Orientador : Alda Luiza Santos Lerayer / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-01T22:30:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Chaves_AnaCarolinaSampaioDoria_D.pdf: 30225787 bytes, checksum: 23269875fe498ebad72acea3cde56c4b (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: o processo de formação de acetaldeído pela bactéria láctica Streptococcus thermophilusfoi investigadonestatese.O cetaldeídoresponsávelpelo sabore aroma característicosde iogurte,é produzidopor diferentesvias metabólicaspelas diversas bactérias lácticas. Neste trabalho, a atenção foi focada especificamente na reação para a formação de acetaldeído, catalisada pela enzima serina hidroximetil transferase (SHMT), codificada pelo gene glyA. A enzima SHMT cataliza diversas reações e no caso da bactéria S. thermophilus, ela exerce também a atividade característica da enzima treonina aldolase (TA), definida como a interconversão do aminoácido treonina em glicina e acetaldeído. Neste estudo, 34 linhagens selvagens de S. thermophilus da coleção do NIZO Food Research foram avaliadas quanto à produção de acetaldeído na presença e na ausência do aminoácido L-treonina. A suplementação do meio com L-treonina levou ao aumento da produção de acetaldeído. Foi detectada uma clara diferença na quantidade de acetaldeído formado pelas diversas linhagens; enquanto algumas produziram pouco ou não produziram quantidades detectáveis, outras formaram quantidades consideráveis de acetaldeído. A capacidade de produção de acetaldeído durante a fermentação foi correlacionada com a atividade da enzima treonina aldolase. Com o objetivo de se estudar a função da enzima SHMT, foi construída uma linhagem com o gene glyA interrompido. A inativação deste gene resultou em acentuada redução da atividade TA assim como também na perda completa da capacidade de produção de acetaldeído durante a fermentação. Subseqüentemente, foi construída uma linhagem de S. thermophilus na qual o gene glyA foi clonado sob o controle de um forte promotor (PLacA)' Quando esta linhagem foi cultivada em meio M17 e em leite foi observada a super expressão do gene glyA, constatada por meio do aumento da atividade TA, da produção de acetaldeído e ácido fólico. Estes resultados mostraram que, em S. thermophilus, a enzima SHMT apresenta atividade de treonina aldolase, sendo esta a principal via para a formação de acetaldeído nas condições destes experimentos / Abstract: The process of acetaldehyde formation by the yogurt bacterium Streptococcus thermophilus is described here. The typical yogurt flavor is caused by acetaldehyde produced through many difIerent pathways by the yogurt starter bacteria Lactobacillus bulgaricus and S. thermophilus. In this thesis, the attention was focused on one specmc reaction for acetaldehyde formation catalyzed by serine hydroxymethyltransferase(SHMT), encoded by the glyA gene. In S. thermophilus, this enzyme SHMT also plays the typical role of the enzyme threonine aldolase (TA) tOOtis the interconvertion of threonine into glycine and acetaldehyde. In this work, 34 wild type S. thermophilus strains ftom the NIZO Food Research Collection were screened for acetaldehyde production in the presence and absence of L-threonine. Supplementation of the growth medium with L-threonine led to an increase in acetaldehyde production. A clear difIerence in the amount of acetaldehyde formed could be detected among the difIerent strains. While some strains produce very small or no detectable amounts other strains produce a considerable high amount of acetaldehyde. Furthermore, acetaldehyde formation during fermentation could be correlated to threonine aldolase activity of SHMT. To study the physiological role of SHMT, aglyA mutant was constructed by gene disruption. lnactivation of glyA resulted in a severe reduction of TA activity and complete loss of acetaldehyde formation during fermentation. Subsequent1y,aS. thermophilus strain was constructed in which the glyA gene was cloned under control of a strong promoter (PLacA)' When this strain was used for fermentation it was possible to observe tOOtglyA gene was overexpressed through the increase in TA activity, in acetaldehyde and folic acid production. These results show tOOt, in S. thermophilus, SHMT, displaying threonine aldolase activity, constitutes the main pathway for acetaldehyde formation under our experimental conditions. These findings can be used to control and improve acetaldehyde and folic acid production in fermented (dairy) products with S. thermophilus as starter culture / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Orientador : Carmen Silvia Bertuzzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T04:23:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_Kelly_M.pdf: 15332993 bytes, checksum: 39bff3e0afd6a69cc924f944b9927971 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A Síndrome de Turner (ST), descrita por Henry Turner em 1938, caracteriza-se classicamente por um fenótipo feminino associado à baixa estatura, infantilismo sexual, esterilidade, além de diversas malfonnações. Há evidências de que mutações na enzima metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR), ligada ao metabolismo do ácido fólico, levariam a aberrações cromossômicas devido a fenômenos de hipometilação. No presente estudo nós avaliamos a freqüência das mutações C677T e A1298C no gene da MTHFR em 49 portadoras de ST e em 200 indivíduos controles. O método de análise foi a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) seguida de digestão enzimática específica. Encontramos 26% de pacientes heterozigotas para a mutação C677T, 18% de homozigotas mutantes para a mutação C677T, 22% de pacientes heterozigotas A1298C, 10% de homozigotas mutante 1298C e 14% de heterozigotas para ambas as mutações C677T/A1298C. Nossos resultados indicam uma incidência elevada de indivíduos mutantes C677T (p<0,001) em nossa amostra. Sugerindo que a deficiência da MTHFR pode ser identificada como um fator de risco para nascimentos de crianças com ST / Abstract: Henry Tumer described Turner's syndrome (TS) in 1938 and characterized it as a classicaI female phenotype associated with a short stature, sexual irmnaturity,sterility and other maIformations. Evidences exist that methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) enzyme mutations related to folic acid metabolism lead to chromosomal aberrations due to the hypomethylation phenomenon. This study evaIuates the frequency of C677T and A1298C mutations of the MTHFR gene among 49 individuais with TS and 200 control individuais. An analysisof the results was obtained using the polymerase chain reaction (PCR), which was followed by specific enzymatic digestion. In this study, 26% of patients were heterozygous for the C677T mutation, 18% were homozygous for the C677T mutation, 22% ofthe patients were heterozygous for the A1298C mutation and 14% were heterozygous for both C677T/A1298C mutations. Our results demonstrated a higher incidence of C677T mutant individuais (p<0.001) in this sample. Suggesting that MTHFR deficiency can be defined as a risk factor for the birth of TS children / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Helena Teixeira Godoy / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-02T11:27:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Murate_EleniceHaruko_D.pdf: 28219052 bytes, checksum: 50b65b2408ff93e7ad5c2707dbeb8a0f (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A demanda nutricional por folatos é particularmente alta durante a gestação e a suplementação antes da concepção pode reduzir significativamente a incidência de malformações congênitas, principalmente defeitos do tubo neural e anencefalia. Em muitos países, onde a incidência dessas anomalias é significativa, programas de fortificação de alimentos com ácido fólico tem sido implementados. No Brasil, a preocupação com a fortificação de produtos alimentícios com ácido fólico ainda é tímida, porém, a possibilidade de fornecimento dessa vitamina através de produtos nutritivos, como os derivados de leite, pode ser um estímulo à fortificação e consumo desses produtos na dieta, principalmente nos grupos mais suscetíveis. Para estudar a viabilidade do enriquecimento de novos produtos e a determinação dos teores de ácido fólico empregou-se a metodologia de análise por cromatografia líquida de alta eficiência. O método foi aplicado em amostras enriquecidas com ácido fólico de iogurte, requeijão caseiro, queijo minas frescal e tofu. A metodologia foi validada, em relação à sua aplicação a esses produtos, obtendo-se valores em torno de 95% de recuperação, boa repetibilidade, apresentando coeficientes de variação abaixo de 0,6%, e limites de detecção de 1,99ng/g para o requeijão caseiro e queijo minas frescal e 2,11ng/g para iogurte e tofu. Perdas acentuadas foram encontradas durante a etapa de adição do ácido fólico à matéria-prima, variando entre 23 a 42%. Nas etapas de aquecimento, coagulação e dessoragem observaram-se perdas adicionais de 21% no requeijão, 8% no queijo minas frescal e 11% no tofu,enquanto no iogurte as perdas foram de 24% durante o processo de fermentação. No soro, fração volumosa do processamento de produtos como o queijo minas frescal, foram encontrados entre 63 a 79% do AF presente no leite enriquecido. Os valores de ácido fálico encontrados nos produtos aqui processados foram de 194,2; 215,2; e 130'mu'g/100g para o queijo minas frescal, requeijão e iogurte, respectivamente, partindo-se de leites contendo 210,0; 229,5; e 173,4'mu'g/100g de ácido fálico. No tofu obtiveram-se valores médios de ácido fálico de 194'mu'g/100g partindo-se de extrato de soja contendo 216,0'mu'g/100g. O queijo minas frescaI e requeijão apresentaram boa estabilidadedurante o período de vida útil, enquanto o tofu apresentou perdas de 20% nos primeiros cinco dias, mantendo-se estável até o décimo dia. Cerca de 25% de perdas foram observadas no iogurte na primeira semana, não apresentando alterações até ao final de 28 dias de armazenamento. / Abstract: The nutritional demand for folates is particularly high during gestation and its supplementation before conception can significantly reduce the incidence of congenital malformations, mainly defects of the neural tube and anencefalie. In many countries where the incidence of these anomalies is significant, food programs of enrichment with folic acid have been implemented. In Brazil, the concem with the enrichment of products with folic acid is still limited, however, the possibility of supplying this vitamin via nutritional products, such as the milkderivatives, could be a stimulation to the enrichment and consumption of these products in the diet, mainly in the most susceptible groups. To study the viability of the enrichment of new products and the determination of folic acid content high performance liquid chromatography methodology was used. The method was applied the following samples enriched with folic acid: yoghurt, creamcheese, frescal cheese and tofu. The methodology was validated with respect to its application to these products, giving values of around 95% of recovery and good repeatability, with variation coefficients below 0.6%, and detection limitsof 1.99ng/g for the creamcheese and frescal cheese, and 2'mu' ng/g for the yoghurt and tofu. Accented losses have been found during the stage of homogenization of the folic aeid with the raw material, varying between 23-42%. In the stages of heating, coagulation and whey removal, had observed losses of 21%were observed in the creamcheese, 8% in the frescal cheese and 11% in tofu, while in the yoghurt the losses were about been of 24% during the fermentation processo In the whey, a voluminous fraction of the processing of products such as the frescal cheese, between 63-79% of the folie acid present in enriched milkwas found. The values for folie aeid found in the processed products here were 194.2; 215.2 and 130'mu'g/100g for the frescal cheese, ereamcheese and yoghurt, respectively, starting form milk eontaining 2100; 229.5; and 173,4'mu'g/100g of vitamin content. In the tofu average values for folic acid of 194'mu'g/100g were found having employed a soy extraet containing 216.0'mu'g/100g. The frescal eheese and creameheese presented good stability during the shelf life period, while the tofu presented losses of 20% in the first five days, then remaining stable up to the tenth day. About 25% of losses were observed in the yoghurt in the first week, presenting no further alterations up to the end of the 28 days of storage. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências / Made available in DSpace on 2012-10-23T03:34:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 238395.pdf: 1566108 bytes, checksum: 2d17804e5f120f0c40415fc3ca1b8adb (MD5) / O objetivo do estudo foi verificar a ação da homocisteína (HC) e do ácido fólico (AF), isoladamente e em conjunto, no desenvolvimento embrionário, com ênfase no padrão morfológico, neurulação e estrutura organizacional do telencéfalo (TEL) e medula espinhal embrionária (ME); para tanto, utilizamos o modelo de Gallus domesticus. Foram constituídos 5 grupos experimentais: 2 controles # Controle Fechado (GC1) e Controle Salina (GC2) # e 3 tratados # HC (G3), HC e AF (G4) e AF (G5), cada um com N=10. Ovos fertilizados foram numerados, pesados e incubados em estufa apropriada (38°C e 65% de umidade). Após 32 horas (8-9HH), foram retirados da estufa e efetuouse uma abertura na face superior mediana do ovo (1,5cm de diâmetro). Esta permitiu a visualização do embrião e o tratamento: 25Yl de salina (GC2), 10Ymol de D,L-HC/25Yl de salina (G3), 0,5Yg de AF+10Ymol de D,L-HC/25Yl de salina (G4) e 0,5Yg de AF/25Yl de salina (G5). Concluída a manipulação, a abertura era fechada com filme PVC atóxico e o ovo recolocado na estufa. O GC1 não foi submetido aos procedimentos de abertura e tratamento. Após 96 horas (23-25HH), os embriões foram dessensibilizados à 4°C e posteriormente analisados ao estereomicroscópio, para detecção de alterações do padrão morfológico, determinação do estágio de desenvolvimento (HH) e mensuração cefálica e corporal (14, 20 e 30X). Em seguida, foram fixados em formol 10% (24h) e conservados em etanol 70%, tendo a massa corporal aferida após 5 dias. A região cefálica e truncal dos embriões foi preparada para microscopia, e os cortes (8Ym) foram submetidos às técnicas de hematoxilina-eosina (HE), para descrição geral e posterior morfometria das camadas celulares do TEL e ME, e quantificação celular da notocorda e mesoderma apical à ME; técnica de Hoescht (33258), para evidenciar células em apoptose; e técnicas imuno-histoquímicas, para localizar dos filamentos intermediários vimentina e GFAP. A partir da análise estereomicroscópica, foi possível identificar que a porcentagem de embriões que apresentaram padrão morfológico normal foi de 100% em GC1 e GC2, e de 70% em G5. Já em G3 e G4 a porcentagem foi de 20 e 30%, respectivamente, e a diferença significativa entre estes dois e os demais grupos. Através da análise morfométrica realizada nos embriões, observamos que os grupos GC1 e GC2, geralmente, apresentaram valores médios superiores aos demais grupos tratados, com exceção de G5, que exibiu médias semelhantes a dos grupos controle. Em contrapartida, G3 exibiu quase sempre as menores médias, embora as diferenças não fossem significativas. Comportamento semelhante foi apresentado, quanto à morfometria das camadas celulares # ventricular e do manto #, tanto do TEL, quanto da ME. A espessura média destas camadas, foi, quase sempre, significativamente superior nos grupos controle em comparação aos grupos G3 e G4. Os cortes da região truncal exibiram abertura da região apical da ME # G4 # acompanhada de falha na fusão do mesoderma apical à ME # G3. Através das técnicas imunohistoquímicas, foi possível identificar diferenças na intensidade e localização dos filamentos intermediários vimentina e GFAP, tanto no TEL quanto na ME e adjacências, entre os grupos controle (GC1 e GC2) e tratados (G3, G4 e G5). Com relação à apoptose, foi possível evidenciá-la, no TEL e ME, somente em G4. Portanto, o tratamento com HC (G3) foi o que mais interferiu, tanto no padrão morfológico, quanto na estrutura organizacional do TEL e ME. Já o tratamento com AF (G5) não interferiu, de forma significativa, nestes mesmos parâmetros. E o AF, administrado concomitantemente com a HC (G4), não foi capaz de anular os efeitos nocivos desta substância, provavelmente, em decorrência da imaturidade metabólica dos embriões. The objective of the study was to verify the action of homocysteine (HC) and folic acid (AF), separately and in set, in the embryonic development, with emphasis in morphologic pattern, neurulation and organization of telencephalon (TEL) and embryonic spinal cord (SP); for this, we used the model of Gallus domesticus. Five experimental groups had been constituted: 2 controls # Closed Control (CG1) and Saline Control (CG2) - and 3 treated - HC (G3), HC + FA (G4) and FA (G5), each one with N=10. Fertilized eggs had been numbered, weighed and incubated at 38°C and 65% humidity. After 32h in stove (8-9HH), a window was opened on the egg´s surface (1.5 cm diameter), that allowed the visualization of embryo and the treatment: 25Yl saline (CG2), 10Ymol D, L-HC/25Yl saline (G3), 0,5Yg FA + 10Ymol D, L-HC/25Yl saline (G4) and 0,5Yg AF/25Yl saline (G5). After egg window was closed with film atoxic PVC and the eggs returned for the incubator. The CG1was not submitted to the procedures of opening and treatment. After 96 hours (23-25HH) embryos were dessensibilized at 4°C, removed from egg and analyzed to stereomicroscope (20X), for detention of alterations of morphologic pattern, determination of development stage (HH) and morphometrical analysis (14, 20 and 30X). After the embryos were fixed in formaldehyde 10% (24h) and maintained in ethanol 70%. After the corporal mass was measuared and embryos were prepared for microscopy. The serial sections (8Ym) were submitted to techniques of Hematoxylineosin (HE), for general description, morphometrical analysis of the cellular layers of the TEL and SC, and cellular quantification of notochord and apical mesoderm; Hoescht (33258) to evidence cells in apoptose; and immunohistochemistry techniques to locate of intermediate filaments vimentin and GFAP. From the stereomicroscopical analysis it was possible to identify that the percentage of embryos that had showed normal morphologic pattern in GC1 and GC2 (100%) and in G5 (70%). Already in G3 and G4 the percentage was respectively of 20 and 30% with significant difference between these two and too much groups. In morphometrical analysis of the embryos we observe that CG1 and CG2 generally had showed superior average values when compared with too much groups, with exception of G5, that showed similar averages to control groups. On the other hand, G3 almost always showed the average inferiors even so the differences were not significant. Similar behavior was presented also in the morphometrical analysis of the cellular layers - ventricular and of the mantle -, as much of the TEL how much of SC. The average thickness of these layers was almost always significantly superior in the control groups when compared with groups G3 and G4. The slices of the trunk region had shown opening of the apical region of SC - G4 # and also failure in the fusion of the apical mesoderm - G3. Through immunohistochemistry techniques it was possible to identify differences in the intensity and localization of intermediate filaments vimentin and GFAP between the control groups (GC1 and GC2) and treated groups (G3, G4 and G5), as much in the TEL how much in SC and surroundings. Apoptosis had been evidenced only in the TEL and SC of G4. The treatment with HC (G3) interfered more, as much in morphologic pattern how much in organization of TEL and SC. Although treatment with FA (G5) did not interfere of significant form in these same parameters, when managed in set with HC (G4), it was not capable to annul the harmful effect of this substance, probably due to metabolic immaturity of embryos.

Orientador: Helena Teixeira Godoy / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-27T06:22:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Catharino_RodrigoRamos_M.pdf: 28509631 bytes, checksum: 4b1886c6cc3ae02a838acddb45af0107 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O conhecimento dos níveis de enriquecimento dos alimentos, com ácido fólico (AF), tem sido dificultado, especialmente, pela falta de metodologias apropriadas. Visando atender a esta necessidade, foi desenvolvida e avaliada uma metodologia para determinação do ácido fólico em alimentos enriquecidos, utilizando a cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE). O método desenvolvido foi aplicado em 36 diferentes tipos/marcas de alimentosenriquecidos,comoleiteempó, leite sterilizado,bebidaláctea, queijotipopetit suisse, cereal matinal e farinha láctea. As vantagens do método proposto foram versatilidade, simplicidade e rapidez, principalmente das etapas de extração e limpeza. A extração do AF foi feita com KOH (O,lmol/L), através de vibração ultra-sônica por 10 minutos, e a limpeza do extrato com H3P04 (O,lmol/L), tampão fosfato e ácido tricloroacético. Através dos resultados obtidos pelo método de superficie de resposta, constatou-se que essas etapas foram realizadas dentro da faixa ótima para todos os parâmetros estabelecidos. No sistema cromatográfico utilizou-se coluna de fase reversa CI8, e a eluição por gradiente permitiu uma corrida rápida de apenas 9 minutos, necessitando de mais 5 minutos para o re-equilibrio da coluna, antes de uma nova injeção. A detecção foi feita a 29Onme a quantificação por curva de padronização externa. Os limites de detecção e quantificação e a recuperação, determinados nos níveis de enriquecimento para o leite em pó, foram 1,3nglrnL, 2,6nglrnL e 98,6%, respectivamente. Testes de repetibilidade apresentaram coeficientes de variação inferiores a 7,3%. Dos alimentos enriquecidos analisados, 25 foram produtos lácteos, sendo que em 16 deles o ácido fólico estava presente em quantidade igual ou superior a declarada, 7 produtos apresentaram quantidades inferiores, principalme mesmo fabricante, de queijo tipo petit suisse, embora constasse no rótulo, não foi detectado ácido fólico. Entre cereais matinais e farinhas lácteas foram analisadas 11 amostras, das quais somente 5 apresentaram concentrações iguais ou superiores às especificadas nos rótulos. Os resultados obtidos neste trabalho, além de demonstrarem as vantagens e aplicabilidade da metodologia desenvolvida e validada, apontam para a necessidade de maior rigor no controle das taxas de enriquecimento destes alimentos e reforçam a necessidade de futuros estudos de vida de prateleira dos mesmos / Abstract: Food enrichment with folic acid (FA) has been difficult to control, due to the lack of appropriate methodology. With the aim of solving this problem, methodology for the determination of folic acid in enriched foods was developed and evaluated, using high performance liquid hromatography (HPLC). The method developed was applied to 36 types/brands of enriched foods, such as powdered milk, sterilized milk, milk based beverages, petit suisse type cheese, breakfast cereais and milk based mixes. The advantages of the method proposed were versatility, simplicityand speed, especially in the extraction and clean-up steps. tTItrasonicationfor 10 minutes in KOH (0.1 mol/L) was used to extract the FA, followed by a clean-up procedure using H3PO4(0.1 mol/L), phosphate buffer and trichloroacetic acid. Response surface methodology applied to the results, showed that these steps were carried out within the optimum range for all the parameters established. In the chromatographic step, a CI8 reverse phase column was used, and gradient elution allowed for a quick run of only 9 minutes, requiring a further 5 minutes to re-equilibrate the column before injecting another sample. Detection was at 290nm and quantification by means of an external standard curve. For the determination of the enrichment levels in powdered milk, the limits of detection, quantification and recuperation were respectively 1.3ng/mL, 2.6ng/mL and 98.6%. Repeatability tests presented coefficients of variation below 7.3%. Ofthe enriched foods analyzed, 25 were milk based, and in 16 ofthese, folic acid was present in amounts equal to or greater than those declared on the label, whilst in 7 products the values were below those declared, these being mainly sterilized milk samples and milk based beverages. In two samples of petit suisse type cheese, both ftom the Same manufacturer, folic acid was not detected, although it appeared on the label. Of the 11 samples of breakfast cereal and milk based mix analyzed, only 5 presented concentrations equal to or greater than those specified on the label. In addition to showing the advantages and applicability of the methodology developed and validated, the results of this study showed the need for greater control of the enrichment levels of these foods, and reforced the need for further studies on the shelflife ofthe products / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Helena Teixeira Godoy / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-28T11:48:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pallone_JulianaAzevedoLima_M.pdf: 19998225 bytes, checksum: a7769925437b6605ba41d30f7837959c (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Mesmo com o grande impacto causado pelos resultados das novas pesquisas a respeito das possíveis ações benéficas do ácido fólico à saúde, ainda são muito poucos os dados a respeito dos reais teores de ácido fólico, presente nos alimentos, principalmente dados analíticos sobre alimentos brasileiros, como também dados de estabilidade. A população está, portanto, exposta ao consumo de alimentos de qualidade não controlada, podendo ingerir quantidades não adequadas, às necessidades. Na tentativa de melhorar esse quadro é que este trabalho foi conduzido. Utilizou-se a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para determinação de ácido fólico segundo CATHARINO e GODOY (2000). O método foi aplicado em amostras de leite esterilizado, produzido em planta piloto e também adquirido no mercado, leite em pó, bebida láctea achocolatada pronta para consumo, margarina, farinha e pão. Pequenas adaptações na metodologia foram feitas, principalmente na etapa de extração, para amostras de farinha e pão. A aplicação da metodologia para margarina, assim como as alterações no método para as amostras de farinha e pão foram validadas em relação à recuperação, repetibilidade, limites de detecção e quantificação obtendo valores em torno de 96% de recuperação, coeficientes de variação inferiores a 1,5% nos ensaios de repetibilidade e 1,3ng/mL e 2,6ng/mL os limites de detecção e quantificação determinados, respectivamente. Foram analisadas 4 amostras, em 3 diferentes lotes, de leites fluídos adquiridos no mercado, com datas bem próximas ao processamento, e o valor do ácido fólico encontrado estava abaixo do declarado no rótulo do produto, para 50% das amostras analisadas. Após 3 meses, ainda dentro do prazo de validade, a perda de ácido fólico chegou a 20%. Nos 4 ensaios de esterilização do leite, realizado em planta piloto, nos processos de adição e homogeneização a perda de ácido fólico ficou em torno de 54%, enquanto que o processo de esterilização foi responsável por uma perda de apenas 10%. Durante o período de 90 dias a taxa de ácido fólico perdida foi de 16% Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: Despite the great impact of the results of new research in to possible beneficial effects of folic acid on the health, there are still not enough data about the content of folic acid in enriched food and no studies on its stability, chiefly in Brazilian foods. Therefore people are exposed to the consumption of food of uncontrolled quality, ingesting inadequate quantities for their needs. The aim of this work was to improve this picture. High pressure liquid chromatography (HPLC) was used to determine folic acid according to CATHARINO and GODOY (2000), in samples of sterilized milk produced in a pilot plant and also in samples purchased on the market, in powdered milk, ready to use milk chocolate beverage, margarine, flour and bread. Some modifications in the methodology wêre made, mainly in the extraction step, for the samples of flour and bread. These alterations were validated with respect to recover, and values of from 92 to 98% were obtained, repeatability was very well. The limits of detection and quantification being respectively 1,3ng/mL and 2,6ng/mL. Four sample were analysed in 3 different lots of fluid milk purchased on the market, and the values of folic acid were found to be below the values declared on the label of the products, in 50% of the samples. After 3 months, the loss of folic acid approached 20%. In all the 4 experiments with milk sterilization made in the pilot plant, the process of addition and homogenization resulted in a loss of folic acid of 54%, while the process of sterilization was responsible for only 10%. In a 90-day period the loss of folic acid was 16%. The same milk samples were submitted to a boiling process and the vitamin was show to be resistant, with a conservation of about 99%. As for powdered milk and ready to use milk chocolate beverage, 4 samples of each were also analysed, in 3 different lots, for each product purchased on the market. The content of folic acid found was practically equal that declared by.the manufacturers for the powdered milk. Nevertheless, after 1 year of storage, the loss of folic acid reached 60% ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Francisco Benedito Teixeira Pessine / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-19T02:12:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Calderini_Adriana_D.pdf: 8667238 bytes, checksum: 93c066670f54801635af79d770afae4c (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: 5-Fluorouracil (5-FU) e um dos fármacos mais úteis no tratamento de tumores sólidos em adultos, especificamente carcinomas do trato gastrointestinal (estômago, cólon e reto) e da mama. Em resumo, seu maior efeito bioquímico e a inibição da síntese do DNA, pois a concentração que inibe sua síntese pode ainda permitir a sintese do RNA. Causa severos efeitos adversos como mielo supressão, mucosite, dermatite, diarréia e toxicidade cardíaca. Em razão disto, têm sido realizadas várias tentativas para encapsular 5-FU a fim de reduzir os efeitos adversos que ele provoca. O objetivo deste projeto foi encapsular este anti-neoplásico utilizando nano-esferas de ácido poli(lático-co-glicólico), PLGA, como sistema carreador, acoplando à sua superfície quitosana e folato de quitosana para melhor endereçamento aos locais de ação, bioadesividade e menor toxicidade. A encapsulação de 5-FU em nano-esferas de PLGA foi aperfeiçoada através de planejamento experimental e por análise quimiométrica. Muitos fatores foram estudados: métodos de preparação, temperatura, quantidade inicial de 5-FU e pH. Na caracterização destes sistemas foram utilizadas diversas técnicas: espalhamento dinâmico de luz, determinação do potencial Zeta, calorimetria diferencial de varredura, análise termogravimétrica, difratometria de raios-X e microscopia eletrônica de varredura. Além disso, foram realizados ensaios de perfil de liberação, de estabilidade coloidal e estudo do comportamento desses sistemas em relação às células in vitro. O planejamento experimental permitiu obter nanoparticulas com capacidade de carregamento em torno de 11% e eficiência de encapsulação de 32%. O acoplamento de quitosana e folato de quitosana permitiu retardar a liberação do fármaco em solução. Para armazenagem destas partículas, observou-se que elas foram menos degradadas quando estão liofilizadas e mantidas a 4 °C. A melhor concentração de sacarose para liofilizá-las, sem que ocorra aumento de tamanho e polidispersão, foi 250 mmol/L. Os testes in vitro comprovaram a eficácia destas formulações / Abstract: 5-fluorouracil (5-fluoro-1H-pyrimidine-2,4-dione) is one of the most used drug to treat solid tumors in adults, specifically gastrointestinal (stomach and colorectal) and breast carcinomas. In summary, the major biochemical effect of 5-FU is inhibition of DNA synthesis, since concentrations which inhibit this synthesis may still permit RNA synthesis. It causes severe adverse effects as myelosuppression, mucositis, dermatitis, diarrhea and cardiac toxicity. Its encapsulation in nanoparticles can reduce these adverse effects, prolong its release and the drug can be placed directly on its site of action. The goal of this work was to encapsulate this anti-neoplasic drug using poly (lactic-co-glycolic acid) PLGA nanospheres as carrier system, attaching on their surface chitosan and folate-chitosan to attain an enhanced targeting, bioadesivity and less toxicity. The encapsulation of 5-FU in PLGA nanospheres was improved through an experimental design and chemometry. Many factors were studied: methods of preparation, temperature, initial amount of 5-FU and pH. In the characterization, many techniques were employed: dynamic light scattering, determination of Zeta potential, differential scanning calorimetry, thermo gravimetric analysis, X-ray difractometry and scanning electron microscopy. Besides, we also analyzed the release profile, colloidal stability and the behavior of these systems in relation to in vitro cancer cells. The experimental design allowed obtaining nanoparticles with drug loading around 11% and encapsulation efficiency of 32%. The attachment of chitosan and folate-chitosan also allowed prolonging the drug release in solution. To store these formulations, we observed that lyophilized particles kept at 4 °C were less degraded. The best sucrose concentration to freeze-drying these particles with no size and polidispersity change was 250 mmol/L. The in vitro tests proved the efficacy of these formulations / Doutorado / Físico-Química / Doutor em Ciências

Orientadores: Nelci Fenalti Höehr, Joyce Maria Annichino-Bizzacchi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T12:13:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barnabe_Aline_D.pdf: 1712567 bytes, checksum: 647e2ea59dbddb21e153a8e6ceae61cc (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Folato, vitamina B12 e ferro são nutrientes essenciais, cujas deficiências afetam indivíduos em todas as faixas etárias, sendo consideradas um problema de Saúde Pública no mundo. Níveis reduzidos de folato e vitamina B12 podem estar associados com níveis elevados de homocisteína (Hcy), e que eventualmente resultam em complicações. Entretanto, no Brasil, poucos estudos avaliaram a prevalência dessas deficiências, principalmente de folato e vitamina B12, após a fortificação de farinhas com ácido fólico e ferro. Os objetivos do presente estudo foram: avaliar a prevalência das deficiências de folato, vitamina B12 e ferro em idosos, crianças, gestantes e lactantes após a fortificação de farinhas com ácido fólico e ferro adotado pela ANVISA em 2004; e investigar a contribuição de polimorfismos genéticos sobre os níveis de folato, vitamina B12 e Hcy nestes indivíduos. Os indivíduos foram recrutados em Centros de Saúde da cidade de Campinas entre 2006 a 2007. No total, 719 indivíduos incluindo, 262 idosos, 106 crianças, 291 gestantes e 60 lactantes foram incluídos. As concentrações destes nutrientes foram mensuradas por eletroquimioluminescência; a dosagem de Hcy foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE); e os polimorfismos foram investigados por PCR-RFLP. Os resultados mostraram que a prevalência das deficiências de folato, vitamina B12 e ferro no grupo total de indivíduos foram de 0,3%, 5,3% e 12,6%, respectivamente. Praticamente não se observou a deficiência de folato, presente apenas em um idoso e uma gestante, enquanto que a deficiência de vitamina B12 foi prevalente em gestantes (8,9%) e idosos (4,2%). Além disso, a deficiência de ferro e anemia ferropriva foram prevalentes em crianças (9,9% e 4,9%, respectivamente), e gestantes (25,1% e 5,5%, respectivamente). A hiperhomocisteinemia esteve presente principalmente em idosos (34,3%). Com relação aos polimorfismos, apenas as gestantes carreadoras dos alelos CT+TT do polimorfismo no gene MTHFR (C677T) mostraram níveis reduzidos de folato (p=0,030). Através da análise múltipla, observamos que os níveis de Hcy foram determinados principalmente pelo folato (p<0,001), vitamina B12 (p<0,001), gênero (p<0,001) e idade (p<0,001) em idosos; vitamina B12 (p= 0,011) em crianças e folato (p=0,002) em gestantes. Nossos resultados demonstraram que na população avaliada, após 2 anos do início da fortificação de farinhas com ácido fólico e ferro, a deficiência de folato é praticamente inexistente, ao contrário da deficiência de ferro e de vitamina B12. A elevada prevalência da deficiência de vitamina B12 em idosos e gestantes deve ser valorizada na prática, devido ao risco de complicações. O mesmo deve ser observado em relação à deficiência de ferro, prevalente em crianças e gestantes. Portanto, medidas como suplementação e a dosagem desses nutrientes, para grupos populacionais de risco, devem ser implementados em políticas de Saúde Pública. Além disso, a hiperhomocisteinemia observada em idosos pode ser um fator de risco ou um marcador de doença arterial, que é comum nesses indivíduos / Abstract: Folate, vitamin B-12 and iron are essential nutrients, whose deficiencies are considerable public health problems worldwide, affecting all age groups. Low levels of folato and vitamin B12 have been associated with high concentrations of homocysteine (Hcy) and can lead to complications. In Brazil, a few studies evaluated the prevalence of these nutrients, especially, folate and vitamin B12, post acid folic and iron fortification era. The aim of this study was to assess folate, vitamin B12 and iron deficiencies in distinct Brazilian populations including elderly, children, pregnant and lactating women, after the initiation of folic acid and iron fortification by Brazilian authorities. We also investigated the contribution of polymorphisms on folate, vitamin B12 and Hcy levels in these individuals. Folate, vitamin B12 and ferritin levels were measured by chemiluminescence immunoassays, and Hcy levels were determined by high-performance liquid chromatography. Genotype analyses of RFC1 A80G, GCPII C1561T and MTHFR C677T polymorphisms were performed by PCR-RFLP. The individuals were recruited from primary care centers in Campinas ¿ Brazil, between 2006 - 2007. In total 719 individuals, including elderly (262), children (106), pregnant women (291) and lactating women (60) were included. The overall prevalence of low folate, vitamin B-12 and iron status was 0.3%, 5.3% and 12.6%, respectively. Folate deficiency was practically inexistent and was observed only in elderly (n=1) and pregnant women (n=1), whereas vitamin B12 deficiency was frequent in pregnant women (8.9%) and elderly (4.2%). Moreover, iron deficiency and iron deficiency anemia were prevalent in children (9.9% and 4.9%, respectively) and pregnant women (25.1% and 5.5%, respectively). Plasma Hcy concentrations were significantly higher in the elderly (34.3%). Pregnant women carrying the MTHFR 677T allele (CT+TT) showed lower serum folate levels (p=0.030), but none of the polymorphisms investigated in this study affected folate, vitamin B12 and Hcy levels in elderly, children and lactating women. After a multivariate analysis, Hcy levels were predicted by variables such as folate (p<0.001), vitamin B12 (p<0.001), gender (p<0.001) and age (p<0.001) in elderly; vitamin B12 (p= 0.011) in children; and folate (p = 0.002) in pregnant women. Our results demonstrated that folate deficiency is practically inexistent in this population, two years after the initiation of folic acid fortification, in contrast to vitamin B12 and iron deficiency. The high prevalence of vitamin B12 deficiency in elderly and pregnant women is relevant due to health complications. Supplementation and measure of nutrients in some groups of the population should be indicated by Public Health¿s policies. Furthermore, hiperhomocysteinemia in elderly can be a risk factor or a marker of arterial disease, which is common in these individuals / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutora em Ciências Médicas

Orientadores: Helena Teixeira Godoy, Giovanna Pisanelli Rodrigues de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-23T09:26:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neves_DanielaAndrade_M.pdf: 1283645 bytes, checksum: 04bc54a00f7c9c30f4f77c52b62a51c1 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A bioacessibilidade é a proporção de um composto ingerido que apresenta-se disponível no intestino para ser absorvido. A verificação da bioacessibilidade do ácido fólico presente em amostras de pão francês produzidos com farinha de trigo fortificada foi realizada através da simulação in vitro da digestão, o que permite a avaliação da eficiência do processo de fortificação da farinha de trigo. O teor de ácido fólico das amostras de farinha de trigo, pão francês e dos extratos obtidos a partir da simulação da digestão foram determinados por cromatografia líquida de ultra performance (UPLC), e em seguida, foram calculadas as retenções do ácido fólico em cada uma das amostras e extratos. Para a verificação da influência da temperatura e tempo de aquecimento na degradação de amostras de padrão de ácido fólico livre e microencapsulado foram realizadas análises térmica diferencial e termogravimétrica (ATD-TG) e difração de raios-X (DRX). Os resultados mostraram que o ácido fólico apresentou retenção de 85% e aproximadamente 70% nas etapas de homogeneização e assamento do pão francês, respectivamente, enquanto que a bioacessibilidade do ácido fólico foi de 100% nas amostras analisadas. As amostras de padrão de ácido fólico apresentaram total degradação após exposição a 155°C por 35 min e 175°C por 15 min. Já o padrão de ácido fólico microencapsulado apresentou completa decomposição a 100°C por 15min. Assim, pode-se concluir que o processo de enriquecimento das farinhas de trigo com ácido fólico, no que diz respeito ao fabrico de pães francês se mostra eficiente e que novas técnicas de recobrimento e técnicas de microencapsulamento devem ser estudadas para poderem ser aplicadas ao ácido fólico / Abstract: Bioaccessibility is the proportion of a compound ingested that is available to be absorbed. The bioaccessibility of folic acid in bread samples made with fortified wheat flour was carried out through the in vitro simulation of the digestion. This vitamin concentration in the flour, bread extracts and in the extracts obtained by de digestion simulation were measured by ultra-performance liquid chromatography (UPLC). Then the folic acid retention was calculated for each sample. The influence of temperature and time in the degradation of free and microencapsulated folic acid standard during a heating process were determined by a thermogravimetric and differential thermal analysis (TG-DTA) and X-ray diffraction (DRX). The results showed that folic acid retention was 85% and near 70% after the flour homogenization and the bread baking, respectively. Even though there were losses during the bread production the folic acid was 100% bioaccessible in the bread samples. The free folic acid standards samples presented total degradation after 35 min at 155°C and 15 min at 175°C exposition. However, the microencapsulated folic acid standards showed a complete degradation under 100°C for 15 min. Thus, it is conclude that in bread fabrication the wheat flour fortification process with folic acid is efficient and that new coating and microencapsulation techniques must be studied in order to be applied to folic acid / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos