Submitted by Alexandre Sousa (alexandre.sousa@incqs.fiocruz.br) on 2014-07-03T21:54:54Z No. of bitstreams: 1 MARARLENE_Dissertacao (1).pdf: 2444212 bytes, checksum: 522268424d7b6029b60dfc70b716c1b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-03T21:54:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARARLENE_Dissertacao (1).pdf: 2444212 bytes, checksum: 522268424d7b6029b60dfc70b716c1b5 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Os ionóforos poliéteres são antibióticos utilizados em bovinos como promotores de crescimento, para aumentar a produção de leite em vacas lactentes e prevenir e tratar a coccidiose. Entretanto, poucos são os métodos para determinação destes resíduos em leite e não há dados de monitoramento disponíveis no Brasil. Este trabalho teve como objetivo desenvolver, validar e aplicar um método para a determinação de resíduos de seis antibióticos da classe dos ionóforos poliéteres (lasalocida, maduramicina, monensina, narasina, salinomicina e senduramicina) em leite cru, UHT, pasteurizado e em pó empregando a extração QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe) e a cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas sequencial (LC-MS/MS). Recuperações globais de 92,8 a 112,7% e desvios padrão relativos inferiores a 16% foram obtidos em condições de precisão intermediária. Os valores de CCα calculados não ultrapassaram 20% do Limite Máximo de Resíduo (LMR) para a monensina e 25% dos Níveis Máximos (NM) para as demais substâncias. Os limites de detecção estimados variaram de 0,03 µg/L a 0,4 µg/L e os limites de quantificação de 0,07 µg/L a 0,9 µg/L para a salinomicina e maduramicina, respectivamente. Estes resultados demonstraram que o método desenvolvido e validado é adequado para a determinação de resíduos de lasalocida, maduramicina, monensina, narasina, salinomicina e senduramicina em leites em pó, cru, UHT e pasteurizado, para fins de verificação da conformidade de amostras em relação aos limites recomendados pelo Codex Alimentarius e pela Comunidade Europeia. O método foi aplicado em 102 amostras de leite integral UHT comercializadas na região metropolitana do Rio de Janeiro, fornecendo dados inéditos no Brasil sobre a ocorrência de resíduos de ionóforos poliéteres neste produto de origem animal. A substância monensina foi detectada em 13,7% das amostras, mas nenhuma apresentou resultados acima dos limites regulatórios. O método validado poderá ser utilizado no INCQS para análises de rotina, contribuindo para ações de vigilância sanitária. / Polyether ionophores are antibiotics used in cattle to promote growth, enhance milk production in dairy cows and prevent and treat coccidiosis. However, there are just a few methods for determining these residues in milk and no monitoring data available in Brazil. This study aimed to develop, validate and apply a method for determining residues of six antibiotics belonging to the polyether ionophore class (lasalocid maduramicin, monensin, narasin, salinomycin and semduramicin) in raw, UHT, pasteurized and powdered milk using QuEChERS extraction (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe) and high performance liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Overall recoveries from 92.8 to 112.7% and relative standard deviation lower than 16% were obtained in intermediate precision conditions. CCα calculated values did not exceed 20% the Maximum Residue Limit (MRL) for monensin and 25% the Maximum Levels (ML) for the remaining substances. Estimated detection limits ranged from 0.03 µg/L to 0.4 µg/L and limits of quantification from 0.07 µg/L to 0.9 µg/L for salinomycin and maduramicin, respectively. These results showed that the developed and validated method is suitable for the determination of residues of lasalocid, maduramicin, monensin, narasin, salinomycin and semduramicin in powder, raw, pasteurized and UHT milk, for sample compliance evaluation regarding the limits recommended by Codex Alimentarius and European Community. The method was applied for 102 samples of UHT whole milk marketed in the metropolitan region of Rio de Janeiro, Brazil, providing unpublished data on the occurrence of polyether ionophores residues in this animal product. The substance monensin was detected in 13.7% of samples, but none of them showed results above the regulatory limits. The validated method could be used in INCQS for routine analysis, contributing to health surveillance actions.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Currently, one of highest trade barriers that Brazil has found for the marketing of their products from the agribusiness chain is the lack of informations on the presence of residues in foods produced in the country. Due to the complexity of the matrices of animal origin and the low concentrations of pesticides and veterinary drugs present, there is a great need to develop efficient and reliable analytical methods for identification and quantification of residues. In this study we evaluated the linearity range of standard curves (eight concentration levels and six injections each), limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ), matrix effect and the precision and accuracy, in terms of percent recovery for 91 pesticides and 9 veterinary drugs analyzed and validated by the QuEChERS method and Liquid Chromatography coupled with Tandem Mass Spectrometry in meat, liver, kidney, milk and egg samples. For this, we performed the fortification of previously homogenised samples with solutions containing 100 compounds in three fortification levels (10, 25 and 50 μg kg-1), 6 replicates for each level, and applied the method extraction. The modified QuEChERS extraction method consist weighing 10 g of the matrix (10 mL for milk), 10 mL of acetonitrile containing 1% of acetic acid (v/v) and shake handly and vigorously for about 1 min. After, 4 g of anhydrous magnesium sulfate and 1.7 g anhydrous sodium acetate, repeating the agitation. After centrifugation for 8 min (3500 rpm), 4 mL of extract were transferred to another tube containing 600 mg of anhydrous magnesium sulfate and 500 mg C18, repeating the agitation and centrifugation. The extract was diluted (1:1) in the mobile phase, and then analyzed by LC-MS/MS. Analytical curves prepared in solvent and in all matrix extracts, showed adequate linearity between 1.0 and 250.0 μg L-1, with determination coefficients greater than 0.995. The method showed satisfactory recovery values between 70 and 120% (RSD ≤ 20%) to about 85% of the compounds in all matrices at levels 10, 25 and 50 μg kg-1 (for milk μg L-1). In general, the method presented LOQm value of 10 g kg-1 (μg L-1). Therefore, we concluded that the proposed method can be applied efficiently for the determination of pesticide and veterinary drugs residues in the different evaluated matrices without any modification of the method. / Atualmente, uma das maiores barreiras comerciais que o Brasil tem encontrado para a comercialização de seus produtos da cadeia do agronegócio é a falta de informações sobre a presença de resíduos em alimentos produzidos no país. Devido a complexidade das matrizes de origem animal e das baixas concentrações dos agrotóxicos e medicamentos veterinários presentes, há uma grande necessidade de desenvolvimento de métodos analíticos eficientes e confiáveis para a identificação e quantificação dos resíduos. Neste estudo avaliou-se a faixa de linearidade das curvas analíticas (8 níveis de concentração e 6 injeções cada), limite de detecção (LOD), limite de quantificação (LOQ), efeito matriz, bem como precisão e exatidão, em termos de percentual de recuperação, para 91 agrotóxicos e 9 medicamentos veterinários analisados e validados pelo método QuEChERS e Cromatografia Líquida Acoplada à Espectrometria de Massas Sequencial em amostras de carne, fígado, rim, leite e ovo. Para isso, efetuou-se a fortificação dos alimentos previamente homogeinizados, com soluções contendo os 100 compostos, em 3 níveis de fortificação (10, 25 e 50 μg kg-1), 6 réplicas para cada nível, e aplicou-se o método de extração. A extração pelo método QuEChERS modificado consistiu na pesagem de 10,0 g da matriz (para leite 10 mL), 10 mL de acetonitrila contendo 1% (v/v) de ácido acético e procedeu-se a agitação manual e vigorosa, por cerca de 1 min. Acrescentou-se 4,0 g de sulfato de magnésio anidro e 1,7 g de acetato de sódio anidro, repetindo-se a agitação. Foram, posteriormente, centrifugados por 8 min (3500 rpm), após 4 mL de extrato foram transferidos para outro tubo contendo 600 mg de sulfato de magnésio anidro e 500 mg C18, repetindo a agitação e a centrifugação. O extrato foi diluído (1:1) na fase móvel, e em seguida analisado por LC-MS/MS. As curvas analíticas, preparadas no solvente e nos extratos das matrizes avaliadas, apresentaram linearidade adequada entre 1,0 e 250,0 µg L-1, com valores de coeficiente de determinação maiores que 0,995. O método apresentou valores de recuperação satisfatórios entre 70 e 120% e (RSD ≤ 20%) para cerca de 85% dos compostos em todas as matrizes nos níveis de 10, 25 e 50 μg kg-1 (para leite μg L-1). Em geral, o método apresentou valor de LOQm de 10 μg kg-1 (μg L-1). Portanto, concluiu-se que o método proposto pode ser aplicado de forma eficiente para a determinação de resíduos de agrotóxicos e medicamentos veterinários nas diferentes matrizes avaliadas, sem a necessida de alteração do método desenvolvido foi eficiente para a extração e clean-up dos extratos de carne, fígado, rim, leite e ovo, uma vez que apresentou desempenho satisfatório em ambas as matrizes, dependendo da técnica de detecção utilizada.

A presença de compostos de uso veterinário em produtos de origem animal é uma grande preocupação em termos de saúde pública. A utilização descontrolada de antibióticos como medicamentos veterinários pode levar ao desenvolvimento de resistência bacteriana, podendo prejudicar a eficácia destas drogas no uso em humanos. Os aminoglicosídeos são antibióticos extensivamente utilizados na criação de animais para o tratamento de infecções bacterianas ou para a promoção do crescimento. A União Europeia estabeleceu níveis máximos de resíduos permitidos (LMRs) para os aminoglicosídeos em vários alimentos de origem animal. O governo brasileiro implementou um plano de controle que avalia os resíduos de medicamentos veterinários em produtos de origem animal. Neste trabalho, foram desenvolvidos método quantitativo por cromatografia a líquido acoplada a espectrometria de massas triplo quadrupolo em modo tandem (LC-MS/MS) e método de screening utilizando cromatografia a líquido acoplada a espectrometria de massas com analisador por tempo-de-voo (LC-qTOF-MS) para a determinação simultânea dos aminoglicosídeos espectinomicina, tobramicina, gentamicina, kanamicina, higromicina, apramicina, estreptomicina, diidroestreptomicina, amicacina e neomicina em leite e em músculo bovino, de aves e suíno. Como método de extração utilizou-se procedimento com ácido tricloroacético e clean up por precipitação a baixa temperatura e C18 a granel. Os métodos por LC-MS/MS e LC-qTOF-MS foram validados de acordo com a Diretiva da Comissão Europeia 2002/657/CE. Os resultados obtidos no método quantitativo para recuperação, precisão, linearidade, especificidade, limites de decisão (CCα) e capacidades de detecção (CCβ) nestas matrizes foram considerados satisfatórios. Os dados de limite de detecção (LOD) e limite de quantificação (LOQ) foram estabelecidos a partir dos LMRs, variando de 5 a 100 ng g-1 para LOD e 12,5 a 250 ng g-1 para LOQ. As recuperações variaram de 36,8 a 98%, e os coeficientes de variação ficaram entre 0,9 e 20,2%, observando-se que todas as curvas foram feitas com nas próprias matrizes a fim de minimizar os efeitos de matriz que são intrínsecos para os casos estudados neste trabalho. Os valores de CCβ obtidos no método qualitativo foram entre 25 e 250 ng g-1, considerados satisfatórios para os analitos nessas matrizes. O método proposto mostrou-se simples, fácil e adequado para a análise de um grande número de amostras por dia a um baixo custo. / The presence of several substances in animal products has been a major public concern. The use of antibiotics drugs as veterinary medicines might lead to the development of bacterial resistance, which might undermine the efficacy of these drugs in human use. The aminoglycosides are antibiotics that have been extensively employed in animal husbandry for the treatment of bacterial infections, but also as growth promotion. The European Union has issued strict maximum residue levels (MRLs) for aminoglycosides in several animal origin products. The Brazilian government implemented a control plan that assesses the residues of veterinary medicines in animal products. A quantitative method based on liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC–MS/MS) and a screening method by liquid chromatography mass spectrometry with time-of-flight system (LC-qTOF-MS) has been developed for simultaneous determination of the aminoglycosides spectonomycin, tobramycin, gentamicin, kanamycin, hygromycin, apramycin, streptomycin, dihydrostreptomycin, amikacin and neomycin in milk and in bovine, poultry and swine muscles. A simple extraction method was developed using trichloroacetic acid and clean up with low temperature precipitation and C18 bulk. The LC–MS/MS and LC-qTOF-MS methods were validated according to the European Union Commission Directive 2002/657/EC. Adequate performance characteristics were obtained for recovery, precision, calibration curve, specificity, decision limits (CCα) and detection capabilities (CCβ) in all matrices tested. The detection limit (LOD) and limits of quantification (LOQ) was established from MRL ranging from 5 to 100 ng g-1 for LOD and 12.5 to 250 ng g-1 to LOQ. Recoveries ranged from 36.8 to 98.0% and the coefficient of variation from 0.9 to 20.2%, noting that all curves have been made into their own matrices in order to minimize the matrix effects which are intrinsic to the cases studied in this work. The CCβ values obtained in qualitative method were between 25 and 250 ng g-1, considered satisfactory for the analytes in those matrices. The proposed method proved to be simple, easy, and adequate for high-throughput analysis of a large number of samples per day at low cost.

A presença de compostos de uso veterinário em produtos de origem animal é uma grande preocupação em termos de saúde pública. A utilização descontrolada de antibióticos como medicamentos veterinários pode levar ao desenvolvimento de resistência bacteriana, podendo prejudicar a eficácia destas drogas no uso em humanos. Os aminoglicosídeos são antibióticos extensivamente utilizados na criação de animais para o tratamento de infecções bacterianas ou para a promoção do crescimento. A União Europeia estabeleceu níveis máximos de resíduos permitidos (LMRs) para os aminoglicosídeos em vários alimentos de origem animal. O governo brasileiro implementou um plano de controle que avalia os resíduos de medicamentos veterinários em produtos de origem animal. Neste trabalho, foram desenvolvidos método quantitativo por cromatografia a líquido acoplada a espectrometria de massas triplo quadrupolo em modo tandem (LC-MS/MS) e método de screening utilizando cromatografia a líquido acoplada a espectrometria de massas com analisador por tempo-de-voo (LC-qTOF-MS) para a determinação simultânea dos aminoglicosídeos espectinomicina, tobramicina, gentamicina, kanamicina, higromicina, apramicina, estreptomicina, diidroestreptomicina, amicacina e neomicina em leite e em músculo bovino, de aves e suíno. Como método de extração utilizou-se procedimento com ácido tricloroacético e clean up por precipitação a baixa temperatura e C18 a granel. Os métodos por LC-MS/MS e LC-qTOF-MS foram validados de acordo com a Diretiva da Comissão Europeia 2002/657/CE. Os resultados obtidos no método quantitativo para recuperação, precisão, linearidade, especificidade, limites de decisão (CCα) e capacidades de detecção (CCβ) nestas matrizes foram considerados satisfatórios. Os dados de limite de detecção (LOD) e limite de quantificação (LOQ) foram estabelecidos a partir dos LMRs, variando de 5 a 100 ng g-1 para LOD e 12,5 a 250 ng g-1 para LOQ. As recuperações variaram de 36,8 a 98%, e os coeficientes de variação ficaram entre 0,9 e 20,2%, observando-se que todas as curvas foram feitas com nas próprias matrizes a fim de minimizar os efeitos de matriz que são intrínsecos para os casos estudados neste trabalho. Os valores de CCβ obtidos no método qualitativo foram entre 25 e 250 ng g-1, considerados satisfatórios para os analitos nessas matrizes. O método proposto mostrou-se simples, fácil e adequado para a análise de um grande número de amostras por dia a um baixo custo. / The presence of several substances in animal products has been a major public concern. The use of antibiotics drugs as veterinary medicines might lead to the development of bacterial resistance, which might undermine the efficacy of these drugs in human use. The aminoglycosides are antibiotics that have been extensively employed in animal husbandry for the treatment of bacterial infections, but also as growth promotion. The European Union has issued strict maximum residue levels (MRLs) for aminoglycosides in several animal origin products. The Brazilian government implemented a control plan that assesses the residues of veterinary medicines in animal products. A quantitative method based on liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC–MS/MS) and a screening method by liquid chromatography mass spectrometry with time-of-flight system (LC-qTOF-MS) has been developed for simultaneous determination of the aminoglycosides spectonomycin, tobramycin, gentamicin, kanamycin, hygromycin, apramycin, streptomycin, dihydrostreptomycin, amikacin and neomycin in milk and in bovine, poultry and swine muscles. A simple extraction method was developed using trichloroacetic acid and clean up with low temperature precipitation and C18 bulk. The LC–MS/MS and LC-qTOF-MS methods were validated according to the European Union Commission Directive 2002/657/EC. Adequate performance characteristics were obtained for recovery, precision, calibration curve, specificity, decision limits (CCα) and detection capabilities (CCβ) in all matrices tested. The detection limit (LOD) and limits of quantification (LOQ) was established from MRL ranging from 5 to 100 ng g-1 for LOD and 12.5 to 250 ng g-1 to LOQ. Recoveries ranged from 36.8 to 98.0% and the coefficient of variation from 0.9 to 20.2%, noting that all curves have been made into their own matrices in order to minimize the matrix effects which are intrinsic to the cases studied in this work. The CCβ values obtained in qualitative method were between 25 and 250 ng g-1, considered satisfactory for the analytes in those matrices. The proposed method proved to be simple, easy, and adequate for high-throughput analysis of a large number of samples per day at low cost.

Orientadores: Felix Guillermo Reyes Reyes, Marili Villa Nova Rodrigues / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-19T20:15:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Branco_LucianadaConceicaoCastello_M.pdf: 696133 bytes, checksum: 0c1ae932e7cdd4cd2fea5388f7a0bb5a (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Os antimicrobianos são aplicados mundialmente na tilapicultura para o tratamento de bacterioses, principais doenças que acometem esta espécie. Entre os antibióticos, a enrofloxacina (ENR), pertencente à família das quinolonas, é utilizada internacionalmente e tem demonstrado ser eficaz no tratamento de infecções bacterianas. No Brasil, seu uso na criação de peixes ainda não foi aprovado, mas o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) incluiu, em 2010, este fármaco no Plano Nacional de Controle de Resíduos e Contaminantes em Peixes (PNCRC). A ENR é biotransformada pelos animais à ciprofloxacina (CIP), composto este que apresenta atividade antimicrobiana e é utilizado na medicina humana. O processamento de alimentos tem mostrado ser um fator positivo para a segurança dos alimentos, devido à possível degradação de resíduos de antimicrobianos que poderiam causar o desenvolvimento de resistência em micro-organismos ou induzir efeitos adversos na saúde de seres humanos. Assim, é de grande importância, do ponto de vista da saúde pública e de conhecimento científico, conhecer o comportamento de resíduos de medicamentos veterinários nos alimentos quando submetidos ao processamento. O fishbúrguer, preparado com carne de tilápia, têm demonstrado elevada aceitação pelos consumidores. Isto reflete o novo estilo da vida em que os requisitos para a compra de um alimento incluem os benefícios nutricionais e também a conveniência de preparação. Para avaliar a diminuição dos níveis de resíduo de ENR e CIP presentes em filé de tilápia, durante processo de produção e fritura dos mesmos, torna-se necessário o desenvolvimento e validação de metodologia analítica que apresentem precisão, exatidão e sensibilidade para determinar este composto e seu metabólito. Portanto, os objetivos deste trabalho foram em filé de tilápia, bem como em um produto derivado, fishbúrguer, para avaliar a estabilidade dessas substâncias durante o processo de produção e fritura. Para este fim, um método simples, rápido e de baixo custo, utilizando LC-MS, foi desenvolvido e validado para a determinação simultânea de ENF e CIP. O preparo de amostra foi baseado na precipitação de proteínas com ácido tricloroacético, extração com acetonitrila e limpeza do extrato com hexano. A separação cromatográfica foi realizada em uma coluna C18. Para ambos os compostos, as curvas de calibração na matriz demonstraram linearidade superior a 0,99. O método foi seletivo, exato (91-100% de recuperação) e preciso (coeficientes de variação abaixo de 5%). Limites de detecção e quantificação foram, respectivamente, 3,5 e 10,4 µg/kg para ambos os compostos. Os valores calculados CCa e CCß foram, respectivamente, 107 e 114 µg/kg para ENR e 105 e 110 µg/kg para CIP (LMR estabelecido pela Comissão da UE é de 100 µg/kg para a soma de ENR e CIP). O método foi empregado para a determinação de resíduos de ENR e CIP em amostras de filés de tilápia obtidos a partir de peixes expostos a ENR (dose única de 40 mg/kg de peso corpóreo - administrado via ração). Os animais foram sacrificados após 4, 8 e 12 h de exposição. Resíduos acima do LMR foram encontrados mesmo após 12 h de administração do fármaco. A fim de avaliar a influência do processo de produção e fritura sobre os níveis residuais de ENR e CIP, fishbúrgueres foram preparados com filé de tilápias expostas a ENR. O método analítico para determinação da ENR e CIP no filé de tilápia foi adaptado e validado para a análise de fishbúrgueres antes e após fritura. Os métodos adaptados foram validados e mostraram-se linear, com coeficiente de correlação maior que 0,99, precisos (coeficiente de variação abaixo de 6%) e exatos (recuperação média de 90 a 106%). Foram analisadas amostras de fishbúrgueres (antes e após fritura) utilizando os métodos validados. Não foi verificada redução significativa dos níveis residuais da soma de ENR e CIP durante o preparo dos fishbúrgueres. No entanto, redução (p<0,05) de, aproximadamente, 10% foi verificada como consequência da fritura. Porém, essa redução pode ser considerada baixa em termos de segurança dos consumidores / Abstract: Antimicrobials are used worldwide for the treatment of tilapicultura bacteriosis, main diseases that affect this species. Among the antibiotics, enrofloxacin (ENR), belonging to the quinolone family, is used internationally and has been shown to be effective in treating bacterial infections in fish. In Brazil, its use in fish farm is not yet approved, but the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA) included, in 2010, this drug in the National Plan for Control of Residues and Contaminants in Fish (PNCRC). ENR is biotransformed in the body of animals being converted to ciprofloxacin (CIP), an active compound used in human medicine. Food processing has shown to be a positive factor for the food safety, due to the possible degradation of antimicrobial agents that could potentially cause development of resistance in microorganisms or induce adverse health effects in humans. Thus, it is of great importance, from the standpoint of public health and scientific knowledge, to know the behavior of veterinary drugs in foods when subjected to processing for consumption. The fishburger, prepared with meat from tilapia, have shown high acceptance by the consumers. This follows the new style of life in which the requirements for the purchase of a food include the nutritional benefits and the convenience of preparation. To evaluate the degradation of ENR present in meat processed as tilapia fishburger, it becomes necessary to develop and validate analytical methods that present precision, accuracy and sensitivity to determine this compound and CIP as well. Therefore, the objectives of this study were to develop and validate analytical method for the determination of ENR and CIP in tilapia fillet, as well as in a product derived from tilapia meat (fishburger) and to evaluate the stability of these substances during the frying of fishburgers prepared from tilapias exposed to ENR. For this purpose, a simple, fast and low cost LC-MS method for the simultaneous determination of ENR and CIP residues in tilapia fillet and fishburgers was developed and validated. Sample preparation was done by protein precipitation with trichloroacetic acid, acetonitrile extraction and extract clean up with hexane. The chromatographic separation was performed on a C18 column. For both compounds, matrix matched calibration curves showed linearity higher than 0.99. The method was selective, accurate (91-100% recovery) and precise (coefficients of variation below 5%). Limits of detection and quantification were, respectively, 3.5 and 10.4 µg/kg for both compounds. The calculated CCa and CCß values were, respectively, 107 and 114 µg/kg for ENR and 105 and 110 µg/kg for CIP (MRL established by the EU Commission is 100 µg/kg for the sum of ENR and CIP). The method was employed for the determination of ENR and CIP residues in samples of tilapia fillets obtained from fishes exposed to ENR (single dose of 40 mg/kg b.w incorporated in the feed). The animals were killed after 4, 8 and 12 h of exposure. Sum of residues of ENR and CIP above the MRL were found, even after 12 h of ENR administration. In order to evaluate the influence of cooking (frying) on the residual levels of ENR and CIP, fishburgers were formulated with fillet of tilapias exposed to ENR. The analytical method for the determination of ENR and CIP in tilapia fillet was adapted and validated for the analysis of the fishburgers before and after frying. Adapted and validated methods showed linearity with a correlation coefficient greater than 0.99, selectivity, precision (coefficient of variation below 6%) and accuracy (average recovery of 90 to 106%). Samples of fishburgers (before and after frying) were analyzed using the validated methods. A small reduction (approximately 10%) in the residual levels of ENR and CIP as a consequence of frying was verified, indicating that both compounds are stable to cooking conditions / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Susanne Rath / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-21T08:01:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Doretto_KeityMargareth_D.pdf: 2722057 bytes, checksum: d4c5a2090af2c524cc8d28125e30eaa2 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Antimicrobianos, entre eles as sulfonamidas, têm sido amplamente utilizados em medicina veterinária para fins terapêuticos e profiláticos. Uma vez excretados os fármacos e/ou metabólitos podem levar a contaminação do meio ambiente e estudos sobre o impacto ambiental ainda são escassos. Em adição, no Brasil, ainda não existe uma fiscalização de medicamentos veterinários. A não conformidade dos medicamentos reflete diretamente na saúde animal, como também é um tópico relevante quanto à segurança alimentar. Assim sendo, métodos foram desenvolvidos e validados para a determinação de sulfadiazina (SDZ), sulfadimetoxina (SDM) e sulfaquinoxalina (SQX) em medicamentos de uso veterinário por cromatografia líquida de alta eficiência associada a um detector de arranjo de fotodiodos (HPLC-DAD). Os resultados obtidos indicam a necessidade de controle de qualidade dos fármacos de uso veterinário comercializados no Brasil. Ainda, o trabalho estudou a sorção da SDZ, SDM e SQX em quatro solos característicos do Estado de São Paulo. Os estudos foram conduzidos conforme recomendação do Guia OECD 106. As sulfonamidas foram quantificadas nas soluções de solo por um método HPLC-DAD previamente validado. Os dados de adsorção/dessorção das sulfonamidas nos quatro solos foram ajustados com isotermas de Freundlich na forma linear ou logarítmica. Um fenômeno de histerese de adsorção/dessorção foi evidente em todos os solos. Os baixos valores do coeficiente de Freundlich (KF) obtidos sugerem fraca adsorção das sulfonamidas nos solos avaliados e, portanto, estas tendem a ser lixiviados e, por sua vez apresentam potencial para contaminar águas superficiais e subterrâneas / Abstract: Antimicrobials, including sulfonamides, have been widely used in veterinary medicine for therapeutic and prophylactic purposes. Once excreted, drugs and/or metabolites can contaminate the environment. Environmental impact studies are still scarce. In addition, in Brazil, there is no surveillance of veterinary medicines. The poor quality of drugs may reflect directly on animal health and is also a topic relevant to food safety. Therefore, methods were developed and validated for the determination of sulfadiazine (SDZ), sulfadimethoxine (SDM) and sulfaquinoxaline (SQX) in veterinary drugs, using high performance liquid chromatography coupled to a photodiode array detector (HPLC-DAD). The obtained results indicate the need for a quality control program of veterinary drugs comercialized in Brazil. Moreover, the present work aim studied the sorption of sulfonamides (SDZ, SDM and SQX) in four characteristic soils of the State of São Paulo. The studies were conducted as recommended by the OECD Guidelines 106. The sulfonamides were quantified in the soil solutions by a previously validated HPLC-DAD method. Adsorption/desorption data of sulfonamides in soils were fitted to Freundlich isotherms in the linear or logarithmic forms. A hysteresis of adsorption/desorption was evident in all four soils evaluated. The low values of the Freundlich coefficient (KF) obtained suggest weak adsorption of sulfonamides in soils, and therefore they tend to be leached and present high potential to contaminate surface and groundwater / Doutorado / Quimica Analitica / Doutora em Ciências

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The agribusiness has been incorporating new technologies in the production of meat, including good management of farms, health, balanced diet, breeding and integrated production. Allied to this, there is a growing concern with issues related to residues and contaminants in animals intended for food production. In the study, were compared four extraction methods based on the method QuEChERS for the determination of 79 pesticides and 15 veterinary drugs analyzed by Liquid Chromatography coupled to tandem Mass Spectrometry in samples of meat and pork liver, chicken and fish. The parameters evaluated were: linear range (6 concentration levels and 6 injections each), limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ), decision limit (CCα), capability of detection (CCβ) and matrix effect, as well as precision and accuracy, in terms of recovery. For this, we performed the fortification of matrices previously homogenized with solutions containing compounds at 3 levels of fortification (20, 50 and 100 μg kg-1), 6 replicates for each level, were performade. The modified QuEChERS extraction method consists in the extraction of 10 g of the matrix with 10 mL of acetonitrile containing 1% (v/v) of acetic acid and shaking vigorously by hand for 1 min. After, 4 g of anhydrous magnesium sulfate and 1.7 g anhydrous sodium acetate were added and the agitation repeated. After the extract was centrifugated for 8 min (3500 rpm) and 2 mL of the extract was transferred to another tube containing 300 mg of anhydrous magnesium sulfate and 50 mg of sorbent PSA, repeating the agitation and centrifugation. The extract was diluted (1:1 v/v) in the mobile phase and then analyzed by LC-MS/MS. Analytical curves prepared in solvent and in extracts of matrices evaluated showed adequate linearity between 5 and 200 μg kg-1, with coefficients of determination greater than 0.99. The method showed satisfactory recovery values between 70 and 120% (RSD ≤ 20%) to about 95% of compounds in all matrices, except for liver showed satisfactory values to about 80% of the compound at levels of 20, 50 and 100 μg kg-1. The LOQ of method was 10 μg kg-1. CCα values were between 1.1 and 102.9 μg kg-1 and CCβ values were in the range 1.9 to 105.9 μg kg-1. The results of this study showed that the modified method QuEChERS is fast, simple and efficient and can be applied to the determination of pesticides and veterinary drugs in samples of meat and liver pork, chicken and fish fillet for routine analysis. Furthermore, the use of LC-MS/MS was efficent, allowing the determination and confirmation of a large number of compounds simultaneously at residues livels. / O agronegócio nacional vem incorporando novas tecnologias na produção de carnes, incluindo bom manejo das granjas, sanidade, alimentação balanceada, melhoramento genético e produção integrada. Aliado a este fato, há uma preocupação crescente com questões relacionadas à presença de resíduos e contaminantes em animais destinados a produção de alimentos. Neste estudo, comparou-se quatro métodos de extração baseados no método QuEChERS para a determinação de 79 agrotóxicos e 15 medicamentos veterinários por Cromatografia Líquida acoplada à Espectrometria de Massas em Série em amostras de carne e fígado suíno, carne de frango e filé de peixe. Os parâmetros avaliados foram: faixa de linear das curvas analíticas (6 níveis de concentração e 6 injeções cada), limite de detecção (LOD), limite de quantificação (LOQ), limite de decisão (CCα), capacidade de detecção (CCβ) e efeito matriz, bem como precisão e exatidão, em termos de recuperação. Para isso, efetuou-se a fortificação das matrizes previamente homogeneizadas, com soluções contendo os compostos em 3 níveis de fortificação (20, 50 e 100 μg kg-1), 6 réplicas para cada nível, e aplicou-se o método proposto. A extração pelo método QuEChERS modificado consistiu na extração de 10,0 g da matriz com 10 mL de acetonitrila contendo 1% (v/v) de ácido acético sob agitação manual e vigorosa por 1 min. Acrescentou-se 4,0 g de sulfato de magnésio anidro e 1,7 g de acetato de sódio anidro, repetindo-se a agitação. O extrato foi centrifugado por 8 min (3500 rpm) e após 2 mL de extrato foram transferidos para outro tubo contendo 300 mg de sulfato de magnésio anidro e 50 mg de sorvente PSA, repetindo-se a agitação e a centrifugação. O extrato foi diluído (1:1) na fase móvel e em seguida analisado por LC-MS/MS. As curvas analíticas, preparadas no solvente e nos extratos das matrizes avaliadas, apresentaram linearidade adequada entre 5 e 200 μg L-1, com valores de coeficiente de determinação maiores que 0,99. O método apresentou valores de recuperação satisfatórios entre 70 e 120% e (RSD ≤ 20%) para cerca de 95% dos compostos em todas as matrizes, exceto para fígado que apresentou valores satisfatórios para cerca de 80% dos compostos nos níveis de 20, 50 e 100 μg kg-1. O valor de LOQ do método foi de 10 μg kg-1. Os valores de CCα ficaram entre 1,1 e 102,9 μg kg-1 e os valores de CCβ ficaram na faixa de 1,9 a 105,9 μg kg-1. Os resultados desse estudo mostraram que o método QuEChERS modificado é rápido, simples e eficiente, podendo ser aplicado para a determinação de agrotóxicos e medicamentos veterinários em amostras de carne e fígado suíno, carne de frango e filé de peixe em análise de rotina. Além disso, o emprego da LC-MS/MS mostrou-se eficiente, permitindo a determinação e confirmação de um grande número de compostos simultaneamente em níveis de resíduos.

Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado / Coorientador: Nájla Mohamad Kassab / Banca: Paulo César Pires Rosa / Banca: Cristiane Masetto Gaitani / Banca: Paulo Clairmont Feitosa de Lima Gomes / Banca: Marlus Chorilli / Resumo: O mercado farmacêutico veterinário tem crescido acentuadamente nos últimos anos, sendo liderado, principalmente, pelo segmento destinado aos animais de produção. As associações de oxitetraciclina com diclofenaco ou com piroxicam, na forma farmacêutica de soluções injetáveis, são amplamente empregadas na medicina veterinária. Apesar da importância clínica dessas associações, não foi encontrado na literatura científica nenhuma metodologia analítica capaz de quantificar simultaneamente esses fármacos nos medicamentos veterinários. Portanto, este trabalho objetivou desenvolver e validar métodos analíticos para determinação simultânea de oxitetraciclina associada ao diclofenaco de sódio ou ao piroxicam em soluções injetáveis veterinárias, empregando a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e Espectrofotometria no ultravioleta (UV). As matérias-primas desses fármacos foram caracterizadas por Cromatografia em Camada Delgada (CCD), Espectrofotometria na região do Ultravioleta (UV) e do Infravermelho (IV), Termogravimetria (TG), Calorimetria Exploratória Diferencial (DSC), Difração de Raios X (DRX), Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas (CLAE-EM). O estudo de degradação forçada foi conduzido em condições hidrolíticas (alcalina, ácida, neutra e oxidativa) e fotolíticas, a estabilidade acelerada e de longa duração foram analisadas durante 6 meses (40 ± 2ºC) e 24 meses (30 ± 2ºC), respectivamente.... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The veterinary pharmaceutical market has grown markedly in the last years, being led, mainly, by the segment destined to the production animals. Fixed-dose combinations of oxytetracycline with diclofenac or piroxicam, available as injectable solutions, are widely used in veterinary medicine. Despite the clinical importance of these combinations, no analytical methodology could be found in the scientific literature capable of quantifying these drugs simultaneously in veterinary pharmaceuticals. Therefore, this work aimed to develop and validate analytical methods for the simultaneous determination of the oxytetracycline, diclofenac sodium and piroxicam in injectable veterinary solutions by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) and UV spectrophotometry. The raw materials of these drugs were characterized by Thin Layer Chromatography (TLC), Ultraviolet (UV) and Infrared (IR) Spectrophotometry, Thermogravimetry (TG), Differential Scanning Calorimetry (DSC), X-ray Diffraction (XRD), Scanning Electron Microscopy (SEM) and High Performance Liquid Chromatography coupled to Mass Spectrometry (HPLC-MS). The forced degradation study was conducted under hydrolytic (alkaline, acid, neutral and oxidative) and photolytic conditions. The accelerated and the long term stability studies were carried out during 6 months (40 ± 2ºC) and 24 months (30 ± 2ºC), respectively.... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Um total de 168 machos Bos indicus foram abatidos depois de 8, 15, 35, 49, 63, 91, 120 e 154 dias após a aplicação de eprinomectina e ivermectina (convencional e longa ação), e 18 diferentes tecidos comestíveis foram avaliados quanto à concentração de resíduos dessas moléculas para verificar se o período de carência estabelecido garante o esgotamento em todos eles, em níveis abaixo dos limites máximos estabelecidos por agências reguladoras internacionais, com o objetivo de abordar questões relacionadas à barreiras técnico-comerciais entre países. Além disso, visou analisar se a concentração desses resíduos é afetada pelo processamento térmico, para avaliar a coerência de se considerar para produtos enlatados, os mesmos limites determinados para produtos crus. As análises de concentração de resíduos foram feitas por HPLC (sistema LC-MS/MS). Os dados foram transformados para escala \"logaritmo natural\" e foi realizada análise de variância, teste de comparação múltipla, análises de regressão e de correlação. Os resultados demonstraram que os níveis de eprinomectina encontrados foram abaixo de todos os limites máximos de resíduos (LMR), ao longo de todos os períodos e tecidos avaliados. Com relação à ivermectina, padrões diferenciados de distribuição foram observados, porém ao final do período de carência, dos 18 tecidos avaliados, 17 apresentaram concentrações dentro dos LMR, com exceção do sítio de aplicação, em que se observou alto nível de dispersão e valores acima de alguns LMR, mesmo após cumprido o período de carência indicado na bula. Foram observadas correlações significativas (P&lt;0,01) entre concentrações residuais em fígado e em tecidos musculares, sendo que as equações obtidas podem ser úteis em programas de vigilância. O processamento térmico afetou os resultados de concentração de resíduos de ivermectina em alguns músculos testados, que apresentaram concentração significativamente mais elevada (P&lt;0,05) após a esterilização. Conclui-se que a eprinomectina é mais recomendada que a ivermectina, no que tange ao propósito de se evitar violações de LMR; que foram distintos os padrões de distribuição de resíduos em cada tecido avaliado, mas que se respeitado o período de carência, praticamente todos os tecidos estarão abaixo dos LMR estabelecidos internacionalmente, exceto pelo sítio de aplicação; portanto, que o tempo de depleção de resíduos do sítio de aplicação (até abaixo dos LMR) deveria ser considerado para a determinação do período de carência dos medicamentos; e que é fundamental haver uma harmonização dos LMR em esfera global. Além disso, observou-se que o processamento térmico a que os enlatados são submetidos provoca níveis discrepantes (mais elevados) de resíduos em relação aos produtos crus e isso deve ser levado em consideração nas análises de vigilância, pois pode gerar incertezas quanto à possibilidade de violação em mercados importadores. / A total of 168 Bos indicus males were slaughtered after 8, 15, 35, 49, 63, 91, 120 and 154 days post-application of eprinomectin and ivermectin (conventional and long-acting), and 18 different edible tissues were evaluated for the residue concentration of these molecules to verify if the established withdrawal period guarantees depletion in all of them, at levels below the maximum limits established by regulatory agencies around the world, in order to address issues related to technical trade barriers between countries. In addition, it aimed to analyze if the concentration of these residues is affected by thermal processing, to evaluate the consistency of considering for canned goods, the same limits determined for raw products. Residue concentration analyzes were performed using HPLC (LC-MS / MS system). Data were converted into \"natural logarithm\" scale and analysis of variance, multiple comparison test, regression and correlation analysis were performed. Results showed that eprinomectin levels were found to be below all maximum residue limits (MRL) throughout all periods and tissues evaluated. Regarding ivermectin, differentiated distribution patterns were observed, but at the end of the withdraw period, 17 of the 18 tissues evaluated had concentrations within the MRLs, except for the injection site, where a high level of dispersion was observed and values above some of MRLs recommended by the main international regulations, even after having been completed the withdraw period indicated in the instructions. Significant correlations (P &lt;0.01) were observed between residual concentrations in liver and muscle tissues, and the equations obtained may be useful in surveillance programs. The thermal processing affected ivermectin concentration results in some tested muscle types, which had a significantly higher residue concentration (P &lt;0.05) after sterilization. It was concluded that eprinomectin is more recommended than ivermectin for the purpose of avoiding MRL violations; that the residue distribution patterns in each tissue were different, but if the withdrawal period is met, almost all tissues will be below internationally established MRLs except for the application site; therefore, that the depletion time of injection site residues (to below the MRL) should be considered for the determination of the drug withdrawal period; and that harmonization of MRLs is essential in the global sphere. In addition, it has been observed that the thermal processing to which the canned products are subjected causes discrepant (higher) levels of residues in relation to the raw products and this must be taken into account in surveillance analyzes, since it may generate uncertainties as to the possibility of violation in importers markets.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Typically, soil is the final destination of pesticides applied in agriculture and of veterinary drugs employed in animal production. The global concern about the possible consequences of the increased use of these compounds is reflected in increasingly stringent regulations on the levels of residues in agricultural products, animal products and in the environment. This results in intensifying the demand for environmental certification, reduction of Maximum Residue Levels in food and the introduction of procedures for traceability in production processes. In this study, we compared different extraction methods: mechanical agitation, ultrasound and QuEChERS for the determination of 76 pesticides and 9 veterinary drugs in soil using Ultra High Performance Liquid Chromatography coupled to tandem Mass Spectrometry (UHPLC-MS/MS). The extraction method that showed the best results consisted of weighing 10 g of soil followed by the addition of 10 mL of water and kept at rest for 10 min. Then added 10 mL of acetonitrile containing 1% (v/v) acetic acid and proceeded with mechanical shaking for 15 min. Then, it was added 4 g of anhydrous magnesium sulfate and 1.7 g of anhydrous sodium acetate and shaked manually and vigorously for 1 min. Subsequently, the tube was centrifuged for 8 min (3400 rpm) and the extract was filtered and diluted (1:4, v/v) in water before analysis by UHPLC-MS/MS. The method was validated by evaluating several parameters, such as linearity of analytical curves, limits of detection and quantification (LOD and LOQ), matrix effect, as well as accuracy an precision in terms of percentage of recovery and RSD. The analytical curves prepared in solvent and in the blank matrix extract showed linearity for most compounds, with coefficients of determination greater than 0.99, and the standard curves prepared in "blank" matrix extract were used to evaluate the matrix effect. To verify the accuracy and precision of the method, fortification in four concentration levels (10, 25, 50 and 100 μg kg-1) we performed, and extracted in replicate (n = 6), resulting in recovery values between 70 to 120%, with RSD lower than 20% for most of the compounds. Values of method LOQ and LOD were from 3.0 to 7.5 μg kg-1 and from 10 to 25 μg kg-1, respectively. After validation, the method was applied to the determination of pesticides and veterinary drugs in real samples, it showed to be very efficient to be applied in routine analysis. / Normalmente, o solo é o destino final dos agrotóxicos utilizados na agricultura e dos medicamentos veterinários utilizados na criação de animais. A preocupação mundial com as possíveis consequências do aumento do uso destes compostos se reflete em regulamentações cada vez mais exigentes sobre os níveis de resíduos nos produtos agrícolas, produtos de origem animal e no ambiente. Isso resulta na intensificação da demanda por certificação ambiental, redução dos limites máximos de resíduos em alimentos e a introdução de procedimentos que permitam a rastreabilidade nos processos produtivos. Neste estudo, comparou-se diferentes métodos de extração, sendo eles, agitação mecânica, ultrassom e QuEChERS para a determinação de 76 agrotóxicos e 9 medicamentos veterinários em solo utilizando Cromatografia Líquida de Ultra Eficiência acoplada à Espectrometria de Massas em Série (UHPLC-MS/MS). O método de extração que apresentou os melhores resultados consistiu na pesagem de 10 g de solo, seguido da adição de 10 mL de água e mantido em repouso por 10 min. Em seguida adicionou-se 10 mL de acetonitrila contendo 1% (v/v) de ácido acético e procedeu-se a agitação mecânica por 15 min. Logo após, acrescentou-se 4 g de sulfato de magnésio anidro e 1,7 g de acetato de sódio anidro e agitou-se manual e vigorosamente por 1 min. Posteriormente, o tubo foi centrifugado por 8 min (3400 rpm) e o extrato foi filtrado e diluído (1:4, v/v) em água antes da análise por UHPLC-MS/MS. O método foi validado avaliando-se vários parâmetros, como linearidade das curvas analíticas, limites de detecção e quantificação (LOD e LOQ), efeito matriz, assim como exatidão e precisão, em termos de percentual de recuperação e RSD. As curvas analíticas preparadas no solvente e no extrato branco da matriz apresentaram linearidade adequada para a maioria dos compostos, com valores de coeficiente de determinação maiores que 0,99, sendo que as curvas analíticas preparadas no extrato branco da matriz foram utilizadas para compensar o efeito matriz. Para verificar a exatidão e precisão do método, efetuou-se a fortificação em quatro níveis de concentração (10, 25, 50 e 100 μg kg-1), e extração em replicata (n = 6), obtendo-se valores de recuperação entre 70 e 120%, com RSD menores que 20% para a grande maioria dos compostos. Os valores de LOD e LOQ do método variaram entre 3,0 e 7,5 μg kg-1 e 10 e 25 μg kg-1, respectivamente. Após a validação, o método foi aplicado para a determinação de agrotóxicos e medicamentos veterinários em amostras reais, mostrando-se bastante eficiente para ser aplicado em análises de rotina.