Made available in DSpace on 2016-06-02T19:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 280.pdf: 710949 bytes, checksum: a9c69398fde37e93380b6616b7e68317 (MD5) Previous issue date: 2004-07-12 / Este trabalho teve o objetivo de verificar a viabilidade da utilização do método LiDS (Lifecycle Design Strategies estratégias de projeto para o ciclo de vida) para a avaliação dos impactos ambientais no ciclo de vida de uma família de produtos veterinários. Para a realização da pesquisa de campo foram escolhidas cinco empresas de produtos veterinários e a coleta de dados consistiu da aplicação de roteiros de entrevistas semi-estruturados. A pesquisa permitiu identificar quais são as informações necessárias ao reprojeto de produtos veterinários visando a redução de impactos ambientais. O método LiDS se mostrou satisfatório, pois permitiu a identificação da etapa mais crítica do ciclo de vida do produto relativa à possibilidade de ocorrência de impactos ambientais e além disso, o método mostrou-se confiável quanto a identificar o que realmente é significativo para melhorias na concepção do produto, por meio de geração de propostas que incluem a questão ambiental. As principais propostas estão relacionadas aos materiais utilizados na fabricação da embalagem, disponibilização das informações no produto, aspectos logísticos, preservação da saúde dos indivíduos e utilização de energia elétrica.

Made available in DSpace on 2016-12-01T19:18:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 113420.pdf: 624532 bytes, checksum: 845e7714cbd2ade0830911343550ae3a (MD5) Previous issue date: 2013-05-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The relationship between buyer and seller has excelled in a business environment increasingly competitive, in which only a quality product is no longer a guarantee of success. In this scenario, the role of the sales force has been magnified, whose focus is to build lasting relationships between the actors in this process. The relationship between client and salesman is also an important part in the pet shops market. In this study, the client is a veterinarian, a pet shop owner and responsible for the purchase of medicines and vaccines marketed locally. The sales force is formed by sales representatives hired by the distributors of medicines and vaccines. Aiming to analyze the business relationship between them, a qualitative research was conducted with 19 veterinarians from Florianopolis. Also, five supervisors of distributors located in the state of Santa Catarina were interviewed, in order to verify their knowledge in relation to perceptions of veterinarians on existing qualifications in their sales force. For a long-term relationship development with the sales representative, veterinarians consider it important to build a relationship of trust and partnership. The seller needs to be polite, not pushy and empathize. Features related to the sales process as knowing the products, appropriate frequency of visits, constantly available, adapting to the vet s schedules and solving problems were also identified as important. Furthermore, veterinarians expect that representatives have trading conditions and flexibility, receive technical support of the company, working with a trusted brand and quality products. Supervisors have demonstrated knowledge about what is important for the veterinarian to develop a good business relationship with the seller, however, there was the need to give more attention to the personal characteristics valued by veterinarians. From this study, it can be concluded, when there is a long-term relationship, sales representatives act as a positive differential to increase sales of the distributors of vaccines and medicines. / O relacionamento entre comprador e vendedor tem se destacado em um ambiente de negócios cada vez mais competitivo, no qual somente um produto de qualidade não é mais garantia de sucesso. Neste cenário, o papel da força de vendas tem sido ampliado, cujo enfoque é a construção de um relacionamento duradouro entre os atores desse processo. O relacionamento entre cliente e vendedor também é peça importante no mercado de pet shops. Neste estudo, o cliente é o médico veterinário, proprietário de um pet shop e responsável pela compra dos medicamentos e vacinas comercializados no local. A força de venda é formada pelos representantes comerciais, contratados pelas distribuidoras de medicamentos e vacinas. Com o objetivo de analisar o relacionamento de negócios entre eles, realizou-se uma pesquisa qualitativa com 19 veterinários de Florianópolis. Também foram entrevistados cinco supervisores de distribuidoras do estado de Santa Catarina, com o intuito de verificar seu conhecimento em relação às percepções dos médicos veterinários sobre as qualificações existentes em sua força de vendas. Para desenvolver um relacionamento de longo prazo com o representante de vendas, os médicos veterinários consideram importante a construção de uma relação de confiança e parceria. O vendedor precisa ser educado, não insistente e ter empatia.Características relacionadas à venda como conhecer os produtos, ter uma frequência adequada de visitas, estar disponível, adequar-se aos horários do veterinário e resolver problemas também foram apontadas como importantes. Além disso, os veterinários esperam que os representantes tenham condições de negociação e flexibilidade, possuam respaldo técnico da empresa, trabalhem com uma marca de confiança e com produtos de qualidade. Os supervisores demonstraram ter conhecimento sobre o que é importante para o médico veterinário desenvolver um bom relacionamento de negócios com o vendedor, porém, verificou se a necessidade de dar mais atenção às características interpessoais valorizadas pelos veterinários. A partir deste estudo, pode-se concluir que, à medida que se constitui um relacionamento de longo prazo, os representantes de vendas atuam como um diferencial positivo para aumentar as vendas das distribuidoras de vacinas e medicamentos.

