Thesis (Ph. D.)--Cornell University, March, 2008. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 376-419).

IntroduÃÃo: A beta talassemia à um grupo de distÃrbios, cada um resultando de um defeito genÃtico, na velocidade de sÃntese de uma ou mais cadeias globÃnicas da hemoglobina (Hb). A desproporÃÃo na produÃÃo das cadeias globÃnicas pode resultar em eritropoese ineficaz, produÃÃo insuficiente de Hb, hemÃlise e anemia de grau variado. A beta talassemia à mais frequente nos paÃses banhados pelo mar MediterrÃneo, refletindo a participaÃÃo desses povos na formaÃÃo da populaÃÃo brasileira. As mutaÃÃes predominantes no Brasil sÃo a IVS-I-1, IVS-I-6, IVS-I-110 e o CD 39, as quais estÃo associadas a diversos quadros clÃnicos e sÃo, em sua maioria, regionalmente especÃficas. Objetivo: Caracterizar o perfil clÃnico, hematolÃgico e molecular dos indivÃduos adultos com beta talassemia do Hospital UniversitÃrio Walter CantÃdeo, em acompanhamento no centro de referÃncia de Hematologia e Hemoterapia do estado do Cearà (HEMOCE). Metodologia: Foram analisados 22 indivÃduos portadores de beta talassemia, sendo 7 intermediÃria e 15 menor, de ambos os sexos, no perÃodo de fevereiro de 2008 a setembro de 2009. Os dados clÃnicos e laboratoriais: hemograma, nÃveis de Hb A2 e de Hb F; ferro sÃrico; capacidade total e latente de ligaÃÃo do ferro (CTLFe, CLLFe), ferritina e Ãndice de saturaÃÃo da transferrina (IST), foram obtidos dos prontuÃrios, ao diagnÃstico. Cerca de 5 mL de sangue venoso foi coletado em tubo contendo o anticoagulante EDTA para o estudo molecular. A anÃlise das mutaÃÃes foi realizada por meio da tÃcnica da reaÃÃo em cadeia mediada pela polimerase alelo especÃfico (PCR-AE), onde foram analisadas as seguintes mutaÃÃes: IVS-I-1, IVS-I-6, IVS-I-110 e o CD 39. As anÃlises estatÃsticas foram desenvolvidas no software livre R (versÃo 2.7.0) e o nÃvel de significÃncia estabelecido foi 5%. Resultados: Dos 22 pacientes estudados, 15 eram portadores de β talassemia menor e sete intermediÃria. A idade variou de 18 a 68 anos, com mÃdia de 44,7 anos. 18,2 % do sexo masculino e 81,8% do sexo feminino. As mutaÃÃes foram caracterizadas em 68,2% dos casos, que teve como mais frequente a IVS-I-6, seguida do cÃdon 39. A mutaÃÃo IVS-I-I foi caracterizada em um paciente e a IVS-I-110 nÃo foi encontrada. NÃo houve diferenÃa clÃnica significante entre os parÃmetros hematolÃgicos e bioquÃmicos. Houve discrepÃncia entre o fenÃtipo e o genÃtipo em alguns pacientes, porÃm nÃo houve diferenÃa significativa entre as mutaÃÃes e as manifestaÃÃes clÃnicas. ConclusÃes: Os resultados do presente estudo reforÃam o predomÃnio da mutaÃÃo IVS-I-6 no nordeste do Brasil. Recomendam-se estudos posteriores para investigaÃÃo da co-heranÃa com a α talassemia nesses pacientes para justificar a discrepÃncia entre genÃtipos e fenÃtipos. / Background: Beta thalassemia is a group of disorders, each resulting from a genetic defect in the rate of synthesis of one or more globin chains of hemoglobin (Hb). The imbalance in the production of globin chains can result in ineffective erythropoiesis, insufficient production of hemoglobin, hemolysis and anemia of varying degree. Beta thalassemia is more common in countries bordering the Mediterranean Sea, reflecting the participation of these peoples in the formation of the Brazilian population. The predominant mutations in Brazil are the IVS-I-1, IVS-I-6, IVS-I-110 and CD 39, which are associated with different clinical conditions and are mostly regionally specific. Objective: To characterize the clinical, hematological and molecular adults with beta thalassemia of the University Hospital CantÃdeo Walter and followed at a referral center for Hematology of the state of Cearà (Hemoce). Methods: We analyzed 22 individuals with beta thalassemia, 7 intermediate and 15 minor, in both sexes, from February 2008 to September 2009. Clinical data and laboratory tests: blood count, levels of Hb A2 and Hb F, serum iron, total capacity and latent iron binding (CTLFe, CLLFe), ferritin and transferrin saturation index (IST) were obtained from medical records, diagnosis. About 5 mL of venous blood was collected in tubes containing EDTA anticoagulant for molecular study. The analysis of mutations was performed using the technique of chain reaction mediated by allele specific polymerase (PCR-AE), where we analyzed the following mutations: IVS-I-1, IVS-I-6, IVS-I-110 and CD 39. Statistical analysis was carried out in software R (version 2.7.0) and the level of significance was 5%. Results: Of 22 patients studied, 15 were patients with β thalassemia minor and seven intermediate. The age ranged 18-68 years with a mean of 44.7 years. 