Orientador: Cecilia Laluce / Banca: Maria Lucia Gonsales da Costa Araujo / Banca: Sandra Regina Ceccato Antonini / Banca: Debora Colombi / Banca: Luiz Carlos Basso / Resumo: Fermentações sucessivas com alta densidade celular são realizadas em Usinas de produção de etanol no Brasil e devido às dificuldades de esterilização, bactérias e leveduras selvagens competem entre si por nutrientes e pela dominância no processo. O objetivo do presente estudo consistiu em melhorar as condições de clarificação do melaço, propagação e fermentação da linhagem de levedura Saccharomyces cerevisiae do laboratório IQAr/45-2, visando a maior produção de etanol sem perda de viabilidade nos processos com e sem reutilização celular. Estudou-se também as associações entre a levedura IQAr/45-2 e as leveduras industriais (PE-2, CAT-1 e SA-1). Para a clarificação do melaço variou-se o acidulante (fosfato e ácido sulfúrico), pH inicial do melaço, temperatura e tempo de decantação, com intuito de levar a uma maior remoção de impurezas presente nesta matéria-prima. A melhor condição de propagação para levedura IQAr/45-2 consistiu em três etapas de concentrações crescentes de açúcar no melaço (4%, 8% e 12%) à 30°C com agitação (100 rpm). Esta condição de propagação levou a um rendimento de biomassa de 6,1g.L-1. Elevando-se a temperatura para 37°C, o tempo de propagação de cada etapa pode ser reduzido para 12h (cada) à custa de um aumento em uma etapa (melaço 3%, 5%, 8% e 12%), com biomassa variando de acordo com a levedura: 7,6g.L-1 para PE-2, 6,7g.L-1 para SA-1, 6,4g.L-1 para CAT-1 e 2,5g.L-1 para IQAr/45-2. Apesar de apresentar um menor crescimento a 37°C, a levedura IQAr/45-2 não mostrou instabilidade genética em meios cromogênios diferenciais. Para otimizar as condições de fermentação da levedura IQAr/45-2 em mini-reatores variou-se o tempo e fluxo de alimentação, temperatura e concentração de açúcar no mosto de alimentação visando um maior rendimento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Successive fermentations at high cell densities and cell reuse currently take part of the routine of Brazil distilleries for fuel ethanol production. Due to difficulties related to sterilization, bacteria and Saccharomyces and non-Saccharomyces yeasts compete with each other for nutrients and dominance of the process. The aim of the present work is to optimize and improve processes for molasses clarification, inoculum propagation, fermentation conditions and storage of Saccharomyces cerevisiae IQAr/45-2 between fermentation cycles with and without revitalization in order to minimize losses in ethanol production and viability during repetitive fermentations. It was also studied associations between the strain IQAr/45-2 and industrial yeasts (PE-2, CAT-1 and SA-1). In order to improve conditions for molasses clarification, acidification agents (phosphate and sulfuric acid), initial pH, temperature and decantation time were varied during the experiments. The best propagation condition for the strain IQAr/45-2 consisted on three consecutive steps of growth in increasing sugar concentrations (4%, 8% and 12%) at 30°C with agitation (100 rpm). Under these conditions, the biomass accumulated at the end of the propagation was 6.1 g.L-1. On the other hand, raising the propagation temperature from 30°C to 37°C, the time of each step decreased from 24h to 12h, while the biomass formed at the end of the entire propagation varied with the strain as follows: 7,6 g.L-1 for PE-2, 6,7g.L-1 for SA-1, 6,4g.L-1 for strain CAT-1 e 2,5g.L-1for strain IQAr/45-2. Any genetic instability occurred, as shown by the colonies formed on the differential chromogenic medium, when samples from the final culture propagated at 37°C were plated. Optimization of the fermentation conditions for the strain IQAr/45-2 was established in mini-reactors... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Regina Maria Barretto Cicareli / Banca: Raquel Mantuaneli Scarel Caminaga / Banca: Maurício Bacci Junior / Resumo: Alterações súbitas ou prolongadas no meio ambiente podem ter influências deletérias na composição do código da vida, o (DNA). A epigenética é a visão moderna da nossa interação com o meio em que vivemos. De acordo com a Organização Mundial de Saúde, "morte súbita" é aquela que acontece até 24 horas desde o início da sintomatologia. A morte súbita de causa cardíaca, definida como uma morte natural inesperada em pessoas sem antecedentes cardiovasculares pré-conhecidos (com carácter fatal) revela-se, em todos os estudos efetuados até o momento, como a principal causa de morte na atividade física, podendo acometer tanto recém-nascidos como adultos. Diversos genes foram identificados em associação a SQTL (síndrome do QT longo - doenças genéticas que causam arritmias cardíacas potencialmente fatais), onde 90% dos casos estão relacionados a mutações no gene responsável pelo canal de sódio SCN5A (locus LQT3) e no gene MTR. A metilação do DNA é uma alteração epigenética que atua na regulação da expressão gênica, e pode estar relacionada com a morte súbita de origem cardíaca. Na metilação do DNA ocorre a adição de um radical metil (CH3) no carbono 5 de citosina geralmente seguida por guanina (dinucleotídeo CpG), catalisada por enzimas DNA metiltransferases (DNMTs). Metodologias relativamente simples permitem o conhecimento da existência de metilação no DNA. O tratamento do DNA genômico com bissulfito de sódio converte as citosinas (C) não metiladas em uracilas (U), mas não afeta as citosinas (C) metiladas, procedendo a seguir à amplificação por PCR específica para metilação e sequenciamento dos produtos selecionados a partir do DNA tratado com bissulfito. Este estudo teve como objetivos investigar diferenças nos padrões de metilação que pudessem estar associados ao desenvolvimento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Prolonged or sudden changes in the environment may have deleterious influences on the content of the code of life, the (DNA). Epigenetics is the modern view of our interaction with the environment in which we live. According to the World Health Organization, "sudden death" is that which happens within 24 hours from the onset of symptoms. Sudden death from cardiac causes, defined as an unexpected natural death in people without cardiovascular history foreknown (with fatal character) shows up in all studies performed to date, as the leading cause of death in physical activity can affect both newborns and adults. Several genes have been identified in association with LQTS (long QT syndrome - genetic diseases that cause potentially fatal cardiac arrhythmias), where 90% of cases are related to mutations in the gene responsible for the sodium channel SCN5A (LQT3 locus) and the MTR gene. DNA methylation is an epigenetic modification that acts in the regulation of gene expression, and may be related to sudden cardiac death. DNA methylation occurs on the addition of a methyl group (CH3) carbon-5 of cytosine generally followed by guanine (CpG dinucleotide), enzyme catalyzed DNA methyltransferases (DNMTs). Methodologies allow relatively simple knowledge of the existence of DNA methylation. The treatment of genomic DNA with sodium bisulfite converts cytosine (C) at uracilas unmethylated (U), but does not affect cytosines (C) methylated by making Following amplification by methylation specific PCR and sequencing of the products selected from DNA treated with bisulfite. This study aimed to investigate differences in methylation patterns that could be associated with the development and / or recurrence of cardiovascular diseases. Therefore we assessed the pattern of methylation in the promoter region of genes... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Olga Maria Mascarenhas de Faria Oliveira / Coorientador: Kátia Maria da Silva Cerqueira Leite / Banca: Giuseppina Pace Pereira Lima / Banca: Glaucia Maria Pastore / Resumo: O maracujá amarelo azedo (Passiflora edulis f. flavicarpa Degener) pode ser consumido in natura ou industrializado. Sua importância é dada pelo valor medicinal, popularmente usado no tratamento da ansiedade, insônia e irritabilidade; alimentício, na forma de polpa congelada e suco, doces, geleia e sorvete; e nutracêutico ou alimento funcional, apresentando elevados teores de íons fosfato e potássio, vitamina A, B1 (tiamina), B2 (riboflavina) e C (ácido ascórbico). Algumas alterações podem ocorrer durante o processamento e armazenamento do suco interferindo na cor e sabor do produto final, o que pode implicar em não aceitação por parte dos consumidores. Isso pode ocorrer principalmente devido a reações bioquímicas de escurecimento e alterações bioquímicas moleculares que resultam em flavors indesejáveis e perda de nutrientes. Por esse motivo o controle desses efeitos indesejáveis durante o processamento de frutos é muito importante para a preservação da aparência natural dos mesmos. Deste modo as enzimas Pectinametilesterase (PME; EC: 3.1.1.11), Peroxidase (POD; EC: 1.11.1.7), Polifenoloxidase (PPO; EC: 1.10.3.1) e Ascorbato Oxidase (AO; EC: 1.10.3.3) podem ser responsáveis pelo escurecimento enzimático e outras reações que alteram o produto durante e ao final do processamento. Visto isso, com o objetivo de agregar valores nutricionais e mercadológicos ao maracujá vem sendo desenvolvida e usada a cultura híbrida, que, em síntese, significa o uso de sementes modificadas e com manejo adequado, com vistas à racionalização do uso de defensivos agrícolas e aumento de produtividade. O objetivo desse trabalho é estudar o comportamento cinético das enzimas já citadas e avaliar os teores de compostos bioativos como vitamina C, compostos fenólicos, flavonóides, e atividade antioxidante em cinco... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The yellow passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa Degener) can be eaten in natura or industrialized. Its importance is given by medicinal value, commonly used for treating anxiety, insomnia and irritability; food in the form of frozen pulp and juice, candy, jelly and ice cream, and nutraceutical or functional food, with high levels of potassium and phosphate ions, Vitamin A, B1 (thiamine), B2 (riboflavin) and C (ascorbic acid). Some changes may occur during processing and storage of the juice interfere the color and flavor of the final product, which can result in non-acceptance by the consumers. This can occur mainly due to biochemical browning and reactions molecular biochemical changes that result in undesirable flavors and nutrient loss. Therefore the control of these undesirable effects during processing of fruits is very important for preserving the natural appearance. Thus, enzymes pectinmethilesterase (PME, EC: 3.1.1.11), peroxidase (POD, EC: 1.11.1.7), Polyphenoloxidase (PPO, EC: 1.10.3.1) and ascorbate oxidase (AO, EC: 1.10.3.3) can be responsible for enzymatic browning and other reactions that alter the product during and after processing. Seen it, with the goal of adding nutritional value and market the passion fruit has been developed and used a hybrid culture, which, in summary, means the use of modified seeds and with appropriate management, with a view to rationalizing the use of pesticides and increase productivity. The aim of this work is to study the kinetic behavior of the enzymes already mentioned and evaluate the contents of bioactive compounds such as vitamin C, phenolic compounds, flavonoids and antioxidant activity of five hybrid the yellow passion fruit tart cultivar. The main results of this study was to visualize distinct kinetic behaviors of the same enzyme in hybrids studied and higher levels... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Regina Maria Barretto Cicarelli / Banca: Marcia Graminha / Banca: Alberto José Cavalheiro / Resumo: Trypanosoma brucei é o agente etiológico da tripanossomíase africana ou doença do sono, transmitida por dípteros do gênero Glossina, conhecidos como moscas tsé-tsé. O diagnóstico e tratamento da doença não são satisfatórios, uma vez que para o tratamento está disponível um número de drogas altamente tóxicas e com um efeito limitado, pois dependem da fase da doença, das condições fisiológicas do hospedeiro, da suscetibilidade e variabilidade genética da cepa. Além do alto custo, o tratamento é potencialmente perigoso e está limitado ao surgimento de resistência generalizada aos fármacos utilizados. O diagnóstico é limitado à associação dos sintomas com a doença, muitas vezes é confundido com outras doenças pelo que o paciente não recebe o tratamento adequado. Por isso, tem-se a necessidade de buscar novos fármacos com melhor atividade tripanocida. Neste trabalho, avaliou-se a atividade tripanocida de 38 compostos diferentes e inéditos, como N1,N2-dibenziletano-1,2-diamina (cloridratos de benzil diaminas), N1-benzil,N2-metilferroceniletano-1,2-diamina (cloridratos de diaminas de ferroceno), 2-metoxi/hidroxi-3-(1-alquenil)-1,4-naftoquinonas e seus derivados 2-amina-1,4-naftoquinonas contra as cepas 427 e 29-13 de T. brucei. A eficácia dos compostos foi avaliada pelo método colorimétrico do MTT [brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazoliom]. Os resultados encontrados foram similares aos das atividades metabólicas das células (parasitas e/ou células HepG2 - linhagem de células de hepatoma, usada como modelo para simular funções hepáticas humanas in vitro), sendo o IC50 (metade da concentração inibitória máxima) calculado por regressão linear para cada composto. Da série anterior, o composto cloridrato de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Trypanosoma brucei is the etiologic agent of sleeping sickness (Human African Trypanosomiasis [HAT]), transmitted by flies of Glossina genus, known as tsetse flies. The diagnostic and treatment of this disease are not satisfactory, since the treatment uses many toxicity drugs with limited effects, because depend on the stage of the disease, morphological diversity, heterogeneous biological behaviour, different