Um total de 168 machos Bos indicus foram abatidos depois de 8, 15, 35, 49, 63, 91, 120 e 154 dias após a aplicação de eprinomectina e ivermectina (convencional e longa ação), e 18 diferentes tecidos comestíveis foram avaliados quanto à concentração de resíduos dessas moléculas para verificar se o período de carência estabelecido garante o esgotamento em todos eles, em níveis abaixo dos limites máximos estabelecidos por agências reguladoras internacionais, com o objetivo de abordar questões relacionadas à barreiras técnico-comerciais entre países. Além disso, visou analisar se a concentração desses resíduos é afetada pelo processamento térmico, para avaliar a coerência de se considerar para produtos enlatados, os mesmos limites determinados para produtos crus. As análises de concentração de resíduos foram feitas por HPLC (sistema LC-MS/MS). Os dados foram transformados para escala \"logaritmo natural\" e foi realizada análise de variância, teste de comparação múltipla, análises de regressão e de correlação. Os resultados demonstraram que os níveis de eprinomectina encontrados foram abaixo de todos os limites máximos de resíduos (LMR), ao longo de todos os períodos e tecidos avaliados. Com relação à ivermectina, padrões diferenciados de distribuição foram observados, porém ao final do período de carência, dos 18 tecidos avaliados, 17 apresentaram concentrações dentro dos LMR, com exceção do sítio de aplicação, em que se observou alto nível de dispersão e valores acima de alguns LMR, mesmo após cumprido o período de carência indicado na bula. Foram observadas correlações significativas (P<0,01) entre concentrações residuais em fígado e em tecidos musculares, sendo que as equações obtidas podem ser úteis em programas de vigilância. O processamento térmico afetou os resultados de concentração de resíduos de ivermectina em alguns músculos testados, que apresentaram concentração significativamente mais elevada (P<0,05) após a esterilização. Conclui-se que a eprinomectina é mais recomendada que a ivermectina, no que tange ao propósito de se evitar violações de LMR; que foram distintos os padrões de distribuição de resíduos em cada tecido avaliado, mas que se respeitado o período de carência, praticamente todos os tecidos estarão abaixo dos LMR estabelecidos internacionalmente, exceto pelo sítio de aplicação; portanto, que o tempo de depleção de resíduos do sítio de aplicação (até abaixo dos LMR) deveria ser considerado para a determinação do período de carência dos medicamentos; e que é fundamental haver uma harmonização dos LMR em esfera global. Além disso, observou-se que o processamento térmico a que os enlatados são submetidos provoca níveis discrepantes (mais elevados) de resíduos em relação aos produtos crus e isso deve ser levado em consideração nas análises de vigilância, pois pode gerar incertezas quanto à possibilidade de violação em mercados importadores. / A total of 168 Bos indicus males were slaughtered after 8, 15, 35, 49, 63, 91, 120 and 154 days post-application of eprinomectin and ivermectin (conventional and long-acting), and 18 different edible tissues were evaluated for the residue concentration of these molecules to verify if the established withdrawal period guarantees depletion in all of them, at levels below the maximum limits established by regulatory agencies around the world, in order to address issues related to technical trade barriers between countries. In addition, it aimed to analyze if the concentration of these residues is affected by thermal processing, to evaluate the consistency of considering for canned goods, the same limits determined for raw products. Residue concentration analyzes were performed using HPLC (LC-MS / MS system). Data were converted into \"natural logarithm\" scale and analysis of variance, multiple comparison test, regression and correlation analysis were performed. Results showed that eprinomectin levels were found to be below all maximum residue limits (MRL) throughout all periods and tissues evaluated. Regarding ivermectin, differentiated distribution patterns were observed, but at the end of the withdraw period, 17 of the 18 tissues evaluated had concentrations within the MRLs, except for the injection site, where a high level of dispersion was observed and values above some of MRLs recommended by the main international regulations, even after having been completed the withdraw period indicated in the instructions. Significant correlations (P <0.01) were observed between residual concentrations in liver and muscle tissues, and the equations obtained may be useful in surveillance programs. The thermal processing affected ivermectin concentration results in some tested muscle types, which had a significantly higher residue concentration (P <0.05) after sterilization. It was concluded that eprinomectin is more recommended than ivermectin for the purpose of avoiding MRL violations; that the residue distribution patterns in each tissue were different, but if the withdrawal period is met, almost all tissues will be below internationally established MRLs except for the application site; therefore, that the depletion time of injection site residues (to below the MRL) should be considered for the determination of the drug withdrawal period; and that harmonization of MRLs is essential in the global sphere. In addition, it has been observed that the thermal processing to which the canned products are subjected causes discrepant (higher) levels of residues in relation to the raw products and this must be taken into account in surveillance analyzes, since it may generate uncertainties as to the possibility of violation in importers markets.