18.2% male and 81.8% female. The mutations were characterized in 68.2% of cases, which had the most frequent IVS-I-6, followed by the codon 39. The mutation IVS-I-1 was found in one patient and IVS-I-110 was not found. There was no significant clinical differences between the hematological and biochemical parameters. There was a discrepancy between phenotype and genotype in some patients, but no significant difference between mutations and clinical manifestations. Conclusions: The results of this study reinforce the dominance of the mutation IVS-I-6 in northeastern Brazil. Are recommended further studies to investigate the co-inheritance with α-thalassemia in these patients to justify the discrepancy between genotypes and phenotypes.

by Li Chi-kong. / "September 2002." / Thesis (M.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2002. / Includes bibliographical references (p. 223-251). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Electronic reproduction. Ann Arbor, MI : ProQuest Information and Learning Company, [200-] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Mode of access: World Wide Web.

A ?-talassemia, uma hemoglobinopatia, é caracterizada como um distúrbio hereditário monogênico onde a síntese das cadeias globínicas ? está alterada. Devido desiquilíbrio na relação entre as cadeias ? e ? produzidas, observa-se um excesso de cadeias ? livres, determinante da fisiopatologia da doença. As manifestações observadas são eritropoese ineficaz, hemólise extramedular, anemia, expansão medular, esplenomegalia, deformidades ósseas e acúmulo de ferro. Clinicamente classifica-se como ?-talassemia major (BTM) a forma mais grave da doença, devido à ausência de cadeias ? (?0) ou redução acentuada (?+) acarretando em dependência de transfusões sanguíneas periódicas, para sobrevivência. O traço ?-talassêmico (BTT) antes vistos como assintomáticos, também apresentam alterações, inclusive acúmulo de ferro e eritropoese ineficaz, mas não são dependentes de transfusão e tampouco passam por acompanhamento médico. Extremamente heterogênea, apresenta diversos fenótipos e mais de 300 alterações moleculares causadoras de ?-talassemia já foram descritas em todo mundo. O objetivo deste estudo foi identificar as mutações de ?-talassemia em Ribeirão Preto-SP e procurar associar tais alterações à avaliação hematológica e do status férrico, na tentativa de estabelecer uma relação genótipo-fenótipo. Para tanto, 27 BTM, 23 BTT e 28 controles foram recrutados no Ambulatório de Hemoglobinopatias, do HC/FMRP-USP de Ribeirão Preto. Por meio de PCR-Alelo Específico, pesquisamos as quatro mutações mais comuns no Brasil: CD39 (CAG->TAG), IVS1-110 (G->A), IVS1-6 (T->C) e IVS1-1 (G ->A). A distribuição foi 64% CD39, 26% IVS1-110 e 4% IVS1-6. A análise de covariância e comparação múltiplas, entre os grupos formados e o controle, revelou alterações hematológicas e no status férrico. Os pacientes BTM com a mutação CD39, em sua forma heterozigota ou homozigota, e heterozigotos para a IVS1-110, revelaram anemia grave e intensa sobrecarga de ferro. Os BTT heterozigotos para CD39 demonstraram comprometimento do metabolismo ferro e/ou eritropoese. A adoção de medidas paliativas e de monitoramento aos BTT faz-se necessária, uma vez que, alterações apresentadas associam-se a desordens graves, mas quando não negligenciadas podem ser facilmente prevenidas. A metodologia adotada demonstrou-se eficaz para a pesquisa das mutações estudadas. Embora tenhamos conseguido observar uma relação genótipo-fenótipo, um estudo multicêntrico da população brasileira proporcionará a identificação de mais relações, principalmente nos fenótipos menos prevalentes em nossa região, contribuindo para a compreensão da heterogeneidade da ?-talassemia. / The ?-thalassemia, one haemoglobinopathies, is characterized as a monogenic hereditary disorder where the synthesis of ? globin chains is modified. Due to imbalance in the relationship between production of ? and ? chains, there is an excess of free ? chain that determines the pathophysiology of the disease. Manifestations observed are ineffective erythropoiesis, extra medullary hemolysis, anemia, bone marrow expansion, splenomegaly, bone deformities and iron accumulation. Clinically is classified as ?-thalassemia major (BTM), the most severe form of the disease, as a result of the absence of ? chains (?0) or very large reduction of these (?+) resulting in dependence on regular blood transfusions to survive. The ?-thalassemia trait (BTT) before seen as asymptomatic, also show changes, including iron accumulation and ineffective erythropoiesis, despite of that they aren\'t dependent on transfusion nor undergo medical care. It is extremely heterogeneous, presents several phenotypes and more than 300 molecular changes that causing ?-thalassemia have been described worldwide. The purpose of this study was to identify ?-thalassemia mutations in Ribeirao Preto-Brazil and to explore changes in hematological evaluation and iron status in an attempt to establish a genotype-phenotype relationship. Therefore, a group of 27 BTM, 23 BTT and 28 controls were recruited from the outpatient clinic of hemoglobinopathies, from The Clinical Hospital of Medical School of Ribeirao Preto (HC / FMRP-USP), Brazil. Adopting the technique ARMS (Amplification Refractory Mutation System), we searched for the four most common mutations in Brazil: CD39 (CAG -> TAG), IVS1-110 (G -> A), IVS1-6 (T -> C) and IVS1-1 (G -> A). The distribution was 64% presents CD39 mutation, followed by IVS1-110 e IVS1-6, with 26% and 4% respectively. Covariance Analysis and multiple comparison between the studies groups and control, showed differences in hematological parameters and in iron status either. The BTM heterozygous or homozygous for CD39 mutation and heterozygous for IVS1-110 revealed severe anemia and iron overload. The BTT heterozygous for CD39 showed impairment of iron metabolism and / or erythropoiesis. It is necessary the monitorization of the BTT patients is necessary, since changes presented by them are associated with serious disorders, the adoption of mitigation measures which when are not neglected can be easily prevented. The methodology proved to be effective for the investigation of mutations studied. While we were able to observe a genotype-phenotype relationship, a multicenter study of the Brazilian population will provide the identification of more relations, especially in less prevalent phenotypes in our region, contributing to the understanding of the heterogeneity of ?-thalassemia.

Orientador: Claudia Regina Bonini Domingos / Banca: Ricardo Luiz Dantas Machado / Banca: Paula Rahal Liberatore / Resumo: A talassemia beta constitui um grupo heterogêneo de distúrbios genéticos da síntese de hemoglobina sendo uma das doenças monogênicas mais comums, identificada e estudada por várias décadas. É originária da região do Mediterrâneo porém, atualmente apresenta-se amplamente distribuída pelo mundo devido ao fluxo gênico pela migração das populações. No Brasil, os tipos de talassemia mais prevalentes são as talassemias alfa e beta e apresentam número variável de indivíduos portadores devido ao alto grau de miscigenação da população. As formas graves de talassemia beta são facilmente diagnosticadas entretanto, as formas mais suaves muitas vezes são interpretadas e tratadas como anemia ferropriva. O presente estudo teve como objetivo caracterizar as formas talassêmicas do tipo beta e verificar os interferentes na expressão do fenótipo como a possível co-herança com hemocromatose hereditária. Através da associação de análise hematimétrica, metodologias clássicas e análise por HPLC analisamos 332 amostras de sangue com suspeita de talassemia beta. Um total de 70 amostras foram identificadas como portadores de hemoglobinas normais (AA), 145 portadores de talassemia beta heterozigota (BTH) e 117 portadores de talassemia alfa/beta (ABT). A análise estatística por regressão linear entre as metodologias clássicas e HPLC para quantificação de hemoglobina A2 e Fetal para os três grupos foram estatisticamente significativas. A análise molecular por PCR-ASO para identificação dos mutantes para hemocromatose hereditária mostraram 11,76% de mutação C282Y e 70,58% para H63D no grupo de talassemia beta e 25% de mutação C282Y e 75% H63D para o grupo de talassemia alfa/beta. Esses resultados evidenciam a necessidade da associação de metodologias para o correto diagnóstico da talassemia beta, bem como caracterização molecular para hemocromatose...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The beta-thalassemia constitutes a heterogeneous group of genetic disorders of hemoglobin synthesis. It has been one of the most common monogenic diseases identified and studied for many decades. Its origins are from Mediterranean region, although nowadays it is spread for the whole world due to gene flow of migration populations. In Brazil, the most prevalent types of thalassemia are the alpha-thalassemia and beta-thalassemia. They present a variable number of individual carriers due to high degree of miscigenation. The serious forms of beta-thalassemia are easily identified, but the milder forms are many times diagnosed and treated as iron deficiency anemia. The objective of the present study was to characterize the thalassemic forms and verify the interferents in the expression of the phenotype as the possible co-inheritance with hereditary hemochromatosis. It was analysed, utilizing hematimetric analysis, classic methodologies and HPLC analysis, 332 blood samples suspect of beta-thalessemia. The total of 70 samples were identified as carriers of normal hemoglobins (AA), 145 carriers of beta-thalassemia heterozigote (BTH) and 117 carriers of alpha/beta-thalassemia (ABT). The statistic analysis by linear regression between classic methodologies and HPLC for quantification of hemoglobin A2 and Fetal hemoglobin were statistically differents and significants. The molecular analysis by PCR-ASO to identify the mutants with hereditary hemochromatosis showed 11,76% of mutation C282Y and 70,58% to H63D in the beta-thalassemia group and 25% of mutation C282Y and 75% of H63D in the alpha/beta- thalassemia group. These results prove the necessity of association of methodologies in order to achieve the correct diagnosis of beta-thalassemia, as well as the molecular characterization of hemochromatosis, due to the fact of its possible co-inheritance with beta-thalassemia in the vast genotypic diversity found in Brazil. / Mestre

Orientador: Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-10T05:00:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bezerra_MarcosAndreCavalcanti_M.pdf: 1651250 bytes, checksum: efe8b98a0acb6f960292cb82199b3ee2 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A talassemia ß é uma doença hereditária freqüente da Hb e tem sido encontrada em praticamente todas as populações estudadas. A ocorrência dessas síndromes no Brasil tem sido estudada ao longo do tempo, entretanto, por causa das limitações nas metodologias utilizadas em muitas pesquisas, os dados de prevalência e diversidade são incompletos. Além disso, como conseqüência da composição étnica do nosso país, miscigenada por elementos de origens européia, africana, asiática e indígena, e desigualmente distribuída, a incidência da talassemia pode variar de região para região. Este estudo tem como objetivo mostrar caracteríticas clínicas, bioquímicas e moleculares das síndromes talassêmicas em população do estado de Pernambuco. Foram estudados 117 pacientes não relacionados, sendo 11 diagnosticados com talassemia ß maior, 36 talassemia ß intermediária e 70 com a interação S/ß talassemia, acompanhados na Fundação HEMOPE. A caracterização molecular foi feita por técnicas de PCR e seqüenciamento. A caracterização dos alelos ß talassêmicos revelou 15 diferentes mutações, sendo que 4 delas correspondem a 84,3% dos alelos ß talassêmicos, nas seguintes proporções: 54,9% IVS-I-6 (T-»C), 15,2% IVS-I-5 (G-»C), 7,9% códon 39 (C-»T) e 6,1% IVS-I-1 (G-»A). Foram encontradas outras mutações raras, pela primeira vez descritas no Brasil: IVS-II-849 (A-»G), poli-A (T-»C), - 29 (A-»G), Códon 30 (A-»C), IVS-I-2 (T-»C), IVS-II-837 (T-»G), Códons 106/107 (+G), além das mutações IVS-I-5 (G-»A) e -88 (C-»T). Uma nova mutação foi descrita: códon 12 (-C). Foram encontrados 30 pacientes homozigotos IVS-I-6 (T-»C) e tal mutação mostrou uma forte associação com o haplótipo VI. A mutação IVS-I-5 (G-»C) esteve relacionada ao haplótipo I, diferentemente do encontrado em outras populações (haplótipo VII) em que esta mutação é prevalente, podendo sugerir uma origem diferente para esta mutação no Brasil. A deleção -a3.7 kb esteve presente em 4,2% dos pacientes homozigotos para talassemia ß e em 15,7% dos S/ß tal, enquanto a aaaanti 3.7kb foi encontrada em 5,7% dos S/ß tal. O polimorfismo XmnI esteve presente em 6,1% dos pacientes com ß tal homozigota e em apenas 1,4% dos S/ß tal. Com relação ao alelo UGT1A1, foi visto que pacientes com genótipos (TA)7 / (TA)7 e (TA)7 / (TA)8 apresentaram maiores níveis de bilirrubina não conjugada e parecem ter maior probabilidade de desenvolver colelitíase. No Brasil, embora a composição étnica da população seja heterogênea, as mutações mais comuns são de origem Mediterrânea; Pernambuco pode ser considerado uma exceção já que cerca de 16,0% da população talassêmica possui mutações de origem Asiática e 10,8% são de origem africana. A diversidade de mutações e suas respectivas freqüências diferem do encontrado em outras populações brasileiras já estudadas, como a do Sudeste, onde 4 mutações também respondem pela maioria (97%) dos casos, porém a mutação predominante é a ß039 (C-»T) / Abstract: ß Thalassemia is a frequent inherited disease of the Hb molecule found in the majority of populations and distributed worldwide. The prevalence of this syndrome in Brazil has been studied for a long time, but due to limitations in the methodology of some research, data on prevalence and clinical diversity are not fully complete. Furthermore, as a consequence of our ethnic composition, mixed with an uneven distribuition of European, African, Asian and Indian native populations, the incidence of thalassemia may vary greatly from one region to another. This study aims to show clinical features, and also biochemical and molecular data of our thalassemia syndromes in a population setting of thalassemia patients in the State of Pernambuco. We studied 117 non-related patients, 11 of them with ß thalassemia major, 36 ß with thalassemia intermedia and 70 with the S/ß thalassemia interaction, followed regularly at the Fundação HEMOPE ¿ Recife - Brazil. Molecular characterization was performed by PCR techniques and DNA sequencing. Characterization of ß thalassemia alleles showed 15 different mutations, 4 of which corresponded to 84.3% of the ß thalassemia alleles, in the following proportions: 54.9% IVS-I-6 (T-»C), 15.2% IVS-I-5 (G-»C), 7.9% codon 39 (C-»T) and 6.1% IVS-I-1 (G»A). Other rare mutations were found and for the first time in Brazil, such as: IVS-II-849 (A-»G), poly-A (T?C), -29 (A?G), codon 30 (A-»C), IVS-I-2 (T-»C), IVS-II-837 (T-»G), codons 106/107 (+G), as well as IVS-I-5 (G-»A) and -88 (C-»T) mutations. A new mutation is also described: codon 12 (-C). We found 30 homozygous patients for the IVS-I-6 (T-»C) mutation, which showed a strong association with the ß gene haplotype VI. The IVS-I-5 (G-»C) mutation was related to the ß gene haplotype I, differently from that found in other populations studied (ß haplotype VII) where it is more prevalent, suggesting a different origin for this mutation in Brazil. The -a3.7 kb deletion was present in 4.2% of ß thalassemia homozygous patients and in 15.7% of the S/ß thalassemia patients, whereas the aaaanti3.7kb was found in 5.7% of them. The XmnI polymorphism was present in 6.1% of the homozygous ß thalassemia patients and in only 1.4% of the S/ß thalassemia individuals. In relation to the UGT1A1 allele, we found that patients with genotypes (TA) 7 / (TA) 7 and (TA) 7 / (TA) 8 showed higher levels of non-conjugated bilirrubin and seem to be more prone to developing gall stones. In Brazil, although the ethnic composition is markedly heterogeneous, the most common mutations are of Mediterranean origin; Pernambuco may be a curious exception to this, since around 16.0% of the thalassemia population have mutations of Asian origin and 10.8% of African origin. In conclusion, the diversity of the mutations found and their frequencies greatly differ from those found in other Brazilian populations studied previously, for example in the Southeast where only four thalassemia mutations are responsible for the majority (97%) of the thalassemia cases, although the commonest mutation is the ß039 (C-»T) / Mestrado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Orientadores: Fernando Ferreira Costa, Anderson Ferreira da Cunha / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T20:38:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Brugnerotto_AnaFlavia_M.pdf: 5508751 bytes, checksum: b177c8643fd6a6d948194049324253a1 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: As síndromes talassêmicas compreendem um grupo heterogêneo de doenças hereditárias em que existe uma redução no ritmo de síntese de uma ou mais cadeias polipeptídicas da hemoglobina. Nas talassemias ß ocorre a supressão total ou parcial da produção de cadeias ß. O estado homozigótico da maioria das variantes genéticas da talassemia ß produz o quadro clínico da talassemia maior. Esses pacientes apresentam acentuada anemia e necessitam de transfusões sanguíneas regulares para sobreviverem. Os indivíduos heterozigotos para a talassemia ß apresentam, com raras exceções, apenas discreta anemia. Existem ainda alguns quadros clínicos não tão graves quanto à forma homozigótica clássica, geralmente não dependem de transfusões, que são denominados de talassemia intermediária. Os genes responsáveis pela síntese das cadeias da ß globina estão organizados em um cluster localizado no braço curto do cromossomo 11. Quase 200 alelos de talassemia ß já foram caracaterizados. Destes, 125 representam mutações pontuais em regiões funcionalmente importantes do gene, uma de particular interesse ao nosso estudo, é a mutação Cd 39 (C--T). Este trabalho teve como objetivo analisar o perfil global de expressão gênica de células CD 34+ de pacientes com talassemia ß, portadores da mesma mutação genética (Cd 39), mas com evoluções clínicas distintas, maior e intermediária, pelo método de SAGE (Serial Analysis of Gene Expression). Foram gerados 2718 trancritos únicos para o perfil de talassemia ß intermediária e 3052 para o perfil de talassemia ß maior, os quais foram classificados como genes identifcados, no matches, ESTs e outras sequências preditas e anotadas. As expressões de 14 genes foram quantificadas pela reação em cadeia da polimerase em tempo real nas amostras de células CD34+ dos pacientes talassêmicos intermediário e maior, com intuito de validar os resultados obtidos pelo SAGE. As expressões foram concordantes em 57,14% dos genes (ABCB10, APEX1, APOC1, EYA3, HMBS, OAZ1, SRGN, TAGLN2) e discordantes nos demais 42,85% (EIF5a, GRIN2C, HMGB1, NAE1, PCBP2, RAD23B). Quando ambos os perfis foram comparados entre si, 42 transcritos foram ditos como diferencialmente expresso (p<0,05). A análise funcional comparativa dos 42 transcritos diferencialmente expressos foi realizada de acordo com o Gene Ontology Consortium afim de obtermos a classificação funcional destes transcritos. Em conjunto, os resultados podem colaborar na identificação de transcritos importantes, que possam auxiliar na melhor compreensão da fisiopatologia desta doença e desempenhar papéis moduladores no fenótipo em talassemia ß / Abstract: Thalassemia syndromes are a heterogeneous group of hereditary diseases in which there is a reduction in the synthesis of one or more hemoglobin chains. In ß-thalassemia there is a reduction or total suppression of the expression of ß globin genes. The homozygous state of most ß-thalassemia genetic variants produces the clinical evolution of thalassemia major. These patients present severe anemia and require regular blood transfusions in order to survive. Heterozygous individuals present, with exceptions, discret anemia. There are some clinical evolutions that are not as severe as the classic homozygous form, which are often blood transfusion independent, named ß-thalassemia intemedia. The gene responsible for the synthesis of ß the globin chain is arranged in a cluster located on the short arm of cromossome 11. Nearly 200 ß-thalassemia alleles have been characterized. Of these, 125 represent mutations in functionally-important regions of the gene. A nonsense mutation, ie base substitution, which introduces a premature stop codon, destroying the normal reading and interfering in mRNA translation, is of particular interest to our study, especially the Cd 39 mutations (C--T). The aim of this study was to evaluate the global gene expression pattern of CD34+ culture cells from patients with ß-thalassemia, carrying the same genetic mutation (Cd 39) but with different phenotypes (major and intermedia), using Serial Analysis of Gene Expression (SAGE). Two SAGE profiles were gerated: INT and MAIOR. Comparison of the 2718 an 3052 distinct tags from the INT and MAIOR profiles, represented by identified trnacripts and novel tags, 42 tags demonstrated with a differential expression at a statistically significant level (p<0,05) and corresponded to known genes, ESTs or no matches. The expression of 14 genes was further investigated by the real-time polymerase chain reaction in cells cultured from patients with ß-thalassemia intermedia and major, with the purpose of to validating the results obtained by the SAGE method. Similar expressions were seen in 57.14% (ABCB10, APEX1, APOC1, EYA3, HMBS, OAZ1, SRGN, TAGLN2) and discordant expressions were seen in 42.85% (EIF5a, GRIN2C, HMGB1, NAE1, PCBP2, RAD23B). The functional classification was performed according to the Gene Ontology Consortium and a total of a 42 transcripts were submitted to functional classification. Together, our results may contribute to identify important transcripts that may play roles in modulating phenotype in ß-thalassemia and to better understand the pathophysiology of this disease / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

A ?-talassemia, uma hemoglobinopatia, é caracterizada como um distúrbio hereditário monogênico onde a síntese das cadeias globínicas ? está alterada. Devido desiquilíbrio na relação entre as cadeias ? e ? produzidas, observa-se um excesso de cadeias ? livres, determinante da fisiopatologia da doença. As manifestações observadas são eritropoese ineficaz, hemólise extramedular, anemia, expansão medular, esplenomegalia, deformidades ósseas e acúmulo de ferro. Clinicamente classifica-se como ?-talassemia major (BTM) a forma mais grave da doença, devido à ausência de cadeias ? (?0) ou redução acentuada (?+) acarretando em dependência de transfusões sanguíneas periódicas, para sobrevivência. O traço ?-talassêmico (BTT) antes vistos como assintomáticos, também apresentam alterações, inclusive acúmulo de ferro e eritropoese ineficaz, mas não são dependentes de transfusão e tampouco passam por acompanhamento médico. Extremamente heterogênea, apresenta diversos fenótipos e mais de 300 alterações moleculares causadoras de ?-talassemia já foram descritas em todo mundo. O objetivo deste estudo foi identificar as mutações de ?-talassemia em Ribeirão Preto-SP e procurar associar tais alterações à avaliação hematológica e do status férrico, na tentativa de estabelecer uma relação genótipo-fenótipo. Para tanto, 27 BTM, 23 BTT e 28 controles foram recrutados no Ambulatório de Hemoglobinopatias, do HC/FMRP-USP de Ribeirão Preto. Por meio de PCR-Alelo Específico, pesquisamos as quatro mutações mais comuns no Brasil: CD39 (CAG->TAG), IVS1-110 (G->A), IVS1-6 (T->C) e IVS1-1 (G ->A). A distribuição foi 64% CD39, 26% IVS1-110 e 4% IVS1-6. A análise de covariância e comparação múltiplas, entre os grupos formados e o controle, revelou alterações hematológicas e no status férrico. Os pacientes BTM com a mutação CD39, em sua forma heterozigota ou homozigota, e heterozigotos para a IVS1-110, revelaram anemia grave e intensa sobrecarga de ferro. Os BTT heterozigotos para CD39 demonstraram comprometimento do metabolismo ferro e/ou eritropoese. A adoção de medidas paliativas e de monitoramento aos BTT faz-se necessária, uma vez que, alterações apresentadas associam-se a desordens graves, mas quando não negligenciadas podem ser facilmente prevenidas. A metodologia adotada demonstrou-se eficaz para a pesquisa das mutações estudadas. Embora tenhamos conseguido observar uma relação genótipo-fenótipo, um estudo multicêntrico da população brasileira proporcionará a identificação de mais relações, principalmente nos fenótipos menos prevalentes em nossa região, contribuindo para a compreensão da heterogeneidade da ?-talassemia. / The ?-thalassemia, one haemoglobinopathies, is characterized as a monogenic hereditary disorder where the synthesis of ? globin chains is modified. Due to imbalance in the relationship between production of ? and ? chains, there is an excess of free ? chain that determines the pathophysiology of the disease. Manifestations observed are ineffective erythropoiesis, extra medullary hemolysis, anemia, bone marrow expansion, splenomegaly, bone deformities and iron accumulation. Clinically is classified as ?-thalassemia major (BTM), the most severe form of the disease, as a result of the absence of ? chains (?0) or very large reduction of these (?+) resulting in dependence on regular blood transfusions to survive. The ?-thalassemia trait (BTT) before seen as asymptomatic, also show changes, including iron accumulation and ineffective erythropoiesis, despite of that they aren\'t dependent on transfusion nor undergo medical care. It is extremely heterogeneous, presents several phenotypes and more than 300 molecular changes that causing ?-thalassemia have been described worldwide. The purpose of this study was to identify ?-thalassemia mutations in Ribeirao Preto-Brazil and to explore changes in hematological evaluation and iron status in an attempt to establish a genotype-phenotype relationship. Therefore, a group of 27 BTM, 23 BTT and 28 controls were recruited from the outpatient clinic of hemoglobinopathies, from The Clinical Hospital of Medical School of Ribeirao Preto (HC / FMRP-USP), Brazil. Adopting the technique ARMS (Amplification Refractory Mutation System), we searched for the four most common mutations in Brazil: CD39 (CAG -> TAG), IVS1-110 (G -> A), IVS1-6 (T -> C) and IVS1-1 (G -> A). The distribution was 64% presents CD39 mutation, followed by IVS1-110 e IVS1-6, with 26% and 4% respectively. Covariance Analysis and multiple comparison between the studies groups and control, showed differences in hematological parameters and in iron status either. The BTM heterozygous or homozygous for CD39 mutation and heterozygous for IVS1-110 revealed severe anemia and iron overload. The BTT heterozygous for CD39 showed impairment of iron metabolism and / or erythropoiesis. It is necessary the monitorization of the BTT patients is necessary, since changes presented by them are associated with serious disorders, the adoption of mitigation measures which when are not neglected can be easily prevented. The methodology proved to be effective for the investigation of mutations studied. While we were able to observe a genotype-phenotype relationship, a multicenter study of the Brazilian population will provide the identification of more relations, especially in less prevalent phenotypes in our region, contributing to the understanding of the heterogeneity of ?-thalassemia.

Thesis (Ph.D.)--University of Alabama at Birmingham, 2009. / Title from PDF title page (viewed on July 13, 2010). Includes bibliographical references.

Research report submitted in accordance with the requirements for the Degree Master of Science in Medicine( Bioethics and Health Law. Faculty of Health Sciences, University of the Witwatersrand Steve Biko Centre for Bioethics, 2014 / It is every normal parent’s wish to have a happy child free of ailments and suffering. However, not all children are born free of diseases and suffering. Some are born with severe disabilities and others are born with congenital genetic problems that have less chances of cure or no cure at all. These unfortunate circumstances make parents of such children with severe medical conditions desperate and devastated to the extent that they try anything possible in attempting to improve quality of life of their sick children. No parent wants to see his or her child suffering. However, a more pressing situation is when parents decide to have a second child whose purpose is to save the life of the sick first child by donating stem cells from cord blood or bone marrow. This second child is sometimes referred to as the “Saviour sibling” and is born for the purpose of saving the life of the sick older child of the family. ‘Saviour sibling is the media name for a child who is conceived, gestated, and delivered in order to provide umbilical cord blood, or, even more contentious, bone marrow desperately needed by the parents’ older child’ (Mills 2005:2).Because there is no matching donor for the ill older child, a donor is created in the form of a second sibling, whose match is genetically guaranteed by IVF, preimplantation genetic diagnosis (PGD), and tissue typing (Boyle and Savulescu 2001). Given that children are already being created in other Countries such as the United States of America, France and Britain for the above-mentioned purpose, this research report will attempt to engage in the debate surrounding saviour siblings, the use of preimplantation genetic diagnosis (PGD) in creating these children, and the possibility of this technology being abused and misused for gender selection. Taking this into consideration, this research report will attempt to highlight what the South African laws and policies say about saviour siblings. Should parents with pressing issues as mentioned-above demand to have a “saviour child” of their own for the purpose of using him or her to save the life of another of their children in South Africa, on which grounds would it be rejected or accepted?