Orientadora: Profª. Drª. Neiva Isabel Rodrigues Magdalena / Coorientadores: Profª. Drª. Melissa Rodrigues de Araújo, Prof. Dr. Cassius Torres, Profª. Drª. Sônia Raboni / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Saúde da Criança e do Adolescente. Defesa: Curitiba, 05/12/2014 / Inclui referências : f. 88-98 / Área de concentração: hemato-Oncologia e Genética pediátrica / Resumo: A anemia de Fanconi (AF) é uma doença geneticamente herdada de maneira autossômica recessiva caracterizada por fragilidade cromossômica e distúrbios hematológicos associados às malformações congênitas. A doença pode evoluir para anemia aplástica severa em decorrência de falência da medula óssea. Pacientes com AF têm susceptibilidade aumentada para neoplasias de cabeça e pescoço - Carcinoma Espinocelular (CEC), do trato anogenital e da cavidade bucal. Embora o tratamento eficaz para AF seja o transplante de células tronco hematopoiéicas (TCTH), é sabido que o risco de desenvolvimento de neoplasias aumenta progressivamente após o mesmo. Recentemente, o papilomavírus humano (HPV) tem sido considerado como um agente co-carcinogênico e propõe-se a participação do mesmo na carcinogênese em AF. No presente estudo foram realizados anamnese, exame físico da boca e coleta de amostras de células epiteliais bucais por meio de bochechos com solução salina para detecção do HPV por meio da técnica de Polimerase Chain Reaction (PCR) em tempo real. A amostra do estudo (n = 150) foi dividida em três grupos: indivíduos com AF não transplantados (n = 50) e transplantados (n = 50) e indivíduos saudáveis (controle) (n = 50). Houve semelhança entre os grupos em relação à idade, sexo e escolaridade. Os pacientes com AF foram provenientes de 21 estados brasileiros, sendo os de maior frequência: SC (17%), PR e SP (15%) e BA (10%). A doença do enxerto contra hospedeiro (DECH) foi encontrada apenas em pacientes com AF transplantados (6%, p = 0,04). Lesões leucoplásicas foram mais encontradas em pacientes transplantados (10%) do que em pacientes não-transplantados (2%) (p = 0,02) e lesões aftosas apareceram apenas em pacientes não-transplantados (6%) (p = 0,02). Observou-se apenas um caso de HPV de alto risco com genótipo não especificado. Em análise pareada para HPV de alto e baixo risco, selecionou-se 12 pacientes de cada grupo e todos os resultados foram negativos para HPV. Em conclusão, verificou-se maior frequência de lesões bucais nos pacientes com AF, mas não se observou diferença entre pacientes com AF transplantados, não transplantados e controles em relação à frequência de HPV. Palavras-Chave: Anemia de Fanconi; Papilomavírus Humano; Reação em Cadeia da Polimerase; Boca. / Abstract: Fanconi anemia (FA) is usually inherited as an autosomal recessive disorder characterized by progressive pancytopenia, congenital abnormalities and a predisposition to the development of hematological malignancies as well as squamous cell carcinoma of head and neck and anogenital region. Whereas effective treatment for the hematological complications of FA is hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), it is also known that the risk of developing cancer increases progressively thereafter. Recently, the human papillomavirus (HPV) has been considered as a co-carcinogen agent and could be involved in the carcinogenesis of FA. In the present study we performed anamnesis and physical examination of the mouth and we also collected samples of oral epithelial cells by gargling with saline for HPV detection by the polymerase chain reaction technique (PCR) in real time. The study sample (n = 150) were divided into three groups: nontransplanted patients with FA (n = 50) and transplanted patients with FA (n = 50) and healthy individuals (controls) (n = 50). There was no difference between the groups regarding age, sex and levels of education. Patients with FA were from 21 Brazilian states, with the highest frequency as follows: States of Santa Catarina (17%), Parana and Sao Paulo (15%) and Bahia (10%). There was no difference in the frequency of caries and gingivitis among study groups (p > 0.05). The identification of Graft versus host disease (GVHD) was found only in transplanted FA patients. Leukoplakic lesions (p = 0.02) were found more frequently in transplanted patients (10%) than non-transplanted patients (2%) and aphthous lesions appeared only in non-transplant patients (6%) (p = 0.02). It was found only one case of high-risk HPV genotype unspecified. In paired analysis for HPV high and low risk, we selected 12 patients in each group and all results were negative for HPV. In conclusion, A higher frequency of oral lesions were identified in patients with FA but no difference was observed between transplanted , non transplanted patients and healthy controls regarding the presence of HPV. Keywords: Fanconi Anemia; Human Papillomavirus; Polymerase Chain Reaction; Mouth.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-03T14:35:25Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO SUELEN CRISTINA DE LIMA.pdf: 5986222 bytes, checksum: 679d57cd1651e5c141d03a5aa0e9f8cc (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-03T14:35:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO SUELEN CRISTINA DE LIMA.pdf: 5986222 bytes, checksum: 679d57cd1651e5c141d03a5aa0e9f8cc (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / CNPq / A Anemia de Fanconi (AF) é uma síndrome genética essencialmente autossômica recessiva, caracterizada clinicamente por anormalidades congênitas, alterações hematológicas e suscetibilidade aumentada ao câncer. Ao nível celular, indivíduos portadores desta síndrome apresentam acentuada fragilidade cromossômica, resultante de falhas no sistema de reparo a lesões no DNA, o que lhes confere hipersensibilidade a agentes clastogênicos. Para o diagnóstico laboratorial, costumase avaliar as alterações cromossômicas induzidas em linfócitos do sangue periférico por agentes químicos, tais como: Diepoxibutano (DEB) e Mitomicina C (MMC). Contudo, a utilização destes agentes para fins de diagnóstico possui uma série de restrições no que se refere à sua obtenção, transporte, manipulação e descarte. Neste contexto, a Radiação Ionizante (RI) surge como um agente clastogênico alternativo ao uso do DEB, tendo em vista que oferece menores riscos em termos de biossegurança e ao meio ambiente. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi investigar o uso da RI em linfócitos de sangue venoso periférico (SVP) para diagnostico da AF. Para padronização da metodologia de análise, avaliaram-se primeiramente diferentes níveis de dose de irradiação, utilizando-se acelerador linear (taxa dose 200 cGy/min), e tempos de cultivo celular distintos, em amostras de SVP de pacientes previamente diagnosticados positivos para AF. Em seguida, dois grupos de indivíduos foram estudados: Grupo N formado por 5 indivíduos normais e Grupo P composto por 9 pacientes suspeitos de serem portadores de AF. Cada amostra individual de SVP foi separada em duas alíquotas, sendo uma irradiada e a outra não exposta à radiação. Após cultura de linfócitos, para cada alíquota, foram contabilizadas as alterações cromossômicas observadas em 200 metáfases. Os resultados indicaram três dos nove pacientes como portadores da Anemia de Fanconi (AF+), enquanto para os demais pacientes a metodologia definida nesta pesquisa os diagnosticou negativamente (AF-). Todos os indivíduos caracterizados como AF+, através da metodologia estabelecida neste trabalho, foram também diagnosticados como portadores da AF pelo teste DEB (padrão ouro). Diferenças estatisticamente significativas, ao nível de 5%, foram encontradas entre as alterações cromossômicas apresentadas pelos indivíduos dos grupos N e P (AF+), indicando que a metodologia estabelecida nesta pesquisa permite diferenciar pacientes portadores da AF de indivíduos normais. Os resultados desta pesquisa sugerem o uso da RI como ferramenta para diagnóstico de portadores da Anemia de Fanconi, contribuindo para a disponibilização de uma metodologia alternativa, mais acessível e de igual eficácia em relação àquela atualmente empregada no Brasil para o diagnóstico desta doença.

La anemia de Fanconi (FA) se caracteriza por malformaciones, fallo medular progresivo y predisposición al cáncer. El transplante de médula es actualmente la única opción terapéutica aunque incrementa el riesgo oncológico y son pocos los pacientes con donante compatible lo que ha promovido la investigación en terapia génica y medicina regenerativa basada en reprogramación celular de fibroblastos de pacientes FA a celulas madre pluripotentes (iPS). Son 12 los genes Fanconi hasta ahora descritos, 3 de ellos implicados en predisposición al cancer en portadores (FANCD1/BRCA2, PALB2 y BRIP1). La FA se caracteriza por fragilidad cromosómica lo que se utiliza como herramienta diagnóstica. El objetivo de esta tesis es el análisis de la variabilidad en cuanto al fenotipo celular y clínico de los pacientes de AF en España y la determinación de la contribución de la variabilidad genética dentro de los propios genes FA. Los resultados de los primeros 200 test de fragilidad cromosómica realizados en el grupo ha permitido cuantificar la variabilidad interindividual, establecer niveles umbral y determinar que el 15% de los pacientes FA presentan mosaicismo somático. Se ha determinado que la fragilidad espontánea de los pacientes se debe también a horquillas de replicación bloqueadas, ya que correlaciona con la fragilidad inducida por DEB. En cuanto a la caracterización genética de la población española de pacientes, se ha completado los estudios de subtipaje en 102 familias. Este estudio ha revelado que el 75% de los pacientes españoles pertenecen al grupo de complementación FA-A. Una vez completado el subtipaje, se ha determinado el espectro mutacional de la población. Se ha completado el estudio en 66 pacientes FA-A y se han determinado las mutaciones más frecuentes, creando, a partir de estos resultados, un protocolo para la optimización del análisis mutacional en los pacientes españoles. También se han caracterizado molecular y funcionalmente, algunas de las mutaciones encontradas, como la determinación del haplotipo asociado a la mutación más frecuente, la determinación de los puntos de rotura de una gran deleción para determinar el mecanismo molecular que la originó y también el estudio funcional de las mutaciones no truncadoras encontradas. Se ha determinado que el subtipo genético condiciona la sensibilidad celular de los pacientes a agentes inductores de ICLs, mientras que el tipo de mutación (truncadora/no truncadora) no tendría relevancia. Del mismo modo, el tipo de mutación parece no condicionar el fenotipo clínico de los pacientes. Se ha determinado que la incapacidad de las células de reparar los enlaces intercruzantes en el ADN es directamente responsable de las malformaciones congénitas que presentan los pacientes, mientras que la evolución hematológica estaría condicionada por otros factores. Finalmente, se ha llevado a cabo un estudio de proteómica diferencial para determinar proteínas y procesos celulares que se encuentran desregulados en las células FA, y así determinar que otros factores podrían ser responsables del fenotipo de los pacientes. En este estudio se han encontrado varias proteínas implicadas en la respuesta a IFN-gamma, metabolismo oxidativo, homeostasis mitocondrial, transporte intracelular y procesamiento del ARN. / Fanconi anemia (FA) is characterized by congenital malformations, bone marrow failure and predisposition to cancer. Bone marrow transplant is the only possible treatment to overcome haematological disease, even if it increases the risk of cancer and not all patients have a compatible donor. These facts promoted the development of clinical protocols for gene therapy and regenerative medicine based on reprogramming fibroblast cells from FA patients to hematopoietic stem cells. There are 12 known genes causing FA, 3 of them involved also in predisposition to breast/ovarian cancer (FANCD1/BRCA2, PALB2 and BRIP1). FA is characterized by chromosome instability. Therefore, this endpoint is used in diagnosis. The aim of this thesis is to analyze the variability associated to cellular and clinical phenotype of FA patients and its relationship to genetic variability found in FA genes. We have performed 200 chromosome fragility tests. This analysis allowed the determination of interindividual variability, creation of diagnostic thresholds and the identification of FA mosaic patients (15%). We have seen that spontaneous chromosome fragility correlates to DEB-induced chromosome fragility, indicating that spontaneous DNA damage is also due to stalled replication forks. We have genetically characterized the Spanish FA population, including subtype determination and mutational analysis. Subtyping analysis of 102 Spanish FA families showed that FA-A group is the most frequent, accounting for 75% of patients. Once complementation group is defined, we conducted mutational analysis. We completed the study on 66 FA-A patients, to uncover the Spanish mutational spectrum for this gene. Several frequent mutations were found. Based on these results, we created a work-flow that allows optimization of mutation analysis on Spanish patients. We also characterized some of the mutations found at the molecular and functional level: we determined the haplotype associated to the most frequent mutation on this gene, we found the breakpoints for a large deletion so that the molecular mechanism responsible for the origination of this deletion was revelled and, finally, we performed functional analysis of non-truncating mutations. We showed that genetic subtype conditions cellular sensitivity to ICLs, while mutation type (truncating/non-truncating) does not seem to play an important role. In a similar way, mutation type does not influence severity of clinical phenotype. We have seen that FA cell inability to resolve stalled replication forks is directly responsible for congenital malformations seen in FA patients, while hematologic evolution seems to be conditioned by other factors. Finally, we also conducted a study of differential proteomics to look for differentially expressed proteins and subsequent altered cellular processes. These processes could be responsible for part of the FA patients' phenotype. In this study we found several proteins involved in response to gamma-IFN, oxidative metabolism, mitochondrial homeostasis, intracellular transport and RNA processing.

Orientador: Prof. Dr. Ricardo Pasquini / Co-orientadora: Drª. Noemi Farah Pereira / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 07/10/2014 / Inclui referências / Resumo: Anemia de Fanconi (AF) é uma doença autossômica recessiva e, em raros casos, ligada ao X, com grande heterogeneidade genética resultante de diferentes mutações em genes cujos produtos estão envolvidos nas vias de reparo do DNA, sendo que 16 subtipos genéticos já foram identificados. A variabilidade fenotípica desta doença dificulta o diagnóstico clínico, sendo necessários testes laboratoriais para sua confirmação. A possível influência do genótipo AF nas manifestações clínicas, como falência progressiva da medula óssea, leucemias e câncer, pode ser melhor definida se a mutação dentro de um subtipo genético for identificada. A pesquisa de mutações é complexa em função do número de genes associados e da variedade de alterações deletérias e não deletérias em cada gene. Os objetivos deste estudo foram identificar o subtipo genético dos pacientes brasileiros com AF, desenvolver uma estratégia de diagnóstico molecular aplicável à rotina clínica e correlacionar os genótipos encontrados com os fenótipos observados. Foram incluídos 255 pacientes AF, atendidos no ambulatório de Anemia de Fanconi do HC/UFPR, entre 1995 e 2012. Foi desenvolvido um teste de triagem para a identificação de 11 mutações frequentes nos genes FANCA, FANCC e FANCG dos pacientes AF brasileiros. Nos casos identificados somente em heterozigose a segunda mutação envolvida foi investigada pela técnica de MLPA (Multiplex Ligation Probe Amplification) e (ou) sequenciamento do DNA. Utilizando o teste de triagem proposto foi possível identificar alterações em 128 dos 255 pacientes (50,2%). Foram encontradas mutações no FANCA em 89/255 pacientes, no FANCC em 11/255 e no FANCG em 28/255. Em 71/128 pacientes foram encontradas mutações em homozigose e em 57/128 em heterozigose composta. Em quatro destes 57 a segunda mutação foi identificada ainda na triagem, em 51/57 foi necessário utilizar o MLPA e sequenciamento, e em dois pacientes não foi identificada a segunda mutação. Um total de 52 mutações diferentes foi encontrado, sendo 22 novas alterações ainda não descritas na literatura. O método proposto foi eficiente, pois permitiu a subtipificação genética de 126/255 (49,4%) pacientes. O uso desta estratégia possibilitou diminuir em 29,4% a necessidade do sequenciamento, além de dirigi-lo para um único gene em 20,0% dos casos heterozigotos. A redução do custo e do tempo torna viável a pesquisa de mutações como ferramenta para diagnóstico molecular da AF entre brasileiros. A análise da associação das mutações c.3788-3790delTCT e c.1077-2A>G com o fenótipo e às manifestações clínicas se restringiu aos dados disponíveis, porém foi limitada pelas dificuldades inerentes ao conteúdo dos prontuários. O uso desta estratégia de tipificação molecular em um maior número de pacientes permitirá a investigação mais ampla do efeito destas mutações na evolução clínica da AF. Palavras-chave: Anemia de Fanconi. Mutação-genética. Genes AF. / Abstract: Fanconi Anemia (FA) is an autosomal recessive or X-linked disease, with wide genetic heterogeneity resulting from different mutations in genes which products are involved in DNA repair pathways and 16 genetic subtypes have been identified. The phenotypic variability makes clinical diagnosis difficult and laboratory tests are necessary for confirmation. The possible influence of genotype in clinical manifestations such as progressive bone marrow failure, leukemia and cancer may be better understood if the mutations within a genetic subtype are identified. The mutation's investigation is complex due to the number of associated genes and the variety of deleterious and non-deleterious mutations in each gene. The aims of this study were to identify genetic subtypes of Brazilian patients with FA, to develop a strategy for molecular diagnosis applicable to clinical routine, and to correlate genotypes with phenotypes. 255 patients from Fanconi Anemia Outpatient Clinic of HC/UFPR, from 1995 to 2012 were included. The initial strategy was a screening test which included eleven frequent mutations in FA Brazilian patients. In the heterozygous cases the second mutation was investigated by MLPA (Multiplex Ligation Probe Amplification), and/or DNA sequencing. Using the proposed screening test, mutations were identified in 128 out of 255 patients (50.2%). FANCA mutations were found in 89/255 patients, FANCC in 11/255 patients and FANCG in 28/255 patients. 71/128 patients showed homozygous mutations and 57/128 were found in heterozygosis. In four out of 57 heterozygous the second mutation was identified in the screening test, in 51/57 MLPA and sequencing were required. In two patients the second mutation involved was not identified. A total of 52 different mutations were found, 22 of them are new mutations not previously described. The proposed method was effective because it allowed the genetic subtyping of 126/255 (49.4%) patients. Using this strategy a 29.4% decrease in sequencing demand was observed as well as sequencing was driven to a single gene in 20.0% when heterozygous. Cost and time reduction makes it feasible to search for mutations as a tool for molecular diagnosis of FA Brazilian patients. Analysis of association of the mutations c.3788_3790delTCT and c.1077-2A> G with the phenotype and the clinical manifestations was restricted to the available data, but limited by the difficulties relative to the content of the medical records. The use of this molecular typing strategy in a larger number of patients will allow more extensive investigation of the effect of these mutations in the clinical evolution of FA. Keywords: Fanconi Anemia. Genetic Mutation. FA genes.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2004 / Inclui bibliografia / A Anemia de Fanconi (AF) é uma doença genética autossômica recessiva, caracterizada clinicamente pela falência progressiva da medula óssea, malformações congênitas, atraso do crescimento e predisposição à leucemia e tumores sólidos. Existem onze subtipos / Fanconi´s anemia (FA) is a genetic autossomal recessive disorder. It is clinically characterized by progressive bone marrow failure, congenital abnormalities, growth retardation and predisposition to leukemia and solid tumors. There are eleven genetic sub

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, 2004 / Inclui bibliografia / A Anemia de Fanconi e uma desordem genetica de heranca autossomica recessiva, com manifestacao clinica heterogenea, caracterizada por uma falencia medular progressiva, malformacoes congenitas e predisposicao ao desenvolvimento de neoplasias, sobretudo leu / Fanconi¡äs anemia is a rare autossomal recessive disorder with heterogeneous clinics, characterized by progressive bone marrow failure, congenital abnormalities and predisposition to malignancies, especially leukemia and solid tumors. There are eleven gen

Orientador: Prof. Dr. Ricardo Pasquini / Co-orientadora: Profª. Drª. Neiva Isabel Rodrigues Magdalena / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Saúde da Criança e do Adolescente. Defesa: Curitiba, 27/11/2014 / Inclui referências / Área de concentração: Hematologia e oncologia pediátrica / Resumo: A anemia de Fanconi (AF) é herdada de maneira autossômica recessiva, excepcionalmente ligada ao cromossomo X e caracterizada por uma falência progressiva de medula óssea, malformações congênitas e uma enorme predisposição ao câncer. O transplante de células-tronco hematopoéticas (TCTH) é a única possibilidade de cura para as complicações hematológicas da AF. Os resultados do transplante são excelentes especialmente nos pacientes jovens, em fase de aplasia e com doadores aparentados compatíveis. No entanto, existem poucos dados na literatura em relação às complicações tardias após o TCTH nestes pacientes. Este estudo compreende a avaliação de 157 pacientes que sobreviveram pelo menos 2 anos após o TCTH, cujo seguimento variou de 2 a 25 anos (Mediana de 8,7 anos) e que foram transplantados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná entre 1988 e 2011. No momento do transplante, 80% dos pacientes encontravam-se em fase de aplasia, 71% foram transplantados com doadores aparentados e 29% com doadores não aparentados. Diversos regimes de condicionamento foram utilizados e a medula óssea foi a fonte de células-tronco em 89% dos casos. Quimerismo completo foi observado em 76% dos casos e a rejeição ocorreu em apenas um paciente após os dois anos. Aos dois anos pós-TCTH, 16 pacientes apresentavam DECH crônica em atividade e 16 estavam em uso de tratamento imunossupressor. A incidência cumulativa do carcinoma espinocelular (CEC) de cavidade oral foi de 8% aos 10 anos e 14% aos 15 anos pós-TCTH. Apenas 2 dos 12 pacientes com CEC estão vivos após 5 anos do diagnóstico do câncer, sem evidência de doença. Os pacientes com DECH crônica desenvolveram o CEC mais jovens e numa fase mais precoce após o TCTH do que aqueles sem DECH crônica. Nos patientes avaliáveis, o hipotireoidismo foi detectado em 25% e o hipogonadismo em 40%. Ao todo, 4 mulheres tiveram gestações normais com fetos saudáveis. Outras complicações neurológicas, auditivas, visuais, pulmonares, hepáticas e renais relacionadas ao procedimento do transplante ou à doença básica também foram descritas em menor frequência. A probabilidade de sobrevida aos cinco anos foi de 95%, aos 10 anos de 90% e aos 15 anos de 79%. A sobrevida global foi influenciada de maneira negativa pela realização de transplantes antes de 2003, pela presença de DECH crônica e pelo diagnóstico do CEC. A maior causa de óbito foi o CEC de cavidade oral seguida pela DECH crônica e suas complicações infecciosas. Esta análise confirma que o TCTH é um tratamento eficaz para os pacientes com AF. A sobrevida foi melhor para os pacientes transplantados recentemente e para aqueles que não tinham DECH ou câncer. A maioria dos pacientes que sobreviveram mais do que 2 anos tinham uma vida normal e com um quimerismo completo. Mais esforços são necessários para diminuir o impacto das complicações tardias relacionadas a doença ou ao procedimento do transplante. A prevenção ou detecção precoce do CEC pode levar a um aumento na sobrevida no futuro. Palavras-chave: Anemia de Fanconi. Complicações tardias. Câncer. Doença do enxerto contra o hospedeiro. / Abstract: Fanconi Anemia (FA) is an autosomal recessive disorder rarely X-linked, characterized by progressive bone marrow failure, congenital abnormalities and a striking predisposition to cancer. Hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) is the only treatment able to cure the hematological complications associated with FA. Survival after transplant is excellent especially in young patients with aplastic anemia and matched related donors. However, only limited data are available regarding late complications after HSCT for these patients. This study evaluated late effects among 157 patients followed between 2 and 25 years (median 8.7 years) who survived for at least 2 years after transplant. These patients were transplanted at the Hospital de Clínicas - Federal University of Parana between 1988 and 2011. At the time of transplant, 80% of patients were in aplastic phase, 71% received transplants from related donors while 29% were transplanted using unrelated donors. Several preparatory regimens were used and bone marrow was the stem cell source in 89% of patients. Full donor chimerism was observed in 76% of patients and only one patient rejected after 2 years. At the time of study entry, 16 patients had active chronic GVHD and 16 patients were still receiving immunosuppressive therapy. The probability of survival was 95% at 5 years, 90% at 10 years and 79% at 15 years. Overall survival was negatively impacted by transplants performed before 2003, presence of chronic GVHD and diagnosis of squamous cell carcinoma (SCC). The cumulative incidence of SCC of the mouth at 10 years was 8% and at 15 years was 14%. Only 2 patients with SCC are alive, disease free, 5 years after diagnosis. Patients with GVHD developed this complication at a younger age and earlier after transplant when compared to patients who did not have GVHD. In evaluable patients, 25% had hypothyroidism and 40% had the diagnosis of hypogonadism. Normal pregnancies occurred in 4 females with normal offsprings. Other neurological, auditory, visual, pulmonary, hepatic and renal complications related to the disease or to the transplant procedure were also described in a lower frequency. SCC of the mouth was the major cause of death followed by GVHD and its infectious complications. In summary, this analysis confirms that HSCT is an effective treatment for paients with FA. Survival was better for patients transplanted more recently and without chronic GVHD or SCC. The majority of patients who survived beyond 2 years after transplantation had normal lives and full donor chimerism. Further efforts are needed to reduce the burden of late complications related to the disease or to the transplant procedure. Prevention or early detection of SCC may yield further improvement in survival in the future. Keywords: Fanconi anemia. Late complications. Graft versus Host Disease. Cancer. Long term follow up.

Tese (doutorado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2010 / Bibliografia: f. 41-44 / Anemia de Fanconi (AF) é uma doença genética autossômica recessiva, com falência da medula óssea, malformações congênitas ósseas: anomalias de crânio, face e membros superiores atraso do crescimento e associação a neoplasias. Este estudo avaliou o padrão / Fanconi Anemia (FA) is an autosomal recessive genetic disease, with bone marrow failure, congenital osseous anomalies such as skull, face and upper limb anomalies, growth delay and it presents association with neoplasia. This study evaluated craniofacial

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2009 / Bibliografia: f. 20-22 / OBJETIVOS: Avaliar e correlacionar fatores de risco à doença cárie, como dieta, higienização bucal e microbiota bucal potencialmente cariogênica (Streptococcus mutans) com experiência de doença cárie por meio de levantamento de índice CPO-D/ ceo-d em paci / OBJECTIVES: This study was aimed to evaluate and to correlate risk factors for the caries disease with caries experiences by DMFT / dmft index in patients presenting with Fanconi´s anemia (FA). MATERIAL AND METHOD: 31 FA patients aged between 4 to 20 were

Orientador: Prof. Dr. Cassius Carvalho Torres-Pereira / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia. Defesa: Curitiba, 2016 / Inclui referências : f. 69-79 / Área de concentração / Resumo: A anemia de Fanconi (AF) é uma síndrome genética rara caracterizada por instabilidade cromossômica e dificuldade de reparo do DNA. Pacientes com AF desenvolvem o carcinoma de células escamosas (CCE) na boca mais cedo e com maior frequência que a população em geral, especialmente após o transplante de células tronco hematopoéticas (TCTH). Embora tenha aumentado a evidência de um papel etiológico da microbiota local e o processo de carcinogênese; não existem informações sobre a microbiota bucal de pacientes com AF. O objetivo desse estudo foi explorar a microbiota salivar de 61 pacientes com AF e comparar os resultados com a condição de saúde bucal e fatores de riscos associados ao desenvolvimento do CCE. Depois de responder a um questionário e ser submetido a um exame clínico intrabucal, todos os pacientes passaram por um etapa de coleta de saliva e as amostras foram analisadas utilizando o sequenciamento do gene 16S rRNA (Região Hipervariável :V3-V4 Miseq, Illumina). O perfil microbiano associado aos parâmetros clínicos e dados retirados de prontuário médico foram analisados utilizando modelos lineares. A mediana de idade da amostra estudada foi de 22 anos e a maioria deles haviam sido submetidos ao TCTH (n=53). Os filos bacterianos mais abundantes foram Firmicutes (média da abundância relativa ± desvio padrão(DP)) (42,1% ± 10,1%) e Bacteroidetes (25,4% ± 11,4%). O histórico de doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) bucal (n=27) estava associada com maiores proporções de Firmicutes (43,8% x 38,5%, p = 0,05) quando comparados com os que não apresentaram DECH. Altos níveis de sangramento gengival foram associados com os genêros Prevotella (22,25% x 20%), Streptococcus (19,83% x 17,61%), Porphyromonas (3,63% x 1,42%, p = 0,03), Treponema (1,02% x 0,28%, p = 0,009), Parvimonas (0,28% x 0,07%, p = 0,02) e Dialister (0,27% x 0,10%, p = 0,04). Por fim, pacientes transplantados à mais de 11 anos mostraram níveis mais elevados de Streptococcus (18,4%), Haemophilus (12,7%) e Neisseria (6,8%). Em conclusão, pacientes com AF que apresentavam piores condições de higiene bucal abrigavam maiores proporções de gêneros de bactérias compatíveis com doença periodontal. Foram observadas diferenças microbianas específicas, na presença de longo tempo de transplante, histórico de GVHD e mucosite, bem como, na presença de lesões com potencial de malignidade. Palavras-chave: Anemia de Fanconi. Câncer bucal. Microbiota. Saliva. Bactéria. Sequenciamento de Nucleotídeos de Alto Rendimento. / Abstract: Fanconi anemia (FA) is a rare genetic disease characterized by chromosomal instability and impaired DNA damage repair. FA patients develop oral squamous cell carcinoma (OSCC) earlier and more frequently than the general population, especially after hematopoeitic stem cell transplantation (HSCT). Although evidence of an etiological role of the local microbiome and carcinogenesis has grown, no information exists regarding the oral microbiome of FA patients. The aim of this study was to explore the salivary microbiome of 61 FA patients regarding their oral health status and OSCC risk factors. After answering a questionnaire and receiving oral clinical examination, saliva samples were collected and analyzed using 16rRNA sequencing (V3-V4 hypervariable region, MiSeq, Illumina). The microbial profiles associated with medical and clinical parameters were analyzed using general linear models. Patients were young (mean age = 22 yrs old) and most of them had received HSCT (n=53). The most abundant phyla were Firmicutes (mean relative abundance ± SD) (42.1%±10.1%) and Bacteroidetes (25.4%±11.4%). A history of graft-versus-host disease (GVHD) (n=27) was associated with higher proportions of Firmicutes (43.8% x 38.5%, p=0.05). High levels of gingival bleeding were associated with the genera Prevotella (22.25% x 20%), Streptococcus (19.83% x 17.61%), Porphyromonas (3.63% x 1.42%, p=0.03), Treponema (1.02% x 0.28%, p=0.009), Parvimonas (0.28% x 0.07%, p=0.02) and Dialister (0.27% x 0.10%, p=0.04). Finally, participants transplanted longer than 11 years showed highest levels of Streptococcus (18.4%), Haemophilus (12.7%) and Neisseria (6.8%). In conclusion, FA patients with poor oral hygiene harbored higher proportions of genera of bacteria compatible with gingival disease. Specific microbial differences were observed in the presence of a history of long time since HSCT, history of oral GVHD and mucositis as well when potential malignant oral lesion was present. Keywords: Fanconi anemia. Oral cancer. Microbiome. Saliva. Bacteria. Massively-Parallel Sequencing.