Atualmente, o Brasil encontra-se na privilegiada posição de maior produtor e exportador mundial de carne bovina, tornando a pecuária uma das atividades nacionais mais importantes e rentáveis. Este dado enfatiza a importância de pesquisa e desenvolvimento em reprodução bovina, especialmente em hormônios estimuladores da ovulação, tais como a gonadotrofina coriônica equina (eCG). Os produtos comerciais à base de eCG comercialmente disponíveis são purificados a partir do sangue de éguas gestantes, apresentando variabilidade de lote para lote e presença de contaminantes. Estes fatos, juntamente com a limitação do material de partida (sangue equino), enfatizam a necessidade de haver um sistema de expressão de eCG recombinante passível de ser explorado comercialmente. Neste quesito, as células de mamíferos se mostram um sistema robusto para tal finalidade, visto que são capazes de adicionar modificações pós-traducionais às cadeias polipeptídicas, tais como a glicosilação, o que é essencial para o correto dobramento, maturação e montagem das duas subunidades, além de interferir diretamente com a meia-vida, o reconhecimento do receptor, a solubilidade e a atividade biológica das proteínas. No entanto, mesmo entre os sistemas de expressão heteróloga em células de mamífero, encontra-se muita variabilidade nos padrões de glicosilação adicionado. No presente trabalho, foi realizado um estudo comparativo através da clonagem e expressão de uma forma fusionada de eCG (reCGβα) em duas linhagens celulares diferentes: (1) CHO-DG44, um dos sistemas de expressão mais utilizados pelas indústrias farmacêuticas, capaz de adicionar N-glicanos complexos; e (2) 293T, uma linhagem humana capaz de produzir glicoproteínas carreando oligossacarídeos complexos e sialilados. Os resultados de atividade biológica (in vitro e in vivo) apontam uma maior atividade de reCG produzido por células CHO-DG44. O perfil de N-glicosilação de reCG produzido pelas células CHOD-G44 assemelhou-se mais à eCG selvagem, quando comparado a reCG produzido por células 293T. Por fim, estudos clínicos foram realizados com reCG produzido em meio livre de soro fetal bovino e parcialmente purificado, onde atividade específica de reCG produzido por células CHO-DG44 mostrou-se similar ao produto comercial selvagem. / Brazil is currently the major beef producer and exporter, rendering to livestock one of the country´s most economically relevant activities. This emphasizes the importance of research and development in bovine reproduction, especially at ovulation-stimulatory hormones, such as equine gonadotropin (eCG). The commercially available eCG-based products are purified from blood of pregnant heifers, presenting batch-to-batch variability and the presence of contaminants. These facts, together with the limitation of the bulk material (equine blood), emphasize the need of an eCG expression system able to be commercially explored. In this aspect, mammalian cells are a robust system, capable of add post-translational modifications to polypeptide chains, such as glycosylation, which is essential for the correct folding, maturation and assembly of both eCG subunits. In addition, glycosylation directly interferes with the protein half-life, receptor recognition, solubility and biological activity. In the present work, a comparative study was carried out by cloning and expressing a fusion form of eCG (reCGβα) in two different mammalian cell lines: (1) CHO-DG44, one of the most used by pharmaceutical companies expression systems, capable of add complex-type N-glycans; and (2) 293T, a human cell line capable of produce glycoproteins carrying complex and sialylated oligosaccharides. The in vitro and in vivo biological activity results show a higher potency of reCG produced by CHO-DG44 cells. The N-glycosylation pattern produced by CHO-DG44 cells was more similar to native eCG in comparison to the N-glycosylation produced by 293T cells. Finally, clinical studies were performed with serum absent media produced and partially purified reCG, showing that the specific activity of reCG produced by CHO cells was similar to the commercial wild type product.

O presente trabalho visa desenvolver métodos analíticos que permitam determinar as concentrações de oxitetraciclina por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, no leite, plasma e líquido sinovial, além de analisar as concentrações correspondentes em gado leiteiro em lactação portadoras de doença do casco submetidos aos tratamentos intramuscular e tópico. Adicionalmente, são tecidos comentários sobre a eficácia clínica destes tratamentos. Desta forma, objetivando determinar a depuração de oxitetraciclina no organismo dos animais tratados, a concentração no sítio de ação e a quantidade residual em leite, as amostras biológicas foram colhidas e quantificadas em diferentes tempos pré e pós-administração do fármaco. Os métodos analíticos validados apresentaram linearidade, limite de detecção, quantificação, exatidão, precisão e recuperação adequadas à quantificação do antibiótico nas matrizes estudadas. Através da administração do medicamento por via intramuscular, observou-se resíduos acima dos limites máximos (100ppb) estabelecidos pela legislação brasileira para oxitetraciclina no leite até 120 horas após a última administração do medicamento pelo esquema seriado de doses. Já pela via tópica, não foram observados valores residuais na matriz biológica. Do ponto de vista clínico, o tratamento tópico foi eficiente nos animais tratados, levando a cura das lesões. Com relação ao tratamento intramuscular, não foram observados resultados satisfatórios, pois a maioria das lesões não regrediu após as administrações. / The purpose of the present work is to develop methods which allow the determination of oxytetracycline by High Pressure Liquid Chromatography in milk, serum and synovial fluid, as well as analyze the corresponding concentration in milk cattle with foot lameness subjected to intramuscular and topical administration of the antibiotic. It is also commented the clinical efficacy of these two treatments. Thus, to determine the clearance of oxytetracycline in the body of the treated animals, the concentration on the site of action, and the antibiotic residue in milk, biological samples have been collected and analyzed for the oxytetracycline content at different times before and after the drug administrations. The validated analytical methods showed suitable linearity, detection and quantification limits, accuracy, precision and recovery, allowing proper quantification of the antibiotic in the studied biological matrices. When administered intramuscular1y, oxytetracycline residues were observed in milk above the maximum limits (100ppb) established by the brazilian legislation up to 120 hour after the last administration of the medicine using multiple doses treatment, whereas on topical use, residues were not observed in this matrix. When analyzing the clinical aspects, topical treatment was very efficient, leading to the healing of the treated animals. In relation to intramuscular treatment, non satisfactory results were observed, as most of lesion did not disappear after the antibiotic administration.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thaysa dos Santos Silva.pdf: 1435457 bytes, checksum: 4745e5a89c1abe5f3e29a10d0aa47fe5 (MD5) Previous issue date: 2011-02-21 / Milk is considered one of the nutritionally complete foods, consumers and inspection organizations require that this product has innocuousness and good quality. The veterinary medicinal products, in particular antimicrobials have been widely used in stockfarming to treat and preventi diseases (mastitis). However, when they are used in an inappropriate manner, the presence of residues of antimicrobials such as sanitizers, antibiotics or chemotherapic drugs, endanger animals´ and humans´ health, predisposing the population to allergic reactions, carcinogenic activity, microbial resistance, in addition to causing economic losses to industries, producers and governments. Furthermore, the analysis of titratable acidity in milk is one of the parameters used by dairy industry for the indirect determination of its quality, being compulsory in the milk reception platforms the industries. In this study 992 samples (441 of raw, 327 of pasteurized and 224 of Ultra High Temperature (UHT) milk) were collected from April to November 2010 in the properties and places of commercialization, and analyzed in the State of Goias. The commercial kit Delvotest® SP-NP was used to carry out the antimicrobials research, a methodology according the federal law for the titratable acidity, and the software SPSS version 15.0 for data analysis. Out of the analyzed samples 8.47% (5.34% of raw milk, 1.92% of pasteurized milk and 1.21% UHT milk) were positive for the presence of antimicrobials residues. As for titratable acidity, 25.30% of the samples (12.10 % raw milk, 9.57% of pasteurized milk and 3.63% UHT milk) were not within standard values. Among these samples, 10.48% were below the recommendation and 14.82% were above. The analyzes results confirm that the quality of raw, pasteurized and UHT milk produced