, produ??o dos ?vulos, espermatozoides e de ferom?nios. Contudo, a principal fun??o do corpo gorduroso ? a reserva de lip?dios. O corpo gorduroso dos insetos normalmente ? dividido em duas regi?es, o corpo gorduroso visceral, localizado pr?ximo do tubo digestivo, e o corpo gorduroso parietal, localizado pr?ximo da cut?cula. Os tipos celulares encontrados no corpo gorduroso dos insetos variam, sendo encontrado apenas um tipo em alguns e mais de dez tipos em outros. Os principais tipos celulares encontrados no corpo gorduroso dos insetos s?o os trof?citos, ur?citos e os oen?citos. A morfologia e a bioqu?mica do corpo gorduroso de Lutzomyia longipalpis, o principal vetor da leishmaniose visceral nas Am?ricas, foi analisado por microscopia de luz, microscopia eletr?nica e cromatografia em camada fina de alta performance. Assim, cortes atrav?s do abd?men de machos e f?meas adultas mostraram que o corpo gorduroso ? dividido em dois componentes principais, de acordo com a distribui??o espacial no corpo do inseto: uma parte parietal que est? localizada logo abaixo da cut?cula, e outra visceral que est? distribu?da em l?bulos suspensos e frequentemente associado a traqueias na hemocele. O corpo gorduroso de L. longipalpis cont?m somente um tipo celular, o trof?cito, o qual possui grande quantidade de got?culas de lip?dios, gr?nulos de prote?na e rosetas de glicog?nio em seu citoplasma. A composi??o lip?dica varia de acordo com a condi??o fisiol?gica e esp?cie do inseto. O lip?dio neutro estocado mais encontrado no corpo gorduroso de insetos ? o triacilglicerol. Al?m disso, pequenas quantidades de diacilglicerol, esteroides, ?cidos graxos livres, carotenoides e monoacilglicerois s?o transportadas por lipoforina (maior lipoprote?na dos insetos). O diacilglicerol ? derivado de triacilglicerois estocados no corpo gorduroso e constitui a principal forma de acido graxo que s?o mobilizadas para os s?tios de utiliza??o tal como os m?sculos de voo, por exemplo. A an?lise bioqu?mica dos tergitos abdominais de machos de L. longipalpis, atrav?s de Cromatografia em camada fina de alta performance, mostrou a presen?a de diferentes classes de lip?dios neutros (mono-, di- e triacilglicerois, ?cidos graxos, colesterol e colesterol esterificado) e fosfolip?dios (fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol, lisofosfatidilcolina) no corpo gorduroso. Al?m disso, a composi??o lip?dica entre os tergitos abdominais variou, sendo a maior quantidade de lip?dios extra?dos do quarto tergito, o qual possui gl?ndulas produtoras de ferom?nio. Finalmente, o principal lip?dio neutro extra?do do corpo gorduroso de L. longipalpis foi o triacilglicerol e o principal fosfolip?dio foi a fosfatidiletanolamina.

Orientador: Carmem Silvia Fontanetti Christofoletti / Coorientador: Lucilene Delazari dos Santos / Banca: Ana Maria Costa Leonardo / Banca: Roberta Cornelio Ferreira Nocelli / Resumo: Diplópodos são animais intimamente envolvidos com a manutenção do ecossistema, pois apresentam uma contribuição bastante significativa para o meio ambiente; revolvem o solo durante a locomoção, o que ocasiona aeração do mesmo e melhora a ação de microrganismos, na medida em que auxiliam no aumento da microflora através de suas fezes e através da alimentação de matéria orgânica em decomposição. Estes animais não apresentam populações numerosas, mas podem ocorrer explosões populacionais, decorrentes de mudanças climáticas, utilização de pesticidas entre outros desequilíbrios ambientais. Apresentam poucos predadores devido ao exoesqueleto resistente que os tornam impalatáveis, além da presença de glândulas de defesa que liberam fortes substâncias de ação repulsiva. As estratégias de defesa dos milípedes podem ser classificadas em físicas e químicas, onde se destacam o ato de enrolar-se e o fluído defensivo, respectivamente. O milípede Urostreptus atrobrunneus tem apresentado pontos de infestação em centros urbanos do estado de São Paulo, causando muitos transtornos à população humana. Por se tratar de uma espécie pouco conhecida, realizar um estudo sobre as glândulas de defesa destes animais é interessante, uma vez que a mesma vem apresentando um maior contato com populações humanas e de outros animais. Face ao exposto foi objetivo deste trabalho: 1) Realizar uma revisão sobre os mecanismos de defesa dos milípedes, comparando-os com os encontrados nos artrópodes e correlacionando as semelhanças observadas entre os grupos. 2) Descrever a morfologia da glândula de defesa do milípede U. atrobrunneus por meio de técnicas histológica, histoquímica e ultraestrutural. 3) Analisar os compostos voláteis presentes na secreção defensiva do milípede por meio da cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (GC-MS). As análises permitiram verificar que a glândula de defesa... / Abstract: Diplopods are animals intimately involved in ecosystem maintaining since they show a very significant contribution to the environment; revolve the ground during transportation, which leads to aeration of the same and improves the action of microorganisms, to the extent that assist in the microflora increase a through their feces and by feeding on decaying organic matter. These animals do not have large populations, but population explosions resulting from climate change, use of pesticides and other environmental imbalances. Have few predators due to the tough exoskeleton that make them unpalatable, and the presence of defensive glands that release substances of strong repulsive action. The defense strategies of millipedes can be classified into physical and chemical, which highlights the act of rolling up and defensive fluid, respectively. The millipede Urostreptus atrobrunneus have presented points of infestation in urban centers of the São Paulo state, Brazil, causing much disruption to the human population. Because it is a little-known species, conduct a study on the defense glands of these animals is interesting, since it has shown greater contact with human populations and other animals. Given the above, the objective of this study was: 1) Conduct a review of the millipedes defense mechanisms, comparing them with those found in arthropods and correlating the similarities observed between the groups. 2) Describe the morphology of the defense gland millipede U. atrobrunneus by histological, histochemical and ultrastructural techniques. 3) Analyze the volatile compounds present in the defensive secretion of the millipede by coupled mass spectrometry gas chromatography (GC- MS). The analysis allows to verify that the gland 's defense of U. atrobrunneus is of type 2, according to the classification proposed in the literature by Eisner et al. (1978) for glands defense diplopods; this gland is composed of a spherical glandular bag fitted... / Mestre

Orientador: Daniela Carvalho dos Santos / Resumo: O bicho-da-seda, Bombyx mori (Lepidoptera: Bombycidae), é o inseto de maior importância econômica na produção de seda. A lagarta se alimenta de folhas de amoreira e é altamente sensível a agrotóxicos, assim o uso destes em culturas agrícolas circunvizinhas às plantações de amoreira pode afetar o desenvolvimento de B. mori, acarretando em desequilíbrio nas suas funções metabólicas e, consequentemente, comprometendo a produção de casulos. Entre estes agrotóxicos, destaca-se o Novaluron, inseticida inibidor da síntese de quitina nos insetos e empregado no controle de insetos pragas de culturas agrícolas próximas as plantações de amoreira. Assim, investigamos os efeitos tóxicos de Novaluron no desenvolvimento de B. mori. Lagartas de B. mori, foram separadas em dois grupos experimentais: grupo controle (GC) e grupo tratamento (GT: tratado com 0, 15 mL/L de Novaluron). Após ecdise do 2° para o 3° instar, lagartas do GT foram alimentadas por 24 horas com folhas de amoreira tratadas com o inseticida. Paralelamente foi realizada uma nova exposição, porém em lagartas que realizavam a ecdise do 4° para o 5° instar. Lagartas, pupas e adultos de B. mori foram anestesiadas e segmentos do intestino médio, glândula da seda e órgãos reprodutores retirados e processados convencionalmente para técnicas de microscopias de luz, eletrônica e imunohistoquímica. Além disso, os efeitos no desenvolvimento, reprodução e qualidade do casulo também foram avaliados. O Novaluron provocou efeitos citotóxico... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The silkworm, Bombyx mori (Lepidoptera: Bombycidae is the insect of major economic importance in the production of silk. The larvae feeds on mulberry leaves and is highly sensitive to agrochemicals, thus the use of these in agricultural crops surrounding the mulberry plantations can affect the development of B. mori, causing an imbalance in its metabolic functions and, consequently, compromising the production of cocoons. Among these agrochemicals, stands out the Novaluron, an insecticide inhibitor of the synthesis of chitin in insects and used in the control of insect pests of crops near mulberry plantations. Thus, we investigated the lethal and sublethal effects of Novaluron on the development of B. mori. Larvae were selected into two experimental groups: control group (CG) and treatment group (TG: treated with 0, 15 mL/L Novaluron). After ecdysis from the 2nd to the 3rd instar, the TG larvae were fed for 24 hours with mulberry leaves treated with the insecticide. In parallel, a new exposition was carried out, however in larvae that carry out the ecdysis from the 4th to the 5th instar. B. mori larvae, pupae and adults were anesthetized and segments of the midgut, silk gland and reproductive organs were removed and processed conventionally for light microscopy, electron microscopy and immunohistochemistry. In addition, the effects on the development, reproduction and quality of the cocoon were also evaluated. Novaluron caused cytotoxic effects on the midgut and the silk glan... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O Gambá-de-Orelha-Branca (Didelphis albiventris) é um marsupial que ocupa uma ampla variedade de habitats, desde florestas até áreas urbanas, em diversos biomas brasileiros e apresenta um importante papel na disseminação de sementes. O objetivo desta pesquisa é estudar a morfologia lingual desta espécie. As línguas foram coletadas de animais encontrados mortos em estradas no estado do Rio Grande do Sul ou ainda de cadáveres de animais oriundos do Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre (NURFS/ UFPel). As amostras foram submetidas para processamento para as técnicas de microscopias de luz (ML) e eletrônicas de varredura (MEV) e transmissão (MET). Através da ML observamos o epitélio estratificado pavimentoso e o brotamento das papilas em fetos, o desenvolvimento das papilas linguais em animais infantis e as características das papilas totalmente desenvolvidas em adultos. Pelas colorações de Azan e Picrosirius observamos que o colágeno está localizado principalmente sob o epitélio. Através da MEV a análise da camada epitelial revelou três tipos de papilas filiformes com diferentes morfologias de acordo com a região. As papilas fungiformes estão dispersas pelo ápice e corpo linguais, e parcialmente cobertas por uma elevação de mucosa. Papilas circunvaladas são em número de 3 e formam um triângulo na raiz lingual. Papilas foliadas são pequenas e delgadas elevações no bordo caudolateral da língua, em número varíavel de 13-18 projeções. Os tecidos subepiteliais das papilas fungiformes, circunvaladas e foliadas apresentam uma superfície irregular com algumas depressões dorsalmente. Através da MET o estrato córneo demonstrou, para adultos e fetos, o processo de renovação epitelial através da liberação das células mais superficiais; na camada granular observamos tonofilamentos e grânulos de querato-hialina; a camada espinhosa se mostrou similar em ambas as idades e esteve marcada pela grande quantidade de desmossomos intercelulares. As características até então observadas na língua de D. albiventris são semelhantes às observadas em outras espécies de marsupiais. Os procedimentos experimentais foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA/FMVZ/USP). / The White-eared Opossum (Didelphis albiventris) is a marsupial that occupies a wide variety of habitats, ranging from forests to urban areas, in several Brazilian biomes and plays an important role in the dissemination of seeds. The objective of this research is to study the lingual morphology of this species. The tongues were collected from animals found dead on roads in the state of Rio Grande do Sul or by cadaver donation from the Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre (NURFS / UFPel). The samples were submitted to light and scanning (SEM) and transmission (TEM) electron microscopy techniques. Through light microscopy we observed the epithelium stratified squamous and the budding of the papillae in fetuses, the development of the lingual papillae in infants and the characteristics of the fully developed papillae in adults. By the staining of Azan and Picrosirius we observed that the collagen is located mainly under the epithelium. Through the SEM the analysis of the epithelial layer revealed three filiform papillae with different morphologies according to the region. The fungiform papillae are scattered at the apex and body lingual, and partially covered by an elevation of mucosa. Circumvallate papillae are 3 in number and form a triangle at the lingual root. Foliate papillae are small and slender elevations in the caudolateral border of the tongue, in varying numbers of 13-18 projections. The subepithelial tissues of fungiform, circumvallate and foliate papillae have an irregular surface with some dorsal depressions. Through MET, the stratum corneum demonstrated, for adults and fetuses, the process of epithelial renewal through the release of the most superficial cells; in the granular layer we observed tonofilaments and granules of kerato-hyaline; The spinous layer was similar in both ages and was marked by the great amount of intercellular desmosomes. The characteristics previously observed in the tongues of D. albiventris are similar to those observed in other species of marsupials. The experimental procedures were approved by the Committee on Ethics in the Use of Animals (CEUA / FMVZ / USP).

Biotécnicas aplicadas à reprodução animal são empregadas com o intuito de melhorar qualitativa e quantitativamente os rebanhos. A superovulação assim como a estimulação do folículo dominante utilizando-se doses suprafisiológicas de eCG (gonadotrofina coriônica eqüina) são empregadas em bovinos e bubalinos, mas nem sempre alcançam os resultados esperados. Entretanto, foram relatadas alterações morfofuncionais em corpos lúteos (CL) de animais submetidos a estes tratamentos, o que implica, necessariamente, em levantamento de hipóteses relativas ao(s) mecanismo(s) pelo(s) qual(is) as gonadotrofinas exógenas alteram as funções celulares nos folículos e corpos lúteos resultantes. Com o intuito de melhor compreensão do papel exercido pelo eCG sobre a célula luteínica bovina, 16 vacas foram sincronizadas e submetidas (grupos tratados) ou não (grupo controle) ao tratamento com eCG. O tratamento foi realizado previamente (superovulação) ou posteriormente (estimulação do folículo dominante) ao desvio folicular. No dia 6 após a ovulação, estes animais foram abatidos e os CL coletados para realização de análises histológicas e ultra-estruturais, assim como o sangue coletado para dosagem de progesterona. Para comparação dos dados obtidos entre os diferentes grupos utilizou-se o programa GraphPrism e as médias foram consideradas diferentes quando p < 0.05. Em relação à densidade de mitocôndrias e densidade numérica das mitocôndrias elipsóides não houve diferença significativa entre os grupos estudados. Quando se calculou o volume total das mitocôndrias no CL bovino, houve diferença significativa do grupo superovulado em relação aos outros grupos. Já para as mitocôndrias esferóides observou-se diferença significativa do grupo estimulado comparado aos grupos controle e superovulado. À imunofluorescência os animais do grupo superovulado apresentaram visualmente uma marcação mais fluorescente intensa para mitocôndrias quando comparados aos grupos controle e estimulado; e o grupo estimulado apresentou uma marcação mais intensa em relação ao grupo controle. Houve diferença significativa entre os três grupos em relação à quantidade das células luteínicas grandes. Quando se corrigiu o número de células luteínicas grandes pelo volume do CL, os mesmos resultados foram encontrados. Quanto às medidas do maior diâmetro das células luteínicas grandes houve uma diferença significativa quando comparado o grupo estimulado com os demais. Aspectos qualitativos da microvascularização do CL em animais controle e superovulados revelam vascularização mais abundante no grupo tratado. Estes dados apontam para modificações morfológicas da célula luteínica e do CL bovino direcionadas à maior produção hormonal após tratamento com eCG e indicam que doses diferentes aplicadas em momentos diferentes do ciclo estral levam à respostas diversas da célula luteínica e do próprio CL. / Biotechnologies applied to animal reproduction are employed in order to improve livestock quality and quantity. Superovulation and the stimulation of the dominant follicle using supraphysiological doses of eCG (equine chorionic gonadotropin) are used in cattle and buffaloes, but not always achieve the expected results. However, morphofunctional changes in corpora lutea (CL) derived from animals submitted to these treatments were reported, which necessarily implies a survey of hypotheses regarding the mechanism(s) by which exogenous gonadotrophins result in altered cellular functions in the follicles and corpora lutea. In order to better understand the role played by eCG on bovine luteal cells, 16 cows were synchronized and submitted (treated groups) or not (control group) to treatment with eCG. The treatment was performed previously (superovulation) or after (stimulation of the dominant follicle) follicular deviation. At 6 days after ovulation, animals were slaughtered and the CL collected for histological and ultrastructural analysis, as well as blood for determining plasmaprogesterone.For statistical analysis the program Graph Prism was used and mean considered significant different when p < 0.05. In relation to mitochondria number and volume density there were no differences among the studied groups. Values of mitochondria total volume in CL were different if stimulated was compared to the other groups. Imunofluoresce for mitochondria showed a more intensive signal for animals from the superovulated group, followed by animals belonging to the stimulated group. The number of large luteal cells was different among all groups. Even though this number was corrected by CL volume, the same results were found. The biggest diameter of large luteal cells was compared among the groups and stimulated group showed higher values. Qualitative aspects of CL microvascularization in control and superovulated animals reveal more abundant vascularization in treated group. These data point towards morphological modification of bovine CL and luteal cell directed to increased hormonal production after eCG treatment. Moreover, results indicate that different eCG dosis applied in different time points of estrous cycle lead to different responses from CL and luteal cells.

A superfície das folhas de árvores (filosfera) oferece uma grande área de habitat para os micro-organismos, mas constitui um ambiente extremo. O desenvolvimento de comunidades microbianas é dependente de fonte de carbono e de certos nutrientes essenciais inorgânicos comumente liberados pela planta para a sua superfície. No entanto, um grupo especial de bactérias, Cyanobacteria, é menos dependente da planta para sua nutrição, pois vários destes organismos são autotróficos para carbono e nitrogênio. Portanto, Cyanobacteria é particularmente interessante para se avaliar neste ambiente. Neste estudo, linhagens de cianobactérias presentes na superfície das folhas secretoras de sal da planta de manguezal Avicennia schaueriana foram isoladas e caracterizadas morfológica, molecular e ultraestruturalmente. O potencial destes isolados para sintetizar moléculas bioativas também foi avaliado. Para isso, folhas de A. schaueriana foram coletadas em um manguezal com histórico de contaminação por petróleo, localizado próximo ao Rio Iriri, em Bertioga-SP. O isolamento das cianobactérias foi realizado usando quatro meios de cultura (BG-11, SWBG-11, BG-11o e SWBG-11o) e dois métodos: a) esfregaço das folhas nos meios sólidos em placas de Petri; e b) submersão das folhas em frascos Erlenmeyer contendo meios líquidos. Após a obtenção de culturas puras, os isolados foram crescidos em meios líquidos, as células foram concentradas e usadas para extração de DNA genômico. O gene de RNAr 16S de cada isolado foi amplificado por PCR usando iniciadores específicos (27F/1494Rc), clonado e sequenciado. As sequências de RNAr 16S foram usadas na construção de árvore filogenética. O potencial dos isolados para sintetizar moléculas bioativas foi acessado pela amplificação de PCR usando iniciadores específicos para sequências gênicas codificadoras de peptídeo sintetase (NRPS), policetídeo sintase (PKS), cianopeptolina, aeruginosina, saxitoxina, anatoxina-a/homoanatoxina-a e microcistina. Como resultado, trinta morfotipos foram isolados em meio líquido e quatro em meio sólido. Estes morfotipos foram identificados como pertencentes a quatro ordens diferentes (12 Nostocales, 9 Pseudanabaenales, 8 Chroococcales e 5 Oscillatoriales). Entre os isolados, alta abundância de linhagens potencialmente fixadoras de N2 foi encontrada, indicando que elas possivelmente são uma importante fonte de nitrogênio neste habitat. As sequências do gene de RNAr 16S de vinte e quatro isolados ficaram distribuídas em onze clados distintos na árvore filogenética e mostraram baixas similaridades com gêneros já descritos. Na análise da ultraestrutura destas linhagens, destacou-se a presença de grânulos de elevado volume em uma cianobactéria unicelular e de um arranjo de tilacoides incomum em uma cianobactéria filamentosa homocitada com morfologia aparentemente simples. Sequências gênicas codificadoras de PKS foram detectadas em dezessete linhagens, de aeruginosina em sete linhagens e de cianopeptolina em dez linhagens. Entretanto, sequências gênicas codificadoras de NRPS e das cianotoxinas microcistina, saxitoxina e anatoxina-a/homoanatoxina-a não foram detectadas. A superfície das folhas de A. schaueriana apresenta elevado número de cianobactérias não descritas, provavelmente um resultado das condições peculiares tanto da filosfera quanto do manguezal estudado. Este é o primeiro relato de isolamento de cianobactérias da superfície de folhas de A. schaueriana / The tree leaf surface (phyllosphere) offer a large habitat area for microorganisms but constitute an extreme environment. The development of microbial communities is dependent of carbon source and certain essential inorganic nutrients commonly released from the plant to its surface. However, a special group of bacteria, Cyanobacteria, is less dependent of the plant for their nutrition since several of these organisms are autotrophic for carbon and nitrogen. Therefore, cyanobacteria are particularly interesting to be evaluated in this environment. In this study, cyanobacterial strains present in the salt-excreting leaf surface of the mangrove Avicennia schaueriana were isolated and morphologically, molecularly and ultrastructurally characterized. The potential of these isolates to synthesize bioactive molecules was also evaluated. To this purpose, A. schaueriana leaves were collected in a mangrove with history of oil contamination located near to the Iriri river in Bertioga-SP. The isolation of cyanobacteria was achieved using four culture media (BG-11, SWBG-11, BG-11o and SWBG-11o) and two methods: a) smearing of leaves into solid media in Petri dishes; and b) submersion of leaves in Erlenmeyer flasks containing liquid media. After obtaining pure cultures, the isolates were grown into liquid media, and the cells were concentrated and used for genomic DNA extraction. The gene of rRNA 16S of each isolate was amplified by PCR using specific primers (27F/1494Rc), cloned and sequenced. The 16S rRNA sequences were used for the construction of a phylogenetic tree. The potential of the isolates to synthesize bioactive molecules was assessed by PCR amplification using primers specific for gene sequences encoding non-ribosomal peptide synthetase (NRPS), polyketide synthase (PKS), cyanopeptolin, aeruginosin, saxitoxin, anatoxin-a/homoanatoxin-a and microcystin. As results, thirty morphotypes were isolated in liquid media and four in solid media. These morphotypes were identified as belonging to four different orders (12 Nostocales, 9 Pseudanabaenales, 8 Chroococcales and 5 Oscillatoriales). Among the isolates, it was found a high abundance of potentially N2-fixing strains, what indicates that they possibly are an important source of nitrogen in this habitat. The 16S rRNA gene sequences of twenty-four isolates were distributed into eleven distinct clades in the phylogenetic tree and showed low similarities with described genera. In the ultrastructural analyses of these strains, the highlight was the presence of granules of high volume in a unicellular cyanobacterium and an unusual thylakoid arrangement in a homocytous filamentous cyanobacterium with apparently simple morphology. Gene sequences encoding for PKS were detected in seventeen strains, for aeruginosine in seven strains and cyanopeptolin in ten strains. Gene sequences encoding for NRPS and for the cyanotoxins microcystin, saxitoxin, and anatoxin-a/homoanatoxin-a were not found. The leaf surface of A. schaueriana presents a high number of undescribed cyanobacteria, probably as a result of the peculiar conditions of the phyllosphere and the studied mangrove. This is the first report of isolation of cyanobacteria from the leaf surface of A. schaueriana

Popularmente conhecidas como flowering stones ou ice plants, as plantas da família Aizoaceae (Caryophyllales) caracterizam-se por suas folhas suculentas morfologicamente diversas. Com centro de origem no sul da África, a maior parte das espécies pertence a subfamília Ruschioidaeae, com plantas de folhas dorsiventrais, cilíndricas e trígonas, sendo marcante a ocorrência de conação entre as bases de folhas opostas, e a presença de feixes vasculares periféricos, com xilema endoscópico. Nosso estudo mostra que a formação dos feixes vasculares periféricos é posterior ao estabelecimento da blastozona marginal, e que tecidos da face abaxial diferenciam-se no domínio adaxial da folha durante a histogênese da lâmina. Sugerimos que um mecanismo de abaxialização foliar esteja vinculado à formação da margem foliar de Aizoaceae. O xilema dos feixes vasculares periféricos é formado wide band tracheids - \"wbts\", um tipo especializado de elemento traqueal com acentuado espessamento da parede secundária. \"Wbts\" vinculam-se a órgãos suculentos e ocorrem somente em Aizoaceae, Anacampserotaceae e Cactaceae, tendo despertado interesse dos pesquisadores quanto à sua origem e função. A partir de análises comparativas de anatomia, ultraestrutura e de imunomarcação de pectina, concluímos que a definição de \"wbts\" deve ser mantida nas famílias, no entanto, destacamos a possível ocorrência de idioblastos traqueoidais na região de medular de algumas espécies. Este trabalho contribui no conhecimento da anatomia e ontogênese foliar de Aizoaceae, abrindo oportunidades de estudos sobre os mecanismos envolvidos no estabelecimento da dorsiventralidade em folhas de simetria radial. A análise comparativa de wide-band tracheids \"wbts\" em Aizoaceae, Anacampserotaceae e Cactaceae traz contribuições ao conhecimento sobre sua distribuição e características nos diferentes órgãos / Popularly known as flowering stones or ice plants, the species of Aizoaceae (Caryophyllales) are characterized by morphologically diverse succulent leaves. With center of origin in Southern Africa, most species are classified in the subfamily Ruschioidaeae, which present dorsiventral, cylindrical and three-angled leaved plants, being remarkable the occurrence of conation between the bases of opposite leaves, and the presence of peripheral vascular bundles with endoscopyc xylem. Our study shows that the formation of peripheral vascular bundles occurs after the marginal blastozone establishment, and abaxial tissues differentiate in the adaxial domain of the leaf, during blade histogenesis. We suggest that an abaxialization mechanism is involved in the formation of leaf margins in Aizoaceae. The xylem of peripheral vascular bundles is composed by wide band tracheids - wbts, a specialized type of cell that occurs only in Aizoaceae, Cactaceae Anacampserotaceae. The origin and function of this cell type has been the subject of study by some researchers. By means of comparative analysis of anatomy, ultrastructure and pectin immunolabeling, we conclude that the definition of \"wbts\" should be kept in the three families; however, we highlight the possibility of idioblasts tracheids in the some cases. This work contributes to the knowledge of leaf anatomy and ontogenesis in Aizoaceae, opening opportunities for studies on the mechanisms involved in the establishment of dorsiventrality in leaves with radial symmetry. A comparative analysis of wbts in Aizoaceae, Cactaceae Anacampserotaceae brings contributions to knowledge about their distribution and characteristics in different organs

Os tendões são tecidos de transição das forças contráteis geradas pelos músculos e as transferindo para os ossos, podendo assim gerar movimento. A região em que o tecido tendíneo se insere ao ósseo é chamada de junção osteotendínea ou entese. Estas junções podem ser classificadas como fibrosas ou fibrocartilaginosas, as fibrosas são aquelas em que os tendões e/ou ligamentos se inserem no eixo (diáfise) dos ossos longos e as fibrocartilaginosas a inserção ocorre nas epífises dos ossos longos ou nos ossos curtos. Este estudo tem como propósito analisar as fibras colágenas e as células presentes na junção osteotendínea, utilizando microscopia de luz com as colorações de Hematoxilina-eosina, Azocarmim, Picro-sírius e Tricromo de Masson e os aspectos ultraestruturais empregando os métodos de microscopia eletrônica de varredura e de transmissão. Foram utilizados 30 ratos Wistar machos, sendo 15 adultos com idade de 4 meses (grupo A) e 15 idosos com idade de 18 meses (grupo B), sendo utilizados 5 ratos de cada grupo para microscopia de luz, 5 para microscopia eletrônica de varredura e 5 para microscopia eletrônica de transmissão. Os membros posteriores dos ratos foram retirados, dissecados e desmineralizados com EDTA a 7% para microscopia de luz e EDTA 0,15M pH 7,4 para microscopia eletrônica de transmissão durante 4 semanas, não foi necessário desmineralizar as amostras para microscopia eletrônica de varredura. Cortes de 6 m foram realizados e montados em lâminas histológicas para análise em microscópio de luz, a técnica de criofratura em nitrogênio líquido foi realizada para análises em microscópio eletrônico de varredura e cortes de 60 nm foram realizados, montados em telas de cobre de 200 mesh (EMS) para análises em microscópio eletrônico de transmissão. O processo de envelhecimento mostrou alterações das fibrilas colágenas, em que o tipo I predomina no grupo adulto e o tipo III no idoso, diminuição na quantidade de células de fibrocartilagem, processos citoplasmáticos destas células curtos e em número reduzido e uma diminuída capacidade de síntese devido a aparelhos de Golgi menores, poucas cisternas de retículo endoplasmático granular e escassas mitocôndrias. / Tendons are transition tissues of contractile forces generated by muscles and transferring to bone, generating this way move. The region where tendon attach to bone is called bone-tendon junction or enthesis. These junctions can be classified as fibrous or fibrocartilaginous, the fibrous are those in which tendons/ligaments are attached in the shaft (diaphysis) of the long bones and fibrocartilaginous attachment occur in the epiphyses of the long bones or short bones. This study aims to analyze collagen fibers and the cells present in the bone-tendon junction, using light microscope with Hematoxylineosin, Azocarmine, Picrosirius red and Masson\'s trichrome staining and ultrastructural aspects using scanning electron microscope, transmission electron microscope methods. Thirty male Wistar rats were using, 15 adults rats at 4 months-old (A group) and 15 old rats at 18 months-old (B group), were used 5 rats of each group to light microscopy, 5 rats to scanning electron microscopy and 5 rats to transmission electron microscopy. The hind limbs of the rats were removed, dissected and demineralized using 7% EDTA solution to light microscopy and 0,15M pH 7,4 EDTA solution to transmission electron microscopy for 4 weeks, was not necessary demineralize the samples to scanning electron microscopy. Cut in slices 6 m thickness were made and mounted on histological slides to analyze in light microscope, freeze-fracture technique with liquid nitrogen was performed to analysis in scanning electron microscope and cuts in slices 60 nm thickness were made, mounted on copper grids (200-mesh - EMS) to analysis in transmission electron microscope. The aging process showed changes of the collagen fibrils, in which type I predominates on adult groups and the type III on the old group, decrease in the amount of the fibrocartilage cells, few and short cytoplasmic processes of this cells and a decreased synthesis capacity due a small Golgi apparatus, a few cisternae of rough endoplasmatic reticulum and few mitochondria.

Tendões são descritos como tecido conjuntivo denso modelado que inserem os músculos aos ossos. Sua principal função é servir como tecido de transição das forças contráteis geradas pelos músculos aos ossos, podendo assim gerar movimentos. Entre todos os tendões, o calcâneo é um dos mais frequentemente lesados. As lesões ocorrem principalmente em homens e são mais frequentes entre a terceira e quarta década de vida. Dentre os vários métodos de sutura existentes, do ponto de vista clínico, a de Kessler-Tajima com os nós entre os cotos é muito utilizada por evitar o estrangulamento da microcirculação. Após a cirurgia o paciente retorna ao trabalho após 85 dias, em média, podendo atingir até 270 dias. O objetivo do presente estudo foi testar a eficiência da aplicação da proteína biocompatível F1, uma proteína extraída a partir do látex natural da Hevea brasiliensis, sobre tendões lesados, buscando uma melhora no reparo, assim como, a influência da sutura-U e de Kessler-Tajima. Alterações musculares decorrentes da lesão no tendão também foram avaliadas. Para isso, utilizamos ratos Sprague Dawley machos de 3 meses, que foram submetidos a tenotomia completa, a lesão foi corrigida com ambas as suturas, seguido da aplicação da proteína e avaliados após duas e quatro semanas. As técnicas utilizadas para análises no tendão foram as de microscopia de luz, microscopia eletrônica de varredura e transmissão, bem como, a síntese de colágeno tipos I e III, TIMP-1 e 2, MMP-2 e 9 por western blot. Para analisar as alterações musculares, a expressão dos genes MuRF1 e Atrogin1 foram quantificadas por RT-qPCR, seguido de análises de contração muscular máxima e teste de fadiga. Os resultados sugerem uma melhora no reparo do tendão no grupo que utilizamos a sutura-U associada à proteína após quatro semanas, devido ao aumento na síntese de colágeno tipo I e a diminuição de MMP-9, assim como, a capacidade de contração muscular máxima retorna aos níveis do grupo controle. A sutura-U também influencia menos na fadiga muscular. / Tendons are described as dense modeled connective tissue which insert the muscles to the bones. Its main function is to serve as transition tissue of the contractile forces generated by muscles to the bones, and thus generate movements. Among all the tendons, the calcaneal is the most frequently injured one. The lesions occur mainly in men and are more frequent between the third and fourth decade of life. Among the several existing suture methods, from a clinical point of view, the Kessler-Tajima with the nodes between the stumps is used to a great extent in order to avoid the microcirculations strangling. After surgery, the patient returns to work after 85 days, on average, and can reach up to 270 days. The objective of this study was to test the efficiency of the application of biocompatible F1 protein, a protein extracted from natural latex from the Hevea brasiliensis, on injured tendons, seeking an improvement in the repair, as well as the influence of the suture-U and Kessler-Tajima. Muscle changes arising from the tendon injury were also evaluated. For this reason, Sprague Dawley male rats at 3 mounths-old were used, which underwent complete tenotomy, the lesion was corrected with both sutures, followed by the application of protein and evaluated after two and four weeks. The techniques used for analyzes in the tendon were the light microscopy, scanning electron microscopy and transmission, as well as the synthesis of collagen types I and III, TIMP-1, -2, MMP-2, and -9 by Western blot. In order to analyze the muscular alterations, the expression of genes MuRF1 and Atrogin1 were quantified by RT-qPCR, followed by analysis of maximum muscle contraction and fatigue testing. The results suggest an improvement in the tendon repair in the group that the suture-U was used associated with protein after four weeks, due to the increase in the synthesis of collagen type I and the decrease of MMP-9, as well as the ability of maximum muscle contraction to return to the levels of the control group. The suture-U also influences on less muscle fatigue.