No presente trabalho, foi investigada a produção de bacteriocinas por diferentes isolados e raças fisiológicas de Xanthomonas campestris PV. Malvacearum (E. F. Smith, 1901) DYE. Isolados provenientes de várias localidades, diferiram entre si quanto à capacidade de produção e à sensibilidade as bacteriocinas, tanto a nível de raças ou de isolados, como em relação à origem desses isolados. Consequentemente, foi impossível a caracterização destes em grupos por tipos de bacteriocinas. De acordo com os resultados obtidos, as bacteriocinas produzidas são termoestáveis a 79°C por 15 minutos. Foi observado que 55% dos isolados produziram bacteriocinas contra os demais, quando testados em meio de cultura BDA. Em Agar-Nutriente a produção foi inibida. Paralelamente aos estudos de produção de bacteriocinas, foram feitas observações a respeito da variabilidade patogênica de Xanthomonas campestris PV. Malvacearum . Foram detectadas as raças fisiológicas 3, 7, 13, 17, 18 e 19 com base nas reações de patogenicidade apresentadas pelo grupo de linhagens diferenciais de algodoeiro. Todas essas raças foram observadas no Estado de São Paulo. A raça 18 foi detectada em amostras provenientes de todos os outros Estados produtores de algodão na Zona Meridional do Brasil (Paraná, Mato Grosso, Minas Gerais, Goiás e Mato Grosso do Sul), porém, nessas regiões foi observada ocorrência menos generalizada das demais raças / The production of bacteriocins by different isolates and physiologic races of Xanthomonas campestris PV. Malvacearum (E. F. Smith, 1901) Dye was investigated. Isolates coming from several localities differed as bacteriocins productors and to the sensibility to such substances. Differences were also observed among races as well as according the geographic origin. Characterization and grouping of the isolates by the type of bacteriocins produced was not possible. The bacteriocins were thermostable at 79°C for minutes. The results showed that 55% of the isolates produced bacteriocins against the others, when tested in PDA medium. Bacteriocin production was inhibited in Nutrient-Agar. Observations concerning the variability of Xanthomonas campestris pv. Malvacearumwere made. Physiologic races 3, 7, 13, 17, 18 and 19 were detected on the basis of reactions exhibited by the group of cotton lines generally recognized as differentials. All those races were observed in São Paulo state, Brazil. Race 18 was detected also in samples collected in the other cotton producing meridional states of Brazil (Paraná, Mato Grosso, Minas Gerais, Goiás and Mato Grosso do Sul); however, a less generalized ocorrence was observed for the other races in the same states

Estágio realizado na Escola Superior de Biotecnologia-UCP e orientado pela Prof.ª Doutora Célia Manaia / Tese de mestrado integrado. Engenharia Química. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2008

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, 2008. / Submitted by Suelen Silva dos Santos (suelenunb@yahoo.com.br) on 2009-09-22T17:02:54Z No. of bitstreams: 1 2008_SandraRLonghin_completa.pdf: 1902688 bytes, checksum: 664e6fc3291bfecdcc45c6794b75f0b3 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-06-30T20:37:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_SandraRLonghin_completa.pdf: 1902688 bytes, checksum: 664e6fc3291bfecdcc45c6794b75f0b3 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-06-30T20:37:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_SandraRLonghin_completa.pdf: 1902688 bytes, checksum: 664e6fc3291bfecdcc45c6794b75f0b3 (MD5) Previous issue date: 2008 / A presença de compostos farmacêuticos e de higiene pessoal no ambiente aquático tem sido objeto de preocupação entre a comunidade científica. Uma forma de aporte dessas substâncias ocorre por meio dos efluentes das indústrias farmacêuticas que possuem baixa biodegradabilidade e alta toxicidade. A preocupação com relação aos efluentes da produção industrial dos antibióticos beta-lactâmicos se deve ao fato de que os mesmos podem promover efeitos negativos como o desenvolvimento de organismos resistentes no ambiente aquático. O presente estudo avalia a eficiência dos Processos Oxidativos Avançados (POA) homogêneo UV, H2O2/UV, Fe2+/H2O2, Fe2+ H2O2/UV, Fe3+/ H2O2, Fe3+/ H2O2/UV e Fe2+/ H2O2/solar na degradação de amostras sintéticas dos antibióticos AMX e AMP. Para esses POA investigou-se o efeito de parâmetros como a concentração dos íons Fe+2, Fe+3, a