and consumed in Goias is not within the standard values recommended by federal law, as regards the presence of antimicrobial residue and titratable acidity, which represents risk to public health, besides causing economic losses in milk processing. / O leite é considerado um dos alimentos mais completos nutricionalmente, assim os consumidores e órgãos fiscalizadores, exigem que este produto seja inócuo e de qualidade. Os medicamentos veterinários, em particular os antimicrobianos, têm sido amplamente utilizados na pecuária para tratamento e prevenção de doenças (mastites), no entanto, quando utilizados em desrespeito às boas práticas, a presença de resíduos de antimicrobianos sejam eles sanitizantes, antibióticos ou quimioterápicos colocam em risco tanto a saúde animal como a humana, predispondo a população a eventuais reações alérgicas, ação carcinogênica e resistência microbiana, além de causar prejuízos econômicos para as indústrias, produtores e governos. Além disso, a análise de acidez titulável no leite também é um dos parâmetros utilizados pelos laticínios para a determinação indireta de sua qualidade, sendo obrigatória nas plataformas de recepção de leite dos laticínios. Neste trabalho foram analisadas 992 amostras de leite no Estado de Goiás, sendo 441 de leite cru, 327 de pasteurizado e 224 de Ultra Higth Temperature (UHT), de abril a novembro de 2010, coletadas nas propriedades fornecedoras de leite e locais de comercialização do produto. Para realização da pesquisa de antimicrobianos foi utilizado o kit comercial Delvotest® SP-NP, já para a acidez titulável utilizou-se metodologia segundo legislação federal, e para análise dos dados o software SPSS versão 15.0. Das amostras analisadas 8,47% se mostraram positivas para a presença de resíduos de antimicrobianos (5,34% de leite cru, 1,92% de leite pasteurizado e 1,21% de leite UHT), já 25,30% das amostras apresentaram-se fora do padrão para acidez titulável (12,10 % leite cru, 9,57% de leite pasteurizado e 3,63% de leite UHT). Dentre as amostras que estavam fora do padrão para acidez titulável, 10,48% estavam abaixo do recomendado e 14,82% estavam acima. Os resultados das análises da pesquisa confirmam que a qualidade do leite cru, pasteurizado e UHT produzido e consumido em Goiás, estão apresentando resultados fora dos padrões recomendados pela legislação federal, no que se refere à presença de resíduo de antimicrobiano e acidez titulável, o que gera preocupação, pois representa risco a saúde pública, além de causar prejuízos no processamento do leite.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao claudia b alves ciencia animal.pdf: 627145 bytes, checksum: a4fd70b84f741b2cb9ff2e800f0c5352 (MD5) Previous issue date: 2010-02-12 / Usual practices in health stablishments, both human and animal, produce a considerable quantity of residues that potentially represents risks to health of the internal community and the population. These wastes demand special management, with or without treatment prior to the final destination. Consequently, the processing constitutes a vital topic to occupational safety of the employees who handling them, such as to the public health and environment. Thus, this study aimed to analyze aspects of the control of residues produced at the Veterinary Hospital of the Federal University of Goiás (HV/UFG). The waste was classified in four groups (GA, GB, GD and GE) accordling to its nature: infectious, chemical, common and drill-sharp, respectively. The evaluation of the residues management was performed using a checklist prepared in accordance with actual legislation and after its validation and application in all sectors of the HV/UFG. The qualifying and quantifying were made through the inspection and weighing of these products. The study was carried out from may 04 to July 17, 2009. As results, it was observed that the management adopted in HV/UFG wasn t fully in accordance with the sanitary regime. Among the critical points observed, it can be outstand the inappropriate separation, identification and storage of the health services waste, poor training of the professionals involved, as well as, insufficient structural conditions. From the previously waste conditioned as GA, it was observed that only 28,5% were appropriately classified as GA. The rest, 2% was GB, 0.5% was GE and 69% was GD. It can be concluded that if the segregation was performed properly in accordance of sanitary legislation, could occur a reduction up to 71% of the contaminated residues. This result can be considered relevant because it implicate in considerable reduction in costs for the treatment of the health services waste, just as in the prevention of infectious diseases and occupational accidents during the handling of these residues. / As atividades cotidianas nos diversos estabelecimentos que prestam serviços de saúde, seja humana ou animal, produzem uma considerável quantidade de resíduos, alguns com características que podem representar riscos à saúde da comunidade hospitalar e à população em