clinical courses and the virulence appears to be an intrinsic property of each strain and high genetic variability. Besides the high cost, the treatment is potentially dangerous and limited the emergence of widespread drug resistance. The diagnosis is limited to the association of symptoms with the disease, is often confused with other diseases so the patient does not receive adequate treatment. Thus, the development of new research is necessary in order to generate new drugs with trypanocidal activity. In this work, we evaluated the trypanocidal activity of 38 inedited compounds of N1,N2-dibenzylethane-1,2-diamine hydrochlorides, N1-benzyl,N2-methyferrocenylethane-1,2-diamine hydrochlorides, 2-metoxy/hydroxy-3-(1-alquenyl)-1,4-naphtoquinones and amine derivatives of this compounds (2-amine-1,4-naphtoquinones) against 427 and 29-13 T. brucei parasite strains. The efficacy of these compounds was also measured using the reduction of MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]. The results were similar to the metabolic activity of cells (parasites and/or HepG2 - hepatoma cell line used as a model to simulate human hepatic functions in vitro), being the IC50 (half of the maximum inhibitory concentration) calculated by linear regression for each sample. The compounds N-(ferrocenylmetyl)-N'-(4-metoxybenzyl)ethane-1,2-diamine) hydrochlorides and 2-metoxy-3-(2-phenylethenyl)-1,4-naphtoquinone... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

As fosfodiesterases do tipo 2A (PDE2A) hidrolisam os nucleotídeos cíclicos cAMP e cGMP e por isso desempenham papel importante na sinalização intracelular. PDE2A é composta por uma região N-terminal, que ao contrário de outras famílias de PDEs, não possui função conhecida, dois domínios regulatórios, GAF A e GAF B, e um domínio catalítico localizado na porção C-terminal. Sabe-se que a hidrólise dos nucleotídeos cíclicos, pela PDE2A, é ativada pela ligação de cGMP ao domínio regulatório GAF B. Em uma triagem dois híbridos, identificamos XAP2 como a principal proteína interatora de PDE2A. XAP2 é um componente crucial do complexo multiprotéico do receptor Aril hidrocarboneto (Ahr), o principal fator de transcrição que controla a expressão de múltiplos genes envolvidos em detoxificação. Neste trabalho, foi determinado que XAP2 liga o domínio GAF B da enzima PDE2A. Ensaios de atividade fosfodiesterásica, utilizando proteínas purificadas, mostram que a ligação de XAP2 não interfere na atividade enzimática de PDE2A. Para analisar se PDE2A afeta a função de XAP2, foi investigado o deslocamento de Ahr para o núcleo. Sabe-se que a regulação da expressão dos genes alvos de Ah é iniciada pela ligação de tetraclorodibenzodioxina (TCDD) e por uma via, ainda pouco entendida, dependente de cAMP. Verificamos que a ligação de PDE2A à XAP2 inibe o deslocamento de Ahr para o núcleo, induzido por TCDD e por cAMP em células hepáticas Hepa1c1c7 em cultura. Em conclusão, mostramos neste trabalho que XAP2 recruta PDE2A para o complexo Ahr, causando a inibição da mobilidade de Ahr, possivelmente pela redução local da concentração de cAMP. Esses dados suportam o papel de cAMP no controle da função de Ahr. / Phosphodiesterase type 2A (PDE2A) hydrolyzes cyclic nucleotides cAMP and cGMP thus efficiently controlling cNMP-dependent signaling pathways. PDE2A is composed of an N-terminal region, two regulatory GAF domains and a catalytic domain. Cyclic nucleotide hydrolysis is known to be activated by cGMP binding to GAF-B, however, other mechanisms may operate to fine-tune local cyclic nucleotide levels. In a yeast-two-hybrid screening we identified XAP2, a crucial component of the aryl hydrocarbon receptor (AhR) complex, as a major PDE2A-interacting protein. We mapped the XAP2 binding site to the GAF-B domain of PDE2A. PDE assays with purified proteins showed that XAP2 binding does not change the enzymatic activity of PDE2A. To analyze if PDE2A could affect the function of XAP2 we studied nuclear translocation of AhR, i.e. the master transcription factor controlling the expression of multiple detoxification genes. Notably, regulation of AhR target gene expression is initiated by tetrachlorodibenzodioxin (TCDD) binding to AhR and by a poorly understood cAMP-dependent pathway, followed by the translocation of AhR from the cytosol into the nucleus. Binding of PDE2A to XAP2 inhibited TCDD- and cAMP-induced nuclear translocation of AhR in Hepa1c1c7 hepatocytes. We conclude that XAP2 targets PDE2A to the AhR complex thereby restricting AhR mobility, possibly by a local reduction of cAMP levels. Our results provide first insights into the elusive cAMP-dependent regulation of AhR.

Metarhizium anisopliae é um fungo filamentoso entomopatogênico muito versátil que infecta, aproximadamente, 300 espécies de artrópodes, e também é adaptado à vida na rizosfera de plantas, sendo de extrema importância para o controle biológico de pragas na agricultura e pecuária. De acordo com o comportamento promíscuo desse fungo, pesquisadores têm identificado um grande número de genes relacionados à interação com o hospedeiro, e que são regulados de acordo com a sua indução. Em sua maioria, são genes que codificam para enzimas hidrolíticas. O número e a diversidade desses genes podem ser a chave para a habilidade desse patógeno em infectar uma larga variedade de artrópodes, podendo expressar genes diferentemente para cada tipo de hospedeiro. M. anisopliae secreta, entre outros, complexos quitinolítico e proteolítico para a degradação da quitina e proteínas presentes na cutícula do hospedeiro.Desse modo, o estudo da regulação dessas enzimas é de fundamental importância para o entendimento do processo de infecção; sendo assim, através desse trabalho foi observada e analisada a especialização na expressão de proteínas, especialmente de quitinases e proteases, secretadas por uma linhagem selvagem de M. anisopliae, na presença de cutículas de diferentes artrópodes, particularmente, de Dysdercus peruvianus, Boophilus microplus, Anticarsia gemmatalis e de quitina cristalina, através de ensaios de detecção enzimática e eletroforese uni e bidimensional. Em todos os experimentos, variando-se as condições de fonte de carbono e tempo de cultivo, a secreção de proteínas se mostrou altamente diferenciada, demonstrando comportamento diferencial do fungo a vários hospedeiros, o que seria um sinal da versatilidade do entomopatógeno, aqui estudado, para a capacidade de infectar centenas de hospedeiros. / Metarhizium anisopliae is a very versatile entomopathogenic filamentous fungus that infects, approximately, 300 species of arthropods, and is also adapted to the life in the rhizosphere of plants, being of extreme importance for the biological control of pests in agriculture and pecuary. In accordance with this promiscuous behavior of this fungus, researchers have identified a great number of genes related to the interaction with the host, and that they are regulated in accordance with its induction. In their majority, these genes encode for hydrolytic enzymes. The diversity of these genes can be the key for the ability of this pathogen in infect a wide variety of arthropods, being able to differently express genes for each type of host. M. anisopliae secretes chitinolytic and proteolytic complexes for the degradation of the chitin and proteins present in the cuticle of the host. In this way, the study of the regulation of these enzymes is of up fundamental importance for the understanding of the infection process. Through this research, the specialization in the expression of proteins, especially chitinases and proteases, secreted by a wild strain of M. anisopliae, in the presence of cuticles of different arthropods, particularly, of Dysdercus peruvianus, Boophilus microplus, Anticarsia gemmatalis and crystalline chitin, was observed and analyzed through enzymatic assays and one- and two-dimensional electrophoresis. In all the experiments, the conditions of the carbon source and time of culture, the protein secretion showed highly differentiated, demonstrating distinguishing fungus behavior to various hosts, which would be a sign of the versatility of this entomopathogen for the capacity of infecting hundreds of hosts.

Orientador: Renato Wendhausen Júnior. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional de Blumenau, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Programa de Pós-Graduação em Química.

Orientador: Daiane Cristina Sass / Banca: Henrique Ferreira / Banca: Tânia Petta / Resumo: Ainda que consideráveis avanços tecnológicos no setor agrícola tenham proporcionado melhorias no bem-estar humano, milhares de pessoas ainda enfrentam miséria e fome ao redor do mundo. O progresso alcançado no último século, com a Revolução Verde, apesar de ter impulsionado a produção global de alimentos, também trouxe consequências catastróficas para o ambiente natural. Além disso, a população mundial continua a crescer exponencialmente, em especial em regiões emergentes como nos continentes africano e asiático. Todos esses fatores, somados aos inúmeros limitantes das produções agrícolas, representam uma grande ameaça à segurança alimentar do planeta, além de trazer prejuízos econômicos exorbitantes. Dentre os limitantes agrícolas, as fitopatologias causadas por bactérias do gênero Xanthomonas respondem por perdas de produção que podem chegar a 100%, quando em situação epidêmica. As produções de tomate, pimentão e mandioca podem ser reduzidas gravemente quando acometidas por Xanthomonas euvesicatoria, causadora da mancha bacteriana em pimentão e tomateiros, e Xanthomonas axonopodis pv. manihotis, causadora da bacteriose da mandioca. O combate atual para estas doenças baseia-se no uso de compostos cúpricos, notadamente danosos à saúde humana e ambiental, mas há casos, como o da bacteriose da mandioca, em que não há controle químico eficaz, sendo medidas de controle e manejo a única possibilidade de amenizar o problema. Como alternativa, estudos vem apontado a possibilidade de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Yet considerable technological advances in the agricultural sector have provided improvements in human well-being, thousands of people still face misery and hunger around the world. The progress achieved in the last century within the Green Revolution, despite having boosted global food production, has also brought catastrophic consequences to the natural environment. In addition, the world population continues to grow exponentially, especially in emerging regions such as the African and Asian continents. All these factors, coupled with the numerous constraints of agricultural production, pose a great threat to the planet's food security, as well as exorbitant economic losses. Among the agricultural limitations, phytopathologies caused by bacteria of the genus Xanthomonas respond by losses of production that can reach 100%, when in an epidemic situation. The tomato, pepper and cassava productions can be severely reduced when affected by Xanthomonas euvesicatoria, which causes bacterial spot in pepper and tomatoes, and Xanthomonas axonopodis pv. manihotis, which causes cassava bacterial blight. The current fight for these diseases is based on the use of copper compounds, notably harmful to human and environmental health, but there are cases, such as cassava bacterial blight, in which there is no effective chemical control, and management measures are the only possibility of mitigating the problem. As an alternative, studies have indicated the possibility of using secondary met... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Suely Regina Mogami Bomfim / Resumo: Uma das biotecnologias com propósito relevante à saúde humana é o plasma rico em plaquetas (PRP) o qual, não há registro protocolar padronizado para Rattus novergicus (Wistar). De fato, a falta de padronização do método leva pesquisadores à dúvida sob qual protocolo seguir para os melhores resultados referente as concentrações e mudanças morfológicas plaquetárias. Tal indeterminação promove morosidade nas pesquisas científicas. Frente a conjectura, usou-se o mínimo de animais possíveis em experimentação duplo-cego, retirando-se 3,2 mL de sangue de cada animal por pulsão cardíaca o qual posteriormente, foi testado em três protocolos distintos. Cada protocolo foi designado como P1; P2; P3 e o grupo controle designado PSP. Desta forma, i. P1 foi submetido a uma única centrifugação de 160G por 6min resultando em 100 μL de PRP; ii. P2 foi resignado a dupla centrifugação sendo a primeira etapa 160G por 20min e a segunda etapa 400G por 15 min, resultando em 100 μL de PRP e iii. P3 destinado a dupla centrifugação sendo a primeira etapa 300G por 10 min e a segunda etapa 640G por 10 min, resultando em 100 μL de PRP. Obtivemos maiores concentrações plaquetárias dos protocolos P2 e P3 com concentrações superiores a 519%. Quanto a visualização morfológica plaquetária por esfregaço, os três protocolos apresentaram boa visualização, no entanto P3 sobressaiu-se aos demais quanto ao tempo global de preparo e menor inclusão eritrocitária. Assim, padronizamos um modelo animal in vivo para futur... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: One of the biotechnologies with a relevant human health purpose is platelet rich plasma (PRP), which has no standardized protocol record for Rattus novergicus (Wistar). In fact, the lack of standardization of the method leads researchers to doubt which protocol to follow for the best results regarding platelet concentrations and morphological changes. Such indeterminacy promotes slowness in scientific research. In view of the conjecture, how few animals were used in a double-blind experiment and 3.2 mL of blood was drawn from each animal by heartbeat and subsequently tested in three separate protocols. Each protocol was designated as P1; P2; P3 is the control group designated PSP. i. P1 was subjected to a single 160G centrifugation for 6min resulting in 100 μL of PRP, ii. P2 was resigned to double centrifugation with the first stage 160G for 20min and the second stage for 400G for 15 min, resulting in 100 μL of PRP and iii. P3 intended for double centrifugation with the first stage of 300G for 10 min and the second stage of 640G for 10 min, resulting in 100 μL of PRP. We obtained higher platelet concentrations of protocols P2 and P3 with concentrations higher than 519%. Regarding the morphological visualization of platelet smears, the three protocols presented good visualization, but P3 stood out for the others in terms of total preparation time and less erythrocyte invasion. Thus, we standardized an in vivo animal model for future scientific investigations interested in the ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Guilherme Duarte Rossi / Resumo: A possibilidade da evolução da resistência dos insetos à maioria dos inseticidas disponíveis e a necessidade por moléculas específicas para o manejo de organismos alvos e não tóxicas ao meio ambiente guiam a contínua busca por novos compostos com atividade inseticida. No presente trabalho, investigamos o potencial da actinobactéria Streptomyces sp. ENT-21 como fonte de moléculas inseticidas sobre lagartas de Diatraea saccharalis (Fabricius) (Lepidoptera: Crambidae), uma importante praga da cana-de-açúcar. Um extrato quitinolítico foi produzido a partir do cultivo de Streptomyces sp. ENT-21 em meio contendo quitina. Este extrato foi fracionado por filtração molecular (Sephadex G25) e separado em amostras proteicas e não proteicas. Os efeitos do extrato quitinolítico bruto e fracionado sobre a taxa de mortalidade e peso das lagartas de D. saccharalis foram avaliados. A adição do extrato quitinolítico bruto de Streptomyces sp. ENT-21 à dieta artificial resultou em 100% de mortalidade das lagartas de D. saccharalis. Após fracionamento a amostra não proteica resultou em maior mortalidade e redução do peso das lagartas em relação à fração proteica. Esses dados sugerem que a atividade quitinolítica não seja o principal modo de ação responsável pela atividade inseticida do extrato quitinolítico. Os dados também sugerem um possível efeito sinérgico entre os composto proteicos e não proteicos presentes no extrato bruto de Streptomyces sp. ENT-21. / Abstract: Insect resistance to most of the available insecticides and the requirement for specific molecules for pest management and safe to the environment guide a continuous search of new insecticidal compounds. In this work, we investigated the potential of the actinobacterium Streptomyces sp. ENT-21 as a source of insecticidal molecules against larval Diatraea saccharalis (Fabricius) (Lepidoptera: Crambidae), an important sugarcane pest. The chitinolytic extract was prepared by cultivating Streptomyces sp. ENT-21 in a chitin containing medium. This extract was fractionated using molecular filtration (Sephadex G25) forming protein and non-protein fractions. The effects of the crude chitinolytic extract as well of the fractions were evaluated over the development of D. saccharalis larvae in bioassays conducted using artificial diet. The addition of the crude chitinolytic extract to the artificial diet used for rearing larval D. saccharalis resulted in 100% of larval mortality. A non-protein fraction resulted in a higher mortality rate and weight reduction over surviving larvae than the protein fraction, suggesting that the chitinolytic activity present in the protein fraction is not the main mode of action involved in the insecticidal activity of the chitinolytic produced extract. Results also suggest a possible synergic effect among protein and non protein compounds in the crude chitinolytic extract from Streptomyces sp. ENT-21. / Mestre