concentração de H2O2, a ação da radiação UV e solar na degradação de AMX e AMP. O processo Fenton (Fe2+/H2O2) apresentou os melhores resultados mostrando-se bastante promissor. Esse processo é eficiente, simples e de baixo custo A avaliação da eficiência dos processos se deu por meio do acompanhamento da variação da concentração de AMX e AMP por espectrofotometria no UV, pela redução da DQO durante 60 min de reação e pela avaliação da presença de compostos carbônicos nos resíduos sólidos da degradação por espectrometria no IR. A toxicidade e a biodegradabilidade dos produtos formados pelo processo Fenton também foram objeto de estudo. A toxicidade foi avaliada pela influência na determinação da dose letal para 50% dos organismos (DL50) em Artemia salina e pela inibição do crescimento radicular e alteração no ciclo celular mitótico do organismo Allium cepa. Os resultados observados para a redução da concentração dos analitos AMX e AMP foram acima de 95,0% para os POA Fenton e foto-Fenton após 60 min de reação. A redução da DQO observada para o processo Fenton atingiu 75% para AMX e 81% para AMP. O resíduo sólido resultante do processo de oxidação com Fe2+/H2O2 para AMX e AMP mostrou, para ambos os antibióticos, a presença de compostos carbônicos. As respostas para toxicidade dos produtos gerados resultaram para o sistema-teste Artemia salina um DL50=70% (v/v) após 48 h de ensaio, para AMX/Fenton e DL50= 50% (v/v), após 72 h, de ensaio para AMP/Fenton. No sistema-teste Allium cepa, a toxicidade avaliada pelo crescimento da raiz foi observada para soluções acima de 5% de diluição (v/v) tanto para AMX quanto para AMP. Quanto à genotoxicidade, os resíduos de degradação apresentaram para o sistema Allium cepa alterações no ciclo celular mitótico, o que indica toxicidade podendo promover mutação no conteúdo genético celular. A biodegradabilidade (DBO/DQO) dos resíduos do tratamento por Fe2+/H2O2 mostraram uma recalcitrância indicando a necessidade de tratamento combinado como químico/biológico para este efluente. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The presence of active pharmaceutical substances and personal-care products in aquatic environment has been a great concern for the scientific community. Pharmaceutical industries are one of the main sources of these types of compounds, which are characterized by low degradability and high toxicity. The antibiotic preparation may negatively affect living organisms in water bodies. However, some organisms in the water bodies may become resistant after their contact with the bioactive chemical wastes. In the present work the efficiency of some homogeneous Advanced Oxidation Process (AOP) UV, H2O2/UV, Fe2+/H2O2, Fe2+ H2O2/UV, Fe3+/ H2O2, Fe3+/ H2O2/UV e Fe2+/ H2O2/solar radiation was investigated toward the degradation of AMX and AMP. The effect of relevant experimental parameters Fe+2, Fe+3, H2O2 concentration and the UV radiation was investigate. The Fenton process (Fe2+/H2O2) offered the most promising results, mainly accounts of high degradation capacity higher than 97% at reaction time 60 min. This process is high operational, simplicity and low coast. The efficiency of Fenton process was available using UV-Vis spectral data and chemical oxygen demand (COD). The results showed that AOP Fenton and AOP photo-Fenton are able to reduce near 100% of the concentrations of AMX and AMP after 60 min of reaction. The reduction of COD using Fenton process reached 75% and 81% for AMX and AMP, respectively. Solid residues from AMX and AMP oxidation reactions produced by Fenton reagent was evaluated by infrared spectroscopy (IR). The IR results showed the presence of carbonic compounds for both antibiotics. Toxicity tests with Artemia salina and Allium cepa were performed because of fast answers related to the toxicity of by-products from oxidation process. Artemia salina was efficient for the AMX/Fenton and AMP/Fenton, which showed DL50= 70% (v/v), after 48 h, and DL50= 50% (v/v), after 72 h, respectively. Allium cepa was efficient for chemical solution greater than 5% dilution (v/v) for both AMX and AMP considering the effects of toxicity on roots growth. Allium cepa showed changes in the mitotic cellular cycle for both AMX and AMP under Fenton reagent. It indicates an eventual mutation in the cellular genetic content. The biodegradability (BOD/COD) of Fenton process residue was investigated and shows the low biodegradation for AMX residues.

“PERCEPCIÓN DE LA AUTOMEDICACIÓN CON ANTIBIÓTICOS EN LOS USUARIOS EXTERNOS DE UN HOSPITAL PÚBLICO EN LIMA PERÚ” AUTOR: Dr. Leonel Christian Martínez Cevallos ASESOR: Dr. Eduardo Demetrio Matos Prado PROBLEMA: ¿Cuál es la percepción sobre la automedicación con antibióticos en los usuarios de consultorio externo del Hospital Nacional Arzobispo Loayza? Hipótesis: Existe relación directa entre el grado de instrucción y la automedicación con antibióticos en los sujetos de estudio. Objetivo: Identificar las percepciones más comunes sobre la automedicación con antibióticos en los usuarios de consultorio externo del HNAL. MATERIAL Y MÉTODOS: Estudio tipo encuesta, de carácter prospectivo observacional, descriptivo y transversal. Población: Usuarios de Consultorios Externos del Hospital Nacional Arzobispo Loayza, Lima Perú, a partir del mes de Noviembre del año 2011 en adelante. Muestra: n=369. RESULTADOS: El 58% de los usuarios se auto medican con antibióticos, el grado de instrucción superior es menos prevalente en quienes se auto medican (38%) comparado con quienes no practican esta actividad (53,8%), (p =0,003). Los síntomas respiratorios fueron la causa más común para la automedicación y el 84,5% consideran a los antibióticos en el tratamiento del resfrío común. También perciben motivos no relacionados al estado de la salud para automedicarse, como tratamiento “Ya conocido”, “Confianza en el personal de la farmacia” o “tiempo prolongado de espera en el hospital previo a la consulta médica”. Los antibióticos más usados en la automedicación son los Betalactámicos, Quinolonas y Aminoglucósidos. Durante la automedicación, el 49,3% acceden a los antibióticos por petición directa y el 33,3% por sugerencia del personal de la farmacia. Durante el consumo de antibióticos sin receta médica, el 89,2% consideran “mejoría de sus síntomas”. CONCLUSIONES: El 58% de los usuarios de consultorio externo del HNAL practica la automedicación con antibióticos, siendo probablemente las infecciones respiratorias, la causa más común, sin embargo se describen otras causas no relacionados al estado de salud, como la “terapia ya conocida”, “confianza en el personal de la farmacia” o “tiempo prolongado de espera antes de la consulta médica” como posibles causas de automedicación. Los grupos de antibióticos más usados para esta práctica fueron los Betalactámicos, Quinolonas y Aminoglucósidos. / Tesis de segunda especialidad

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-09-08T20:28:44Z No. of bitstreams: 1 Tese_Ieda Maria S Torres.pdf: 1184324 bytes, checksum: 1a8f013e18ff6a2485e7ff6182415423 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-09-09T15:08:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Ieda Maria S Torres.pdf: 1184324 bytes, checksum: 1a8f013e18ff6a2485e7ff6182415423 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-09-09T15:08:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Ieda Maria S Torres.pdf: 1184324 bytes, checksum: 1a8f013e18ff6a2485e7ff6182415423 (MD5) Previous issue date: 2008 / Pseudomonas aeruginosa é um microrganismo oportunista e tem a capacidade de responder a uma variedade de mudanças ambientais, apresentando alta resistência intrínseca a numerosos agentes antimicrobianos. Cefalosporinas, especialmente ceftazidima e cefepima são efetivas contra Pseudomonas aeruginosa, contudo sua intensa resistência tem limitado o uso desses antimicrobianos. Uma estratégia utilizada para evitar este problema é encapsular esses antimicrobianos em lipossomas unilamelares. Neste estudo, foi comparada a capacidade inibitória de ceftazidima e cefepima encapsuladas em lipossomas com a dos antibióticos na forma livre, contra a cepa de Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Foram determinados diâmetro, eficiência de encapsulação, estabilidade dos lipossomas e concentração inibitória mínima (CIM) dos antimicrobianos na forma livre e encapsulada. A concentração bactericida mínima (CBM) da ceftazidima e cefepima livre e encapsuladas em lipossomas unilamelares foram determinadas a 1, 2 ou 4 vezes o CIM. O diâmetro médio dos lipossomas foi de 131,88 nm, com eficiência de encapsulação da cefepima e ceftazidima de 2,29 % e 5,77 %, respectivamente. A CIM da ceftazidima e da cefepima encapsuladas em lipossomas foi 50% inferior àquela do fármaco livre. Ceftazidima e cefepima encapsuladas em lipossomas foram mais eficientes quanto ao efeito bactericida sobre a Pseudomonas aeruginosa, não havendo recuperação microbiana após 24 horas de incubação. Isto demonstra o potencial destes sistemas transportadores de fármacos para contribuir na redução do aparecimento de resistência bacteriana a estes antibióticos. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Pseudomonas aeruginosa is an opportunistc microorganismi which is able to respond to a large variety of environmental changes exhibits intrinsic resistance to several aintimocrobial agents. Cephalosporins, particularly ceftazidime and cefepime are effective against Pseudomonas aeruginosa, however, its increasing resistance has limites the usage of these antibiotics. Encapsulating antimicrobial drugs into unilamellar liposomes is an approach that has been investigated in order to overcome microorganism resistance. In this study, antimicrobial activity of liposomal ceftazidime and cefepime against Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 was investigated and compared to that of the free drugs. Liposomal characterization included diameter, encapsulations efficiency and stability. Minimal inhibitory concentration (MIC) was determined for free and liposomal forms of both drugs. Minimal bactericidal concentration (MBC) was determined at concentrations 1,2 and 4 times the MIC. Liposome average diameter was 131.88 nm and encapsulation efficiency for cefepime and ceftazidime were 2,29% and 5,77%, respectively. Mic for liposomal antibiotics was 50% lower than that for the free drugs. Liposomal Ceftazidime and cefepime exhibited a more efficient bactericidal effect over Pseudominas aeruginosa, with no microbial regrowth whithin 24 hours of incubation. This demonstrates the ability of these drug delivery sistems in contributing for the reduction of the development of bacterial resistance.

Memoria para optar al título de Químico / Los antibióticos a lo largo del tiempo han sido utilizados como distintas opciones terapéuticas en el tratamiento y control de enfermedades infecciosas, pero en la actualidad la lucha contra ciertas enfermedades se ha vuelto un problema mundial en términos de la salud en general, debido a que la eficacia de los antibióticos ha ido en declive por la resistencia que han ido desarrollando los microorganismos. Sumado a lo anterior, la tendiente disminución de la investigación y desarrollo de nuevos agentes antibacterianos con distintos mecanismos de acción, obliga a concentrar los esfuerzos de investigar nuevos blancos moleculares. La proteína FtsZ (Filamentous Temperature-Sensitive Z) ha sido objeto de este tipo de estudios, debido a su importancia en el proceso de citodiéresis (o citocinesis) celular bacteriana, pues polimeriza en protofilamentos necesarios para ensamblar el anillo Z, un complejo divisor que permite que se lleve a cabo el proceso normal de citodiéresis, hecho que ha despertado el interés en esta estructura como un atractivo blanco para el diseño de agentes antibacterianos con pocos efectos adversos. Se han desarrollado distintos inhibidores de la FtsZ, destacándose la estructura PC190723 (5) la cual posee una potente y selectiva actividad antiestafilocócica en determinados modelos de infección in vivo. Sobre un modelo de docking ya estudiado, se concluyó que la serie de las fenilfuranoxibenzamidas (3), análoga estructuralmente a 5 posee parámetros de interacción similar y favorable al sitio de unión de la FtsZ y posee el núcleo 5-fenilfurano que tiene potencial actividad biológica. Posteriormente se sintetizaron las series 1, 2 y se obtuvieron los compuestos 3a y 4a, 4b, 4c y 4f contenedores todos del núcleo químico 5-fenilfurano de relevancia para el estudio de ensayos biológicos propuestos para la investigación. La síntesis de los compuestos se realizó en etapas; se empleó la reacción de arilación de Meerwein sobre el furfural a partir de anilinas comerciales, seguido de la reducción de los aldehídos con borohidruro de sodio. El estudio de la reacción de Mitsunobu condujo hacia la formación del compuesto 3a, un bioisóstero de las fenilfuranoxibenzamidas, a partir de 3-hidroxibenzoato de etilo con el correspondiente alcohol. Además, el estudio de las fenilfuranoxibenzamidas condujo a la formación de nuevos productos de los cuales pocos antecedentes hay de su proceso de obtención y uso como posibles agentes antibacterianos, a partir del método de esterificación de alcoholes con cloruro de p-toluenosulfonilo (o metanosulfonilo). Se evaluó la actividad biológica de los compuestos obtenidos frente a bacterias prototipo Gram-positivas, Staphylococcus aureus resistente a meticilina y Enterococcus faecalis sensible a vancomicina / Antibiotics has been used over time like different therapeutical options in treatment and control of infectious diseases, but lately the struggle with certain type of diseases has become in a worldwide problem in terms of general health, because the effectivity of antibiotics has been reduced for the resistance that microorganisms has been developing. Besides, the tending decrease on develop and research of new antibacterial agents with new action mechanisms, force to concentrate the efforts to investigate new molecular targets. FtsZ protein (Filamentous Temperature-Sensitive Z) has been marked as target of this kind of studies, because the importance in the bacterial cellular cytokinesis process, it polymerizes in necessary protofilaments to assemble Z-ring, a divisor complex that allows the normal cytokinesis process to be carried out, a fact that has sparked interest in this structure as an attractive target for the design of antibacterial agents with few adverse effects. Different FtsZ inhibitors have been developed, standing out the PC190723 (5) structure which it has a powerful and selective anti-staphylococcal activity in certain models of in vivo infection. About an already studied docking model, it concluded that the phenylfuranoxibenzamide series (3), analogical structurally to 5, it possesses similar and favorable interaction parameters at the binding site of FtsZ and it possesses 5-phenylfuran core that it has powerful biological activity. Later it synthesized the 1, 2, series and it obtained the compounds 3a, 4a, 4b and 4c, all containing 5-fenilfuran core, relevant for the proposed bioassays studies for research. Compound synthesis was performed in stages; it has used Meerwein’s arylation on furfural from commercial anilines, then the aldehydes reduction with sodium borohidride. Study of Mitsunobu’s reaction leads to the formation of the compound 3a, a phenylfuranoxibenzamide bioisostere, from ethyl 3-hydroxybenzoate with the corresponding alcohol. Besides, phenylfuranoxibenzamide’s study lead to the formation of new products of which few antecedents are about its obtaining process and use as possible antibacterial agents, from the alcohol estherification method with p-toluensulfonyl (or methanesulfonyl). The biological activity of the compounds obtained was evaluated against Gram-positive prototype bacteria, methicillin-resistant Staphylococcus aureus and vancomycin-sensitive Enterococcus faecalis

Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo en el Portal de Tesis Electrónicas / El profesional químico farmacéutico está apto para desempeñarse en un amplio campo laboral, ya que posee una rigurosa formación en distintos ámbitos de la ciencia, pudiendo hacerlo tanto en el área pública como privada, así también como entregador de servicio o fiscalizador. Una de las áreas en que puede desempeñarse es en la Farmacia Asistencial, ya sea pública o privada y, dentro de la misma, en distintas subáreas. La práctica prolongada para optar al título de químico farmacéutico se realizó en el Servicio de Farmacia de Clínica Dávila y se dividió en dos etapas: a) La primera de ellas, estuvo destinada a conocer el quehacer profesional en todo lo que abarca la farmacia propiamente tal, a saber, compras y gestión con proveedores, recepción e ingreso de compras de medicamentos y otros, recepción y dispensación de medicamentos a los servicios, elaboración de papelillos y dosis unitaria, dilución de drogas oncológicas y preparación de nutriciones parenterales y, finalmente, asistencia al comité de farmacia de la clínica. b) La segunda, se centró en analizar el consumo de antimicrobianos en el período enerodiciembre del año 2006 y elaborar un manual de utilización racional de antibióticos de uso restringido, de acuerdo a los fármacos seleccionados por los infectólogos de la clínica. El manual de utilización racional de antibióticos de uso restringido abarcó diez agentes antimicrobianos: anfotericina B, cefepima, cefoperazona-sulbactam, colistina, ertapenem, imipenem-cilastatina, linezolid, meropenem, piperacilina-tazobactam y vancomicina. El estudio de consumo y la elaboración del manual, se realizó con el objetivo de entregar información farmacológica a los profesionales de la salud y la posibilidad de generar pautas, a futuro, respecto de una mejor utilización de estos agentes y disminuir la aparición de resistencia bacteriana

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4462_1.pdf: 969527 bytes, checksum: 2742833f24533974ca79f9689a36f81e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / A freqüente resistência das micobactérias atípicas às drogas antituberculose, a ausência de esquemas terapêuticos eficazes e os estudos concernentes à aplicação de novas moléculas sobre micobactérias motivaram a determinação do efeito pós-antibiótico (EPA) in vitro de um novo derivado 1,2,4-oxadiazol-hidrazida (HHBA) e de suas associações com o quimioterápico ofloxacino (OFLO), uma fluorquinolona, e o m-Flúor-Fenilalanina (m-FFen), um inibidor da síntese da parede celular. O EPA foi avaliado após o tempo de contato de 2 e 4 horas frente ao Mycobacterium fortuitum e ao Mycobacterium smegmatis. As drogas foram testadas em concentrações equivalentes a concentração inibitória mínima (CIM). Considerado um parâmetro farmacodinâmico de grande relevância em situações clínicas, o EPA exerce a sua maior importância na escolha do antimicrobiano, nos regimes de dosagem terapêutica e nos seus intervalos de administração. O EPA pode ser induzido pela exposição do microrganismo ao antimicrobiano por um período de tempo determinado, seguindo da rápida retirada deste antimicrobiano, e o acompanhamento do recrescimento deste microrganismo. Matematicamente, o EPA é calculado pela fórmula: EPA= T C, em que T representa o tempo necessário para que a cultura teste cresça o equivalente a 1log10 em relação à numeração efetuada logo após a retirada da droga e C representa o tempo necessário para que a cultura controle cresça igualmente de 1log10. O que concerne ao efeito pós-antibiótico sobre o M. fortuitum após 2 horas de contato a OFLO apresentou os maiores valores de EPA, 8,60 ± 1,50 horas. Todas as associações mostraram-se antagônicas com exceção da HHBA+m-FFen que induziu a um EPA indiferente de 1,20 ± 1,20 horas. Após 4 horas de contato, a OFLO continuou apresentando a melhor atividade cujo EPA foi equivalente a 11,50 ± 2,00 horas, sua associação com a m-FFen apresentou um EPA indiferente de 11,00 ± 2,70 horas. As demais associações apresentaram-se antagônicas. O efeito pós-antibiótico do HHBA frente ao M. smegmatis após um contato de 2 horas foi de 2,40 ± 2,80 horas e a sua associação com a OFLO mostrou ser a mais efetiva cujo valor do EPA foi de 3,30± 2,80 horas. Após 4 horas de contato o EPA do HHBA não foi alterado, permanecendo em 3,30 ± 2,60 horas. O aumento do tempo de contato induziu um aumento dos valores do EPA para as drogas estudadas e suas associações, exceto o m-FFen, as associações OFLO-HHBA e OFLO-HHBA-m-FFen frente ao M. smegmatis, e o HHBA e sua associação HHBA-m-FFen, frente ao M. fortuitum. A ofloxacino foi o antimicrobiano que induziu os melhores valores de EPA para o M. fortuitum, bem como o HHBA foi o antimicrobiano que induziu os melhores valores de EPA para o M. smegmatis. O aumento do tempo de contato de 2 para 4 horas potencializou os EPAs das drogas estudadas.Todas as associações testadas apresentaram um caráter antagônico, exceto a associação OFLO-m-FFen após 4 horas de contato, frente o M. smegmatis. E os tempos de contatos escolhidos, bem como a CMI utilizada para os ensaios, foram insuficientes para que as drogas e suas associações pudessem induzir EPAs sinérgicos. Como os mecanismos do EPA ainda não estão totalmente definidos é difícil lançar hipóteses acerca do qual ou quais mecanismos estão implicados na variação dos resultados dos EPAs de drogas testadas em associação

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-06-07T17:54:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Luciana Lopes Silveira.pdf: 1368404 bytes, checksum: d3d6d9f510ef85fed12736dbfea768f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-07T17:54:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Luciana Lopes Silveira.pdf: 1368404 bytes, checksum: d3d6d9f510ef85fed12736dbfea768f2 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / FACEPE / As proteases são enzimas proteolíticas, as quais apresentam grande interesse pelas indústrias em diversas áreas. As proteases que possuem a capacidade de degradação da hélice de colágeno tem sido estudadas para a aplicação dos peptídeos de colágeno, no tratamento de doenças como: hipertensão, inibindo a enzima conversora de angiotensina II (ECA), assim como da própria enzima pelas indústrias farmacêuticas em tratamentos de feridas com necrose ou no tratamento da doença de Dupuytren. As proteases com atividade colagenolítica, capazes de degradar o colágeno, podem ser obtidas através de diversas fontes, e dentre estas, os micro-organismos são escolhidos devido à sua diversidade bioquímica e susceptibilidade para a manipulação genética. Devido ao potencial dessas enzimas, existe uma procura de novas fontes microbianas, as quais seja possível obter a protease com rapidez e baixo custo no processo de purificação. O presente trabalho teve como objetivos purificar e caracterizar protease com atividade colagenolítica obtida através da Actinobactéria Actinomadura sp., isolada do solo Licania rígida BETH. O microorganismo foi cultivado em meio a base de farinha de soja, líquido metabólico foi concentrado através do processo de precipitação com acetona (70%), seguida foi purificado parcialmente pelo processo de cromatografia de troca iônica em resina de DEAE-sephadex (G-50). A protease com atividade colagenolítica foi eluida, utilizando gradiente de concentração, com solução de NaCl 0,1M em tampão Tris-HCl, pH 8,0. O cromatograma foi obtido através da leitura no comprimento de onda de 280nm. A tabela de purificação foi obtida através da realização da atividade proteásica, da colagenolítica e da concentração proteica em cada etapa de purificação. Para a determinação do peso molecular e da pureza foi realizado a eletroforese em gel (SDS-page). A caracterização da amostra purificada foi realizada através de ensaios de: termoestabilidade, a enzima foi submetida às termperaturas de 50° - 80°C durante 30 minutos; temperatura ótima, nas temperaturas de 30°C – 80°C; pH ótimo, variando o pH5-6 (0,1M do tampão de ácido acético- acetato de sódio ) e 7-9 ( 0,1M do tampão Tris- HCl); efeito de inibidores, utilizando os inibidores fluoreto de fenilmetanosufonil, dodecil sulfato de sódio, beta- mercaptoetanol e pepstatina em contato com a enzima durante 60 minutos; o efeito de íons metálicos, foi utilizado soluções com ions divalentes ( Fe 2+, Mg 2+, Ca 2+, Zn2+) em contato com a enzima durante 60 minutos; e efeito de frequência ultrassônica, enzima submetida a frequência ultrassônica (40 kHz), em diferentes intervalos de tempo. Os resultados obtidos demonstraram que a protease é possível purificar utilizando o gradiente de de NaCl 0,1M em tampão Tris-HCl, pH 8,0, assim como uma atividade colagenolítica específica de 31.094,89 U/mg de proteína, com um fator de purificação de 9,81. Na eletroforese foi possível observar duas bandas, com pesos moleculares de 20 KDa e 45,0 KDa. A enzima apresentou termoestabilidade até 60°C, a temperatura ótima de atividade em 50°C. Sob condições de variação de pH, a atividade enzimática apresentou maiores atividade colagenolítica em faixa de pH 7 a 8, reduzindo bruscamente em pH 9,0. Quando submetida ao efeito da frequência ultrassônica, a enzima após 10 minutos apresentou aumento de 50% de sua atividade colagenolítica inicial. Sendo assim, essa nova biomolécula apresenta potencial biotecnológico, uma vez que o processo de produção envolve um substrato, a farinha de soja, que é amplamente encontrado no Brasil, e o protocolo de purificação desenvolvido foi eficaz para a obtenção da protease com atividade colagenolítica. / Proteases are proteolytic enzymes, which have high interest by industries in various fields. Protease having the helix collagen degradation capacity has been studied for application of the collagen peptides in the treatment of diseases such as hypertension, inhibiting the angiotensin II converting enzyme (ACE), the enzyme itself as well as by pharmaceutical industries in treatment of wounds with necrosis or treatment of Dupuytren's disease. Proteases with collagenolytic activity capable of degrading the collagen can be obtained from several sources, and among them, the micro-organisms are chosen because of their biochemical diversity and susceptibility to genetic manipulation. Because of the potential of these enzymes, there is a demand for new microbial sources, which can be obtained with the protease speed and low cost in the purification process. This study aimed to purify and characterize protease with collagenolytic activity obtained by actinobacteria Actinomadura sp., Isolated from soil of Licania rigida BETH. The microorganism was grown in medium based on soybean flour, metabolic liquid was concentrated by precipitation process with acetone (70%), then was partially purified by ion exchange chromatography procedure resin DEAE-Sephadex (G-50). The protease collagenolytic activity was eluted with using a concentration gradient with 0.1M NaCl solution in Tris-HCl buffer, pH 8.0. The chromatogram was obtained by scanning the wavelength of 280nm. The purification table is obtained by performing the protease activity of collagenolytic and the protein concentration in each purification step. To determine the molecular weight and the purity was conducted gel electrophoresis (SDS-PAGE). Characterization of the purified sample was conducted through tests: thermal stability, the enzyme was subjected to termperaturas 50 ° - 80 ° C for 30 minutes; optimum temperature at temperatures of 30 ° C - 80 ° C; optimum pH, varying the pH5-6 (0.1 M sodium acetate acetic acid-buffer) and 7-9 (0.1 M of buffer Tris- HCl); effect of inhibitors using the inhibitors fenilmetanosufonil fluoride, sodium dodecyl sulfate, beta-mercaptoethanol and pepstatin contact with the enzyme for 60 minutes; The effect of metal ions, was used solutions with divalent ions (Fe 2+, Mg 2+, Ca 2+, Zn 2+) in contact with the enzyme for 60 minutes; ultrasonic frequency and effect, subject enzyme ultrasonic frequency (40 kHz) at different time intervals. The results obtained demonstrated that the protease can be purified using gradient of 0.1 M NaCl in Tris-HCl buffer, pH 8.0, as a specific collagenolytic activity 31094.89 U / mg protein with a factor of purification 9.81. The electrophoresis was observed two bands with molecular weights of 20 KDa and 45 KDa. The enzyme showed thermostability at 60 ° C, the optimum temperature for activity at 50 ° C. Under conditions of varying pH, the enzyme activity showed higher collagenolytic activity in the pH range 7 to 8, reducing sharply at pH 9.0. When submitted to the effect of ultrasonic frequency, the enzyme after 10 minutes increased by 50% from its initial collagenolytic activity. Therefore, this presents new biotechnological potential biomolecule, since the production process involves a substrate, soybean flour, which is widely found in Brazil, and purification protocol was developed to obtain effective protease with collagenolytic activity.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-05T17:22:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação SABRINA _Versao Final.pdf: 1211156 bytes, checksum: e04bb37df92566361a9f4180ea5bba4b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-05T17:22:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação SABRINA _Versao Final.pdf: 1211156 bytes, checksum: e04bb37df92566361a9f4180ea5bba4b (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / CAPES / Tendo em vista o aumento da resistência bacteriana se busca alternativas terapêuticas, entre as quais se destaca o uso de produtos naturais. A quitosana é um biopolímero natural que apresenta biocompatibilidade e ação antimicrobiana, conhecida. Por outro lado, estudos estão sendo realizados utilizando óleos essenciais que são usados na medicina popular com uma aplicação bastante difundida. Os óleos essenciais apresentam diversas atividades biológicas como ação antimicrobiana, anti-infamatória, regenerativa, hidratante, anti-helmíntica entre várias outras ações. Cymbopongo martinii (CMEO), é uma planta herbácea da família das gramíneas que dele é extraído o óleo popularmente conhecido como Palmarosa que apresenta ação antimicrobiana frente a diversos microrganismos. Neste contexto, a presente pesquisa objetivou avaliar o potencial antimicrobiano, citotóxica do gel de quitosana enriquecido com óleo essencial de Cymbopogon martini. As quitosanas de alto e de baixo peso molar (QAB) adquiridas da Sigma® foram misturadas 1:1 e diluídas em ácido acético 1% para obtenção de um composto de quitosana (QAB) a 10mg/mL. O composto de quitosana obtido foi caracterizado quanto suas características estruturais, grau de desacetilação e peso molar, respectivamente, pelas técnicas de espectofotometria de infravermelho, ressonância magnetca nuclear de hidrogêncio e viscosidade. A quitosana apresentou grupos funcionais característicos do polímero, grau de desacetilação de 80,66% e peso molar de 6,03 x 104g/mol. CMEO foi adquirido da Ferquima®, que disponibilizou sua composição química, o qual teve como composto predominante Geraniol (81,8%). A atividade antimicrobiana da QAB, do CMEO e da associação QAB+CMEO foi determinada através da técnica de microdiluição, obtendo-se as Concentrações Inibitória Mínima (CIM) e Bactericia Mínima (CBM), frente cepas de Staphylococcus aureus e Escherichia coli. Os valores de CIM e de CBM frente à S. aureus foram iguais para QAB (4mg/mL) e para E. coli foram respectivamente de 2mg/mL e de 4mg/mL. Na determinação do CIM, utilizando o OECM frente a S.aureus e E. coli, foram encontradas as concentrações de 13,5 mg/mL e 22,5 mg/mL respectivamente. Contudo, a CBM não foi encontrada para o OECM, tanto para S. aureus como para E. coli, demonstrando que EOCM apresentou apenas efeito bacteriostático frente as cepas testes. Os valores de CIM e de CBM frente à cepa de S. aureus para a associação QAB + OECM 3mg/mL+ 13,3mg/mL e de 5mg/mL + 22,5 mg/mL, respectivamente. Para E. coli exposta a QAB+EOCM as concentrações CIM e CBM foram de 1,5mg/mL + 6,75mg/mL e de 4mg/mL + 18,5mg/mL, respectivamente. A análise para presença de sinergismo entre OECM e QAB foi realizada por planejamento fatorial 22 usando concentrações sub-CIM de ambas as drogas. Verificou-se que a associação foi classificada como indiferente. O potencial irritante das susbtâncias testes foi determinado através do teste da Membrana Corioalontoide do ovo de galinha (HET-CAM) fecundado e incubado por um período de 9-10 dias. Para determinar o grau de irritabilidade pelo HET-CAM, foram observadas a presença de lise, coagulação e hemorragia, até 5 minutos após a exposição às substâncias testes. Todas as substâncias testes foram não irritantes. De acordo com os resultados obtidos pode-se concluir que a quitosana não teve efeito de sinergismo esperado em associação com óleo, contudo a associação QAB + OECM conferiu um efeito bactericida ao óleo essencial, antes não observada. / In view of the increase in bacterial resistance, alternative therapies have been studied, among which stands out the use of natural products. Chitosan is a natural biopolymer that has biocompatibility and known antimicrobial action. Furthermore, studies are being carried out using essential oils that are used in folk medicine with a widespread application. Essential oils have various biological activities such as antimicrobial, anti-inflammatory-regenerative, moisturizing, anthelmintic among many other actions. Cymbopogon martinii (CM) is a family of herbaceous grasses that it is extracted from the oil popularly known as Palmarosa which has antimicrobial activity against various microorganisms. In this context, the present study aimed to evaluate the antimicrobial activity and cytotoxicity of chitosan gel enriched with essential oil of Cymbopogon martini. The chitosan high and low molecular weight (CHL), purchased from Sigma®, were mixed 1: 1 and diluted in 1% acetic acid to obtain a solution of 10mg / ml of polymer. The chitosan obtained was characterized about the structural characteristics, deacetylation degree and molecular weight, respectively, by techniques of IR spectrophotometry, nuclear magnetic resonance of hydrogen and viscosity. Chitosan has the characteristic functional groups of the polymer, degree of deacetylation of 80.66% and molecular weight of 6.03 x 104g / mol. Essential oil of Cymbopogon martinii was purchased from Ferquima®, which released its chemical composition, which has as the predominant compound Geraniol (81.8%). The antimicrobial activity of the CHL, the EOCM and CHL + EOCM association was determined by the microdilution technique, obtaining the Minimum Inhibitory Concentrations (MIC) and Minimum Bactericia (MBC) against Staphylococcus aureus and Escherichia coli. The values of MIC and MBC against S. aureus were the same for CHL (4mg/mL) and E. coli were respectively 2mg/mL and 4mg/mL. In the determination of MIC using EOCM against S. aureus and E. coli were found concentrations of 13.5 mg/mL and 22.5 mg/ml respectively. However, MBC was not found to EOCM for both S. aureus and E. coli, demonstrating that EOCM showed only bacteriostatic effect. The MIC and MBC values to S. aureus for CHL association EOCM were 3mg/mL + 13,3mg/mL and 5 mg/Ml + 22.5 mg/mL, respectively. For E. coli exposed to CHL + EOCM the MIC and MBC concentrations were 1.5 mg/mL + 6,75mg/mL and 4mg/mL + 18,5mg/mL, respectively. The analysis to measure the synergy between EOCM and CHL was performed by factorial analysis using the sub-MIC concentrations for either drug and the association of drugs was classified as indifferent. It was also examined the cytotoxicity of the drugs by Hen's Egg Test – Chorioallantoic Membrane (HET-CAM) fertilized and incubated for a period of 9-10 days. To determine the degree of irritability by the HET-CAM were observed the presence of lysis, coagulation and bleeding, up to 5 minutes after exposure to the test substances. All test substances were non-irritant. According to the results it can be concluded that the chitosan was not expected synergistic effect in combination with oil, yet the association CHL + EOCM gave a bactericidal effect to the essential oil, not previously observed.