geral. Esses produtos necessitam de processos diferenciados em seu manejo, exigindo ou não tratamento prévio à sua destinação final, sendo particularmente importantes tanto para a segurança ocupacional dos trabalhadores que os manuseiam, como para a saúde pública e ao meio ambiente. Diante do exposto, o presente estudo teve como objetivo analisar aspectos do gerenciamento dos resíduos gerados no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Goiás (HV/UFG), sendo estes classificados em quatro grupos (GA, GB, GD e GE), denominados, respectivamente, infectantes, químicos, comuns e perfurocortantes. A avaliação do manejo desses resíduos foi efetuada utilizando check list, elaborado de acordo com a legislação vigente e, depois de validado, aplicado em todos os Setores do HV/UFG. A qualificação e quantificação foram efetuadas por meio de inspeção e pesagem desses produtos. O estudo foi realizado no período de 04 de maio a 17 de julho de 2009. Verificou-se que o manejo adotado no HV/UFG não está plenamente em conformidade com a normatização sanitária em vigor. Dentre os pontos de estrangulamentos verificados, destacaram-se a segregação, identificação e armazenamento inadequados dos resíduos de serviços de saúde (RSS), capacitação deficiente dos diferentes profissionais envolvidos no manejo dos mesmos, bem como condições físico-estruturais insuficientes. Dos resíduos acondicionados previamente pelos profissionais do HV/UFG como do GA, depois de segregados, notou-se que somente 28,5% foram classificados como GA, 2% GB, 0,5% GE e 69% GD. Concluiu-se que se a segregação fosse realizada de forma adequada e conforme a legislação sanitária, poderia haver uma redução de até 71% dos resíduos infectantes. Esse resultado é apontado como relevante por implicar em uma diminuição considerável nos custos destinados ao tratamento dos RSS, como também na prevenção de enfermidades infecto-contagiosas e acidentes ocupacionais ocorridos durante o manuseio desses produtos.

O presente trabalho visa desenvolver métodos analíticos que permitam determinar as concentrações de oxitetraciclina por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, no leite, plasma e líquido sinovial, além de analisar as concentrações correspondentes em gado leiteiro em lactação portadoras de doença do casco submetidos aos tratamentos intramuscular e tópico. Adicionalmente, são tecidos comentários sobre a eficácia clínica destes tratamentos. Desta forma, objetivando determinar a depuração de oxitetraciclina no organismo dos animais tratados, a concentração no sítio de ação e a quantidade residual em leite, as amostras biológicas foram colhidas e quantificadas em diferentes tempos pré e pós-administração do fármaco. Os métodos analíticos validados apresentaram linearidade, limite de detecção, quantificação, exatidão, precisão e recuperação adequadas à quantificação do antibiótico nas matrizes estudadas. Através da administração do medicamento por via intramuscular, observou-se resíduos acima dos limites máximos (100ppb) estabelecidos pela legislação brasileira para oxitetraciclina no leite até 120 horas após a última administração do medicamento pelo esquema seriado de doses. Já pela via tópica, não foram observados valores residuais na matriz biológica. Do ponto de vista clínico, o tratamento tópico foi eficiente nos animais tratados, levando a cura das lesões. Com relação ao tratamento intramuscular, não foram observados resultados satisfatórios, pois a maioria das lesões não regrediu após as administrações. / The purpose of the present work is to develop methods which allow the determination of oxytetracycline by High Pressure Liquid Chromatography in milk, serum and synovial fluid, as well as analyze the corresponding concentration in milk cattle with foot lameness subjected to intramuscular and topical administration of the antibiotic. It is also commented the clinical efficacy of these two treatments. Thus, to determine the clearance of oxytetracycline in the body of the treated animals, the concentration on the site of action, and the antibiotic residue in milk, biological samples have been collected and analyzed for the oxytetracycline content at different times before and after the drug administrations. The validated analytical methods showed suitable linearity, detection and quantification limits, accuracy, precision and recovery, allowing proper quantification of the antibiotic in the studied biological matrices. When administered intramuscular1y, oxytetracycline residues were observed in milk above the maximum limits (100ppb) established by the brazilian legislation up to 120 hour after the last administration of the medicine using multiple doses treatment, whereas on topical use, residues were not observed in this matrix. When analyzing the clinical aspects, topical treatment was very efficient, leading to the healing of the treated animals. In relation to intramuscular treatment, non satisfactory results were observed, as most of lesion did not disappear after the antibiotic administration.

Atualmente, o Brasil encontra-se na privilegiada posição de maior produtor e exportador mundial de carne bovina, tornando a pecuária uma das atividades nacionais mais importantes e rentáveis. Este dado enfatiza a importância de pesquisa e desenvolvimento em reprodução bovina, especialmente em hormônios estimuladores da ovulação, tais como a gonadotrofina coriônica equina (eCG). Os produtos comerciais à base de eCG comercialmente disponíveis são purificados a partir do sangue de éguas gestantes, apresentando variabilidade de lote para lote e presença de contaminantes. Estes fatos, juntamente com a limitação do material de partida (sangue equino), enfatizam a necessidade de haver um sistema de expressão de eCG recombinante passível de ser explorado comercialmente. Neste quesito, as células de mamíferos se mostram um sistema robusto para tal finalidade, visto que são capazes de adicionar modificações pós-traducionais às cadeias polipeptídicas, tais como a glicosilação, o que é essencial para o correto dobramento, maturação e montagem das duas subunidades, além de interferir diretamente com a meia-vida, o reconhecimento do receptor, a solubilidade e a atividade biológica das proteínas. No entanto, mesmo entre os sistemas de expressão heteróloga em células de mamífero, encontra-se muita variabilidade nos padrões de glicosilação adicionado. No presente trabalho, foi realizado um estudo comparativo através da clonagem e expressão de uma forma fusionada de eCG (reCGβα) em duas linhagens celulares diferentes: (1) CHO-DG44, um dos sistemas de expressão mais utilizados pelas indústrias farmacêuticas, capaz de adicionar N-glicanos complexos; e (2) 293T, uma linhagem humana capaz de produzir glicoproteínas carreando oligossacarídeos complexos e sialilados. Os resultados de atividade biológica (in vitro e in vivo) apontam uma maior atividade de reCG produzido por células CHO-DG44. O perfil de N-glicosilação de reCG produzido pelas células CHOD-G44 assemelhou-se mais à eCG selvagem, quando comparado a reCG produzido por células 293T. Por fim, estudos clínicos foram realizados com reCG produzido em meio livre de soro fetal bovino e parcialmente purificado, onde atividade específica de reCG produzido por células CHO-DG44 mostrou-se similar ao produto comercial selvagem. / Brazil is currently the major beef producer and exporter, rendering to livestock one of the country´s most economically relevant activities. This emphasizes the importance of research and development in bovine reproduction, especially at ovulation-stimulatory hormones, such as equine gonadotropin (eCG). The commercially available eCG-based products are purified from blood of pregnant heifers, presenting batch-to-batch variability and the presence of contaminants. These facts, together with the limitation of the bulk material (equine blood), emphasize the need of an eCG expression system able to be commercially explored. In this aspect, mammalian cells are a robust system, capable of add post-translational modifications to polypeptide chains, such as glycosylation, which is essential for the correct folding, maturation and assembly of both eCG subunits. In addition, glycosylation directly interferes with the protein half-life, receptor recognition, solubility and biological activity. In the present work, a comparative study was carried out by cloning and expressing a fusion form of eCG (reCGβα) in two different mammalian cell lines: (1) CHO-DG44, one of the most used by pharmaceutical companies expression systems, capable of add complex-type N-glycans; and (2) 293T, a human cell line capable of produce glycoproteins carrying complex and sialylated oligosaccharides. The in vitro and in vivo biological activity results show a higher potency of reCG produced by CHO-DG44 cells. The N-glycosylation pattern produced by CHO-DG44 cells was more similar to native eCG in comparison to the N-glycosylation produced by 293T cells. Finally, clinical studies were performed with serum absent media produced and partially purified reCG, showing that the specific activity of reCG produced by CHO cells was similar to the commercial wild type product.

Submitted by MICHAEL PÉREZ RODRÍGUEZ null (michaelpr@iq.unesp.br) on 2016-09-16T20:43:06Z No. of bitstreams: 1 TESE MICHAEL VERSÃO FINAL.pdf: 4495815 bytes, checksum: 5d4a4f8ffcd143bb08ad336b289fe7ab (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-09-22T14:44:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 perezrodriguez_m_dr_araiq_par.pdf: 1340231 bytes, checksum: 9e639833f42ff1e6fc87e7f9f965f8fc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-22T14:44:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 perezrodriguez_m_dr_araiq_par.pdf: 1340231 bytes, checksum: 9e639833f42ff1e6fc87e7f9f965f8fc (MD5) Previous issue date: 2016-08-26 / Pró-Reitoria de Pós-Graduação (PROPG UNESP) / Este trabalho descreve o desenvolvimento de métodos analíticos ambientalmente mais amigáveis utilizando sistemas de screening e procedimentos de análise por injeção em fluxo para a detecção e quantificação de antibióticos, da classe das tetraciclinas, em amostras de medicamentos veterinários e alimentos de origem animal como leite bovino e suplementos de ovos. Os métodos desenvolvidos foram baseados na reação de acoplamento diazo obtida entre as tetraciclinas e o ácido p-sulfanílico diazotado em meio básico, resultando na formação de azo compostos com máximos de absorção em torno de 435 nm, permitindo determinar esses antibióticos por espectrofotometria. As condições analíticas foram otimizadas através de análise multivariada utilizando planejamentos experimentais fatoriais e o desempenho dos métodos propostos foi avaliado através de parâmetros como linearidade, efeito matriz, precisão, exatidão, limite de detecção, limite de quantificação, recuperação e estudo de interferências. O primeiro trabalho desenvolvido fez uso de um procedimento de injeção em fluxo contínuo para a rápida determinação de tetraciclinas em formulações veterinárias comerciais, visando maior eficiência no controle de qualidade na indústria farmacêutica. Na sequência, foi desenvolvido um método de screening mediante análise por injeção em fluxo empregando uma cela capilar de longo caminho óptico (LWCC) para a detecção de resíduos de tetraciclinas em amostras de leite bovino, sem a necessidade de passos de extração dispendiosos e demorados ou complicados tratamentos de amostras. Finalmente, um novo método de microextração líquido-líquido dispersiva assistida por ultrassom (US-DLLME) foi desenvolvido para a simples, rápida e eficiente extração de resíduos de tetraciclinas a partir de amostras de suplemento de ovos e, posterior análise por injeção em fluxo baseada em uma cela capilar de longo caminho óptico (LWCC), empregando um banho de aquecimento com controle de temperatura. Os métodos descritos apresentaram importantes características como simplicidade operacional, possibilidade de automação, rapidez e baixo custo das análises. Além disso, estes métodos seguiram os princípios da química verde, de modo que permitiram realizar determinações ambientalmente mais limpas, através da redução considerável do consumo de reagentes e amostras, evitando ou minimizando o emprego de solventes tóxicos. Também, os métodos desenvolvidos para a análise de resíduos mostraram excelente desempenho para aplicação no controle de qualidade dos produtos alimentares estudados na indústria alimentícia, a fim de proteger os consumidores. / This work describes the development of environmentally friendly analytical methods using screening systems and flow injection procedures for detection and quantification of tetracycline antibiotics in veterinary pharmaceuticals and animal-derived foods such as bovine milk and egg-based protein supplements. The developed methods were based on the diazo coupling reaction between the tetracyclines and diazotized p-sulfanilic acid in basic medium, resulting in the formation of azo compounds that present maximum absorption around 435 nm, which allows determining these antibiotics by spectrophotometry. The analytical conditions were optimized by means of multivariate analysis using factorial experimental designs. Performance of the proposed methods was assessed through parameters such as linearity, selectivity, precision, accuracy, detection limit, quantification limit, matrix effect and recovery. The first developed work used a continuous flow injection procedure for the rapid determination of tetracyclines in commercial veterinary formulations, aiming greater efficiency in quality control in the pharmaceutical industry. Thereafter, it was developed a screening method by flow injection analysis using a liquid waveguide capillary cell (LWCC) for detecting tetracyclines residues in bovine milk samples, without the need for expensive extraction steps that are time-consuming or complicated sample treatments. Finally, a new ultrasound-assisted dispersive liquid-liquid microextraction (US-DLLME) method was developed for simple, rapid, and efficient extraction of tetracyclines residues from egg supplement samples, followed by flow injection analysis based on a liquid waveguide capillary cell (LWCC), using a controlled temperature heating bath. The described methods presented important features such as operational simplicity, possibility of automation, quickness and low cost of the analysis. Furthermore, these methods followed the principles of green chemistry, making possible to perform environmentally cleaner determinations, due to the considerable reduction of reagents and samples consumption, avoiding or minimizing the use of toxic solvents. Besides, the methods developed for residues analysis showed excellent performance for application in the food industry for quality control of the studied food products in order to protect consumers.