Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-25. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:10Z : No. of bitstreams: 1 000860821.pdf: 2915690 bytes, checksum: 1ff5640161c93a6edf44ddc1558a8eeb (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Candida albicans é um fungo oportunista capaz de causar infecções superficiais e até sistêmicas. A maioria das infecções é mediada pela formação de biofilme que confere resistência aos agentes antifúngicos e ao sistema imune, porém os mecanismos de desenvolvimento do biofilme e patogenicidade ainda não foram completamente elucidados. No presente estudo foram selecionados 9 genes de C. albicans com função desconhecida, dentre 34 cepas mutantes que apresentaram fenótipo alterado para formação de biofilme. Os biofilmes foram formados em placas de 96 poços ou discos de poliestireno e avaliados em diferentes tempos de desenvolvimento. A seguir foram construídas 4 cepas complementadas que foram avaliadas quanto à susceptibilidade a agentes estressantes, crescimento sob limitação de nutrientes e testes de filamentação. A arquitetura dos biofilmes foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os biofilmes também foram avaliados quanto à quantidade de β-1,3-glucana e quitina. Para os modelos de infecção, células epiteliais bucais (TR-146) foram utilizadas para análise de aderência, invasão e dano. A patogenicidade das cepas foi avaliada em ovos embrionados de galinha durante 7 dias, após a inoculação das cepas. Células planctônicas e biofilmes foram submetidos a testes antifúngicos com os agentes fluconazol, anfotericina B e caspofungina. A reação em cadeia da polimerase quantitativa foi realizada para verificar a expressão dos genes MRV8 e NDT80 em células fúngicas em interação com células epiteliais e MRV8, MRV1 e MRV6 em células crescidas em biofilme. Os resultados foram analisados por teste t de Student, ANOVA, Tukey e testes de Log-rank (Mantel-Cox) (p < 0,05). Foram construídas 4 cepas complementadas para os genes selecionados ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847 e MRV8. A função de ORF19.823 ainda permanece desconhecida, pois nãofoi observado fenótipo msignificativo para a cepa.... / Candida albicans is an opportunistic fungi capable of causing superficial and systemic infections. Most of infections are mediated by biofilm formation which confers resistance to antifungal agents and immune system, but the mechanisms of biofilm development and pathogenicity were not thoroughly elucidated yet. In the presente study, 9 unknown function genes of C. albicans were selected among 34 mutant strains that presented altered phenotype for biofilm formation. The biofilms were formed on 96-well microtitle plates or on polystyrene disks and evaluated in different time intervals. Next, 4 complemented strains were constructed and evaluated for susceptibility to stressor agents, growth under nutrient limitation and filamentation tests. The biofilm architecture was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). The biofilms were also assessed as the quantity of β-1,3-glucan and chitin. For the infection models, buccal epithelial cells (TR-146) were used for adherence, invasion and damage assays. The pathogenicity of the strains was evaluated in embrionated chicken eggs for 7 days, after inoculation of the strains. Planktonic cells and biofilms were submitted to antifungal tests with fluconazole, amphotericin B, and caspofungin. Quantitative polymerase chain reaction was performed to verify the expression of MRV8 and NDT80 genes in fungal cells in interaction with epithelial cells and MRV8, MRV1, and MRV6 genes in cells grown in biofilm. The results were submitted to the Student t test, ANOVA, Tukey's test, and Log-rank test (Mantel-Cox) (p < 0.05). Four complemented strains were constructed for the selected genes ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847, and MRV8. The function of the ORF19.823 is still unknown, because the mutant strain did not show any significative phenotype for the tests performed. The mutant strain for the ORF19.7170 caused less damage on epithelial cells, but the result was not significant and the gene was dispensable... / FAPESP: 2011/21346-7

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-30Bitstream added on 2014-06-13T20:02:13Z : No. of bitstreams: 1 fariajunior_nb_dr_arafo.pdf: 372525 bytes, checksum: 70354f6898155c6e1ee3732f3e66788f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivo: Este estudo avaliou: (experimento 1) a influência de diferentes substratos na formação de biofilmes de Enterococcus faecalis; e (experimento 2) a atividade antibacteriana contra E. faecalis, pH e solubilidade dos cimentos AH Plus, Sealer 26, Epiphany SE, Sealapex, Activ GP, MTA Fillapex e MTA Sealer. Metodologia: (1) Biofilmes de E. faecalis foram desenvolvidos sobre dentina bovina, guta-percha, hidroxiapatita e osso bovino por 14 ou 21 dias. Após os períodos de incubação, os espécimes (n=5 por substrato por período) foram marcados pela técnica Live/Dead e observados usando microscopia confocal de varredura a laser. Quatro imagens foram obtidas para cada amostra e analisadas pelo programa bioImage_L. Os parâmetros avaliados foram biovolume (μm3) da população total e verde (células vivas) e o percentual de cobertura do substrato. (2) Para