A epilepsia é uma das desordens mais frequente do sistema nervoso central com aproximidamente 2% de prevalência mundial e 30% de refratariedade. O uso das plantas medicinais é uma possibilidade de identificar novas moléculas com potencial terapêutico. Nesse estudo, utilizamos o modelo de convulsão induzida pelo ácido caínico em zebrafish adulto, para explorar o potencial terapêutico da samambaia Blechnum brasiliense Desv. Primeiramente, utilizando cromatografia liquida de ultra eficiência, foi validado método analítico para quantificação do ácido rosmarínio na fração acetato de etila, obtida por fracionamento do extrato bruto da planta. A fração apresentou teor de 0,0764 g% de ácido rosmarínico. A partir desta fração foi realizado isolamento em coluna preparativa para obtenção do composto para testes em peixe-zebra. Nos ensaios toxicológicos em embriões de zebrafish foram avaliados o extrato bruto e a fração acetato de etila de B. brasiliense, bem como ácido rosmarínico isolado, possibilitando o cálculo das doses letais médias (DL50). Os valores foram 363,3 μg/mL para o extrato, 196,3 μg/mL para a fração e 250,3 μM para o ácido rosmarínico. Os resultados demonstraram que as amostras apresentaram toxicidade aos embriões apenas nas maiores concentrações testadas. Nos ensaios realizados com zebrafish adultos, todas as amostras foram capazes de modular o perfil e a intensidade da convulsão causada pelo ácido caínico, bem como a latência para a primeira crise clônica. As doses ativas foram: 20 mg/kg para o extrato bruto, 5 e 10 mg/kg para a fração acetato de etila e 1 mg/kg para o ácido rosmarínico, sendo capazes de reduzir as crises e aumentar o tempo de latência no modelo de epilepsia em zebrafish. Assim, nosso estudo indica a espécie Blechnum brasiliense como fonte de substância com potencial terapêutico a ser explorada para o tratamento da epilepsia. / Epilepsy is one of the most frequent disorders of the central nervous system with approximately 2% of world prevalence and 30% of refractoriness. The use of medicinal plants is a possibility to identify new molecules with therapeutic potential. In this study, we used the caynic acid-induced convulsion model in adult zebrafish to explore the therapeutic potential of the Blechnum brasiliense Desv fern. Firstly, using ultra-efficient liquid chromatography, we validated an analytical method for the quantification of rosmarinic acid in the ethyl acetate fraction, obtained by plant crude extract fractionation. The fraction presented a content of 0.0764 g% of rosmarinic acid. From this fraction was carried out the preparative column isolation of the compound for tests in zebrafish. In the toxicological tests using zebrafish embryos, were evaluated the crude extract and the ethyl acetate fraction of B. brasiliense, as well as, the isolated rosmarinic acid, allowing the calculation of median lethal doses (LD50). The values were 363.3 μg/mL for the extract, 196.3 μg/mL for the fraction and 250.3 μM for the rosmarinic acid. The results showed that samples presented toxicity to the embryos only in the highest concentrations tested. In the trials with adult zebrafish, all samples were able to modulate the profile and intensity of the convulsion caused by kainic acid, as well as, the latency for the first clonic crisis. The active doses were 20 mg/kg for the crude extract, 5 and 10 mg/kg for the ethyl acetate fraction, and 1 mg/kg for rosmarinic acid, being able to reduce the crises and increase the latency time in the zebrafish model of epilepsy. Thus, our study indicates the species Blechnum brasiliense as a source of substance with therapeutic potential to be explored for the treatment of epilepsy.

Objetivos: Avaliar a farmacocinética e a distribuição tecidual do benzaldeído semicarbazona livre (BS) e incluso em ß-Ciclodextrinas (BS/ß-CD) após administração de diversas doses por diferentes vias de administração. Metodologia: As concentrações plasmáticas de BS foram quantificadas através de método analítico por CLAE-UV desenvolvido e validado, após administração das doses de 10 mg/kg i.v. bolus e 50 e 100 mg/kg p.o. da droga livre e 10 mg/kg i.v. bolus e 50 mg/kg p.o. da droga complexada a ratos Wistar (n = 8 animais/grupo). Os perfis plasmáticos foram avaliados individualmente pelas abordagens não-compartimental e compartimental para determinação dos parâmetros farmacocinéticos. A avaliação compartimental foi realizada utilizando software Scientist 2.0.1 (Micromath®). A ligação do BS a proteínas plasmáticas foi determinada por ultrafiltração na faixa de 1,0 a 60,0 µg/mL. O perfil de penetração tecidual da droga livre e complexada foi investigado em diferentes órgãos utilizando o método de homogeneizado de tecido até 5 h após administração de dose 10 mg/kg i.v. A penetração cerebral também foi avaliada para a droga livre e inclusa em ß-CD após a dose de 50 mg/kg até 4 h após administração (n = 3 animais/tempo coleta). Resultados e Discussão: A fração livre do BS em plasma de ratos foi de 34 ± 5%. O modelo de um compartimento descreveu adequadamente todos os perfis plasmáticos estudados. Após doses intravenosa (10 mg/kg) e oral (50 mg/kg), parâmetros farmacocinéticos como Vd (1,6 ± 0,5 e 2,2 ± 0,8 L/kg, respectivamente) e Cltot (1,4 ± 0,5 and 1,8 ± 0,5 L/h×kg, respectivamente) foram maiores para o BS complexado em relação à droga livre, embora os t1/2 (0,8 ± 0,1 h-1) mantiveram-se similares (p < 0,05). A biodisponibilidade oral do BS/ß-CD (~37%) foi aproximadamente o dobro daquela observada para a droga livre (~20%). O fator de penetração cerebral após doses intravenosa (2,8) e oral (2,5), assim como tempo de residência médio, foram maiores para a droga complexada, independente da via de administração avaliada. Conclusões: A farmacocinética do BS livre e complexado mostra uma rápida distribuição tecidual e uma rápida eliminação. A maior penetração cerebral do complexo em relação à droga livre mostra que a ß-CD é uma estrutura capaz de vetorizar, reter e modificar a liberação do BS nesse órgão, explicando os achados farmacodinâmicos prévios. / Purpose: This study aimed to investigate the pharmacokinetics and tissue distribution of benzaldehyde semicarbazone (BS) free and complexed with ß- cyclodextrin (BS/ß-CD) after administration to rodents at different doses by diverse routes. Methodology: BS plasma concentrations were determinated in Wistar rats after administration of 10 mg/kg i.v bolus and 50 and 100 mg/kg p.o. for the free drug and 10 mg/kg i.v. bolus and 50 mg/kg for the BS/ß-CD (n = 8/group), using