Orientador: Eliana Gertrudes de Macedo Lemos / Coorientador: Elisângela Soares Gomes Pepe / Coorientador: Mariana Rangel Pereira / Banca: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez / Banca: João Martins Pizauro Junior / Resumo: O mercado industrial está se tornando cada vez mais dependente do uso de enzimas como catalisadores. Dentre as enzimas utilizadas industrialmente estão as de origem microbiana, por serem ativas nas mais diversas condições. As lacases são enzimas com alto potencial, pois atuam sobre diversos compostos, o que possibilita uma vasta diversidade de possíveis aplicações. Entre as formas de prospecção de novas enzimas microbianas, encontra-se a metagenômica. Diante disto, foi realizada a busca por potenciais lacases seguindo uma estratégia "sequence-driven" em uma base de dados metagenomicos composta por amostras de diversos ambientes, pertencente ao Laboratório de Bioquímica de Microrganismos e Plantas (LBMP). As ORFs previamente anotadas por similaridade de sequências e domínios conservados como possíveis "Multicopper oxidases" (grupo no qual se encontram as lacases) foram prospectadas pela região conservada para lacases L3 (HLHGH). Esta estratégia retornou três ORFs, a ORF50MF; a ORF51ME e a ORF13SE (lacmeta), as quais foram clonadas e submetidas as análises de super-expressão e purificação. LacMeta, similar em 82% com a sequência de proteína hipotética de Streptomyces rubidus [WP_069465126.1], foi a proteína que apresentou o melhor resultado de expressão e purificação, sendo então submetida a caracterização cinética. A proteína fusionada a uma cauda de hexa-histidina foi purificada na forma homo-trimérica, com 107 kDa, e apresentou atividade ótima em pH ácido para o substrato AB... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The industrial market is becoming increasingly dependent on the use of enzymes as biocatalysts. Among the enzymes used industrially are those of microbial origin, because they are active in the most diverse conditions. Laccases are enzymes with high potential, since they act on several compounds, which allows a wide diversity of possible applications. Among the search for new forms of microbial enzymes, is the metagenomic. In this way, the search for potential laccases was carried out following a sequence-driven strategy in a metagenomic database composed of samples from different environments, belonging to the Laboratory of Biochemistry of Microorganisms and Plants (LBMP). The ORFs previously annotated by similarity of sequences and conserved domains as possible "Multicopper oxidases" (group in which the laccases are) were prospected by the region conserved for laccases L3 (HLHGH). This strategy returned three ORFs, the ORF50MF; the ORF51ME and the ORF13SE (lacmeta), which were cloned and subjected to super-expression and purification analyzes. LacMeta, similar in 82% to the hypothetical protein sequence of Streptomyces rubidus [WP_069465126.1], was the protein that presented the best expression and purification result and was then subjected to kinetic characterization. The protein fused to a hexa-histidine tail was purified in the homo-trimeric form with 128.22 kDa and presented optimum acidic pH activity for the ABTS substrate, for which obtained the catalytic parameters k... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientadora: Maria Lucia Gonsales da Costa Araujo / Banca: Kelly Johana Dussán Medina / Banca: Rosineide Gomes da Silva Cruz / Resumo: Streptomyces clavuligerus produz vários compostos bioativos importantes, como os beta-lactâmicos ácido clavulânico (AC), um inibidor de beta-lactamases utilizado em combinação com antibióticos beta-lactâmicos, e mais vinte clavamas (várias com atividade antifúngica), o antibiótico cefamicina (CefC), utilizado comercialmente para a produção de antibióticos semi-sintéticos, além de bioativos não beta-lactâmicos como tunicamicina e holomicina. Estudos têm mostrado que tanto a natureza como a concentração de fontes de nitrogênio influenciam a produção de bioativos em S. clavuligerus, pois muitos precursores destes biocompostos derivam de intermediários nitrogenados do metabolismo primário. Um aminoácido importante para o cultivo de S. clavuligerus é a lisina, que atua no