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Micro-organismos marinhos como fonte de metabólitos bioativos: atividade anti-trichomonas vaginalis, antibiofilme e antibaceriana

Senger, Franciane Rios January 2016 (has links)
Nos últimos anos, os metabólitos isolados de fungos marinhos vêm ganhando considerável atenção em razão de possuírem estruturas químicas únicas com diversas atividades biológicas já descritas, incentivando novas pesquisas na área. A tricomoníase é a doença sexualmente transmissível (DST) de origem não viral mais comum no mundo, estando associada a sérias consequências à saúde, sendo relatado um aumento no número de isolados clínicos resistentes ao tratamento de escolha. Infecções causadas por bactérias com diferentes mecanismos de resistência, representam um grande desafio para a saúde pública atual, acarretando em altas taxas de mortalidade e morbidade. As bactérias patogênicas dispõem de fatores de virulência, como a formação de biofilme, que agravam infecções tornando-as persistentes. Devido ao potencial biológico dos produtos de origem marinha e a importância dessas infecções, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade anti-T. vaginalis, antimicrobiana e antibiofilme de moléculas obtidas da fermentação de fungos associados a organismos marinhos. As 14 cepas fúngicas foram isoladas de esponjas e corais marinhos, obtidos da costa do estado de Alagoas, Brasil. Após produção do metabólito, o micélio foi separado do meio. O micélio foi extraído com metanol e o meio com acetato de etila. As frações foram submetidas aos ensaios de atividade anti-T.vaginalis, antimicrobiana e antibiofilme (inibição da formação e erradicação). As frações que demonstraram atividade foram submetidas ao ensaio de hemólise, avaliação da citotoxicidade (HMVII e Vero) e toxicidade em modelo de Galleria mellonella. A fração que demonstrou os melhores resultados nos ensaios de atividade foi submetida ao fracionamento bioguiado. As frações orgânicas dos fungos Aspergillus niger (FMPV 03) e complexo Trichoderma harzianum/Hypocrea lixii (FMPV 09) foram ativas frente ao T. vaginalis ATCC 30236, com valores de MIC de 2 mg/mL e 1 mg/mL, respectivamente. Quando investigadas, essas frações mantiveram a atividade frente ao isolado clínico resistente ao metronidazol (TV-LACM2R), apresentado os mesmo valores de MIC encontrados para o isolado ATCC. Para a atividade antimicrobiana, as frações orgânicas do Aspergillus niger (FMPV 03), Aspergillus tubingensis (FMPV 06), complexo Trichoderma harzianu/Hypocrea lixii (FMPV 09) e Aspergillus sydowii (FMPV 10) foram ativas contra S. epidermidis ATCC 35984. Ainda, frente a P. aeruginosa ATCC 27853 somente as frações orgânicas do Aspergillus niger (FMPV 03) e Aspergillus tubingensis (FMPV 06) demonstraram atividade. Neste ensaio, para ambas as bactérias, os valores de MIC não ultrapassaram 1,5 mg/mL. A atividade destas frações também foi observada frente às mesmas bactérias no ensaio de antiformação de biofilme, já que ocorreu a morte das células. A habilidade de erradicar biofilmes foi detectada somente para a fração orgânica do fungo Aspergillus flavus (FMPV 01), o qual foi capaz de remover 52% do biofilme já formado de S. epidermidis ATCC 35984. A ausência de hemólise dos eritrócitos foi observada em todas as frações ativas estudadas. Na avaliação da citotoxicidade in vitro frente às linhagens celulares HMVII e Vero, apenas a fração orgânica do Aspergillus niger (FMPV 03), não apresentou efeito citotóxico. No entanto, no ensaio de avaliação da toxicidade in vivo, nenhuma das amostras testadas causou redução na sobrevivência das larvas de Galleria mellonella. Então, a fração orgânica do fungo Aspergillus niger (FMPV 03) foi submetida ao fracionamento bioguiado utilizando coluna RP-18. Sete frações foram obtidas, sendo que a primeira (100% água), foi ativa contra T. vaginalis, S. epidermidis e P. aeruginosa. Quando submetida à Cromatografia em Camada Delgada (CCD), demonstrou quatro bandas que foram coradas com anisaldeído-ácido sulfúrico e ninhidrina. Além disso, a fração 100% água não demonstrou redução da sobrevivência das larvas de Galleria mellonella, nas três concentrações testadas. Portanto, a gama de atividades relatadas corrobora o potencial dos fungos marinhos na produção de moléculas bioativas. / In recent years, the isolated metabolites from marine fungi have been attracted considerable attention due to unique chemical structures with diverse biological activities, encouraging further research in the area. Trichomoniasis is the most prevalent non-viral sexually transmitted disease (STD) worldwide. This has been linked to serious health consequences and an increase in the number of clinical isolates resistant to the treatment of choice has been reported. Infections caused by bacteria with different resistance mechanisms represent a major challenge to the current public health, resulting in high rates of mortality and morbidity. Pathogenic bacteria present virulence factors, such as biofilm formation, which migth enhance the persistence of infections. Due to the biological potential of marine products and the importance of these infections, the aim of this study was to evaluate the anti-T. vaginalis, antimicrobial and antibiofilm activities of the obtained molecule from the fermentation of fungi associated with marine organism. The 14 fungal strains were isolated from sponges and corals marine obtained from the coast of Alagoas, Brazil. After production of the metabolite the mycelium was separated from the medium. The mycelium was extracted with methanol and the medium with ethyl acetate. The fractions were subjected to the assays anti-T. vaginalis, antimicrobial and antibiofilm (inhibition of the formation and eradication) activities. The fractions that showed activity were subjected to the assays of hemolysis, cytotoxicity evaluation (HMVII and Vero) and toxicity Galleria mellonella model. The fraction which showed the best results in activity assays was subjected to fractionation bioguided. The organic fraction of Aspergillus niger (FMPV 03) and Trichoderma harzianum/Hypocrea lixii complex (FMPV 09) were active against T. vaginalis ATCC 30236 with MIC values of 2 mg/mL and 1 mg/mL, respectively. When investigated, these fractions maintained activity against resistant clinical isolate to metronidazole (TV-LACM2R), presented the same MIC values found to isolate ATCC. For the antimicrobial activity, the organic fractions of Aspergillus niger (FMPV 03), Aspergillus tubingensis (FMPV 06), Trichoderma harzianum/Hypocrea lixii complex (FMPV 09) and Aspergillus sydowii (FMPV 10) were active against S. epidermidis ATCC 35984. Even, against P. aeruginosa ATCC 27853 only the organic fractions of Aspergillus niger (FMPV 03) and Aspergillus tubingensis (FMPV 06) demonstrated activity. In this test, for both bacteria, MIC values did not exceed 1.5 mg/mL. The activity of these fractions was also observed across the same bacteria in the antibiofilm formation assay, since cell death occurred. The ability to eradicate biofilms was detected only for the organic fraction of the fungus Aspergillus flavus (FMPV 01) which was able to remove 52% of the already formed biofilm of S. epidermidis ATCC 35984. The absence of hemolysis of red cells was observed in all active fractions studied. In the assessment of cytotoxicity in vitro against the cell lines HMVII and Vero, only the organic fraction of Aspergillus niger (FMPV 03), showed no cytotoxic effect. However, in the test evaluation of in vivo toxicity, none of the samples tested caused a reduction in the survival of the larvae of Galleria mellonella. Then, the organic fraction of the fungus Aspergillus niger (FMPV 03) was submitted to bioguided fractionation using RP-18 column. Seven fractions were obtained, of which the first (100% water), was active against T. vaginalis, S. epidermidis e P. aruginosa. When subjected to thin layer chromatography (TLC) showed four bands were stained with ninhydrin and anisaldehyde-sulfuric acid. In addition, 100% water fraction showed no reduction of the survival of larvae of Galleria mellonella at the three concentrations tested. Therefore, the range of activities reported corroborates the potential of marine fungi to produce bioactive molecules.
