Orientador: Alessandro de Mello Varani / Coorientador: Marcos Túlio Oliveira / Banca: Jesus Aparecido Ferro / Banca: Henrique Ferreira / Resumo: Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) é um fitopatógeno responsável por causar o Cancro Cítrico, relacionado a grandes perdas econômicas para a citricultura. Esta bactéria utiliza diversos mecanismos moleculares para infectar o hospedeiro, dentre eles, o Sistema de Secreção Tipo III (T3SS), considerado o principal fator de virulência expresso in planta pela Xac. Sabe-se que a ativação do T3SS é controlada por dois reguladores: HrpG e HrpX. Porém, os mecanismos que controlam estes reguladores e posteriormente a expressão do T3SS in planta ainda são pouco compreendidos. Estudos realizados por nosso grupo de pesquisa sugerem que a concentração de fosfato inorgânico (Pi) presente em meio de cultura ou em espaço apoplástico, onde a Xac causa a infecção em plantas, pode estar relacionado com a ativação do T3SS, sugerindo uma possível relação entre o Pi com os reguladores HrpG e HrpX. Em Xac, a detecção e transportorte do Pi é realizada pelo sistema de dois componentes (TCS) PhoR/PhoB, codificado pelo operon pho. Afim de averiguar a possível relação entre PhoR/PhoB com os reguladores do T3SS HrpG e HrpX, ensaios de modelagem molecular foram realizados, indicando que a proteína PhoR poderia interagir fisicamente com HrpG, fosforilando-a, e sugerindo um possível mecanismo de interação entre o TCS PhoR/PhoB e os genes reguladores do T3SS. Para testar a hipótese de interação física entre HrpG e PhoR, as proteínas recombinantes PhoR, PhoB e HrpG de Xac foram expressas em células de Escher... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) is a plant pathogen that causes citrus canker, responsible for significant economic losses in citriculture. This bacteria uses several molecular mechanisms to infect the host, such as the Type III Secretion System (T3SS), which is considered the main factor of virulence expressed in plant by Xac. Activation of T3SS is controlled by two regulators, HrpG and HrpX, however, the mechanisms that control these regulators and subsequently the expression of T3SS in planta are poorly understood. Previosuly, our research group identified that the concentration of inorganic phosphate (Pi) present in culture media or in the apoplastic space, where Xac causes infection in plants, may be related to the activation of T3SS, suggesting a possible relationship between Pi and the HrpG and HrpX regulators. In Xac, the detection and transport of Pi is performed by the two-component system (TCS) PhoR/PhoB, encoded by the operon pho. In order to investigate the possible relationship between PhoR/PhoB and the regulators of T3SS HrpG and HrpX, molecular modeling analyses were performed and indicated that the PhoR protein could physically interact with HrpG and phosphorylate it, suggesting a possible mechanism of interaction between TCS PhoR / PhoB and the T3SS regulatory genes with subsequent activation of T3SS. To test the hypothesis, recombinant forms of PhoR, PhoB and HrpG were expressed in Escherichia coli BL21 cells for the purpose of performing pull-down ass... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Henrique Ferreira / Resumo: O cancro cítrico é uma doença que afeta todas as variedades economicamente importantes de citros cultivadas ao redor do mundo. Atualmente representa uma ameaça aos maiores produtores mundiais de laranjas doce e de suco concentrado: o estado de São Paulo, Brasil, e estado da Flórida, EUA. O agente etiológico mais importante do cancro é a bactéria Gram-negativa Xanthomonas citri subsp. citri (X. citri) patotipo A, cujo genoma tem sido estudado e impulsionado descobertas e avanços na compreensão da doença e de seu agente causador. Contudo, mecanismos celulares essenciais são ainda pouco explorados neste micro-organismo. Desta forma, a compreensão de tais mecanismos e de seus efetores pode ser explorado no desenvolvimento de antimicrobianos e de novas estratégias para o combate ao cancro cítrico. Nosso grupo mostrou recentemente que ésteres de ácido gálico são potentes inibidores da divisão cromossômica e celular em X. citri. No presente trabalho, demos continuidade aos estudos com o objetivo de caracterizar processos essenciais à infecção ocasionada por X. citri, como a motilidade. As análises de bioinformática revelaram que a ORF XAC1934 estaria relacionada com motilidade em X. citri, uma vez que há uma grande identidade desta ORF com fleN, um gene regulador da formação flagelar em outros micro-organismos. Os resultados de motilidade e potencial infectivo in planta do mutante deletado desta ORF corroboraram a literatura, apresentando padrões semelhantes a estudos com mutantes d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Citrus canker is a disease that affects all economically important varieties of citrus cultivars worldwide. Currently, it represents a threat to the world’s biggest sweet orange juice producers: São Paulo state, Brazil, and Florida, USA. The canker etiologic agent is the Gram-negative bacterium Xanthomonas citri subsp. citri (X. citri). Its genome knowledge has driven to discoveries and advances in the study of the causal agent of this disease. However, this microorganism’s essential microbiological processes are still underexplored. Therefore, the understanding of these mechanisms and its effectors can be useful in antibiotics development in order to prevent citrus canker infections. Our group have shown recently that esters of galic acid are potent inhibitors of cell division in X. citri. In this work, we continue to study essential processes for citrus canker infection such as motility. Bioinformatics analyses reveled that ORF XAC1934 is related to motility in X. citri, because there is an identity to fleN, a microorganism flagellar formation regulator gene. The motility and infective potential in planta results of the mutant deleted for this ORF corroborate the literature, showing a similar pattern presented in Pseudomonas aeruginosa and Vibrio cholerae deleted mutants for fleN. Despite this, there was no subcellular localization of the studied ORF protein. It suggests that this ORF does not interfere in flagellar localization nor in adequate divisional septa formation as... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-31Bitstream added on 2014-06-13T19:37:01Z : No. of bitstreams: 1 reis_em_me_prud.pdf: 457113 bytes, checksum: 1e14d0c874fd9ea5c0cf226d8aa7f99c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Esta pesquisa tem como objetivo analisar a citricultura paulista a partir do aparecimento da doença de citros denomin ada cancro cítrico no município de Presidente Prudente – SP, no ano de 1957. O combate ao cancro cítrico mobilizou os poderes públicos e privados no Estado de São Paulo, desencadeando o maior embargo fitossanitário da história da agricultura brasileira. As conseqüências desse embargo refletem até os dias atuais um quadro de exclusão frente aos poucos produtores da Região de Presidente Prudente – SP. Além disso, provocou um intenso debate na região a respeito do papel desempenhado pelo FUNDECITRUS, em suas a ções de erradicação do cancro cítrico na região, promovendo assim de acordo com os produtores um tratamento desigual para os produtores da região em questão e os produtores da região nobre da citricultura ao Norte do Estado. / The objective of this research is to analyze the citriculture State São Paulo starting from the emergence of the disease of citric denominated citrus canker in the municipal district of Presidente Prudente - SP, in the year of 1957. The combat to the citrus canker mobilized the public and private powers in the State of São Paulo, unchaining the largest seizure phytosanitary of the history of the Brazilian agriculture. The consequences of that seizure contemplate little by little until the current days a picture and exclusion front producing Region of Presidente Prudente - SP. Besides, it provoked an intense debate in the area regarding the paper carried out by FUNDECITRUS, in their action s of erradication of the citrus canker in the area, promoting like this in agreement with the producers an unequal treatment for the producing of the area in subject and the producing of the noble area of the citriculture to the North of the State.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-05-06Bitstream added on 2014-06-13T19:56:03Z : No. of bitstreams: 1 soaresjunior_j_me_rcla.pdf: 752217 bytes, checksum: cb7bfc540971b4b49bd12620984c3d88 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O cancro cítrico é uma doença de importância mundial para o cultivo de laranjas e seu agente causador é a bactéria Xanthomonas axonopodis pv. citri. Embora todos os genes presentes nessa bactéria já tenham sido sequenciados, grande parte destas sequências não apresenta qualquer informação experimental sobre a contribuição para o sucesso da instalação do patógeno na planta hospedeira. Por outro lado, torna-se cada vez mais evidente que várias bactérias fitopatogênicas utilizam mecanismos de adaptação de origem genética que podem induzir efeitos fisiológicos na planta e adequar o ambiente de tal forma que permita a ocorrência da doença. Dentre estes mecanismos, está a possibilidade da bactéria produzir substâncias que se assemelhem a hormônios vegetais, como a auxina (AIA). O objetivo deste trabalho foi desenvolver metodologia genômica de busca para investigar se há genes que codificam para a produção de compostos iguais ou semelhantes a este hormônio em X. axonopodis pv. citri e se a sua participação no processo de patogênese é fundamental para o sucesso da infecção. Para tal, foi produzida coleção de mutantes genéticos funcionais aleatoriamente em X. axonopodis pv. citri, com posterior submissão desta mesma coleção a teste de produção de auxina utilizando o reagente Salkowski. Após produção e análise de grupo de mutantes dirigidos e coleção de aproximadamente 14200 mutantes aleatórios não foi detectada linhagem defectiva para a produção de AIA ou composto semelhante. Os resultados obtidos neste estudo, no entanto, mostram que a biossíntese do composto em X. axonopodis pv. citri é dependente do triptofano e que existe uma concentração ótima deste aminoácido a ser adicionado no meio de cultura para que a bactéria realize a biossíntese. Este é o primeiro estudo... / The citrus canker is a disease of global significance for the cultivation of oranges and its causative agent is the bacterium Xanthomonas axonopodis pv. citri. Although all the genes present in this bacterium have been sequenced, most of these sequences have no experimental information regarding the contribution to the successful installation of the pathogen on the host plant. On the other hand, it has been clearly demonstrated that several pathogenic bacteria use adaptative mechanisms that can induce physiological effects in plants and adjust the environment in a way that allows the occurrence of the disease. Among these mechanisms there is the possibility the bacteria produce substances that are similar to plant hormones such as auxin (IAA). The objective of this study was to develop a screening methodology to investigate the presence of genes that code for a compound identical or similar to auxins in X. axonopodis pv. citri as well as if it plays a role during the pathogenesis process. The main goal of this study was to produce a collection of random and directed genetic mutant strains of X. axonopodis pv. citri for the screening of auxin production by using the Salkowski reagent. After production and analysis of the group of mutants, including a collection of approximately 14,200 random mutant strains, defective production of IAA or similar compound was not detected. On the other hand, the results of this study show that such compound mimics effects of hormonal properties in X. axonopodis pv. citri and is dependent of tryptophan. In addition, it is shown that there is an optimum concentration of this amino acid to be added in the culture medium for the bacteria to carry out biosynthesis. To our knowledge, this is the first study to investigate systematically the production of auxin-like compounds in Xanthomonas axonopodis pv. citri.

Resumo: A caracterização da estrutura genética de populações clonais de patógenos bacterianos tem sido feita, entre outros métodos, por "Southern blot" empregando-se como sondas seqüências de inserção ou genes avr. O presente trabalho objetivou o desenvolvimento de oligonucleotídeos iniciadores e sondas de DNA baseadas em genes de patogenicidade para estudo da diversidade genética de isolados de Xanthomonas citri subsp. citri, Xanthomonas fuscans subsp. aurantifolii e Xanthomonas alfalfae subsp. citrumelonis. Observou-se a presença dos genes avrXacE1, avrXacE2 e lrp em todos isolados das subsp. citri e aurantifolii e a ausência do gene avrXacE2 no isolado da subsp. citrumelonis. Os perfis de restrição gerados por PCR-RFLP não revelaram polimorfismo nos genes amplificados e o uso de genes avr como sondas para "Southern blot" mostrou-se efetiva na diferenciação das espécies de Xanthomonas patogênicas a citros e na identificação de relativo polimorfismo entre isolados da mesma espécie. A diversidade haplotípica foi maior com o gene avrXacE1. Com exceção à sonda correspondente ao gene lrp, o número de haplótipos identificados (17) variou de acordo com a endonuclease utilizada em "Southern blot". Os isolados da subsp. citri apresentaram um maior número de cópias dos genes avr em comparação com isolados das subsp. aurantifolii e citrumelonis. O estado de São Paulo, que adota uma campanha de erradicação do cancro cítrico, apresentou a menor diversidade haplotípica, provavelmente em decorrência do curto período em que o patógeno interage com o hospedeiro. / Abstract: The genetic structure of clonal populations of bacterial pathogens has been characterized, among other methods, by Southern blot using insertion sequences or avr genes as probes. The present work aimed the development of DNA primers and probes based on pathogenicity genes to study the genetic diversity of Xanthomonas citri subsp. citri, Xanthomonas fuscans subsp. aurantifolii, and Xanthomonas alfalfae subsp. citrumelonis strains. The presence of avrXacE1, avrXacE2 and leucine rich protein (lrp) genes was observed in all citri and aurantifolii strains, as well as the absence of the avrXacE2 gene in citrumelonis isolate. The restriction profiles generated by PCR-RFLP did not show polymorphism in the amplified genes and the use of avr genes as Southern blot probes showed to be effective to differentiate Xanthomonas species pathogenic to citrus and to identify a relative polymorphism between strains belonging to the same species. The haplotype diversity was higher with the avrXacE1 gene. Excepting the probe corresponding to lrp gene, the number of haplotypes identified (17) varied according to the endonuclease used on Southern blot. The strains of the citri species presented a higher number of copies of the avr genes compared to aurantifolii and citrumelonis. The state of São Paulo, that adopts a campaign of eradication of the citrus canker, presented the smaller haplotype diversity, probably as result of the short period where the pathogen interacts with the host. / Orientadora: Maria Inês Tiraboschi Ferro / Coorientador: José Belasque Júnior / Banca: João Martins Pizauro Junior / Banca:Julio Cezar Franco de Oliveira / Mestre

Orientador: Antonio Nivaldo Hespanhol / Banca: Edgar Aparecido da Costa / Banca: Sonia Maria N. Marangoni Montes / Resumo: Esta pesquisa tem como objetivo analisar a citricultura paulista a partir do aparecimento da doença de citros denomin ada cancro cítrico no município de Presidente Prudente - SP, no ano de 1957. O combate ao cancro cítrico mobilizou os poderes públicos e privados no Estado de São Paulo, desencadeando o maior embargo fitossanitário da história da agricultura brasileira. As conseqüências desse embargo refletem até os dias atuais um quadro de exclusão frente aos poucos produtores da Região de Presidente Prudente - SP. Além disso, provocou um intenso debate na região a respeito do papel desempenhado pelo FUNDECITRUS, em suas a ções de erradicação do cancro cítrico na região, promovendo assim de acordo com os produtores um tratamento desigual para os produtores da região em questão e os produtores da região nobre da citricultura ao Norte do Estado. / Abstract: The objective of this research is to analyze the citriculture State São Paulo starting from the emergence of the disease of citric denominated citrus canker in the municipal district of Presidente Prudente - SP, in the year of 1957. The combat to the citrus canker mobilized the public and private powers in the State of São Paulo, unchaining the largest seizure phytosanitary of the history of the Brazilian agriculture. The consequences of that seizure contemplate little by little until the current days a picture and exclusion front producing Region of Presidente Prudente - SP. Besides, it provoked an intense debate in the area regarding the paper carried out by FUNDECITRUS, in their action s of erradication of the citrus canker in the area, promoting like this in agreement with the producers an unequal treatment for the producing of the area in subject and the producing of the noble area of the citriculture to the North of the State. / Mestre

Orientadores: Marcos Antonio Machado, Alexandre Morais do Amaral / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T03:30:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Homem_RafaelAugusto_M.pdf: 2248507 bytes, checksum: 707bfda4edde12e0c0ac988130077aa3 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O cancro cítrico é uma das mais sérias doenças de citros no mundo, sobretudo nos países onde a citricultura exerce papel influente na geração de empregos e divisas, como o Brasil, o maior produtor mundial de laranjas. Por esse motivo, o agente causal dessa doença, a bactéria Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), teve seu genoma completamente sequenciado. No genoma de Xac foram identificados dois agrupamentos gênicos (operons), xcsCDEFGHIJKLMN e xpsEFGHIJKLMND, que codificam para o sistema de secreção do tipo II (SSTII), mecanismo altamente envolvido no processo de patogenicidade em algumas bactérias causadoras de doenças em plantas. Até o momento, não há evidência da função desempenhada por cada conjunto gênico do SSTII de Xac e da relação desses com o processo de interação com a planta de citros. Neste estudo foram analisadas as funcionalidades dos dois agrupamentos gênicos do SSTII de Xac e sua atividade durante a interação com a planta hospedeira. As análises revelaram que a bactéria utiliza os dois sistemas de forma distinta e com relevância diferenciada durante a interação com a planta, com repercussão no crescimento da bactéria no tecido foliar, sobretudo o operon xps. Adicionalmente, foram identificadas contribuições distintas na atividade de degradação dos compostos amido, carboximetilcelulose e proteína. Exames de microscopia revelaram que a bactéria tem sua organização estrutural do biofilme influenciada pelos dois SSTII e análises de expressão gênica revelaram que o operon xps apresenta atividade extremamente maior em relação ao operon xcs. Estes resultados mostram pela primeira vez a influência independente de ambos SSTII na capacidade patogênica de Xac. / Abstract: The citrus canker is a major threat to the citrus industry worldwide, especially where the citriculture plays an important role in employments and revenues, like United States and Brazil, the largest orange producing country. Therefore, the causal agent of citrus canker, the Gram negative bacterium Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac), had its genome completely sequenced. Throughout the genome of Xac, two operons (xps EFGHIJKLMND and xcsCDEFGHIJKLMN) that encompass 11 and 12 different proteins, respectively, for the type two secretion systems (TIISS) were identified. These mechanisms are highly involved in pathogenicity and virulence in some bacteria that cause disease in plants. However, so far, there are no studies on the function of these operons in Xac and their relationship for the infection process in the citrus plant. In this study, the functions of the two operons that code for the TIISS in Xac and their activity during the interaction with the plant host were analyzed. The analyses revealed that the bacterium uses both TIISS, however in a different fashion during the contact with the leaf tissue and the xps operon is highly more active. In addition, the operons were found to be differentially effective on the degradation of starch, carboxymethilcellulose and proteins. Confocal microscopy investigations found that the bacterial organization (biofilm) is influenced by both TIISS and gene expression analyses showed a much higher activity of the xps operon as compared to the xcs group. These results provide the first clear evidence of the independent influence of both TIISS in the pathogenic process of Xac. / Mestrado / Genetica de Microorganismos / Mestre em Genética e Biologia Molecular

O cancro cítrico (Xanthomonas axonopodis pv. citri) é uma das mais importantes doenças dos citros e seu controle é feito com medidas de exclusão e erradicação do patógeno. As chances de detecção de plantas doentes diminuem em pomares com baixa incidência da doença. Considerando-se as dificuldades da diagnose visual do cancro cítrico e as vantagens de uma tecnologia que possa melhorar o processo de detecção desta doença no campo, procurou-se identificar características espectroscópicas únicas de uma planta com esta doença. Os objetivos do presente trabalho foram verificar as características espectroscópicas de folhas com cancro cítrico e correlacioná-las às alterações na eficiência fotossintética do tecido foliar doente e relacionar severidade da doença à eficiência fotossintética. Os perfis espectroscópicos e a eficiência fotossintética de plantas das espécies Citrus sinensis (?Hamlin?), Citrus reticulata (?Ponkan?) e Citrus limonia (?Cravo?) foram avaliados antes e após a inoculação com Xanthomonas axonopodis pv. citri. O modelo y = (1 - x) ?, onde y representa a assimilação líquida relativa de CO2 e x, a severidade da doença, foi ajustado aos dados por meio de regressão não-linear. O modelo monomolecular foi ajustado à relação entre assimilação líquida relativa de CO2 e razões espectroscópicas da região do vermelho, também por regressão não-linear. Concluiu-se que a doença afeta a eficiência fotossintética de ?Ponkan? e ?Hamlin?. Em ?Hamlin?, a doença não apenas reduz a área foliar, mas também reduz a fotossíntese do tecido verde remanescente. Há relação positiva entre as razões espectroscópicas da região do vermelho e a fotossíntese nas variedades testadas. / Citrus canker (Xanthomonas axonopodis pv. citri) is one of the most important diseases of citrus. Regulatory control is applied by means of exclusion and eradication of the pathogen. Possibilities of detection of infected trees decrease in orchards with low disease incidence. Considering the difficulties in visual diagnosis of citrus canker and the advantages of a technology that can improve the process of its detection in the field, single spectroscopic characteristics of a plant with this disease was searched. The objectives of the present work were to verify the spectroscopic characteristics of leaves with citrus canker and to correlate them to photosynthetic efficiency of these diseased leaves, and to relate disease severity to photosynthetic efficiency. Spectroscopic profiles and photosynthetic efficiency of Citrus sinensis (?Hamlin?), Citrus reticulata (?Ponkan?) and Citrus limonia (?Cravo?) were assessed before and after the inoculation with Xanthomonas axonopodis pv. citri. The model y = (1 - x) ?, in which y represents relative net assimilation of CO2 and x, disease severity, was fitted to the data by nonlinear regression. The monomolecular model was fitted to the relationships between relative net assimilation of CO2 and spectroscopic reasons of the red region, also by nonlinear regression. It was concluded that the disease affects the photosynthetic efficiency of ?Ponkan? and ?Hamlin?. In ?Hamlin?, the disease not only reduces the amount of leaf area, but also reduces the photosynthesis of the remaining green leaf tissue. There is a positive relationship between spectroscopic reasons of the red region and photosynthesis in ?Hamlin?, ?Ponkan?, and ?Cravo?.

Orientador: Henrique Ferreira / Resumo: A citricultura constitui uma importante atividade econômica no país, com o Brasil sendo o maior produtor de laranja doce no mundo. A produção é ameaçada pelo cancro cítrico asiático, uma doença severa que traz grande prejuízo e leva a necessidade do controle de seu agente causador, a bactéria Gram-negativa Xanthomonas citri subsp. citri (Xac). Atualmente não há nenhuma medida curativa para os pomares e a opção é o manejo integrado para evitar o avanço da doença. O único controle químico utilizado no presente é a aplicação de compostos a base de cobre, os quais trazem riscos de contaminação ao solo e de mananciais de água. Desta forma, estratégias alternativas de controle são essenciais para manter a citricultura brasileira competitiva no mercado. Compostos derivados do metabolismo vegetal tais como os flavonoides, ácido fenólicos e terpenóides são classes de substâncias com um grande potencial antimicrobiano. Nesse contexto, foi avaliada a ação anti-Xac de compostos híbridos de chalcona, ésteres do ácido vanílico e os monoterpenóides Timol e Carvacrol. No caso dos híbridos de pirazinamida-chalconas, não houve atividade antimicrobiana constatada contra Xac. Para os vanilatos, os compostos de cadeia lateral de 5 até 8 carbonos apresentaram ação anti-Xac, com atividade bacteriostática. Timol e Carvacrol mostraram atividade anti-Xac, uma vez que foram bactericidas a 200 μg.mL-1. Estes terpenóides foram avaliados quanto ao seu modo de ação e apresentaram atividade na permeabilizaç... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Citriculture has great importance to Brazil`s economy, with the country occupying the post of the largest sweet orange producer in the world. This production is threatened by Asiatic citrus canker, a crop disease which causes great losses in production and fruit quality. Because of these problems, there is a need to manage its causal agent – the Gram-negative bacteria Xanthomonas citri subps. citri (Xac). Nowadays there are no curative measure to surpass the disease in the orchards and the only option is the integrated management to avoid its spread. The only chemical control used in this strategy is based on copper, which is associated with soil and water springs contamination. For that reason, new alternative control strategies become essential to maintain the Brazilian citriculture competitive in the market. Compounds derived from plants metabolism such as flavonoids, phenolic acids and terpenoids are interesting substances with antimicrobial proprieties. In this context, we evaluated the anti-Xac action of hybrid chalcone compounds, vanillic acid esters and monoterpenoids (Thymol and Carvacrol). The pyrazinamide-chalcone hybrids showed no antimicrobial activity against Xac. In the case of the vanillic acid esters, synthetic compounds with a side chain structure composed of 5 to 8 carbons presented an bacteriostatic anti-Xac activity. Compounds Thymol and Carvacrol also showed anti-Xac action, once this compounds were bactericidal at 200 μg.mL-1. These terpenoids were eval... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-04-28Bitstream added on 2014-06-13T20:21:38Z : No. of bitstreams: 1 teixeira_ec_dr_araiq.pdf: 2441746 bytes, checksum: 6a8b98becf92d1426314457c9b30825c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve como principal objetivo realizar estudos funcionais na bactéria Xac, estudando o possível envolvimento dos genes copA, copB e cutC no mecanismo de resistência a cobre nesta bactéria. Estes estudos funcionais envolveram: análise da expressão dos genes durante o crescimento na presença de cobre por Northern e Western blots e por eletroforese bi-dimensional, produção e purificação das proteínas recombinantes e produção de anticorpos, inativação de um dos genes (copA) para avaliar a participação da proteína CopA no mecanismo de resistência a cobre e análise da interação das proteínas de resistência a cobre com outras proteínas de Xac através do ensaio de duplo híbrido de leveduras. Os resultados obtidos mostraram que a linhagem mutante infecta a planta, mas os sintomas são mais retardados na presença do metal, quando comparada à linhagem selvagem. O crescimento das células mutantes na ausência e presença de cobre in planta indicou maior sensibilidade ao cobre pelas células mutantes. Na tentativa de verificar se as proteínas CopA, CopB e CutC interagem com outras proteínas de Xac, um ensaio de duplo híbrido de leveduras foi realizado. Através deste ensaio, algumas proteínas foram identificadas, as quais necessitam de estudos de caracterização adicionais. / Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) is the causal agent of the citrus canker, a serious disease that affects the most commercial citrus cultivars causing serious economic impacts. Symptoms include canker lesions, leading to abscission of fruit and leaves and general tree decline. By sequencing the genome of this bacterium (ONSA Network, FAPESP, Brazil), a better knowledge of this microorganism and its molecular interactions with the host might be elucidated. For this, we analyzed the gene expression during growth in the presence of copper by Northern and Western blots, 2D-electrophoresis, production and purification of the CopA, CopB, and CutC recombinant proteins, inactivation of the copA gene to evaluate the participation of CopA protein in the copper resistance mechanism, and protein-protein interactions assays by the yeast two-hybrid assay. Results showed that the mutant strain infects the plant, but the lesions formation was retarded in the presence of copper. The mutant strain showed more sensitivity to copper than the wild type strain during growth in planta. In order to verify whether the CopA, CopB, and CutC proteins interact with other proteins of Xac, a yeast two-hybrid assay was performed. By this assay, some proteins were identified, which need further characterizations.