metabolismo primário via cadaverina aminotransferase, e no metabolismo secundário via 1-piperideina-6-carboxilato, para a produção do raro aminoácido ácido alfa-aminoadípico, um precursor de CefC e de todos os demais antibióticos beta-lactâmicos. Outra fonte de nitrogênio de destaque é o glutamato de sódio, que apresenta efeitos positivos na produção de AC por fornecer átomos de carbono para a molécula deste biocomposto. Estudos têm relatado a produção de bioativos utilizando lisina ou glutamato de sódio nos meios de cultivo, mas não há relatos na literatura sobre a influência conjunta destes aminoácidos. Este trabalho trata da investigação de relações entre, a utilização conjunta de lisina e glutamato de sódio e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Streptomyces clavuligerus produces several important bioactive compounds, such as beta-lactams, clavulanic acid (AC), a beta-lactamase inibitor which is used in combination with beta-lactam antibiotics, and twenty more clavams with antifungal activity, the antibiotic cephamycin (CefC), of great commercial interest for the production of semisynthetic antibiotic, and the non-lactamic bioactives tunicamycin and holomicyn. Studies have shown that both the nature and the concentration of nitrogen sources influence the production of bioactives metabolites in S. clavuligerus, because many precursors of these biocompounds derive from nitrogenous intermediates of the primary metabolism. Lysine is an important amino acid in S. clavuligerus, acting on the primary metabolism via cadaverine aminotransferase, and on the secondary metabolismo via 1-piperidine -6- carboxylate, for the production of the rare amino acid alpha-aminoadipic acid, a precursor of CefC as also of all other beta-lactams antibiotics. Another important source of nitrogen is sodium glutamate, which in S. clavuligerus culture media has positive effects on the production of AC. Studies have reported the production of bioactive compounds employing lysine or sodium glutamate in culture media, but there aren't reports in the literature on the joint infuence of these amino acids. In this sense, this project proposes to investigate relations between combinations of lysine and sodium glutamate and and the production of beta-lactam compounds AC and CefC by S. clavuligerus in submerged cultures employinh chemically defined media. Initially, batch fermentations were carried out in a rotating incubator at 28°C and 260 rpm, in order to select the best combination of lysine and glutamate concentrations to obtain higher final bioactives compounds yields. This combination was then validated in bioreactor. The set of results in shaken fla... / Mestre

Orientador: Paulo Roberto Bueno / Banca: Ronaldo Censi Faria / Banca: Paulo Olivi / Resumo: Este trabalho está centrado no desenvolvimento, caracterização e utilização de uma superfície composta por monocamada auto-organizada (self assembled monolayer - SAM) de L-cisteína, funcionalizada com a enzima metalo-β-lactamase (MβL). A função designada a este sensor foi de detecção da velocidade da cinética enzimática, em tempo real, da reação da penicilinase com seu substrato, um antibiótico β-lactâmico, por técnica piezelétrica, microbalança a cristal de quartzo (QCM), e por técnicas eletroquímicas. As curvas de progresso foram obtidas pela variação da frequência no cristal de quartzo, demonstrando a cinética em tempo real. Não foram obtidas curvas com perfil hiperbólico, como esperado pelo modelo de Michaelis-Menten, por ambas as técnicas devido às baixas concentrações de substrato utilizadas nas análises. Foram obtidos gráficos com padrões lineares e a partir deles foi possível calcular a constante de Michaelis-Menten ( ). A obtida a partir da técnica eletroquímica mostrou-se mais próxima ao valor fornecido pelo fabricante da enzima. No entanto, pela técnica piezelétrica a foi maior, refletindo em perda de sensibilidade da enzima pelo substrato. / Abstract: The aim of this study was to develop, characterize, and apply the functionalized tranducer imobilized with metalo-β-lactamase (MβL) enzyme using appropriate procedures based on L-cysteine self-assembling monolayer-SAM. The enzymatic activity of MBL under β-lactam antibiotic was measured, on real time, by piezoeletric quartz crystal microbalance (QCM) and eletrochemical techniques. The progress curves were obtained by varying the frequency of quartz crystal. The hyperbolic pattern corresponding to the pattern set on the model of the Michaelis-Menten was not obtained due to low concentration of substrate. On the other side, linear graphic was obtained and the Km was calculated. The Km obtained from electrochemical analyses showed a value similar to manufacturer's instructions of fabricant, and the Km obtained by QCM showed higher, reflecting the lost of sensibility. / Mestre

Duas variações de resíduo agroindustrial foram analisadas como meio de cultura para o bioprocesso de fermentação semissólida pelo fungo Fusarium oxysporum, com o objetivo de obter a melhor produção de peptidases e lipases. Essas enzimas foram microencapsuladas por spray drying, visando garantir sua estabilidade e investigar outros prováveis benefícios obtidos pela técnica. A utilização de planejamento experimental permitiu analisar os efeitos e interações entre as variáveis operacionais do processo (temperatura de secagem, proporção de adjuvantes e relação entre adjuvantes). A caracterização bioquímica e físico-química do extrato enzimático e das micropartículas também foram estudadas. O emprego de farelo de trigo como substrato demonstrou maior produção enzimática que o uso de farelo de algodão. A fermentação produziu uma serinopeptidase e uma lipase, ambas com característica alcalina, com alta estabilidade em ampla faixa de pH e certa estabilidade em diferentes temperaturas. Para ambas as enzimas, observou-se modulação positiva da atividade frente à maioria dos íons estudados e forte inibição pelo surfactante SDS, enquanto a lipase demonstrou superatividade frente a CTAB. A caracterização enzimática permite sugerir a aplicação dessas enzimas na formulação de detergentes enzimáticos, indústria de couro, indústria de papel, agroquímicos, síntese de biopolímeros e biodísel. No processo de microencapsulação, a temperatura foi a variável operacional mais importante para a estabilidade, enquanto a quantidade de adjuvantes em relação à quantidade de extrato enzimático influenciou nas condições de manipulação. O estudo demonstrou que a técnica de microencapsulação por spray drying resultou em grande benefício no armazenamento das enzimas, por aumentar consideravelmente sua estabilidade e melhorar as propriedades físicas do extrato. / Two variations of agroindustrial residue were analyzed as culture medium for the bioprocess of solid-state fermentation by the fungus Fusarium oxysporum, in order to achieve the best production of peptidases and lipases. These enzymes were microencapsulated by spray drying in order to ensure its stability and investigate other potential benefits obtained by the technique. The use of experimental design allowed us to analyze the effects and interactions between the operating variables of the process (drying temperature, proportion of adjuvants and relation among adjuvants). Biochemical and physico-chemical characterization of the enzymatic extract and of the microparticles were also studied. The use of wheat bran as substrate demonstrated a greater enzyme production then the use of cottonseed meal. The fermentation produced serinepeptidases and lipases, both alkaline, with high stability over a wide pH range and some stability at different temperatures. For both enzymes, there was up regulation of activity with most of the ions analyzed and strong inhibition against the surfactant SDS, whereas lipase demonstrated superactivity against CTAB. The enzymatic characterization suggests the application of these enzymes in the formulation of enzymatic detergents, leather industry, paper industry, agrochemicals, synthesis of biopolymers and biodiesel. In the microencapsulation process, the temperature was the most important operating variable for stability, while the amount of adjuvants in relation to the amount of enzymatic extract influenced in terms of handling. The study demonstrated that the technique of microencapsulation by spray drying resulted in benefits for the storage of enzymes, by increasing considerably its stability and improve the physical properties of the extract.

Orientador: Carlos Gilberto Raetano / Banca: Edson Luiz Lopes Baldin / Banca: Evandro Pereira Prado / Resumo: Infestações de Diabrotica spp. (Coleoptera: Chrysomelidae) podem causar danos severos nas culturas e comprometer as expectativas de rendimentos. O conhecimento da dinâmica populacional do inseto, em culturas hospedeiras é fundamental para determinação do planejamento estratégico para altos rendimentos. Campo Novo do Parecis - MT é uma importante região agrícola, onde se emprega a semeadura de soja no verão e milho, feijão, algodão e girassol, na segunda safra. O objetivo desse trabalho foi avaliar dentro dos sistemas produtivos da Chapada do Parecis, a ocorrência de Diabrotica spp. e a eficiência do uso de biotecnologia no sistema de produção, fornecendo recomendações que auxiliam no gerenciamento das propriedades. Nesse sistema foi observado uma crescente incidência do gênero Diabrotica nos cultivos e o desafio de entendimento da mudança na dinâmica da praga. A influência de Diabrotica spp. no sistema de produção da região do Parecis - MT e os processos de interações entre seis épocas de semeadura, 5 tipos de tecnologia e dois sistemas de produção soja-milho (SM) e soja-milho-feijão (SMF) em dois anos agrícolas, foram analisados nesse experimento. Esse trabalho identificou as diferenças da dinâmica populacional de Diabrotica spp. nos sistemas de produção SM e SMF nas safras 2014/2015 e 2015/2016 e quantificou os momentos de maior incidência da praga no sistema, que correspondem ao período de janeiro a março, auxiliando na estratégia de planejamento agrícola e suas medidas de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Diabrotica spp. infestations can cause severe damage to crops and jeopardize income expectations. Knowledge of insect population dynamics in crops is important to determine strategic planning for high productivity. Campo Novo do Parecis - MT is an important agricultural region, where soybeans are planted in summer and corn, beans, cotton and sunflower in the second harvest. The objective of this work was to evaluate the occurrence of Diabrotica spp. with the productive systems of the Chapada do Parecis and the efficiency of the use of biotechnology in the production system, providing recommendations that assist the properties management. This system had an increasing incidence of the genus Diabrotica in its crops and a challenge of understanding the change in the dynamics of this pest. This experiment analyzed the influence of Diabrotica spp in the production system of the Parecis - MT region and the interaction processes between six planted seasons, five types of technology and two production systems of soybean - corn (SC) and soybean - corn - bean (SCB) in two agricultural years. This work identified the differences in the population dynamics of Diabrotica spp. in SC and SCB production systems in the 2014/2015 and 2015/2016 harvests and quantified the periods of greatest incidence of the pest in the system, which corresponds to the period from January to March, that assists in the agricultural planning and the control measures for the region. There were 480 observations, where more than 2000 adults of Diabrotica spp. were collected by counting in yellow non-pheromone adhesive traps. The productivity damages were correlated by the effects of the planting season, production system and technology adopted (CV - OGM free; RR - cp4 epsps; PRO - Cry1A.105 + Cry2Ab2; PRO2 - Cry1A.105 + Cry2Ab2 + cp4 epsps e PRO3 - Cry1A.105 + Cry2Ab2 + cp4 epsps + Cry3Bb1) to the damage caused by ... / Mestre

Orientador: Maria Célia Bertolini / Banca: Iran Malavazi / Banca: Sergio Akira Uyemura / Resumo: O fungo filamentoso Neurospora crassa é um organismo modelo utilizado na compreensão de diversos aspectos da biologia dos eucariotos, e tem sido usado, em nosso laboratório, para estudos celulares básicos, como os mecanismos bioquímicos e moleculares envolvidos na regulação do metabolismo de glicogênio. Uma análise sistemática realizada com uma coleção de linhagens mutantes em genes codificadores de fatores de transcrição permitiu identificar várias proteínas potencialmente envolvidas na regulação do metabolismo do glicogênio neste organismo. Algumas linhagens mutantes apresentaram alterações no perfil de acúmulo de glicogênio e na expressão dos genes que codificam as enzimas glicogênio sintase (gsn) e glicogênio fosforilase (gpn) quando comparadas à linhagem selvagem. Dentre estas, duas linhagens mutantes em genes que codificam para a proteína RCO-1 (regulator of conidiation-1) e para uma proteína hipotética foram selecionadas para o presente estudo, levando em consideração que ambas linhagens também apresentaram