A infestação por carrapatos é uma das principais parasitoses que afetam a bovinocultura prejudicando a saúde do animal por meio de hábito hematófago, além de gerar perdas econômicas para o seu controle, sendo o uso de carrapaticidas o principal método utilizado. O uso negligenciado destes produtos induz a geração de resistência tornando necessário o desenvolvimento de métodos alternativos, como a imunização por vacinas e o uso de probióticos. Probióticos são alimentos funcionais, compostos de micro-organismos vivos, que quando ingeridos em doses adequadas e com frequência, conferem diversos efeitos benéficos à saúde do hospedeiro por meio de diferentes mecanismos de ação. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito imunomodulador e carrapaticida de micro-organismos probióticos em bovinos da raça Girolando. Para tanto, durante 154 dias, foram estudados 30 animais distribuídos em 06 grupos e submetidos a diferentes tratamentos, a saber: Grupo A (controle) os animais não receberam tratamento específico; Grupo B (efeito vacina) nos dias inicial, 14 e 28 os animais foram imunizados com a proteína rGST-Hl; Grupo C (efeito probiótico EEL) os animais receberam, durante 70 dias, uma dose diária de 10 mL, da preparação probiótica EEL; Grupo D (efeito vacina + probiótico EEL) nos dias inicial, 14 e 28 os animais foram vacinados e receberam durante 70 dias, 10 mL da preparação probiótica EEL; Grupo E (efeito probiótico PT) os animais receberam, durante 70 dias, uma dose de 10 mL da preparação probiótica ProbioTick e Grupo F (efeito vacina + probiótico PT) nos dias inicial, 14 e 28 os animais foram vacinados e receberam diariamente, durante 70 dias, 10 mL da preparação probiótica ProbioTick. A cada 14 dias foram realizadas coletas de sangue para avaliação da hemostasia, do estado de anemia e o desenvolvimento da resposta imune humoral. Os resultados demonstraram que os tratamentos não afetaram significativamente a hemostasia, bem como os parâmetros eritrocíticos dos animais. No tocante ao sistema imunológico, verificou-se que os animais tratados com as preparações probióticas apresentaram maior número de linfócitos quando comparado ao grupo controle diferindo estatisticamente no 70º dia, sendo que os percentuais encontrados para os grupos C, D, E e F foram respectivamente de 55,8%; 63,5%; 60,8% e 59,4%. Os animais que foram vacinados (grupo B) e tratados com as preparações probióticas (Grupos D e F), apresentaram níveis superiores de anticorpos totais IgG (72,769; 93,735 e 98,825 mg/dL) e quanto aos anticorpos IgG anti rGST-Hl, os animais dos Grupos D e F tiveram seus valores aumentados quando comparados aos do Grupo B por um período mais prolongado, onde no 98º dia, as densidades ópticas medidas foram de 0,868 e 0,915. Desta forma, conclui-se que as preparações probióticas foram capazes de modular a resposta imunológica dos animais. / Tick infestation is the main parasitic diseases that affect the cattle farming. In addition to impairing the health of the animal by means of a hematophagous habit, it also generates economic losses regarding its control, being the use of acaricides the main method used. Its neglected use has led to cases of resistance, which turn necessary the development of alternative methods such as the immunization with vaccines and the use of probiotics. Probiotics are functional food that contains live microorganisms that when ingested in appropriate amount bring benefits to the hosts through different mode of action. Thus, the present work aimed to evaluate the immunomodulatory and acaricide effect of probiotic microorganisms in Girolando cattle. Therefore, during 154 days, 30 animals were distributed in 6 groups, and submitted to different treatments: Group A (control), the animals did not received any treatment. Group B (vaccine effect), on the initial, 14 and 28 days, the animals were immunized with rGST-H1. Group C (probiotic effect EEL, the animals received, for 70 days, a daily dose of 10 mL of the probiotic EEL preparation. Group D (vaccine + probiotic EEL effect), on the initial, 14 and 28 days, the animals were vaccinated and received for 70 days, 10 mL probiotic preparation EEL. Group E (probiotic effect PT), the animals received, for 70 days, a dose of 10 mL of probiotic preparation ProbioTick and Group F (vaccine + PT probiotic effect), on the initial, 14 and 28 days, the animals were vaccinated and received daily for 70 days, 10 mL ProbioTick. In each 14 days blood samples were collected and exams were performed to evaluate hemostasis, anemia status and development of the immune response. The results showed that the different treatments did not affect hemostasis and the erythrocytic parameters of the animals. Regarding the immune system, the results showed that the animals treated with probiotic preparations presented a higher number of lymphocytes when compared to the control group, differing statistically on the 70th day, being that the percentages found for groups C, D, E and F were respectively 55.8%; 63.5%; 60.8% and 59.4%. In addition, animals treated with the probiotic (Groups D and F) and vaccinated (B) showed higher levels of total IgG antibodies (72.769, 93.735 and 98.825 mg/dL) and as for the IgG anti rGST-H1 antibodies, only the animals in Groups D and F had their values increased for a longer period, where on the 98th day, The optical densities measured were 0.868 and 0.915. Therefore, the probiotic preparations evaluated were able to modulate the imune response of animals.

O estabelecimento de isolados de Rhipicephalus (B.) microplus resistentes a drogas é um passo fundamental para pesquisas sobre mecanismos de ação das drogas e desenvolvimento de novos acaricidas. Diferentes tratamentos de pressão de seleção foram efetuados sobre uma população de campo com fator de resistência (FR) à ivermectina (IVM) 1,37 visando obter experimentalmente uma cepa resistente. O tratamento das larvas com IVM não resultou em infestações de bezerros. O tratamento das adultas, por duas gerações consecutivas não alterou o valor do FR da população. A este último procedimento foi associado o tratamento do hospedeiro com IVM, resultando em aumento significativo do FR. Infestações utilizando larvas provenientes de posturas de alta eclodibilidade parece ter contribuído ainda mais para o aumento do FR observado na última geração. Em resumo, foi possível estabelecer pela primeira vez, em laboratório, uma cepa resistente à IVM que apresentou um aumento estatisticamente significante do valor do FR da última geração analisada (F10) em relação à inicial (F1). / The establishment of drug resistant Rhipicephalus (B.) microplus isolates is a fundamental step on researches about drugs mechanisms of action and on the development of new acaricides. Different selection treatments were effectuated upon a field population with an ivermectin (IVM) resistant ratio (RR) 1,37 aiming to obtain experimentally a resistant strain. The larval treatments with IVM do not reach calf infestations. The adult treatments, in two consecutive generations do not changed the population RR. To this last protocol was added the IVM host treatment, increasing significantly the RR. Infestations using larvae obtained from the high-eclodibility oviposition seemed to have contributed much more to the RR increase observed on the last generation. Finally, it was possible to establish for the first time, on laboratory, an IVM resistant strain that showed a significantly higher RR value from the last generation (F10) in relation to the first one analyzed (F1).

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:15:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007-Marcos Pinheiro Franque.pdf: 2601170 bytes, checksum: cef61cb976b6652b0e5f4fe212f81de9 (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / This work aimed the evaluation of biological parameters of parasitic and non-parasitic phases of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (= Boophilus microplus) in equine. Four equines were individually infested with approximately 40,000 larvae obteined of R. (B.) microplus females engorged in bovines, being in two of them established three infestations. In the place of larvae fixation, it was noticed development of an intense itchy reaction and the larvae involved in a serum exudates. A larval mortality of approximately 90% was observed, with a small number of larvae changing to nymph stage. The mortality of nymphs was around 60%, with reduction of the itchy reaction, and in the adult stage was observed approximately 30% of mortality. As for the susceptibility, it was observed that two equine were resistant, one moderately resistant and one sensitive to the establishment of infestation by R. (B.) microplus. In the equine considered sensitive, were made observations of parasitic and non-parasitic phase of this ixodid. According to the parameters of the parasitic phase of R. (B.) microplus, of the three experimental infestations, the day at the beginning of detachment of females occurred among infestations were 28 and 31 days, during 12 days at first infestation and 20 days at second and thirst infestation, presentin modal day at 32?; 36? and 37? day, respectively. Were recovered 179 females of R. (B.) microlus at first infestation, 187 and 358 at the second and thirst infestation, corresponding to a mean recovery rate between 0.90 and 1.79%. The means periods of parasitic phase increase among infestations, during between 33. 27 and 38.51 days, being obteined females with mean weight of 90.0mg at the first infestation, 81.5 mg at second and 109.4mg at thirst infestation, considering all females recovered. For the estudy of the non-parasitic phase were selected form each infestation 20, 49, 71 females, presenting means weights of 151.8; 121.1 and 147.8 mg, respectively. The means periods of pre-posture were between 2.8 and 3.5 days. The means periods of posture were of 13.6; 11.7 and 13.4 days, respectively, with pick of posture occurring at the 3rd day after the beginning at three infestations. The means weights of posture were verified between 57.3 and 80.6mg corresponding to 1,146.9 and 1,611.4 eggs produced. The means periods of incubation of eggs produced by R. (B.) microplus studied females occurred between 23.7 and 29 days, presenting hatch means rates decreasing of 67% in the first infestation to 54.7% at the thirst infestation. The means of reprodutive efficiency index also decreased among infestations of 35.5% to 26.9% at the last infestation. It was verified that the means periods between the infestation date and the beginning of the larval appearance were between 60.0 and 64.9 days. These results demonstrate that, starting from experimental infestation in equine, R. (B.) microplus is able to complete the biological cycle for at least one generation, resulting in a number of larvae enough to infest pastures. / Este trabalho teve como objetivo avaliar par?metros biol?gicos de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (= Boophilus microplus) mediante infesta??es expermentais em eq?inos. Foram utilizados quatro eq?inos infestados individualmente com aproximadamente 40.000 larvas, obtidas de f?meas de R. (B.) microplus alimentadas em bovino, sendo realizadas tr?s infesta??es em dois destes equinos. No local de fixa??o das larvas notou-se desenvolvimento de uma intensa rea??o pruriginosa e as larvas envolvidas em um exsudato seroso. Foi observada uma mortalidade larval de aproximadamente 90%, com um pequeno n?mero larvas mudando para o est?gio de ninfa. A mortalidade de ninfas ocorreu em torno de 60%, com redu??o da rea??o pruriginosa, e no est?gio adulto notou-se mortalidade de aproximadamente 30%. Quanto ? susceptibilidade, observou-se que dois eq?inos foram resistentes, um moderadamente resistente e um sens?vel ao estabelecimento da infesta??o por R. (B.) microplus. No eq?ino considerado sens?vel, foram realizadas as observa??es de fase parasit?ria e n?o parasit?ria deste ixod?deo. Em rela??o aos par?metros da fase parasit?ria de R. (B.) microplus, nas tr?s infeta??es, o dia de in?cio do desprendimento das f?mas ocorreu entre 28 e 31 dias, durando 12 dias na primeira infesta??o e 20 dias na segunda e terceira infesta??es, apresentando dia modal no 32?, 36? e 37? dia respectivamente, ap?s as infesta??es com as larvas. Foram recuperadas 179 f?meas de R. (B.) microplus na primeira infesta??o, 187 na segunda e 358 na terceira infesta??o, correspondendo a uma taxa de recupera??o entre 0,90 e 1,79%. O per?odo m?dio da fase parasit?ria aumentou entre a primeira e terceira infesta??es, ocorrendo entre 33,27 e 38,51 dias, verificando-se f?meas com peso m?dio de 90,0mg na primeira infesta??o, 81,5mg na segunda e 109,4mg na terceira infesta??o, considerando-se todas as f?meas recuperadas. Para o estudo da fase n?o parasit?ria foram selecionadas respectivamente 20, 49 e 71 f?meas de cada infesta??o que apresentaram peso m?dio, respectivamente, de 151,8mg; 121,1 mg e 147,8mg. Observou-se um per?odo m?dio de pr?-postura entre 2,8 e 3,5 dias. O per?odo m?dio de postura foi de 13,6; 11,7 e 13,4 dias, respectivamente, entre as infesta??es, com pico de postura ocorrendo no 3? dia ap?s seu in?cio. Verificou-se um peso m?dio de postura entre 57,3 a 80,6mg, nas infesta??es, o que corresponde ? produ??o m?dia de ovos entre 1.146,9 e 1.611,0. O per?odo m?dio de incuba??o dos ovos das f?meas estudadas de R. (B.) microplus, durou entre 23,7 e 29 dias, apresentando uma taxa de eclos?o m?dia decrescendo de 67% na primeira infesta??o, para 54,7% na terceira infesta??o. O ?ndice m?dio de efici?ncia reprodutiva tamb?m decresceu ente as infesta??es de 35,5%, para 26,9% na ?ltima infesta??o. Verificou-se que o per?odo m?dio entre a data de infesta??o e o in?cio da eclos?o larval ocorreu entre 60 e 64,9 dias. Estes resultados demonstram que, a partir de infesta??es experimentais em eq?inos, R. (B.) microplus ? capaz de completar seu ciclo biol?gico por pelo menos uma gera??o, resultando em um n?mero de larvas suficiente para infestar parstagens.

Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2016-09-09T11:45:13Z No. of bitstreams: 1 2011 - Vanessa de Almeida Raia.pdf: 1415435 bytes, checksum: 6553cdee2bd5a5f2a363cb3cd11f812d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-09T11:45:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011 - Vanessa de Almeida Raia.pdf: 1415435 bytes, checksum: 6553cdee2bd5a5f2a363cb3cd11f812d (MD5) Previous issue date: 2011-01-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / To fill some gaps about the intrinsic mechanisms of the biology of oviposition of R. (B.) microplus, we evaluated the concentration of lipids and carbohydrates, as well as the variability of lipid in eggs per day of posture. For this, engorged females weighing between 151 and 360 mg were placed in controlled environment (27 ? 1 ? C, 80 ? 5% RH, darkness), and after beginning of laying, three samples of the eggs pool were daily collected, packed and preserved at -20 ? C. Samples 1 and 2, weighing 50 mg each, were used to quantitate lipids and glucose, and to evaluate the lipid profile, respectively; and the third sample, containing 1 g of eggs, was used to quantitate glycogen. The determination of total lipids was performed using phospho-vanillin reagent, while the concentrations of cholesterol, triglycerides and glucose were obtained by colorimetric determination using endpoint enzymatic kit. The level of glycogen was performed using the acid 3,5 dinitrosalicylic reactive . The results were analyzed by nonparametric Kruskal-Wallis and the relationship between the concentrations of substrates and the days of laying was assessed by polynomial regression. There was no significant difference in the concentrations of these substrates in eggs from different days of oviposition, as there was no relationship of these concentrations with the days of laying. After lipid extraction, the samples were performed in thin layer chromatography, high-performance (HPTLC) for neutral lipids and phospholipids. Then, densitometry was performed using the Image Master Total Lab and the daily percentage of each lipid in the samples was calculated. Among the neutral lipids were identified the hydrocarbons, esterified cholesterol, triglycerides, fatty acids, free cholesterol and diacylglycerol. Of these, the cholesterol ester showed the highest variation, it was not detected in eggs at the fifth day of oviposition. Among the phospholipids were detected the phosphatidic acid, phosphatidylethanolamine, phosphatidylcholine and sphingomyelin fosfatidilinusitol. This latter was absent in eggs of the seventh day onwards. Thus, the different rates of hatchability of eggs from different laying days cannot be attributed to the concentrations of total lipids, although some specific lipids such as cholesterol ester and sphingomyelin might influence the difference in larval hatchability, more researches are needed for clarify the role of these substrates in embryogenesis / Objetivando preencher algumas lacunas sobre os mecanismos intr?nsecos da biologia da oviposi??o de R. (B.) microplus, foram avaliadas as concentra??es de lip?dios e carboidratos, assim como a variabilidade lip?dica dos ovos postos em diferentes dias de postura. Para isso, f?meas ingurgitadas pesando entre 151 e 360 mg foram colocadas em estufa biol?gica sob condi??es controladas (27 ? 1oC, 80 ? 5% UR, escotofase), e ap?s in?cio da postura, tr?s amostras di?rias do ?pool? de ovos foram coletadas, acondicionadas e preservadas a ?20?C. As amostras 1 e 2, pesando 50 mg cada, foram utilizadas para dosar lip?dios e glicose, e avaliar o perfil de lip?dios, respectivamente; a amostra 3, contendo 1 g de ovos foi utilizada para dosar glicog?nio. A dosagem de lip?dios totais foi realizada atrav?s do reagente de fosfo-vanilina, enquanto as concentra??es de colesterol, triglicer?dios e glicose foram obtidas atrav?s de determina??o colorim?trica com a utiliza??o de kit enzim?tico de ponto final. A dosagem de glicog?nio foi realizada atrav?s do reativo ?cido 3,5 dinitrosalic?lico. Os resultados das dosagens foram analisados pelo teste n?o param?trico de Kruskal-Wallis e a rela??o entre as concentra??es dos substratos e os dias de postura foi avaliada atrav?s de Regress?o polinomial. N?o foram constatadas diferen?as significativas entre as concentra??es destes substratos nos ovos de diferentes dias de oviposi??o, assim como n?o houve rela??o dessas concentra??es com os dias de postura. Ap?s extra??o dos lip?dios das amostras, foram realizadas cromatografias em camada delgada de alto desempenho (HPTLC) para lip?dios neutros e fosfolip?dios. Em seguida, a densitometria foi realizada atrav?s do programa Image Master Total Lab e o percentual di?rio de cada lip?dio nas amostras foi calculado. Dentre os lip?dios neutros foram identificados hidrocarbonetos, colesterol esterificado, triglicer?dios, ?cidos graxos, colesterol livre e diacilglicerol. Destes, o colesterol esterificado foi o que apresentou maior varia??o, n?o sendo detectado nos ovos do quinto dia de oviposi??o. Dentre os fosfolip?dios foram detectados o ?cido fosfat?dico, fosfatidiletanolamina, fosfatidilcolina, fosfatidilinusitol e esfingomielina. Sendo este ?ltimo ausente nos ovos do s?timo dia de postura em diante. Assim, as diferentes taxas de eclodibilidade por dia de postura n?o podem ser atribu?das ?s concentra??es de lip?dios totais, embora alguns lip?dios espec?ficos como o colesterol esterificado e a esfingomielina possam ter influ?ncia na diferen?a de eclodibilidade larval, sendo necess?rios mais estudos para eclarecer o papel desses substratos na embriog?nese

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 504442 bytes, checksum: 85bbb3436f0253ff5e83a42cae5a4a22 (MD5) Previous issue date: 2008-02-22 / To evaluate the immune response of BALB/c mice immunized with the synthetic peptide anti-tick R. (B.) microplus SBm7462 by oral and nasal routes and to study the induction of AICD in memory T cells were used 80 BALB/c mice, divided in four experimental groups with 20 animals each (group I: oral immunization; group II: nasal immunization; group III: animals not immunized; and a group with animals givers of peritoneal macrophages. Two immunizations had been made with an interval of 21 days. At nine and 15 days after the first and the second immunization the collects were realized, separately for each group, and the T cells isolated had been cultivated with 5% CO2 at 37ºC, per 10 days in the presence of 1μg of SBm7462 and APCs. Later, the different agents, inductive (mithramycin and cycloheximide) or inhibiting (benzamide riboside and cyclosporin A) of apoptosis had been added, subdivided in distinct treatments. After the specific incubation period for each one of the treatments, it had been determined the percentage of cellular viability by the exclusion for Tripan Blue and the percentage of apoptotic cells with the dye Acridine Orange and by TUNEL technique. The specific nature of the T cells was confirmed by the increase in the number of cells after re-stimulation in vitro with SBm7462, which had held as memory T cells. The induction of AICD occurred by the inhibition of the expression of c-myc and by the increase of the expression of Fas and the induced AICD for the synthetic peptide SBm7462 was mediated by an independent way of the calcineurina and the kinetic of regulation of FasL. The mucosa routes, oral and nasal, can be considered alternative ways for the immunization with the synthetic peptide SBm7462 however they require a bigger number of doses to induce a response with high levels of immunoglobulins. / Com o objetivo avaliar a resposta imune de camundongos BALB/c imunizados por via oral e nasal com o peptídeo sintético anti-carrapato R. (B.) microplus SBm7462 e estudar a indução da AICD dos linfócitos T de memória dos animais imunizados, utilizou-se 80 camundongos BALB/c, divididos em quatro grupos experimentais com 20 animais cada (grupo I: imunização por via oral; grupo II: imunização por via nasal; grupo III: animais não imunizados; e um grupo de animais doadores de macrófagos peritoneais). Foram feitas duas imunizações, com intervalo de 21 dias. Aos nove e 15 dias após a primeira e segunda imunização realizou-se as coletas, separadamente para cada grupo, e os linfócitos T isolados foram cultivados em estufa, 5% de CO2 a 37ºC, por 10 dias na presença de 1μg de SBm7462 e APCs. Posteriormente, adicionou-se os diferentes agentes indutores (mitramicina e CHX) ou inibidores (DBR e CsA) de apoptose, subdivididos em tratamentos distintos. Após o período de incubação específico para cada um dos tratamentos, determinou-se a porcentagem de viabilidade celular pela exclusão pelo Azul de Tripan e a porcentagem de células apoptóticas pela coloração com Laranja de Acridina e pela técnica de TUNEL. A natureza específica dos linfócitos T foi confirmada pelo aumento no número de células após re-estimulação in vitro com SBm7462, os quais se comportaram como linfócitos T de memória. Ocorreu indução da AICD por inibição da expressão do c-myc e por aumento da expressão de Fas e a AICD induzida pelo peptídeo sintético SBm7462 foi mediada por uma via independente da calcineurina e da cinética de regulação do FasL. As vias de mucosa, oral e nasal, podem ser consideradas vias alternativas para a imunização com o peptídeo sintético SBm7462, porém requerem um maior número de doses para induzir uma resposta com altos níveis de imunoglobulinas.

A infestação por carrapatos é uma das principais parasitoses que afetam a bovinocultura prejudicando a saúde do animal por meio de hábito hematófago, além de gerar perdas econômicas para o seu controle, sendo o uso de carrapaticidas o principal método utilizado. O uso negligenciado destes produtos induz a geração de resistência tornando necessário o desenvolvimento de métodos alternativos, como a imunização por vacinas e o uso de probióticos. Probióticos são alimentos funcionais, compostos de micro-organismos vivos, que quando ingeridos em doses adequadas e com frequência, conferem diversos efeitos benéficos à saúde do hospedeiro por meio de diferentes mecanismos de ação. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito imunomodulador e carrapaticida de micro-organismos probióticos em bovinos da raça Girolando. Para tanto, durante 154 dias, foram estudados 30 animais distribuídos em 06 grupos e submetidos a diferentes tratamentos, a saber: Grupo A (controle) os animais não receberam tratamento específico; Grupo B (efeito vacina) nos dias inicial, 14 e 28 os animais foram imunizados com a proteína rGST-Hl; Grupo C (efeito probiótico EEL) os animais receberam, durante 70 dias, uma dose diária de 10 mL, da preparação probiótica EEL; Grupo D (efeito vacina + probiótico EEL) nos dias inicial, 14 e 28 os animais foram vacinados e receberam durante 70 dias, 10 mL da preparação probiótica EEL; Grupo E (efeito probiótico PT) os animais receberam, durante 70 dias, uma dose de 10 mL da preparação probiótica ProbioTick e Grupo F (efeito vacina + probiótico PT) nos dias inicial, 14 e 28 os animais foram vacinados e receberam diariamente, durante 70 dias, 10 mL da preparação probiótica ProbioTick. A cada 14 dias foram realizadas coletas de sangue para avaliação da hemostasia, do estado de anemia e o desenvolvimento da resposta imune humoral. Os resultados demonstraram que os tratamentos não afetaram significativamente a hemostasia, bem como os parâmetros eritrocíticos dos animais. No tocante ao sistema imunológico, verificou-se que os animais tratados com as preparações probióticas apresentaram maior número de linfócitos quando comparado ao grupo controle diferindo estatisticamente no 70º dia, sendo que os percentuais encontrados para os grupos C, D, E e F foram respectivamente de 55,8%; 63,5%; 60,8% e 59,4%. Os animais que foram vacinados (grupo B) e tratados com as preparações probióticas (Grupos D e F), apresentaram níveis superiores de anticorpos totais IgG (72,769; 93,735 e 98,825 mg/dL) e quanto aos anticorpos IgG anti rGST-Hl, os animais dos Grupos D e F tiveram seus valores aumentados quando comparados aos do Grupo B por um período mais prolongado, onde no 98º dia, as densidades ópticas medidas foram de 0,868 e 0,915. Desta forma, conclui-se que as preparações probióticas foram capazes de modular a resposta imunológica dos animais. / Tick infestation is the main parasitic diseases that affect the cattle farming. In addition to impairing the health of the animal by means of a hematophagous habit, it also generates economic losses regarding its control, being the use of acaricides the main method used. Its neglected use has led to cases of resistance, which turn necessary the development of alternative methods such as the immunization with vaccines and the use of probiotics. Probiotics are functional food that contains live microorganisms that when ingested in appropriate amount bring benefits to the hosts through different mode of action. Thus, the present work aimed to evaluate the immunomodulatory and acaricide effect of probiotic microorganisms in Girolando cattle. Therefore, during 154 days, 30 animals were distributed in 6 groups, and submitted to different treatments: Group A (control), the animals did not received any treatment. Group B (vaccine effect), on the initial, 14 and 28 days, the animals were immunized with rGST-H1. Group C (probiotic effect EEL, the animals received, for 70 days, a daily dose of 10 mL of the probiotic EEL preparation. Group D (vaccine + probiotic EEL effect), on the initial, 14 and 28 days, the animals were vaccinated and received for 70 days, 10 mL probiotic preparation EEL. Group E (probiotic effect PT), the animals received, for 70 days, a dose of 10 mL of probiotic preparation ProbioTick and Group F (vaccine + PT probiotic effect), on the initial, 14 and 28 days, the animals were vaccinated and received daily for 70 days, 10 mL ProbioTick. In each 14 days blood samples were collected and exams were performed to evaluate hemostasis, anemia status and development of the immune response. The results showed that the different treatments did not affect hemostasis and the erythrocytic parameters of the animals. Regarding the immune system, the results showed that the animals treated with probiotic preparations presented a higher number of lymphocytes when compared to the control group, differing statistically on the 70th day, being that the percentages found for groups C, D, E and F were respectively 55.8%; 63.5%; 60.8% and 59.4%. In addition, animals treated with the probiotic (Groups D and F) and vaccinated (B) showed higher levels of total IgG antibodies (72.769, 93.735 and 98.825 mg/dL) and as for the IgG anti rGST-H1 antibodies, only the animals in Groups D and F had their values increased for a longer period, where on the 98th day, The optical densities measured were 0.868 and 0.915. Therefore, the probiotic preparations evaluated were able to modulate the imune response of animals.

O estabelecimento de isolados de Rhipicephalus (B.) microplus resistentes a drogas é um passo fundamental para pesquisas sobre mecanismos de ação das drogas e desenvolvimento de novos acaricidas. Diferentes tratamentos de pressão de seleção foram efetuados sobre uma população de campo com fator de resistência (FR) à ivermectina (IVM) 1,37 visando obter experimentalmente uma cepa resistente. O tratamento das larvas com IVM não resultou em infestações de bezerros. O tratamento das adultas, por duas gerações consecutivas não alterou o valor do FR da população. A este último procedimento foi associado o tratamento do hospedeiro com IVM, resultando em aumento significativo do FR. Infestações utilizando larvas provenientes de posturas de alta eclodibilidade parece ter contribuído ainda mais para o aumento do FR observado na última geração. Em resumo, foi possível estabelecer pela primeira vez, em laboratório, uma cepa resistente à IVM que apresentou um aumento estatisticamente significante do valor do FR da última geração analisada (F10) em relação à inicial (F1). / The establishment of drug resistant Rhipicephalus (B.) microplus isolates is a fundamental step on researches about drugs mechanisms of action and on the development of new acaricides. Different selection treatments were effectuated upon a field population with an ivermectin (IVM) resistant ratio (RR) 1,37 aiming to obtain experimentally a resistant strain. The larval treatments with IVM do not reach calf infestations. The adult treatments, in two consecutive generations do not changed the population RR. To this last protocol was added the IVM host treatment, increasing significantly the RR. Infestations using larvae obtained from the high-eclodibility oviposition seemed to have contributed much more to the RR increase observed on the last generation. Finally, it was possible to establish for the first time, on laboratory, an IVM resistant strain that showed a significantly higher RR value from the last generation (F10) in relation to the first one analyzed (F1).

Introdução: Rhipicephalus microplus é um parasito importante na bovinocultura. Novas estratégias de controle dependem de um maior entendimento da sua fisiologia e da relação parasito-hospedeiro, e moléculas envolvidas na aquisição e digestão de sangue são alvos interessantes. Objetivo: determinar o mecanismo de ação do inibidor de coagulação BmGTI (Boophilus microplus Midgut Thrombin Inhibitor). Metodologia: BmGTI foi obtido a partir do homogenato de intestino de fêmeas de R. microplus parcialmente ingurgitadas utilizando técnicas de cromatografia de troca iônica, gel filtração e afinidade por trombina. A atividade inibitória foi monitorada pelo ensaio de coagulação do fibrinogênio induzida por trombina. A preparação de BmGTI foi avaliada por SDS-PAGE e analisada por LC-MS/MS. A provável ORF de BmGTI foi clonada no plasmídeo pPIC9, expressa em Pichia pastoris e purificada. Diferentes razões molares de trombina:rBmGTI foram examinadas para atividade inibitória de trombina sobre a clivagem do fibrinogênio em pH 7,5. E64 foi usado para bloquear o sítio ativo de rBmGTI e o ensaio de inibição foi realizado. Diferentes razões molares de trombina:rBmGTI foram incubadas e analisadas por SDS-PAGE para verificar interações entre as proteases. A atividade de rBmGTI sobre o fibrinogênio foi analisada pela incubação de ambos. Resultados e Discussão: Baseado na m/z dos fragmentos trípticos de BmGTI sua sequência foi identificada como BmCL1, uma catepsina Llike protease ativa em pH ácido, mas sem capacidade de hidrolisar substrato sintético em pH ≥7,0. rBmCL1/BmGTI foi expressa em P. pastoris como próenzima e após ativação, a enzima foi purificada. Diferentes razões molares de trombina:rBmCL1/BmGTI foram ensaiadas; quando a concentração de rBmCL1/BmGTI estava 64 vezes maior do que a de trombina, esta apresentou atividade residual de 37%. Quando rBmCL1/BmGTI teve seu sítio ativo bloqueado por E64, não houve inibição da atividade de trombina sobre fibrinogênio. A análise do fibrinogênio por SDS-PAGE, após incubação com rBmCL1/BmGTI, mostrou que as cadeias α e β do fibrinogênio são hidrolisadas. Conclusão: A partir destes resultados, concluímos que BmGTI inibe a coagulação sanguínea pela hidrólise das cadeias α e β do fibrinogênio. / Introduction: Rhipicephalus microplus is an important parasite of cattle. New strategies for control depend on a better knowledge of its physiology and hostparasite relationship, and molecules involved in acquisition and digestion of blood meal are interesting targets. Objectives: to determine how BmGTI (Boophilus microplus Midgut Thrombin Inhibitor) inhibits coagulation. Materials and Methods: BmGTI was obtained from partially engorged females midguts homogenate through ion exchange, size exclusion and thrombin-affinity chromatographies. Thrombin inhibition activity was measured by thrombin-induced fibrinogen clotting assay. BmGTI preparation was checked by SDS-PAGE and analyzed by LCMS/ MS. BmGTI putative ORF was cloned in pPIC9 plasmid, expressed in Pichia pastoris and purified. Different molar ratios of thrombin:BmGTI were examined for inhibitory activity of thrombin upon fibrinogen cleavage at pH 7.5. E64 was used to block BmGTI active site and inhibitory activity was assayed. Different molar ratio of thrombin:BmGTI were incubated and analyzed by SDS-PAGE to verify proteaseinhibitor interactions. BmGTI direct activity upon fibrinogen was analyzed after incubation by SDS-PAGE. Results and Discussion: Based on m/z of the BmGTI tryptic fragments it was identified as BmCL1, a cathepsin L-like proteinase active at acidic pH, but unable to hydrolyze synthetic substrate at pH ≥7.0. BmCL1/BmGTI was expressed in P. pastoris as pro-enzyme and after activation the enzyme was purified. Different molar ratios of thrombin:rBmCL1/BmGTI were assayed, and when rBmCL1/BmGTI concentration was 64-fold higher than thrombin concentration, this enzyme residual activity was 37%. When rBmCL1/BmGTI has its active site blocked with E-64, it was unable to inhibit thrombin activity upon fibrinogen. Analysis by SDS-PAGE of fibrinogen after incubation with rBmCL1/BmGTI showed that fibrinogen chains α and β were hydrolyzed. Conclusion: Based on these results, we concluded that rBmGTI/BmCL1 inhibits blood coagulation through hydrolyzes of fibrinogen chain- α and β.

Resumo: Avaliou-se comparativamente duas formulações, de ação prolongada, contendo Ivermectina (4% e 3,15%) em quatro experimentos em bovinos. Pelo grupo controle, constatou-se a presença das seguintes espécies de nematódeos gastrintestinais: Haemonchus placei, Cooperia punctata, Cooperia spatulata, Trichostrongylus axei, Oesophagostomum radiatum e Trichuris discolor. Quanto à eficácia anti-helmíntica, observou-se que a Ivermectina 4%* foi estatisticamente (P<0,05) superior à Ivermectina 3,15% contra Haemonchus placei, Cooperia punctata e Oesophagostomum radiatum. As duas formulações praticamente não diferiram quanto à eficácia anti-Boophilus microplus e antilarvas de Dermatobia hominis (berne). Decorridos 120 dias pós-tratamento, foram registrados, em relação ao grupo controle, diferenciais de ganho de peso corporal de 17,79 e 11,19 kg em bovinos medicados com Ivermectina 4% e Ivermectina 3,15%, respectivamente. / Abstract: Comparative endectocide efficacy and effect on weight gain in cattle treated with two (3.15% or 4%) ivermectin formulations. Four trials were conduced to a comparative evaluation of two long action (3.15% or 4%) ivermectin formulations. In the anthelmintic study, the 4% ivermectin formulation showed efficacy statistically higher than 3.15% ivermectin against Haemonchus placei, Cooperia punctata and Oesophagostomum radiatum. Ivermectin at both concentrations was similarly effective against Boophilus microplus and larvae of Dermatobia hominis (warble fly). After 120 days post-treatment, it was observed, relative to the control group, difference in the weight gain of 17.70kg and 11.10kg in cattle treated with 4% ivermectin and 3.15% ivermectin, respectively. / Orientador: Gilson Pereira de Oliveira / Coorientador: Alvimar José da Costa / Banca: Márcia Cristina de Sena Oliveira / Banca: Oeliton Ferreira Barbosa / Mestre

A saliva do carrapato bovino Boophilus microplus contém dois inibidores de trombina: o BmAP e a microfilina. Este trabalho apresenta a purificação e a caracterização deste último anticoagulante. A microfilina foi purificada da saliva por cromatografia de gel filtração, ultrafiltração em membrana de exclusão de 3 kDa e cromatografia de afinidade em trombina-Sepharose. A análise por espectrometria de massas mostrou uma massa molecular de 1770 Da. Com uma composição de 16 aminoácidos, a microfilina é o segundo menor inibidor peptídico de trombina já descrito. A microfilina inibe a fibrinocoagulação e a agregação plaquetária induzida por trombina com IC50 de 5 M. Como ela não inibe a atividade amidolítica da enzima sobre S2238, mas inibe a hidrólise de um substrato sintético longo que interage com o exosítio I da trombina, o mecanismo de ação proposto para a microfilina é o bloqueio do exosítio I da enzima. A microfilina é resistente à temperatura e não inibe a atividade amidolítica de fXa, plasmina, proteína C ativada, uroquinase, quimiotripsina e tripsina. O estudo mais detalhado da microfilina permitirá sua avaliação como antígeno contra o carrapato e/ou como droga antitrombótica.