Introdução: A doença hepática gordurosa não alcoólica é uma das formas mais comuns de doença hepática crônica no mundo ocidental. A taurina é um aminoácido que apresenta atividade antioxidante e, por isso, pode ser uma terapia promissora nessa hepatopatia. Objetivo: Avaliar o efeito da taurina na esteatose hepática induzida por tioacetamida em Danio rerio. Métodos: Os animais foram divididos em 4 grupos (n=288): controle (Ctrl - 20 μL de solução salina), taurina (TAU – 1000 mg/kg), tiaoacetamida (TAA – 300 mg/kg) e com coadministração de taurinatioacetamida (TAU+TAA – 1000 mg/kg + 300 mg/kg). A TAA foi injetado por via intraperitoneal, 3 vezes por semana, durante 2 semanas. A expressão de mRNA, histologia, lipoperoxidação e atividade de enzimas antioxidantes foram avaliadas no tecido hepático e o conteúdo de triglicerídeos foi medido no soro. Resultados: A injeção de TAA induziu esteatose, a qual foi confirmada por métodos histológicos. A lipoperoxidação mostrou ser maior no grupo TAA (0.89 ± 0.06 nmol/mg de proteína) em comparação com o grupo TAU+TAA (0.50 ± 0.01 nmol/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da superóxido dismutase (SOD) no grupo TAU+TAA (5.95 ± 0.40 U SOD/mg de proteína) foi aumentada quando comparada com o grupo TAA (4.14 ± 0.18 U SOD/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da catalase e os triglicerídeos séricos não apresentaram alteração. A expressão de mRNA da Sirtuína 1 (0,5 vezes) e do receptor 2 de adiponectina (0,39 vezes) foram menores nos grupos TAA do que no grupo Ctrl (P<0.05). A expressão de mRNA do TNF-α foi 6,4 vezes maior no grupo TAA que no grupo Ctrl. A expressão de Sirtuina1 foi 2,6 vezes maior na TAU+TAA do que no grupo TAA. Conclusão: A taurina parece melhorar a esteatose hepática, reduzindo o estresse oxidativo e aumentando a expressão da Sirtuina 1. / Background: Nonalcoholic fatty liver disease is one of the most prevalent forms of chronic liver disease in the Western world. Taurine is a amino acid with antioxidants proprieties that may be a promising therapy for treating this disease. Aim: To evaluate the effect of taurine on hepatic steatosis induced by thioacetamide in Danio rerio. Methods: Animals were divided into 4 groups (n=288): control (20 μl of saline solution), taurine (1000 mg/kg), thioacetamide (300 mg/kg) and with coadministration of taurine-thioacetamide group (1000 mg/kg plus 300 mg/kg). Thioacetamide was injected intraperitoneally three times a week for 2 weeks. The mRNA expression, lipoperoxidation, antioxidant enzymatic activity and histological analyses were evaluated in the liver and the triglyceride content was assessed in the serum. Results: Thioacetamide injection induced steatosis, as indicated by histological analyses. The lipoperoxidation showed significant lipid damage in the thioacetamide group (0.89 ± 0.06 nmol/mg of protein) compared to the taurinethioacetamide group (0.50 ± 0.01 nmol/mg of protein) (P < 0.001). Superoxide dismutase (SOD) activity in the taurine-thioacetamide group (5.95 ± 0.40 SOD/mg of protein) was significantly increased compared to the thioacetamide group (4.14 ± 0.18 U SOD/mg of protein) (P < 0.001). The mRNA expression of SIRT1 (0.5-fold) and Adiponectin receptor 2 (0.39-fold) were lower in the thioacetamide group than the control (P < 0.05). TNF-α mRNA expression was 6.4-fold higher in the thioacetamide group than control (P < 0.05). SIRT1 mRNA expression was 2.6-fold higher in the taurine-thioacetamide group than in the thioacetamide group. Conclusion: Taurine seems to improve hepatic steatosis by reducing oxidative stress and increasing SIRT1 expression.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T20:54:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 330549.pdf: 2250244 bytes, checksum: 52aafb6ef597f19f359fe112a89bcdc1 (MD5) Previous issue date: 2014 / Glifosato é um dos herbicidas mais usados no Brasil, sendo altamente solúvel em água e quando aplicado em ambiente terrestre e aéreo pode ocorrer a sua infiltração no solo e a percolação para os corpos d'água, atingindo diferentes organismos aquáticos não-alvos, como invertebrados e vertebrados. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do glifosato, na concentração de 65 µg/L, sobre a organização estrutural e ultraestrutural, bem como sobre os parâmetros bioquímicos de toxicidade nos ovários do peixe Danio rerio. Esta concentração foi estabelecida pelo CONAMA como a máxima permitida para os rios do Brasil. As células germinativas foram caracterizadas em quatro fases: ovogônia, ovócito pré-vitelogênico I, ovócito pré-vitelogênico II e ovócito vitelogênico, baseado em critérios morfológicos já estabelecidos na literatura. Verificou-se um aumento significativo no diâmetro dos ovócitos pré-vitelogênicos I e nos ovócitos vitelogênicos, assim como um aumento significativo no índice gonadossomático (IGS) em ovários de peixes expostos ao glifosato por um período de 15 dias (exposição subcrônica). Na análise estrutural das células germinativas não foram identificadas alterações morfológicas, porém na análise ultraestrutural, observou-se no citoplasma dos ovócitos formações membranosas concêntricas tipo myelin-like, associadas aos grânulos de vitelo periféricos, além de alterações nas cisterna dos corpos de Golgi. Houve também redução do número de mitocôndrias e cristas mitocondriais nas células foliculares. Constatou-se maior expressão de SF-1, em ovários expostos ao glifosato. Identificou-se também um aumento significativo no número de células imunomarcadas com o anticorpo anti-Bak, porém um número significativamente menor de células imunomarcadas com o anticorpo anti-Bcl2. Na exposição dos peixes ao glifosato por um período de 96 h (exposição aguda), identificou-se redução nos níveis de tióis não proteicos (NPSH) e um aumento significativo nos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), caracterizando estresse oxidativo. Na exposição por um período de 360 h (15 dias), não houve a caracterização de estresse oxidativo. Mesmo na concentração de glifosato regulamentada para os rios do Brasil, efeitos subletais foram identificados nos ovários, sendo reconhecidos usando ferramentas bioquímicas e ultraestruturais. Desta forma, estas análises devem ser realizadas em testes toxicológicos na avaliação de parâmetros reprodutivos. Os efeitos adversos do glifosato sobre os ovócitos e as células foliculares demonstradas aqui representam um importante risco para a reprodução de peixes.<br> / Abstract: Glyphosate is one of the most commonly used herbicides in Brazil, being highly soluble in water and when applied in aerial and terrestrial environment can occur its infiltration into the soil and the percolation to the bodies of water, reaching different non-target aquatic organisms, such as invertebrates and vertebrates. The main goal of this study was to evaluate the effects of glyphosate, at a concentration of 65 µg/L, on structural and ultra-structural organization, as well as on the biochemical parameters of toxicity on the ovaries of the fish Danio rerio. This concentration was established by CONAMA as the maximum allowable for the Brazilian rivers. The germ cells were characterized in four stages: oogonia, previtellogenic I oocyte, previtellogenic II oocyte and vitellogenic oocyte, based on morphological criteria previously established on the literature. A significant increase on the diameter of the previtellogenic I and vitellogenic oocytes was verified, as well as a significant increase in the gonadosomatic index (GSI) in the ovaries of the fish exposed to the glyphosate for a 15 days period (sub-chronic exposure). In the structural analysis of the germ cells, morphologic changes were not identified. However, in ultrastructural analysis, concentric membranous formation of myelin-like kind were observed on the cytoplasm of the oocytes, associated to the peripheral yolk granules, and also morphological change Golgi cisterns. In follicular cells reduction on the number of mitochondria and mitochondrial cristae observed. In this analysis, it was also observed with. It was observed greater SF-1 expression in ovaries exposed to glyphosate. It was also identified a significant increase in the number of immunostained cells with the anti-Bak antibody, but a significantly lower number of immunostained cells with antibody anti-Bcl2. On exposure of fish to glyphosate for 96 hours (acute exposure), it was identified a reduction in levels of non-protein sulfhydryl (NPSH) and a significant increase in levels of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), featuring oxidative stress. On exposure of a period of 360 hours (15 days), there was no characterization of oxidative stress. Even with the glyphosate concentration regulated to Brazil's rivers, sublethal effects were identified on the ovaries, being recognized using biochemistry and ultrastructural tools. In this way, these analyses should be carried out in toxicological evaluation of reproductive parameters. The adverse effects of glyphosate on the oocytes and follicular cells shown here represent a major risk for the reproduction of fish.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2017 / Made available in DSpace on 2017-09-19T04:09:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347992.pdf: 2382912 bytes, checksum: 7d4dc8be152c8579ca29709f01adf318 (MD5) Previous issue date: 2017 / O glifosato e os herbicidas à base de glifosato são considerados praguicidas de amplo espectro e pós-emergente, e são os mais utilizados na agricultura mundial para matar uma variedade de ervas daninhas terrestres e aquáticas. Assim, pelo uso excessivo deste agroquímico nas culturas, especialmente quando aplicado por pulverização, pode ocorrer a sua infiltração no solo e a lixiviação para os corpos de água, atingindo diferentes organismos aquáticos não-alvos. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi investigar a toxicidade celular do herbicida à base de glifosato, Roundup® WG (0,065; 0,65 e 6,5 mg/L), após 15 dias, sobre a morfologia, ultraestrutura e proteínas envolvidas na fusão e fissão mitocondrial no ovário do peixe-zebra, Danio rerio. Primeiramente, foi obtida a concentração letal média (CL50) de 42,61 mg/L em 96 horas para D. rerio após exposição ao Roundup® WG. Após exposição de D. rerio ao Roundup® WG por 15 dias, as células germinativas foram caracterizadas em três fases: ovócitos pré-vitelogênicos I (PreI), ovócitos pré-vitelogênicos II (Pre II) e ovócitos vitelogênicos (Vit), baseado em critérios morfológicos já estabelecidos na literatura. Uma diminuição no diâmetro dos ovócitos PreI foi observada nas três concentrações do Roundup® WG e uma diminuição do diâmetro dos ovócitos PreII nas duas maiores concentrações avaliadas. Em relação ao conteúdo da proteína vitelina, um aumento foi observado nos ovários das fêmeas expostas, sugerindo uma relação dose-dependente do Roundup® WG. Na análise ultraestrutural, foram observadas zonas de vacuolização nas células foliculares e um aumento do espaço perivitelínico, com presença de macro e micro vesículas, bem como compartimentos mitocondriais comprometidos nos ovários de fêmeas expostas. Também, foi observado uma redução do número de mitocôndrias e um aumento de mitocôndrias alteradas com uma severidade alta nos ovócitos, bem como uma diminuição no conteúdo de Drp1, Mfn1 e Mfn2 envolvidas na fissão e fusão mitocondrial, que pode indicar à mitocôndria como um dos alvos do Roundup® WG. Estes resultados, sugerem que Roundup® WG poderia ser considerado como um possível disruptor endócrino nos ovários de D. rerio, afetando à maturação ovariana. No entanto, devem ser realizados mais testes toxicológicos avaliando outros parâmetros reprodutivos e seu impacto nos peixes. Além disso, a menor concentração de glifosato avaliada neste estudo, que é a concentração permitida pelo CONAMA (0,065 mg/L), provocou diminuição no diâmetro dos ovócitos PreI, aumento do conteúdo de vitelina, bem como alteração nas mitocôndrias e diminuição de Drp1 e Mfn2, isso poderia indicar que o limite máximo permissível de glifosato no Brasil precisa ser reavaliado. Assim, o presente estudo demonstrou diferentes alterações no ovário de D. rerio expostos às concentrações do Roundup® WG, indicando a toxicidade reprodutiva deste herbicida. / Abstract: Glyphosate and glyphosate-based herbicides are considered broad-spectrum and post-emergent pesticides, and are the most widely used in global agriculture to kill a variety of terrestrial and aquatic weeds. Thus, due to the excessive use of this agrochemical in the crops, especially when applied by spraying, infiltration into the soil and leaching into the water bodies can occur, reaching different non-target aquatic organisms. Therefore, the objective of this study was to investigate the cellular toxicity of glyphosate-based herbicide, Roundup® WG (0.065, 0.65 and 6.5 mg/L) on morphology, ultrastructure and proteins involved in fusion and fission mitochondrial in the ovaries of zebrafish, Danio rerio. First, the determination of mean lethal concentration (LC50) was 42.61 mg/L in 96 hours for D. rerio after exposure to Roundup® WG. After exposure of D. rerio to concentrations of Roundup® WG for 15 days, germ cells of ovaries were characterized in three phases: pre-vitellogenic oocytes I (PreI), pre-vitellogenic oocytes II (PreII) and vitellogenic oocytes (Vit), based on morphological criteria already established in the literature. A diameter decrease in the PreI was observed in the three concentrations of Roundup® WG as well as a diameter decrease of the PreII oocytes when two highest concentrations were evaluated. In relation to the content of the vitellin protein, an increase in its content was observed in the ovaries of exposed females, depending on the concentration of the herbicide. In the ultrastructural analysis, zones of vacuolization in follicular cells and an increase of perivitelinic space with presence of macro and micro vesicles were observed, as well as compromised mitochondria compartments in the ovaries of exposed females. In addition, reductions in the number of mitochondria and an increase of altered mitochondria with high severity in oocytes were observed, as well as a decrease in the content of Drp1, Mfn1 and Mfn2 involved in mitochondrial fission and fusion. These may indicate the mitochondria as a Roundup® WG target. These results suggest that Roundup® WG could be considered as a possible endocrine disrupter in the ovaries of D. rerio, affecting ovarian maturation. However, further toxicological tests should be performed to evaluate other reproductive parameters and their impact on fish. In addition, the lowest concentration of glyphosate evaluated in this study, which is the concentration allowed by CONAMA (0.065 mg/L), caused a diameter decrease of the PreI, an increase in vitellin content, as well as a change in the mitochondria and a decrease in Drp1 and Mfn2. In this respect, the maximum permissible limit of glyphosate in Brazil needs to be reevaluated. Thus, the present study demonstrated different alterations in the ovaries of D. rerio exposed to concentrations of Roundup® WG, indicating reproductive toxicity of this herbicide.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T00:52:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 213393.pdf: 956920 bytes, checksum: a810d760f276b24af6058e83ddf60604 (MD5) / O receptor pregnano X (PXR) é um receptor nuclear envolvido na regulação transcricional de enzimas envolvidas no metabolismo de fármacos e também de proteínas transportadoras. Em mamíferos, vários xenobióticos induzem a expressão dos genes do citocromo P4503A (CYP3A) e de resistência a multidrogas 1 (MDR1) através da via de sinalização do receptor PXR. Pouca atenção tem sido dada aos estudos sobre a identificação da função biológica dos homólogos do PXR em espécies de não-mamíferos. O peixe-zebra tem se tornado amplamente utilizado e aceito como espécie modelo em estudos toxicológicos e farmacológicos no entendimento dos mecanismos de doenças humanas e na identificação de vias de sinalização conservadas. O objetivo desse estudo foi avaliar a expressão in vivo dos genes PXR, CYP3A e MDR1 no fígado de peixes-zebra tratados com o esteróide sintético pregnenolona 16a-carboninitrilo (PCN), o antimicótico sintético clotrimazol (CTZ) e o composto fármaco nifedipina (NIF). Peixes (n=15 por grupo) foram expostos à PCN, CTZ e NIF (20 mg.Kg-1) por 48 horas. Os fígados foram retirados e utilizados para a extração do RNA total (n=5 por grupo). A partir do cDNA obtido foi realizada a reação de PCR, utilizando diferentes iniciadores para a amplificação de PXR, CYP3A, MDR1 e ß-ACTINA. Fígados de peixes tratados com PCN mostraram uma indução de 1,9 vezes na indução do PXR seguida de 1,8 vezes na indução do CYP3A e de 1,6 vezes na indução do MDR1 nos níveis de mRNA. CTZ e NIF não afetaram estatisticamente a expressão dos genes PXR, CYP3A e MDR1. O padrão similar na expressão do mRNA dos genes PXR, CYP3A e MDR1 encontrado em peixes tratados com diferentes indutores de PXR sugere que a associação intrínseca entre esses três genes é conservada no peixe-zebra.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-10-19T13:18:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337735.pdf: 10736659 bytes, checksum: 42e8e2ea8991b610be6a882697f3ee00 (MD5) Previous issue date: 2015 / A formação de vasos sanguíneos compreende processos fundamentaisna embriogênese, ocorrendo inicialmente por vasculogênese, seguidapor angiogênese. Falhas no equilíbrio fisiológico entre indutores pró- eantiangiogênicos podem contribuir com processos fisiopatológicos,referidos como doenças angiogênicas. Plantas medicinais como o Cissusverticillata L., sobre a qual foram reportadas ações antirreumática eantiinflamatória; hipoglicemiante; vasoconstrictora e antimitótica, sãoutilizadas pela medicina popular, no Brasil. Foram estudados os efeitosdos extratos foliares aquoso (EACv) e hidroalcóolico (EHCv) dessaespécie sobre a formação de vasos, por meio de ensaios in vivo(embriões de Gallus domesticus e Danio rerio; camundongos adultos daespécie Mus musculus). E in vitro (com células endoteliais da veiaumbilical humana-HUVEC). Os resultados mostram a presença deflavonoides na composição dos extratos, e ação antioxidante (29-59%).In vivo os extratos, isoladamente ou associados a FGFb ou VEGF-A,retardaram o crescimento dos embriões de D. rerio e G. domesticus, enestas espécies inibiram a vasculogênese e a angiogênese nasmembranas vitelínica e corioalantóica. Os extratos isolados não inibirama angiogênese em camundongos adultos, mas nos três modelos aassociação de extratos+FGFb ou VEGF-A foi capaz de reverter o efeitoangiogênico destes fatores. Em células HUVEC os extratos de C.verticillata reduziram a viabilidade celular e o brotamento vascularestimulado por FGFb e VEGF-A. No entanto, a não efetividade sobremecanismos de proliferação, migração, tubulogênese e modulação deVEGFR2, apontam a necessidade de estudos adicionais paradeterminação dos alvos moleculares do EACv e EHCv. É possívelconcluir que estes inibem vasculogênese e angiogênese embrionária, eque tais ações estariam relacionadas à inibição da viabilidade e aobloqueio do brotamento angiogênico sobre células endoteliais, bemcomo à capacidade dos EACv e EHCv de reverterem a potente atividadede fatores de crescimento angiogênicos, verificados no presente estudo.<br> / Abstract : The formation of blood vessels includes fundamental processes inembryogenesis, taking place through the vasculogenesis, followed ofangiogenesis. Failures in the physiological balance between pro- andantiangiogenic inductors can contribute to pathophysiological processesreferred as angiogenic diseases. Medicinal plants such as Cissusverticillata L. have been reported are used in folk medicine in Brazil asantirheumatic, anti-inflammatory hypoglycemic, vasoconstrictor andantimitotic actions. The effects of aqueous (AECv) and hydroalcoholic(HECv) leaf extracts of C. verticillata on the blood vessels formationwere studied by assaying in vivo (of Gallus domesticus and Danio rerioembryos as well in adults mice of Mus musculus). In vitro, assays withendothelial cells from human umbilical vein (HUVEC) experimentalmodels. The findings show the presence of flavonoids in both extractscomposition and also an antioxidant action (29-59%). Whenadministered in vivo the extracts, alone or associated with FGF orVEGF-A, have slowed the embryonic growth of D. rerio and G.domesticus, and (in this last species) inhibited vasculogenesis andangiogenesis in the yolk and chorioallantoic membranes. The extractsalone did not inhibited advanced angiogenesis, in M. musculus adults,however, in the three animal models the association of extracts + FGFbor VEGF-A was capable to reverse the angiogenic effect of theseexogenous growth factors. There was verified a decrease in cell viabilityand the vascular sprouting as stimulated by FGFb and VEGF-A, inHUVEC. However, the non-effectiveness of important angiogenicmechanisms, such as proliferation and cell migration; tubulogenesis andVEGFR2 receptor modulation, indicate that more studies in order todetermine the molecular targets of the extracts remains to be performed.In conclusion, the findings show that the extracts inhibit embryonicvasculogenesis and angiogenesis, and also that such actions are possiblyrelated with decrease of viability and the blockade of angiogenicsprouting on the endothelial cells, as well the capacity of both extracts toreverse the potent activity of angiogenic growth factors, as observed inthe present study.

The proteome is in constant flux and therefore it is important to understand the contribution of protein dynamics to the function of an organism. The zebrafish (Danio rerio) is a recognised model organism that is widely used to investigate physiological processes. The focus of this thesis was to develop a method to calculate the rates of synthesis of heart proteins of zebrafish on a proteome-wide scale. The initial stage of the project involved the optimisation of a method to characterise the protein complement of individual zebrafish hearts. It was concluded that for the rapid screening of proteins 1-dimensional gel electrophoresis in conjunction with high resolution liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) was the most appropriate experimental approach. In order to determine the rates of protein synthesis, zebrafish were administered with a stable isotope-labelled amino acid ([2H7] L-leucine) via the diet and its incorporation into heart proteins was monitored over an 8 week time course. Using this method it was possible to calculate the synthesis rates of over 600 proteins. The experimental strategy was then applied to define the changes in protein synthesis rates in hearts from zebrafish that were subjected to chronic unpredictable stress (CUS). A variety of stressors on zebrafish comprising air emersion, net chasing or net confinement were employed to model CUS. These approaches were validated by a parallel behavioural analysis. The results revealed that glycolytic and gluconeogenic enzymes as well as proteins involved in hypoxia had significantly altered synthesis rates in response to induced stress. This thesis describes for the first time a proteomics approach to determine the rates of synthesis of individual proteins in the zebrafish and its application to investigate the effects of stress conditions on heart proteome dynamics.

Introdução: A doença hepática gordurosa não alcoólica é uma das formas mais comuns de doença hepática crônica no mundo ocidental. A taurina é um aminoácido que apresenta atividade antioxidante e, por isso, pode ser uma terapia promissora nessa hepatopatia. Objetivo: Avaliar o efeito da taurina na esteatose hepática induzida por tioacetamida em Danio rerio. Métodos: Os animais foram divididos em 4 grupos (n=288): controle (Ctrl - 20 μL de solução salina), taurina (TAU – 1000 mg/kg), tiaoacetamida (TAA – 300 mg/kg) e com coadministração de taurinatioacetamida (TAU+TAA – 1000 mg/kg + 300 mg/kg). A TAA foi injetado por via intraperitoneal, 3 vezes por semana, durante 2 semanas. A expressão de mRNA, histologia, lipoperoxidação e atividade de enzimas antioxidantes foram avaliadas no tecido hepático e o conteúdo de triglicerídeos foi medido no soro. Resultados: A injeção de TAA induziu esteatose, a qual foi confirmada por métodos histológicos. A lipoperoxidação mostrou ser maior no grupo TAA (0.89 ± 0.06 nmol/mg de proteína) em comparação com o grupo TAU+TAA (0.50 ± 0.01 nmol/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da superóxido dismutase (SOD) no grupo TAU+TAA (5.95 ± 0.40 U SOD/mg de proteína) foi aumentada quando comparada com o grupo TAA (4.14 ± 0.18 U SOD/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da catalase e os triglicerídeos séricos não apresentaram alteração. A expressão de mRNA da Sirtuína 1 (0,5 vezes) e do receptor 2 de adiponectina (0,39 vezes) foram menores nos grupos TAA do que no grupo Ctrl (P<0.05). A expressão de mRNA do TNF-α foi 6,4 vezes maior no grupo TAA que no grupo Ctrl. A expressão de Sirtuina1 foi 2,6 vezes maior na TAU+TAA do que no grupo TAA. Conclusão: A taurina parece melhorar a esteatose hepática, reduzindo o estresse oxidativo e aumentando a expressão da Sirtuina 1. / Background: Nonalcoholic fatty liver disease is one of the most prevalent forms of chronic liver disease in the Western world. Taurine is a amino acid with antioxidants proprieties that may be a promising therapy for treating this disease. Aim: To evaluate the effect of taurine on hepatic steatosis induced by thioacetamide in Danio rerio. Methods: Animals were divided into 4 groups (n=288): control (20 μl of saline solution), taurine (1000 mg/kg), thioacetamide (300 mg/kg) and with coadministration of taurine-thioacetamide group (1000 mg/kg plus 300 mg/kg). Thioacetamide was injected intraperitoneally three times a week for 2 weeks. The mRNA expression, lipoperoxidation, antioxidant enzymatic activity and histological analyses were evaluated in the liver and the triglyceride content was assessed in the serum. Results: Thioacetamide injection induced steatosis, as indicated by histological analyses. The lipoperoxidation showed significant lipid damage in the thioacetamide group (0.89 ± 0.06 nmol/mg of protein) compared to the taurinethioacetamide group (0.50 ± 0.01 nmol/mg of protein) (P < 0.001). Superoxide dismutase (SOD) activity in the taurine-thioacetamide group (5.95 ± 0.40 SOD/mg of protein) was significantly increased compared to the thioacetamide group (4.14 ± 0.18 U SOD/mg of protein) (P < 0.001). The mRNA expression of SIRT1 (0.5-fold) and Adiponectin receptor 2 (0.39-fold) were lower in the thioacetamide group than the control (P < 0.05). TNF-α mRNA expression was 6.4-fold higher in the thioacetamide group than control (P < 0.05). SIRT1 mRNA expression was 2.6-fold higher in the taurine-thioacetamide group than in the thioacetamide group. Conclusion: Taurine seems to improve hepatic steatosis by reducing oxidative stress and increasing SIRT1 expression.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-12-18T13:43:03Z No. of bitstreams: 1 2014_FabieniTiemyMenezesOkiyama.pdf: 1068633 bytes, checksum: 4392f55c77685b9ac6e3975585b0b5ae (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2014-12-29T19:23:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_FabieniTiemyMenezesOkiyama.pdf: 1068633 bytes, checksum: 4392f55c77685b9ac6e3975585b0b5ae (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-29T19:23:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_FabieniTiemyMenezesOkiyama.pdf: 1068633 bytes, checksum: 4392f55c77685b9ac6e3975585b0b5ae (MD5) / Problemas relativos a lesões e insuficiência cardíaca são preocupantes, bem como as modificações morfológicas inerentes a esta afecção. No anseio da retratação de dados inovadores e aplicáveis a anatomia cardíaca foi a motivação da escolha do zebrafish (Danio rerio) como modelo de pesquisa. Acrescido ainda das suas diversas qualidades morfofuncionais e principalmente a sua capacidade de regeneração cardíaca. Utilizou-se 10 peixes, entre machos e fêmeas para a preparação histológica do seu tecido cardíaco. Quantificou-se a densidade de cardiomiócitos, tecido conjuntivo e fibras de colágeno tipo I e tipo III, coradas pela coloração Picrosirius Red. Todos os parâmetros comparados entre átrio (AT) e ventrículo (VT) houve diferença estatística, provavelmente pela diferença de tamanho entre suas camadas. O átrio de machos e fêmeas juntos (GT) apresentou maior densidade de núcleo de cardiomiócitos no átrio (6,93% ± 0,51) que no ventrículo (3,84% ± 0,20), e maior densidade de miocárdio no ventrículo (68,77% ± 1,25) que o no átrio (60,30% ± 2,44). O ventrículo de GT (8,02% ± 0,61) apresentou menor densidade de tecido conjuntivo que o átrio (24,50% ± 1,35), sendo que machos (átrio:22,80% ± 1,74 e ventrículo:13,47% ± 1,08) apresentaram maior densidade no ventrículo e menor no átrio que fêmeas (átrio: 27,96% ± 1,97 e ventrículo:4,63% ± 0,29). Ainda no grupo GT, a densidade de fibras tipo I no átrio foi menor comparado às fibras do tipo III (4,28% ± 1,20 e 5,68% ± 1,90, respectivamente), e maior no ventrículo (3,22% ± 0,89 e 0,14% ± 0,05, respectivamente) assim como em outras espécies. Possivelmente essa diferença está ligada a fatores hormonais e comportamentais tanto no tecido conjuntivo quanto no colágeno. Com base nos resultados encontrados abre-se o leque dentro destes parâmetros para estudos futuros relacionados à espécie estudada. ___________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Problems relating to injuries and heart failure are troubling as well as morphological changes inherent in this condition. Longing in the retraction of innovative and applicable data cardiac anatomy was the motivation of the choice of the zebrafish (Danio rerio) as a research model. Plus its various morphological and functional qualities, and especially its ability to cardiac regeneration. Ten fish were used between males and females for histological preparation of their cardiac tissue. Quantified the density of cardiomyocytes, connective tissue and collagen type I and type III fibers, stained by Picrosirius red. All parameters comparing atrium (AT) and ventricular (VT) was no statistical difference, probably due to the size difference between its layers. The atrium of males and females together (GT) showed higher core density lobby (6.93% ± 0.51) than in the ventricle (3.84 ± 0.20%), and higher density of the ventricular myocardium (68, 77% ± 1.25) than in the atrium (60.30% ± 2.44). The GT ventricle (8.02 ± 0.61%) showed lower density of connective tissue that the atrium (24.50 ± 1.35%) and males (atrium: 22.80% ± 1.74 and ventricle: 13.47% ± 1.08) showed higher density in the ventricle and lower in females (atrium: 27.96% ± 1.97 and ventricle: 4.63% ± 0.29). Also in GT, the density of fibers type I in the atrium was lower compared to the fibers of type III (4.28% ± 1.20 and 5.68 ± 1.90%) and higher in the ventricle (3, 22% ± 0.89 and 0.14 ± 0.05%) as well as other species. Possibly this difference is linked to hormonal and behavioral factors in both the connective tissue and the collagen. Based on these results opens up the range within these parameters for future studies related to the species studied.

Introdução: A doença hepática gordurosa não alcoólica é uma das formas mais comuns de doença hepática crônica no mundo ocidental. A taurina é um aminoácido que apresenta atividade antioxidante e, por isso, pode ser uma terapia promissora nessa hepatopatia. Objetivo: Avaliar o efeito da taurina na esteatose hepática induzida por tioacetamida em Danio rerio. Métodos: Os animais foram divididos em 4 grupos (n=288): controle (Ctrl - 20 μL de solução salina), taurina (TAU – 1000 mg/kg), tiaoacetamida (TAA – 300 mg/kg) e com coadministração de taurinatioacetamida (TAU+TAA – 1000 mg/kg + 300 mg/kg). A TAA foi injetado por via intraperitoneal, 3 vezes por semana, durante 2 semanas. A expressão de mRNA, histologia, lipoperoxidação e atividade de enzimas antioxidantes foram avaliadas no tecido hepático e o conteúdo de triglicerídeos foi medido no soro. Resultados: A injeção de TAA induziu esteatose, a qual foi confirmada por métodos histológicos. A lipoperoxidação mostrou ser maior no grupo TAA (0.89 ± 0.06 nmol/mg de proteína) em comparação com o grupo TAU+TAA (0.50 ± 0.01 nmol/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da superóxido dismutase (SOD) no grupo TAU+TAA (5.95 ± 0.40 U SOD/mg de proteína) foi aumentada quando comparada com o grupo TAA (4.14 ± 0.18 U SOD/mg de proteína) (P<0.001). A atividade da catalase e os triglicerídeos séricos não apresentaram alteração. A expressão de mRNA da Sirtuína 1 (0,5 vezes) e do receptor 2 de adiponectina (0,39 vezes) foram menores nos grupos TAA do que no grupo Ctrl (P<0.05). A expressão de mRNA do TNF-α foi 6,4 vezes maior no grupo TAA que no grupo Ctrl. A expressão de Sirtuina1 foi 2,6 vezes maior na TAU+TAA do que no grupo TAA. Conclusão: A taurina parece melhorar a esteatose hepática, reduzindo o estresse oxidativo e aumentando a expressão da Sirtuina 1. / Background: Nonalcoholic fatty liver disease is one of the most prevalent forms of chronic liver disease in the Western world. Taurine is a amino acid with antioxidants proprieties that may be a promising therapy for treating this disease. Aim: To evaluate the effect of taurine on hepatic steatosis induced by thioacetamide in Danio rerio. Methods: Animals were divided into 4 groups (n=288): control (20 μl of saline solution), taurine (1000 mg/kg), thioacetamide (300 mg/kg) and with coadministration of taurine-thioacetamide group (1000 mg/kg plus 300 mg/kg). Thioacetamide was injected intraperitoneally three times a week for 2 weeks. The mRNA expression, lipoperoxidation, antioxidant enzymatic activity and histological analyses were evaluated in the liver and the triglyceride content was assessed in the serum. Results: Thioacetamide injection induced steatosis, as indicated by histological analyses. The lipoperoxidation showed significant lipid damage in the thioacetamide group (0.89 ± 0.06 nmol/mg of protein) compared to the taurinethioacetamide group (0.50 ± 0.01 nmol/mg of protein) (P < 0.001). Superoxide dismutase (SOD) activity in the taurine-thioacetamide group (5.95 ± 0.40 SOD/mg of protein) was significantly increased compared to the thioacetamide group (4.14 ± 0.18 U SOD/mg of protein) (P < 0.001). The mRNA expression of SIRT1 (0.5-fold) and Adiponectin receptor 2 (0.39-fold) were lower in the thioacetamide group than the control (P < 0.05). TNF-α mRNA expression was 6.4-fold higher in the thioacetamide group than control (P < 0.05). SIRT1 mRNA expression was 2.6-fold higher in the taurine-thioacetamide group than in the thioacetamide group. Conclusion: Taurine seems to improve hepatic steatosis by reducing oxidative stress and increasing SIRT1 expression.

Telperion is a portion of the eZemvelo Nature Reserve, located in Mpumalanga Province of South Africa. It falls within the Grassland Biome that comprise of a wide diversity of habitats and of which only 2.3% is currently conserved in reserves. The objective of this study was to determine the interaction of Telperion zebras with their vegetation habitats, the influence of vegetation on their movement and how it differs seasonally, focusing specifically on two groups in distinctly different habitat types. The first, Rocky Highveld Grassland, the second a Mixed Grassland community. Hourly zebra observations took place distinguishing between stallions, mares and foals during different times of the day, throughout a year. Zebra habitat was thereby identified and vegetation surveys were conducted in each of these sites according to the Braun-Blanquet vegetation sampling method. The plant species recorded for each sample plot were captured in the vegetation database TURBOVEG. The database was exported into the working directory JUICE. The results indicate no difference between feeding rates of the habitat types. Mares spent most time feeding, then stallions followed by foals, all of which were highest during afternoons. A vegetation gradient was identified, implying that zebras utilise both vegetation communities, as well as the transition between the communities. Zebras were less vigilant during grazing when large numbers were gathered in the same area. Tracking zebras revealed their migrating behaviour from a central point to the rest of the reserve in summer and more specifically to rocky ridges in winter. The understanding of zebra behaviour contributes to management and mitigation for good veld conditions in Telperion. Copyright / Dissertation (MSc)--University of Pretoria, 2012. / Plant Science / unrestricted