Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-06T14:20:41Z No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Tatiana_Silva_SEM_ASSINATURA_04_DE_MAIO_DE_2012.pdf: 845827 bytes, checksum: 19ffcad3fdcf3c9f86b9b8ff26ad5fc0 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-06T14:20:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_Tatiana_Silva_SEM_ASSINATURA_04_DE_MAIO_DE_2012.pdf: 845827 bytes, checksum: 19ffcad3fdcf3c9f86b9b8ff26ad5fc0 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / Devido a grande importância da microbiota no desenvolvimento de parasitas nos invertebrados, muitos estudos vêm sendo desenvolvidos para o melhor entendimento desta interação. Desta forma, a associação entre microrganismos e seus hospedeiros invertebrados, vetores de doenças, está se tornando cada vez mais evidente. Com base nisto, o objetivo do presente estudo foi caracterizar a microbiota bacteriana de caramujos da espécie Biomphalaria glabrata, principal hospedeiro intermediário do Schistosoma mansoni. Para isto, um grupo de caramujos selvagens, provenientes da Vila Sotave em Jaboatão dos Guararapes, PE/Brasil, e um grupo não selvagem, mantido em laboratório, tiveram a sua microbiota caracterizada através da: técnica de coloração de Gram, análise morfológica das colônias em ágar sangue e em ágar Eosina Azul de Metileno, sendo a caracterização confirmada pelo sistema de identificação bacteriana VITEK 2. Foram realizados testes de susceptibilidade aos antimicrobianos, com base no método de difusão em disco. Os antimicrobianos empregados pertencem à classe de ß-lactâmicos, aminoglicosídeos, quinolonas, inibidores da via folato, fenicóis e tetraciclinas. Os resultados mostraram que todas as bactérias foram gram negativas, incluindo 11 gêneros bacterianos, sendo Enterobacter cloacae a espécie predominante em caramujos selvagens, enquanto que, Citrobacter freundii e Aeromonas sobria predominaram no grupo não selvagem. Quanto à susceptibilidade aos antimicrobianos, todos os isolados mostraram-se resistentes ao ß-lactâmico amoxicilina e sensíveis ao meropenem. A partir destes resultados, novas estratégias de controle biológico da esquistossomose podem ser propostas.

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-10T19:49:51Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Priscila Brandão Gomes da Silva Santiago.pdf: 6439353 bytes, checksum: a2184d10d0aeab3dc4ad22bcec7a66ec (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-10T19:49:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Priscila Brandão Gomes da Silva Santiago.pdf: 6439353 bytes, checksum: a2184d10d0aeab3dc4ad22bcec7a66ec (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-07-29 / Tiazolidina é um sistema de anel heterocíclico com múltiplas aplicações. Seu núcleo tem sido relatado por ser responsável pela maior parte das ações farmacológicas relacionadas com os seus análogos estruturais, como anti-câncer, anti-inflamatória, anticonvulsivante, hipoglicemiantes, anti-viral e anti-bacteriana. Devido ao aumento do número de infecções hospitalares e resistência de patógenos ao arsenal terapêutico existente, há uma demanda no avanço da pesquisa de novos compostos bioativos. Diante desses fatos, este estudo teve como objetivo o planejamento estrutural, a síntese e avaliação da atividade antimicrobiana de novos derivados da tiazolidina-2,4-diona e 4-tioxo-tiazolidina-2-ona, além da avaliação quanto ao potencial citotóxico in vitro dos derivados obtidos. Treze arilidenos substituídos na posição 5 do anel heterocíclico foram obtidos por meio de reações de condensação de Knoevenagel. As estruturas químicas dos compostos sintetizados foram caracterizadas por RMN 1H e RMN 13C, Infravermelho e Massa. As cepas selecionadas para a atividade antimicrobiana pela técnica de difusão em disco foram dos grupos de bactérias Grampositivas, Gram-negativas, álcool-ácido resistentes e levedura. Os testes antimicrobianos foram ainda complementados com os valores da CMI e CMB. Os compostos foram avaliados quanto a seu potencial citotóxico pelo método de MTT em três linhagens de células tumorais humanas HL-60 (leucemia promielocítica - humana), MCF-7 (adenocarcinoma de mama - humano) e NCI-H292 (carcinoma epidermoide de pulmão - humano). Os compostos foram considerados puros, com rendimentos satisfatórios e suas constantes físico-químicas determinadas. Nove dos treze compostos sintetizados apresentaram atividade frente a, no mínimo, duas cepas testadas. Os compostos não se mostraram ativos contra bactérias Gram-negativas e levedura. Quanto ao estudo de citotoxicidade, o composto IIe apresentou melhor potencial citotóxico contra as linhagens testadas, com valores de IC50 inferiores a 4 μg/mL. Este estudo demonstrou que a substituição bioisostérica da tiocarbonila em vez da carbonila na posição 4 do anel tiazolidínico, em alguns compostos, resultou em um aumento da atividade antimicrobiana. Devido aos resultados obtidos, esses compostos podem representar pontos de partida úteis para a otimização das pesquisas. Os estudos que envolvem o mecanismo de ação são necessários para uma compreensão completa da atividade antimicrobiana e citotóxica dos compostos, bem como modificações estruturais para melhorar a atividade anti-proliferativa e anti-mitótica.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4461_1.pdf: 581325 bytes, checksum: 3ac6df73d6c58a450eea979f2d9f9829 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / Com a utilização clínica de agentes antimicrobianos começaram a surgir bactérias resistentes a diversos antibióticos, entre os quais, se destacam os β- lactâmicos. A hidrólise do anel β-lactâmico pelas enzimas β-lactamases é o mecanismo de resistência bacteriana mais bem documentado. A obtenção de Streptomyces produtores de inibidores de tais enzimas constitui uma importante estratégia para contornar o problema da resistência bacteriana, garantindo a continuidade da terapia antimicrobiana com os β-lactâmicos. Com este objetivo, 19 linhagens de Streptomyces spp, pertencentes a Coleção de Microrganismos do Departamento de Antibióticos da UFPE (DAUFPE), isoladas de solos e preservadas em óleo mineral foram testadas quanto a capacidade de inibir a ação de β-lactamases produzidas por Klebsiella aerogenes ATCC 15380. As 19 linhagens foram purificadas utilizando-se os meios ISP-1 e TSB e submetidas à seleção primária pelos métodos de difusão em ágar, utilizando bloco de gelose e cultivo em meio sólido nos meios CAA e ISP-2. No meio CAA, 15% das linhagens formaram halo de inibição, com 10 a 12 mm de diâmetro e 10% formaram halos maiores que 20 mm de diâmetro. No meio ISP- 2, 5% das linhagens formaram halo de 12 mm de diâmetro e 11% halos de 17 mm de diâmetro. A partir destes ensaios, cinco linhagens (DAUFPE 3036, DAUFPE 3060, DAUFPE 3094 DAUFPE 3098 e DAUFPE 3133) que formaram os maiores halos de inibição, foram selecionadas para ensaio em meio líquido usando meios de cultura sintéticos ou quimicamente definidos e complexos. As fermentações foram realizadas a 300C e 200rpm durante 96 horas. As amostras retiradas em intervalo de tempo pré-definido foram submetidas à centrifugação a 11000 rpm por 5 minutos, para a separação do líquido metabólico, o qual foi submetido a determinação de pH, atividade antimicrobiana e ácido clavulânico, sendo este um potente inibidor de β- lactamases. Observou-se que o melhor meio para produção de inibidor de β- lactamase foi o MPE modificado, em que todas as linhagens apresentaram atividade antimicrobiana contra Klebsiella aerogenes ATCC 15380. Com relação à produção de ácido clavulânico, três linhagens (DAUFPE 3036, DAUFPE 3060 e DAUFPE 3094) apresentaram resultado positivo em dois meios de cultura (MPE modificado e meio com glicerol), enquanto que as duas linhagens restantes (DAUFPE 3098 e DAUFPE 3133) produziram outros inibidores

Made available in DSpace on 2018-08-23T21:50:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12424_Dissertação_Divan Henrique Barcelos.pdf: 1490408 bytes, checksum: bfc34fc78982de3e46382c567f84009d (MD5) Previous issue date: 2018-03-21 / As leishmanioses são um grave problema de saúde pública no Brasil e no mundo, com 12 milhões de pessoas infectadas. Os tratamentos disponíveis embora eficientes, apresentam problemas como toxicidade, alto custo ou resistência pelo parasito. As bacteriocinas são peptídeos antimicrobianos produzidos no ribossomo por diversas bactérias. Sua ação de inibição in vitro já foi testada contra fungos, bactérias e protozoários, sendo por isso consideradas como uma substância de grande potencial biotecnológico. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a capacidade anti-leishmania das bacteriocinas A53; C55 e Nisina e da (substância inibitória do tipo bacteriocina) BLIS P16, contra as espécies de Leishmania infantum e Leishmania amazonensis. Os resultados de IC50 para L. amazonensis foram de: A53-24,78 μg/mL; C55-75,49 μg/mL e Nisina-3191 μg/mL. Já para o tratamento contra promastigotas de L. infantum foi observado IC50 de: A53-12,57 μg/mL; C55-44,31 μg/mL. Nisina-317,2 μg/mL e P16- 2,9 μg/mL. O tratamento contra amastigotas de L. infantum se mostrou mais eficiente que contra as formas promastigotas, apresentando um IC50 de 2,17 μg/mL para A53 e de 1,76 μg/mL para P16. Também foi avaliado a ação citotóxica de A53 e P16 sobre macrófagos da linhagem J774A.1, apresentando respectivamente IC50 de 9,75 μg/mL e de 6,6 μg/mL. Para se avaliar a interação entre a A53 e a P16 com a membrana externa de promastigotas de L. infantum foi realizada microscopia eletrônica de varredura, a qual demostrou que as substâncias testadas possuem a capacidade de alterar a morfologia externa do parasita. Foram realizados experimentos para se avaliar a capacidade do tratamento com P16 sobe a indução do estresse oxidativo em promastigotas de L. infantum. Foi verificado a capacidade de estimular apoptose nas formas promastigotas, bem como um estimulo a superprodução de espécies reativas de oxigênio (ROS) e uma interferência na progressão do ciclo celular. Os dados do presente trabalho demonstram que as bacteriocinas são promissoras para testes que visem o desenvolvimento de novas drogas contra as leishamanioses.