Made available in DSpace on 2016-03-07T19:20:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-11-27. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:24:44Z : No. of bitstreams: 1 000858751.pdf: 1279197 bytes, checksum: a6b7adec5b4fbf5c0cbc62f17a606107 (MD5) / A podridão negra, incitada por Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc), é considerada a doença bacteriana mais destrutiva das brássicas em muitos países, podendo promover consideráveis reduções na produtividade. O estudo dos nichos ecológicos de sobrevivência de bactérias fitopatogênicas possui grande importância no manejo de fitobacterioses, uma vez que uma pequena quantidade de inóculo sobrevivente entre os ciclos de cultivo pode ser suficiente para iniciar uma nova epidemia no campo. Baseado nisso, o presente trabalho avaliou a sobrevivência de Xcc em diferentes ensaios, através da utilização do isolado 3098C de Xcc resistente a 100 μg/mL de rifampicina. A sobrevivência de Xcc na forma de células livres no solo foi avaliada em cinco experimentos, desenvolvidos em condições de campo, entre maio e agosto de 2014. Em condições controladas¸ foram utilizados seis tipos de solo, amostrados de diferentes áreas com cultivo ou não de brássicas. A colonização do filoplano e rizosfera de 26 espécies de plantas daninhas por Xcc também foi avaliada em experimentos de campo, entre agosto de 2014 a outubro de 2015. Nos experimentos de campo, Xcc sobreviveu entre 4 e 7 dias no solo, sendo influenciada diretamente pela temperatura e umidade, ocorridas durante os experimentos. Em condições controladas, a bactéria sobreviveu de 10 a 24 dias, sendo esses períodos influenciados pela textura, pH e teor de matéria orgânica em cada tipo de ... / Black rot, incited by Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc), is the most destructive bacterial disease of brassicas in many countries, and can promote substantial reductions in productivity. The study of survival ecological niches of phytopathogenic bacteria has great importance in the management of plant bacteriosis, since a small amount of inoculum surviving among the cultivation cycle may be sufficient to initiate a new outbreak in the field. Based on this, this study evaluated the survival of Xcc in different experiments using Xcc strain 3098C, resistant to 100 μg/mL of rifampicin. The survival of Xcc as free cells in the soil was evaluated in five experiments, carried out in field conditions, between May and August, 2014. Under controlled conditions, six types of soil were used, sampled from different areas, with or without brassicas cultivation. The colonization of phylloplane and rhizosphere of 26 weed species by Xcc was also evaluated in field experiments, between August, 2014 and October, 2015. In field experiments, Xcc survived between 4 and 7 days in the soil, being directly influenced by temperature and humidity that occurred during the experiments. Under controlled conditions, the bacteria survived for 10 to 24 days, and these periods were influenced by texture, pH and organic matter content in each soil type. In weeds rhizosphere, Xcc had low capacity to survive, at most 28 days on Raphanus raphanistrum. In phylloplane, Xcc survived more than 42 days in Lepidium virginicum, and up to 70 days in Raphanus raphanistrum. Weeds from Amaranthaceae and Poaceae families did not show potential for the epiphytic survival of Xcc.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:21:47Z : No. of bitstreams: 1 laia_ml_dr_jabo_prot.pdf: 9478549 bytes, checksum: f92e822aa9f06920bc2065ca991c0323 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) constitui um dos principais patógenos da citricultura mundial. Essa litobactéria causa cancro em folhas. ramos e frutos de citros em geral. ocasionando grandes perda econômicas anuais. A fim de estudar a interação dessa bactéria com seu hospedeiro empregou-se a análise de mutantes e da expressão gênica global por meio de microarranjos de DNA (transcrissoma). Na primeira parte do estudo foi obtida uma biblioteca de cerca de 10.000 Illutantes do isolado 306 de Xac. Desses. 3.300 foram inoculados em folhas de limoeiro cravo e sua capacidade em causar cancro cítrico foi avaliada aos três dias da inoculação. Após quatro inoculaçàes. 