variações na progressão do ciclo celular quando analisadas por citometria de fluxo. Como a proteína RCO-1 é uma provável parceira da proteína RCM-1 (regulator of conidiation and morphology-1), então a linhagem mutante no gene codificador de RCM-1 foi incluída neste trabalho. Portanto, foi feita a caracterização de um fator de transcrição anotado como proteína hipotética e de dois cofatores transcricionais RCO-1 e RCM-1, ortólogos ao complexo corepressor Tup1-Ssn6 de Saccharomyces cerevisiae. As proteínas RCO-1, RCM-1 e a codificada pela ORF NCU09739 estão envolvidas na regulação do metabolismo do glicogênio, atuando na regulação da expressão dos genes gsn e/ou gpn. Estas mesmas proteínas também são necessárias para o crescimento e desenvolvimento normal do... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The filamentous fungus Neurospora crassa is a model organism used to understand various aspects of eukaryotic biology. It has been used, in our laboratory, in basic cellular studies, such as the biochemical and molecular mechanisms involved in the regulation of glycogen metabolism. A systematic analysis performed with a collection of mutant strains in genes encoding transcription factors led to the identification of proteins likely involved in the regulation of glycogen metabolism in this organism. Some mutant strains showed changes in the glycogen accumulation profile and in the expression of the genes encoding the enzymes glycogen synthase (gsn) and glycogen phosphorylase (gpn) when compared to the wild-type strain. Among these, two mutant strains in the genes encoding RCO-1 (regulator of conidiation-1) and a hypothetical proteins were selected for the present study. Both strains presented variations in cell cycle progression when analyzed by flow cytometry. RCO-1 protein is likely a partner of RCM-1 (regulator of conidiation and morphology-1) protein, thus the mutant strain in the gene encoding RCM-1 was included in this work. Therefore, we performed the characterization of a transcription factor annotated as a hypothetical protein and the two transcriptional cofactors RCO-1 and RCM-1, orthologs of the Saccharomyces cerevisiae corepressor complex Tup1-Ssn6. RCO-1, RCM-1 and the product of the ORF NCU09739 are involved in the regulation of glycogen metabolism, acting in the regulation of gsn and/or gpn gene expression. The same proteins are necessary for growth and normal development of the fungus, since the mutant strains showed changes in hyphae length, pigmentation and conidiation. Gene expression analysis showed that the NCU09739 gene was highly expressed at the beginning of the conidia germination, showing the importance... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria Célia Bertolini / Co-orientador: Fernanda Zanolli Freitas / Banca: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Roberto do Nascimento Silva / Resumo: Neste trabalho, uma coleção de linhagens mutantes de N. crassa em proteínas quinases foi adquirida pelo nosso laboratório e estas linhagens foram utilizadas a fim de identificar as proteínas envolvidas no controle do metabolismo do glicogênio no fungo. Estas proteínas foram anotadas como pertencentes a diferentes classes de proteínas quinases devido às características dos seus domínios quinases. Inicialmente foram identificadas as quinases que estão envolvidas no controle do metabolismo do carboidrato através da quantificação do conteúdo de glicogênio, tanto em uma situação de crescimento vegetativo (30 °C), como sob a condição de estresse térmico (45 °C). Nesta parte, as linhagens mutantes que mostraram perfis de acúmulo de glicogênio diferente da linhagem selvagem, nas condições avaliadas foram selecionadas. Posteriormente, foram realizadas quantificações de atividade da enzima glicogênio sintase de N. crassa (GSN), sob as mesmas condições experimentais, na presença e ausência do modulador alostérico glicose-6-fosfato (G6P). Foi verificado que a enzima GSN presente em algumas linhagens mutantes provavelmente estaria diferentemente fosforilada, quando comparada à proteína presente na linhagem selvagem. Por este motivo, uma análise das diferentes isoformas de fosforilação foi realizada em algumas das linhagens mutantes combinando os ensaios 2D-PAGE e Western blot. Através destas análises foi possível verificar quais proteínas quinases estão envolvidas no controle do metabolismo do glicogênio e que atuam mais especificamente na regulação por fosforilação da enzima GSN. Das 55 linhagens inicialmente utilizadas, 6 linhagens apresentaram diferenças no acúmulo de glicogênio, na atividade GSN e no estado de fosforilação da enzima GSN, quando comparadas com a selvagem. Portanto, caracterizam