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-10-10T19:40:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Hugo Marcelo Nascimento Carvalho.pdf: 2938358 bytes, checksum: dc9e907fcd01cb44e73cb41b3d2676d2 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-11-21T20:49:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Hugo Marcelo Nascimento Carvalho.pdf: 2938358 bytes, checksum: dc9e907fcd01cb44e73cb41b3d2676d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-21T20:49:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Hugo Marcelo Nascimento Carvalho.pdf: 2938358 bytes, checksum: dc9e907fcd01cb44e73cb41b3d2676d2 (MD5) Previous issue date: 2012-09-28 / O surgimento de cepas bacterianas cada vez mais resistentes vem ganhando força através do uso indiscriminado de antimicrobianos para a prevenção ou tratamento de infecções. Diversas drogas já disponíveis no mercado não são suficientemente eficazes contra os microrganismos resistentes, aumentando a necessidade do estudo e desenvolvimento de novos fármacos para atuação na terapeutica. Fármacos semi-sintéticos e sintéticos já são a maioria dos utilizados, estando em torno de 75% dos disponíveis para terapeutica. Nosso objetivo com esse trabalho foi explorar a atividade biológica dessas estruturas, sintetizando através de uma hibridação molecular, derivados de hidrazona, que na literatura há vários estudos que mostram queesses compostos possuem diversas atividades biológicas como antividade antimicrobiana, antichagásica, antiepileptica dentre outras. Através de metodologias já dominadas em nosso laboratorio, obtivemos o cicloaduto isoxazolínico em quantidade multi-gramas, conforme descrito em trabalhos anteriores, a partir do enecarbamatoendocíclico N(carbobenziloxicarbonil)-2-óxido de pirrolina e carboetoxiformonitrila (CEFNO), através de uma reação de cicloadição 1,3-dipolar. Após reação de uma hidrogenólise, para remoção do grupamento protetor, fizemos uma reação de N-benzoilação, utilizando o cloreto 4-clorobenzoila e o cloreto 4-fluorobenzoila. Em seguida, Através de uma condensação com o 5-nitro-2-tiofeno benzaldeido, 2-tiofeno benzaldeido e 2-Piridina benzaldeido foram formadas as 06 novas hidrazonas isoxazolínicas. Esses compostos foram avaliados preliminarmente quanto a sua atividade antimicrobiana através do método de difusão em disco contra os microrganismos de Staphylococcus aureus, Enterococus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Candida albicans, Candida krusei, Micrococcus luteus, e Bacillus subtilis, apresentando atividade apenas para staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e micrococcus luteus com halos inferiores a 15mm, não sendo considerados bons agentes antibacterianos contra esses microorganismos, ficando a perspectiva da avaliação biológica quanto as outras atividades relatadas. / The emergence of bacterial strains resistant increasingly been gaining strength through the indiscriminate use of antibiotics for prevention or treatment of infections. Several drugs already on the market are not sufficiently effective against resistant microorganisms, increasing the need for the study and development of new drugs for the therapeutic action. Drugs semi-synthetic and synthetic already are most used, with about 75% of available for therapy. Our intention with this study was to explore the biological activity of these structures, synthesizing through a molecular hybridization, hydrazones derivatives, in the literature there are several studies that show that compounds have diverse biological activities such as antimicrobial activity, Chagas, among other antiepileptic. Through methodologies have dominated In our laboratory, we obtained the isoxazoline cycloaduct in multi-gram quantity, as described in previous works, from enecarbamate N-(carbobenziloxicarbonile)-2-pyrroline oxide and carboetoxiformonitrile through a reaction of 1,3-dipolar cycloaddition. After a hydrogenolysis reaction, to remove the grouping protector, made a reaction of N-benzoylation, using the 4-clorobenzoila chloride and chloride 4-fluorobenzoil. Then through condensation with a 5-nitro-2-thiophene benzaldeide, 2-thiophene benzaldeide and 2-pyridine benzaldeide were formed six new hydrazones isoxazolines. These compounds were preliminarily evaluated as to their antimicrobial activity by disc diffusion method against the microorganisms Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Candida albicans, Candida krusei, Micrococcus luteus, and Bacillus subtilis, showing activity only for staphylococcus aureus, micrococcus luteus and Bacillus subtilis halos with less than 15mm, not being considered good antibacterial agents against these microorganisms, leaving the prospect of biological evaluation as other activities reported

Medicamentos antimicrobianos são cada vez mais utilizados, com finalidades diversas, em medicina veterinária. Esta conduta pode ocasionar a presença de resíduos destes compostos em alimentos de origem animal. Desta forma, o controle da presença destes contaminantes se torna imprescindível do ponto de vista de saúde pública. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento, validação e posterior utilização de metodologias para análise de antimicrobianos em produtos destinados à alimentação animal e produtos de origem animal destinados ao consumo humano. Diferentes metodologias, com abordagem tanto qualitativa como quantitativa, foram desenvolvidas, contemplando as seguintes classes de antimicrobianos: sulfonamidas, quinolonas, fluorquinolonas, tetraciclinas, beta-lactâmicos, macrolídeos, lincosamidas, além de trimetoprima e bromexina. Os métodos multirresíduos desenvolvidos contemplaram um total de até 46 compostos diferentes numa mesma análise. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas foi utilizada, com diferentes abordagens: cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em modo tandem (LC-MS/MS) e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas híbrida quadrupolo-tempo de voo (LC-QTOF). Os diferentes procedimentos de preparo de amostras foram desenvolvidos com o enfoque comum de reunir eficiência, praticidade, baixo custo e baixa produção de resíduos, combinação ideal para análises de rotina. As metodologias validadas foram aplicadas à análise de 4962 amostras provenientes do Serviço de Inspeção Federal (SIF), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, sendo 2728 amostras de músculos de animais de diferentes espécies, 1105 amostras de leite bovino e 1129 amostras de rações. Foram detectados resíduos em 130 das 1126 amostras de rações, representando 11,25% das amostras analisas. Já para os alimentos de origem animal, o número de amostras contendo resíduos acima do limite de quantificação foi 39, que corresponde a 1,02% do total de amostras analisadas (3833). Entretanto, as amostras não conformes, que são aquelas com concentração de resíduos acima do limite máximo de resíduo estabelecido para o composto naquela matriz, foram apenas 13, representando 0,34% do total de amostras analisadas.Por fim, as metodologias desenvolvidas se mostraram adequadas para detecção simultânea de antimicrobianos em matrizes biológicas, proporcionando maior rapidez, menor custo de análise e geração de resultados confiáveis quando testadas em amostras reais nas condições existentes nos serviços de inspeção. / The objective of this work was the development, validation and subsequent use of methodologies for analyzing antimicrobials in products intended for animal nutrition and products of animal origin for human consumption. Different methodologies, with both qualitative and quantitative approaches, were developed, covering the following classes of antimicrobials: sulfonamides, quinolones, fluoroquinolones, tetracyclines, beta-lactams, macrolides, lincosamides, in addition to trimethoprim and bromexin. Liquid chromatography coupled to mass spectrometry was used with different approaches: liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and liquid chromatography coupled to quadrupole-time hybrid mass spectrometry (LC-QTOF). The different preparation of samples developed with the common approach of to bringing efficiency, practicity, low cost and low waste generation, ideal combination for routine analysis. Developed methodologies were applied to 4962 samples of the Federal Inspection Service (SIF), of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply, 2728 samples of muscles of different species, 1105 samples of bovine milk and 1129 samples of rations. Positive results were obtained in 130 of 1126 feed samples, representing 11.25% of the analyzed samples. For animal origin products, the number of samples above the quantification limit was 39 to 3833 samples analyzed, corresponding to 1.02% of the total. However, non-compliant samples, which are those with a concentration above the maximum residue limit established for the compound in that matrix, were only 13, representing 0.34% of the total samples analyzed. Finally, the methodologies developed were suitable for the simultaneous detection of different antimicrobials of different classes in different foods of animal origin, providing greater speed and lower analytical cost when tested in real samples under conditions in the inspection service.

Medicamentos antimicrobianos são cada vez mais utilizados, com finalidades diversas, em medicina veterinária. Esta conduta pode ocasionar a presença de resíduos destes compostos em alimentos de origem animal. Desta forma, o controle da presença destes contaminantes se torna imprescindível do ponto de vista de saúde pública. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento, validação e posterior utilização de metodologias para análise de antimicrobianos em produtos destinados à alimentação animal e produtos de origem animal destinados ao consumo humano. Diferentes metodologias, com abordagem tanto qualitativa como quantitativa, foram desenvolvidas, contemplando as seguintes classes de antimicrobianos: sulfonamidas, quinolonas, fluorquinolonas, tetraciclinas, beta-lactâmicos, macrolídeos, lincosamidas, além de trimetoprima e bromexina. Os métodos multirresíduos desenvolvidos contemplaram um total de até 46 compostos diferentes numa mesma análise. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas foi utilizada, com diferentes abordagens: cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em modo tandem (LC-MS/MS) e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas híbrida quadrupolo-tempo de voo (LC-QTOF). Os diferentes procedimentos de preparo de amostras foram desenvolvidos com o enfoque comum de reunir eficiência, praticidade, baixo custo e baixa produção de resíduos, combinação ideal para análises de rotina. As metodologias validadas foram aplicadas à análise de 4962 amostras provenientes do Serviço de Inspeção Federal (SIF), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, sendo 2728 amostras de músculos de animais de diferentes espécies, 1105 amostras de leite bovino e 1129 amostras de rações. Foram detectados resíduos em 130 das 1126 amostras de rações, representando 11,25% das amostras analisas. Já para os alimentos de origem animal, o número de amostras contendo resíduos acima do limite de quantificação foi 39, que corresponde a 1,02% do total de amostras analisadas (3833). Entretanto, as amostras não conformes, que são aquelas com concentração de resíduos acima do limite máximo de resíduo estabelecido para o composto naquela matriz, foram apenas 13, representando 0,34% do total de amostras analisadas.Por fim, as metodologias desenvolvidas se mostraram adequadas para detecção simultânea de antimicrobianos em matrizes biológicas, proporcionando maior rapidez, menor custo de análise e geração de resultados confiáveis quando testadas em amostras reais nas condições existentes nos serviços de inspeção. / The objective of this work was the development, validation and subsequent use of methodologies for analyzing antimicrobials in products intended for animal nutrition and products of animal origin for human consumption. Different methodologies, with both qualitative and quantitative approaches, were developed, covering the following classes of antimicrobials: sulfonamides, quinolones, fluoroquinolones, tetracyclines, beta-lactams, macrolides, lincosamides, in addition to trimethoprim and bromexin. Liquid chromatography coupled to mass spectrometry was used with different approaches: liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and liquid chromatography coupled to quadrupole-time hybrid mass spectrometry (LC-QTOF). The different preparation of samples developed with the common approach of to bringing efficiency, practicity, low cost and low waste generation, ideal combination for routine analysis. Developed methodologies were applied to 4962 samples of the Federal Inspection Service (SIF), of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply, 2728 samples of muscles of different species, 1105 samples of bovine milk and 1129 samples of rations. Positive results were obtained in 130 of 1126 feed samples, representing 11.25% of the analyzed samples. For animal origin products, the number of samples above the quantification limit was 39 to 3833 samples analyzed, corresponding to 1.02% of the total. However, non-compliant samples, which are those with a concentration above the maximum residue limit established for the compound in that matrix, were only 13, representing 0.34% of the total samples analyzed. Finally, the methodologies developed were suitable for the simultaneous detection of different antimicrobials of different classes in different foods of animal origin, providing greater speed and lower analytical cost when tested in real samples under conditions in the inspection service.

Medicamentos antimicrobianos são cada vez mais utilizados, com finalidades diversas, em medicina veterinária. Esta conduta pode ocasionar a presença de resíduos destes compostos em alimentos de origem animal. Desta forma, o controle da presença destes contaminantes se torna imprescindível do ponto de vista de saúde pública. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento, validação e posterior utilização de metodologias para análise de antimicrobianos em produtos destinados à alimentação animal e produtos de origem animal destinados ao consumo humano. Diferentes metodologias, com abordagem tanto qualitativa como quantitativa, foram desenvolvidas, contemplando as seguintes classes de antimicrobianos: sulfonamidas, quinolonas, fluorquinolonas, tetraciclinas, beta-lactâmicos, macrolídeos, lincosamidas, além de trimetoprima e bromexina. Os métodos multirresíduos desenvolvidos contemplaram um total de até 46 compostos diferentes numa mesma análise. A cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas foi utilizada, com diferentes abordagens: cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em modo tandem (LC-MS/MS) e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas híbrida quadrupolo-tempo de voo (LC-QTOF). Os diferentes procedimentos de preparo de amostras foram desenvolvidos com o enfoque comum de reunir eficiência, praticidade, baixo custo e baixa produção de resíduos, combinação ideal para análises de rotina. As metodologias validadas foram aplicadas à análise de 4962 amostras provenientes do Serviço de Inspeção Federal (SIF), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, sendo 2728 amostras de músculos de animais de diferentes espécies, 1105 amostras de leite bovino e 1129 amostras de rações. Foram detectados resíduos em 130 das 1126 amostras de rações, representando 11,25% das amostras analisas. Já para os alimentos de origem animal, o número de amostras contendo resíduos acima do limite de quantificação foi 39, que corresponde a 1,02% do total de amostras analisadas (3833). Entretanto, as amostras não conformes, que são aquelas com concentração de resíduos acima do limite máximo de resíduo estabelecido para o composto naquela matriz, foram apenas 13, representando 0,34% do total de amostras analisadas.Por fim, as metodologias desenvolvidas se mostraram adequadas para detecção simultânea de antimicrobianos em matrizes biológicas, proporcionando maior rapidez, menor custo de análise e geração de resultados confiáveis quando testadas em amostras reais nas condições existentes nos serviços de inspeção. / The objective of this work was the development, validation and subsequent use of methodologies for analyzing antimicrobials in products intended for animal nutrition and products of animal origin for human consumption. Different methodologies, with both qualitative and quantitative approaches, were developed, covering the following classes of antimicrobials: sulfonamides, quinolones, fluoroquinolones, tetracyclines, beta-lactams, macrolides, lincosamides, in addition to trimethoprim and bromexin. Liquid chromatography coupled to mass spectrometry was used with different approaches: liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) and liquid chromatography coupled to quadrupole-time hybrid mass spectrometry (LC-QTOF). The different preparation of samples developed with the common approach of to bringing efficiency, practicity, low cost and low waste generation, ideal combination for routine analysis. Developed methodologies were applied to 4962 samples of the Federal Inspection Service (SIF), of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply, 2728 samples of muscles of different species, 1105 samples of bovine milk and 1129 samples of rations. Positive results were obtained in 130 of 1126 feed samples, representing 11.25% of the analyzed samples. For animal origin products, the number of samples above the quantification limit was 39 to 3833 samples analyzed, corresponding to 1.02% of the total. However, non-compliant samples, which are those with a concentration above the maximum residue limit established for the compound in that matrix, were only 13, representing 0.34% of the total samples analyzed. Finally, the methodologies developed were suitable for the simultaneous detection of different antimicrobials of different classes in different foods of animal origin, providing greater speed and lower analytical cost when tested in real samples under conditions in the inspection service.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-02-15T11:27:01Z No. of bitstreams: 1 talithacaiafaferreiraalvesbotelho.pdf: 1130454 bytes, checksum: c1b10245c9b48a2632cac3cd710bbb13 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-02-26T12:22:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 talithacaiafaferreiraalvesbotelho.pdf: 1130454 bytes, checksum: c1b10245c9b48a2632cac3cd710bbb13 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T12:22:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 talithacaiafaferreiraalvesbotelho.pdf: 1130454 bytes, checksum: c1b10245c9b48a2632cac3cd710bbb13 (MD5) Previous issue date: 2014-05-26 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A crescente busca por novos compostos antimicrobianos, devido a altas taxas de resistência aos mesmos, tem sido objeto de estudo de vários pesquisadores no desenvolvimento de ferramentas para descobrimento e desenho de novos antimicrobianos. No presente trabalho utilizamos três estirpes de Brucella abortus: RB51, S19 e S2308. As bactérias são cocobacilos, gram-negativas, intracelulares facultativas e, agente etiológico da brucelose em bovinos, bubalinos, humanos, ovinos e outros animais. O difícil tratamento da doença através da combinação de diferentes antibióticos está associado às altas taxas de resistência aos antibióticos utilizados contra a Brucella abortus, tornando-a uma bactéria de difícil controle e ao mesmo tempo um campo extenso de estudo para novos agentes antimicrobianos. Os peptídeos sintéticos são uma alternativa promissora como agentes antimicrobianos. No presente trabalho foram usados os peptídeos (Lalb1; Lalb1.2; Lalb1.3; Lrot3.5; Lrot3.6; Lrot3.7 e Lrot3.8) que possuem características baseadas em peptídeo naturais produzidos pelas plantas Lippia alba(Lalb) e Lippia rotundifolia (Lrot), e que foram modificados utilizando-se ferramentas computacionais de modelagem. Todos os peptídeos apresentaram atividade antimicrobiana em alguma das concentrações testadas (8, 16, 32, 64 e 128 μg/mL). Os peptídeos Lrot3.5 e Lrot3.6 além de apresentarem atividade antimicrobiana contra as três estirpes estudas na concentração 32μg/mL e demonstraram não diminuir a viabilidade celular de macrófagos em testes com redução de tetrazolio (MTT). Estes são, portanto, peptídeos promissores para estudos adicionais. / The search for new antimicrobial compounds leads many researchers to the development of tool for antimicrobial prospection and design due to the increasing of antibiotic resistance by bacteria. In the present study, three strains of Brucella abortus were used: RB51, S19 and S2308. The bacteria are coccobacilli, gramnegative, facultative intracellular and etiological agents of brucellosis in cattle, buffaloes, humans, sheep, and other animals. The treatment is very difficult and a combination of different antibiotics associated to high antibiotic resistance rates for commonly used drugs against Brucella abortus increases the difficult of microorganism control. Thus, an avenue of opportunities for an extensive research field for antimicrobial agents’ studies is opened. Synthetic peptides are a promising alternative for the development of new antimicrobial agents. In this study, the following synthetic peptides were used: Lalb1.2; Lalb1.3; Lrot3.5; Lrot3.6; Lalb1; Lrot3.7 and Lrot3.8 against Brucella strains. These peptides were developed based on natural characteristics of antimicrobial peptides produced by plants using Lippia alba (Lalb) and Lippia rotundifolia (Lrot) leaf transcritptome for antimicrobial prospection. All peptides showed antimicrobial activity for all of the evaluated concentrations (8, 16,32, 64 and 128 mg/mL). TheLrot3.5 and Lrot3.6 peptides showed antimicrobial activity against all of the three studied strains at the concentration 32μg/mL. These peptides at this concentration do not decrease cell viability of macrophages in tetrazolium reduction (MTT) tests and are prospective peptides for additional studies.

Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Derby (S. Derby) é um dos sorovares mais frequentemente detectados na cadeia produtiva de suínos na região sul do Brasil. Estudos prévios indicaram que isolados de S. Derby apresentando perfis similares de resistência a antimicrobianos estavam circulando ao longo dos anos nesta região. A sobrevivência de Salmonella no ambiente e a persistência no hospedeiro são facilitadas pela sua habilidade em formar biofilmes. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi identificar a presença de grupos clonais entre 140 isolados de S. Derby coletados ao longo de um período de dez anos de diferentes origens da cadeia produtiva de suínos (linfonodos, conteúdo intestinal, ambiente e produtos suínos). Para tanto, o perfil de resistência a antimicrobianos, através de dois conceitos distintos de avaliação de resistência (valores ECOFF e valores de breakpoint), a habilidade em formar biofilmes e a caracterização genotípica por macro-restrição (PFGE) foram avaliados. A determinação do MIC foi realizada em todos os isolados, frente aos seguintes antimicrobianos: ácido nalidíxico, ampicilina, cefotaxima, ceftazidima, ciprofloxacina, colistina, florfenicol, gentamicina, estreptomicina e tetraciclina. Para avaliar a capacidade de S. Derby em formar biofilmes, três metodologias foram aplicadas: i. morfologia de colônia em ágar contendo Vermelho Congo, para determinar a detecção fenotípica de fímbria curli e celulose; ii. formação de biofilme na interface ar-líquido em caldo LB; iii. aderência em microplacas de poliestireno de 96 poços. No total, apenas 17 (12,1%) isolados puderam ser classificados como suscetíveis a todos os antimicrobianos testados. As maiores frequências de populações “non-Wild Type” (nWT) foram observadas frente a tetraciclina (75,7%), estreptomicina (70%) e colistina (11,4%), enquanto que não foram detectadas populações nWT para ciprofloxacina, ceftazidima e gentamicina. Multi-resistência (resistência a ≥ 3 antimicrobianos; de acordo com valores de breakpoint) foi detectada em 8,6% dos isolados. Em ágar contendo Vermelho Congo, três diferentes morfologias de colônia foram observadas. A morfologia Rdar (vermelha, seca e rugosa) foi a mais frequente, sendo detectada em 59 isolados (42,1%); enquanto que as morfologias Saw (branca e mucoide) e Pdar (rosa, seca e rugosa) foram observadas em 46 (32,9%) e em 35 (25%) dos isolados, respectivamente. Os morfotipos Rdar e Pdar, que em conjunto albergaram a maioria dos isolados, são considerados os mais usualmente observados em isolados de Salmonella capazes de formar biofilme. A formação de película rígida, sem dispersão por agitação, foi observada em 24 amostras (17,1%) em caldo LB convencional e em 78 amostras (55,7%) em caldo LB low salt, sendo todas pertencentes aos morfotipos Rdar ou Pdar. Em placas de poliestireno de 96 poços, um grande número (n=96; 68,6%) dos isolados foram fracamente ou moderadamente produtores de biofilme, incluindo todos os isolados que apresentaram os morfotipos Rdar e Pdar. Através dos perfis de formação de biofilme e de resistência a antimicrobianos observados, 36 isolados foram selecionados para macro-restrição por eletroforese em campo pulsado (PFGE). Destas, 27 foram agrupadas em 11 pulsotipos que apresentavam mais de uma cepa com 100% de similaridade. Desta forma, foi possível identificar clones e cepas intimamente relacionadas de S. Derby que circularam em granjas, matadouros-frigoríficos e foram encontrados em alimentos ao longo de uma década. / Salmonella enterica subsp. enterica serovar Derby (S. Derby) is one of the serovars most frequently detected in the swine production chain of southern Brazil. Previous studies indicated that isolates of S. Derby displaying similar antimicrobial resistance profiles circulated over the years in this region. Survival of Salmonella in the environment and persistence in the host are facilitated by the ability to form biofilms. Thus, the aim of this study was to identify the presence of clonal groups between 140 S. Derby isolates collected over a ten-year period from various porcine origins (lymph nodes, intestinal content, environment and pork). Therefore, the antimicrobial resistance profile, through two distinct concepts of resistance evaluation (ECOFF value and breakpoint value), the ability to form biofilm and the genotypic characterization by macro-restriction (PFGE) were evaluated. MIC determinations were performed on all isolates, against the following antimicrobials: nalidixic acid, ampicillin, cefotaxime, ceftazidime, ciprofloxacin, colistin, florfenicol, gentamicin, streptomycin and tetracycline. To evaluate the S. Derby ability to form biofilm, three methods were applied: i. colony morphology on Congo Red agar, to determine the phenotypic detection of curli fimbriae and cellulose; ii. biofilm formation in liquid-air interface of LB broth; iii. adherence on a 96-well polystyrene microtiter plate. In total, only 17 (12.1%) isolates were classified as susceptible to all antimicrobials tested. The highest frequencies of non-Wild Type (nWT) populations were observed against tetracycline (75.7%), streptomycin (70%) and colistin (11.4%), whereas there were no detectable nWT population to ciprofloxacin, ceftazidime and gentamicin. Multidrug resistance (resistance to ≥ 3 antimicrobials) was detected in 8.6% of isolates. On Congo Red agar, three different colony morphology types were observed. The Rdar type (read, dry and rough) was the most frequent, being detected in 59 isolates (42.1%); while Saw (white and smoth) and Pdar (pink, dry and rough) types were observed in 46 (32.9%) and 35 isolates (25%), respectively. The Rdar and Pdar types, which together encompassed the majority of the isolates, are considered the most often observed in Salmonella isolates able to form biofilm. The formation of a rigid pellicle, which could not be dispersed by agitation, was observed in 24 (17.1%) isolates in conventional LB broth and in 78 (55.7%) isolates in low salt LB broth, all belonging to morphotypes Rdar or Pdar. On 96-well polystyrene microtiter plate, a larger number (n=96; 68.6%) of isolates showed to be weak or moderate biofilm producers, including all isolates that showed the Rdar and Pdar type. Through the biofilm and resistance profiles observed, 36 isolates were selected for macro-restriction for pulsed-feld gel electrophoresis (PFGE). Of these, 27 isolates were clustered in 11 pulsotypes which presented more than one strain with 100% of similarity. Therefore, was possible to identify clones and strains closely related of S. Derby that circulated in pig farms, slaughter plants and encountered in foods along a decade.