A doença de Chagas é endemia que afeta grande parte da América Latina. Estima-se que de 18 a 20 milhões de pessoas estejam infectadas pelo parasita causador da doença e que ocorram, aproximadamente, 50.000 mortes relacionadas à doença de Chagas por ano, nos 21 países da área endêmica. O arsenal terapêutico atualmente usado contra a parasitose, constituído por apenas dois fármacos, é insuficiente, considerando-se, também, que ambos não apresentam ação adequada na fase crônica da doença. Em razão de se tratar de parasitose que acomete apenas países em desenvolvimento, o interesse na pesquisa de novos antichagásicos é consideravelmente baixo por parte dos países que se destacam na introdução de novos fármacos na terapêutica. Resta aos países envolvidos a procura por novas alternativas quimioterápicas. Face ao exposto e ante à alta atividade, em testes in vitro contra o Trypanosoma cruzi, do derivado hidroximetilado do nitrofural, intermediário de síntese de bases de Mannich, obtido em trabalhos anteriores, o objetivo do presente projeto foi sintetizar bases de Mannich desse derivado com aminoácidos lisina e arginina e o dipeptídio lisina-arginina resultante. Os compostos foram sintetizados utilizando-se métodos clássicos e alternativos e grupos protetores, normalmente utilizados na síntese de peptídios e outros, tentativamente empregados, como os grupos metílico e etílico. Em adição, experimentos foram efetuados com o objetivo de otimizar a síntese do hidroximetilnitrofural. Os derivados sintetizados foram analisados por IV, RMN 1H e 13C, e alguns deles, também, por espectrometria de massas. Eles serão submetidos a testes in vitro em cultura de células infectadas com T. cruzi tão logo os grupos protetores sejam removidos. Além disso, serão efetuados testes de liberação para estudo da respectiva estabilidade. Dessa forma, esperam-se obter subsídios importantes para estudos mais aprofundados do seu mecanismo de ação e da possível mutagenicidade envolvida. / Chaga\'s disease is an endemic disease that aftects most part of Latin Arnerica. About 18 to 20 million people are infected by the parasite and around 50 thousand deaths are related to Chagas\' disease each year, in the 21 countries of endemic areas. The therapeutic armamentarium available against the disease is constituted by only two drugs and is insufficient, considering, also, that the drugs are not efficient in the chronic phase of the disease. As a parasitosis that only occurs in developing countries, the interest in the research for new antichagasic agents is considerably low in countries that are responsible for the introduction of new drugs in the therapeutics. So, the search for new chemotherapeutic alternatives is a task for the involved countries. In view of the situation and taking into account the high activity in in vitro tests against Trypanosoma cruzi showed by nitrofurazone hydroxymethyl derivative, an intermediary of Mannich bases reaction previously synthesized, the objective of this work was to synthesize its Mannich bases. The carriers used were aminoacids lysine and arginine and its dipeptide, lysinearginine. The compounds were synthesized using classic and alternative methods and protecting groups, currently used in peptide synthesis and others temptatively employed, as methyl and ethyl groups. Also, many experiments were performed in order to achieve the optimization of hydroxymethylnitrofurazone synthesis. The derivatives synthesized were analyzed by IR, 1H and 13C NMR, and some also by mass spectrometry. They will be submitted to in vitro tests with cell infected with T. cruzi as soon as the protecting groups are removed. Besides, tests of drug release will be performed to study their stability. We expect to obtain important information toward better comprehension of their mechanism of action and possible mutagenicity involved.

A nitazoxanida é um novo antiparasitário de amplo espectro e pertence à classe dos nitrotiazóis. No Brasil, encontra-se disponível na forma de comprimidos revestidos e pó para suspensão oral, sob nome cormercial de Annita . A análise de fármacos é necessária em todas as fases do desenvolvimento farmacêutico e na manutenção da segurança e eficácia terapêutica dos produtos comercializados. Assim, o presente trabalho objetivou o desenvolvimento e validação de métodos para análise qualitativa e quantitativa da nitazoxanida nas formas farmacêuticas comerciais e a avaliação da estabilidade do fármaco em condições de degradação forçada, contemplando a determinação da cinética de fotodegradação e o isolamento, identificação e estudo da citotoxicidade do produto de degradação majoritário. As análises por espectrometria de massas (MS/MS), infravermelho (IV), ressonância magnética nuclear (RMN 1H e 13C) e calorimetria exploratória diferencial permitiram identificar a nitazoxanida utilizada como substância química de referência. Os métodos por cromatografia em camada delgada, espectrofotometria no ultravioleta (UV), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC) foram utilizados para identificação do fármaco nas formas farmacêuticas. Os métodos quantitativos validados foram: UV, CLAE e EC. Todos cumpriram com os parâmetros descritos pelas guias de validação e não apresentaram diferença estatística significativa na determinação do fármaco. O estudo preliminar de estabilidade frente à degradação oxidativa, ácida, básica, térmica e fotolítica demonstrou que o fármaco é instável em todas as condições testadas, sendo que os meios oxidativo, alcalino e fotolítico foram os fatores de maior importância. A cinética de fotodegradação da nitazoxanida apresentou cinética de ordem zero para ambas as formas farmacêuticas. Em todas as condições de degradação testadas ocorreu a formação de um produto de degradação majoritário, chamado de PD1, o qual precipitou nas condições analíticas e foi isolado por filtração. O mesmo foi identificado por RMN 1H e 13C, EM/EM e IV como o derivado desacetilado da nitazoxanida, a tizoxanida. A avaliação preliminar da citotoxicidade indicou que o produto isolado apresenta maior toxicidade celular in vitro após 48 horas de incubação frente à células mononucleares, quando comparado à nitazoxanida. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram a importância do aprofundamento dos estudos nesta área para garantir a segurança e eficácia terapêutica dos produtos farmacêuticos comercializados. / Nitazoxanide is a new broad-spectrum antiparasitic drug and it belongs to the class of nitrothiazol. In Brazil, it is available as tablets and powder for oral suspension, under the cormercial name of Annita . Drug analysis is needed in all phases of pharmaceutical development and maintenance of marketed products safety and efficacy. Thus, the present study aimed the methods development and validation for qualitative and quantitative analysis of nitazoxanide in commercial pharmaceutical forms and evaluation of drug stability in forced degradation conditions, comprising the photodegradation kinetics determination and the isolation, identification and the cytotoxicity study of the major degradation product. The analysis by mass spectrometry (MS/MS), infrared (IR), nuclear magnetic resonance (1H and 13C NMR) and differential scanning calorimetry allows to identify the nitazoxanide chemical reference structure. The methods by thin layer chromatography, spectrophotometry (UV), high performance liquid chromatography (HPLC) and capillary electrophoresis (CE) were used to identify the drug in pharmaceutical formulations. Quantitative methods have been validated: UV, HPLC and CE. All methods met the criteria described by the validation guidelines and showed no significant statistically difference in the drug determination. The preliminary stability study of nitazoxanide under oxidative, acidic, basic, thermal and photolytic conditions showed that the drug is unstable in all tested conditions, and oxidative, alkaline and photolytic conditions are the factors of major importance. The photodegradation kinetics of nitazoxanide showed zero-order kinetics for both dosage forms. In all tested degradation conditions it was formed a majority degradation product, named PD1, which precipitated in the analytical conditions and it was isolated by filtration. The same product was identified by 1H and 13C NMR, MS/MS and IR as deacetylated derivative of nitazoxanide, the Tizoxanide. The preliminary citotoxicity evaluation indicated that the isolated product has a higher cellular toxicity in vitro after 48 hours of incubation, when compared to nitazoxanide. The results demonstrate the importance of this type of study to ensure the safety and efficacy of marketed pharmaceutical products.

A nitazoxanida é um novo antiparasitário de amplo espectro e pertence à classe dos nitrotiazóis. No Brasil, encontra-se disponível na forma de comprimidos revestidos e pó para suspensão oral, sob nome cormercial de Annita . A análise de fármacos é necessária em todas as fases do desenvolvimento farmacêutico e na manutenção da segurança e eficácia terapêutica dos produtos comercializados. Assim, o presente trabalho objetivou o desenvolvimento e validação de métodos para análise qualitativa e quantitativa da nitazoxanida nas formas farmacêuticas comerciais e a avaliação da estabilidade do fármaco em condições de degradação forçada, contemplando a determinação da cinética de fotodegradação e o isolamento, identificação e estudo da citotoxicidade do produto de degradação majoritário. As análises por espectrometria de massas (MS/MS), infravermelho (IV), ressonância magnética nuclear (RMN 1H e 13C) e calorimetria exploratória diferencial permitiram identificar a nitazoxanida utilizada como substância química de referência. Os métodos por cromatografia em camada delgada, espectrofotometria no ultravioleta (UV), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC) foram utilizados para identificação do fármaco nas formas farmacêuticas. Os métodos quantitativos validados foram: UV, CLAE e EC. Todos cumpriram com os parâmetros descritos pelas guias de validação e não apresentaram diferença estatística significativa na determinação do fármaco. O estudo preliminar de estabilidade frente à degradação oxidativa, ácida, básica, térmica e fotolítica demonstrou que o fármaco é instável em todas as condições testadas, sendo que os meios oxidativo, alcalino e fotolítico foram os fatores de maior importância. A cinética de fotodegradação da nitazoxanida apresentou cinética de ordem zero para ambas as formas farmacêuticas. Em todas as condições de degradação testadas ocorreu a formação de um produto de degradação majoritário, chamado de PD1, o qual precipitou nas condições analíticas e foi isolado por filtração. O mesmo foi identificado por RMN 1H e 13C, EM/EM e IV como o derivado desacetilado da nitazoxanida, a tizoxanida. A avaliação preliminar da citotoxicidade indicou que o produto isolado apresenta maior toxicidade celular in vitro após 48 horas de incubação frente à células mononucleares, quando comparado à nitazoxanida. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram a importância do aprofundamento dos estudos nesta área para garantir a segurança e eficácia terapêutica dos produtos farmacêuticos comercializados. / Nitazoxanide is a new broad-spectrum antiparasitic drug and it belongs to the class of nitrothiazol. In Brazil, it is available as tablets and powder for oral suspension, under the cormercial name of Annita . Drug analysis is needed in all phases of pharmaceutical development and maintenance of marketed products safety and efficacy. Thus, the present study aimed the methods development and validation for qualitative and quantitative analysis of nitazoxanide in commercial pharmaceutical forms and evaluation of drug stability in forced degradation conditions, comprising the photodegradation kinetics determination and the isolation, identification and the cytotoxicity study of the major degradation product. The analysis by mass spectrometry (MS/MS), infrared (IR), nuclear magnetic resonance (1H and 13C NMR) and differential scanning calorimetry allows to identify the nitazoxanide chemical reference structure. The methods by thin layer chromatography, spectrophotometry (UV), high performance liquid chromatography (HPLC) and capillary electrophoresis (CE) were used to identify the drug in pharmaceutical formulations. Quantitative methods have been validated: UV, HPLC and CE. All methods met the criteria described by the validation guidelines and showed no significant statistically difference in the drug determination. The preliminary stability study of nitazoxanide under oxidative, acidic, basic, thermal and photolytic conditions showed that the drug is unstable in all tested conditions, and oxidative, alkaline and photolytic conditions are the factors of major importance. The photodegradation kinetics of nitazoxanide showed zero-order kinetics for both dosage forms. In all tested degradation conditions it was formed a majority degradation product, named PD1, which precipitated in the analytical conditions and it was isolated by filtration. The same product was identified by 1H and 13C NMR, MS/MS and IR as deacetylated derivative of nitazoxanide, the Tizoxanide. The preliminary citotoxicity evaluation indicated that the isolated product has a higher cellular toxicity in vitro after 48 hours of incubation, when compared to nitazoxanide. The results demonstrate the importance of this type of study to ensure the safety and efficacy of marketed pharmaceutical products.

A nitazoxanida é um novo antiparasitário de amplo espectro e pertence à classe dos nitrotiazóis. No Brasil, encontra-se disponível na forma de comprimidos revestidos e pó para suspensão oral, sob nome cormercial de Annita . A análise de fármacos é necessária em todas as fases do desenvolvimento farmacêutico e na manutenção da segurança e eficácia terapêutica dos produtos comercializados. Assim, o presente trabalho objetivou o desenvolvimento e validação de métodos para análise qualitativa e quantitativa da nitazoxanida nas formas farmacêuticas comerciais e a avaliação da estabilidade do fármaco em condições de degradação forçada, contemplando a determinação da cinética de fotodegradação e o isolamento, identificação e estudo da citotoxicidade do produto de degradação majoritário. As análises por espectrometria de massas (MS/MS), infravermelho (IV), ressonância magnética nuclear (RMN 1H e 13C) e calorimetria exploratória diferencial permitiram identificar a nitazoxanida utilizada como substância química de referência. Os métodos por cromatografia em camada delgada, espectrofotometria no ultravioleta (UV), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e eletroforese capilar (EC) foram utilizados para identificação do fármaco nas formas farmacêuticas. Os métodos quantitativos validados foram: UV, CLAE e EC. Todos cumpriram com os parâmetros descritos pelas guias de validação e não apresentaram diferença estatística significativa na determinação do fármaco. O estudo preliminar de estabilidade frente à degradação oxidativa, ácida, básica, térmica e fotolítica demonstrou que o fármaco é instável em todas as condições testadas, sendo que os meios oxidativo, alcalino e fotolítico foram os fatores de maior importância. A cinética de fotodegradação da nitazoxanida apresentou cinética de ordem zero para ambas as formas farmacêuticas. Em todas as condições de degradação testadas ocorreu a formação de um produto de degradação majoritário, chamado de PD1, o qual precipitou nas condições analíticas e foi isolado por filtração. O mesmo foi identificado por RMN 1H e 13C, EM/EM e IV como o derivado desacetilado da nitazoxanida, a tizoxanida. A avaliação preliminar da citotoxicidade indicou que o produto isolado apresenta maior toxicidade celular in vitro após 48 horas de incubação frente à células mononucleares, quando comparado à nitazoxanida. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram a importância do aprofundamento dos estudos nesta área para garantir a segurança e eficácia terapêutica dos produtos farmacêuticos comercializados. / Nitazoxanide is a new broad-spectrum antiparasitic drug and it belongs to the class of nitrothiazol. In Brazil, it is available as tablets and powder for oral suspension, under the cormercial name of Annita . Drug analysis is needed in all phases of pharmaceutical development and maintenance of marketed products safety and efficacy. Thus, the present study aimed the methods development and validation for qualitative and quantitative analysis of nitazoxanide in commercial pharmaceutical forms and evaluation of drug stability in forced degradation conditions, comprising the photodegradation kinetics determination and the isolation, identification and the cytotoxicity study of the major degradation product. The analysis by mass spectrometry (MS/MS), infrared (IR), nuclear magnetic resonance (1H and 13C NMR) and differential scanning calorimetry allows to identify the nitazoxanide chemical reference structure. The methods by thin layer chromatography, spectrophotometry (UV), high performance liquid chromatography (HPLC) and capillary electrophoresis (CE) were used to identify the drug in pharmaceutical formulations. Quantitative methods have been validated: UV, HPLC and CE. All methods met the criteria described by the validation guidelines and showed no significant statistically difference in the drug determination. The preliminary stability study of nitazoxanide under oxidative, acidic, basic, thermal and photolytic conditions showed that the drug is unstable in all tested conditions, and oxidative, alkaline and photolytic conditions are the factors of major importance. The photodegradation kinetics of nitazoxanide showed zero-order kinetics for both dosage forms. In all tested degradation conditions it was formed a majority degradation product, named PD1, which precipitated in the analytical conditions and it was isolated by filtration. The same product was identified by 1H and 13C NMR, MS/MS and IR as deacetylated derivative of nitazoxanide, the Tizoxanide. The preliminary citotoxicity evaluation indicated that the isolated product has a higher cellular toxicity in vitro after 48 hours of incubation, when compared to nitazoxanide. The results demonstrate the importance of this type of study to ensure the safety and efficacy of marketed pharmaceutical products.

Em 1968, um composto do tipo 5-nitroimidazol, o megazol, foi sintetizado por Berkelhammer e Asato e demonstrou largo espectro de ação biológica. Em 1980, pesquisadores brasileiros determinaram excelente atividade desta molécula contra o Tripanosoma cruzi, em ratos, por via oral. Constam da literatura quatro rotas para a obtenção deste fármaco, que podem ser otimizadas no tocante ao aumento da produtividade e minimização dos riscos. A nova rota, ora proposta, é uma alternativa para a síntese do megazol, realizada somente em três etapas de fácil execução, abrindo caminho para obtenção de seus análogos estruturais. / In 1968, Berkelhammer and Asato synthesized a compound of the 5-nitroimidazole group, called megazol. This compound demonstrated a high biological activity. In 1980, brazilian researchers tested the megazol in mices and they discovered an excellent activity of this against Chagas\' disease. There are four routes to synthesize these compound indicated in the literature. Actually, these routes can be optimized to achieve the yield and minimization of the risks involved in the unitary processo The new route proposed is an alternative to obtain the megazol in only three stages of easy perform. This method makes way to structural analogues of this drug.

Orientador: Cesar Costapinto Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-20T14:12:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Nascimento_AnaCarolina_M.pdf: 2361694 bytes, checksum: bcd5c25d65fe1d7ac8a8666d6f13c023 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O secnidazol corresponde à formulação 1-(hidroxipropil)-2-metil-5-nitroimidazol e possui espectro de atividade contra microorganismos anaeróbicos e eficácia no tratamento de amebíase, giardíase, tricomoníase e vaginose bacteriana. Ele é comercializado na forma racêmica, isto é, na proporção 1:1 dos seus enantiômeros R e S. Não é oficial em nenhuma farmacopeia. Estudos relatam que para alguns imidazóis o enantiômero R apresenta maior atividade biológica frente ao enantiômero S. Portanto a separação do secnidazol é importante para testes biológicos comparativos de efeitos colaterais. Inserindo-se neste contexto, foi desenvolvido este trabalho de pesquisa com o intuito de estudar a resolução enantiomérica do fármaco secnidazol pela técnica de cromatografia líquida de alta eficiência utilizando coluna recheada com fase estacionária tris(3,5-dimetilfenilcarbamato) de amilose. Experimentos de pulsos com soluções diluídas foram realizados variando a vazão de fase móvel de 1,0 a 2,5 mL/min e as temperaturas de 20 a 35°C. Os resultados mostraram alta eficiência, com número de pratos superando 1000 e fatores de separação na ordem de 7,0. Os valores negativos de 'delta'H e 'delta'S* indicam que a adsorção dos enantiômeros da fase móvel na fase estacionária é entalpicamente favorável. Experimentos a altas concentrações (condições de sobrecarga) foram realizados com a finalidade de determinar as isotermas não-lineares pelo método da análise frontal e também os perfis de eluição sob estas condições. As isotermas de adsorção apresentaram comportamento não-linear e o modelo de Langmuir foi bem correlacionado aos dados experimentais de equilíbrio no intervalo de concentração analisado. A partir da metodologia shortcut foram obtidos os parâmetros operacionais da unidade leito móvel simulado. As purezas alcançadas para as correntes de extrato e refinado foram 85,50% e 72,50%, respectivamente / Abstract: The chemical formula of secnidazole is 1-(hydroxypropyl)-2-methyl-5-nitroimidazole. It acts activity against anaerobic microorganisms and is effective in the treatment of amebiasis, giardiasis, trichomoniasis, and bacterial vaginosis. It is marketed in the racemic form, that is, proportion 1:1 of their R and S-enantiomers. It's not officially recognized by any pharmacopoeia. Studies have reported that for some imidazoles the R-enantiomer has a higher biological activity than the S-enantiomer. For this reason the separation of secnidazole is important for comparative biological tests of side effects. It is in this context that this research was developed in order to study the enantiomeric resolution of drug secnidazole by the technique of high performance liquid chromatography using stationary phase column packed with amylose tris (3, 5- dimethylphenylcarbamate). Pulse experiments with dilute solutions were conducted by varying the mobile phase flow (1.0 to 2.5 mL/min) and temperature (20 to 35 °C). The results revealed high efficiency, with number of plates overcoming 1000 and selectivities in the order of 7.0. The negative values of 'delta'H and 'delta'S* indicates that the enantiomer adsorption from the mobile phase to stationary phase is enthalpically favorable. Experiments in overloaded conditions were realized to obtain the equilibrium adsorption isotherms by frontal analysis, as well overload elution profiles. The adsorption isotherms shown a nonlinear behavior and the Langmuir model was well correlated to equilibrium experimental data in the range of investigated concentration. From the shortcut method operating parameters were obtained to the simulated moving bed unit. The purities reached for the extract and raffinate lines were 85.50% and 72.50% , respectively / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestra em Engenharia Química

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:31:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_juliana_nunes_vieira.pdf: 749761 bytes, checksum: d10f921e3d83dd0cb845cc767149a9f3 (MD5) Previous issue date: 2012-03-14 / The rapid development of resistance to gastrointestinal parasites anthelmintics has shown the limited efficiency of this method in the suppression of endoparasitoses in ruminants, and has furthered research in alternative control methods. The use of chemicals in animal anthelmintic treatment, in association with nematophagous fungi used for biological control, is a strategy that has proven to be effective in reducing the nematode population density of farm animals. This study aims to verify the in vitro susceptibility of the nematophagous fungi Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans, Paecilomyces fumosoroseus, Paecilomyces lilacinus, Paecilomyces marquandii and Paecilomyces variotii against the antiparasitic drugs albendazole, thiabendazole, ivermectin (100%), levamisole (7.5%) and closantel (10%) by using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). MICs ranged between 4 and 0,031µg/mL for albendazole, thiabendazole and ivermectin, between 0,937 and 0,117µg/mL for levamisole, and between 0,625 and 0,034 for closantel. The results obtained showed that all antiparasitic drugs tested had an in vitro inhibitory effect on nematophagous fungi, being able to jeopardize the fungus action as a biological control bioagent. / O rápido desenvolvimento de resistência de parasitos do trato gastrintestinal a antihelmínticos tem demonstrado limitada eficiência desse método para o controle de determinadas endoparasitoses em ruminantes, incentivado assim, pesquisas com métodos alternativos de controle parasitário. A utilização de compostos químicos no tratamento anti-helmíntico de animais, em associação com fungos nematófagos usados no controle biológico, é uma estratégia que vem se mostrando eficaz para a redução da densidade populacional de nematódeos nos animais de produção e pouco se sabe sobre seu emprego simultâneo. Este trabalho teve por objetivo verificar, através da Concentração Inibitória Mínima (CIM), a suscetibilidade in vitro dos fungos nematófagos Arthrobotrys oligospora, Duddingtonia flagrans, Paecilomyces fumosoroseus, Paecilomyces lilacinus, Paecilomyces marquandii e Paecilomyces variotii aos antiparasitários albendazol, tiabendazol e ivermectina (100%), levamisol (7,5%) e closantel (10%). As CIMs variaram de 4 a 0,031µg/mL para albendazol, tiabendazol e ivermectina, de 0,937 a 0,117µg/mL para o levamisol e de 0,625 a 0,039µg/mL para o closantel, dependendo do fungo testado. Os resultados mostram que todos os antiparasitários testados tiveram efeito inibitório in vitro sobre os fungos nematófagos, podendo comprometer suas ações como bioagentes de controle biológico.

A produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) nos sistemas biológicos é contrabalanceada pelos sistemas antioxidantes enzimáticos e não-enzimáticos. Quando há um desequilíbrio entre a geração de ROS e esses sistemas, ocorre um aumento dessas espécies reativas causando estresse oxidativo, que pode levar a danos a macromoléculas, como lipídios, proteínas e o DNA. Os fármacos doxorrubicina (antineoplásico) e benzonidazol (antiparasitário) são conhecidos por induzir efeitos colaterais que podem estar relacionados ao aumento de ROS. Além disso, ensaios de mutagenicidade demonstram que esses fármacos apresentam atividade mutagênica por danos oxidativos. O Grupo NEQUIMED desenvolve substâncias com potencial atividade antineoplásica e antiparasitária, as quais ainda não foram avaliadas em relação às propriedades tóxicas e genotóxicas. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi analisar as propriedades mutagênicas e de estresse oxidativo dessas novas substâncias, comparando aos fármacos benzonidazol e doxorrubicina. Para detecção de ROS foi realizado o ensaio fluorimétrico utilizando o marcador 2,7-diacetato de diclorofluoresceína (DCFH-DA) em linhagens celulares de hepatocarcinoma humano (HepG2) e fibroblasto de camundongo (Balb/C 3T3 clone A31). O estado redox destas células foi avaliado através da quantificação da expressão gênica e do conteúdo proteico das enzimas antioxidantes através das técnicas de qRT-PCR e Western blot, respectivamente. A atividade mutagênica foi analisada com o ensaio Ames miniaturizado Salmonella/microssoma utilizando a linhagem TA102 de Salmonella typhimurium que detecta agentes mutagênicos que causam danos por oxidação. Os resultados mostraram que as substâncias estudadas pelo Grupo não induzem aumento na produção de ROS ou induzem em menores níveis do que doxorrubicina e benzonidazol, além de levar a alterações menos proeminentes que os fármacos para a expressão das proteínas antioxidantes. No ensaio mutagênico, o benzonidazol apresentou o pior perfil, doxorrubicina e Neq0438 somente foram mutagênicos com ativação enzimática, enquanto Neq0551 foi inativo. Assim, as novas substâncias (Neq0438 e Neq0551) apresentaram um perfil melhor do que os fármacos de referência, tornando-os candidatos promissores para estudos in vitro e in vivo subsequentes. / The production of reactive oxygen species (ROS) in biological systems is compensated by the enzymatic and non-enzymatic antioxidant systems. The excessive ROS production causes oxidative stress, which can damage important cellular macromolecules such as lipids, proteins and DNA. The drugs doxorubicin (antineoplastic) and benzonidazole (antiparasitic) are both known for their side effects, which can be related to the increase of ROS. Besides, mutagenicity assays show that these drugs have a mutagenic activity via oxidative damages. The research group NEQUIMED studies new substances with potential antineoplastic and antiparasitic activities, but their toxic and genotoxic properties have not been fully evaluated yet. Thus, the aim of this work is to assess the mutagenic potential and the oxidative stress generated by these substances, comparing them to benzonidazole and doxorubicin. The fluorimetric assay using the probe dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH-DA) was used for ROS detection in human hepatocarcinoma (HepG2) and mouse fibroblast (Balb/C 3T3 clone A31) cell lines. The redox state of these cells was evaluate by qRT-PCR and Western blot methods to quantifying gene expression and protein content of the antioxidant enzymes. The mutagenic potential was assessed by the miniaturized Ames text with the Salmonella/microssome mutagenicity assay, using the TA102 strain of Salmonella typhimurium, which detects oxidation damages to the DNA. The new substances did not induce an increase on ROS production, or did in lower levels when compared to doxorubicin and benzonidazole. Moreover, reference drugs also induced greater changes on the expression of the antioxidant enzymes. Benznidazole had a higher mutagenic activity, while Neq0438 and doxorubicin were mutagenic only when incubated with enzymatic activation. Neq0551 was inactive for Ames assay. Therefore, these new substances (Neq0438 and Neq0551) had a better overall profile than the reference drugs, turning out to be promising candidates for further in vitro and in vivo studies.

O Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da tripanossomíase americana ou doença de Chagas. O vetor desta parasitose é um inseto hemíptero da família Triatominae, conhecido popularmente como barbeiro, chupões, chupança. A doença de Chagas ocorre desde o sul dos EUA até o sul da Argentina e cerca de 20 milhões de pessoas da América Latina correm o risco de adquirir a infecção. O problema desta patologia está na ausência de fármacos não tóxicos e ativos para a fase crônica da doença. O nifurtimox (retirado recentemente do mercado) e benznidazol, utilizados na terapêutica têm alta incidência de efeitos colaterais, o que compromete o tratamento. Face ao exposto, é necessária a pesquisa de novos agentes que sejam eficazes para a cura e bem-estar do paciente chagásico. À vista de tais fatos e utilizando-se o método de modificação molecular latenciação, o objetivo deste trabalho foi o estudo de condições sintéticas para pró-fármacos dendriméricos de hidroximetilnitrofural potencialmente antichagásicos. O hidroximetilnitrofural tem mostrado atividade contra as formas amastigotas e tripomastigotas do Trypanosoma cruzi in vitro. Já os dendrímeros são novas arquiteturas moleculares, estruturas nanoscópicas, extremamente organizadas com massa molecular definida. Possuem diversas vantagens em relação aos polímeros tradicionais e podem atuar como agentes transportadores de fármacos, permitindo-Ihes liberação controlada. Os estudos desenvolvidos acerca das condições reacionais para a obtenção do dendrímero de primeira geração mostraram a dificuldade em se obtê-los. O hidroximetilnitrofural apresentou baixa reatividade nas condições estudadas, o que conduz à necessidade de estudos adicionais sobre novas rotas para a síntese dos dendrímeros a partir dos ésteres desse derivado. / The Trypanosoma cruzi is an etiological agent of American tripanosomiasis or Chagas\' disease. The vector of this parasitic disease is a hemipter insect from Triatominae family, known popularly as barber. Chagas\' disease occurs from the South of USA to the South of Argentine and about 20 million of people in Latin America are under the risk of acquiring the infection. The problem of this pathology is the absence of non toxic and active drugs for its chronic phase. Nifurtimox (recently removed from the market) and benznidazole, the only that has been available for therapeutics have high incidence of side effects. So, the research of new agents for the cure and welfare of the patient is needed. Taking into account such facts and employing a process of molecular modification, named latentiation, the aim of this work was the study of the synthetic conditions for obtaining potentially antichagasic dendrimeric prodrugs of hydroxymethylnitrofurazone. The hydroxymethylnitrofurazone showed to be active against the trypomastigotes and amastigotes forms of Trypanosoma cruzi in vitro. On the other hand, the dendrimers are new molecular architecture, nanoscopic structure extremely organized with defined molecular weight. They have a wide range of advantages related to traditional polymers and can act as drug carriers, towards drug controlled release. The studies developed concerning the reaction conditions for the attainment of the first generation of dendrimer showed the difficulty in obtaining these prodrugs. The hydroxymethylnitrofurazone presented low reactivity in the studied conditions, which leads to the necessity of developing further studies about new synthetic routes for obtaining dendrimers from its ester derivative.

Este trabalho tem como meta o estudo comparativo de duas rotas de síntese do megazol, tomando como base estudos feitos na Faculdade de Ciências Farmacêuticas da USP. Nestes foram observados que a obtenção do megazol pode ser feita por diferentes caminhos sintéticos, modificando processos e reagentes envolvidos na química de heterocíclicos, em particular os imidazóis. Foram avaliadas condições experimentais, rendimentos parciais e globais bem como as características de reagentes envolvidos nos processos indicados. / The scope of the present work is the analogy study over the two main routes on megazol synthesis, based on studies previously accomplished at the College of Pharmaceutical Sciences of USP. In the results of the above referred studies, it was observed that the obtaining of the megazol can be achieved by different synthetic ways, by modifying processes and reagents related to the chemical properties of heterocyclic compounds, particularly with the imidazoles. Experimental conditions, both partial and final yields as well as the characteristics of the reagents evolved in the indicated processes were evaluated.