Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: A defiCiência de alfa-1 antitripsina e uma desordem genetica que resulta no aparecimento precoce de enfisema pulmonar e doenca hepatica. A Organizacao Mundial de Saúde e American Thoracic Society /European Respiratory Society preconizam que os pacientes com doenca pulmonar obstrutiva cronica realizem o rastreamento para defiCiência de alfa-1 antitripsina. No entanto, existe a necessidade de exames mais acessiveis para possibilitar a realizacao dessa orientacao em paises com extensa dimensao territorial, como o Brasil. A tecnica em papel filtro e um procedimento simples, que tem sido amplamente utilizado para o rastreamento genetico e diagnostico de diversas doencas. Objetivo: Validacao do metodo de dosagem de alfa-1 antitripsina por imunonefelometria em amostras de papel filtro em pacientes com doenca pulmonar obstrutiva cronica no Brasil. Metodos: Foi analisada a dosagem da alfa-1 antitripsina plasmatica e em papel filtro de 192 pacientes com doenca pulmonar obstrutiva cronica. Para a analise o papel filtro (WhatmanTM, GE, 903, lot W101, USA) foi picotado em discos com diametro de 6 mm e, posteriormente, diluidos em 200 μL de soro fisiologico permanecendo a 4ºC durante 12 horas. Tanto as amostras de papel filtro quanto de plasma foram analisadas no equipamento da Siemens BNII pelo metodo de imunonefelometria. Resultados: O coeficiente de correlacao entre a concentracao de alfa-1 antitripsina serica e no papel filtro foi de r= 0,45. Atraves da tecnica de reamostragem obootstrapo foi determinado um ponto de corte de 2,02 mg/dl, com um intervalo de confianca de 1,45 u 2,64 mg/dL (97%), para o papel filtro. Com o ponto de corte de 2,02 no papel filtro foi observado sensibilidade de 100%, especificidade de 95,7% e valor preditivo positivo de 27,2% e negativo de 100%. Conclusao: O metodo em papel filtro se mostrou uma ferramenta confiavel para o rastreamento de pacientes com defiCiência de alfa-1 antitripsina. Entretanto, recomenda-se que os individuos que apresentarem valores da alfa-1 antitripsina no papel filtro abaixo do valor maximo do intervalo de confianca (2,64 mg/dL) sejam investigados por meio de testes mais especificos, garantindo maior confiabilidade ao metodo / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: A defiCiência de alfa 1-antitripsina (DAAT) e um disturbio genetico descoberto ha 50 anos, com diversas implicacoes clinicas, que afeta especialmente pulmao e figado. Esta defiCiência e o fator genetico mais notorio, associado ao aumento do risco do desenvolvimento de doenca pulmonar obstrutiva cronica em fumantes. Seu diagnostico envolve a deteccao de niveis sericos reduzidos e determinacao genotipica. Apesar de sua importancia, nao existem dados epidemiologicos brasileiros a respeito da prevalencia da defiCiência e, ou da frequencia de ocorrencias dos alelos deficientes. Objetivo: Este estudo visa a reconhecer a DAAT, em uma populacao de individuos com DPOC, e a realizar a determinacao dos genotipos encontrados, assim como a frequencia alelica dos alelos envolvidos nesta doenca: Materiais e Metodo: Trata-se de um estudo transversal, envolvendo 1073 pacientes. Destes 926 tinham diagnostico de DPOC, com relacao VEF1/CVF abaixo do limite inferior do normal, em idade superior a 40 anos, de ambos os sexos, pertencentes a cinco estados brasileiros (São Paulo, Pernambuco, Goias, Ceara e Rio Grande do Sul). Caracterizou-se pela dosagem de AAT em eluato de papel filtro, por nefelometria e, nos individuos identificados como possiveis deficientes, pela dosagem de AAT serica. Todos aqueles com dosagem serica de AAT < 113 mg/dL foram submetidos a genotipagem e, nos casos de resultados discordantes, foi realizado o sequenciamento genetico por PCR. Resultados: Dos pacientes incluidos no estudo, 85 tinham dosagem de AAT em eluato de papel filtro &#8804; 2,64 mg/dL e 24 (2,8% do total) tinham dosagem serica < 113 mg/dL. Os alelos encontrados neste subgrupo foram: Pi*Z (54,2%), Pi*M (31,3%), Pi*S (12,5%), Pi*M1 (2,1%). Para a populacao total do estudo, a estimativa da defiCiência de AAT intermediaria a grave foi 2,8% e, somente para a defiCiência grave (ZZ) de AAT, a estimativa de prevalencia foi 0,8%. Conclusao: Este e o primeiro estudo destinado a estabelecer a prevalencia da defiCiência de AAT e a frequencia dos alelos envolvidos, em pacientes com DPOC, no Brasil. As frequencias encontradas mostram que a defiCiência de AAT esta presente em pacientes com DOPC, no Brasil, e reforcam as diretrizes mundiais que incentivam sua pesquisa em individuos com doenca pulmonar obstrutiva / BV UNIFESP: Teses e dissertações

O saco vitelínico é uma das membranas embrionárias que desempenham um papel importante para a sobrevivência inicial do embrião em muitas espécies de mamíferos, além de produzir proteínas necessárias para o desenvolvimento do mesmo. Foram coletados 17 embriões bovinos, em diferentes períodos gestacionais afim de identificar as proteínas alfafetoproteína, alfa- 1 antitripsina e transferrina, presentes no saco vitelínico destes,para tanto realizou-se a técnica de Western Blot com eletroforese em gel de poliacrilamida, SDS-PAGE a 6%. Os géis, após a corrida, foram corados com Comassie blue, e as membranas de nitrocelulose, após a transferência, com Ponceau. Utilizaram-se os anticorpos monoclonal para alfafetoproteína anti-camundongo, monoclonal, receptpr de transferrin anti-camundongo IgG1, e policlonal para alfa- 1 antitripsina anti-coelho como anticorpos primário e conjugado para peroxidase e fosfatase como secundários. A revelação foi do tipo colorimétrica-fosfatase alcalina e por ECL. O saco vitelínico apresentou-se bem desenvolvido até os 50 dias de gestação, onde, a partir desse período o processo de involução está bem caracterizado Em algumas amostras do saco vitelínico detectamos a presença da alfafetoproteina, alfa-1 antitripsina e da transferrina, porém em algumas amostras as bandas estavam fracas, mostrando assim, que os anticorpos reagem com as proteínas bovinas. O fato de aparecerem bandas fracas pode estar relacionado a uma fraca reação cruzada por se tratar de um anticorpo não específico. / In many species of mammals, the yolk sac is one of the embrionary membranes that plays an important role in the embryo´s initial survival, as well as, in the manufacturing of the necessary proteins for its development. In order to identify the proteins: alfafetoprotein, alfa 1 - antitrypsin, and transferrin present in the cow´s embryo´s yolk sac, 17 bovine embryos were collected in different pregnancy periods. This procedure was performed by Western Blot Technique with a polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE, at 6%. Gels following the electrophoresis, where tainted with Comassie blue, and the membranes of Nitrocellulose, following their transference (the proteins that were present in the gel go to the membrane), with Ponceau. Monoclonal Antibody mouse anti human &alpha;-fetoprotein, alphafetoprotein mouse monoclonal antibody, transferrin receptor mouse IgG1, and rabbit polyclonal to alpha 1 antitrypsin were used as primary antibodies, and Peroxidase labelled antimouse e Peroxidase labelled antirabbit e anti-mouse IgG- Alkaline Fosfatase as secundary ones. The membrane´s revelation was of the alcaline fosfatase colormetric type and by ECL. The yolk sac was presented well developed until the 50 days of gestation, where to break of this period the involution process well it is characterized. In some of the yolk sac samples we detected the presence of alfafetoprotein, alfa 1- antitrypsin, and transferrin, however, the bands in some specimens (samples) were weak, demonstrating that the antibodies react with the bovine proteins. The fact that weak bands appeared might be related to a weak cross reaction since we are dealing with a non specific antibody.

O saco vitelínico é uma das membranas embrionárias que desempenham um papel importante para a sobrevivência inicial do embrião em muitas espécies de mamíferos, além de produzir proteínas necessárias para o desenvolvimento do mesmo. Foram coletados 17 embriões bovinos, em diferentes períodos gestacionais afim de identificar as proteínas alfafetoproteína, alfa- 1 antitripsina e transferrina, presentes no saco vitelínico destes,para tanto realizou-se a técnica de Western Blot com eletroforese em gel de poliacrilamida, SDS-PAGE a 6%. Os géis, após a corrida, foram corados com Comassie blue, e as membranas de nitrocelulose, após a transferência, com Ponceau. Utilizaram-se os anticorpos monoclonal para alfafetoproteína anti-camundongo, monoclonal, receptpr de transferrin anti-camundongo IgG1, e policlonal para alfa- 1 antitripsina anti-coelho como anticorpos primário e conjugado para peroxidase e fosfatase como secundários. A revelação foi do tipo colorimétrica-fosfatase alcalina e por ECL. O saco vitelínico apresentou-se bem desenvolvido até os 50 dias de gestação, onde, a partir desse período o processo de involução está bem caracterizado Em algumas amostras do saco vitelínico detectamos a presença da alfafetoproteina, alfa-1 antitripsina e da transferrina, porém em algumas amostras as bandas estavam fracas, mostrando assim, que os anticorpos reagem com as proteínas bovinas. O fato de aparecerem bandas fracas pode estar relacionado a uma fraca reação cruzada por se tratar de um anticorpo não específico. / In many species of mammals, the yolk sac is one of the embrionary membranes that plays an important role in the embryo´s initial survival, as well as, in the manufacturing of the necessary proteins for its development. In order to identify the proteins: alfafetoprotein, alfa 1 - antitrypsin, and transferrin present in the cow´s embryo´s yolk sac, 17 bovine embryos were collected in different pregnancy periods. This procedure was performed by Western Blot Technique with a polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE, at 6%. Gels following the electrophoresis, where tainted with Comassie blue, and the membranes of Nitrocellulose, following their transference (the proteins that were present in the gel go to the membrane), with Ponceau. Monoclonal Antibody mouse anti human &alpha;-fetoprotein, alphafetoprotein mouse monoclonal antibody, transferrin receptor mouse IgG1, and rabbit polyclonal to alpha 1 antitrypsin were used as primary antibodies, and Peroxidase labelled antimouse e Peroxidase labelled antirabbit e anti-mouse IgG- Alkaline Fosfatase as secundary ones. The membrane´s revelation was of the alcaline fosfatase colormetric type and by ECL. The yolk sac was presented well developed until the 50 days of gestation, where to break of this period the involution process well it is characterized. In some of the yolk sac samples we detected the presence of alfafetoprotein, alfa 1- antitrypsin, and transferrin, however, the bands in some specimens (samples) were weak, demonstrating that the antibodies react with the bovine proteins. The fact that weak bands appeared might be related to a weak cross reaction since we are dealing with a non specific antibody.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-13T13:07:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_VerificacaoAssociacaoVariabilidade.pdf: 1628183 bytes, checksum: 55fc26df5908aacccaa7561b8a2faab9 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-03-31T13:17:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_VerificacaoAssociacaoVariabilidade.pdf: 1628183 bytes, checksum: 55fc26df5908aacccaa7561b8a2faab9 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-31T13:17:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_VerificacaoAssociacaoVariabilidade.pdf: 1628183 bytes, checksum: 55fc26df5908aacccaa7561b8a2faab9 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2004 / A asma brônquica é uma desordem inflamatória crônica, complexa, na qual estão envolvidos fatores genéticos e ambientais. A inflamação das vias aéreas na asma é regulada, predominantemente, por células do sistema imunológico e por uma vasta rede de citocinas que interagem mutuamente e com as vias aéreas. O exato desempenho funcional de cada citocina na fisiopatologia da asma ainda necessita ser completamente estabelecido. A presente investigação teve como objetivo comparar a distribuição dos alelos S e Z do gene da A1AT e do polimorfismo do gene do TNF-α (-308 G/A) em uma população de 110 asmáticos, divididos em dois níveis de severidade da asma (com 54 pacientes no nível da doença moderada persistente e 56 pacientes no nível da doença severa persistente). Os genótipos da A1AT e do TNF-α (-308 G/A) foram determinados pela técnica de digestão enzimática (polimorfismo no comprimento dos fragmentos de restrição). O polimorfismo no promotor do gene do fator de necrose tumoral TNF-α (-308G/A), citocina pro-inflamatória que participa da reação inflamatória em pacientes com asma, contribuindo para a hiperreatividade brônquica, não foi na presente investigação, associado com a doença ou com o aumento da hiperreatividade brônquica, nos níveis de severidade sintomática mais graves da doença. / Asthma is a complex chronic inflammatory disorder in which genetic and environmental factors are involved with the remodeling extracelullar matrix. The present study had aim to describe, through genetic methods, the prevalence of both S and Z alpha 1-antitrypsin alleles and the TNF-α (-308) genetic polymorphism, associated with the spectrum of asthma severity levels. A total of 110 asthmatics recruited random sample fora physical examination, determination of cutaneous sensibility with prick test, determination of respiratory parameters (forced expiratory volume in the first second and vital capacity) and DNA analysis by polymerase chain reaction and RFLP, completed this study. The patients was divided in two groups, 54 with moderated asthma and 56 with severe asthma. The genotype distribution of the deleterious variants of alpha 1 - antitrypsin may contribute to the severe persistent level of asthma. The TNF-α (-308 G/A) heterozygotes is not significantly associated with asthma.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Recurrent airway obstruction (RAO) and inflammatory airway disease (IAD) show high prevalence and are economically important in equine athletes. RAO is considered a multifactorial disease due to genetic and environmental components in their patophysiology. The aim of this study was to determine the presence of polymorphism at exons 2, 3, 4 and 5 of the SPi2 gene and a possible association between them and ORA or IAD on 51 thoroughbred horses through single-strand conformational polymorphism (SSCP). Exons 2, 3 and 4 of the Spi2 gene showed no polymorphism. On exon 5, 3 alleles and 6 genotypes were identified. Frequency of allele A (0.6388) and genotype AA (0.3888) were higher in horses affected by RAO but no association was found between any polymorphism and horses with RAO or IAD. / A obstrução recorrente das vias aéreas (ORA) e a doença inflamatória das vias aéreas (DIVA) são doenças de alta prevalência e economicamente importantes em cavalos atletas. A ORA é considerada uma enfermidade multifatorial por apresentar componentes ambientais e genéticos em sua fiosiopatologia. O presente trabalho teve por objetivo determinar a presença de polimorfismos nos éxons 2, 3, 4 e 5 do gene SPi2 e verificar uma possível associação destes com a ORA e/ou DIVA em 51 cavalos Puro Sangue de Corrida através da técnica de polimorfismo conformacional de fita simples (SSCP). Os éxons 2, 3 e 4 não apresentaram polimorfismo. No éxon 5 do gene Spi2 foram identificados três alelos e seis genótipos. Apesar do alelo A e o genótipo AA apresentarem freqüência (0,6388 e 0,3888, respectivamente) mais elevada nos animais com ORA, não houve associação entre os polimorfismos observados e ORA ou DIVA.