proteínas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this work, a collection of N. crassa strains mutated in genes encoding protein kinases was used to identify proteins involved in the control of glycogen metabolism in this fungus. These proteins were annotated as belonging to different classes of protein kinases due to their kinase domains. Initially, we identified the proteins involved in the metabolism control by quantifying the glycogen accumulated under vegetative growth (30 °C) and under a stress condition such as heat stress (45 °C). The mutant strains showing glycogen accumulation profiles different from the wild-type strain under the conditions evaluated were selected. The selected mutant strains were used to quantify glycogen synthase activity (GSN), under the same experimental conditions, in the presence and absence of the allosteric modulator glucose-6-phosphate (G6P). From this assays, it was observed that GSN in some mutant strains would be differently phosphorylated when compared to the enzyme present in the wild-type strain. Therefore, an analysis of the GSN phosphorylation isoforms was performed in such mutant strains by combining 2D-PAGE and Western blot. Through these analysis, it was possible to identify which protein kinases are involved in the control of glycogen metabolism and specifically act in the GSN phosphorylation. Of the 55 strains initially used six strains showed differences in the glycogen accumulation, in the GSN activity, and in the state of GSN phosphorylation, compared to the wild-type strain. Therefore, they characterize putative protein kinases that regulate glycogen metabolism by regulating the GSN enzyme. The strain knocked-out in the ORF encoding the protein PHO85-like (a cyclin-dependent protein kinase) showed differences in the glycogen content, increased -/+ G6P ratio, and changes in the GSN phosphorylation... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maria Célia Bertolini / Banca: Paulo Sergio Rodrigues Coelho / Banca: Otavio Henrique Thiemann / Banca: Gustavo Henrique Goldman / Banca: Aline Maria da Silva / Resumo: Resultados prévios, em nosso laboratório, permitiram identificar fatores de transcrição provavelmente atuando como reguladores do metabolismo de glicogênio no fungo Neurospora crassa utilizando uma coleção de linhagens mutantes do fungo contendo ORFS codificadoras de fatores de transcrição individualmente nocauteadas. O presente trabalho teve como objetivo realizar análises funcionais de alguns dos fatores de transcrição anteriormente identificados, tais como o regulador transcricional XlnR, descrito em outros fungos filamentosos como regulador de genes codificadores de enzimas xilanolíticas e/ou celulolíticas e o produto da ORF NCU04390, uma proteína sem função conhecida. Inicialmente foram realizadas análises de acúmulo de glicogênio e da expressão dos genes gsn (codificador da enzima glicogênio sintase) e gpn (codificador da enzima glicogênio fosforilase) durante o crescimento vegetativo (30ºC) e sob condição de estresse térmico (45ºC) nas linhagens mutantes e comparadas à linhagem selvagem. Ambas as linhagens mutantes apresentaram alterações tanto no conteúdo de glicogênio como na expressão dos genes citados anteriormente, o que indicou o possível envolvimento dos fatores de transcrição na regulação do metabolismo do carboidrato. Foram realizados experimentos com o objetivo de investigar a função do fator de transcrição XlnR na regulação do metabolismo de glicogênio. Foi verificado que esta proteína regula os níveis do carboidrato, bem como a expressão do gene gsn quando o fungo foi crescido em fontes alternativas de carbono. Entretanto, o fator de transcrição XLR-1 de N. crassa produzido na forma recombinante em E. coli (inteiro e truncado) não foi capaz de ligar ao motif presente no promotor gsn. Genes codificadores de duas endoxilanases foram identificados no genoma de N. crassa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Previous results from our laboratory using a collection of Neurospora crassa strains mutated in genes encoding transcription factors allowed us to identify transcription factors likely involved in glycogen metabolism regulation. The present work aimed to perform a functional analysis of some transcription factors previously identified, such as the transcriptional regulator XlnR, described in many filamentous fungi as a transcriptional regulator of xylanolitic and/or cellulolitic genes and a protein with unknown function, the ORF NCU04390 product. Initially, analysis of glycogen accumulation and gsn (coding glycogen synthase) and gpn (coding glycogen phosphorylase) gene expression were performed under vegetative growth (30 °C) and under heat shock cond ition (45 ºC) in the two mutant strains and compared to the wild-type strain. Both mutant strains showed changes in the glycogen levels as well as in the gsn and gpn expression, suggesting an involvement of these transcription factors in the regulation of glycogen metabolism. Additional analysis was performed in order to investigate the function of the XlnR transcription factor. It was observed that this transcription factor regulates the glycogen levels as well as the gsn expression under alternative carbon sources. However, the recombinant XLR-1 transcription factor produced in E. coli (entire and truncated proteins) was not able to bind to the XLR-1 motif present in the gsn promoter. Two endoxylanases coding genes were identified in the N. crassa genome database and analysis of their gene expression showed the upregulation of both genes during growth in xylan instead of xylose as carbon sources. This result suggested that the XLR-1 transcription factor is not the only protein that regulates the endoxylanases genes. The transcription factor encoded by NCU04390 ORF was... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O Brasil é um dos maiores produtores de polpa de eucalipto e suas plantações são dependentes do enraizamento adventício de genótipos selecionados. Neste trabalho foram analisados os efeitos de diferentes fontes de carboidratos e de qualidade de luz no enraizamento adventício in vitro de duas espécies de eucalipto economicamente importantes, Eucalyptus grandis, de fácil enraizamento e Eucalyptus globulus, recalcitrante ao enraizamento. As fontes de carboidratos testadas em meio de cultura líquido foram sacarose, glicose e frutose. Microestacas de ambas as espécies e plantas-matrizes de Eucalyptus globulus foram expostas a comprimentos de onda enriquecidos para luz branca, azul, vermelha e vermelho-extrema e seus efeitos foram testados em relação ao enraizamento. O enraizamento adventício aumentou em ambas as espécies quando foi fornecida sacarose durante a fase de indução e frutose na fase de formação. Fazendo uma analogia entre o enraizamento adventício e a tuberização de batata, este resultado pode ser atribuído a atividade de invertases na fase de indução e fructoquinase na fase de formação, porém mais estudos devem ser conduzidos para confirmar esta hipótese. Não houve efeito de qualidade de luz no enraizamento adventício quando os tratamentos de luz foram aplicados nas microestacas. A exposição de plantas-matrizes crescidas em meio de cultura sem sacarose à ambiente enriquecido com comprimento de onda vermelho-extremo proporcionou um aumento de 255% na porcentagem de enraizamento de suas microestacas, mesmo na ausência de auxina exógena no meio de enraizamento, quando comparado com plantas-matrizes expostas à luz branca nas mesmas condições de cultura. Este resultado está aparentemente relacionado com o balanço 8 endógeno de açúcares solúveis e amido na parte aérea e raízes em desenvolvimento, com maior conteúdo de ambos na região das raízes. / Brazil is one of the largest producers of eucalypt pulp and its plantations are dependent of adventitious rooting of selected genotypes. In this work we analyzed the effects of different carbohydrate sources and light qualities on in vitro adventitious rooting of two economically important eucalypt species, the easy-to-root Eucalyptus grandis and the recalcitrant Eucalyptus globulus. The carbohydrate sources tested in static liquid medium were sucrose, glucose and fructose. The effect of white, blue, red and far-red light exposure on microcuttings of both species and on donor-plants of E. globulus was evaluated in relation to rooting. Rooting was improved in both species by supplying sucrose in the induction phase and fructose in the formation phase. By a putative analogy of adventitious rooting with tuberization in potato stems, this result was attributed to activities of invertases in the induction phase and fructokinase in the formation phase, but more studies will be needed to confirm this hypothesis. There was no effect of light quality on adventitious rooting when light treatments were applied on microcuttings. Compared to the white light-treated control donor-plants grown on medium without sucrose, donor-plants grown under a far-red light enriched environment on medium devoid of sucrose yielded 255% in the rooting percentage of microcuttings derived therefrom, even in the absence of exogenous auxin in rooting medium. This result was apparently related to the balance between endogenous hexoses and starch content in shoots and developing roots, with a higher content of both in the rooting zone.

Orientador: Elenice Deffune / Banca: Sonia Regina Pérez Evangelista Dantas / Banca: Hélio Amante Miot / Resumo: As úlceras venosas são impactantes e representam um grande desafio médico devido ao entrelaçamento de comorbidades e causas multifatoriais, sendo de suma importância o surgimento de inovações tecnológicas na abordagem terapêutica que sejam acessíveis aos seus portadores. Diante dessa realidade, este trabalho se propôs a abordar as úlceras venosas comparando um produto existente no mercado, Hidrocolóide (HC), com uma proposta in house, o Gel de Plaquetas (GP), através da diminuição da área, avaliação descritiva da vascularização e queixas referidas. Participaram do estudo 17 pacientes, perfazendo um total de 22 úlceras venosas que foram acompanhados durante 90 dias, utilizando um dos produtos citados, de acordo com o randomização, em associação com o uso de faixas elásticas. A distribuição do grupo, segundo a randomização foi de 13 lesões no grupo de hidrocolóide e 9 no grupo de gel de plaquetas. A média percentual de redução das áreas das feridas foi de 57,78% para hidrocolóide e de 53,45% para gel de plaquetas, não apresentando diferenças estatisticamente significativas. O desempenho dos produtos estudados apresentaram grande similaridade no percentual de redução de área, o que indica que é preciso um estudo amostral maior para evidenciar superioridade de um produto sobre o outro. Porém quando comparados, quanto ao menor tempo de acompanhamento (D15), o gel de plaquetas apresentou melhor desempenho, com redução maior do que o hidrocolóide em tempo reduzido semelhante. A análise histológica no momento pré e pós tratamento sugere que o GP atua de forma a estimular a regeneração dos tecidos (estroma coeso) e de forma mais definitiva (distribuição dos vasos difusa na derme reticular). O aspecto do fechamento da lesão é mais consistente quando comparado com os pacientes que usaram HC onde se observou a formação de uma fina epiderme frágil... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Venous ulcers are striking and represent a major challenge due to the commingling of medical comorbidities and multifactorial causes, with the emergence of great importance to technological innovations in therapeutic approaches that are accessible to their patients. Given this reality, this study proposes to address venous ulcers comparing a product on the market, hydrocolloid (HC) with a proposed in-house, the Platelet Gel (GP), by decreasing the area and descriptive evaluation of vascularization complaints referred. The study included 17 patients, a total of 22 venous ulcers who were followed for 90 days, using one of the products listed, according to the randomization, in association with the use of compression elastic. The distribution of the group, according to randomization was 13 injuries in the hydrocolloid group and 9 in the group of platelet gel. The average percentage reduction of wound areas was 57.78% for hydrocolloid and 53.45% for platelet gel, showing no statistically significant differences. The performance of the products studied showed great similarity in the percentage of area reduction, which indicates that it is necessary to study a larger sample to demonstrate the superiority of one product over another. But when compared, for the shortest time of follow-up (D15), the platelet gel performed better, with greater reductions than the hydrocolloid in a short time like that. Histological analysis in the D0 and D90 of the treatment suggests that the GP acts to stimulate the regeneration of tissues (stroma together) and more definite form (diffuse distribution of vessels in the reticular dermis). The appearance of the closure of the injury is more consistent when compared with patients who used HC we observed the formation of a thin skin, fragile, observed in histological sections showed that a distribution of vessels in the papillary dermis. Histological sections confirmed... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre