Degradation of membrane proteins in the vacuole/lysosome is dependent on their prior sorting into the multivesicular body (MVB) pathway. This sorting process involves incorporation of proteins into vesicles that are formed by budding of the limiting membrane of the endosome into the lumen of the organelle. The MVB sorting process on the whole is highly conserved from yeast to human, and depends on the Vps27/Hrs, ESCRT-I, -II, and -III protein complexes functioning sequentially on the endosomal membrane, as well as on additional factors, such as the ubiquitinating enzyme Rsp5/Nedd4. It has now been established that ubiquitin serves as a sorting signal for many cargoes into the MVB pathway. In this thesis work, we provide evidence that Bro1 is not required for protein ubiquitination or early steps of endocytosis, but functions at the late endosome level as an integral component of the MVB pathway. Similarly to its human homologue Alix, Bro1 interacts with components of the ESCRT-I and ESCRT-III complexes. The putative role of Bro1/Alix in bridging an interaction between ESCRT-I and –III might be important to strengthen an association of these protein complexes to allow efficient sorting of cargo proteins. Deficiency in Bro1 results in recycling of the endocytosed Gap1 permease back to the plasma membrane, a process coupled to deubiquitination of the permease. This recycling is a non-classical phenotype for cells impaired in MVB pathway thus suggesting Bro1 to have a particular role in this sorting process. Furthermore, the conserved C-terminal proline-rich domain (PRD) of Bro1 is specifically important for MVB sorting of cargo proteins that are subject to ubiquitination. We show Bro1 (via its PRD) to play a highly important role in recruitment of the deubiquitinating enzyme Doa4 to the endosome. Consistent with this, Bro1 is required for deubiquitination of cargo proteins, a step occurring just before cargo incorporation into the endosomal vesicles, and similarly to Doa4, for ubiquitin recycling. In contrast to previous interpretations, we show that Doa4 has a direct role in sorting of ubiquitinated cargo proteins into the MVB pathway. We propose that Doa4 – via its association to Bro1 - achieves this role by catalyzing deubiquitination of cargo proteins and/or some components of the MVB sorting machinery. We further show Bro1 to interact with the ubiquitin ligase Rsp5, which, in addition to being required for cargo protein ubiquitination at the plasma membrane, apparently contributes to multiple steps of endocytosis and MVB sorting. Also the Bro1-Rsp5 interaction is dependent on the C-terminal PRD region of Bro1. We propose that this interaction is conserved. A role for ubiquitin in regulation of the MVB sorting machinery is emerging: the function of factors recognizing and sorting ubiquitinated cargo proteins in the MVB pathway is suggested to be coupled to their cycling between ubiquitinated and deubiquitinated stages. A growing body of evidence indicates that ubiquitin ligases of the Rsp5/Nedd4 family play a central role in this regulation. We speculate the Bro1/Alix protein, through its ability to simultaneously interact with factors of the MVB sorting machinery and with ubiquitinating and deubiquitinating enzymes to play a central role in the successive rounds of ubiquitination and deubiquitination of specific factors along the MVB pathway.

Volvo Penta has been producing boat engines since 1907 and are world leading in this seg­ment. They have today an extended range and also sell industrial power stations. Quality, safe­ty and environmental care are three core values for Volvo and together they strive to give their customers the right product with the right quality. Volvo has developed a production system named Volvo Production System, VPS, and one of the pillars is continuous improvements. Within this pillar you can find value stream map­ping, which is used to analyze the value stream through the process. This tool gives a wide perspective and helps to keep focus on the entire process instead of just parts of it. Volvo Penta in Vara has earlier done value stream mapping but without good results since they didn’t take set-up times and imbalances in account. Therefore Penta wanted a guide for how they should proceed the process in the future. For that reason this thesis work’s goal is to provide work instructions on value stream mapping for Penta. To approach the goal studies of value stream mapping and three interviews with com­panies were done. These factors resulted in work instructions which were tested in a case study. To develop the work instruction, operators from the process joined to give inputs and to help out in the discussions for improvements. Before the final work instruction was set, a connection to Cost Deployment were completed. The final results of this thesis work were a checklist with a manual, a toolbox and a note template. These tools were handed over to Volvo Penta in Vara with recommendations for future work. Some of the recommendations were that they should implement the work instruction as a standard and test it on different value streams. / Volvo Penta är ett företag som har tillverkat båtmotorer sedan 1907, men idag tillverkar de även drivsystem för industriellt bruk. Fabriken som ligger i Vara tillverkar endast driv­system för marint bruk av följande varianter; D4, D6 och D3. Kvalitet, säkerhet och miljöhänsyn är Volvo Pentas kärnvärden och detta är grunden för per­sonalens arbetssätt, produktutveckling samt hur de bemöter sina kunder. Genom att utgå ifrån Volvo Production System, VPS, strävar företaget efter sina kärnvärden. En av grundstenarna i VPS är ständiga förbättringar och där ingår arbetet med värde­flödes­ana­lyser, som innebär en studie kring andelen värdeskapande tid i förhållande till den totala tiden. Genom att analysera värdeflödet utifrån kunden fås en helhetsbild och slöserier samt ba­lans­eringsförluster blir synliga och kan sedan elimineras. Då fokus ska ligga på det totala flödet kan en vision om att nå det önskvärda framtida tillståndet bildas. Volvo Penta i Vara har tidigare gjort en värdeflödesanalys, VFA, men den blev inte kom­plett då hänsyn enbart hade tagits till takttider. Viktiga parametrar såsom ställtider, slöserier och obalanser hade blivit utelämnade. Företaget gav därför ut ett uppdrag till två studenter från Högskolan Väst med syfte att ta fram ett arbetssätt för hur en VFA ska göras samt ta reda på om Cost Deployment, CD, kan kopplas till teorin om VFA. Utifrån insamlade teorier kring VFA och utförda intervjuer, med två företag samt en anställd på Volvo Penta som arbetat med denna metodik, kunde författarna sammanställa ett arbetssätt. Arbetssättet testades vid en fall­studie då en övergripande VFA över hela fabriken gjordes. Därefter diskuterades arbets­sättet och de förbättringar som togs fram testades vid utformande av VFA på detaljerad nivå. Det slutgiltliga arbetssättet bestod utav en checklista med en beskrivande lathund som ska underlätta datainsamlingen. Även en verktygslåda har tagit fram som hjälp vid sammanställning av VFA:n. Det sammanställda arbetssättet överlämnades till Volvo Penta i Vara med rekommendationer för framtida arbete. Dessa rekommendationer var bland annat att införa arbetssättet som en standard och testa det på andra delar av flödet.

Für die Entwicklung neuer Technologien wird mehr und mehr der Einsatz von Spritzschichten benötigt. Hiermit lassen sich die komplexen Anforderungen an die Oberflächeneigenschaften erfüllen. Die thermischen Spritzverfahren werden immer mehr auch zum Mittelpunkt von Industrieanwendungen und bieten ein großes Anwendungsgebiet. Die Steigerung der Produktivität und der Leistung von technischen Anlagen und Maschinen erhöht gleichzeitig auch die Beanspruchung der Bauteile. Daher ist es notwendig, dass hochbeanspruchte oder gefährdete Oberflächen durch thermisches Spritzen geschützt werden, so dass sie den Belastungen besser standhalten. Ebenso führt die allgemeine Rohstoffknappheit dazu, dass Maschinenteile nicht vollständig aus bestimmten Materialien gefertigt werden können. Diese Teile können durch eine geeignete Oberflächenbeschichtung rohstoffsparend und damit kostengünstig hergestellt werden. Ein weiteres Anwendungsgebiet für das thermische Spritzen ist die Reparatur verschlissener Teile. Die hohe Flexibilität des thermischen Spritzens, die geringen Reparaturkosten und die damit verbundenen kurzen Ausfallzeiten kommen der Industrie zu Gute. Nach wie vor existiert keine Online-Prozesskontrolle, welche die relevanten Größen der Wechselwirkung Flamme – Spritzzusatzwerkstoff erfassen kann. Die Schichtoptimierung erfolgt weitestgehend durch eine empirische Veränderung der Spritzparameter und die anschließende Analyse und Zuordnung der Parameter zu den Ergebnissen. Hierbei beschränkt sich die Prozesskontrolle auf das Einstellen konstanter Werte für die regelbaren Eingangsgrößen. Bei diesen Möglichkeiten wird vorausgesetzt, dass bei konstanten Maschineneinstellungen auch ein konstanter Prozess mit reproduzierbaren Ergebnissen vorliegt. Im täglichen Umgang ist jedoch festzustellen, dass die Ergebnisse über einen längeren Zeitraum meist nicht reproduzierbar sind. Eine online arbeitende Meßmethode, die Aussagen über die Geschwindigkeit und Erwärmung der Spritzpartikel macht, liefert die Grundlage für reproduzierbare Ergebnisse. An Stelle der Anlagensteuergrößen werden Partikelparameterkorrelierte Messgrößen überwacht bzw. für eine Steuerung verwendet. Der Zugang zu Flammen- bzw. Partikeltemperatur erfolgt mit Hilfe der optischen Emissionsspektroskopie. In der vorliegenden Arbeit wird das Emissionsspektrum an zwei Orten entlang der Plasmaachse ausgewertet. Aus dem Intensitätsverhältnis von mehreren Spektrallinien eines Elements wird die Temperaturentwicklung der Partikel ermittelt (Temperaturbestimmung an mehreren Orten) und damit auch deren Geschwindigkeit beurteilt. Kenntnisse über die Temperatur- und Geschwindigkeitsverteilung geben die Möglichkeit reproduzierbare Schichten herzustellen, da die Bedingungen zu einem späteren Zeitpunkt exakt reproduziert werden können. Durch fluiddynamische Rechnungen wird der Nachweis erbracht, dass die Temperatur- und Geschwindigkeitsfelder des Plasmas und der injizierten Partikel miteinander korreliert sind. Im Verlauf dieser Arbeit wird weiterhin gezeigt, dass die genannten Messgrößen eine Signifikanz zum Spritzprozess aufweisen. Mögliche Störeinflüsse sowie eine Fehlerbetrachtung ergänzen die gewonnen Aussagen.

Informationen für URZ-Nutzer, in dieser Ausgabe speziell zum Ausbau des Campusnetzes und zur Nutzung der Ausbildungspools.

Ce travail concerne l’étude de la corrosion et du frottement du revêtement CrNi-9,5%C déposé par projection thermique sur l’acier SAE 1010. Les études ont été réalisées sur les revêtements bruts de déposition et après traitements thermiques à l’argon dans une gamme de températures variant entre 600 et 900 °C. Il a été trouvé que le revêtement était principalement constitué de Cr3C2 et NiCr en rapport avec la température de traitement. Il a été montré que la réponse du matériau revêtu au cours d’essais potentio-dynamiques dans une solution à 3.5% NaCl dépend fortement de l’épaisseur du revêtement et de l’évolution de la microstructure au cours des traitements thermiques. Il a été ainsi montré que le traitement réalisé à 900oC sur le revêtement de 450 mm d’épaisseur permettait de réduire de 97% la densité de courant de corrosion. Cela résulte d’un phénomène de diffusion à l’état solide qui conduit à une meilleure cohésion inter-lamellaire empêchant la solution de corrosion de pénétrer. Le principal mécanisme de corrosion est galvanique et résulte de la différence remarquable entre les propriétés électrochimiques de la matrice et de celles des carbures existants dans le revêtement. Durant les essais de frottement sous une charge de 5 N du matériau revêtu contre une bille d’alumine, on observe un changement progressif du mécanisme de frottement passant d’adhésif/abrasif à abrasif, principalement, lorsque la température du traitement augmente. Toutefois, les constantes de frottement sont du même ordre de grandeur, environ 10-6 mm3/N.m, ce qui indique un comportement satisfaisant du point de vue tribologique. / The present work has been devoted to the study of the corrosion and wear behaviors of CrNi-9.5%C coatings deposited onto a SAE 1010 steel substrate by a vacuum plasma thermal spray process. The studies were carried out with the coatings both in the as-deposited condition and after heat treatment in argon, at temperatures varying between 600° to 900oC. It has been found that the coatings contained mainly Cr3C2 and NiCr, irrespective to the heat treatment temperature. It has been shown that the response of the coated systems during the potentio-dynamic tests in a 3.5% NaCl solution depends strongly, besides the coating thickness, on the microstructural coating evolution that occurs during heat treatment. It has been found that the heat treatment performed at 900oC, for the 450 mm coating thickness, allowed the reduction of approximately 97% of the corrosion current density, as a result of a solid-state diffusion phenomenon, which produced a higher lamellar cohesion, impeding the penetration of the corrosive solution. The main corrosion mechanism has been attributed to the galvanic corrosion phenomenon, as a consequence of the remarkable difference between the electrochemical properties of the matrix and those of the existing carbides in the coating. During the sliding tests, the coated systems rubbed against alumina under a 5 N normal load, indicated a progressive change in the mechanism, from a mixed adhesive and abrasive, to a predominant abrasive as the heat treatment temperature increases. However, the wear constants were found to be of the order of approximately of 10-6 mm3/N.m, indicating that a satisfactory behavior from the tribological point of view. / En el presente trabajo se estudio el comportamiento ante la corrosión y el desgaste de recubrimientos de CrNi9,5%C depositados sobre un acero SAE 1010 usando la técnica de proyección térmica de plasma al vacío (VPS). Los estudios se realizaron para los recubrimientos tanto en condición de cómo depositados como tratados térmicamente, en atmósfera de argón, a temperaturas de recocido de 600°, 800° y 900°C. Se encontró que el recubrimiento tiene Cr3C2 y NiCr como fases mayoritarias, independiente de la temperatura del tratamiento. La respuesta de los sistemas recubiertos durante los ensayos potencio-dinamicos en solución acuosa de 3.5% NaCl indicó una significativa dependencia tanto del espesor, como de los cambios microestructurales producidos en función de la temperatura de tratamiento térmico. Se determinó que el tratamiento térmico realizado a 900oC, para un recubrimiento de 450mm de espesor, ha permitido una reducción de aproximadamente un 97% del valor de la densidad de corriente, como resultado del aumento en la cohesión interlamelar obtenida debido al fenómeno de difusión en estado sólido, lo cual impide la penetración de la solución agresiva. En este caso, el mecanismo principal de daño se debe al proceso de corrosión galvánica, como consecuencia a la diferencia apreciable existente entre la naturaleza electroquímica de la matriz de Ni con respecto a los carburos. La respuesta del sistema recubierto contra alumina durante los ensayos de desgaste deslizante bajo 5N de carga normal indica que tiene lugar un cambio progresivo del mecanismo combinado de desgaste adhesivo y abrasivo hacia un mecanismo mayormente abrasivo, a medida que la temperatura del tratamiento termico aumenta. Sin embargo, las constantes de desgaste determinadas para todos los ensayos llevados a cabo se encontraron del orden de 10-6 mm3/N.m, indicando un comportamiento satisfactorio desde el punto de vista tribologico.

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Für die Entwicklung neuer Technologien wird mehr und mehr der Einsatz von Spritzschichten benötigt. Hiermit lassen sich die komplexen Anforderungen an die Oberflächeneigenschaften erfüllen. Die thermischen Spritzverfahren werden immer mehr auch zum Mittelpunkt von Industrieanwendungen und bieten ein großes Anwendungsgebiet. Die Steigerung der Produktivität und der Leistung von technischen Anlagen und Maschinen erhöht gleichzeitig auch die Beanspruchung der Bauteile. Daher ist es notwendig, dass hochbeanspruchte oder gefährdete Oberflächen durch thermisches Spritzen geschützt werden, so dass sie den Belastungen besser standhalten. Ebenso führt die allgemeine Rohstoffknappheit dazu, dass Maschinenteile nicht vollständig aus bestimmten Materialien gefertigt werden können. Diese Teile können durch eine geeignete Oberflächenbeschichtung rohstoffsparend und damit kostengünstig hergestellt werden. Ein weiteres Anwendungsgebiet für das thermische Spritzen ist die Reparatur verschlissener Teile. Die hohe Flexibilität des thermischen Spritzens, die geringen Reparaturkosten und die damit verbundenen kurzen Ausfallzeiten kommen der Industrie zu Gute. Nach wie vor existiert keine Online-Prozesskontrolle, welche die relevanten Größen der Wechselwirkung Flamme – Spritzzusatzwerkstoff erfassen kann. Die Schichtoptimierung erfolgt weitestgehend durch eine empirische Veränderung der Spritzparameter und die anschließende Analyse und Zuordnung der Parameter zu den Ergebnissen. Hierbei beschränkt sich die Prozesskontrolle auf das Einstellen konstanter Werte für die regelbaren Eingangsgrößen. Bei diesen Möglichkeiten wird vorausgesetzt, dass bei konstanten Maschineneinstellungen auch ein konstanter Prozess mit reproduzierbaren Ergebnissen vorliegt. Im täglichen Umgang ist jedoch festzustellen, dass die Ergebnisse über einen längeren Zeitraum meist nicht reproduzierbar sind. Eine online arbeitende Meßmethode, die Aussagen über die Geschwindigkeit und Erwärmung der Spritzpartikel macht, liefert die Grundlage für reproduzierbare Ergebnisse. An Stelle der Anlagensteuergrößen werden Partikelparameterkorrelierte Messgrößen überwacht bzw. für eine Steuerung verwendet. Der Zugang zu Flammen- bzw. Partikeltemperatur erfolgt mit Hilfe der optischen Emissionsspektroskopie. In der vorliegenden Arbeit wird das Emissionsspektrum an zwei Orten entlang der Plasmaachse ausgewertet. Aus dem Intensitätsverhältnis von mehreren Spektrallinien eines Elements wird die Temperaturentwicklung der Partikel ermittelt (Temperaturbestimmung an mehreren Orten) und damit auch deren Geschwindigkeit beurteilt. Kenntnisse über die Temperatur- und Geschwindigkeitsverteilung geben die Möglichkeit reproduzierbare Schichten herzustellen, da die Bedingungen zu einem späteren Zeitpunkt exakt reproduziert werden können. Durch fluiddynamische Rechnungen wird der Nachweis erbracht, dass die Temperatur- und Geschwindigkeitsfelder des Plasmas und der injizierten Partikel miteinander korreliert sind. Im Verlauf dieser Arbeit wird weiterhin gezeigt, dass die genannten Messgrößen eine Signifikanz zum Spritzprozess aufweisen. Mögliche Störeinflüsse sowie eine Fehlerbetrachtung ergänzen die gewonnen Aussagen.

This diploma thesis focuses on the additional services transmitted in conjunction with television broadcast. The first part presents the background research in the evolution of these technologies. In the second part the step-by-step creation of a sample application based on the latest HbbTV platform is dealt with. Finally, the described application demonstrates the streaming possibilities of audiovisual content on the TV screen.

Degradation of membrane proteins in the vacuole/lysosome is dependent on their prior sorting into the multivesicular body (MVB) pathway. This sorting process involves incorporation of proteins into vesicles that are formed by budding of the limiting membrane of the endosome into the lumen of the organelle. The MVB sorting process on the whole is highly conserved from yeast to human, and depends on the Vps27/Hrs, ESCRT-I, -II, and -III protein complexes functioning sequentially on the endosomal membrane, as well as on additional factors, such as the ubiquitinating enzyme Rsp5/Nedd4. It has now been established that ubiquitin serves as a sorting signal for many cargoes into the MVB pathway. <p>In this thesis work, we provide evidence that Bro1 is not required for protein ubiquitination or early steps of endocytosis, but functions at the late endosome level as an integral component of the MVB pathway. Similarly to its human homologue Alix, Bro1 interacts with components of the ESCRT-I and ESCRT-III complexes. The putative role of Bro1/Alix in bridging an interaction between ESCRT-I and –III might be important to strengthen an association of these protein complexes to allow efficient sorting of cargo proteins. Deficiency in Bro1 results in recycling of the endocytosed Gap1 permease back to the plasma membrane, a process coupled to deubiquitination of the permease. This recycling is a non-classical phenotype for cells impaired in MVB pathway thus suggesting Bro1 to have a particular role in this sorting process. Furthermore, the conserved C-terminal proline-rich domain (PRD) of Bro1 is specifically important for MVB sorting of cargo proteins that are subject to ubiquitination. We show Bro1 (via its PRD) to play a highly important role in recruitment of the deubiquitinating enzyme Doa4 to the endosome. Consistent with this, Bro1 is required for deubiquitination of cargo proteins, a step occurring just before cargo incorporation into the endosomal vesicles, and similarly to Doa4, for ubiquitin recycling. In contrast to previous interpretations, we show that Doa4 has a direct role in sorting of ubiquitinated cargo proteins into the MVB pathway. We propose that Doa4 – via its association to Bro1 - achieves this role by catalyzing deubiquitination of cargo proteins and/or some components of the MVB sorting machinery. We further show Bro1 to interact with the ubiquitin ligase Rsp5, which, in addition to being required for cargo protein ubiquitination at the plasma membrane, apparently contributes to multiple steps of endocytosis and MVB sorting. Also the Bro1-Rsp5 interaction is dependent on the C-terminal PRD region of Bro1. We propose that this interaction is conserved. <p>A role for ubiquitin in regulation of the MVB sorting machinery is emerging: the function of factors recognizing and sorting ubiquitinated cargo proteins in the MVB pathway is suggested to be coupled to their cycling between ubiquitinated and deubiquitinated stages. A growing body of evidence indicates that ubiquitin ligases of the Rsp5/Nedd4 family play a central role in this regulation. We speculate the Bro1/Alix protein, through its ability to simultaneously interact with factors of the MVB sorting machinery and with ubiquitinating and deubiquitinating enzymes to play a central role in the successive rounds of ubiquitination and deubiquitination of specific factors along the MVB pathway. <p> / Doctorat en sciences, Spécialisation biologie moléculaire / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Informationen für URZ-Nutzer, in dieser Ausgabe speziell zum Ausbau des Campusnetzes und zur Nutzung der Ausbildungspools.:Campusnetz-Backbone 2010 Ausbildungspools: Verfügbarkeit im Sommersemester 2011 Ausbildungspools: Softwarebedarf für das Sommersemester 2011 Kurzinformationen: * Root VPS mit vorinstalliertem Betriebssystem * WebVPN * Erweiterung eines VPSH-Clusters * Renovierung Computerpools Software-News: * Microsoft-Software für Privat * MSDNAA-Portal * Software-Updates * Neue Softwarehandbücher