a HPLCUV method specifically developed and validated. Individual plasma profiles obtained were evaluated by non-compartmental and compartmental approaches, using the software Scientist 2.0.1 (MicroMath®), analysis to determine the pharmacokinetic parameters. BS protein binding was determined by ultrafiltration at a concentration range of 1.0 a 60.0 µg/mL. BS tissue penetration after free or ß-CD-complexed drug administration was investigated in different tissues homogenates up to 5 h after i.v. bolus dosing of 10 mg/kg dose. Brain penetration of the free and complexed drug was also evaluated up to 4 h after administration of 50 mg/kg p.o. dose (3 animals/time point). Results and Discussion: BS free fraction in plasma was 34 ± 5%. The one-compartmental model described adequately the plasma profiles of all groups investigated. After i.v. (10 mg/kg) and p.o. (50 mg/kg) doses, pharmacokinetic parameters such as Vd (1.6 ± 0.5 e 2.2 ± 0.8 L/kg, respectively) and CLtot (1.4 ± 0.5 and 1.8 ± 0.5 L/h×kg, respectively) were higher for the BS/ß-CD than for the free drug, although the t1/2 (0.8 ± 0.1 h-1) remained the same (p < 0.05). The oral bioavailability of the BS/ß-CD (~ 37%) was approximately 2-fold of that observed for the free BS (~ 20%). The brain penetration factor after i.v. (2.8) and p.o. (2.5) doses, as well as the mean residence time, were higher after BS/ß-CD dosing than after free drug dosing, regardless of the route administrated. Conclusions: BS pharmacokinetics (free and complexed) showed a fast tissue distribution and elimination. The higher brain penetration of the drug after the administration of the complex reveals that the ß-CD may be a potential system to carrier, retain and change the delivery of BS in this organ, explaining the previous pharmacodynamic results.

Compostos antioxidantes e anti-inflamatórios vêm sendo apontados como uma alternativa para auxiliar no tratamento da epilepsia. Ácido rosmarínico (AR) e seu metabolito ácido caféico (AC) têm ação antioxidante e anti-inflamatória relatada em vários estudos. Além disso, AR tem ação inibitória sobre GABA transaminase (GABA-T), enzima que metaboliza um dos principais neurotransmissores envolvidos na epilepsia: o GABA. Nesta tese, investigamos o efeito do AR e AC em modelos de convulsão e sua ação neuroprotetora sobre o estresse oxidativo, neuroinflamação e genotoxicidade relacionados à epilepsia. Para isso, utilizou-se primeiramente o modelo de kindling induzido por pentilenotetrazol (PTZ) para avaliar o efeito dos compostos na epileptogênese. Os compostos não produziram efeito antiepileptogênico in vivo neste modelo, no entanto, algumas doses de AR e AC mostraram um efeito neuroprotetor contra o estresse oxidativo e contra o dano ao DNA induzidos pelo kindling no córtex dos camundongos, demostrando um efeito benéfico contra alterações fisiológicas associadas à epileptogênese. Baseados no fato do AR ser um inibidor da GABA-T, avaliamos o efeito dos compostos na potencialização da ação do agonista GABAérgico diazepam (DZP) sobre as convulsões agudas induzidas por PTZ e pilocarpina (PIL) e no teste do sono induzido por DZP. O efeito de AR e AC na prevenção do dano genotóxico produzido pelos modelos também foi investigado. AR e AC mostraram potencializar a ativação GABAérgica, o que foi evidenciado pelo aumento da latência para a convulsão aguda induzida por PTZ, promovido por AR (4 mg/kg), e pela redução para o início do sono induzido por DZP, promovido por AR (4 mg/kg) e AC (8 mg/kg). Além disso, AR e AC (4 mg/kg) reduziram o dano genotóxico causado por PIL. Complementarmente, verificamos (in vitro) que o pré-tratamento com AR foi capaz modular a ativação microglial, produzindo um padrão de ativação anti-inflamatório, reduzindo a formação de espécies reativas e a expressão de citocinas pró-inflamatórias, e o dano genotóxico induzido pela inflamação. Estas respostas foram relacionadas à possível inibição da via apoptótica por AR. Em suma, os trabalhos aqui apresentados evidenciaram um efeito neuroprotetor de AR e AC por reduzir o estresse oxidativo, a ativação de vias inflamatórias e o dano genotóxico, envolvidos na progressão do processo epiléptico. / Antioxidants and anti-inflammatory compounds have been identified as an alternative to improve the treatment of epilepsy. The rosmarinic acid (RA) and its metabolite caffeic acid (CA) have their antioxidant and anti-inflammatory effects reported in several studies. Moreover, AR has inhibitory action on GABA transaminase (GABA-T), the enzyme that metabolizes an important neurotransmitter involved in epilepsy: GABA. In this thesis, we investigated the effect of RA and CA in seizure models and its neuroprotective action on oxidative stress, neuroinflammation and genotoxicity related to epilepsy. For this, first we used the kindling model induced by pentylenetetrazole (PTZ-induced kindling) for evaluating the effect of compounds on epileptogenesis. The compounds had no effect antiepileptogenic in vivo in this model, however, some doses of RA and CA showed a neuroprotective effect against oxidative stress and DNA damage induced by kindling in the cortex of the mice, demonstrating a beneficial effect against physiological changes related to epileptogenesis. Based on the fact of RA being an inhibitor of GABA-T, we evaluated the effect of compounds over potentiation of action of GABAergic agonist diazepam (DZP) on acute seizures induced by PTZ and pilocarpine (PIL) and in DZP-induced sleep test. The preventive effect of genotoxic damage induced by acute seizure models also was investigated. RA and CA showed potentiate GABAergic activation, which was evidenced by increase in latency to acute seizures PTZ-induced promoted by RA (4 mg/kg), and the reduction in latency to sleep in DZP-induced sleep test promoted by RA (4 mg/kg) and AC (8 mg/kg). In addition, RA and CA (4 mg/kg) reduced the genotoxic damage caused by PIL. Moreover, we found (in vitro) that the pre-treatment with RA was able to modulate microglial activation, producing a pattern of anti-inflammatory activation, reducing the formation of reactive species and the expression of proinflammatory cytokines, consequently reducing genotoxic damage induced by inflammation. These responses were related to the possible inhibition of apoptotic pathway by RA. In short, the works presented here showed a neuroprotective effect of RA and CA because of redution of oxidative stress, inflammatory pathways and genotoxic damage, involved in the progression of the epileptic process.

Cerca de 30% dos pacientes com epilepsia continuam refratários ao tratamento medicamentoso e continuam a sofrer crises, mesmo utilizando um ou mais fármacos antiepilépticas. Intervenções não farmacológicas representam uma alternativa aos fármacos antiepilépticos, dentre as quais a acupuntura, uma técnica tradicional chinesa, que é freqüentemente utilizada como tratamento complementar na medicina ocidental. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da acupuntura manual sobre as convulsões no modelo de kindling induzido por pentilenotetrazol (PTZ) em camundongos, comparar o efeito da acupuntura com diazepam, avaliar a sua utilização em associação a uma dose baixa de diazepam, e avaliar parâmetros de estresse oxidativo, inflamação, genotoxicidade e mutagenicidade. No modelo de kindling, os animais dos grupos que receberam acupuntura manual, foram tratados diariamente durante 16 dias com estimulação no acuponto VG20, e a cada três dias os animais receberam o salina ou diazepam (0,15 mg / kg; i.p.) 30 min antes da administração de PTZ (60 mg / kg; s.c.). Nos grupos que não receberam acupuntura manual, os animais receberam salina, diazepam (2 mg / kg; i.p. - controle positivo), diazepam (0,15 mg / kg; i.p.), 30 min antes da administração de PTZ (60 mg / kg; s.c.). O comportamento convulsivo (porcentagem de convulsão e latência para a primeira convulsão) foi observado por 30 min. Após o último tratamento, os animais foram eutanasiados e o córtex, hipocampo, sangue periférico e medula óssea foram coletados para avaliação dos parâmetros de estresse oxidativo, inflamação, genotoxicidade e mutagenicidade. Os dados de porcentagem (%) de convulsão e latência para a primeira convulsão (LFS) foram analisados pelo Teste de Fisher e GEE respectivamente. MAC e MAC + DZP 0.15mg/Kg não impediram a ocorrência das convulsões, nem aumentaram a LFS, com exceção do terceiro dia de tratamento, no qual observou-se aumento na LFS no grupo MAC + DZP 0.15mg/Kg, comportamento que não se repetiu ao longo do protocolo. Observou-se nos grupos MAC e MAC + DZP 0.15mg/Kg uma redução na formação de espécies reativas de oxigênio e na liberação de óxido nítrico, bem como aumento na atividade de SOD e CAT, sugerindo que a acupuntura oferece proteção contra estresse oxidativo. Além disso, nos mesmos grupos verificou-se a redução na expressão da citocina pró-inflamatória (TNF-α). No grupo MAC + DZP 0.15mg/Kg observou-se uma tendência à proteção do DNA no hipocampo, uma vez que não houve diferença em comparação ao grupo Sal/Sal, contudo não foi observada mutagenicidade em nenhum dos grupos de tratamento. Para concluir, os resultados indicaram que MAC em associação ao DZP 0.15mg/Kg foi capaz de alterar parâmetros associados a convulsões mediada por PTZ no modelo de kindling em camundongos, bem como a acupuntura teve um efeito protetor contra estresse oxidativo, neuroinflamação e danos ao DNA no mesmo modelo. / Around 30% of patients with epilepsy continue refractory to drug treatment and continue to suffer crises, even using one or more anti-epileptic drugs. Nonpharmacological interventions represent an alternative to antiepileptic drugs, among which acupuncture, a traditional Chinese technique, which is often used as a complementary treatment in Western medicine. The aim of this study was to evaluate the effect of manual acupuncture on seizures in the kindling model induced by pentylenetetrazol (PTZ) in mice, comparing the effect of acupuncture with diazepam, to evaluate their use in combination with a low dose of diazepam, and evaluate parameters of oxidative stress, inflammation, genotoxicity and mutagenicity. In the model of kindling, the animal groups receiving manual acupuncture, were treated daily for 16 days with stimulation of the acupoint VG20, and every three days the animals received saline or diazepam (0.15 mg / kg, ip) 30 min before PTZ administration (60 mg / kg, sc). In the groups not receiving manual acupuncture, the animals received saline, diazepam (2 mg / kg, ip - positive control), diazepam (0.15 mg / kg, ip) 30 min before the PTZ administration (60 mg / kg ; sc). The convulsive behavior (percentage of seizure and latency to the first seizure) was observed for 30 min. After the last treatment, the animals were euthanized and the cortex, hippocampus, peripheral blood and bone marrow were collected for evaluation of parameters of oxidative stress, inflammation, genotoxicity and mutagenicity. Percentage of seizure (%) and latency to the first seizure (LFS) were analyzed by Fisher test and GEE respectively. MAC and MAC + DZP 0.15mg / kg did not prevent the occurrence of seizures or increased LFS, except for the third day of treatment, in which there was an increase in LFS in the MAC + DZP 0.15mg / kg group, behavior that was not repeated throughout the protocol. It was observed in the MAC and MAC + DZP 0.15mg / kg groups a reduction in the formation of reactive oxygen species and release of nitric oxide and increase in SOD and CAT activity, suggesting that acupuncture provides protection against oxidative stress. Furthermore, in the same groups there was a reduction in the expression of pro-inflammatory cytokine (TNF-α). In the MAC + DZP 0.15mg / kg group there was a tendency to protect DNA in hippocampus since there was no difference in comparison to Sal/Sal group, however mutagenicity was not observed in any of the treatment groups. In conclusion, the results indicated that MAC in association with DZP 0.15mg / kg was able to change parameters associated with seizures mediated in PTZ kindling model in mice, also suggested that acupuncture had a protective effect against oxidative stress, neuroinflammation and damage DNA in the same model.

OBJETIVO: Comparar a eficácia e a tolerabilidade dos fármacos antiepiléticos (FAE) no tratamento em monoterapia de pacientes com epilepsia focal ou generalizada. MÉTODOS: Uma revisão sistemática foi realizada por meio da busca nas bases de dados eletrônicas Pubmed, Scopus, Web of Science e Cochrane Register of Controlled Trials. Foram incluídos os ensaios clínicos controlados com pacientes com epilepsia, em tratamento com FAE, via oral, em monoterapia, e que avaliaram o número de pacientes que atingiram a remissão das crises epilépticas, que interromperam o tratamento devido à ineficácia terapêutica ou à ocorrência de reações adversas (RAM) intoleráveis. Meta-análises de comparação de múltiplos tratamentos foram realizadas por meio do modelo bayesiano de efeitos randômicos que permitiu o cálculo do Odds Ratio meta-analítico para os FAE estudados. Também foi realizado um ranqueamento da probabilidade de cada FAE ser a melhor opção em eficácia e tolerabilidade. RESULTADOS E CONCLUSÕES: A busca identificou 18874 publicações, no entanto apenas 71 estudos foram selecionados, compreendendo 17555 pacientes com epilepsia. Vinte e nove estudos apresentaram os desfechos de eficácia no tratamento de crises focais, 19 em crises generalizadas e 58 apresentaram dados de tolerabilidade. Nesses estudos, 15 FAE foram avaliados. No tratamento das crises focais, os FAE de nova geração levetiracetam (LEV), lamotrigina (LTG), oxcarbazepina, sultiame e topiramato (TPM) demonstraram possuir eficácia equivalente à carbamazepina (CBZ), clobazam e valproato (VPA). No entanto, a CBZ apresentou o pior perfil de tolerabilidade devido à grande probabilidade do paciente abandonar o tratamento devido à RAM intoleráveis. Quanto ao tratamento das crises generalizadas, a LTG, LEV e TPM são tão eficazes quanto o VPA para o tratamento de crises generalizadas tônico-clônicas, tônicas e clônicas. O VPA e a etosuximida constituem as melhores opções para o tratamento de crises de ausências, enquanto que a LTG mostrou-se menos eficaz. Para o tratamento de crises mioclônicas e espasmos infantis mais ensaios clínicos randomizados são necessários para fornecer boas evidências que possam guiar a decisão clínica dos profissionais de saúde. Dentre os FAE com perfil de eficácia adequado, a LTG destacou-se pela menor probabilidade de manifestar RAM intoleráveis. / OBJECTIVE: To compare the efficacy and tolerability of the antiepileptic drugs (AED) in monotherapy of patients with focal or generalized epilepsy. METHODS: A systematic review was in the Medline/Pubmed, Scopus, Web of Science and Cochrane Register of Controlled Trials databases. We included randomized clinical trials of patients with epilepsy treated with oral monotherapy AED, which evaluated number of patients becoming seizure free at the maintenance treatment period; number of patients which withdrawals from the study because of therapeutic inefficacy and number of patients which withdrawals from the study because of intolerable adverse reaction. Network meta-analyses were performed using Bayesian random effects model. We also carried out a ranking of the probability of each AED be the best option in the efficacy and tolerability outcomes. Sensitivity analyses were conducted in order to check the robustness of the results. RESULTS AND CONCLUSIONS: The research identified 18,874 publications, but only 71 studies were selected, comprising 17555 patients with epilepsy.Twenty-nine trials showed the efficacy outcomes in the treatment of focal seizures, 19 in generalized seizures and 58 showed tolerability data. In the treatment of focal seizures, levetiracetam (LEV), lamotrigine (LTG), oxcarbazepine, sultiame and topiramate (TPM) have demonstrated equivalent efficacy to carbamazepine (CBZ), clobazam and valproate (VPA). LTG, LEV and TPM are as effective as the VPA for the treatment of generalized tonic-clonic, tonic and clonic seizures. VPA and ethosuximide are the best options for the treatment of absence seizures, whereas LTG was less effective. For the treatment of myoclonic seizures and infantile spasms, more randomized clinical trials are needed to provide good evidence to guide the clinical decision of health professionals. Among the AED with adequate efficacy profile, LTG stands out as the AED with the best tolerability profile, suggesting it may be the best option for the treatment of patients with epilepsy.

A epilepsia é uma das desordens mais frequente do sistema nervoso central com aproximidamente 2% de prevalência mundial e 30% de refratariedade. O uso das plantas medicinais é uma possibilidade de identificar novas moléculas com potencial terapêutico. Nesse estudo, utilizamos o modelo de convulsão induzida pelo ácido caínico em zebrafish adulto, para explorar o potencial terapêutico da samambaia Blechnum brasiliense Desv. Primeiramente, utilizando cromatografia liquida de ultra eficiência, foi validado método analítico para quantificação do ácido rosmarínio na fração acetato de etila, obtida por fracionamento do extrato bruto da planta. A fração apresentou teor de 0,0764 g% de ácido rosmarínico. A partir desta fração foi realizado isolamento em coluna preparativa para obtenção do composto para testes em peixe-zebra. Nos ensaios toxicológicos em embriões de zebrafish foram avaliados o extrato bruto e a fração acetato de etila de B. brasiliense, bem como ácido rosmarínico isolado, possibilitando o cálculo das doses letais médias (DL50). Os valores foram 363,3 μg/mL para o extrato, 196,3 μg/mL para a fração e 250,3 μM para o ácido rosmarínico. Os resultados demonstraram que as amostras apresentaram toxicidade aos embriões apenas nas maiores concentrações testadas. Nos ensaios realizados com zebrafish adultos, todas as amostras foram capazes de modular o perfil e a intensidade da convulsão causada pelo ácido caínico, bem como a latência para a primeira crise clônica. As doses ativas foram: 20 mg/kg para o extrato bruto, 5 e 10 mg/kg para a fração acetato de etila e 1 mg/kg para o ácido rosmarínico, sendo capazes de reduzir as crises e aumentar o tempo de latência no modelo de epilepsia em zebrafish. Assim, nosso estudo indica a espécie Blechnum brasiliense como fonte de substância com potencial terapêutico a ser explorada para o tratamento da epilepsia. / Epilepsy is one of the most frequent disorders of the central nervous system with approximately 2% of world prevalence and 30% of refractoriness. The use of medicinal plants is a possibility to identify new molecules with therapeutic potential. In this study, we used the caynic acid-induced convulsion model in adult zebrafish to explore the therapeutic potential of the Blechnum brasiliense Desv fern. Firstly, using ultra-efficient liquid chromatography, we validated an analytical method for the quantification of rosmarinic acid in the ethyl acetate fraction, obtained by plant crude extract fractionation. The fraction presented a content of 0.0764 g% of rosmarinic acid. From this fraction was carried out the preparative column isolation of the compound for tests in zebrafish. In the toxicological tests using zebrafish embryos, were evaluated the crude extract and the ethyl acetate fraction of B. brasiliense, as well as, the isolated rosmarinic acid, allowing the calculation of median lethal doses (LD50). The values were 363.3 μg/mL for the extract, 196.3 μg/mL for the fraction and 250.3 μM for the rosmarinic acid. The results showed that samples presented toxicity to the embryos only in the highest concentrations tested. In the trials with adult zebrafish, all samples were able to modulate the profile and intensity of the convulsion caused by kainic acid, as well as, the latency for the first clonic crisis. The active doses were 20 mg/kg for the crude extract, 5 and 10 mg/kg for the ethyl acetate fraction, and 1 mg/kg for rosmarinic acid, being able to reduce the crises and increase the latency time in the zebrafish model of epilepsy. Thus, our study indicates the species Blechnum brasiliense as a source of substance with therapeutic potential to be explored for the treatment of epilepsy.

Objetivos: Avaliar a farmacocinética e a distribuição tecidual do benzaldeído semicarbazona livre (BS) e incluso em ß-Ciclodextrinas (BS/ß-CD) após administração de diversas doses por diferentes vias de administração. Metodologia: As concentrações plasmáticas de BS foram quantificadas através de método analítico por CLAE-UV desenvolvido e validado, após administração das doses de 10 mg/kg i.v. bolus e 50 e 100 mg/kg p.o. da droga livre e 10 mg/kg i.v. bolus e 50 mg/kg p.o. da droga complexada a ratos Wistar (n = 8 animais/grupo). Os perfis plasmáticos foram avaliados individualmente pelas abordagens não-compartimental e compartimental para determinação dos parâmetros farmacocinéticos. A avaliação compartimental foi realizada utilizando software Scientist 2.0.1 (Micromath®). A ligação do BS a proteínas plasmáticas foi determinada por ultrafiltração na faixa de 1,0 a 60,0 µg/mL. O perfil de penetração tecidual da droga livre e complexada foi investigado em diferentes órgãos utilizando o método de homogeneizado de tecido até 5 h após administração de dose 10 mg/kg i.v. A penetração cerebral também foi avaliada para a droga livre e inclusa em ß-CD após a dose de 50 mg/kg até 4 h após administração (n = 3 animais/tempo coleta). Resultados e Discussão: A fração livre do BS em plasma de ratos foi de 34 ± 5%. O modelo de um compartimento descreveu adequadamente todos os perfis plasmáticos estudados. Após doses intravenosa (10 mg/kg) e oral (50 mg/kg), parâmetros farmacocinéticos como Vd (1,6 ± 0,5 e 2,2 ± 0,8 L/kg, respectivamente) e Cltot (1,4 ± 0,5 and 1,8 ± 0,5 L/h×kg, respectivamente) foram maiores para o BS complexado em relação à droga livre, embora os t1/2 (0,8 ± 0,1 h-1) mantiveram-se similares (p < 0,05). A biodisponibilidade oral do BS/ß-CD (~37%) foi aproximadamente o dobro daquela observada para a droga livre (~20%). O fator de penetração cerebral após doses intravenosa (2,8) e oral (2,5), assim como tempo de residência médio, foram maiores para a droga complexada, independente da via de administração avaliada. Conclusões: A farmacocinética do BS livre e complexado mostra uma rápida distribuição tecidual e uma rápida eliminação. A maior penetração cerebral do complexo em relação à droga livre mostra que a ß-CD é uma estrutura capaz de vetorizar, reter e modificar a liberação do BS nesse órgão, explicando os achados farmacodinâmicos prévios. / Purpose: This study aimed to investigate the pharmacokinetics and tissue distribution of benzaldehyde semicarbazone (BS) free and complexed with ß- cyclodextrin (BS/ß-CD) after administration to rodents at different doses by diverse routes. Methodology: BS plasma concentrations were determinated in Wistar rats after administration of 10 mg/kg i.v bolus and 50 and 100 mg/kg p.o. for the free drug and 10 mg/kg i.v. bolus and 50 mg/kg for the BS/ß-CD (n = 8/group), using a HPLCUV method specifically developed and validated. Individual plasma profiles obtained were evaluated by non-compartmental and compartmental approaches, using the software Scientist 2.0.1 (MicroMath®), analysis to determine the pharmacokinetic parameters. BS protein binding was determined by ultrafiltration at a concentration range of 1.0 a 60.0 µg/mL. BS tissue penetration after free or ß-CD-complexed drug administration was investigated in different tissues homogenates up to 5 h after i.v. bolus dosing of 10 mg/kg dose. Brain penetration of the free and complexed drug was also evaluated up to 4 h after administration of 50 mg/kg p.o. dose (3 animals/time point). Results and Discussion: BS free fraction in plasma was 34 ± 5%. The one-compartmental model described adequately the plasma profiles of all groups investigated. After i.v. (10 mg/kg) and p.o. (50 mg/kg) doses, pharmacokinetic parameters such as Vd (1.6 ± 0.5 e 2.2 ± 0.8 L/kg, respectively) and CLtot (1.4 ± 0.5 and 1.8 ± 0.5 L/h×kg, respectively) were higher for the BS/ß-CD than for the free drug, although the t1/2 (0.8 ± 0.1 h-1) remained the same (p < 0.05). The oral bioavailability of the BS/ß-CD (~ 37%) was approximately 2-fold of that observed for the free BS (~ 20%). The brain penetration factor after i.v. (2.8) and p.o. (2.5) doses, as well as the mean residence time, were higher after BS/ß-CD dosing than after free drug dosing, regardless of the route administrated. Conclusions: BS pharmacokinetics (free and complexed) showed a fast tissue distribution and elimination. The higher brain penetration of the drug after the administration of the complex reveals that the ß-CD may be a potential system to carrier, retain and change the delivery of BS in this organ, explaining the previous pharmacodynamic results.

Compostos antioxidantes e anti-inflamatórios vêm sendo apontados como uma alternativa para auxiliar no tratamento da epilepsia. Ácido rosmarínico (AR) e seu metabolito ácido caféico (AC) têm ação antioxidante e anti-inflamatória relatada em vários estudos. Além disso, AR tem ação inibitória sobre GABA transaminase (GABA-T), enzima que metaboliza um dos principais neurotransmissores envolvidos na epilepsia: o GABA. Nesta tese, investigamos o efeito do AR e AC em modelos de convulsão e sua ação neuroprotetora sobre o estresse oxidativo, neuroinflamação e genotoxicidade relacionados à epilepsia. Para isso, utilizou-se primeiramente o modelo de kindling induzido por pentilenotetrazol (PTZ) para avaliar o efeito dos compostos na epileptogênese. Os compostos não produziram efeito antiepileptogênico in vivo neste modelo, no entanto, algumas doses de AR e AC mostraram um efeito neuroprotetor contra o estresse oxidativo e contra o dano ao DNA induzidos pelo kindling no córtex dos camundongos, demostrando um efeito benéfico contra alterações fisiológicas associadas à epileptogênese. Baseados no fato do AR ser um inibidor da GABA-T, avaliamos o efeito dos compostos na potencialização da ação do agonista GABAérgico diazepam (DZP) sobre as convulsões agudas induzidas por PTZ e pilocarpina (PIL) e no teste do sono induzido por DZP. O efeito de AR e AC na prevenção do dano genotóxico produzido pelos modelos também foi investigado. AR e AC mostraram potencializar a ativação GABAérgica, o que foi evidenciado pelo aumento da latência para a convulsão aguda induzida por PTZ, promovido por AR (4 mg/kg), e pela redução para o início do sono induzido por DZP, promovido por AR (4 mg/kg) e AC (8 mg/kg). Além disso, AR e AC (4 mg/kg) reduziram o dano genotóxico causado por PIL. Complementarmente, verificamos (in vitro) que o pré-tratamento com AR foi capaz modular a ativação microglial, produzindo um padrão de ativação anti-inflamatório, reduzindo a formação de espécies reativas e a expressão de citocinas pró-inflamatórias, e o dano genotóxico induzido pela inflamação. Estas respostas foram relacionadas à possível inibição da via apoptótica por AR. Em suma, os trabalhos aqui apresentados evidenciaram um efeito neuroprotetor de AR e AC por reduzir o estresse oxidativo, a ativação de vias inflamatórias e o dano genotóxico, envolvidos na progressão do processo epiléptico. / Antioxidants and anti-inflammatory compounds have been identified as an alternative to improve the treatment of epilepsy. The rosmarinic acid (RA) and its metabolite caffeic acid (CA) have their antioxidant and anti-inflammatory effects reported in several studies. Moreover, AR has inhibitory action on GABA transaminase (GABA-T), the enzyme that metabolizes an important neurotransmitter involved in epilepsy: GABA. In this thesis, we investigated the effect of RA and CA in seizure models and its neuroprotective action on oxidative stress, neuroinflammation and genotoxicity related to epilepsy. For this, first we used the kindling model induced by pentylenetetrazole (PTZ-induced kindling) for evaluating the effect of compounds on epileptogenesis. The compounds had no effect antiepileptogenic in vivo in this model, however, some doses of RA and CA showed a neuroprotective effect against oxidative stress and DNA damage induced by kindling in the cortex of the mice, demonstrating a beneficial effect against physiological changes related to epileptogenesis. Based on the fact of RA being an inhibitor of GABA-T, we evaluated the effect of compounds over potentiation of action of GABAergic agonist diazepam (DZP) on acute seizures induced by PTZ and pilocarpine (PIL) and in DZP-induced sleep test. The preventive effect of genotoxic damage induced by acute seizure models also was investigated. RA and CA showed potentiate GABAergic activation, which was evidenced by increase in latency to acute seizures PTZ-induced promoted by RA (4 mg/kg), and the reduction in latency to sleep in DZP-induced sleep test promoted by RA (4 mg/kg) and AC (8 mg/kg). In addition, RA and CA (4 mg/kg) reduced the genotoxic damage caused by PIL. Moreover, we found (in vitro) that the pre-treatment with RA was able to modulate microglial activation, producing a pattern of anti-inflammatory activation, reducing the formation of reactive species and the expression of proinflammatory cytokines, consequently reducing genotoxic damage induced by inflammation. These responses were related to the possible inhibition of apoptotic pathway by RA. In short, the works presented here showed a neuroprotective effect of RA and CA because of redution of oxidative stress, inflammatory pathways and genotoxic damage, involved in the progression of the epileptic process.

Cerca de 30% dos pacientes com epilepsia continuam refratários ao tratamento medicamentoso e continuam a sofrer crises, mesmo utilizando um ou mais fármacos antiepilépticas. Intervenções não farmacológicas representam uma alternativa aos fármacos antiepilépticos, dentre as quais a acupuntura, uma técnica tradicional chinesa, que é freqüentemente utilizada como tratamento complementar na medicina ocidental. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da acupuntura manual sobre as convulsões no modelo de kindling induzido por pentilenotetrazol (PTZ) em camundongos, comparar o efeito da acupuntura com diazepam, avaliar a sua utilização em associação a uma dose baixa de diazepam, e avaliar parâmetros de estresse oxidativo, inflamação, genotoxicidade e mutagenicidade. No modelo de kindling, os animais dos grupos que receberam acupuntura manual, foram tratados diariamente durante 16 dias com estimulação no acuponto VG20, e a cada três dias os animais receberam o salina ou diazepam (0,15 mg / kg; i.p.) 30 min antes da administração de PTZ (60 mg / kg; s.c.). Nos grupos que não receberam acupuntura manual, os animais receberam salina, diazepam (2 mg / kg; i.p. - controle positivo), diazepam (0,15 mg / kg; i.p.), 30 min antes da administração de PTZ (60 mg / kg; s.c.). O comportamento convulsivo (porcentagem de convulsão e latência para a primeira convulsão) foi observado por 30 min. Após o último tratamento, os animais foram eutanasiados e o córtex, hipocampo, sangue periférico e medula óssea foram coletados para avaliação dos parâmetros de estresse oxidativo, inflamação, genotoxicidade e mutagenicidade. Os dados de porcentagem (%) de convulsão e latência para a primeira convulsão (LFS) foram analisados pelo Teste de Fisher e GEE respectivamente. MAC e MAC + DZP 0.15mg/Kg não impediram a ocorrência das convulsões, nem aumentaram a LFS, com exceção do terceiro dia de tratamento, no qual observou-se aumento na LFS no grupo MAC + DZP 0.15mg/Kg, comportamento que não se repetiu ao longo do protocolo. Observou-se nos grupos MAC e MAC + DZP 0.15mg/Kg uma redução na formação de espécies reativas de oxigênio e na liberação de óxido nítrico, bem como aumento na atividade de SOD e CAT, sugerindo que a acupuntura oferece proteção contra estresse oxidativo. Além disso, nos mesmos grupos verificou-se a redução na expressão da citocina pró-inflamatória (TNF-α). No grupo MAC + DZP 0.15mg/Kg observou-se uma tendência à proteção do DNA no hipocampo, uma vez que não houve diferença em comparação ao grupo Sal/Sal, contudo não foi observada mutagenicidade em nenhum dos grupos de tratamento. Para concluir, os resultados indicaram que MAC em associação ao DZP 0.15mg/Kg foi capaz de alterar parâmetros associados a convulsões mediada por PTZ no modelo de kindling em camundongos, bem como a acupuntura teve um efeito protetor contra estresse oxidativo, neuroinflamação e danos ao DNA no mesmo modelo. / Around 30% of patients with epilepsy continue refractory to drug treatment and continue to suffer crises, even using one or more anti-epileptic drugs. Nonpharmacological interventions represent an alternative to antiepileptic drugs, among which acupuncture, a traditional Chinese technique, which is often used as a complementary treatment in Western medicine. The aim of this study was to evaluate the effect of manual acupuncture on seizures in the kindling model induced by pentylenetetrazol (PTZ) in mice, comparing the effect of acupuncture with diazepam, to evaluate their use in combination with a low dose of diazepam, and evaluate parameters of oxidative stress, inflammation, genotoxicity and mutagenicity. In the model of kindling, the animal groups receiving manual acupuncture, were treated daily for 16 days with stimulation of the acupoint VG20, and every three days the animals received saline or diazepam (0.15 mg / kg, ip) 30 min before PTZ administration (60 mg / kg, sc). In the groups not receiving manual acupuncture, the animals received saline, diazepam (2 mg / kg, ip - positive control), diazepam (0.15 mg / kg, ip) 30 min before the PTZ administration (60 mg / kg ; sc). The convulsive behavior (percentage of seizure and latency to the first seizure) was observed for 30 min. After the last treatment, the animals were euthanized and the cortex, hippocampus, peripheral blood and bone marrow were collected for evaluation of parameters of oxidative stress, inflammation, genotoxicity and mutagenicity. Percentage of seizure (%) and latency to the first seizure (LFS) were analyzed by Fisher test and GEE respectively. MAC and MAC + DZP 0.15mg / kg did not prevent the occurrence of seizures or increased LFS, except for the third day of treatment, in which there was an increase in LFS in the MAC + DZP 0.15mg / kg group, behavior that was not repeated throughout the protocol. It was observed in the MAC and MAC + DZP 0.15mg / kg groups a reduction in the formation of reactive oxygen species and release of nitric oxide and increase in SOD and CAT activity, suggesting that acupuncture provides protection against oxidative stress. Furthermore, in the same groups there was a reduction in the expression of pro-inflammatory cytokine (TNF-α). In the MAC + DZP 0.15mg / kg group there was a tendency to protect DNA in hippocampus since there was no difference in comparison to Sal/Sal group, however mutagenicity was not observed in any of the treatment groups. In conclusion, the results indicated that MAC in association with DZP 0.15mg / kg was able to change parameters associated with seizures mediated in PTZ kindling model in mice, also suggested that acupuncture had a protective effect against oxidative stress, neuroinflammation and damage DNA in the same model.