o segundo experimento, discos de cada cimento endodôntico foram preparados e armazenados por 2 ou 7 dias. A atividade antibacteriana foi avaliada pelo teste de difusão em ágar (TDA) e pelo teste de contato direto sobre biofilme (TCDB, antibiofilme). No TCDB, biofilmes foram induzidos em blocos de dentina bovina por 14 dias. Os cimentos foram, então, colocados sobre os biofilmes e permaneceram em contato por 5, 10 ou 15 h. No grupo controle, nenhum cimento foi colocado sobre os biofilmes. Os blocos de dentina com o biofilme remanescente foram avaliados quantitativamente (número de unidades formadoras de colônia [UFC]). A solubilidade dos cimentos correspondeu à perda de massa (%) após 15 h de imersão em água destilada. Os valores de pH foram mensurados nos períodos de 5, 10 e 15 h. A análise estatística foi realizada por testes paramétricos e não paramétricos (p=0,05). Resultados: (1) Houve formação de biofilme em todos os grupos. Não houve diferença... / Objective: This study evaluated: (experiment 1) the influence of different substrates on the Enterococcus faecalis biofilm formation; and (experiment 2) the antibacterial activity against E. faecalis, pH and solubility of the sealers AH Plus, Sealer 26, Epiphany SE, Sealapex, Activ GP, MTA Fillapex and MTA Sealer. Methods: (1) E. faecalis biofilms were grown on bovine dentin, gutta-percha, hydroxyapatite and bovine bone for 14 or 21 days. After the incubation periods, the specimens (n=5 per substrate per period) were stained using the Live/Dead technique and observed using a confocal laser scanning microscope. Four confocal pictures were obtained from each sample and analyzed by the software bioImage_L. The parameters evaluated were biovolume (μm3) of total and green population (live cells) and the percentage of surface covered by microorganisms (covering grade). (2) For the second experiment, disks of each material were prepared and stored for 2 or 7 days. Antimicrobial activity was evaluated by the agar diffusion test (ADT) and the direct contact test on biofilm (DCTB, antibiofilm). For the DCTB, biofilms were grown on bovine dentin blocks for 14 days. Then, the sealers were placed on the biofilms and remained in contact for 5, 10 or 15 h. In the control group, no sealer was placed on the biofilms. The dentin blocks containing the remaining biofilms were assessed quantitatively (number of colonyforming units [CFU]). The solubility of the sealers corresponded to their mass loss (%) after 15 h immersion in distilled water. The pH values were measured at 5, 10 and 15 h. Statistical analysis was performed using parametric and non-parametric tests (p=0.05). Results: (1) There was biofilm formation in all groups. Considering the values of the covering grade there was not significant difference among the... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo:O presente estudo avaliou isolados de Streptococcus mutans e leveduras do gênero Candida quanto à capacidade de formação de biofilme in vitro, perfil molecular e a interação destes micro-organismos procedentes de saliva e biofilme dental de crianças com diferentes históricos da doença cárie. A partir de amostras de saliva e biofilme de 38 crianças, foram obtidos 83 isolados de S. mutans e 31 leveduras do gênero Candida, verificando-se 12 (31,5%) indivíduos multicolonizados. Os isolados de Candida spp. foram caracterizados quanto à formação de biofilme, assim como, analisados quanto à região parcial do gene D1/D2, ITS1-5,8S-ITS2 do DNA ribossomal e avaliação do perfil genotípico pelo sistema ABC. Um total de 20 isolados de S. mutans foram selecionados, sendo 12 procedentes de crianças coinfectadas e 08 de crianças não coinfectadas. Estes foram caracterizados, quanto a formação de biofilme in vitro e pelo sequenciamento parcial dos genes HtrA e GtfB. De acordo com os resultados verificou-se entre as linhagens de Candida analisadas que 26 pertenciam à espécie C. albicans (83,8%) e 05 identificadas como Candida não-albicans (16,12%), entre essas, 03 de C. tropicalis (9,6%), 01 C. glabrata (3,2%) e 01 de C. guilliermondii (3,2%). Todas as crianças coinfectadas eram colonizadas com pelo menos uma linhagem de C. albicans, entre as quais foram detectados os genótipos A e B, sendo que o genótipo A foi mais frequente nas crianças com histórico de cárie, ocorrendo em 77% delas, enquanto que o genótipo B foi mais frequente nas crianças sem histórico da doença (87,5%). As espécies não-albicans, principalmente a C. tropicalis estavam associadas à microbiotas cariogênicas, sugerindo que essas espécies podem potencializar a virulência de Streptococcus mutans, aumentando potencialmente o risco da doença. Ambos os micro-organismos avaliados apresentaram variação na concentração de células aderidas durante a formação do biofilme in vitro. Entretanto verificou-se uma variação maior da capacidade de formação de biofilme in vitro entre os isolados de S. mutans procedentes de crianças coinfectadas em relação ao grupo de isolados procedentes de crianças não coinfectadas. Os isolados de S. mutans geneticamente diferentes variavam quanto ao padrão fenotípico da aderência, apresentaram diversidade a qual pôde ser correlacionada ao histórico da doença cárie e padrão de aderência in vitro. Além disso, verificou-se que o padrão de aderência pode ser modificado em função da associação com as leveduras do gênero Candida. As imagens pela técnica de microscopia de fluorescência confocal e por microscopia eletrônica de varredura (MEV) confirmaram a maior expressão de exopolissararídeos na matriz do biofilme formado pela associação de S. mutans com C. albicans confirmando a potencialização da virulência de S. mutans nos biofilmes associados com os dois micro-organismos. A multicolonização, genótipos e distribuição das espécies de Candida encontradas parecem ter uma relação expressiva com o desenvolvimento da cárie dental, sendo que, indivíduos colonizados pela espécie C. tropicalis apresentaram maior incidência da doença. Palavras-chave: Biofilme. Candida albicans. Streptococcus mutans.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-25Bitstream added on 2014-06-13T20:06:11Z : No. of bitstreams: 1 000740082.pdf: 4167341 bytes, checksum: 8fe87af8a33480548b14b44df006b99a (MD5) / A capacidade de aderência dos micro-organismos a diferentes superfícies, a resistência a medicamentos, bem como a interação entre as espécies visam garantir a sobrevivência e a proliferação dos mesmos, resultando em menor susceptibilidade dos patógenos aos tratamentos e aos procedimentos de desinfecção. Este estudo teve como objetivo avaliar in vitro a eficácia da Terapia Fotodinâmica (PDT) mediada pelos fotossensibilizadores (FSs) Photodithazine® (PDZ) e Curcumina (Cur) sobre biofilmes multi-espécies compostos por Streptococcus mutans, Candida albicans e Candida glabrata. Para isso, o estudo foi divido em três partes: 1- avaliação do efeito fotodinâmico das diferentes concentrações de PDZ (100, 150, 175, 200 e 250mg/L) associada à luz LED (660nm/ 37,5J/cm2) na inativação de biofilme multi-espécies formado em fundo de placa de 96 orifícios; 2- avaliação do efeito fotodinâmico quando realizadas uma e três aplicações sucessivas de PDT, mediada por PDZ (175 e 200mg/L) e luz LED (660nm/ 37,5J/cm2) na inativação de biofilmes multi-espécies, formado sobre corpos-de-prova de resina acrílica. 3- avaliação do efeito fotodinâmico de diferentes concentrações do FS Cur (80, 100 e 120μM) associada à luz LED (455nm/ 37,5J/cm2) sobre biofilmes multi-espécies cultivados por diferentes períodos (24 e 48h) sobre corpos-de-prova de resina acrílica. Adicionalmente para cada condição avaliada foi verificado o efeito da aplicação isolada de cada concentração dos FSs PDZ e Cur em contato com o biofilme na ausência de luz (P+L-) e o efeito isolado da luz (P-L+). Além disso, foi realizado o grupo controle positivo, no qual o biofilme não esteve em contato com o FS e não foram iluminados com luz LED (P-L-). Após a aplicação dos tratamentos propostos, a viabilidade dos micro-organismos foi avaliada por meio da contagem de colônias (UFC/mL), teste do XTT, determinação da... / The ability of adhesion of microrganisms to different surfaces, the drug resistance, as well as the interaction among the species help to ensure the survival and proliferation of these microrganisms and result in lower susceptibility of these pathogens to treatment and disinfection procedures. This study aimed to evaluate the in vitro efficacy of PDT mediated by photosensitizers (FSs) Photodithazine ® (PDZ) and Curcumin (Cur) against multispecies biofilms formed by Candida albicans, Candida glabrata and Streptococcus mutans. This study was divided into three parts: 1. evaluation of the effect of photodynamic therapy of different concentrations of PDZ (100, 150, 175, 200 and 250mg / L) associated with the LED light (660 nm / 37.5 J/cm2) in the inactivation of multspecies biofilms formed in 96-well microtiter plates; 2. evaluation of the photodynamic effect of one PDT applications only and three successive PDT applications mediated by PDZ (175 and 200 mg / L) and LED light (660 nm / 37.5 J/cm2) in the inactivation of multispecies biofilms, formed on acrylic resin samples; 3. evaluation of the photodynamic effect of different concentrations of Cur FS (80, 100, and 120μM) associated with LED light (455nm / 37.5 J/cm2) against multispecies biofilms grown during different periods (24 and 48h) on acrylic resin samples. Additional samples were treated either with FSs (PDZ or Cur) (P+L-) or LED light (P-L+) only. Positive control samples had neither light nor FSs (PDZ or Cur) (P-L-). After applying the proposed treatments, the viability of microrganisms was assessed by Colony Count (CFU / mL), the XTT assay, determination of the total biomass (CV) and confocal laser scanning microscopy (CLSM).The results were analyzed using ANOVA or Kruskal-Wallis test followed by Tukey or Dunn, respectively. For the biofilm formed in 96-well plate, the concentrations of 175 and 200mg/L showed greater reduction in cell...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-24Bitstream added on 2014-06-13T18:46:01Z : No. of bitstreams: 1 monteiro_dr_dr_araca.pdf: 4433371 bytes, checksum: 7ace13af6a3345bfc97059baad093841 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar a atividade antifúngica de nanopartículas de prata (NP) contra os biofilmes de Candida albicans e Candida glabrata. NP foram sintetizadas por meio da redução do nitrato de prata com citrato de sódio e estabilizadas com amônia ou polivinilpirrolidona. Os testes de concentração inibitória mínima (CIM) das NP contra células de Candida foram baseados no método da microdiluição. NP foram aplicadas sobre os biofilmes de Candida (48 horas) e após 24 horas de contato sua atividade antifúngica foi determinada por meio da quantificação da biomassa total (coloração com violeta cristal (VC)) e por meio da enumeração das unidades formadoras de colônias (UFCs). Após o tratamento com NP, as matrizes dos biofilmes foram extraídas e analisadas em termos de proteínas, carboidratos e DNA, e a estrutura dos biofilmes foi analisada por meio da microscopia eletrônica de varredura e de epifluorescência. A atividade antibiofilme da combinação de NP com nistatina e clorexidina foi avaliada por meio dos ensaios de VC e UFCs. Leveduras viáveis foram recuperadas a partir dos biofilmes previamente tratados com NP e adicionadas às células epiteliais HeLa e aos poços de placas de poliestireno e, após 2 horas de contato, a adesão foi determinada usando VC. A eficácia de NP submetidas às variações de temperatura (50, 70 e 100ºC) e pH (5 e 9) também foi avaliada, assim como a susceptibilidade às NP dos biofilmes de Candida em diferentes fases de crescimento. Os resultados de CIM mostraram que NP foram fungicidas contra os isolados testados em concentrações baixas (0,4-3,3 μg/mL). NP foram mais efetivas na redução da biomassa para os biofilmes de C. glabrata (reduções de 90% na concentração de 108 μg/mL) do que para C. albicans, e promoveram reduções significativas no log10 do número de UFCs... / The aim of this study was to evaluate the antifungal activity of silver nanoparticles (SN) against Candida albicans and Candida glabrata biofilms. Colloidal suspensions of SN were synthesized by reducing silver nitrate with sodium citrate and stabilized with ammonia or polyvinylpyrrolidone. Minimal inhibitory concentrations (MIC) were performed for Candida cells grown in suspension following the microbroth dilution method. Candida biofilms (48 h) were treated with SN for 24 h and then the total biomass quantification (by crystal violet (CV) staining) and the colony forming units (CFUs) were determined. Also, after treating with SN, extracellular matrices were extracted from Candida biofilms and analyzed chemically in terms of proteins, carbohydrates and DNA. To investigate the biofilm structure, scanning electron microscopy and epifluorescence microscopy were carried out. The antibiofilm activity of SN in combination with nystatin and chlorhexidine was also assessed by CV and CFU. Moreover, viable yeasts were recovered from the biofilms pretreated with SN and added to HeLa epithelial cells or to empty wells of polystyrene plates and, after 2 h of contact, the adhesion capacity of the yeasts was determined by using CV staining. The antibiofilm efficacy of SN subjected to variations of temperature (50, 70 and 100ºC) and pH (5 and 9) was also evaluated. Finally, the susceptibility to SN of biofilms in different stages of growth was analyzed. MIC results showed that SN were fungicidal against the tested strains at very low concentrations (0.4- 3.3 μg/mL). SN were more effective in reducing the total biomass of C. glabrata (reductions around 90% at 108 μg/mL SN) than C. albicans biofilms, and provided significant log10 reduction of... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-06Bitstream added on 2014-08-13T17:59:41Z : No. of bitstreams: 1 000775944.pdf: 1525174 bytes, checksum: 243559115d903e6589baa6f94c5ac6c3 (MD5) / As interações entre fungos e bactérias estão presentes na natureza e tem grande importância médica e ambiental. O desenvolvimento adequado de modelos in vitro e in vivo para caracterizar essas interações é essencial para o entendimento da patogênese das doenças e descoberta de novas estratégias terapêuticas. O objetivo desse estudo foi avaliar as interações microbianas entre Streptococcus mutans e Candida albicans em modelos de biofilmes formados in vitro e em modelo experimental de Galleria mellonella. No estudo in vitro, foram avaliados os efeitos de S. mutans sobre a formação de biofilme por C. albicans e sobre a capacidade de filamentação de C. albicans. Em ambos os testes, foram avaliados os efeitos diretos das células de S. mutans sobre C. albicans e também os efeitos indiretos de S. mutans sobre C. albicans, utilizando apenas o sobrenadante da sua cultura. Além disso, foram testados os efeitos de S. mutans sobre C. albicans em diferentes fases de crescimento da cultura bacteriana (4, 6, 18 e 24 h). Para a realização do estudo in vivo, pela primeira vez na literatura, foram inoculados S. mutans juntamente com C. albicans em lagartas de G. mellonella para indução de infecção experimental. Os efeitos de S. mutans sobre a candidose experimental em G. mellonella foram avaliados pela análise da curva de sobrevivência, pelo estudo da cultura da hemolinfa para quantificação de C. albicans e através da avaliação histológica da presença de hifas de C. albicans nos tecidos do hospedeiro. Os resultados dos testes in vitro e da contagem de UFC/mL em G. mellonella foram submetidos à Análise de Variância e teste de Tukey. Os dados obtidos na curva de sobrevivência de G. mellonella foram analisados pelo método de Log-rank. Em todos os testes, foi considerado nível de significância de 5%. Os resultados in vitro demonstraram que as células de S. mutansfavoreceram a formação de biofilme por C. albicans .... / Interactions between fungi and bacteria are present in nature and has great medical and environmental importance. The development of adequate models in vitro and in vivo to characterize these interactions are essential for understanding the pathogenesis of diseases and discovery of new therapeutic strategies. The aim of this study was to evaluate the microbial interactions between Streptococcus mutans and Candida albicans in vitro and in an experimental model of Galleria mellonella. In the in vitro study, the effects of S. mutans on biofilm formation and on the filamentation ability by C. albicans were evaluated. On both tests, we evaluated the direct effects of S. mutans cells and indirect effects of the supernatant culture of S. mutans on C. albicans. Furthermore, the effects of the S. mutans were tested on C. albicans at different stages of growth of the bacterial culture (4, 6, 18 and 24 h). In vivo study, were inoculated S. mutans together with C. albicans in larvae of G. mellonella for induction of experimental infection. The effects of S. mutans on experimental candidiasis in G. mellonella was evaluated by analysis of the survival curve, the study of the culture of hemolymph for quantification of C. albicans and by histological evaluation the formation of hyphae of C. albicans in the host tissues. The results of in vitro tests and number of CFU/mL in G. mellonella were submitted to ANOVA and Tukey's test. The data obtained in the survival of G. mellonella were analyzed using the log- rank test. In all tests, were adopted significance level 5%. In vitro results showed that cells of S. mutans favored biofilm formation by C. albicans, however when C. albicans was put in contact with the only supernatant of a culture of S. mutans, there was a reduction in biofilm formation and inhibition of the morphological transition of C. albicans. In the in vivo study, it was found that the injection of ....

Made available in DSpace on 2014-08-27T14:36:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-20Bitstream added on 2014-08-27T15:57:12Z : No. of bitstreams: 1 000734833.pdf: 2189317 bytes, checksum: 8cc1e7c303126f49a3ecd91ad07bb881 (MD5) / O trabalho investigou o potencial antimicrobiano fotodinâmico (PACT) mediado por um fotossensibilizador (FS) natural, curcumina (C), exposto a uma fonte de luz LED azul (L) aplicado sobre biofilme maduro de Streptococcus mutans (SM) formado sobre discos de hidroxiapatita e comparou esse potencial com biofilmes submetidos a imersão única com solução de clorexidina a 0.12% (CHX). Adicionalmente, verificou-se a eficácia de uma fonte de luz de amplo espectro (luz branca) de alta intensidade de potência na presença de C e azul de toluidina (T) a baixas concentrações expostos a um tempo extra curto de iluminação. Material e Método: Biofilmes de SM foram submetidos a tratamento com soluções de C e iluminadas com um LED azul (L) a 48 J/cm2 e 72 J/cm2 e a imersão em CHX. Adicionalmente, uma fonte de luz branca (42 J/cm2; 3410 mW/cm2) foi utilizada na presença de baixas concentrações de C e T por um período extra curto de iluminação sobre suspensões de SM. A eficácia das tratamentos foi realizada por meio da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC/mg de biofilme seco e UFC/ml de suspensão) e análise morfológica dos biofilmes foram realizadas por meio de microscopia confocal a laser e microscopia eletrônica de varredura ambiental. Resultados: PACT (C a 2.5 mM e L a 48 J/cm2) apresentou a maior redução bacteriana substancial quando comparada a CHX. A luz branca apresentou fotossensibilização letal nos parâmetros utilizados. Conclusão: A utilização da curcumina, um corante natural e a luz branca, capaz de ativar FS em curtos períodos de tempo, são avanços nesse campo antimicrobiano alternativo. / This work investigated the antimicrobial photodynamic potential (PACT) mediated by a natural photosensitizer (PS), curcumin (C), exposure to an source of blue LED (L) applied over a Streptoccocus mutans (SM) mature biofilm formed on hidroxiapatite discs and compared this potential with biofilms submitted to single immersion of chlorhexidine at 0.12% (CHX). Additionally, it was verified the efficacy of a broad visible spectrum light source (white light) of high potency intensity in the presence of C and toluidine blue (T) at low concentrations and exposure to an extra short illumination time. Materials: SM biofilms were submitted to a treatment with C solutions and exposure to a 48 J/cm2 e 72 J/cm2 of L and immersion in CHX. Furthermore, a white light source (42 J/cm2; 3410 mW/cm2) was used in the presence of low concentrations of C and T for an extra short period over SM suspensions. The efficacy of the treatments were performed by colony forming units counting (CFU/mg of dry biofilm and CFU/ml of suspension) and the morphological analysis of biofilms were performed using confocal laser scanning microscopy images and environmental scanning electron microscopy. Results: PACT (C at 2.5 mM and L at 48 J/cm2) presented a bacterial substantial reduction when compared with CHX treatment. The white light showed lethal photossensibilization in the utilized parameters. Conclusion: The use of curcumin, a natural compound and the white light, able to activate FS at shorts periods, are advance on this antimicrobial alternative field.

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-14Bitstream added on 2014-12-02T11:21:06Z : No. of bitstreams: 1 000792872.pdf: 571447 bytes, checksum: 3bae358d477e471a159de61135729477 (MD5) / Este estudo avaliou a atividade antimicrobiana de um reembasador resiliente Coe Soft® (RRCS) combinado ao polímero antimicrobiano poli (2 tert-butilaminoetil) metacrilato (PTBAEMA) sobre formação de biofilme de Staphyloccocus aureus, Streptococcus mutans e Candida albicans. Espécimes circulares (15mm x 3mm) do RRCS foram confeccionados (n=27), esterilizados, divididos em três grupos de acordo com as concentrações de PTBAEMA a 0% (controle), 10% e 25% e individualmente inoculados em tubos de falcon contendo 5mL de caldo RPMI para os fungos, TSB para S. aureus e BHI para S. mutans e mantidos em overnight a 37ºC em incubadora com agitação orbital a 75rpm, sendo o S. mutans em microaerofilia. Após a inoculação dos espécimes seguiu-se a formação e maturação do biofilme a 37ºC sob agitação orbital a 75rpm. Em seguida cada espécime foi transferido para tubos contendo PBS e diluições seriadas foram realizadas. Alíquotas dessas diluições foram semeadas em placas de Petri e incubadas a 37ºC por 48h. Os dados obtidos foram transformados em log (UFC+1)/mL, considerando-se α=0,05. Os resultados demonstraram que o grupo contendo 25% de PTBAEMA inibiu completamente a formação de biofilme de S. aureus e S. mutans. Uma redução significativa na contagem de S. aureus e S. mutans (Kruskal- Wallis e Dunn; p=0,001) para o grupo contendo 10% de PTBAEMA foi observada quando comparada aos valores encontrados nos respectivos grupos controle. Para C. albicans não foi encontrada diferença significante entre grupos contendo PTBAEMA e o grupo controle (ANOVA; p>0,05). Conclui-se que os RRCS contendo 10% e 25% de PTBAEMA inibiram a formação de biofilme de S. aureus e S. mutans. Entretanto não teve efeito significante na formação de biofilme de C. albicans. / This study evaluated the antimicrobial activity of the resilient reliner Coe Soft ® (RRCS) combined with antimicrobial polymer poly (2-tert butylaminoethyl) methacrylate (PTBAEMA) on Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans and Candida albicans biofilm formation. RRCS circular specimens were prepared (n=27), sterilized, divided into three groups according to PTBAEMA concentrations of 0% (control), 10% and 25% and inoculated into individual falcon tubes containing 5 mL of RPMI broth for fungi, TSB for S. aureus and BHI for S. mutans and kept overnight at 37°C with orbital shaking incubator at 75rpm, and S. mutans in microaerophilic. The specimens’ inoculations were followed by biofilm formation and its maturation at 37°C under orbital shaking at 75rpm. After that, each sample was transferred to tubes containing PBS and serial dilutions were performed. Aliquots of these dilutions were plated in Petri dishes and incubated at 37°C for 48h. The data were transformed into log (CFU +1)/mL, considering α = 0.05. The results showed that the group containing 25% of PTBAEMA inhibited completely biofilm formation of S. aureus and S. mutans. A significant reduction in counts of S. aureus and S. mutans (Kruskal- Wallis and Dunn; p = 0.001) were found in group containing 10% of PTBAEMA when compared to the values in the corresponding control groups. C. albicans had no significant differences between groups containing PTBAEMA and the control group (ANOVA; p> 0.05). It is concluded that the RRCS containing 10% and 25% PTBAEMA inhibited the biofilmformation of S. aureus and S. mutans. However, no significant effect was found on C. albicans biofilm formation.

Orientadora : Profª Drª Patricia do Rocio Dalzoto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica. Defesa: Curitiba, 28/03/2014 / Inclui referências / Área de concentração: Microbiologia / Resumo: A corrosão influenciada por micro-organismos (CIM) é a mudança do potencial eletroquímico na interface metal/solução, causado pela produção de metabólitos de bactérias e fungos que crescem aderidos a superfícies metálicas na forma de biofilmes. O conhecimento da microbiota dos biofilmes permite a escolha do melhor antimicrobiano a ser utilizado para reduzir os efeitos da CIM. A abordagem polifásica, que consiste na associação de técnicas morfológicas, químicas e genéticas, é interessante para uma correta caracterização de micro-organismos. A espectroscopia no infravermelho aparece como uma opção para a identificação de fungos e bactérias devido à rapidez na execução e ao menor custo, quando comparado com as demais técnicas. O objetivo deste trabalho foi o isolamento e a identificação polifásica de micro-organismos presentes em corpos de prova metálicos instalados na Usina Hidrelétrica de Tucuruí (PA), e a avaliação do melhor biocida a ser utilizado para o controle da formação de biofilmes. As coletas foram feitas a cada dois meses entre 2011 e 2012, e os micro-organismos identificados por macro e micromorfologia, bioquimismo e biologia molecular. Os antimicrobianos Orobor, MXD-100 (MaxClean®), hidróxido de sódio, extrato de aroeira (Schinus terebinthifolius) e extrato de erva-mate (Ilex paraguariensis) foram testados quanto a sua eficiência. Os dados foram analisados por ANOVA (p<0,01) seguido por teste de Scott-Knott para comparação das médias (p<0,05). Foram isoladas 358 bactérias aeróbias ou anaeróbias facultativas, pertencentes em sua maioria aos gêneros Bacillus, Citrobacter, Shigella, Pseudomonas, Enterobacter e Acinetobacter. Foi verificada a presença de bactérias redutoras de sulfato e bactérias oxidantes de ferro, além do isolamento de 94 fungos, com predomínio dos gêneros Penicillium e Aspergillus. Os antimicrobianos MXD-100 1 ppm e 3 ppm, Orobor 10 mL/L e NaOH pH 14 foram os mais eficientes no controle, reduzindo em aproximadamente 35% o crescimento bacteriano e fúngico. A espectroscopia no infravermelho foi testada para classificação microbiana, e se mostrou eficiente na identificação de fungos filamentosos, mas novas metodologias devem ser testadas para a identificação bacteriana. A caracterização de micro-organismos encontrados nos corpos de prova metálicos mostra a biodiversidade da região e está relacionada ao processo de biocorrosão, possibilitando o desenvolvimento de novas estratégias de controle. Palavras chave: Biofilme, biocorrosão, biocida e NIRS. / Abstract: Microbially Influenced Corrosion (MIC) is the change of electrochemical potential at the interface metal/solution, caused by metabolites produced by bacteria and fungi growing in metallic surfaces as biofilms. The knowledge of biofilms’ microbiota allow us to choose the best biocide to reduce the effects of MIC. Polyphasic approach, consisting in associate morphological, chemical and genetical techniques, is interesting for the correct characterization of micro-organisms. Infrared spectroscopy shows up as an option to identify fungi and bacteria because of faster response and lower costs, when compared with other techniques. The aim of this work were the isolation and the polyphasic identification of micro-organisms present in metallic coupons installed in Tucuruí’s Power Plant (PA), and the evaluation of the best biocide to be used for the control of biofilm formation. Samples were collected every two months during 2011 and 2012, and micro-organisms were identified by macro and micromorphology, biochemical assays and molecular tools. The efficiency of biocides Orobor, MXD-100 (MaxClean®), sodium hydroxide, Schinus terebinthifolius extract and Ilex paraguariensis extract were tested. Data were analyzed by ANOVA (p<0.01) followed by Scott-Knott test for comparison of means (p<0.05). It was isolated 358 aerobic or facultative anaerobic bacteria, belonging mostly to the genera Bacillus, Citrobacter, Shigella, Pseudomonas, Enterobacter and Acinetobacter. Sulfate-reducing and iron-oxidizing bacteria were also found, in addition of isolation of 94 fungi, with prevalence of the genera Penicillium and Aspergillus. MXD-100 1 ppm and 3 ppm, Orobor 10 mL/L and NaOH pH 14 were the most efficient biocides, reducing approximately 35% of bacteria and fungi. Infrared spectroscopy was tested for micro-organisms classification, and it was efficient to identify filamentous fungi, but new methodologies need to be tested to bacterial identification. The characterization of micro-organisms found on metal surfaces highlights the biodiversity of the region and can be related to the process of biocorrosion, enabling the development of new strategies for its control. Key words: Biofilm, biocorrosion, biocide and NIRS.

Salmonella enterica subsp. enterica sorovar Derby (S. Derby) é um dos sorovares mais frequentemente detectados na cadeia produtiva de suínos na região sul do Brasil. Estudos prévios indicaram que isolados de S. Derby apresentando perfis similares de resistência a antimicrobianos estavam circulando ao longo dos anos nesta região. A sobrevivência de Salmonella no ambiente e a persistência no hospedeiro são facilitadas pela sua habilidade em formar biofilmes. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi identificar a presença de grupos clonais entre 140 isolados de S. Derby coletados ao longo de um período de dez anos de diferentes origens da cadeia produtiva de suínos (linfonodos, conteúdo intestinal, ambiente e produtos suínos). Para tanto, o perfil de resistência a antimicrobianos, através de dois conceitos distintos de avaliação de resistência (valores ECOFF e valores de breakpoint), a habilidade em formar biofilmes e a caracterização genotípica por macro-restrição (PFGE) foram avaliados. A determinação do MIC foi realizada em todos os isolados, frente aos seguintes antimicrobianos: ácido nalidíxico, ampicilina, cefotaxima, ceftazidima, ciprofloxacina, colistina, florfenicol, gentamicina, estreptomicina e tetraciclina. Para avaliar a capacidade de S. Derby em formar biofilmes, três metodologias foram aplicadas: i. morfologia de colônia em ágar contendo Vermelho Congo, para determinar a detecção fenotípica de fímbria curli e celulose; ii. formação de biofilme na interface ar-líquido em caldo LB; iii. aderência em microplacas de poliestireno de 96 poços. No total, apenas 17 (12,1%) isolados puderam ser classificados como suscetíveis a todos os antimicrobianos testados. As maiores frequências de populações “non-Wild Type” (nWT) foram observadas frente a tetraciclina (75,7%), estreptomicina (70%) e colistina (11,4%), enquanto que não foram detectadas populações nWT para ciprofloxacina, ceftazidima e gentamicina. Multi-resistência (resistência a ≥ 3 antimicrobianos; de acordo com valores de breakpoint) foi detectada em 8,6% dos isolados. Em ágar contendo Vermelho Congo, três diferentes morfologias de colônia foram observadas. A morfologia Rdar (vermelha, seca e rugosa) foi a mais frequente, sendo detectada em 59 isolados (42,1%); enquanto que as morfologias Saw (branca e mucoide) e Pdar (rosa, seca e rugosa) foram observadas em 46 (32,9%) e em 35 (25%) dos isolados, respectivamente. Os morfotipos Rdar e Pdar, que em conjunto albergaram a maioria dos isolados, são considerados os mais usualmente observados em isolados de Salmonella capazes de formar biofilme. A formação de película rígida, sem dispersão por agitação, foi observada em 24 amostras (17,1%) em caldo LB convencional e em 78 amostras (55,7%) em caldo LB low salt, sendo todas pertencentes aos morfotipos Rdar ou Pdar. Em placas de poliestireno de 96 poços, um grande número (n=96; 68,6%) dos isolados foram fracamente ou moderadamente produtores de biofilme, incluindo todos os isolados que apresentaram os morfotipos Rdar e Pdar. Através dos perfis de formação de biofilme e de resistência a antimicrobianos observados, 36 isolados foram selecionados para macro-restrição por eletroforese em campo pulsado (PFGE). Destas, 27 foram agrupadas em 11 pulsotipos que apresentavam mais de uma cepa com 100% de similaridade. Desta forma, foi possível identificar clones e cepas intimamente relacionadas de S. Derby que circularam em granjas, matadouros-frigoríficos e foram encontrados em alimentos ao longo de uma década. / Salmonella enterica subsp. enterica serovar Derby (S. Derby) is one of the serovars most frequently detected in the swine production chain of southern Brazil. Previous studies indicated that isolates of S. Derby displaying similar antimicrobial resistance profiles circulated over the years in this region. Survival of Salmonella in the environment and persistence in the host are facilitated by the ability to form biofilms. Thus, the aim of this study was to identify the presence of clonal groups between 140 S. Derby isolates collected over a ten-year period from various porcine origins (lymph nodes, intestinal content, environment and pork). Therefore, the antimicrobial resistance profile, through two distinct concepts of resistance evaluation (ECOFF value and breakpoint value), the ability to form biofilm and the genotypic characterization by macro-restriction (PFGE) were evaluated. MIC determinations were performed on all isolates, against the following antimicrobials: nalidixic acid, ampicillin, cefotaxime, ceftazidime, ciprofloxacin, colistin, florfenicol, gentamicin, streptomycin and tetracycline. To evaluate the S. Derby ability to form biofilm, three methods were applied: i. colony morphology on Congo Red agar, to determine the phenotypic detection of curli fimbriae and cellulose; ii. biofilm formation in liquid-air interface of LB broth; iii. adherence on a 96-well polystyrene microtiter plate. In total, only 17 (12.1%) isolates were classified as susceptible to all antimicrobials tested. The highest frequencies of non-Wild Type (nWT) populations were observed against tetracycline (75.7%), streptomycin (70%) and colistin (11.4%), whereas there were no detectable nWT population to ciprofloxacin, ceftazidime and gentamicin. Multidrug resistance (resistance to ≥ 3 antimicrobials) was detected in 8.6% of isolates. On Congo Red agar, three different colony morphology types were observed. The Rdar type (read, dry and rough) was the most frequent, being detected in 59 isolates (42.1%); while Saw (white and smoth) and Pdar (pink, dry and rough) types were observed in 46 (32.9%) and 35 isolates (25%), respectively. The Rdar and Pdar types, which together encompassed the majority of the isolates, are considered the most often observed in Salmonella isolates able to form biofilm. The formation of a rigid pellicle, which could not be dispersed by agitation, was observed in 24 (17.1%) isolates in conventional LB broth and in 78 (55.7%) isolates in low salt LB broth, all belonging to morphotypes Rdar or Pdar. On 96-well polystyrene microtiter plate, a larger number (n=96; 68.6%) of isolates showed to be weak or moderate biofilm producers, including all isolates that showed the Rdar and Pdar type. Through the biofilm and resistance profiles observed, 36 isolates were selected for macro-restriction for pulsed-feld gel electrophoresis (PFGE). Of these, 27 isolates were clustered in 11 pulsotypes which presented more than one strain with 100% of similarity. Therefore, was possible to identify clones and strains closely related of S. Derby that circulated in pig farms, slaughter plants and encountered in foods along a decade.