Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-23Bitstream added on 2014-06-13T18:09:00Z : No. of bitstreams: 1 pereira_fdc_me_rcla.pdf: 1421119 bytes, checksum: 8743dede24fc8cac2d9cc226ac3e63d9 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Polybia paulista é uma vespa pertencente à ordem Hymenoptera muito comum no Sudeste do Brasil, especialmente no Estado de São Paulo. Os venenos destes insetos são constituídos por aminas, peptídeos, proteínas de alta massa molecular, sendo estas na sua maioria, enzimas. As fosfolipases são as enzimas de maior abundância entre os alérgenos de veneno dos Hymenoptera sociais, constituindo-se também no alérgeno de maior importância. A sequência completa de 985 pb do cDNA da fosfolipase A1 do veneno da vespa P. paulista foi determinada a partir da clonagem. A proteína deduzida por tradução apresentou 302 resíduos de aminoácidos, PI e MW teóricos de 9,1 e 33 kDa respectivamente. Por meio de ferramentas de bioinformática foi possível identificar o sítio ativo entre os resíduos 131 a 140 (10 aminoácidos) e inferir que se trata de uma proteína da super família das esterases lipases. O cDNA completo foi clonado em vetor de expressão pET-28a em cepas de Escherichia coli BL21–DE3. A PLA1-Rec com cauda de 6x Histidinas no N- terminal foi expressa na forma insolúvel em corpúsculos de inclusão por meio da indução com 1mM de IPTG à 20°C por 6 horas. A purificação foi realizada por cromatografia de afinidade em resina agarose-Ni+2 sob condições desnaturantes na presença de 8 M de uréia e a proteína eluida com tampão gradiente decrescente de pH. As análises de Western blotting revelaram a especificidade dos anticorpos policlonais produzidos em camundongos contra a fração eletroforética de PLA1 natural quando testados com o veneno bruto da própria vespa e com a PLA1- Rec de P. paulista. Além disto, estes anticorpos apresentaram imunoreatividade cruzada com o veneno bruto de outras vespas sociais testadas neste trabalho. Outras proteínas detectadas na membrana de nitrocelulose evidenciaram o reconhecimento dos... / Polybia paulista is a wasp that belongs to the Hymenoptera order very common in southeastern Brazil, especially in São Paulo. The venoms of these insects are composed of amines, peptides, high weight molecular proteins, which are mainly enzymes. The phospholipase enzymes are the most abundant among the allergens of social Hymenoptera venom, and they are also the most important allergen. The complete sequence of 985 bp of phospholipase A1 cDNA from P. paulista venom was determined by cloning. The protein inferred by translation had 302 amino acid residues, PI and theoretical MW of 9.1 and 33 kDa respectively. By means of bioinformatics tools, it was possible to identify the active site between residues 131 to 140 (10 amino acids) and infer that it is a protein that belongs to esterases lipases super family. The complete cDNA was cloned into pET-28a expression vector in strains of BL21-DE3 Escherichia coli. The Rec-PLA1 with 6x histidine tail at the N-terminal was expressed in insoluble form in inclusion corpuscles by induction with 1mM IPTG at 20 ° C for 6 hours. The purification was performed by affinity chromatography on agarose-Ni+2 resin under denaturing conditions in the presence of 8 M urea and the protein eluted with decreasing pH gradient buffer. The Western blotting analyses revealed the specificity of polyclonal antibodies produced in mice against the electrophoretic fraction of natural PLA1 when tested with the crude venom of the wasp itself and with the PLA1- Rec of P. paulista. Besides these antibodies presented cross-immunoreactivity with the crude venom of other social wasps tested in this work. Other proteins detected in the nitrocellulose membrane showed the recognition of antibodies to other isoforms of phospholipase already described in the literature. Obtaining the recombinant form of... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Sulene Noriko Shima / Banca: Edilberto Giannotti / Banca: Sidnei Mateus / Resumo: As vespas são um excelente modelo para se tentar compreender a evolução do comportamento social nos Hymenoptera. A biologia e a organização social das vespas eussociais primitivas, em especial o gênero Mischocyttarus, são pouco conhecidas, apesar da grande diversidade de espécies desse gênero nos trópicos. Com o objetivo de identificar os mecanismos envolvidos na regulação social de Mischocyttarus cerberus styx, foram coletadas 6 colônias com histórico comportamental das fêmeas conhecidas, para a análise da morfofisiologia dos indivíduos, no Câmpus da Unesp de Rio Claro, SP. Foi verificado que a dinâmica hierárquica desta espécie é regulada através de uma estratégia que relaciona comportamento de manutenção da colônia ao gasto energético diferencial. Os indivíduos mais dominantes tendem a permanecer mais tempo no ninho, construir mais células e apresentam balanço energético positivo. Através desses mecanismos, a hierarquia é regulada de forma dinâmica, de maneira a permitir que qualquer indivíduo possa ocupar diferentes papéis dentro da colônia, uma vez que, como verificado, os adultos demonstram capacidades reprodutivas similares e não apresentam diferenças morfológicas significativas entre as castas. A determinação das suas funções na colônia dependerá, portanto, das estratégias comportamentais acima descritas / Abstract: The wasps are an excellent model to try itself to understand the evolution of the social behavior in the Hymenoptera. The biology and the social organization of the primitive eusociais wasps, in special the Mischocyttarus genus, little is known, although the great diversity of species of this genus are in the tropics. The objective of this work is identify to the involved mechanisms in the social regulation of Mischocyttarus cerberus styx, had been collected 6 colonies with behavior description of the known females, for the analysis of the morfophysiology of the individuals, in the Campus of the UNESP - Rio Claro, SP. It was verified that the hierarchic dynamics of this species is regulated through a strategy behavior of maintenance of the colony and the distinguishing energy expense. The individuals most dominant tend to remain more time in the nest, to construct more cells and present positive energy balance. Through these mechanisms, the hierarchy is regulated of dynamic form, way to allow that any individual can inside occupy different works in the colony, in such a way, the adults demonstrate similar reproductive capacities and they do not present significant morphologic differences between the cast ones. The determination of its functions in the colony will depend, therefore, of above described the behavior strategies / Mestre

Orientador: Mario Sergio Palma / Banca: Luiz Alberto Beraldo de Moraes / Banca: Alberto José Cavalheiro / Resumo: O desenvolvimento dos venenos e aparelhos de ferroar entre os Insecta representa um atributo evolutivo que contribuiu para a adaptação dos insetos em muitos ambientes terrestres diferentes. Os venenos desses insetos são misturas complexas de compostos biologicamente ativos, tais como compostos de baixa massa molecular, peptídeos e proteínas. Estudos recentes têm demonstrado a capacidade de se detectar e identificar diferentes compostos de natureza peptídica, em concentrações bastante reduzidas nos venenos animais, utilizando-se diferentes abordagens de espectrometria de massas. Isso tem permitido a construção de bibliotecas peptídicas de grande interesse aplicado à biotecnologia. O veneno da vespa social Polybia paulista tem sido intensamente investigado, porém somente os peptídeos mais abundantes deste veneno são conhecidos: os mastoparanos Polybia -MPI e -MPII, o peptídeo quimiotáctico Polybia-CP e a Paulistina. Este fato deve-se principalmente à utilização de abordagens clássicas até então, com coletas "off-line" em relação às análises de sequenciamento, fazendo com que somente os peptídeos mais abundantes pudessem ser investigados. Com os avanços na área da espectrometria de massas, incluindo o desenvolvimento da tecnologia de analisadores do tipo "ion-trap" utilizado no presente trabalho, tornou-se possível a investigação de amostras pouco abundantes, com alta velocidade de aquisição de dados e elevada resolução. O presente estudo visou a obtenção de um perfil peptídico detalhado do veneno de P. paulista por uma abordagem analítica moderna e mais sensível, além de padronizar o sequenciamento destes peptídeos por espectrometria de massas sequencial de maneira "on-line". Os peptídeos foram detectados e sequenciados utilizando-se um sistema LC-ESI-IT-TOF/MS e MSn ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The evolution of venoms and their injection apparatuses among the Insecta represents an evolutionary attribute which contributed for thr adaptation of the insects to many different terrestrial environments. The venoms of insects are complex mixtures of biologically active compounds, such as low molecular mass compounds, peptides and proteins. Recent studies have demonstrated the ability to detect and identify different compounds in very low concentrations in animal venoms, using different approaches of mass spectrometry. This has allowed the construction of peptide libraries of great applied interest in biotechnology. The venom of the social wasp Polybia paulista has been intensively investigated, but only the most abundant peptides of this venom are known: the mastoparans Polybia-MPI and -MPII, the chemotactic peptide Polybia-CP and the Paulistine. This fact is mainly due to the use of classical approaches, using offline collections in relation to peptide sequencing, so only the more abundant peptides could be investigated. With the advances in mass spectrometry, including the development of analyzers type ion-trap as the one used in present work, it became possible to investigate low abundance samples, with high speed of data acquisition at high resolution. The objective of this study was to profile and sequence the peptide compounds present in the venom of the social wasp P. paulista using a modern and very sensitive analytical technique, and standardize the sequencing of peptides by high resolution LC-MS and MSn strategy. Peptides were detected and sequenced using a LCESI- IT-TOF/MS and MSn system of high resolution and sensitivity. The analysis of the venom was performed by high performance liquid chromatography on a reverse phase (HPLC), and the analytes (peptides) were characterized ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Sulene Noriko Shima / Banca: Edilberto Giannotti / Banca: Fabio Prezoto / Resumo: As vespas, devido à característica difilética do grupo, são um excelente modelo para se tentar compreender a evolução do comportamento social nos Hymenoptera. A biologia e a organização social das vespas eussociais primitivas, em especial o gênero Mischocyttarus, são pouco conhecidas, apesar da grande diversidade de espécies desse gênero nos trópicos. Com o objetivo de identificar os mecanismos envolvidos na regulação social de Mischocyttarus (M.) montei, foram coletadas 9 colônias para a análise da morfofisiologia dos indivíduos, sendo que destas, 6 foram previamente observadas em condições naturais no Campus da Unesp de Rio Claro, SP. Foi verificado que a dinâmica hierárquica desta espécie é regulada através de três estratégias principais: a) interações agonísticas moderadas entre os indivíduos de maneira a permitir que fundadoras se associem, estabelecendo uma hierarquia de dominância mas ao mesmo tempo garantindo a viabilidade da colônia no início do ciclo; b) alimentação e gasto energético diferencial dos adultos, onde os mais dominantes ingerem maiores quantidades de alimento, em especial fontes de proteína, ao mesmo tempo em que realizam tarefas de baixo custo energético e comportamentos relacionados à dominância; e c) utilização da oofagia diferencial como forma indireta de competição e monopolização da postura de ovos. Através desses mecanismos, a hierarquia é regulada de forma dinâmica, de maneira a permitir que 2 qualquer indivíduo possa ocupar diferentes papéis dentro da colônia, uma vez que, como verificado, os adultos emergem com capacidades reprodutivas similares e não apresentam diferenças morfológicas significativas entre as castas. A determinação de suas funções na colônia dependerá, portanto, das estratégias acima descritas. / Abstract: The wasps, due to their monophyletic characteristics, are an excellent model to explain the evolutionary scenario of the social behavior in the Hymenoptera. The biology and social organization of primitively eusocial wasps, especially of Mischocyttarus genera, are relatively poor studied, despite of its marked diversity in Neotropical regions. With the aim of identify the traits involved in social regulation of M. (Monogynoecus) montei nine colonies were collected and used in morphological and physiological analysis, from these six were monitored in natural conditions at UNESP, in Rio Claro, SP. The results showed that the hierarchical dynamics of this specie is regulated based on three main strategies: a) moderated agonistics interactions among nestmates, which leads to foundress associations’ foundations and assure the establishment of a dominance hierarchy and the success of the colony in initial phases of development; b) different feeding and energetic cost tasking of adults, whereas the dominant females feed on higher quantities of food, especially protein, and perform tasks with low energetic cost, mainly those related to dominance; and c) differential oophagy as an indirect strategy of competition, avoiding the subordinate oviposition. Through these mechanisms the hierarchy is regulated in a dynamical way, in which any female can assume different tasks in the colony, once the adults emerge with similar reproductive potential and a marked morphological caste differentiation is absent. The role of each nestmate, therefore, will depend on the strategies previously described. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-30Bitstream added on 2014-06-13T18:40:13Z : No. of bitstreams: 1 silva_rm_me_rcla.pdf: 1162202 bytes, checksum: 846ac38f3ba6ac45f0a1d9d936aaad33 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / As vespas são um excelente modelo para se tentar compreender a evolução do comportamento social nos Hymenoptera. A biologia e a organização social das vespas eussociais primitivas, em especial o gênero Mischocyttarus, são pouco conhecidas, apesar da grande diversidade de espécies desse gênero nos trópicos. Com o objetivo de identificar os mecanismos envolvidos na regulação social de Mischocyttarus cerberus styx, foram coletadas 6 colônias com histórico comportamental das fêmeas conhecidas, para a análise da morfofisiologia dos indivíduos, no Câmpus da Unesp de Rio Claro, SP. Foi verificado que a dinâmica hierárquica desta espécie é regulada através de uma estratégia que relaciona comportamento de manutenção da colônia ao gasto energético diferencial. Os indivíduos mais dominantes tendem a permanecer mais tempo no ninho, construir mais células e apresentam balanço energético positivo. Através desses mecanismos, a hierarquia é regulada de forma dinâmica, de maneira a permitir que qualquer indivíduo possa ocupar diferentes papéis dentro da colônia, uma vez que, como verificado, os adultos demonstram capacidades reprodutivas similares e não apresentam diferenças morfológicas significativas entre as castas. A determinação das suas funções na colônia dependerá, portanto, das estratégias comportamentais acima descritas / The wasps are an excellent model to try itself to understand the evolution of the social behavior in the Hymenoptera. The biology and the social organization of the primitive eusociais wasps, in special the Mischocyttarus genus, little is known, although the great diversity of species of this genus are in the tropics. The objective of this work is identify to the involved mechanisms in the social regulation of Mischocyttarus cerberus styx, had been collected 6 colonies with behavior description of the known females, for the analysis of the morfophysiology of the individuals, in the Campus of the UNESP - Rio Claro, SP. It was verified that the hierarchic dynamics of this species is regulated through a strategy behavior of maintenance of the colony and the distinguishing energy expense. The individuals most dominant tend to remain more time in the nest, to construct more cells and present positive energy balance. Through these mechanisms, the hierarchy is regulated of dynamic form, way to allow that any individual can inside occupy different works in the colony, in such a way, the adults demonstrate similar reproductive capacities and they do not present significant morphologic differences between the cast ones. The determination of its functions in the colony will depend, therefore, of above described the behavior strategies

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Ciências Fisiológicas, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2014-01-17T12:16:55Z No. of bitstreams: 1 2013_PriscillaGalanteRibeiro.pdf: 1737160 bytes, checksum: 4a420525f22119a33e4c567b33ad185e (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2014-01-23T14:46:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_PriscillaGalanteRibeiro.pdf: 1737160 bytes, checksum: 4a420525f22119a33e4c567b33ad185e (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-23T14:46:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_PriscillaGalanteRibeiro.pdf: 1737160 bytes, checksum: 4a420525f22119a33e4c567b33ad185e (MD5) / Peçonhas de vespas são formadas por um conjunto de moléculas com diversas ações farmacológicas, como as aminas biogênicas, as acilpoliaminas e os peptídeos, sendo estes últimos os mais abundantes. Atualmente, compostos neuroativos isolados de peçonhas de animais tem despertado grande interesse devido a seu potencial no desenho de novas drogas para prevenir ou tratar doenças como dor crônica, epilepsia e Parkinson, assim como novas ferramentas farmacológicas. Neste contexto, o estudo da peçonha de vespas tem proporcionado à descoberta de novos compostos neuroativos, mas, ainda, até o momento, a grande maioria dos peptídeos não foi identificada e avaliada. A vespa social Parachartergus fraternus tem uma marcante peculiaridade: embora estas vespas vivam em comunidade, a ação da sua peçonha é capaz de paralisar a presa de modo irreversível e não letal o que difere de outras vespas sociais que a utiliza apenas para proteção contra predadores. Esta diferença indica a presença de compostos com ação em estruturas do sistema nervoso. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi a identificação e o isolamento de peptídeos antinociceptivos da peçonha de P. fraternus. A peçonha de P. fraternus foi analisada por duas estratégias: fracionamento por CLAE seguido de MALDI/TOF e a construção da biblioteca de cDNA e sequenciamento. Uma fração específica foi separada por CLAE e após ser sequenciada de novo, teve sua sequência parcialmente determinada, com diversas ambiguidades e especialmente, entre Leucina e Isoleucina. Em relação ao transcritoma, um clone da biblioteca de cDNA foi identificado que codifica o peptídeo, o que possibilitou a completa determinação da sequência peptídica. A análise do sequenciamento revelou a presença de um precursor do peptídeo maduro, composto por um propeptídeo de 61 aminoácidos e com um possível sinal de clivagem. A sequência do peptídeo maduro foi determinada como ILGTILGLLKGL-NH2. Após busca nos bancos de dados, este peptídeo mostrou homologia com a Protonectina, identificada anteriormente na vespa Protonectarina sylveirae. Para o peptídeo sintético, duas modificações foram desenhadas e o peptídeo IFGTILGFLKGL-NH2 foi produzido ®por síntese em fase sólida (Aminotech ). A atividade antinociceptiva dos dois peptídeos foi avaliada utilizando o modelo de placa quente em camundongos Swiss (n=4-6/grupo). Os peptídeos foram injetados por via i.c.v. nas concentrações de 16 e 8 nmol/animal diluídas em solução veículo quatro dias após a implantação da cânula guia. Como controle positivo foi utilizado morfina (16nmol/animal) e como controle negativo foi utilizado água deionizada como veículo. A atividade antinociceptiva do peptídeo natural foi efetiva na concentração de 8 nmol/animal em 90, 120 e 240 min (p<0,05), enquanto que na concentração de 16 nmol/animal mostrou um efeito menor, provavelmente devido à neurotoxicidade. Já o peptídeo sintético mostrou uma resposta dose-dependente, sendo que na concentração de 16 nmol/animal a atividade antinociceptiva não diferiu estatisticamente (p>0,05) da morfina em todos os tempos testados (240min). O peptídeo sintético não mostrou atividade hemolítica, assim como o descrito na literatura para o peptídeo natural. Ao contrário do peptídeo natural, animais injetados com o peptídeo sintético não apresentaram déficit motor, na maior dose testada no teste de antinocicepção. Esses resultados corroboram a hipótese de que a peçonha de vespas possui um grupo de moléculas que atuam no SNC de mamíferos. O peptídeo sintético mostrou potencial de contribuir com o desenvolvimento da neurociência na elucidação da transmissão sináptica e no desenho de novas drogas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Wasp venoms are formed by several molecules, such as biogenic amines, acylpoliamines and peptides which are the most abundant component. Neuroactive compounds are of great interest for their relevant potential to design new drugs, important to prevent and/or treat diseases such as chronic pain, epilepsy and Parkinson, as well as to develop other pharmacological tools. In this context, the study of wasp venoms has lead to the discovery of neuroactive molecules, however most peptides have yet to be identified or characterized. The social wasp Parachartergus fraternus has a remarkable peculiarity: although these wasps live in community, their venom act by irreversibly and non-lethally paralyzing their prey, which differs from other social wasps, which typically uses the venom only for protection against prey. This difference in the mode of action suggests the presence of compounds with activity in the nervous system. For this reason, the aim of this study was the identification and isolation of antinociceptive peptides in the venom of P. fraternus. The venom of P. fraternus was analyzed by two complementary strategies: HPLC fractionation followed by MALDI-TOF analysis and cDNA library construction and sequencing. A specific fraction was identified by mass spectrometry (MALDI-TOF), however sequencing of this fraction was unable to unambiguously determine between Leucine and Isoleucine. Using the transcriptomic approach, the sequence of the precursor encoding this peptide was identified. The precursor encodes a propeptide of 61 amino acids with a putative signal peptide. The sequence of the mature peptide was determined as ILGTILGLLKGL-NH2. Similarity search in public databases showed that this peptide is identical to Protonectin isolated from Protonectarina sylveirae. A synthetic peptide with two amino acid substitutions, IFGTILGFLKGL-NH2, was produced by solid phase synthesis (Aminotech). Antinociceptive activity of both peptides was evaluated by the hot plate model in Swiss mice (n=4-6/group). The peptides were infused via i.c.v. at doses of 16 and 8 nmol/animal (in vehicle solution) four days after the implantation of the guide cannula. Morphine (16nmol/animal) was used as positive control and vehicle solution was used as negative control (2µL/animal). The analgesic activity of the natural isolated peptide was shown to be effective at 8 nmol/animal (p<0.05) in the time points of 90, 120 and 240 min whereas the higher dose of 16 nmol/animal showed a decreased effect, probably due to neurotoxicity. The synthetic peptide had a dose- dependent response, where the highest dose (16 nmol/animal) showed antinociceptive activity that did not differ (p<0.05) from morphine in all time points tested (240min). The synthetic peptide did not show hemolytic activity, similar to the natural peptide as shown in previous studies. Contrary to the natural peptide, animals injected with the higher dose of the synthetic peptide (16nmol/animal) did not show motor deficit in the antinociceptive test. Together, these results support the hypothesis that wasp venoms have a group of molecules with activity in the CNS of mammals. The synthetic peptide tested here showed the potential to contribute to the development of neuroscience in the elucidation of synaptic transmission and also in the design of new drugs.

Orientador: George John Shepherd / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T13:19:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_MileneFaria_D.pdf: 12413684 bytes, checksum: 6b7edcaeed3053f3616f733ff1a4972e (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: O presente trabalho tem como objetivo esclarecer questões básicas sobre a biologia reprodutiva da sete espécies de Oxypetalum (O. alpinum var. alpinum. O.appendiculatum, O. banksii subsp. Banksii, O. jacobinae, O mexiae, O.pachyglossum e O. subriparium ) no município de Viçosa Zona da Mata do Estado de Minas Gerais, sudeste brasileiro. O trabalho foi realizado ao longo dos anos de 1994 a 1997, em nove locais. As espécies são simpátricas exceto O. mexiae e florescem ao longo do ano, exeto O. jacobine que floresce de fevereiro a junho, e O. subriparium, que floresce de novembro a julho. As flores são longevas e duram, em média, cerca de oito a 25 dias. O. banksii subsp. banksii apresenta características de mortologia e biologia floral ainda não mencionadas para a família Asclepiadaceae, como por exemplo, a presença de "compitum extrapistilar". Nova proposta é apresentada sobre a localização do estigma. O néctar é o recurso procurado pelos visitantes florais e acumula-se dentro do tubo floral. Vários atributos florais guiam o aparelho bucal dos insetos dentro da flor, contribuindo para que ocorra remoção e inserção de polínias. As espécies apresentam flores com, principalmente, um ou dois polinários removidos e uma câmara estigmatífera polinizada por flor ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: This study investigated basic aspects of reproductive biology in seven species of Oxypetalum (O. alpinum var. alpinum, O. appendiculatum, O. banksii subsp. banksii, O. jacobinae, O. mexiae, O. pachyglossum e O. subriparium) in the municipalityof Viçosa, Minas Gerais State, in south-east Brazil. Field work was carried out frem 1994 to 1997 in nine individual sites. Ali of the species, except O. mexiae, are sympatric and flower throughout the year, except O. jacobinae, which flower from February to June, and O. subriparium, which flower from November to July. The flowers are long-lived, lasting on average from 8 to 25 days. O. banksii subsp. banksii showed a number of features of morphology and floral biology not previously noted for Asclepiadaceae, such as the presence of an "extrapistilar compitum". New proposals are made for stigma localization. Nectar is the resource used by floral visitors and it accumulates inside the floral tube. Several morphological features guide the mouthparts of the insects within the flower, ensuring removal and insertion of the pollinia. Most of the species commonly showed one or two pollinia removed per flower and one pollinated stigmatic chamber. Pollinations normally consist of a single pollinium inserted into the stigmatic chamber, but in O. appendiculatum two pollinia from the same pollinarium were commonly found. Rates of pollinarium removal and insertion pollinia per flower of the studied species were low, varying from 0.09 to 1.86 and 0.01 to 2.09 respectively...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Biologia Vegetal / Doutor em Ciências Biológicas

Orientador : Silvia das Graças Pompolo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T09:01:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Araujo_SoniaMariadaSilvaRocha_D.pdf: 3918889 bytes, checksum: 6f04545ad09274b3180ac5e58c80507b (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Das 13 espécies de Trypoxylon com número cromossômico conhecido, somente T. albitarse possui cromossomos B, os quais são totalmente heterocromáticos e podem apresentar-se em dois tipos morfológicamente distintos, um metacêntrico e um acrocêntrico. Ao longo dos últimos cinco anos (1996 a 2000), 1003 espécimens de T. albitarse provenientes de 692 ninhos foram estudados citogeneticamente com relação à ocorrência, distribuição, frequência e evolução de seus cromossomos B e muitos destes indivíduos foram submetidos às técnicas de hibridação in situ fluorescente (FISH) ou impregnação por nitrato de prata para localização dos genes ribossômicos e estudo dos nucléolos, respectivamente. Todos os espécimens analisados foram obtidos em diferentes populações naturais na Zona da Mata Mineira, das quais 11 estão localizadas no município de Viçosa (Amoras, Campus, Centro, Marrecos, Palmital, Paraíso, Silvestre, Vila Cristal, Vila Chaves, Fundão e Barrinha), duas no município de Cajuri (Cajuri e Arraial Paraguai), uma no município de Coimbra (Coimbra), uma no município de Porto Firme (Nova Ilha) e uma no município de Piranga (piranga). Com exceção da populaçao de "Centro", as oito primeiras populações de Viçosa e a população de Porto Firme foram amostradas em dois intervalos de tempo diferentes (1996-1998 e 1998-2002), enquanto as populações dos municípios de Cajuri, Coimbra e Piranga, assim como as populações viçosences de Fundao e Barrinha, foram estudadas apenas na segundo amostragem. Os resultados obtidos na primeira etapa de coletas revelaram que, em maior ou menor freqüência, todas as populações analisadas possuem cromossomos B. Entre as populações de Viçosa, a grande maioria das fêmeas e machos analisados portaram um cromos somo B por genoma haplóide, ou seja, a mesma dosagem dos cromossomos do complemento A. Por outro lado, na única população analisada em Porto Firme, somente 14.3% dos indivíduos apresentaram cromossomos B. Considerando que uma das principais características dos cromossomos B é seu modo de transmissão não-mendeliano, a possibilidade de que, em Viçosa, os cromos somos B de T. albitarse estivessem regularizando seu comportamento meiótico e, conseqüentemente, alcançando sua estabilização como um membro normal do complemento cromossômico, foi postulada. Na tentativa de testar esta hipótese, o processo de estabilização dos cromossomos B foi estatisticamente quantificado em todas as populações analisadas. Em Porto Firme, o índice de estabilização (SI) dos B foi bastante baixo, indicando uma invasão recente. Não obstante, em Viçosa, o SI foi igual a 100% em três diferentes populações, onde todos os indivíduos portavam um B por genoma haplóide e indicou uma forte tendência à estabilização dos B nas demais populações. Um estudo comparativo desses dados com os obtidos no seguinte período de amostragem forneceram evidências diretas do processo invasivo dos B em Porto Firme, onde a frequência de Bs aumentou drasticamente. Entretanto em Viçosa, a despeito do aumento em frequência do tipo metacêntrico e da significativa reduçao do tipo acrocêntrico em várias populações, a frequência geral de cromossomos B permaneceu estável. As novas populações analisadas, mostraram uma frequência de Bs e parametros de estabilidade semelhantes aos observados em Viçosa, indicando que se encontram em um estágio evolutivo similar, com a maioria dos indivíduos portando um cromos somo B por genoma haplóide e altos valores de SI. A técnica de FISH com sonda de rDNA não revelou a presença de genes ribossômicos nos cromos somos B, não obstante, demonstrou que, em T. albitarse, os genes ribossômicos estão localizados em toda extensão do braço heterocromático do cromossomo 14. Embora a técnica de impregnação por prata não tenha sido efetiva na localização cromossômica da NOR ativa, foi aplicada com bastante exito na quantificação da atividade nucleolar nos núcleos interfásicos de machos e fêmeas de T. albitarse, mostrando que, a despeito da grande variabilidade no tamanho do 'braço ribossômico' em machos e fêmeas dessa espécie, a atividade nuc1eolar é proporcional ao nível de ploidia dos indivíduos / Abstract: Among the 13 cytogenetica1ly analysed species of Trypoxylon genus, only T. albitarse possess B chromosomes. Two types morphologically distinct of B chromosomes have been found in this wasp, one metacentric and other acrocentric, which are totally heterochromatic. Over the last five years (1996 the 2000), 1003 specimens of T. albitarse obtained from 692 nests, had been cytogenetically studied with respect to the occurrence, distribution, frequency and evolution of its B chromosomes. Many of these individuals had been subjected to techniques of fluorescent in situ hybridisation (FISH) or silver nitrate staining for location of ribosomal genes and nucleoli, respectively. All analysed individuals were collected in different natural populations in the Zona da Mata Mineira (Minas Gerais State, Brazil), of which 11 are located in the city of Viçosa (Amoras, Campus, Centro, Marrecos, Palmital, Paraíso, Silvestre, Vila. Cristal, Villa Chaves, Fundão and Barrinha), two in the city of Cajuri (Cajuri and Arraial Paraguai), one in the city of Coimbra (Coimbra), one in the city of Porto Firme (Nova Ilha) and one in the city of Piranga (piranga). Besides the Centro population, the eight first populations from Viçosa and the population of Porto Firme were sampled twice (1996-1998 and 1998-2002), while the populations located in Cajuri, Coimbra and Piranga, as well as Fundao and Barrinha (Viçosa), were studied only included in the second sampling. The results observed in the first stage of collections have revealed that, although in different frequency, all analysed populations possess B chromosomes. Among the Viçosa's populations, most bore females and males carried a B chromosome per haploid genome, the same dosage of standard (A) chromosomes. On the other hand, in Porto Firme, only 14.3% of individuals carried B chromosomes. Because one of the most conspicuous features of B chromosomes is their non-mendelian transmission mode, we hypothesized that at least in Viçosa, the B chromosomes of T. albitarse were regularizing their meiotic behaviour and, consequently, reaching their stabilization as a normal member of the normal chromosomal complement. To test this hypothesis, the stabilization process of B chromosomes was statistically quantified in all populations. In Porto Firme, the stabilization index (SI) of the B was sufficiently low, indicating a recent invasion. On the other hand populations from Viçosa carried a B per haploid genome, the SI value was equal to 100% while the other populations indicated a strong trend toward the stabilization of B chromosomes. A comparative analysis performed with both set of data (obtained in the first and second period of sampling) had supplied direct evidences of the invasive process of B in Porto Firme, where the B frequency has increased significantly. However in Viçosa, in spite of the increase in the metacentric B frequency and the significant reduction, in some populations, in the acrocentric B frequency, the general frequency of B chromosomes remained stable. The additional populations sampled showed B frequency and stability parameters similar to these observed in the Viçosa region, indicating that they are in a similar evolutionary stage, with most individuals carrying one B per haploid genome and high SI values. Fluorescent in situ hybridization (FISH) showed all ribosomal genes located in the heterochromatic arm of chromosome 14. The silver impregnation method was successfully applied in the nuc1eolar activity quantification of interfasic nuc1ei in males and females of T. albitarse. These results suggested that, despite the great variability in the size of ribosomal arm in this species, nuc1eolar activity is adjusted to the ploidy level / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Stephen Hyslo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:20:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_EricleisonCardoso_M.pdf: 4576236 bytes, checksum: f060332dfc56c8cc9398f30a084be354 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Peçonhas de vespas são capazes de produzir uma variedade de efeitos biológicos, tais como dor, edema, hipotensão, hepatotoxicidade e reações alérgicas. Com a exceção da peçonha da abelha Apis mellifera e de algumas (poucas) espécies de vespas sociais, as peçonhas de himenópteros brasileiros têm sido pouco estudadas. Neste trabalho, caracterizamos farmacologicamente as atividades nas peçonhas de três espécies de vespas sociais da família Vespidae (Polybia chrysothorax, Pseudopolybia compressa e Polybia rejecta) e duas espécies de hábitos solitários, da família Scoliidae, do gênero Pypper (pypper sp. 1 e Pypper sp. 2), todas da região nordeste do Brasil. Especificamente, avaliamos a atividade sobre músculo liso (íleo isolado de cobaia), a cardiotoxicidade em coração semi-isolado de barata, e a ação sobre neurotransmissão em nervo sensorial de crustáceo (siri azul, Callinectes danae) e em junção neuromuscular (preparação nervo frênico-diaftagmo) de camundongo. As peçonhas das três espécies sociais contraíram o íleo isolado de cobaia na faixa de 0.001-100 ~g/ml (dependendo da peçonha), com CEso de 0,25 :t 0,05 ~g/ml, 8,75 :t 1,25 ~g/ml e 7,65 :t 1,85 ~g/ml, (média:!:EPM, 1=4) para Polybia chrysothorax, Polybia rejecta e Pseudopolybia compressa, respectivamente. As peçonhas do gênero Pypper eram inativos neste tecido. A pré-incubação dos tecidos com atropina (antagonista dos receptores muscarínicos, 10 J.1M), metisergida (antagonista dos receptores 5-HT2 da serotonina, 10 JlM), e pirilamina (antagonista dos receptores HI da histamina, 10 f.lM) inibiu a atividade contrátil das três peçonhas sociais enquanto que o Hoe-140 (antagonista dos receptores B2 da bradicinina, 1 JlM) não afetou as respostas. Estes resultados indicam que as peçonhas sociais contêm aminas biogênicas (acetilcolina, histamina e serotonina) mas são destituídas de cininas. As três peçonhas (1-100 ~g) mostraram atividade cardiotóxica em coração semi-isolado de barata, sendo que as mais potentes foram P. chrysothorax e P. compressa; as peçonhas do gênero Pypper eram inativas nesta preparação. A investigação dos possíveis mecanismos responsáveis por este efeito através do uso de antagonistas/inibidores indicou que não houve envolvimento de aminas das peçonhas e que a causa mais provável era uma atuação a nível de canais iônicos, especialmente os de sódio e, em grau menor, os de potássio. A dosagem da atividade fosfolipásica das peçonhas mostrou a seguinte ordem de potência: P. chrysothorax/P. compressa> P. rejecta » Pypper spp., porém esta atividade parece contribuir pouco para os efeitos observados uma vez que a indometacina apenas retardou o início da cardiotoxicidade. Na neurotransmissão, as peçonhas de P. chrysothorax e P. compressa (100 Jlg cada) aumentaram a atividade elétrica espontânea (disparo de potenciais de ação) do nervo sensorial de crustáceo de forma semelhante ao efeito causado pela brevetoxina (10-6 M), uma toxina marinha que age no mecanismo de portão do canal de sódio. As peçonhas também inibiram o potencial de ação do nervo em experimentos de "sucrose gap", efeito este que foi abolido pela tetrodotoxina (10-6 M), bloqueador de canais de sódio voltagem-dependentes. Nestes experimentos, as peçonhas de P. rejecta e do gênero Pypper eram inativas. As peçonhas das duas espécies sociais P. chrysothorax e P. compressa (25-100 Jlg/rnl), mas não da social P. rejecta e das solitárias, inhibiram da neurotransmissão em preparações nervo fTênico-diaftagmo de camundongo (tempo para bloqueio de 50% da resposta contrátil: 40 :!: 5 min (n= 3) e 57 :!: 3 min (n= 3), respectivamente, na concentração de 100 Jlg/rnl). Esta inibição era irreversível por lavagem das preparações. As peçonhas sociais também despolarizaram a membrana da fibra muscular e da placa terminal da junção neuromuscular. Estes achados sugerem uma ação pós-sináptica com possível envolvimento pré-sináptico. As três peçonhas produziram alterações morfológicas no músculo do diaftagma compatíveis com a nuonecrose e correlacionada à sua atividade fosfolipásica. O ftacionamento das peçonhas de P. chrysothorax e P. compressa por HPLC em coluna de fase reversa CI8 resultou em vários picos. O principal destes da peçonha de P. chrysothorax foi seqüenciado. A seqüênciaobtida (ARSLLEGLGIRRGSA), indicou que o peptídeo pertence à família de peptídeos conhecidos como pompilitodotoxinas (pMTX), a qual contém duas isoformas, a-PMTX e J3-PMTX, purificados das peçonhas das vespas solitárias Anoplius samariensis e Batozonellus maculifrons, respectivamente. Esta toxina reproduziu a cardiotoxicidade em coração de barata e o bloqueio de neurotransmissão em crustáceos observados para a peçonha de P. chrysothorax. Os resultados deste estudo indicam que as peçonhas investigadas possuem várias atividades biológicas. A demonstração de que as ações cardio e neurotóxicas da peçonha de P. chrysothorax eram devidas em grande parte à presença de uma isoforma de PMTXs sugere que peçonhas de espécies de vespas sociais podem servir de fontes para moléculas com potencial utilidade como inseticidas / Abstract: Wasp venoms produce a variety of biological effects, including pain, edema, hypotension, hepatotoxicity and allergic reactions. With the exception of bee (Apis mellifera) venom and of a few wasp species, little is known of the toxinology of Brazilian hymenopterans. In this work, we examined the pharmacological activities of venom trom three species of social wasps (Polybia chrysothorax, Pseudopolybia compressa and Polybia rejecta, family Vespidae) and two species of solitary wasps of the genus Pypper (family Scoliidae) found in northeastern Brazil. Specifically, we evaluated the activity on smooth muscle (guinea pig isolated ileum), the cardiotoxicity in cockroach semi-isolated heart, and the action on neurotransmission in crustacean (Callinectes danae, blue crab) sensorial nerve and in mouse phrenic nerve-diaphragm preparations. The venoms ofthe three social species (0.001-100 ~glml, depending on the venom) contracted guinea pig isolated ileum, with ECso of 0.25 ~0.05 ~glrnl, 8.75 :t 1.25 ~glrnl and 7.65 :t 1.85 Ilglrnl (mean~SEM, n=4) for P. chrysothorax, P. rejecta and P. compressa, respectively. The venoms of the two species of Pypper were inactive in this tissue. Pre incubating the tissues with atropine (antagonist of muscarinic receptors, 1 O ~, methysergide (antagonist of serotonin 5-HT 2 receptors, 1 O ~, and pyrilamine (antagonist of histamine HI receptors, 1 O ~ inhibited the contractile activity of the three social venoms, whereas Hoe-140 (antagonist of bradykinin B2 receptors, 1 ~ had no effect on the responses. These results indicate that the social wasp venoms contained amines (acetylcholine, histamine and serotonin) but not kinins. The three venoms (1-100 Jlg) showed cardiotoxicity in cockroach semi-isolated heart, with the most potent being P. chrysothorax and P. compressa; the venoms of the genus Pypper were inactive in this preparation. Investigation of the mechanisms responsible for this effect based on the use of antagonists/inhibitors indicated that there was no contribution by venom amines and that the most probab1e cause was an action involving ion channels, especially sodium channels and, to a lesser degree, potassium channels. The venoms showed the following order of potency for their phospholipase A activity: P. chrysothorax/P. compresas> P. rejecta » Pypper spp. However, this activity contributed little to the observed effects since indomethacin only delayed the cardiotoxicity but did not abolish it. The- venoms of P. chrysothorax and P. compressa (100 Jlg each) increased the spontaneous electrical activity of crustacean sensorial nerve in a manner similar to that observe.d with brevetoxin (5xtO.7 M), a marine toxin that affects thegating mechanism of voltage-dependent sodium channels. These venoms also inhibited sensory nerve action potentials in sucrose gap experiments. This effect was abolished by tetrodotoxin (10-6 M), a blocker of voltage-dependent sodium channels. The venoms of P. rejecta and of the genus Pypper-were inactive in this preparation. The venom of the three social species (25-100 Jlglml), but not the solitary species, inhibited. neurotransmission in mouse phrenic nerve-diaphragm preparations (the time- for 50% blockade of the contractile responses was 40 j: 5 min and 57 j: 3 min for P. chrysothorax and P. compressa, respectively, at 100 Jlglml; n=3 each). This inhibition was irreversible by washing the preparations. The social wasp venoms also depolarized the muscle fiber membrane and tOO terminal endplate of neuromuscular junctions. These observations suggested a possible postsynaptic action for the venoms, with some presynaptic involvement. The three social venoms also produced morphologica1 alterations in muscle that were compatible- with myonecrosis. The- leveI of this damage- correlated with the venom PLA2 activity. The tractionation of P. chrysothorax and P. compressa venoms by RP-HPLC on a CI8 column resulted in several peaks. The main peak of P. chrysothorax venom was sequenced. The sequence obtaine-d (ARSLLEGLGIRRGSA) indicated that the peptide belonged to the family of peptides known as pompilidotoxinas (PMTX), which contains two isoforms, a-PMTX and Jj-PMTX, purified of the venoms of the- soltary wasps Anoplius samariensis and Batozonellus maculifrons, respectively. This toxin reproduced the cardiotoxicity in cockroach heart and the blockade of neurotransmisson in crustacean nerves seen with P. chrysothorax venom. The results of this study indicate that the venoms investigate-d had several biological activities. The demonstration that the cardio- and neurotoxicity of P. chrysothorax venom were largely attributable to the presence of a novel isoform of PMTXs suggests that venom social wasp of species may serve as a source of molecules with potential usefulness as insecticides / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Márcia Regina Brochetto Braga / Coorientador: Mário Sergio Palma / Banca: Henrique Ferreira / Banca: Ricardo de Lima Zollner / Banca: Rogilene Aparecida Prado / Resumo: A fosfolipase A1 é um dos principais alérgenos identificados no veneno do Polybia paulista (Hymenoptera: Vespidae), uma vespa social de elevada importância clínica no sudeste do Brasil. A produção recombinante deste alérgeno contribuirá com o desenvolvimento do diagnóstico molecular de alergia. Neste trabalho é descrita a produção recombinante da fosfolipase A1 de P. paulista (rPoly p 1) no sistema celular Escherichia coli. Elevados níveis da rPoly p 1 na forma insolúvel foram obtidos após expressão na bactéria. A otimização das condições de solubilização permitiu incrementar os níveis de recuperação do alérgeno recombinante. A rPoly p 1 foi purificada (99%) até homogeneidade mediante cromatografia de afinidade em coluna de Ni2+, mostrando valores de rendimento finais de 1.5 g/L de meio de cultura. A forma nativa do alérgeno (nPoly p 1) foi purificada mediante cromatografia de troca catiônica. A rPoly p 1 foi reconhecida pela IgE específica de soros de pacientes sensibilizados ao veneno de P. paulista. O uso da rPoly p 1 permite diferenciar a ocorrência de real dupla sensibilização ao veneno de vespa e formiga ou vespa e abelha da incidência de reatividade cruzada. Soros de pacientes com IgE específica ao veneno de abelha e formiga não reagiram com a rPoly p 1, enquanto que soros de camundongos sensibilizados com rPoly p 1 apresentaram reatividade cruzada exclusivamente com fosfolipases A1 (PLA1) de vespas Neotropicais ou de climas temperados. O alinhamento múltiplo do modelo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Phospholipase A1 (PLA1) is one of the major allergens identified in the venom Polybia paulista (Hymenoptera: Vespidae), a clinically relevant social wasp from Brazil Southeast. The recombinant production of this allergen could result in the development of molecular diagnosis of allergy thus improving the outcomes of venom immunotherapy (IT). Here, we describe the heterologous production of the PLA1 from P. paulista venom in Escherichia coli. High levels of the insoluble recombinant allergen (rPoly p 1) were obtained after expression in the prokaryotic system. The downstream optimization of the solubilization process resulted in high levels of protein recovery. The rPoly p 1 was purified to homogeneity (99%) using an immobilized Ni2+ metal affinity chromatography while a single-step cation-exchange chromatography allowed the purification of native Poly p 1 (nPoly p 1) from the venom glands. Immunoblotting analyses showed the IgE-mediated recognition of the rPoly p 1 by sera from patients sensitized to P. paulista venom. The rPoly p 1 could allow the differentiation of true double sensitization to wasp/bee and wasp/ant venoms from cross-reactivity. The sera from patients with monosensitization to honey bee or fire ant venoms do not cross-reacted with the recombinant allergen. Meanwhile, the sera from rPoly p 1-sensitized mice cross-reacted with venoms of other clinically relevant wasps from Neotropical and temperate regions. The alignment of the 3-D model from rPoly p 1 with the PLA1s from some of these wasps suggested the presence of homologues epitopes as the molecular basis for the cross-reactivity. The presence of cross-reactive carbohydrates determinants (CCDs) in the venom of several Brazilian wasps, which is a major issue for understanding the incidence of cross-reactivity during diagnosis, was also analyzed. Overall, the results described .. (Complete abstract click electronic access below) / Doutor