OBJETIVO: Comparar a eficácia e a tolerabilidade dos fármacos antiepiléticos (FAE) no tratamento em monoterapia de pacientes com epilepsia focal ou generalizada. MÉTODOS: Uma revisão sistemática foi realizada por meio da busca nas bases de dados eletrônicas Pubmed, Scopus, Web of Science e Cochrane Register of Controlled Trials. Foram incluídos os ensaios clínicos controlados com pacientes com epilepsia, em tratamento com FAE, via oral, em monoterapia, e que avaliaram o número de pacientes que atingiram a remissão das crises epilépticas, que interromperam o tratamento devido à ineficácia terapêutica ou à ocorrência de reações adversas (RAM) intoleráveis. Meta-análises de comparação de múltiplos tratamentos foram realizadas por meio do modelo bayesiano de efeitos randômicos que permitiu o cálculo do Odds Ratio meta-analítico para os FAE estudados. Também foi realizado um ranqueamento da probabilidade de cada FAE ser a melhor opção em eficácia e tolerabilidade. RESULTADOS E CONCLUSÕES: A busca identificou 18874 publicações, no entanto apenas 71 estudos foram selecionados, compreendendo 17555 pacientes com epilepsia. Vinte e nove estudos apresentaram os desfechos de eficácia no tratamento de crises focais, 19 em crises generalizadas e 58 apresentaram dados de tolerabilidade. Nesses estudos, 15 FAE foram avaliados. No tratamento das crises focais, os FAE de nova geração levetiracetam (LEV), lamotrigina (LTG), oxcarbazepina, sultiame e topiramato (TPM) demonstraram possuir eficácia equivalente à carbamazepina (CBZ), clobazam e valproato (VPA). No entanto, a CBZ apresentou o pior perfil de tolerabilidade devido à grande probabilidade do paciente abandonar o tratamento devido à RAM intoleráveis. Quanto ao tratamento das crises generalizadas, a LTG, LEV e TPM são tão eficazes quanto o VPA para o tratamento de crises generalizadas tônico-clônicas, tônicas e clônicas. O VPA e a etosuximida constituem as melhores opções para o tratamento de crises de ausências, enquanto que a LTG mostrou-se menos eficaz. Para o tratamento de crises mioclônicas e espasmos infantis mais ensaios clínicos randomizados são necessários para fornecer boas evidências que possam guiar a decisão clínica dos profissionais de saúde. Dentre os FAE com perfil de eficácia adequado, a LTG destacou-se pela menor probabilidade de manifestar RAM intoleráveis. / OBJECTIVE: To compare the efficacy and tolerability of the antiepileptic drugs (AED) in monotherapy of patients with focal or generalized epilepsy. METHODS: A systematic review was in the Medline/Pubmed, Scopus, Web of Science and Cochrane Register of Controlled Trials databases. We included randomized clinical trials of patients with epilepsy treated with oral monotherapy AED, which evaluated number of patients becoming seizure free at the maintenance treatment period; number of patients which withdrawals from the study because of therapeutic inefficacy and number of patients which withdrawals from the study because of intolerable adverse reaction. Network meta-analyses were performed using Bayesian random effects model. We also carried out a ranking of the probability of each AED be the best option in the efficacy and tolerability outcomes. Sensitivity analyses were conducted in order to check the robustness of the results. RESULTS AND CONCLUSIONS: The research identified 18,874 publications, but only 71 studies were selected, comprising 17555 patients with epilepsy.Twenty-nine trials showed the efficacy outcomes in the treatment of focal seizures, 19 in generalized seizures and 58 showed tolerability data. In the treatment of focal seizures, levetiracetam (LEV), lamotrigine (LTG), oxcarbazepine, sultiame and topiramate (TPM) have demonstrated equivalent efficacy to carbamazepine (CBZ), clobazam and valproate (VPA). LTG, LEV and TPM are as effective as the VPA for the treatment of generalized tonic-clonic, tonic and clonic seizures. VPA and ethosuximide are the best options for the treatment of absence seizures, whereas LTG was less effective. For the treatment of myoclonic seizures and infantile spasms, more randomized clinical trials are needed to provide good evidence to guide the clinical decision of health professionals. Among the AED with adequate efficacy profile, LTG stands out as the AED with the best tolerability profile, suggesting it may be the best option for the treatment of patients with epilepsy.