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Antibiofilm activity of lichen secondary metabolites / Activité anti-biofilm des métabolites secondaires de lichen

Sweidan, Alaa 20 July 2017 (has links)
Les bactéries buccales n'infectent pas seulement la bouche mais y resident. Elles peuvent également passer dans la voie sanguine et atteindre des organes secondaires. S’il n'est pas traité, le biofilm dentaire peut provoquer une inflammation destructrice dans la cavité buccale, entrainant de graves complications médicales. Dans ce biofilm, Streptococcus gordonii, colonisateur oral primaire, constitue la plate-forme sur laquelle des colonisateurs pathogènes tardifs comme Porphyromonas gingivalis, l'agent causal des maladies parodontales, se lieront. L'objectif de la première partie de la thèse était de déterminer l'activité antibactérienne de onze composés de lichens appartenant à différentes familles chimiques, pour découvrir de nouveaux antibiotiques pouvant combattre ces bactéries buccales. Nous avons montré que trois composés avaient des activités antibactériennes prometteuses. L'acide psoromique enregistrait les CMIs le plus faibles. De nouveaux analogues de butyrolactone ont ensuite été conçus et synthétisés sur la base des composés antibactériens licheniques connus, les acides lichesteriniques, en substituant différents groupes fonctionnels sur le cycle butyrolactone pour améliorer son activité sur S. gordonii et P. gingivalis. Parmi les dérivés, B-12 et B-13 avaient la plus faible CMI où ils se sont révélés être des bactéricides plus forts, 2 à 3 fois plus, que l'antibiotique, doxycycline. B-12 et B-13 étaient également les plus efficaces vis-à-vis de P. gingivalis. La cytotoxicité de ces 2 composés a ensuite été vérifiée contre les cellulaires épithéliales gingivales humaines et les macrophages. Ils ne présentaient pas de toxicité contre les cellules testées. Une étude préliminaire de relation structure-activité a révélé le double rôle important apporté par deux substituants, chaîne alkyle en C5 et groupe carboxyle en C4 positions, dans leur mécanisme d'action. Ceci a été suivi par l'étude de l’activité antibiofilmique de B-12 et B-13 contre les deux souches orales en utilisant un test de cristal violet et microscopie confocale. Les deux dérivés ont montré, à une concentration plus faible, une inhibition maximale de la formation du biofilm, LCMI, de 9.38 μg/mL contre S. gordonii et 1.17 μg/mL contre P. gingivalis. Cependant, lorsque des concentrations sous-inhibitrices de B-12 et B-13 ont été utilisées, nous avons démontré que les deux souches étudiées pouvaient former des biofilms in vitro, accompagné d’une diminution de l'expression des gènes impliqués dans l'adhésion et la formation de biofilm. Pour mieux comprendre les mécanismes d'action des butyrolactones, nous avons étudié la localisation bactérienne du composé B-13 en synthétisant un B-13 marqué au NBD (4-nitro-benzo [1,2,5] oxadiazole) fluorescent conservant son activité antibactérienne. Par microscopie confocale et HPLC, nous avons montré que ce composé se lie à la surface cellulaire de S. gordonii. Ensuite, B-13 induit une rupture de la paroi cellulaire conduisant à la libération des constituants bactériens et par conséquent, à la mort de S. gordonii, une bactérie Gram-positive. L'expression de deux gènes, murA et alr, impliqués dans la synthèse de la paroi cellulaire, a été modifiée en présence de cette butyrolactone. Les bactéries Gram négatives telles que P. gingivalis ont également montré des cellules abimées présentant une rupture de la paroi en présence de B-13, ce qui suggère que cette butyrolactone agit sur des Gram-positives et Gram-négatives avec une plus grande efficacité contre les Gram-négatives. En outre, nous avons également démontré que l'analogue de B-13, B-12, induit une perturbation de la morphologie de P. gingivalis et S. gordonii. Toutes ces études ont démontré que les butyrolactones dérivées de lichen peuvent être proposés comme des composés antibactériens puissants contre les agents pathogènes oraux qui causent des complications médicales graves. / The oral bacteria do not only infect the mouth and reside there, but also travel via the blood and reach distant body organs. If left untreated, the dental biofilm that can cause destructive inflammation in the oral cavity may result in serious systemic medical complications. In dental biofilm, Streptococcus gordonii, a primary oral colonizer, constitutes the platform on which late pathogenic colonizers like Porphyromonas gingivalis, the causative agent of periodontal diseases, will bind. The aim of the first study was to determine the antibacterial activity of eleven natural lichen compounds belonging to different chemical families to uncover new antibiotics which can fight against the oral bacteria. Three compounds were shown to have promising antibacterial activities where psoromic acid had the lowest MICs of 11.72 and 5.86 µg/mL against S. gordonii and P. gingivalis, respectively. Novel butyrolactone analogues were then designed and synthesized based on the known lichen antibacterial compounds, lichesterinic acids (B-10 and B-11), by substituting different functional groups on the butyrolactone ring trying to enhance its activity on S. gordonii and P. gingivalis.. Among the derivatives, B-12 and B-13 had the lowest MIC of 9.38 µg/mL where they have shown to be stronger bactericidals, by 2-3 times, than the reference antibiotic, doxycycline. B-12 and B-13 were also the most efficient on P. gingivalis exhibiting MIC of 0.037 and 0.293 µg/mL and MBC of 1.17 and 0.586 µg/mL, respectively. These 2 compounds were then checked for their cytotoxicity against human gingival epithelial cells and macrophages by MTT and LDH assays which confirmed their safety against the tested cell lines. A preliminary study of the structure-activity relationships unveiled the important dual role contributed by two substituents, alkyl chain at C4 and carboxyl group at C5 positions, in their mechanism of action. This was followed by the investigation of B-12 and B-13 for their antibiofilm activity against both oral strains using crystal violet assay and confocal microscopy. Both derivatives displayed a lowest concentration with maximal biofilm inhibition, LCMI, of 9.38 µg/mL against S. gordonii and 1.17 µg/mL against P. gingivalis. However, when sub-inhibitory concentrations of B-12 and B-13 were used, we demonstrated that the two investigated strains were able to form biofilms in vitro. Indeed, this antibiofilm activity decreased as indicated by the expression of the genes implicated in adhesion and biofilm formation. To better understand the mechanism of action of butyrolactones, we have investigated B-13 bacterial localization by synthesizing a fluorescently labeled B-13 with NBD (4-nitro-benzo[1,2,5]oxadiazole) conserving its antibacterial activity. By confocal microscope, we showed that this compound binds to S. gordonii cell surface and this was also demonstrated by HPLC analysis. By adhering to cell surface, B-13 induced cell wall disruption leading to the release of bacterial constituents and consequently, the death of S. gordonii, a Gram-positive bacterium. The expression of two genes, murA and alr, implicated in cell wall synthesis, was modified in the presence of this butyrolactone. Gram-negative bacteria such as P. gingivalis showed also cracked and ruptured cells in the presence of B-13, suggesting that this butyrolactone acts on Gram-positive and Gram-negative strains, but with greater efficacy against the Gram-negatives. Besides, we also demonstrated that the analogue of B-13, B-12, has also induced disruption of P. gingivalis and S. gordonii. All these studies demonstrated that butyrolactones derived from a lichen metabolite can be proposed as potent antibacterial agents against oral pathogens causing serious medical complications.
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Caracterização do potencial antifúngico e antibiofilme do sal imidazólico cloreto de 1-metil-3-hexadecilimidazol (C16MlmCl) e das fraçoes purificadas de mate (Ilex paraguariensis A. St. Hil.) frente a células de biofilme de Candida tropicalis / Description of potential and antifungal antibiofilm imidazolium Salt 1- Methyl-3 – octilimidazolium chloride(c16mimcl) and purified fraction of mate ( ilez paraguariensis to. St. Hil.) front of cells biofilme Candida Tropicalis

Bergamo, Vanessa Zafaneli January 2014 (has links)
Em contraste com a vasta descrição na literatura científica dos biofilmes bacterianos, poucos trabalhos focam o estudo da formação e as estratégias de inibição da constituição do biofilme fúngico. Este trabalho objetiva a caracterização do potencial antifúngico e antibiofilme do sal imidazólico 1-metil-3-octilimidazol cloreto (C16MImCl), e das frações (F70 e F90) purificadas de saponinas mate (Ilex paraguariensis A. st. Hil.), frente a células de biofilme de seis isolados clínicos de Candida tropicalis. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) do C16MImCl foi de 0,014μg/mL frente às células planctônicas, ao passo que as Frações de Saponinas da Erva Mate (FSEM) não apresentaram atividade antifúngica. Utilizando o cateter traqueal (CT) como corpo de prova, foi utilizado para avaliar a capacidade de inibição e remoção do biofilme. Avaliou-se também a Concentração Mínima de Erradicação do Biofilme (CMEB) para remoção do biofilme pré-formado pelo método da microplaca. Para a atividade antibiofilme foi observado que o C16MImCl, apresentou melhor resultado quando comparado ao fluconazol. As FSEM também apresentaram atividade antibiofilme quando comparados ao fluconazol, entretanto menores do que o tensoativo sintético Pela análise dos resultados de CMEB, o C16MImCl foi o composto com maior capacidade de erradicar o biofilme pré-formado, na concentração de 0,9 μg/mL (92% a 100% de remoção do biofilme). Os demais compostos testados (fluconazol, FEM e a água) não apresentaram atividade removedora, observando-se valores menores que 80% de remoção. Tanto as concentrações nas quais C16MImCl inibiu as células planctônicas (0,014 μg/mL) como as de biofilme (0,028 -0,225 μg/mL) foram mais baixas que as obtidas pelo fluconazol. Os resultados obtidos demonstram a potencialidade destes tensoativos, principalmente o C16MImCl, que demonstrou baixa toxicidade e provável mecanismo de ação sobre a síntese do ergosterol. Assim, é possível afirmarmos que estes tensoativos representam uma potencial alternativa para o controle químico de fungos leveduriformes, especialmente as ocasionadas por células de biofilme por C. tropicalis. / In contrast to the extensive description in the literature of bacterial biofilms, few works focus on the study of the formation and strategies for inhibiting the formation of fungal biofilms. This work aims to characterize the antifungal potential and antibiofilm the imidazole salt 1 - methyl - 3 - octilimidazol chloride (C16MImCl), and fractions (F70 and F90) purified saponins mate (Ilex paraguariensis A. st. Hil.), against to biofilm cells of six clinical isolates of Candida tropicalis. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of C16MImCl was 0.014 mg / mL to planktonic cells, whereas the Saponin Fractions of Yerba Mate (SFYM) showed no antifungal activity. Using the tracheal catheter (CT) as a specimen was used to evaluate the ability of the biofilm inhibition and removal. We also assessed the Minimum Biofilm Eradication Concentration (MBEC) to remove the preformed biofilms by the microplate method. For antibiofilm activity was observed that C16MImCl, showed better results when compared to fluconazole. The SFYM also had antibiofilm activity when compared to fluconazole, however smaller than the synthetic surfactant. By analyzing the results MBEC, the compound C16MImCl was capacity to eradicate pre- formed biofilm in a concentration of 0.9 mg / mL (92% to 100% biofilm removal) The other tested compounds (fluconazole, SFYM and water) showed no activity remover, observing less than 80 % removal values. Both concentrations at which they inhibit planktonic cells C16MImCl (0.014 μg/mL) and the biofilm (0.028 -0.225 μg/ml) were lower than those obtained by fluconazole. The results obtained demonstrate the potential of these surfactants, especially C16MImCl, which demonstrated low toxicity and probable mechanism of action on the synthesis of ergosterol. Thus, it is possible to assert that these surfactants are a potential alternative to chemical control of yeasts, especially those caused by biofilm cells of C. tropicalis.
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Micro-organismos marinhos como fonte de metabólitos bioativos: atividade anti-trichomonas vaginalis, antibiofilme e antibaceriana

Senger, Franciane Rios January 2016 (has links)
Nos últimos anos, os metabólitos isolados de fungos marinhos vêm ganhando considerável atenção em razão de possuírem estruturas químicas únicas com diversas atividades biológicas já descritas, incentivando novas pesquisas na área. A tricomoníase é a doença sexualmente transmissível (DST) de origem não viral mais comum no mundo, estando associada a sérias consequências à saúde, sendo relatado um aumento no número de isolados clínicos resistentes ao tratamento de escolha. Infecções causadas por bactérias com diferentes mecanismos de resistência, representam um grande desafio para a saúde pública atual, acarretando em altas taxas de mortalidade e morbidade. As bactérias patogênicas dispõem de fatores de virulência, como a formação de biofilme, que agravam infecções tornando-as persistentes. Devido ao potencial biológico dos produtos de origem marinha e a importância dessas infecções, o objetivo deste estudo foi avaliar a atividade anti-T. vaginalis, antimicrobiana e antibiofilme de moléculas obtidas da fermentação de fungos associados a organismos marinhos. As 14 cepas fúngicas foram isoladas de esponjas e corais marinhos, obtidos da costa do estado de Alagoas, Brasil. Após produção do metabólito, o micélio foi separado do meio. O micélio foi extraído com metanol e o meio com acetato de etila. As frações foram submetidas aos ensaios de atividade anti-T.vaginalis, antimicrobiana e antibiofilme (inibição da formação e erradicação). As frações que demonstraram atividade foram submetidas ao ensaio de hemólise, avaliação da citotoxicidade (HMVII e Vero) e toxicidade em modelo de Galleria mellonella. A fração que demonstrou os melhores resultados nos ensaios de atividade foi submetida ao fracionamento bioguiado. As frações orgânicas dos fungos Aspergillus niger (FMPV 03) e complexo Trichoderma harzianum/Hypocrea lixii (FMPV 09) foram ativas frente ao T. vaginalis ATCC 30236, com valores de MIC de 2 mg/mL e 1 mg/mL, respectivamente. Quando investigadas, essas frações mantiveram a atividade frente ao isolado clínico resistente ao metronidazol (TV-LACM2R), apresentado os mesmo valores de MIC encontrados para o isolado ATCC. Para a atividade antimicrobiana, as frações orgânicas do Aspergillus niger (FMPV 03), Aspergillus tubingensis (FMPV 06), complexo Trichoderma harzianu/Hypocrea lixii (FMPV 09) e Aspergillus sydowii (FMPV 10) foram ativas contra S. epidermidis ATCC 35984. Ainda, frente a P. aeruginosa ATCC 27853 somente as frações orgânicas do Aspergillus niger (FMPV 03) e Aspergillus tubingensis (FMPV 06) demonstraram atividade. Neste ensaio, para ambas as bactérias, os valores de MIC não ultrapassaram 1,5 mg/mL. A atividade destas frações também foi observada frente às mesmas bactérias no ensaio de antiformação de biofilme, já que ocorreu a morte das células. A habilidade de erradicar biofilmes foi detectada somente para a fração orgânica do fungo Aspergillus flavus (FMPV 01), o qual foi capaz de remover 52% do biofilme já formado de S. epidermidis ATCC 35984. A ausência de hemólise dos eritrócitos foi observada em todas as frações ativas estudadas. Na avaliação da citotoxicidade in vitro frente às linhagens celulares HMVII e Vero, apenas a fração orgânica do Aspergillus niger (FMPV 03), não apresentou efeito citotóxico. No entanto, no ensaio de avaliação da toxicidade in vivo, nenhuma das amostras testadas causou redução na sobrevivência das larvas de Galleria mellonella. Então, a fração orgânica do fungo Aspergillus niger (FMPV 03) foi submetida ao fracionamento bioguiado utilizando coluna RP-18. Sete frações foram obtidas, sendo que a primeira (100% água), foi ativa contra T. vaginalis, S. epidermidis e P. aeruginosa. Quando submetida à Cromatografia em Camada Delgada (CCD), demonstrou quatro bandas que foram coradas com anisaldeído-ácido sulfúrico e ninhidrina. Além disso, a fração 100% água não demonstrou redução da sobrevivência das larvas de Galleria mellonella, nas três concentrações testadas. Portanto, a gama de atividades relatadas corrobora o potencial dos fungos marinhos na produção de moléculas bioativas. / In recent years, the isolated metabolites from marine fungi have been attracted considerable attention due to unique chemical structures with diverse biological activities, encouraging further research in the area. Trichomoniasis is the most prevalent non-viral sexually transmitted disease (STD) worldwide. This has been linked to serious health consequences and an increase in the number of clinical isolates resistant to the treatment of choice has been reported. Infections caused by bacteria with different resistance mechanisms represent a major challenge to the current public health, resulting in high rates of mortality and morbidity. Pathogenic bacteria present virulence factors, such as biofilm formation, which migth enhance the persistence of infections. Due to the biological potential of marine products and the importance of these infections, the aim of this study was to evaluate the anti-T. vaginalis, antimicrobial and antibiofilm activities of the obtained molecule from the fermentation of fungi associated with marine organism. The 14 fungal strains were isolated from sponges and corals marine obtained from the coast of Alagoas, Brazil. After production of the metabolite the mycelium was separated from the medium. The mycelium was extracted with methanol and the medium with ethyl acetate. The fractions were subjected to the assays anti-T. vaginalis, antimicrobial and antibiofilm (inhibition of the formation and eradication) activities. The fractions that showed activity were subjected to the assays of hemolysis, cytotoxicity evaluation (HMVII and Vero) and toxicity Galleria mellonella model. The fraction which showed the best results in activity assays was subjected to fractionation bioguided. The organic fraction of Aspergillus niger (FMPV 03) and Trichoderma harzianum/Hypocrea lixii complex (FMPV 09) were active against T. vaginalis ATCC 30236 with MIC values of 2 mg/mL and 1 mg/mL, respectively. When investigated, these fractions maintained activity against resistant clinical isolate to metronidazole (TV-LACM2R), presented the same MIC values found to isolate ATCC. For the antimicrobial activity, the organic fractions of Aspergillus niger (FMPV 03), Aspergillus tubingensis (FMPV 06), Trichoderma harzianum/Hypocrea lixii complex (FMPV 09) and Aspergillus sydowii (FMPV 10) were active against S. epidermidis ATCC 35984. Even, against P. aeruginosa ATCC 27853 only the organic fractions of Aspergillus niger (FMPV 03) and Aspergillus tubingensis (FMPV 06) demonstrated activity. In this test, for both bacteria, MIC values did not exceed 1.5 mg/mL. The activity of these fractions was also observed across the same bacteria in the antibiofilm formation assay, since cell death occurred. The ability to eradicate biofilms was detected only for the organic fraction of the fungus Aspergillus flavus (FMPV 01) which was able to remove 52% of the already formed biofilm of S. epidermidis ATCC 35984. The absence of hemolysis of red cells was observed in all active fractions studied. In the assessment of cytotoxicity in vitro against the cell lines HMVII and Vero, only the organic fraction of Aspergillus niger (FMPV 03), showed no cytotoxic effect. However, in the test evaluation of in vivo toxicity, none of the samples tested caused a reduction in the survival of the larvae of Galleria mellonella. Then, the organic fraction of the fungus Aspergillus niger (FMPV 03) was submitted to bioguided fractionation using RP-18 column. Seven fractions were obtained, of which the first (100% water), was active against T. vaginalis, S. epidermidis e P. aruginosa. When subjected to thin layer chromatography (TLC) showed four bands were stained with ninhydrin and anisaldehyde-sulfuric acid. In addition, 100% water fraction showed no reduction of the survival of larvae of Galleria mellonella at the three concentrations tested. Therefore, the range of activities reported corroborates the potential of marine fungi to produce bioactive molecules.
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Caracterização do potencial antifúngico e antibiofilme do sal imidazólico cloreto de 1-metil-3-hexadecilimidazol (C16MlmCl) e das fraçoes purificadas de mate (Ilex paraguariensis A. St. Hil.) frente a células de biofilme de Candida tropicalis / Description of potential and antifungal antibiofilm imidazolium Salt 1- Methyl-3 – octilimidazolium chloride(c16mimcl) and purified fraction of mate ( ilez paraguariensis to. St. Hil.) front of cells biofilme Candida Tropicalis

Bergamo, Vanessa Zafaneli January 2014 (has links)
Em contraste com a vasta descrição na literatura científica dos biofilmes bacterianos, poucos trabalhos focam o estudo da formação e as estratégias de inibição da constituição do biofilme fúngico. Este trabalho objetiva a caracterização do potencial antifúngico e antibiofilme do sal imidazólico 1-metil-3-octilimidazol cloreto (C16MImCl), e das frações (F70 e F90) purificadas de saponinas mate (Ilex paraguariensis A. st. Hil.), frente a células de biofilme de seis isolados clínicos de Candida tropicalis. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) do C16MImCl foi de 0,014μg/mL frente às células planctônicas, ao passo que as Frações de Saponinas da Erva Mate (FSEM) não apresentaram atividade antifúngica. Utilizando o cateter traqueal (CT) como corpo de prova, foi utilizado para avaliar a capacidade de inibição e remoção do biofilme. Avaliou-se também a Concentração Mínima de Erradicação do Biofilme (CMEB) para remoção do biofilme pré-formado pelo método da microplaca. Para a atividade antibiofilme foi observado que o C16MImCl, apresentou melhor resultado quando comparado ao fluconazol. As FSEM também apresentaram atividade antibiofilme quando comparados ao fluconazol, entretanto menores do que o tensoativo sintético Pela análise dos resultados de CMEB, o C16MImCl foi o composto com maior capacidade de erradicar o biofilme pré-formado, na concentração de 0,9 μg/mL (92% a 100% de remoção do biofilme). Os demais compostos testados (fluconazol, FEM e a água) não apresentaram atividade removedora, observando-se valores menores que 80% de remoção. Tanto as concentrações nas quais C16MImCl inibiu as células planctônicas (0,014 μg/mL) como as de biofilme (0,028 -0,225 μg/mL) foram mais baixas que as obtidas pelo fluconazol. Os resultados obtidos demonstram a potencialidade destes tensoativos, principalmente o C16MImCl, que demonstrou baixa toxicidade e provável mecanismo de ação sobre a síntese do ergosterol. Assim, é possível afirmarmos que estes tensoativos representam uma potencial alternativa para o controle químico de fungos leveduriformes, especialmente as ocasionadas por células de biofilme por C. tropicalis. / In contrast to the extensive description in the literature of bacterial biofilms, few works focus on the study of the formation and strategies for inhibiting the formation of fungal biofilms. This work aims to characterize the antifungal potential and antibiofilm the imidazole salt 1 - methyl - 3 - octilimidazol chloride (C16MImCl), and fractions (F70 and F90) purified saponins mate (Ilex paraguariensis A. st. Hil.), against to biofilm cells of six clinical isolates of Candida tropicalis. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of C16MImCl was 0.014 mg / mL to planktonic cells, whereas the Saponin Fractions of Yerba Mate (SFYM) showed no antifungal activity. Using the tracheal catheter (CT) as a specimen was used to evaluate the ability of the biofilm inhibition and removal. We also assessed the Minimum Biofilm Eradication Concentration (MBEC) to remove the preformed biofilms by the microplate method. For antibiofilm activity was observed that C16MImCl, showed better results when compared to fluconazole. The SFYM also had antibiofilm activity when compared to fluconazole, however smaller than the synthetic surfactant. By analyzing the results MBEC, the compound C16MImCl was capacity to eradicate pre- formed biofilm in a concentration of 0.9 mg / mL (92% to 100% biofilm removal) The other tested compounds (fluconazole, SFYM and water) showed no activity remover, observing less than 80 % removal values. Both concentrations at which they inhibit planktonic cells C16MImCl (0.014 μg/mL) and the biofilm (0.028 -0.225 μg/ml) were lower than those obtained by fluconazole. The results obtained demonstrate the potential of these surfactants, especially C16MImCl, which demonstrated low toxicity and probable mechanism of action on the synthesis of ergosterol. Thus, it is possible to assert that these surfactants are a potential alternative to chemical control of yeasts, especially those caused by biofilm cells of C. tropicalis.
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Efeito do extrato do bagaÃo do pendÃculo de caju (Anacardium occidentale L.) contra Streptococcus mutans / Effect of Cashew (Anacardium occidentale L.) Peduncle Bagasse Extract Against Streptococcus mutans

MANUELA ALMEIDA MONTENEGRO 28 September 2012 (has links)
FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O Anacardium occidentale L., conhecido popularmente como cajueiro, ocupa um lugar importante entre as plantas frutÃferas devido à crescente comercializaÃÃo dos seus principais produtos. No nordeste brasileiro, seu cultivo à uma das principais atividades agropecuÃrias da regiÃo. Concentrando-se nos estados do CearÃ, Piauà e Rio Grande do Norte, à utilizado na medicina tradicional para diversos fins terapÃuticos, inclusive, como antimicrobiano. O bagaÃo do caju à obtido apÃs a extraÃÃo do suco, sendo uma importante fonte de resÃduos da agroindÃstria. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial antimicrobiano e antibiofilme do extrato hidroalcoÃlico do bagaÃo do pedÃnculo do caju (EBPC) frente a bactÃria Streptococcus mutans. No presente estudo, determinou-se a ConcentraÃÃo InibitÃria MÃnima (CIM), ConcentraÃÃo Bactericida MÃnima (CBM) e avaliou-se a inibiÃÃo da formaÃÃo de biofilme atravÃs da quantificaÃÃo da biomassa. Para isso, utilizou-se a cepa de S. mutans. Os resultados dos ensaios antimicrobianos mostraram que o EBPC teve aÃÃo bacteriostÃtica (CIM = 250 Âg.mL-1) e bactericida (CBM = 1000 Âg.mL-1). Observou-se inibiÃÃo da biomassa na concentraÃÃo mÃnima de 250 Âg.mL-1. Deste modo, concluiu-se que o EBPC apresentou atividade antimicrobiana e antibiofilme frente ao S. mutans. Estes resultados demonstraram o potencial do EBPC como um possÃvel produto biotecnolÃgico na Ãrea da odontologia. / The Anacardium occidentale L, popularly known as cashew tree, occupies an important place among the fruit trees due to the increasing commercialization of its main products. In northeastern Brazil, its cultivation is one of the main agricultural activities in the region. Concentrating in the states of CearÃ, Piauà and Rio Grande do Norte, it is used in folk medicine for various therapeutic purposes, including as an antimicrobial. The cashew apple bagasse is obtained after extracting the juice, being a major source of waste of agribusiness. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial and antibiofilm potential of the hydroalcoholic extract of the cashew apple pomace (ECAP) against the Streptococcus mutans. It was determined the minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC) and the preventive assay for biofilm formation through biomass quantification. The Streptococcus mutans strain UA159 was used for this intention. The antimicrobial assay results showed that the ECAP was considered bactericidal (250μg.mL) and was considered bactericidal at the concentration of 1000μg.mL. Inhibition in the biomass was observed at the minimum concentration of 250μg.mL. Thus, it was concluded that the EPAC shows antimicrobial and antibiofilm activity against Streptococcus mutans. These results demonstrate the potential of the ECAP as a possible biotechnological product in the field of dentistry.
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Lutte contre les biofilms de Pseudomonas aeruginosa dans le contexte de la mucoviscidose / Fight against Pseudomonas aeruginosa biofilms in Cystic Fibrosis

Simon, Marjolaine 02 April 2015 (has links)
Pseudomonas aeruginosa est un pathogène opportuniste induisant des infections chroniques chez les patients atteints de mucoviscidose. L'éradication de ces infections est presque impossible à l'âge adulte du fait de la formation de biofilms dans les poumons des patients. Les traitements antibiotiques actuels sont peu efficaces contre les biofilms car ce mode de vie assure d'une part la protection des bactéries contre les agents anti-microbiens par l'intermédiaire de la matrice extracellulaire, et favorise d'autre part l'émergence de mécanismes de résistance. Il est donc essentiel de trouver des alternatives thérapeutiques. La bactérie marine Pseudoalteromonas sp. 3J6 sécrète une molécule à activité anti-biofilm efficace contre la souche de laboratoire P. aeruginosa PA01 et les souches cliniques P. aeruginosa MUC-N1, MUC-N2 et MUC-P4. Ces souches ont été caractérisées aux niveaux de leur formation de biofilms in vitro et de leur virulence . Ceci a montré que ces souches sont très différentes les unes des autres et qu'une seule souche, telle que la souche de laboratoire PA01, ne peut pas être représentative des profils observés. Il est donc nécessaire de mener les études anti-biofilms sur plusieurs souches, telles que celles que nous avons sélectionnées. Le potentiel thérapeutique du surnageant de culture (SNa.Js} de Pseudoalteromonas sp. 3J6 et son extrait (Ea.Js} a été étudié en évaluant leur toxicité, la réponse inflammatoire, leur impact sur la production de facteurs de virulence et leur potentiel thérapeutique . SNa.Js et Ea.Js n'étaient pas toxiques vis-à-vis des modèles testés, n'induisaient pas de réponse inflammatoire dans les poumons de souris et n'augmentaient pas la production par P. aeruginosa des facteurs de virulence quantifiés. De plus, SNa.Js s'est avèré être aussi efficace que l'antibiotique ciprofloxacine pour traiter une infection à P. aeruginosa MUC-N2 in vivo sur modèle murin. Ces résultats sont encourageants quant à un potentiel thérapeutique de la molécule à activité anti-biofilm pour contribuer au traitement des infections à P. aeruginosa chez les patients atteints de mucoviscidose. / Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic pathogen leading to chronic infections in patients suffering of cystic fibrosis. Eradication of these infections is almost impossible in adults because of biofilm formation in patient's lungs. Current antibiotics treatments are not efficient enough against biofilms because this lifestyle first protects bacteria from antimicrobial agents via the biofilm extracellular matrix and secondly promotes the emergence of antibiotic resistance mechanisms. lt is therefore essential to find therapeutic alternatives . The marine bacterium Pseudoalteromonas sp. 3J6 secretes an anti-biofilm molecule active against the laboratory P. aeruginosa PA01 strain and the P. aeruginosa clinical strains MUC-N1, MUC-N2 and MUC­ P4. These strains were characterized at the levels of in vitro biofilm formation, and of their virulence. This part of the research work highlighted that these strains are different from one to another and that a single strain, such as the laboratory strain PA01, cannot be representative of the various patterns. Anti-biofilm studies have thus to be performed on several strains, such as the ones we selected. The therapeutic potential of the culture supernatant (SNa.Js} of Pseudoalteromonas sp. 3J6 and its extract Ea.Js was studied by evaluating their toxicity, inflammatory response, impact on virulence factors production, and therapeutic efficiency. SNa.Js and Ea.Js were not taxie against the tested models; did not induce inflammatory response in mice lungs, and did not enhance virulence factor production by clinical P. aerugonisa strains. Moreover, SNa.Js was as efficient as the ciprofloxacin antibiotic to treat an in vivo infection by P. aeruginosa MUC-N2 on mice. These results are encouraging as for a therapeutic potential of the anti-biofilm molecule to contribute at the treatment of P. aeruginosa infections of cystic fibrosis patients.
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Isolamento, investigação química e avaliação do potencial antibiótico, antibiofilme e anti-trichomonas vaginalis de fungos associados a organismos marinhos da costa sul do Brasil / Isolation, chemical investigation and evaluation of antibiotic, antibiofilm and anti-Trichomonas vaginalisactivities of fungi associated to marine organisms from south brazilian coast

Scopel, Marina January 2012 (has links)
Fungos isolados de organismos marinhos têm despertado o interesse de pesquisadores no mundo inteiro, por representarem uma fonte diferenciada de metabólitos secundários, devido às condições ambientais as quais esses microrganismos estão sujeitos. Diversas atividades biológicas têm sido relatadas para estas substâncias, principalmente antitumoral, antimicrobiano e antiparasitária. O crescente aumento nos casos de resistência a antibióticos aponta para a necessidade da disponibilidade de novos agentes terapêuticos. Neste contexto, este trabalho objetivou a identificação dos fungos associados a organismos marinhos coletados na Ilha do Arvoredo (SC), visando o isolamento bioguiado de metabólitos de extratos de micélio e meios de cultivo. As atividades antibiótica e antibiofilme frente aos patógenos Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e anti-Trichomonas vaginalis ATCC 30236 e isolados clínicos, foram investigadas. Todos os fungos isolados foram cultivados por períodos de 7, 14 e 21 dias. Utilizando técnicas moleculares, foram identificados 37 fungos pertencentes ao Filo Ascomycota e um ao Filo Basidiomycota, distribuídos entre 15 diferentes gêneros. O rastreamento de metabólitos quanto à atividade antibiótica foi realizado utilizando a técnica de difusão em agar, obtendo-se 19 amostras com halos de inibição superiores a 10 mm de diâmetro. As atividades antiformação e erradicação de biofilme previamente formado foram avaliadas pelo método de coloração com cristal violeta, e 5% do total de amostras apresentaram inibição de formação e 1% a erradicação de mais de 75% de biofilme de S. epidermidis. Da mesma forma, 5% das amostras foram capazes de inibir ou erradicar entre 51% e 75% biofilmes de P. aeruginosa. Entre os isolados, foram selecionados um fungo pertencente à ordem Sordariales (isolado F22, 14 dias de cultivo) e outro ao gênero Penicillium (isolado F37, 7 dias de cultivo). Os filtrados dos fungos foram particionados com acetato de etila e submetidos à separação cromatográfica, levando à identificação dos compostos mevalonolactona e cis-cyclo(leucyl-tyrosyl) (identificados por técnicas espectroscópicas e espectrométricas), ambos ativos na inibição da formação de biofilme de S. epidermidis ATCC. Mevalonolactona também apresentou atividade frente a isolados clínicos de S. epidermidis revelando, além da atividade antibiofilme, atividade antibiótica em concentração de 0,06 mg/mL. A atividade frente ao parasita T. vaginalis foi avaliada pela técnica de coloração de resazurina e a viabilidade dos trofozoítos caracterizada utilizando trypan blue. Duas amostras dos fungos Hipocrea lixii e Penicillium citrinum mostraram a presença de metabólitos ativos. A inibição do crescimento dos trofozoítos foi observada em 24 horas (MIC=2,5 mg/mL), de acordo com a curva cinética de crescimento. A ausência de hemólise de eritrócitos também foi observada para estas duas amostras. Os resultados obtidos corroboram com os relatos sobre o grande potencial dos fungos marinhos para a descoberta de metabólitos ativos. / Fungi isolated from marine organisms attract the interest of many researchers around the world, since they produce differentiated secondary metabolites due to the environmental conditions to which these organisms are subjected. Several biological activities have been reported for these compounds, mainly as antitumoral, antibacterial and, antiprotozoal. The increasing cases of antimicrobial drug resistance reveal the necessity for the search for new therapeutic agents. In this context, this study aimed to identify the fungi associated with marine organisms collected in the Arvoredo Island (SC/Brazil), in order to isolate bioactive metabolites in extracts of mycelia and broth. The antibiotic and antibiofilm activities against Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and anti-Trichomonas vaginalis ATCC 30236 and clinical isolates activity were investigated. The isolated fungi from marine organisms were cultured for 7, 14 and 21 days. Using molecular techniques, 36 fungi belonging to the Ascomycota and one to Basidiomycota phyla, were identified, distributed among 15 different genera. Screening for metabolites possessing antibiotic activity was performed using the agar diffusion assay, for which was obtained 19 samples with inhibition halo higher than 10 mm in diameter. The inhibition and eradication of biofilm were performed by cristal violet staining method, and 5% of the total samples showed inhibition and 1% eradication of more than 75% of S. epidermidis biofilm. Moreover, 5% of the samples were able to inhibit and eradicate between 51% and 75% of biofilm formed by P. aeruginosa. Among these samples, one strain belonging to the order Sordariales (isolate F22, 14-days of cultive) and one to the genus Penicillium (isolate F37, 7-days of cultive) were selected. The filtrate was extracted with ethyl acetate and subjected to separation by chromatographic techniques, leading to purified compounds mevalonolactone and cis-cyclo(leucyl-tyrosyl) (identified by spectroscopic and spectrometric techniques), both able to inhibit biofilm formation by S. epidermidis ATCC. Mevalonolactone also showed activity against clinical isolates of S. epidermidis revealing, both antibiofilm and antibiotic activities at 0.06 mg.mL-1. The anti-T. vaginalis assay was carried out using the resazurin staining method andviability of trophozoites were characterized using trypan blue. Two samples of the fungi Hypocrea lixii and Penicillium citrinum showed the presence of active metabolites able to inhibit the trophozoites growth in 24 hours (MIC = 2.5 mg.mL-1), according to the kinetic curve of growth. Absence of hemolysis of erythrocytes was also observed for these two filtrate samples. The results corroborate with the reports of the great potential of marine fungi in the discovery of active metabolites.
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Isolamento, investigação química e avaliação do potencial antibiótico, antibiofilme e anti-trichomonas vaginalis de fungos associados a organismos marinhos da costa sul do Brasil / Isolation, chemical investigation and evaluation of antibiotic, antibiofilm and anti-Trichomonas vaginalisactivities of fungi associated to marine organisms from south brazilian coast

Scopel, Marina January 2012 (has links)
Fungos isolados de organismos marinhos têm despertado o interesse de pesquisadores no mundo inteiro, por representarem uma fonte diferenciada de metabólitos secundários, devido às condições ambientais as quais esses microrganismos estão sujeitos. Diversas atividades biológicas têm sido relatadas para estas substâncias, principalmente antitumoral, antimicrobiano e antiparasitária. O crescente aumento nos casos de resistência a antibióticos aponta para a necessidade da disponibilidade de novos agentes terapêuticos. Neste contexto, este trabalho objetivou a identificação dos fungos associados a organismos marinhos coletados na Ilha do Arvoredo (SC), visando o isolamento bioguiado de metabólitos de extratos de micélio e meios de cultivo. As atividades antibiótica e antibiofilme frente aos patógenos Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e anti-Trichomonas vaginalis ATCC 30236 e isolados clínicos, foram investigadas. Todos os fungos isolados foram cultivados por períodos de 7, 14 e 21 dias. Utilizando técnicas moleculares, foram identificados 37 fungos pertencentes ao Filo Ascomycota e um ao Filo Basidiomycota, distribuídos entre 15 diferentes gêneros. O rastreamento de metabólitos quanto à atividade antibiótica foi realizado utilizando a técnica de difusão em agar, obtendo-se 19 amostras com halos de inibição superiores a 10 mm de diâmetro. As atividades antiformação e erradicação de biofilme previamente formado foram avaliadas pelo método de coloração com cristal violeta, e 5% do total de amostras apresentaram inibição de formação e 1% a erradicação de mais de 75% de biofilme de S. epidermidis. Da mesma forma, 5% das amostras foram capazes de inibir ou erradicar entre 51% e 75% biofilmes de P. aeruginosa. Entre os isolados, foram selecionados um fungo pertencente à ordem Sordariales (isolado F22, 14 dias de cultivo) e outro ao gênero Penicillium (isolado F37, 7 dias de cultivo). Os filtrados dos fungos foram particionados com acetato de etila e submetidos à separação cromatográfica, levando à identificação dos compostos mevalonolactona e cis-cyclo(leucyl-tyrosyl) (identificados por técnicas espectroscópicas e espectrométricas), ambos ativos na inibição da formação de biofilme de S. epidermidis ATCC. Mevalonolactona também apresentou atividade frente a isolados clínicos de S. epidermidis revelando, além da atividade antibiofilme, atividade antibiótica em concentração de 0,06 mg/mL. A atividade frente ao parasita T. vaginalis foi avaliada pela técnica de coloração de resazurina e a viabilidade dos trofozoítos caracterizada utilizando trypan blue. Duas amostras dos fungos Hipocrea lixii e Penicillium citrinum mostraram a presença de metabólitos ativos. A inibição do crescimento dos trofozoítos foi observada em 24 horas (MIC=2,5 mg/mL), de acordo com a curva cinética de crescimento. A ausência de hemólise de eritrócitos também foi observada para estas duas amostras. Os resultados obtidos corroboram com os relatos sobre o grande potencial dos fungos marinhos para a descoberta de metabólitos ativos. / Fungi isolated from marine organisms attract the interest of many researchers around the world, since they produce differentiated secondary metabolites due to the environmental conditions to which these organisms are subjected. Several biological activities have been reported for these compounds, mainly as antitumoral, antibacterial and, antiprotozoal. The increasing cases of antimicrobial drug resistance reveal the necessity for the search for new therapeutic agents. In this context, this study aimed to identify the fungi associated with marine organisms collected in the Arvoredo Island (SC/Brazil), in order to isolate bioactive metabolites in extracts of mycelia and broth. The antibiotic and antibiofilm activities against Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and anti-Trichomonas vaginalis ATCC 30236 and clinical isolates activity were investigated. The isolated fungi from marine organisms were cultured for 7, 14 and 21 days. Using molecular techniques, 36 fungi belonging to the Ascomycota and one to Basidiomycota phyla, were identified, distributed among 15 different genera. Screening for metabolites possessing antibiotic activity was performed using the agar diffusion assay, for which was obtained 19 samples with inhibition halo higher than 10 mm in diameter. The inhibition and eradication of biofilm were performed by cristal violet staining method, and 5% of the total samples showed inhibition and 1% eradication of more than 75% of S. epidermidis biofilm. Moreover, 5% of the samples were able to inhibit and eradicate between 51% and 75% of biofilm formed by P. aeruginosa. Among these samples, one strain belonging to the order Sordariales (isolate F22, 14-days of cultive) and one to the genus Penicillium (isolate F37, 7-days of cultive) were selected. The filtrate was extracted with ethyl acetate and subjected to separation by chromatographic techniques, leading to purified compounds mevalonolactone and cis-cyclo(leucyl-tyrosyl) (identified by spectroscopic and spectrometric techniques), both able to inhibit biofilm formation by S. epidermidis ATCC. Mevalonolactone also showed activity against clinical isolates of S. epidermidis revealing, both antibiofilm and antibiotic activities at 0.06 mg.mL-1. The anti-T. vaginalis assay was carried out using the resazurin staining method andviability of trophozoites were characterized using trypan blue. Two samples of the fungi Hypocrea lixii and Penicillium citrinum showed the presence of active metabolites able to inhibit the trophozoites growth in 24 hours (MIC = 2.5 mg.mL-1), according to the kinetic curve of growth. Absence of hemolysis of erythrocytes was also observed for these two filtrate samples. The results corroborate with the reports of the great potential of marine fungi in the discovery of active metabolites.
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Isolamento, investigação química e avaliação do potencial antibiótico, antibiofilme e anti-trichomonas vaginalis de fungos associados a organismos marinhos da costa sul do Brasil / Isolation, chemical investigation and evaluation of antibiotic, antibiofilm and anti-Trichomonas vaginalisactivities of fungi associated to marine organisms from south brazilian coast

Scopel, Marina January 2012 (has links)
Fungos isolados de organismos marinhos têm despertado o interesse de pesquisadores no mundo inteiro, por representarem uma fonte diferenciada de metabólitos secundários, devido às condições ambientais as quais esses microrganismos estão sujeitos. Diversas atividades biológicas têm sido relatadas para estas substâncias, principalmente antitumoral, antimicrobiano e antiparasitária. O crescente aumento nos casos de resistência a antibióticos aponta para a necessidade da disponibilidade de novos agentes terapêuticos. Neste contexto, este trabalho objetivou a identificação dos fungos associados a organismos marinhos coletados na Ilha do Arvoredo (SC), visando o isolamento bioguiado de metabólitos de extratos de micélio e meios de cultivo. As atividades antibiótica e antibiofilme frente aos patógenos Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e anti-Trichomonas vaginalis ATCC 30236 e isolados clínicos, foram investigadas. Todos os fungos isolados foram cultivados por períodos de 7, 14 e 21 dias. Utilizando técnicas moleculares, foram identificados 37 fungos pertencentes ao Filo Ascomycota e um ao Filo Basidiomycota, distribuídos entre 15 diferentes gêneros. O rastreamento de metabólitos quanto à atividade antibiótica foi realizado utilizando a técnica de difusão em agar, obtendo-se 19 amostras com halos de inibição superiores a 10 mm de diâmetro. As atividades antiformação e erradicação de biofilme previamente formado foram avaliadas pelo método de coloração com cristal violeta, e 5% do total de amostras apresentaram inibição de formação e 1% a erradicação de mais de 75% de biofilme de S. epidermidis. Da mesma forma, 5% das amostras foram capazes de inibir ou erradicar entre 51% e 75% biofilmes de P. aeruginosa. Entre os isolados, foram selecionados um fungo pertencente à ordem Sordariales (isolado F22, 14 dias de cultivo) e outro ao gênero Penicillium (isolado F37, 7 dias de cultivo). Os filtrados dos fungos foram particionados com acetato de etila e submetidos à separação cromatográfica, levando à identificação dos compostos mevalonolactona e cis-cyclo(leucyl-tyrosyl) (identificados por técnicas espectroscópicas e espectrométricas), ambos ativos na inibição da formação de biofilme de S. epidermidis ATCC. Mevalonolactona também apresentou atividade frente a isolados clínicos de S. epidermidis revelando, além da atividade antibiofilme, atividade antibiótica em concentração de 0,06 mg/mL. A atividade frente ao parasita T. vaginalis foi avaliada pela técnica de coloração de resazurina e a viabilidade dos trofozoítos caracterizada utilizando trypan blue. Duas amostras dos fungos Hipocrea lixii e Penicillium citrinum mostraram a presença de metabólitos ativos. A inibição do crescimento dos trofozoítos foi observada em 24 horas (MIC=2,5 mg/mL), de acordo com a curva cinética de crescimento. A ausência de hemólise de eritrócitos também foi observada para estas duas amostras. Os resultados obtidos corroboram com os relatos sobre o grande potencial dos fungos marinhos para a descoberta de metabólitos ativos. / Fungi isolated from marine organisms attract the interest of many researchers around the world, since they produce differentiated secondary metabolites due to the environmental conditions to which these organisms are subjected. Several biological activities have been reported for these compounds, mainly as antitumoral, antibacterial and, antiprotozoal. The increasing cases of antimicrobial drug resistance reveal the necessity for the search for new therapeutic agents. In this context, this study aimed to identify the fungi associated with marine organisms collected in the Arvoredo Island (SC/Brazil), in order to isolate bioactive metabolites in extracts of mycelia and broth. The antibiotic and antibiofilm activities against Staphylococcus epidermidis ATCC 35984 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and anti-Trichomonas vaginalis ATCC 30236 and clinical isolates activity were investigated. The isolated fungi from marine organisms were cultured for 7, 14 and 21 days. Using molecular techniques, 36 fungi belonging to the Ascomycota and one to Basidiomycota phyla, were identified, distributed among 15 different genera. Screening for metabolites possessing antibiotic activity was performed using the agar diffusion assay, for which was obtained 19 samples with inhibition halo higher than 10 mm in diameter. The inhibition and eradication of biofilm were performed by cristal violet staining method, and 5% of the total samples showed inhibition and 1% eradication of more than 75% of S. epidermidis biofilm. Moreover, 5% of the samples were able to inhibit and eradicate between 51% and 75% of biofilm formed by P. aeruginosa. Among these samples, one strain belonging to the order Sordariales (isolate F22, 14-days of cultive) and one to the genus Penicillium (isolate F37, 7-days of cultive) were selected. The filtrate was extracted with ethyl acetate and subjected to separation by chromatographic techniques, leading to purified compounds mevalonolactone and cis-cyclo(leucyl-tyrosyl) (identified by spectroscopic and spectrometric techniques), both able to inhibit biofilm formation by S. epidermidis ATCC. Mevalonolactone also showed activity against clinical isolates of S. epidermidis revealing, both antibiofilm and antibiotic activities at 0.06 mg.mL-1. The anti-T. vaginalis assay was carried out using the resazurin staining method andviability of trophozoites were characterized using trypan blue. Two samples of the fungi Hypocrea lixii and Penicillium citrinum showed the presence of active metabolites able to inhibit the trophozoites growth in 24 hours (MIC = 2.5 mg.mL-1), according to the kinetic curve of growth. Absence of hemolysis of erythrocytes was also observed for these two filtrate samples. The results corroborate with the reports of the great potential of marine fungi in the discovery of active metabolites.

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