The lymphatic filariasis, a disease known as elephantiasis in one of its chronic manifestations, is caused by a helminth nematodes species of Wuchereria bancrofti (Cobbold, 1877) that just parasite to human. It is transmitted by mosquitoes of the Culex quinquefasciatus (Say, 1823), with haematophagic nocturnal habit, which coincides with the peak of microfilariae in peripheral blood of the host. It is considered the second leading cause of the disability worldwide to work, to cause physical weakness, social stigma and economic loss. Is distributed in tropical and subtropical regions, present in 83 countries in Asia, Africa, Americas and Oceania, where an estimated 120 million in those infected. In Brazil, the areas considered at risk are the state of Pernambuco (Recife, Olinda, Jaboatão and Paulista), state of Alagoas (Maceió) and state of Pará (Belém), while the latter two cities with the foci of transmission interrupted. Salvador, capital of Bahia state, is considered the oldest focus of Bancroftian filariasis in Brazil. The first epidemiological survey conducted in the city to study the distribution of Wuchereria bancrofti was made in 1878, when 309 individuals were examined in 26 (8.4%) were found microfilariae in the blood. The last survey conducted in 1966 documented the prevalence found in the neighborhood Uruguay of 6.24%. Since then no study was conducted to evaluate the transmission of lymphatic filariasis in Salvador, the focus being considered extinct without any confirmation of the disposal of its transmission. The World Health Organization (WHO) established in 1997, the elimination of lymphatic filariasis in the world by the year 2020. In Brazil, in order to achieve this goal was established in 1997 in conjunction with the National Health Foundation, Research Institutes, Federal University of Alagoas and Health Departments of endemic areas, the National Plan to Eliminate Lymphatic Filariasis. Among the activities planned include the reassessment of epidemiological outbreaks considered extinct. This study aimed to evaluate the distribution of lymphatic filariasis endemic area in the old city of Salvador, Bahia (district and adjacent Uruguay). For this, we carried out the investigation in haemoscopic 11.324 students in the night time, finding no microfilaraemic; 663 employees and their families also underwent the examination of haemoscopia, not being found any microfilaraemic; researched is circulating antigens of W. bancrofti in 510 children aged 6 to 10 years of age through the immunochromatography test - ICT card, where no antigenemia was not identified; and determined the vector infection xenomonitoramento by using the technique of polymerase chain reaction, with the collection of 23.580 female mosquitoes of Culex quinquefasciatus that were engorged and resting inside houses. This analysis was not detected the presence of the DNA from W. bancrofti in these mosquitoes. These findings support that the elimination of the lymphatic filariasis transmission in the former endemic area of Salvador, Bahia and no expansion of lymphatic filariasis in areas adjacent to the old focus of Salvador. / A Filariose linfática (FL), doença conhecida como elefantíase em uma de suas manifestações crônicas, é provocada por um helminto Nematoda da espécie Wuchereria bancrofti (Cobbold, 1877) que parasita exclusivamente o ser humano. Sua transmissão ocorre através de mosquitos da espécie Culex quinquefasciatus (Say, 1823), com hábito hematofágico noturno que coincide com o pico das microfilárias no sangue periférico do hospedeiro. Considerada a segunda causa mundial de incapacidade para o trabalho, provoca debilidade física, estigma social e perdas econômicas. Encontra-se distribuída em regiões tropicais e subtropicais, estando presente em 83 países da Ásia, África, Américas e Oceania, onde são estimados em 120 milhões os infectados. No Brasil as áreas consideradas de risco localizam-se no Estado de Pernambuco (Recife, Olinda, Jaboatão e Paulista), no Estado de Alagoas (Maceió) e no Estado do Pará (Belém), estando as duas últimas cidades com os focos de transmissão interrompidos. Salvador, capital do Estado da Bahia, é considerado o mais antigo foco de bancroftose no Brasil. O primeiro inquérito epidemiológico realizado na cidade, para estudar a distribuição da Wuchereria bancrofti foi feito em 1878, quando foram examinados 309 indivíduos e em 26 (8,4%) foram encontrados microfilárias no sangue. No último inquérito documentado realizado nessa cidade, em 1966, a prevalência encontrada no bairro Uruguai foi de 6,24%. Desde então nenhum estudo foi realizado para avaliar a transmissão da FL em Salvador, sendo o foco considerado extinto sem que houvesse confirmação da eliminação de sua transmissão. A Organização Mundial de Saúde (OMS) estabeleceu em 1997, a eliminação da Filariose linfática no mundo até o ano de 2020. No Brasil, a fim de atingir essa meta foi elaborado, em 1997, em conjunto com a Fundação Nacional de Saúde, Instituições de Pesquisa, Universidade Federal de Alagoas e Secretarias de Saúde de áreas endêmicas, o Plano Nacional para Eliminação da Filariose Linfática. Entre as atividades previstas inclui-se a reavaliação epidemiológica dos focos considerados extintos. Baseando-se nesse princípio, este trabalho tem como objetivo apresentar a distribuição da FL na antiga área endêmica da cidade de Salvador/Estado da Bahia (bairro Uruguai e adjacências). Para isto, realizou-se o inquérito hemoscópico em 11.324 escolares do período noturno, não encontrando nenhum microfilarêmico; 663 funcionários e seus familiares também realizaram o exame da hemoscopia, não sendo encontrado nenhum microfilarêmico; pesquisaram-se antígenos circulantes de W. bancrofti em 510 crianças de 6 a 10 anos de idade através do teste da imunocromatografia ICT card, não sendo identificado nenhuma antigenemia; e avaliou-se a infecção vetorial por xenomonitoramento, através da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase, com a coleta de 23.580 mosquitos fêmeas da espécie Culex quinquefasciatus que se encontravam ingurgitados e pousados dentro das residências. Nessa análise não foi detectado a presença de DNA de W. bancrofti nesses mosquitos. Esses resultados comprovam a eliminação da transmissão da FL na antiga área endêmica de Salvador e a não expansão da FL para áreas contíguas ao antigo foco de Salvador.

Mestre -- Escola Nacional de Saude Publica, Rio de Janeiro, 2002.

Lymphatic filariasis is a highly impact disease because it can impair workers and make difficult their social life. Early diagnosis is very important for efficacy of the treatment. The aim of this study was to establish, in a defined population, the prevalence of Wuchereria bancrofti, the causative agent of lymphatic filariasis, using rapid immunochromatographic card test and thick blood smears; compare the immunochromatographic test with the thick blood smear parasitological method, and evaluate different parasitological techniques. Inhabitants of lymphatic filariasis endemic area were examined in Maceió, Alagoas State, Northeasth Brazil (at the edge of a channel - Reginaldo Canal - that crosses the city sectors Feitosa, Jacintinho and Pitanguinha). The examination of 3,000 children between 5 and 10 years old by immunochromatographic test revealed 10 (0,33%) antigen-positive, and of 411 individuals older than 10 years of age only one (0,24%) was antigen-positive. By thick blood smear method, in the same endemic area, among 5,261 children examined between 5 and 10 years old 4 (0,076%) microfilaremic were detected, and 25 (0.13%) from 19,875 individuals older than 10 years of age were found to be microfilaraemic. The parasite antigen assay using rapid immunochromatographic for diagnosis made possible to carry out tests during daytime, in opposition of the traditional thick blood smears method. Comparing the results from immunochromatographic test and thick smears, a increased ability for parasite detection by the immunological method was observed when children between 5-10 years old were examined, being odds relative 4.4 (I.C. 95% = 1.3 - 16.6). However, with individuals older than 10 years of age, no significant difference on parasites detection ability between these techniques was observed. All antigen-positive individuals by immunochromatographic test were examined by membrane blood filtration and none of them were microfilaraemic. Positive individuals by immunochromatographic test and thick blood smears were also positive when submitted to the enzyme-linked immunosorbent assay. The enzyme-linked immunosorbent assay was better than immunochromatographic test in detected W. bancrofti antigen. From the results of immunochromatographic test with children between 5 and 10 years old (age group preconized by WHO to verify active transmission of lymphatic filariasis) it was possible to show a very low prevalence of parasitism in the delimited area, meaning that in a short time Maceió can be free from lymphatic filariasis transmission / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A filariose linfática é uma doença de grande impacto, pois pode incapacitar seus portadores para o trabalho e dificultar seu convívio social, sendo de grande importância o diagnóstico ainda na fase inicial para que o tratamento seja eficaz. O objetivo do presente trabalho foi identificar em população definida, a prevalência de Wuchereria bancrofti, causadora de filariose linfática, utilizando testes de imunocromatografia rápida em cartão e gota espessa de sangue; comparar a imunocromatografia rápida frente ao método parasitológico da gota espessa de sangue, e avaliar diferentes técnicas parasitológicas. Foram examinados moradores da região endêmica de filariose linfática, definida anteriormente em Maceió, AL (parte dos bairros centrais e contíguos Feitosa, Jacintinho e Pitanguinha, ao longo do canal do Reginaldo). Através da imunocromatografia rápida foram avaliadas 3.000 crianças com idade entre 5-10 anos, sendo 10 (0,33%) antígeno-positivo; e entre 411 indivíduos > 10 anos examinados, apenas um (0,24%) foi antígeno-positivo. Através da gota espessa de sangue e na mesma área endêmica, foram examinadas 5.261 crianças com idade entre 5-10 anos, sendo 4 (0,076%) microfilarêmicas, e examinados 19.875 indivíduos > 10 anos, sendo 25 (0,13%) microfilarêmicos. A utilização de imunocromatografia rápida como forma de diagnóstico, através da pesquisa de antígenos do parasito, possibilitou a realização dos exames em horários matutino e vespertino, fato que se opõe ao método tradicional através de gota espessa. Fazendo-se uma comparação entre os resultados obtidos pela imunocromatografia rápida com os da gota espessa pode-se observar uma maior capacidade de detecção dos parasitados pelo método imunológico quando avaliadas crianças de 5-10 anos de idade sendo a odds relativa igual a 4,4 (I.C. 95% = 1,3 16,6); já em indivíduos com > 10 anos não houve diferença significativa na capacidade de detecção de parasitados entre essas técnicas. Todos os indivíduos antígeno-positivo pela imunocromatografia rápida foram submetidos a exames pela filtração de sangue em membrana e nenhum foi microfilarêmico. Os indivíduos positivos através da imunocromatografia e da gota espessa de sangue, foram submetidos ao teste imunoenzimático, sendo todos positivos por essa última técnica. A técnica imunoenzimática mostrou igual capacidade na detecção de antígenos circulantes de W. bancrofti quando comparada com a imunocromatografia rápida. Através dos exames realizados, utilizando a imunocromatografia rápida na faixa etária de 5 a 10 anos (idade preconizada pela OMS para verificação de transmissão ativa da filariose linfática), foi detectada uma prevalência muito baixa da parasitose na área demarcada, mostrando que em pouco tempo a cidade de Maceió-AL poderá estar livre da transmissão da filariose linfática

Lymphatic filariasis (LF) is an incapacitating disease caused by three filarial nematodes belonging to the family Onchocercidae, namely Brugia timori, Wuchereria bancrofti and Brugia timori. An estimated 90% of lymphatic filariasis cases globally are caused by Wuchereria bancrofti. To evaluate the success of the Global Program to eliminate Lymphatic Filariasis it is essential to monitor the frequency of larval infection in the mosquito vector. Molecular methods to detect Wuchereria bancrofti DNA in mosquitoes have been in existence since 1996. However these methods have not been widely adopted due to the high cost associated with them and the inability of these assays to distinguish between immature and infectious stages in the mosquito vector. The overall aim of this project was to modify, as previously described in literature, the Laney real time PCR assay to permit it to be used in an end point Reverse Transcriptase (RT)-PCR ELISA format. The endpoint PCR-ELISA uses inexpensive conventional thermocyclers and inexpensive reagents and probes. To accomplish this overall goal the specific objectives were to produce a positive control RNAs for Wb-cut-1.2 L3 specific RT-PCR and Wb-TPH RT-PCR that detects any stage of the parasite, and to adapt the detection of both transcripts to a PCR-ELISA format. Positive RNA controls were prepared and purified using template cDNA made available through FR3, subsequent development and optimization of the RT PCR ELISA was achieved through the adaptation of the Onchocerca volvulus O150 PCR ELISA protocol. We found a 16-fold difference in the limit of detection between the ELISA assay and conventional end point RT-PCR when we did a 2-fold dilution series of PCR products for both Wb-Cut-1.2 and Wb-TPH. This indicates that our assay was 16 times more sensitive than the use of regular agarose gel electrophoresis to analyze PCR products. The limit of detection with ELISA and gel analysis were comparable when a 10-fold dilution series of the positive control RNA template was done. The RT-PCR ELISA takes a day to complete and up to three 96 well plates a day can be processed compared to the limited number of samples that can be analyzed by gel electrophoresis a day. It is anticipated that our assay will be used in the molecular xenomonitoring of Wuchereria bancrofti providing earlier time-point assessments of LF infection in endemic areas. In areas that were once endemic, our diagnostic tool will play a pivotal role in monitoring LF resurgence.

Lymphatic filariasis is a neglected disease popularly known as elephantiasis because of one of its chronic clinical manifestation. In Maceió, filariasis transmission is restricted to a well defined area in the city including the contiguous and central ditricts of Feitosa, Jacintinho and Pitanguinha, at the edge of Canal do Reginaldo. In order to assess the epidemiological situation of lymphatic filariasis in Maceió after the implementation of the "Program to Eliminate Lymphatic Filariasis" (PELF) in the city in 1999, hemoscopic and immunological surveys were conducted. For the hemoscopic survey (HS) blood sample was collected by the thick smear (TS) technique after after 9h30 pm, and examined for the presence of circulating microfilariae (mf). Using this technique 53,857 individuals in the endemic area and 9.880 inhabitants in the neighbouring area were examined, aged four years or older. Immunological survey (IS) was carried out using a rapid immunochromatographic card test ("ICT card test") to examine 414 inhabitants of the endemic area and 2,541 in the neighbouring area, being 2,214 individuals between 15 and 25 years and 327 children between 5 and 10 years old. By TS, 182 (0,32%) out of the 53,857 examined individuals in the endemic area presented microfilariae, being the prevalence significantly higher among male than female. It was observed along the years the following frequencies of microfilaraemic carriers: 1999 0.76%; 2000 0.57%; 2001 0.49%; 2002 0.11%; 2003 0.13%; 2004 0.06%. Among 9,880 individuals examined in the neighbouring area, only one (0,01%) microfilaremic carrier was detected. Only one (0,24%) filarial antigen carrier out of 414 examined, were detected. In neighbouring area, 327 children were examined for the "ICT card test", all being antigen-negative, while 2,214 young adults examined, eight (0,36%) presented soluble antigens. The average of microfilariae density of 93.8 ± 149.1 mf/mL blood, is significantly lower than that observed in the same area, in the past decade of 580.5 ± 786 mf/mL. During the study carried out since the implementation of the PELF in Maceió, from 1999 until 2006, the prevalence rates of microfilaraemic diagnosed by TS in the endemic area presented a significant decrease. Analysing the results of examined individuals from the neighbourhood of the endemic area it is evident that filariasis do not spread to the contiguous districts of the endemic focus. The IS carried out in individuals above five years of age in the general population of the endemic area detected very low antigenaemia for Wuchereria bancrofti in 2003. The IS in the neighbouring area carried out in children of 5-10 years old did not detect any individual with circulating antigen of W. bancrofti, whereas in the group of young adults (15-25 years), in this same area, eight individuals were found antigenpositive, being six amicrofilaraemic and two with low microfilaraemia when examined by TS usually employed in big surveys. The results of this study prove that measures used for the elimination of Bancroftian filariasis in the endemic focus of the disease in Maceió, as the treatment and accompaniment of the microfilaraemics since the implementation of the PEFL in 1999, were effective to control transmission in the studied area, making possible its elimination. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A filariose linfática é uma doença negligenciada, conhecida popularmente como elefantíase devido a uma de suas manifestações clínicas crônicas. Em Maceió, o foco de transmissão está restrito a uma área definida na cidade que abrange parte dos bairros centrais e contíguos Feitosa, Jacintinho e Pitanguinha, localizado a partir da margem do Canal do Reginaldo. Com o objetivo de demonstrar a situação da filariose linfática no foco endêmico de Maceió, após a implantação do Programa de Eliminação da Filariose Linfática (PEFL) no município em 1999, foram realizados inquéritos hemoscópicos e imunológicos. Para o inquérito hemoscópico (I.H.), foi utilizada a Gota espessa de sangue (GE), coletada após as 21h30, para pesquisa de microfilárias (mf) circulantes. Foram examinados por esta técnica, 53.857 indivíduos residentes na área endêmica e 9.880 residentes na área circunvizinha à área endêmica, todos com idade acima de quatro anos. Durante o inquérito imunológico (I.I.), realizado com o uso da imunocromatografia rápida em cartão ( ICT card test ), foram examinados 414 indivíduos residentes na área endêmica e 2.541 na área circunvizinha à área endêmica, sendo 2.214 indivíduos com idade entre 15 e 25 anos e 327 crianças com idade entre 05 e 10 anos. Para o I.H., dos 53.857 indivíduos residentes na área endêmica, 182 (0,32%) apresentaram microfilárias circulantes, sendo a prevalência significativamente maior nos indivíduos do sexo masculino que entre os do sexo feminino. Ao longo do período de avaliação da área endêmica foi observada em cada ano as seguintes freqüências de microfilarêmicos: 1999 0,76%; 2000 0,57%; 2001 0,49%; 2002 0,11%; 2003 0,13%; 2004 0,06%. Entre os 9.880 indivíduos avaliados na área circunvizinha, detectou-se apenas um (0,01%) indivíduo microfilarêmico. Durante o I.I. na área endêmica foi verificado que dos 414 examinados, 01 (0,24%) apresentou resultado positivo para antígenos circulantes solúveis do parasito. Na área circunvizinha, das 327 crianças examinadas pelo ICT card test , todas foram antígenos-negativos, enquanto que dos 2.214 adultos jovens avaliados, oito (0,36%) apresentaram antígenos solúveis. Em relação a densidade de microfilárias, foi verificada uma microfilaremia média de 93,8 ± 149,1 mf/mL de sangue, sendo esta densidade significativamente menor do que a encontrada, na mesma área, na década passada, com microfilaremia média de 580,5 ± 786 mf/mL. Durante todo o estudo realizado desde a implantação do PEFL em Maceió, de 1999 até o ano de 2006, constatou-se que a prevalência de microfilarêmicos diagnosticados através da GE na área endêmica apresentou uma significativa redução. A avaliação da população residente na área circunvizinha à área endêmica mostrou que a bancroftose não se expandiu para os bairros contíguos a área endêmica. O I.I. realizado em indivíduos ≥ cinco anos de idade na população geral de residentes da área endêmica detectou muito baixa antigenemia para Wuchereria bancrofti em 2003. O I.I. na área circunvizinha, realizado em crianças de 05 a 10 anos de idade não detectou nenhum indivíduo com antígenos circulantes de Wuchereria bancrofti, enquanto que no grupo de adultos jovens (15 25 anos), nessa mesma área, foi encontrado oito indivíduos antígenos-positivos, porém seis amicrofilarêmicos e dois com baixa microfilaremia, o que não seria detectado através da GE, normalmente utilizada em grandes inquéritos. Os resultados obtidos neste estudo comprovam que as ações adotadas para a eliminação da bancroftose no foco endêmico de filariose linfática em Maceió, como o tratamento e acompanhamento dos parasitados desde a implantação do PEFL em 1999, foram suficientes para controlar a transmissão da parasitose na região estudada, tornando possível sua eliminação.

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A current initiative to eliminate lymphatic filariasis (LF), headed by the World Health Organization, aims to interrupt transmission of the disease through yearly community-wide treatment with the broad spectrum anthelmintic albendazole (ABZ), in combination with ivermectin (IVM) or diethylcarbamazine (DEC). Over the years, the use of both ABZ and IVM in the treatment of veterinary parasites has led to widespread anthelmintic resistance against these drugs. In this study, we genotyped microfilaria of Wuchereria bancrofti, a causative agent of LF, in order to detect the presence of mutations which confer ABZ resistance in other parasites, and we identified such mutations in worms obtained from untreated patients in Ghana and Burkina Faso, West Africa. Microfilaria from patients who had been treated with ABZ + IVM, had a significantly higher frequency of the resistant genotype, and this frequency was even higher in worms from patients that had received two rounds of treatment. In addition, the untreated population of microfilaria had an excess of homozygotes in the population. This excess homozygosity was equivalent to a Wright's Inbreeding Statistic of FIT= 0.44, and we found that the population was significantly subdivided between patients. In order to better understand the mechanisms and factors involved in the potential spread of ABZ resistance, caused by such mutations, through a population of Culex-transmitted W. bancrofti, we developed a deterministic model that incorporates genotype structure into the epidemiological model EPIFIL. This model predicts that the combination of ABZ + DEC leads to stronger selection for the resistant genotype than ABZ + IVM, and that drug efficacy assumptions are an important factor affecting the spread of drug resistance. Treatment coverage, non-random mating, initial allele frequency and number of treatments also had substantial impact on the speed and magnitude of the spread of ABZ resistance. When we expanded this model to include potential IVM-resistance alleles we found that, under ABZ + IVM treatment, selection for resistance to either drug is enhanced by the presence of resistance against the second drug. Similarly, excess homozygosity caused by parasite non-random mating may increase selection for a dominant IVM resistance allele through enhancing the spread of a recessive ABZ resistance allele. Resistence developed more slowly when it was inherited as a polygenic trait. Results from this study suggest that resistance monitoring is crucial, as resistance may not be apparent until treatment is stopped, recrudescence occurs and treatment is reapplied.

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Made available in DSpace on 2016-06-17T14:12:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1914 bytes, checksum: 7d48279ffeed55da8dfe2f8e81f3b81f (MD5) 2015araujo-ta.pdf: 1322210 bytes, checksum: 5513ddf163f4688be5cc2a44a0c09dfc (MD5) Previous issue date: 2015 / Made available in DSpace on 2016-07-05T22:00:04Z (GMT). No. of bitstreams: 3 2015araujo-ta.pdf.txt: 137695 bytes, checksum: 1560d320cc20fe3f8d42b53c85681e8f (MD5) 2015araujo-ta.pdf: 1322210 bytes, checksum: 5513ddf163f4688be5cc2a44a0c09dfc (MD5) license.txt: 1914 bytes, checksum: 7d48279ffeed55da8dfe2f8e81f3b81f (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A filariose linfática (FL) ou bancroftiana é uma doença parasitária causada por Wuchereria bancrofti, um verme filarial transmitido no Brasil pelo mosquito Culex quinquefasciatus. De acordo com a Organização Mundial de Saúde (OMS) esta doença afeta 120 milhões de pessoas em 58 países. Portanto, para enfrentar a FL, a OMS lançou um programa global para eliminá-la até 2020 e o Brasil tornou signatário dessa proposta criando o Plano Nacional de Eliminação da Filariose Linfática (PNEFL). Atualmente, a Região Metropolitana do Recife (RMR) é uma área de importante transmissibilidade e, assim, foi preconizado o Tratamento Coletivo (TC) da população com o medicamento Dietilcarbamazina (DEC) e o controle vetorial para reduzir a transmissão da doença. Como ferramenta complementar, desde a vigilância até a verificação da eliminação, o xenomonitoramento molecular (baseado na PCR para detecção de W. bancrofti em mosquitos) é um importante método não invasivo para monitorar indiretamente se a transmissão de larvas de W. bancrofti está ocorrendo na população humana. A fim de verificar a taxa de infecção vetorial no mosquito C. quinquefasciatus pela W. bancrofti foram coletadas 43.981 fêmeas do mosquito em doze localidades na RMR. Além disso, foi desenvolvido um novo protocolo (PCR duplex) para o diagnóstico de infecção vetorial e o número ideal de fêmeas por pools foi estabelecido. Os resultados mostraram que Linha do Tiro (Recife), uma área com alto índice de microfilaremia na população humana, apresentou status de transmissão durante o TC com uma taxa de infecção vetorial de 0,80%, diferente das outras localidades com transmissão reduzida não foram detectados pools positivos. Portanto, observa-se que onde o TC é conduzido a taxa de infecção vetorial tende a ser reduzida. O xenomonitoramento molecular é um indicador importante para avaliação da eficiência das estratégias do PGEFL implantado em áreas endêmicas, até que ocorra a certificação da interrupção do ciclo de transmissão da filariose