56 mutantes foram selecionados por apresentarem virulência alterada e suas ORFs interrompidas foram identificadas por meio de seqüenciamento. Uma análise dessas ORFs mostrou que havia tanto ORFs quc codificavam para genes relacionados com a patogenicidade em fitobactérias como possihilitou identificar novos genes associados à infecção. além de ORFs hipotéticas. para as quais ainda não foi atrihuída nenhuma função. Dentre os genes previamente implicados na patogênese. pode-se citar o gene rpB4. o qual participa do sistema de secreção do tipo três. Já o gene hrlA. que contribui na virulência de algumas bactérias patogênicas de animais. até o presente ainda não tinha sido relatado como tendo importância no processo de patogênese em fitobactérias. A ORF XACO~40 é um exemplo de uma proteína hipotética que interfere significativamente no processo infeccioso. uma vez que o mutante para esse locos não induziu sintomas da doença. assim como os demais mutantes citados acima. Na segunda parte deste trabalho. produziu-se um microarranjo de DNA contendo 6.9 I 2 sondas imobilizadas (2.673 ORFs. 87 ORFs repetidas. 312 controles negativos e X4 controles positivos... / Xanthomonas axonopodis pv. citri constitutes one of the main and most damaging pathogcn of lhe world-wide citriculture. This phytobacteria causes canker in leaves, branches and fruits of citrus. causing scvcre cconomic losses. In order to study the interaction of this bacterium with its citrus host. two approaches had been used to proceed a post-genomic functional analysis: wholc genol11c mutagcncsis and global expression analysis by cDNA microarrays technique. In the first part of this study a Xac 306 mutants library with ' 10,000 mutants was obtained. From thesc. 3.300 wcrc inoculatcd in mexicam lemon tree leaves and its capacity to cause citrus canker was cvalualcd. Aftcr four inoculation cicIes, 56 mutants had been selected as having modified palhogcnicily. The inlcrruplcd ORFs were identified by DNA sequencing and analysis of these ORFs identificd ORFs coding for genes previously known as related to pathogenicity proccss in phytobactcrilll11 as wcll gcnes not yet described as involved in pathogenicity, incIuding hypothetical gcncs. Al110ng the gencs previously known as implied in pathogens attack, the hrpB4 gene is one that was found, whic participates of the type three secretion system. To the hrtA gene, whose participation in the virulcnce process has been described to some animal pathogenic bacteria but never yet as having a role in to pathogenicity process in phytobacteria, was found to be involved in the pathogenicity of Xac. The ORF XAC0340 is an example of hypothetical protein which presents grcat intcrfcrcncc in thc infcctious process: the mutant for this gene does not induce any diseasc sYl11ploms in citric Icaves...(Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-07Bitstream added on 2014-06-13T19:05:04Z : No. of bitstreams: 1 torres_jp_dr_botfca.pdf: 295393 bytes, checksum: 251f6d38894524f4e162128a576153b9 (MD5) / Foram avaliados, no presente trabalho, o tempo de sobrevivência de um isolado de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (Xap), resistente ao sulfato de estreptomicina, em restos de cultura de feijoeiro no campo, e a presença dessa bactéria em 34 lotes de sementes de feijoeiro produzidas no Estado do Paraná, safras 1998/99 e 1999/99. A sobrevivência de Xap em restos de cultura foi avaliada em diferentes períodos do ano, simulando aproximadamente as três épocas de cultivo de feijão no Brasil (safras das secas, das águas e de inverno), em folíolos infectados mantidos na superfície do solo, com e sem cobertura morta, e enterrados a 10 e 15 cm de profundidade. Os resultados evidenciaram a sobrevivência do agente causal do Crestamento Bacteriano Comum do Feijoeiro de 30 a 45 dias, nos períodos mais úmidos, e de até 90 a 120 dias, nos períodos mais secos, para os tratamentos com tecidos enterrados. Para os tratamentos de superfície, a sobrevivência foi de 45 a 75 dias, nos períodos mais úmidos, e de até 180 dias, nos períodos mais secos. Os dados não mostraram diferenças importantes entre os tratamentos de superfície, solo nu e cobertura com palha, e nem entre os tratamentos com incorporação, 10 e 15 cm de profundidade. Quanto à qualidade sanitária das sementes fiscalizadas de feijoeiro produzidas no Estado do Paraná, nas safras 1998/99 e 1999/99, no que diz respeito à Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli, foi observada a presença dessa bactéria em 50 % dos lotes, com incidência variando de 0,1 % a 1,7 % de sementes contaminadas/infectadas. / The present work evaluated the time of survival of a Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (Xap) isolate, resistant to the streptomycin sulfate, in culture remains of bean in the field, and the presence of this bacteria in 34 lots of bean seeds produced in the State of Paraná, crops 1998/99 and 1999/99. The survival of Xap in culture remains was evaluated in different periods of the year, simulating the three seasons of bean cultivation in Brazil (crop of the droughts, waters and winter), in sick leaves maintained in the soil surface, with and without plant died cover, and buried at 10 and 15 cm of depth. The results obtained evidenced the bacterial common blight of the bean causal agent's survival from 30 to 45 days, in the most humid periods, and up to 90 to 120 days, in the driest periods, for the tissue buried treatments. For the surface treatments, the survival was from 45 to 75 days, in the most humid periods, and up to 180 days, in the driest periods. The data did not show important differences among the surface treatments, nude soil and covering with straw, and nor among the treatments with incorporation, 10 and 15 cm of depth. With relationship to the sanitary quality of the bean seeds produced in the State of Paraná , crops 1998/99 and 1999/99, in what concern the Xap presence, the results of the tests revealed the presence of this bacteria in 50 % of the lots, with incidence varying from 0,1% to 1,7% of infected seeds.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-25Bitstream added on 2015-04-09T12:47:59Z : No. of bitstreams: 1 000817146.pdf: 479870 bytes, checksum: d3427b349dc719a504332ddf82064866 (MD5) / O estudo da interação planta-patógeno é de grande importância para o entendimento do cancro cítrico, justificando assim a busca por genes que estejam ligados a patogenicidade e virulência em Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), agente causal dessa doença. Neste estudo, foi realizada mutagênese aleatória por inserção do transposon EZ-Tn5 in vitro no genoma da Xac. Obteve-se 8000 mutantes onde 292 foram conduzidos em ensaio experimental in planta. Cinco mutantes expressaram sintomatologia alterada, dois com ausência total de sintomas e três com leve hiperplasia. A análise da sequência dos genes onde se inseriu o transposon indicam mutações nos genes purF, yapH, oar, um gene que codifica uma proteína hipotética (XAC 0196), e na região entre os genes pobB (XAC0362) e glpR (XAC0361). As análises de curvas de crescimento bacteriano in planta demonstraram que, exceto o gene purF, todos os demais podem ser genes envolvidos na patogenicidade de Xac. Dois destes, yapH e oar são descritos como relacionados à adesividade bacteriana, evidenciando que a interferência nesse processo exerce influência direta no sucesso da infecção de Xac. Destaca-se também a importância da identificação de uma proteína hipotética, já que essa apresentou sintomatologia atenuada quando ocorreu a inserção do transposon / The study of plant-pathogen interaction is very important to citrus canker understanding, justifying the search for virulence and pathogenicity related genes in Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), causal agent of this disease. In this study, a random mutagenesis by Tn5 transposon insertion into Xac’s genome was performed. Eight thousand mutants were produced and 292 mutants were tested in planta. From those, five mutants expressed altered symptomatology, two showed complete absence of symptoms and three reduced hyperplasia. Gene sequences analysis where transposon was inserted, indicated mutations in purF, yapH and oar genes, in a region that codes for a hypothetical protein (XAC0196), and in a region between pobB (XAC0362) and glpR (XAC0361) genes. Analysis of bacteria growth curve in planta showed that, except for purF gene, all the others genes may be involved in Xac pathogenicity. Two of these genes, yapH and oar, are described as bacterial adhesion related genes, highlighting that interference in this process has direct influence in the Xac infection success. The importance of hypothetical protein identification is emphasized, since it presented attenuated symptomatology when mutated

Orientador: Henrique Ferreira / Banca: Alessandra Alves de Souza / Banca: Patricia Pasquali Parise Maltempi / Resumo: Xanthomonas. citri subsp. citri (Xac) é o agente causal do cancro cítrico, uma das doenças mais graves que afetam plantas cítricas de importância comercial em todo o mundo. O controle eficaz para o cancro cítrico constitui na eliminação de plantas infectadas em programas rigorosos para conter a propagação da bactéria. No entanto, o relaxamento recente nas políticas para combater cancro cítrico em áreas como o estado de São Paulo - Brasil, está a contribuir para a propagação da doença. O conhecimento da biologia deste patógeno de plantas e também dos mecanismos envolvidos na interação planta-patógeno são de grande importância para apoiar o desenvolvimento de estratégias para lidar com o cancro cítrico. Um trabalho recente de nosso grupo demonstrou que os mutantes X. citri com disrupção do gene parB são comprometidos na segregação cromossômica e na capacidade de produzir os sintomas da doença na planta. No presente trabalho, nós estendemos nossas caracterizações, avaliando os efeitos da falta de parB em mutantes X. citri através de uma deleção limpa. ParB é uma proteína de ligação ao DNA e está envolvida no processo de segregação cromossômica através de interação com outras proteínas. Devido à dificuldade de deleção de genes envolvidos neste processo em X. citri, o nocaute de parB foi realizado numa variante abrigando um plasmídeo replicativo capaz de expressar cópias extras de ParB (ParB-TAP) sob o controle de para (promotor de arabinose). A viabilidade de X. citri parB nocaute (XacΔparB-pLAC2) foi avaliada em experimentos de curva de crescimento e em comparação com a estirpe do tipo selvagem, em condições de repressão ou de indução de parB-tap ligado a este promotor; O objetivo foi explorar as condições de depleção e superexpressão de ParB e seus efeitos através da caracterização do referido promotor. Em seguida, X. citri parB nocaute foi visualizado por microscopia de... / Abstract: Xanthomonas citri ssp. citri (Xac) is the causal agent of citrus canker, one of the most severe diseases that affect citrus plants of commercial importance around the world. An effective control for citrus canker constitutes the elimination of infected plants in rigorous programs to contain the spread of the bacteria. However, recent relaxation in the policies to combat citrus canker in areas such as the state of São Paulo, Brazil, the major orange juice producer in the world, are contributing to the spread of the disease. Therefore, knowledge of the biology of this plant pathogen and also of the mechanisms involved in plant-pathogen interaction are of great importance to support the development of strategies to deal with citrus canker. Recent work from our group demonstrated that X. citri mutants disrupted for parB are compromised in chromosome segregation and are unable to produce disease symptoms in plant. In the present work, we extended our characterizations by evaluating the effects of a lack of ParB in X. citri mutants carrying a clean deletion of its coding DNA. ParB is a DNA binding protein and is involved in chromosome segregation process through interaction with other proteins. Because of difficult in genes deletion involved this process in X. citri, the parB gene was deleted in a X. citri variant harboring a replicative plasmid able to express extra copies of ParB (ParB-TAP) under the control of the para (arabinose promoter). The viability of the X. citri parB knockout was assessed in growth curve experiments and compared with the wild type strain under different conditions of parB-tap repression or induction. The aim was to explore the conditions depletion and overexpression of ParB and its effects through the characterization of para in X. citri Thus, the X. citri parB knockout was visualized under differential interference contrast (DIC) microscopy in order to detect morphological alterations normally expected from ... / Mestre

Orientador: Antonio Carlos Maringoni / Coorientador: Tadeu Antônio Fernandes da Silva Júnior / Banca: Luís Otavio Saggion Beriam / Banca: Renate Krause Sakate / Resumo: A podridão negra, incitada por Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc), é considerada a doença bacteriana mais destrutiva das brássicas em muitos países, podendo promover consideráveis reduções na produtividade. O estudo dos nichos ecológicos de sobrevivência de bactérias fitopatogênicas possui grande importância no manejo de fitobacterioses, uma vez que uma pequena quantidade de inóculo sobrevivente entre os ciclos de cultivo pode ser suficiente para iniciar uma nova epidemia no campo. Baseado nisso, o presente trabalho avaliou a sobrevivência de Xcc em diferentes ensaios, através da utilização do isolado 3098C de Xcc resistente a 100 μg/mL de rifampicina. A sobrevivência de Xcc na forma de células livres no solo foi avaliada em cinco experimentos, desenvolvidos em condições de campo, entre maio e agosto de 2014. Em condições controladas¸ foram utilizados seis tipos de solo, amostrados de diferentes áreas com cultivo ou não de brássicas. A colonização do filoplano e rizosfera de 26 espécies de plantas daninhas por Xcc também foi avaliada em experimentos de campo, entre agosto de 2014 a outubro de 2015. Nos experimentos de campo, Xcc sobreviveu entre 4 e 7 dias no solo, sendo influenciada diretamente pela temperatura e umidade, ocorridas durante os experimentos. Em condições controladas, a bactéria sobreviveu de 10 a 24 dias, sendo esses períodos influenciados pela textura, pH e teor de matéria orgânica em cada tipo de ... / Abstract: Black rot, incited by Xanthomonas campestris pv. campestris (Xcc), is the most destructive bacterial disease of brassicas in many countries, and can promote substantial reductions in productivity. The study of survival ecological niches of phytopathogenic bacteria has great importance in the management of plant bacteriosis, since a small amount of inoculum surviving among the cultivation cycle may be sufficient to initiate a new outbreak in the field. Based on this, this study evaluated the survival of Xcc in different experiments using Xcc strain 3098C, resistant to 100 μg/mL of rifampicin. The survival of Xcc as free cells in the soil was evaluated in five experiments, carried out in field conditions, between May and August, 2014. Under controlled conditions, six types of soil were used, sampled from different areas, with or without brassicas cultivation. The colonization of phylloplane and rhizosphere of 26 weed species by Xcc was also evaluated in field experiments, between August, 2014 and October, 2015. In field experiments, Xcc survived between 4 and 7 days in the soil, being directly influenced by temperature and humidity that occurred during the experiments. Under controlled conditions, the bacteria survived for 10 to 24 days, and these periods were influenced by texture, pH and organic matter content in each soil type. In weeds rhizosphere, Xcc had low capacity to survive, at most 28 days on Raphanus raphanistrum. In phylloplane, Xcc survived more than 42 days in Lepidium virginicum, and up to 70 days in Raphanus raphanistrum. Weeds from Amaranthaceae and Poaceae families did not show potential for the epiphytic survival of Xcc. / Mestre

Orientador: Antonio Carlos Maringoni / Resumo: Foram avaliados, no presente trabalho, o tempo de sobrevivência de um isolado de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (Xap), resistente ao sulfato de estreptomicina, em restos de cultura de feijoeiro no campo, e a presença dessa bactéria em 34 lotes de sementes de feijoeiro produzidas no Estado do Paraná, safras 1998/99 e 1999/99. A sobrevivência de Xap em restos de cultura foi avaliada em diferentes períodos do ano, simulando aproximadamente as três épocas de cultivo de feijão no Brasil (safras das secas, das águas e de inverno), em folíolos infectados mantidos na superfície do solo, com e sem cobertura morta, e enterrados a 10 e 15 cm de profundidade. Os resultados evidenciaram a sobrevivência do agente causal do Crestamento Bacteriano Comum do Feijoeiro de 30 a 45 dias, nos períodos mais úmidos, e de até 90 a 120 dias, nos períodos mais secos, para os tratamentos com tecidos enterrados. Para os tratamentos de superfície, a sobrevivência foi de 45 a 75 dias, nos períodos mais úmidos, e de até 180 dias, nos períodos mais secos. Os dados não mostraram diferenças importantes entre os tratamentos de superfície, solo nu e cobertura com palha, e nem entre os tratamentos com incorporação, 10 e 15 cm de profundidade. Quanto à qualidade sanitária das sementes fiscalizadas de feijoeiro produzidas no Estado do Paraná, nas safras 1998/99 e 1999/99, no que diz respeito à Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli, foi observada a presença dessa bactéria em 50 % dos lotes, com incidência variando de 0,1 % a 1,7 % de sementes contaminadas/infectadas. / Abstract: The present work evaluated the time of survival of a Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli (Xap) isolate, resistant to the streptomycin sulfate, in culture remains of bean in the field, and the presence of this bacteria in 34 lots of bean seeds produced in the State of Paraná, crops 1998/99 and 1999/99. The survival of Xap in culture remains was evaluated in different periods of the year, simulating the three seasons of bean cultivation in Brazil (crop of the droughts, waters and winter), in sick leaves maintained in the soil surface, with and without plant died cover, and buried at 10 and 15 cm of depth. The results obtained evidenced the bacterial common blight of the bean causal agent's survival from 30 to 45 days, in the most humid periods, and up to 90 to 120 days, in the driest periods, for the tissue buried treatments. For the surface treatments, the survival was from 45 to 75 days, in the most humid periods, and up to 180 days, in the driest periods. The data did not show important differences among the surface treatments, nude soil and covering with straw, and nor among the treatments with incorporation, 10 and 15 cm of depth. With relationship to the sanitary quality of the bean seeds produced in the State of Paraná , crops 1998/99 and 1999/99, in what concern the Xap presence, the results of the tests revealed the presence of this bacteria in 50 % of the lots, with incidence varying from 0,1% to 1,7% of infected seeds. / Doutor

Orientador: Maria Inês Tiraboschi Ferro / Coorientador: Jesus Aparecido Ferro / Banca: Flavia Maria de Souza Carvalho / Banca: Fabrício José Jaciani / Resumo: O estudo da interação planta-patógeno é de grande importância para o entendimento do cancro cítrico, justificando assim a busca por genes que estejam ligados a patogenicidade e virulência em Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), agente causal dessa doença. Neste estudo, foi realizada mutagênese aleatória por inserção do transposon EZ-Tn5 in vitro no genoma da Xac. Obteve-se 8000 mutantes onde 292 foram conduzidos em ensaio experimental in planta. Cinco mutantes expressaram sintomatologia alterada, dois com ausência total de sintomas e três com leve hiperplasia. A análise da sequência dos genes onde se inseriu o transposon indicam mutações nos genes purF, yapH, oar, um gene que codifica uma proteína hipotética (XAC 0196), e na região entre os genes pobB (XAC0362) e glpR (XAC0361). As análises de curvas de crescimento bacteriano in planta demonstraram que, exceto o gene purF, todos os demais podem ser genes envolvidos na patogenicidade de Xac. Dois destes, yapH e oar são descritos como relacionados à adesividade bacteriana, evidenciando que a interferência nesse processo exerce influência direta no sucesso da infecção de Xac. Destaca-se também a importância da identificação de uma proteína hipotética, já que essa apresentou sintomatologia atenuada quando ocorreu a inserção do transposon / Abstract: The study of plant-pathogen interaction is very important to citrus canker understanding, justifying the search for virulence and pathogenicity related genes in Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), causal agent of this disease. In this study, a random mutagenesis by Tn5 transposon insertion into Xac's genome was performed. Eight thousand mutants were produced and 292 mutants were tested in planta. From those, five mutants expressed altered symptomatology, two showed complete absence of symptoms and three reduced hyperplasia. Gene sequences analysis where transposon was inserted, indicated mutations in purF, yapH and oar genes, in a region that codes for a hypothetical protein (XAC0196), and in a region between pobB (XAC0362) and glpR (XAC0361) genes. Analysis of bacteria growth curve in planta showed that, except for purF gene, all the others genes may be involved in Xac pathogenicity. Two of these genes, yapH and oar, are described as bacterial adhesion related genes, highlighting that interference in this process has direct influence in the Xac infection success. The importance of hypothetical protein identification is emphasized, since it presented attenuated symptomatology when mutated / Mestre

Submitted by Leonardo Freitas (leonardo.hfreitas@ufpe.br) on 2015-04-10T18:09:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Aline de Souza Carvalho.pdf: 3258262 bytes, checksum: 3f81c4413b8ed7201362818528439d61 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-10T18:09:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Aline de Souza Carvalho.pdf: 3258262 bytes, checksum: 3f81c4413b8ed7201362818528439d61 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / CNPq; FACEPE; CAPES / Apuleia leiocarpa (Voguel) J. F.Macbride, uma árvore com grande valor na indústria madeireira, é uma leguminosa (Fabaceae) encontrada na Caatinga. Lectinas são proteínas capazes de reconhecer e se ligar a carboidratos e glicoconjugados de acordo com sua especificidade e, por isso, têm diversas aplicações bioquímicas e biotecnológicas. Sementes de leguminosas são reconhecidas por serem boas fontes de lectinas. Este trabalho descreve a purificação, caracterização e a atividade antimicrobiana deApulSL (Apuleia leiocarpa seeds lectin). ApulSL foi extraída misturando a farinha das sementes em solução salina (NaCl 150 mM), gerando o extrato bruto (EB) que foi aplicado em cromatografia emcoluna de quitina eluida com ácido acético 1M, obtendo-se um único pico ativo. A ApulSL é termorresistente (100°C/2h) e íon dependente (Mn2+), tem caráter ácido e afinidade por N-acetilglicosamina, D(-)-arabinose e azocaseína. Trata-se de uma proteína com estrutura conformacional desordenada, com resíduos de tirosina no cerne hidrofóbicoe um peso molecular nativo de 55,8 kDa, mas que em condições desnaturantes e redutorasse desdobra emtrês a quatro oligopeptídeos, sendo portanto, uma proteína oligomérica. A análise emMALDI TOF/TOF detectou vários peptídeos, mas não houve homologia suficiente (< 30%) entre os peptídeos detectados e o banco de dados de proteínas para a elucidação da sequência primária. A ApulSLapresentouatividade inibitória e bactericida contra três variedades de Xanthomonas campestris, como também inibiu outras cepas gram-negativas e gram-positivas. Em conclusão, a ApulSL é uma lectina sem registros anteriores na literatura e que apresentou potencial antimicrobiano contra a espécie Xanthomonas campestris

Orientador: Celso Eduardo Benedetti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T23:36:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Domingues_MarianeNoronha_D.pdf: 24489370 bytes, checksum: 8029060db192a79e81b19764465f2ca7 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O cancro cítrico, causado pelo fitopatógeno Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), constitui uma doença que afeta a maioria das espécies do gênero Citrus ocorrendo praticamente em todos os continentes e se destaca como uma ameaça à citricultura brasileira. A bactéria utiliza a proteína efetora do tipo III PthA para modular a transcrição na planta hospedeira e promover o desenvolvimento dos sintomas da doença. PthA pertence a família AvrBs3/PthA e contém um domínio central de repetições de 34 aminoácidos que media interações proteína-proteína e proteína-DNA. Elucidar como a PthA ativa a transcrição é de grande importância para o esclarecimento do seu modo de ação e da patogenicidade de Xac. Este trabalho teve como principal objetivo confirmar in vivo e in vitro interações entre PthA de Xac e proteínas de laranja doce selecionadas num screening de duplo-híbrido em leveduras. Além da interação com a proteína ?-importina, conhecida por mediar a importação nuclear de AvrBs3, são descritas neste trabalho interações de PthA com proteínas de citros envolvidas no enovelamento e ubiquitinação do tipo K63. PthAs 2 e 3 interagem preferencialmente com uma ciclofilina (Cyp) de citros e com TDX, uma proteína que contém um domínio tetratricopeptídeo (TPR) e um domínio tiorredoxina (TRX). Constatou-se que PthAs 2 e 3, e não 1 e 4, interagem com um complexo de conjugação a ubiquitina formado por Ubc13 e uma enzima de conjugação a ubiquitina variante (Uev) requerido para o processo de ubiquitinação K63 e no reparo de DNA lesionado. Cyp, TDX e Uev interagem entre si e as proteínas Cyp e Uev estão localizadas no núcleo de células de planta, assim como as variantes de PthA de Xac. Além disso, Ubc13 e Uev complementam o fenótipo de reparo no DNA de cepas de leveduras mutantes, indicando que estão envolvidas em processos de ubiquitinação K63 e reparo no DNA. Como PthA2 afetou o crescimento de cepas de levedura na presença de um agente alquilante do DNA, sugere-se que PthA2 inibe ubiquitinação K63 requerida em vias de reparo aos danos no DNA, e não é alvo deste processo como acreditava-se inicialmente. A proteína Cyp de citros também foi capaz de complementar o fenótipo de leveduras mutantes na maquinaria transcricional, de tal forma que PthAs poderiam aumentar as taxas de transcrição através da modulação da atividade de um complexo proteico associado com controle da transcrição / Abstract: Citrus canker, caused by the pathogen Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), is a disease that affect most species of the genus Citrus occurring in virtually every continent, and stands as a threat to the Brazilian citrus industry. The bacterium uses a type III effector protein PthA to modulate transcription in the host plant and promote the development of disease symptoms. PthA proteins belong to the AvrBs3/PthA family and carry a domain comprising tandem repeats of 34 amino acids that mediates protein-protein and protein-DNA interactions. Elucidate how PthA activates transcription is of great importance for the elucidation of its mode of action and pathogenicity of Xac. This study aimed to confirm in vivo and in vitro interactions between Xac protein PthA and sweet orange proteins in a yeast two-hybrid screening. Here, in addition to the interaction with the ?- importin protein, known to mediate the nuclear import of AvrBs3, we described new interactions of PthAs with citrus proteins involved in folding and K63-linked ubiquitination. PthAs 2 and 3 preferentially interact with a citrus cyclophilin (Cyp) and with TDX, a tetratricopeptide domaincontaining thioredoxin. It was found that PthAs 2 and 3, but not 1 and 4, interact with the ubiquitinconjugating enzyme complex formed by Ubc13 and ubiquitin-conjugating enzyme variant (Uev), required for K63-linked ubiquitination and DNA repair. We show that Cyp, TDX and Uev interact with each other, and that Cyp and Uev localize to the nucleus of plant cells. Furthermore, the citrus Ubc13 and Uev proteins complement the DNA repair phenotype of the yeast mutants, strongly indicating that they are also involved in K63-linked ubiquitination and DNA repair. How PthA2 affected the growth of yeast cells in the presence of a DNA damage agent, suggests that PthA2 inhibits K63-linked ubiquitination required for DNA repair, and is not the target of this process as it was believed initially. The citrus protein Cyp was also able to complement the phenotype of yeast mutants in the transcriptional machinery, such that PthAs could increase the rates of transcription by modulating the activity of a protein complex associated with control of transcription / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular