Com o aumento do número de animais inseminados por IATF (inseminação artificial em tempo fixo), a diminuição de custos e o incremento de índices reprodutivos têm sido os objetivos de vários grupos de pesquisa. Nos protocolos de IATF utilizados, empregam-se dispositivos de liberação sustentada de progesterona (P4), que são, em sua maioria, constituídos de um esqueleto de nylon, recoberto com uma camada de silicone com P4 . Visando a diminuição dos custos de produção e impacto ambiental, foi desenvolvido um dispositivo à base de biopolímeros. Neste estudo, foram comparados dispositivos confeccionados com uma blenda constituída de Poli-hidroxi-butirato (PHB) e Poli-&epsion;-caprolactona (PCL), com o Dispositivo Interno Bovino (DIB&reg;), utilizado como controle . No teste in vitro, utilizaram-se dois tipos de dispositivo à base de biopolímeros, com uma área superficial de 147 cm2: DISP8 (46% PHB, 46% PCL e 8% P4; n=4), DISP10 (45% PHB, 45% PCL, 10% P4; n=4) e o DIB&reg; (1 g de P4, área de 120 cm2; n=3). Os testes in vitro foram conduzidos segundo especificações da USP 23, em um dissolutor de comprimidos, empregando-se uma mistura de álcool/água (60/40) como meio de difusão. Amostras do meio foram colhidas aos 2 min., 2, 4, 8, 12, 24, 48, 60, 72, 84 e 96 h. Os teores de P4 foram dosados por espectrofotometria, em 244 nm de comprimento de onda. Realizaram-se as comparações 3 a 3 dos coeficientes angulares das retas obtidas pela regressão das concentrações acumuladas de P4, em função da raiz quadrada do tempo. As médias e respectivos erros-padrão dos coeficientes angulares foram de 677,39 ± 16.13 µg/cm2/t1/2 para o DIB&reg;, 566,17 ± 3.68 µg/cm2/t1/2 para o Disp8 e 774,63 ± 45.26 µg/cm2/t1/2 para o Disp10. Houve diferença entre o DISP8 e o DISP10 (p< 0,05), mas ambos não diferiram do DIB. Para análise das quantidades liberadas por dia de teste in vitro, consideraram-se 4 períodos: 0-24, 24-48, 48-72 e 72-96 h. Houve interação entre tratamento e tempo (p=0,0024). Nas primeiras 24 horas, o DISP8 liberou significativamente menos P4 do que o DISP10 e o DIB&reg;, cujas liberações não diferiram entre si. No intervalo entre 24 e 48h, o DISP 10 liberou significativamente mais P4 do que o DIB&reg;. O DISP8 liberou uma quantidade de P4 intermediária e não se diferenciou significativamente nem do DIB&reg; e nem do DISP10. No intervalo entre 48 e 72h a quantidade de P4 liberada pelo DISP10 foi significativamente maior do que a do DIB&reg; e a do DISP8, que não diferiram entre si. No intervalo entre 72 e 96h, o DISP10 liberou significativamente mais P4 do que o DIB&reg; e o DISP8 liberou uma quantidade intermediária que não diferiu do DIB&reg; nem do DISP10. No teste in vivo, seis vacas mestiças ovariectomizadas receberam DIB (n=4) ou DISP8 (n=8), em um delineamento alternado, com seqüência não balanceada (cross-over), adicionado de medidas repetidas no tempo, referentes aos 16 dias de colheita das amostras de sangue. As amostras foram analisadas por rádio-imuno-ensaio, em fase sólida, utilizando-se &quotkit&quot comercial da DPC (Diagnostics Products Corporation). As concentrações de pico foram atingidas 4 h após a colocação dos dispositivos e este foi o único momento em que as concentrações plasmáticas de P4 diferiram segundo dispositivo (11,45±1,96 vs 9,23±1,15 ng/mL, respectivamente para DIB e DISP8; p= 0,027). No dia 8 do ensaio, as concentrações plasmáticas de P4 proporcionadas pelo DIB e pelo DISP8 foram respectivamente 2,44±0,09 e 1,89±0,13 ng/mL (p=0.58). Ambos dispositivos mantiveram teores de P4 superiores a 1 ng/mL, durante os 16 dias do teste in vivo. Concluiu-se que os dispositivos confeccionados com a blenda dos biopolímeros PHB/PCL, podem liberar P4 de maneira sustentada, tanto quanto os que empregam silicone em sua fabricação. / With the increase in the number of animals inseminated by TAI (timed artificial insemination) the decrease of costs and the improvement of reproductive performance are the goals of several research groups. Progesterone devices which are majority constituted of a nylon skeleton covered with a silicone layer with P4, are used in TAI protocols. Aiming the decrease of the production costs and the environmental impact, was a new device developed with biopolymers matrix. In this study, were compared a blend of Poli-hidroxi-butirate (PHB) and poli-?-caprolactone (PCL) device with the Bovine Internal Device (DIB&reg;). In the in vitro test, two kinds of the new device with a superficial area of 147 cm2: DISP8 (46% PHB, 46% PCL and 8% P4; n=4), DISP10 (45% PHB, 45% PCL, 10% P4; n=4) and DIB&reg; (1 g of P4, area of 120 cm2; n=3). The in vitro tests were led following USP 23 specifications in a drug dissolutor in alcohol/water (60/40) solution as a diffusion medium. Samples were collected at 2 min., 2, 4, 8, 12, 24, 48, 60, 72, 84 and 96 hours. Progesterone concentrations were estimated by spectrophotometry at UV 244 nm wavelenght. Comparisons 3 by 3 of the angular coefficients of the straight lines obtained by the regression of the accumulated P4 concentrations in function of the square root of time were performed. The averages and respective standard-errors of the angular coefficients were 677,39 ± 16.13 µg/cm2/t1/2 to DIB&reg;, 566,17 ± 3.68 µg/cm2/t1/2 to Disp8 and 774,63 ± 45.26 µg/cm2/t1/2 to Disp10. Difference were observed between DISP8 and DISP10 (p< 0.05) but both did not differ to DIB&reg;. Four periods were considered for analysis of the amounts released per day of in vitro test: 0-24, 24-48, 48-72 and 72-96 hours. Interaction between treatment and time was observed (p=0.0024). In the first 24 hours DISP8 released significantly less P4 than DISP10 and DIB&reg; but the lathers did not differ from each other. In the interval between 24 and 48 hours DISP10 released significantly more P4 than DIB&reg;. The device DISP8 released an intermediary concentration of P4 and was similar to DIB&reg; and to DISP10. In the interval between 48 and 72 hours the progesterone concentration released by DISP10 was significantly higher than DIB&reg; and DISP8 but lathers did not differ from each other. In the interval between 72 and 96 hours DISP10 released significantly more P4 than DIB&reg; while DISP8 released an intermediary amount which did not differ to DIB&reg; or to DISP10. In the test in vivo test, six ovariectomized beef cows received the devices DIB&reg; (n=4) or DISP8 (n=8) in an alternated delineation in a nom balanced sequence (cross-over) added of repeated measures in time, related to the 16 days of blood samples collects. Progesterone concentration from these samples were measured by radioimmunoassay in solid phase using the commercial kit from DPC (Diagnostics Products Corporation). The peak of the progesterone concentrations were observed 4 hours after the devices insertion and this was the unique moment in which plasmatic progesterone concentrations differed depending on device (11,45 ± 1,96 vs 9,23 ± 1,15 ng/mL, respectively for DIB and DISP8; p= 0,027). After 8 days from the device insertion plasmatic progesterone concentrations provided by DIB and DISP8 were respectively 2,44 ± 0,09 and 1,89 ± 0,13 ng/mL (p=0.58). Both devices kept the progesterone concentration higher than 1 ng/mL during the 16 days of the in vivo test. In conclusion, the devices made with biopolymers blends of PHB/PCL can release sustained P4 comparable with silicone matrix.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:55:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1063429 bytes, checksum: d03db996184b33819ba8246a6cf10d87 (MD5) Previous issue date: 2013-03-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / For the preparation of this dissertation it was conducted three experiments with the Nelore heifers under different supplementation strategies to pasture. In the first experiment the objective was to evaluate the effect of different levels of crude protein supplement on performance, intake, digestibility and also in microbial efficiency of animals. For this were used 40 newly weaned heifers, with an initial average age of 8 months and an initial average weight of 230 + 3,39 kg. The experimental design was completely randomized. The experiment contained five treatments and eight replications. The treatments were: mineral mix provided ad libitum, supplement containing 10%, 20%, 30% and 40% crude protein (CP), representing the treatments PB10, PB20, PB30, PB40, respectively. The supplements were provided in the amount of 1 kg / animal / day. There was a higher final body weight and weight gain in the supplemented animals compared to non-supplemented (P <0.10), these two parameters did not differ between animals supplemented with different levels of CP. The intake of dry matter (DM), organic matter (OM), crude protein (CP), total digestible nutrients (TDN), digested dry matter (DDM) and dry matter in g /kg of body weight were higher (P <0.10) for the supplemented animals compared to non-supplemented. The crude protein intake had increased linearly with increasing levels of CP in supplements. The digestibility of DM, OM, CP and TDN were higher (P <0.10) for the supplemented animals compared to non-supplemented. There was a quadratic effect on digestibility of CP with increased levels of CP in supplements. The production of microbial nitrogen (N mic), serum urea nitrogen (NUS) and reason urea nitrogen in the urine/creatinine nitrogen (NUU/Ncre) were higher (P <0.10) for the supplemented animals. Quadratic effect was observed in the production of Nmic, microbial efficiency (Emic), NUS and NUU/Ncre with increased levels of CP in multiple supplements. It was concluded that multiple supplementation provides higher weight gain and final body weight in the period after weaning from Nellore females. The second experiment aimed to evaluate the effect of replacing soybean meal by cottonseed meal 38% in supplements containing 15 and 30% of crude protein (CP) on performance and nutritional parameters of beef heifers. It 40 Nelore heifers was used, initial age of 12 months and average weight of 250 + 3,97 kg, which were conducted for five paddocks evenly formed with Brachiaria decumbens Stapf. The experimental design was completely randomized. The experiment contained five treatments and eight replications. The treatments were: Supplement containing soybean meal, with 15% CP (S15), supplement containing cottonseed meal, 15% CP (A15), supplement containing soybean meal, with 30% CP (S30), supplement containing cottonseed meal, 30% CP (A30) and treatment control receiving mineral mix ad libitum. Supplemented heifers had higher daily weight gains and final body weights also increased (P <0.10) when compared to the control treatment. The animals that received multiple supplementation also had higher intakes of all nutrients evaluated (P <0.10), as well as the digestibility of the same when compared to animals in the control treatment. The animals receiving supplements containing 15% CP had lower digestibility of DM, OM, CP, TDN and neutral detergent fiber corrected for ash and protein (NDFap), compared with those who received supplemental containing 30% CP (P <0.10). Treatments containing cottonseed meal provided greater digestibility of DM (P <0.10). It was concluded that supplementation of grazing heifers provide better performance productive and nutritional and the soybean meal can be substituted for cottonseed meal. In the third experiment, it was evaluated the effect of two additives, as well as their combination, on performance, intake, digestibility and also the efficiency of microbial synthesis. It was used a total of 40 Nelore heifers with age and weight of 16 months and 308 + 4,79 kg, respectively. These animals were divided into five paddocks evenly covered by Brachiaria decumbens Stapf. The experiment had five treatments and eight replications and was conducted during the transition rainy season dry season. The experimental design was completely randomized. The treatments were: ad libitum fed mineral mixture (MM), no additive supplement (SUP), supplement containing enzyme complex (Allzyme ® SSF) (SE), supplement containing live yeast (Yea-Sacc ®) (SL) and supplement containing both (SEL). The average gain and also the final body weight were greater for the supplemented animals, when compared to the MM treatment. These parameters were also higher for animals receiving yeast as an additive, when compared to animals in SUP treatment. The supplemented animals showed higher intake of all nutrients (P <0.10) compared to animals fed MM. The addition of additives did not influence intake between the supplemented animals. When contrasted treatments SE and SL showed higher DM intake, dry matter of forage (DMf), OM, organic matter forage (MOf), DM g / kg of body weight, DMf g / kg of body weight and NDFap g / kg of body weight for animals in SL treatment. The digestibility was higher for animals receiving supplementation for all nutrients. It was observed the effect of yeast presence (SL) in increasing the digestibility of DM, OM and CP comparing to treatment without additives. It was also observed higher microbial production, serum and reason urea nitrogen in the urine/creatinine nitrogen for animals receiving supplementation for animals in MM treatment. It was concluded that multiple supplementation improves better performance and nutritional parameters of heifers, as well as the addition of active yeast enhances this effect, during the transition rainy season dry season. / Para a elaboração dessa dissertação foram realizados três experimentos com fêmeas bovinas da raça Nelore, submetidas a diferentes estratégias de suplementação a pasto. No primeiro experimento o objetivo foi avaliar o efeito de diferentes níveis de proteína bruta no suplemento, no desempenho, consumo, digestibilidade e também na eficiência microbiana dos animais. Para isso foram utilizadas 40 novilhas recém desmamadas, com idade inicial média de 8 meses e peso inicial médio de 230 + 3,39 kg. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado. O experimento continha cinco tratamentos e oito repetições. Os tratamentos foram: mistura mineral fornecida ad libitum (MM), suplemento contendo 10%, 20%, 30% e 40% de proteína bruta (PB), sendo os tratamentos PB10, PB20, PB30, PB40, respectivamente. Os suplementos foram fornecidos na quantidade de 1 Kg/animal/dia. Observou-se maior peso corporal final (PCF) e ganho médio diário de peso (GMD) para os animais suplementados em relação aos não suplementados (P<0,10), não diferindo esses dois parâmetros entre os animais suplementados com diferentes níveis de PB. O consumo de matéria seca (MS), matéria orgânica (MO), proteína bruta (PB), nutrientes digestíveis totais (NDT), matéria seca digerida (MSD) e matéria seca em g/kg de peso corporal, foram maiores (P<0,10) para os animais suplementados em relação aos não suplementados. O consumo de proteína bruta apresentou efeito linear crescente, com o aumento dos níveis de PB nos suplementos. Observou-se um efeito quadrático na digestibilidade da PB com o aumento dos níveis de PB nos suplementos. A produção de nitrogênio microbiano (Nmic), nitrogênio ureico no soro (NUS) e a relação nitrogênio ureico na urina/nitrogênio da creatinina (NUU/Ncre) foram maiores (P<0,10) para os animais suplementados. Observou-se efeito quadrático na produção de Nmic, eficiência microbiana (Emic), NUS e NUU/Ncre com o aumento dos níveis de PB nos suplementos múltiplos. Concluiu-se que a suplementação múltipla proporciona maiores ganhos de peso e peso corporal final no período pós desmama de novilhas Nelore. No segundo experimento objetivou-se avaliar o efeito da substituição do farelo de soja pelo farelo de algodão 38%, em suplementos contendo 15 e 30% de proteína bruta (PB), no desempenho e nos parâmetros nutricionais de novilhas de corte. Foram utilizadas para a execução deste experimento, 40 novilhas Nelore com idade inicial de 12 meses e peso inicial médio de 250 + 3,97 kg, as quais foram conduzidas para cinco piquetes uniformemente formados com Brachiaria decumbens Stapf. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado. O experimento continha cinco tratamentos e oito repetições. Os tratamentos foram: suplemento contendo farelo de soja, com 15% de PB (S15), suplemento contendo farelo de algodão, com 15% de PB (A15), suplemento contendo farelo de soja, com 30% de PB (S30), suplemento contendo farelo de algodão, com 30% de PB (A30) e tratamento controle, recebendo mistura mineral ad libitum (MM). As novilhas suplementadas apresentaram maiores ganhos diários de peso e também maiores pesos corporais finais (P<0,10), quando comparadas às do tratamento controle. Os animais que receberam suplementação múltipla também apresentaram maiores consumos de todos os nutrientes avaliados (P<0,10), assim como também maior digestibilidade dos mesmos, quando comparados aos animais do tratamento controle. Os animais recebendo suplementos contendo 15% de PB apresentaram menores digestibilidades da MS, MO, PB, NDT e fibra insolúvel em detergente neutro corrigida para cinzas e proteína (FDNcp), quando comparados aos que receberam suplemento contendo 30% de PB (P<0,10). Os tratamentos contendo farelo de algodão proporcionaram maiores digestibilidades da MS (P<0,10). Concluiu-se que a suplementação de fêmeas em pastejo proporciona melhor desempenho produtivo e nutricional e que o farelo de soja pode ser totalmente substituído por farelo de algodão 38%. No terceiro experimento foi avaliado o efeito de dois aditivos, assim como a combinação de ambos, no desempenho, consumo, digestibilidade e também na eficiência da síntese microbiana. Foram utilizadas 40 novilhas Nelore de idade e peso médio de 16 meses e 308 + 4,79 kg, respectivamente. Esses animais foram alocados em cinco piquetes uniformemente cobertos por Brachiaria decumbens Stapf. O experimento apresentava cinco tratamentos e oito repetições e foi realizado no período de transição águas - seca. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado. Os tratamentos eram: mistura mineral fornecida ad libitum (MM), suplemento sem aditivo (SUP), suplemento contendo complexo enzimático (Allzyme SSF®) (SE), suplemento contendo levedura ativa (Yea-Sacc®) (SL) e suplemento contendo ambas (SEL). O ganho médio diário e também o peso corporal final foram maiores para os animais suplementados, quando comparados aos do tratamento MM. Esses parâmetros também foram maiores para os animais recebendo a levedura como aditivo, quando comparados aos animais do tratamento SUP. Os animais suplementados apresentaram maior consumo de todos os nutrientes (P<0,10), quando comparados aos animais do tratamento MM. A adição dos aditivos não influenciou no consumo entre os animais suplementados. Quando contrastados os tratamentos SE e SL, observou-se maior consumo de MS, matéria seca de forragem (MSf), MO, matéria orgânica de forragem (MOf), MS em g/kg de peso corporal, MSf em g/ kg de peso corporal e FDNcp em g/kg de peso corporal, para os animais do tratamento SL. A digestibilidade foi maior para os animais recebendo suplementação, para todos os nutrientes. Observou-se efeito da presença da levedura (SL) no aumento da digestibilidade da MS, MO e da PB em relação ao tratamento que recebia suplemento sem aditivos. Foi também observada maior produção microbiana, nitrogênio uréico no soro e relação nitrogênio ureico na urina/nitrogênio da creatinina para animais recebendo suplementação em relação aos animais do tratamento MM. Concluiu-se que a suplementação múltipla melhora o desempenho e os parâmetros nutricionais de novilhas Nelore, assim como a adição de leveduras ativas (Yea-Sacc®) potencializa esse efeito, no período de transição águas - seca.

[EN] The main objective of this study was the analysis, description, characterization and impact of red-orange colorations observed in salted bovine casings (intestines), ready for marketing. To achieve this, over the course of three years, an investigation was conducted in two slaughterhouses to assess the industrial process of obtaining cattle intestines (primary process); and three tripe shops to study the secondary process of obtaining salted bovine casings. A salt processing establishment was also visited. A sensory evaluation of the contaminated products was performed, and samples of salt, bovine casings, and water were collected and subjected to physico-chemical, microbiological, molecular, and histological analyses. Our study concludes that the microorganisms responsible for the color alterations are extremely halophilic archae, Haloarcula, Halogranum or Haloterrígena and Haloferax being the identified Genus. Archaea enter the system by cross-contamination through food grade salt. Our studies show that an extremely low load of archaea is sufficient for its development. According to our observations, red-orange coloration can be found in the salt and brine from the surface of open-head drums with only 20 days of storage, and up to a year and a half. Furthermore, electron microscope scans reveal that these halophilic microorganisms can form biofilms, adhering to the casings' surface, altering its histological structure, and therefore their properties when making sausages. In the establishments surveyed it was found that, despite all the measures taken to ensure product quality and safety (GMP, SSOP and HACCP), quality changes in the product were present. We conclude that this is a problem underestimated at an industrial level, and where preventive measures play a major role. / [ES] El objetivo principal de este trabajo fue el análisis, descripción, caracterización e incidencia de las coloraciones rojo anaranjadas observadas en tripas bovinas saladas (intestinos), prontas para su comercialización. Para ello, en el curso de tres años, se realizó una investigación en dos establecimientos de faena para evaluar el proceso industrial de obtención de intestinos bovinos (proceso primario); y en tres triperías, para estudiar el proceso secundario de industrialización de las tripas bovinas saladas. También se asistió a un establecimiento procesador de sal. Se realizó evaluación sensorial de los productos contaminados y se recolectaron muestras de sal, tripas vacunas y agua para estudios microbiológicos, físico-químicos, moleculares e histológicos. Este trabajo concluye que los microorganismos responsables de las alteraciones son arqueas halófilas extremas identificándose los géneros Haloarcula, Halogranum o Haloterrígena y Haloferax. Las arqueas ingresan al sistema por contaminación cruzada a través de la sal de grado alimentario. Los estudios muestran que una carga extremadamente baja de arqueas es suficiente para su desarrollo. De acuerdo a las observaciones realizadas, se constatan coloraciones rojo anaranjadas en la sal y salmuera de la superficie de las tarrinas con tan sólo 20 días de almacenamiento y hasta un año y medio. Por otra parte, la microscopía electrónica muestra que estos microorganismos halófilos pueden formar biopelículas, adhiriéndose a la superficie de la tripa, alterando su estructura histológica y, por tanto, sus propiedades al momento de la elaboración de embutidos. En los establecimientos estudiados se constató que, a pesar de adoptar todas las medidas para garantizar la inocuidad del producto (GMP, SSOP y HACCP), se presentaban alteraciones de calidad en el producto. En conclusión, se trata de un problema subestimado a nivel industrial, y donde las medidas preventivas desempeñan un papel fundamental. / [CAT] L'objectiu principal d'este treball va ser l'anàlisi, descripció, caracterització i incidència de les coloracions roig ataronjades observades en budells bovins salats (intestins), promptes per a la seua comercialització. Per a això, en el curs de tres anys, es va realitzar una investigació en dos establiments de faena per a avaluar el procés industrial d'obtenció d'intestins bovins (procés primari); i en tres triperies, per a estudiar el procés secundari d'obtenció de budells bovins salats. També es va assistir a un establiment processador de sal. Es va realitzar avaluació sensorial dels productes contaminats i es van recol¿lectar mostres de sal, budells vacunes i aigua per a estudis microbiològics, fisicoquímics, moleculars i histològics. Este treball conclou que els microorganismes responsables de les alteracions són arqueges halòfiles extremes identificant-se els gèneres Haloarcula, Halogranum o Haloterrigena i Haloferax. Les arqueges ingressen al sistema per contaminació encreuada a través de la sal de grau alimentari. Els estudis mostren que una càrrega extremadament baixa d'arqueges és suficient per al seu desenrotllament. D'acord amb les observacions realitzades, es constaten coloracions roig ataronjades en la sal i salmorra de la superfície de les terrines amb tan sols 20 dies d'emmagatzemament i fins a un any i mig. D'altra banda, la microscòpia electrònica mostra que estos microorganismes halòfils poden formar biofilms, adherint-se a la superfície del budell, alterant la seua estructura histològica i, per tant, les seues propietats al moment de l'elaboració d'embotits. En els establiments estudiats es va constatar que, a pesar d'adoptar totes les mesures per a garantir la innocuïtat del producte (GMP, SSOP i HACCP), es presentaven alteracions de qualitat en el producte. En conclusió es tracta d'un problema subestimat a nivell industrial, i on les mesures preventives exercixen un paper fonamental. / Bertacchi Pepe, MM. (2016). Archeas halófilas como causa de alteraciones en tripas bovinas saladas [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/62205 / TESIS

Com o aumento do número de animais inseminados por IATF (inseminação artificial em tempo fixo), a diminuição de custos e o incremento de índices reprodutivos têm sido os objetivos de vários grupos de pesquisa. Nos protocolos de IATF utilizados, empregam-se dispositivos de liberação sustentada de progesterona (P4), que são, em sua maioria, constituídos de um esqueleto de nylon, recoberto com uma camada de silicone com P4 . Visando a diminuição dos custos de produção e impacto ambiental, foi desenvolvido um dispositivo à base de biopolímeros. Neste estudo, foram comparados dispositivos confeccionados com uma blenda constituída de Poli-hidroxi-butirato (PHB) e Poli-&epsion;-caprolactona (PCL), com o Dispositivo Interno Bovino (DIB&reg;), utilizado como controle . No teste in vitro, utilizaram-se dois tipos de dispositivo à base de biopolímeros, com uma área superficial de 147 cm2: DISP8 (46% PHB, 46% PCL e 8% P4; n=4), DISP10 (45% PHB, 45% PCL, 10% P4; n=4) e o DIB&reg; (1 g de P4, área de 120 cm2; n=3). Os testes in vitro foram conduzidos segundo especificações da USP 23, em um dissolutor de comprimidos, empregando-se uma mistura de álcool/água (60/40) como meio de difusão. Amostras do meio foram colhidas aos 2 min., 2, 4, 8, 12, 24, 48, 60, 72, 84 e 96 h. Os teores de P4 foram dosados por espectrofotometria, em 244 nm de comprimento de onda. Realizaram-se as comparações 3 a 3 dos coeficientes angulares das retas obtidas pela regressão das concentrações acumuladas de P4, em função da raiz quadrada do tempo. As médias e respectivos erros-padrão dos coeficientes angulares foram de 677,39 ± 16.13 µg/cm2/t1/2 para o DIB&reg;, 566,17 ± 3.68 µg/cm2/t1/2 para o Disp8 e 774,63 ± 45.26 µg/cm2/t1/2 para o Disp10. Houve diferença entre o DISP8 e o DISP10 (p< 0,05), mas ambos não diferiram do DIB. Para análise das quantidades liberadas por dia de teste in vitro, consideraram-se 4 períodos: 0-24, 24-48, 48-72 e 72-96 h. Houve interação entre tratamento e tempo (p=0,0024). Nas primeiras 24 horas, o DISP8 liberou significativamente menos P4 do que o DISP10 e o DIB&reg;, cujas liberações não diferiram entre si. No intervalo entre 24 e 48h, o DISP 10 liberou significativamente mais P4 do que o DIB&reg;. O DISP8 liberou uma quantidade de P4 intermediária e não se diferenciou significativamente nem do DIB&reg; e nem do DISP10. No intervalo entre 48 e 72h a quantidade de P4 liberada pelo DISP10 foi significativamente maior do que a do DIB&reg; e a do DISP8, que não diferiram entre si. No intervalo entre 72 e 96h, o DISP10 liberou significativamente mais P4 do que o DIB&reg; e o DISP8 liberou uma quantidade intermediária que não diferiu do DIB&reg; nem do DISP10. No teste in vivo, seis vacas mestiças ovariectomizadas receberam DIB (n=4) ou DISP8 (n=8), em um delineamento alternado, com seqüência não balanceada (cross-over), adicionado de medidas repetidas no tempo, referentes aos 16 dias de colheita das amostras de sangue. As amostras foram analisadas por rádio-imuno-ensaio, em fase sólida, utilizando-se &quotkit&quot comercial da DPC (Diagnostics Products Corporation). As concentrações de pico foram atingidas 4 h após a colocação dos dispositivos e este foi o único momento em que as concentrações plasmáticas de P4 diferiram segundo dispositivo (11,45±1,96 vs 9,23±1,15 ng/mL, respectivamente para DIB e DISP8; p= 0,027). No dia 8 do ensaio, as concentrações plasmáticas de P4 proporcionadas pelo DIB e pelo DISP8 foram respectivamente 2,44±0,09 e 1,89±0,13 ng/mL (p=0.58). Ambos dispositivos mantiveram teores de P4 superiores a 1 ng/mL, durante os 16 dias do teste in vivo. Concluiu-se que os dispositivos confeccionados com a blenda dos biopolímeros PHB/PCL, podem liberar P4 de maneira sustentada, tanto quanto os que empregam silicone em sua fabricação. / With the increase in the number of animals inseminated by TAI (timed artificial insemination) the decrease of costs and the improvement of reproductive performance are the goals of several research groups. Progesterone devices which are majority constituted of a nylon skeleton covered with a silicone layer with P4, are used in TAI protocols. Aiming the decrease of the production costs and the environmental impact, was a new device developed with biopolymers matrix. In this study, were compared a blend of Poli-hidroxi-butirate (PHB) and poli-?-caprolactone (PCL) device with the Bovine Internal Device (DIB&reg;). In the in vitro test, two kinds of the new device with a superficial area of 147 cm2: DISP8 (46% PHB, 46% PCL and 8% P4; n=4), DISP10 (45% PHB, 45% PCL, 10% P4; n=4) and DIB&reg; (1 g of P4, area of 120 cm2; n=3). The in vitro tests were led following USP 23 specifications in a drug dissolutor in alcohol/water (60/40) solution as a diffusion medium. Samples were collected at 2 min., 2, 4, 8, 12, 24, 48, 60, 72, 84 and 96 hours. Progesterone concentrations were estimated by spectrophotometry at UV 244 nm wavelenght. Comparisons 3 by 3 of the angular coefficients of the straight lines obtained by the regression of the accumulated P4 concentrations in function of the square root of time were performed. The averages and respective standard-errors of the angular coefficients were 677,39 ± 16.13 µg/cm2/t1/2 to DIB&reg;, 566,17 ± 3.68 µg/cm2/t1/2 to Disp8 and 774,63 ± 45.26 µg/cm2/t1/2 to Disp10. Difference were observed between DISP8 and DISP10 (p< 0.05) but both did not differ to DIB&reg;. Four periods were considered for analysis of the amounts released per day of in vitro test: 0-24, 24-48, 48-72 and 72-96 hours. Interaction between treatment and time was observed (p=0.0024). In the first 24 hours DISP8 released significantly less P4 than DISP10 and DIB&reg; but the lathers did not differ from each other. In the interval between 24 and 48 hours DISP10 released significantly more P4 than DIB&reg;. The device DISP8 released an intermediary concentration of P4 and was similar to DIB&reg; and to DISP10. In the interval between 48 and 72 hours the progesterone concentration released by DISP10 was significantly higher than DIB&reg; and DISP8 but lathers did not differ from each other. In the interval between 72 and 96 hours DISP10 released significantly more P4 than DIB&reg; while DISP8 released an intermediary amount which did not differ to DIB&reg; or to DISP10. In the test in vivo test, six ovariectomized beef cows received the devices DIB&reg; (n=4) or DISP8 (n=8) in an alternated delineation in a nom balanced sequence (cross-over) added of repeated measures in time, related to the 16 days of blood samples collects. Progesterone concentration from these samples were measured by radioimmunoassay in solid phase using the commercial kit from DPC (Diagnostics Products Corporation). The peak of the progesterone concentrations were observed 4 hours after the devices insertion and this was the unique moment in which plasmatic progesterone concentrations differed depending on device (11,45 ± 1,96 vs 9,23 ± 1,15 ng/mL, respectively for DIB and DISP8; p= 0,027). After 8 days from the device insertion plasmatic progesterone concentrations provided by DIB and DISP8 were respectively 2,44 ± 0,09 and 1,89 ± 0,13 ng/mL (p=0.58). Both devices kept the progesterone concentration higher than 1 ng/mL during the 16 days of the in vivo test. In conclusion, the devices made with biopolymers blends of PHB/PCL can release sustained P4 comparable with silicone matrix.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Reconhecida como agente de doença humana em 1982, E.coli enterohemorrágica (EHEC) pode causar diarréia sanguinolenta, colite hemorrágica e síndrome hemolítica urêmica (SHU). EHEC constitui um subgrupo especialmente virulento das E.coli produtoras de toxina de Shiga (Stx). O fator crítico da sua virulência é a toxina Shiga, capaz de interromper a síntese proteica da célula eucariótica. São conhecidos dois subgrupos de Stx, Stx1 e Stx2. Stx1 possui duas variantes Stx1c e Stx1d. Stx2 possui muitas variantes. Estudos epidemiológicos sugerem que cepas com os perfis toxigênicos Stx2 ou Stx2/Stx2c seriam mais frequentemente associadas a pacientes com SHU. Além da expressão de Stx, EHEC do sorotipo O157:H7 colonizam a mucosa intestinal induzindo a formação de lesões denominadas attaching/effacing (A/E). Para a produção da lesão A/E, é necessária a presença de uma ilha de patogenicidade cromossômica denominada LEE, composta por cinco operons, LEE 1 a LEE5. Em LEE 5 são codificadas a adesina intimina e o seu receptor Tir, o qual é translocado por um sistema de secreção tipo III (SSTT) e em LEE 4 são codificadas as proteínas secretadas EspA,B e D. Em EHEC O157:H7 são descritos muitos fatores de virulência, codificados em ilhas de patogenicidade, no cromossomo e no megaplasmídio pO157. Bovinos são o principal reservatório deste patógeno e alimentos de origem bovina e produtos contaminados com fezes de bovinos são causadores de surtos epidêmicos. Em nosso país EHEC O157:H7 é isolada do reservatório animal mas é muito rara a sua ocorrência em doença humana. Notamos que nas cepas bovinas predomina Stx2c, enquanto nas cepas humanas predomina o perfil toxigenico Stx2/Stx2c. Quanto a interação com enterocitos humanos cultivados in vitro (linhagem Caco-2), verificamos que tanto cepas bovinas quanto humanas mostram idêntica capacidade de invadir e persistir no compartimento intracelular das células Caco-2. No entanto, em comparação com as cepas humanas, as cepas bovinas mostram uma reduzida capacidade de produzir lesões A/E. Empregamos qPCR para aferir a transcrição de três diferentes locus (eae, espA e tir) situados nos operons LEE4 e LEE5 de cepas bovinas e humanas, durante a infecção de células Caco-2. Verificamos diferenças na expressão dos genes, especialmente espA, entre cepas bovinas e humanas com maior expressão para estas ultimas, em linha com os achados dos testes FAS. Através de clonagem e expressão de proteínas recombinantes, purificamos as proteínas Eae, EspA e Tir e obtivemos anticorpos específicos, empregados para acompanhar a sua expressão ao longo da infecção de células Caco-2, por imunofluorescencia. Verificamos que as três proteínas são detectadas tanto em cepas bovinas quanto humanas, mas nestas ultimas, a marcação é precoce e torna-se mais intensa com o avanço da infecção. Nossos resultados indicam que cepas EHEC O157:H7 isoladas do reservatório bovino em nosso país apresentam diferenças importantes em relação ao perfil toxigenico e a capacidade de indução de lesões A/E, características apontadas na literatura como relevantes para a virulência do micro-organismo. Por outro lado, nossos achados quanto a capacidade de invadir e multiplicar-se no interior de enterócitos pode explicar a persistência do patógeno no reservatório animal e a sua capacidade de transmissão horizontal. / Recognized in 1982 as a human pathogen, enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) causes bloody diarrhea, hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome (HUS). EHEC belonging to serotype O157:H7 are mostly important in North America, United Kingdom and Japan. Shiga toxin (Stx) is the critical factor of STEC. Stx is capable to interrupt the protein synthesis of the eukaryotic cell. Two subgroups of Stx are known, Stx1 and Stx2. Two variants of Stx1 are known (Stx1c and Stx1d), but several Stx2 variants have been described. Epidemiological studies suggest that STEC/EHEC strains carrying the toxigenic profiles Stx2 or Stx2/Stx2c are more frequently associated to HUS. Besides the expression of Stx, EHEC O157:H7 colonize the intestinal mucosa inducing the formation of characteristic histopathological lesions denominated attaching/effacing (A/E). To the production of A/E lesions, it is necessary the presence of a pathogenicity island called LEE (locus of enterocyte effacement), composed by five operons, LEE 1 to LEE5. An outer membrane adhesin (intimin) and its receptor Tir, which is translocated by a type three secretion sytem (TTSS), are both codified in LEE5 while the secreted proteins EspA, B and D, that constitute part of the SSTT, are codified in LEE4. Cattle are the main reservoir of this pathogen and foods of bovine origin and products contamined with bovine feces are common causes of epidemic outbreaks. In Brazil, EHEC O157:H7 can be isolated from the animal reservoir . Stx2c prevails among the bovine strains, while the toxigenic profiles Stx2 or Stx2/Stx2c are found among the human strains. Concerning the bacterial interaction with human enterocytes cultivated in vitro (Caco-2) we verified that both bovine and human strains showed almost identical ability to invade and to persist in the intracellular compartment of the Caco-2 cells. However, in comparison with the human strains, the bovine strains showed a reduced capacity to produce A/E lesions according to the FAS test. A quantitative FAS test confirmed the relative inefficiency of bovine strains to induce A/E lesions. We also used qPCR to follow the transcription of three genes (eae, espA and tir) of selected bovine and human strains, during the infection of Caco-2 cells. We verified differences in the gene expression, especially for espA, between bovine and human strains and these latter showed a larger expression, in line with the findings of the actin-aggregation tests. Through cloning and expression of recombinant proteins, we purified the Eae, EspA and Tir proteins and obtained specific antibodies, employed to follow the expression of those proteins, by immunofluorescence, along the infection of Caco-2 cells. We found that all proteins are detected both in bovine and human strains, but on these protein labeling occurs early and becomes more intense with the progress of the infection. Our results indicate that EHEC O157:H7 strains isolated from the bovine reservoir in Brazil shows, in comparison to strains isolated from human disease, important differences in relation to the toxigenic profile and the ability to induce A/E lesions. Our findings concerning the ability of the microorganism to invade and to multiply inside enterocytes can explain the persistence of the pathogen in the animal reservoir and its ability of horizontal transmission.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 518698 bytes, checksum: 9b98b706a52c45c02159a500d2de2177 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The aim of this study was to evaluate the serological status of slaughterderived cows for the presence of antibodies against bovine herpesvirus 1 (BoHV-1), viral DNA in ovarian tissue, oocyte, follicular fluid and blood of these animals by polymerase chain reaction (PCR) and correlate it with the serological profile. Serum samples, blood, ovarian tissue, follicular fluid and cumulus-oocyte complex were collected from 147 animals that had no history of vaccination against BoHV-1. Toxic or insufficient samples were discarded. Serological tests allowed the detection of the antibody titers from 2 to 1024. Molecular tests were preceded by the extraction of DNA from the samples, according to manufacturer's recommendations. The PCR reaction to use the primers previously described by Takiuchi et al. (2005). A total of 83.6% (117/140) of serum-positive for BoHV-1 in serum samples were observed. The positive samples were divided into groups according to serological profile, to get 10% of Down Titer (2 &#8804; X <8), 32.9% of Moderate Titer (8 &#8804; X <64); 40.7% High Titer (64 &#8804; X &#8804; 512). In molecular tests, viral DNA was detected only in groups of positive samples. From positive animals, viral DNA was detected in 0.9% (1/115) of oocytes, at 4.3% (5/117) of ovarian tissue, 2.8% (3/108) of blood and any of follicular fluid sample. Comparing the results among groups of samples, the differences were not significant (p>0.05). Thus, animals showed high prevalence of antibodies against BoHV-1 and molecular tests that have provensuccessful in detecting DNA in genital samples from cows, suggesting that these structures could be sites of tropism of this virus. / O objetivo do presente trabalho foi avaliar a condição sorológica de fêmeas bovinas abatidas em um frigorífico quanto à presença de anticorpos contra o Bovine Herpesvirus 1 (Herpesvírus Bovino 1 - BoHV-1). Objetivou-se também avaliar a presença do DNA viral no tecido ovariano, nos ovócitos, líquido folicular e sangue destes animais por meio da Reação de Cadeia de Polimerase (PCR) e correlacioná-la com o perfil sorológico. Foram coletadas amostras de soro, sangue, tecido ovariano, líquido folicular e complexo cumulus-ovócitos de 147 animais que não tinham histórico de vacinação com o BoHV-1. Amostras tóxicas ou insuficientes foram descartadas. Os testes sorológicos foram realizados permitindo a detecção de títulos virais de anticorpos de 2 a 1024. Os testes moleculares foram precedidos da extração do DNA das amostras, de acordo com recomendações do fabricante. Sucessivamente, foram realizadas as PCRs utilizando os oligonucleotídeos previamente descritos por Takiuchi et al. (2005). Observou-se 83,6% (117/140) de soropositividade para o BoHV-1 nas amostras sorológicas. As amostras positivas, divididas em grupos, de acordo com o título sorológico, apresentaram-se 10% de Título Baixo (2 &#8804; X < 8); 32,9% de Título Médio (8 &#8804; X < 64); 40,7% de Título Alto (64 &#8804; X &#8804; 512). Em relação aos testes moleculares, o DNA viral foi detectado somente nos grupos de amostras soropositivas. Dos animais soropositivos, foi evidenciado o DNA viral em 0,9%(1/115) dos ovócitos, em 4,3%(5/117) do tecido ovariano, 2,8%(3/108) do sangue e em nenhuma amostra de líquido folicular. Comparando os resultados entre os grupos de amostras, as diferenças não se mostraram significativas (P > 0,05). Conclui-se que do rebanho analisado foi detectada alta prevalência de anticorpos contra o BoHV-1 e que os testes moleculares se mostraram eficientes na detecção do DNA nas amostras de genitais de fêmeas bovinas, sugerindo que estas estruturas poderiam ser sítios de tropismo deste vírus.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Reconhecida como agente de doença humana em 1982, E.coli enterohemorrágica (EHEC) pode causar diarréia sanguinolenta, colite hemorrágica e síndrome hemolítica urêmica (SHU). EHEC constitui um subgrupo especialmente virulento das E.coli produtoras de toxina de Shiga (Stx). O fator crítico da sua virulência é a toxina Shiga, capaz de interromper a síntese proteica da célula eucariótica. São conhecidos dois subgrupos de Stx, Stx1 e Stx2. Stx1 possui duas variantes Stx1c e Stx1d. Stx2 possui muitas variantes. Estudos epidemiológicos sugerem que cepas com os perfis toxigênicos Stx2 ou Stx2/Stx2c seriam mais frequentemente associadas a pacientes com SHU. Além da expressão de Stx, EHEC do sorotipo O157:H7 colonizam a mucosa intestinal induzindo a formação de lesões denominadas attaching/effacing (A/E). Para a produção da lesão A/E, é necessária a presença de uma ilha de patogenicidade cromossômica denominada LEE, composta por cinco operons, LEE 1 a LEE5. Em LEE 5 são codificadas a adesina intimina e o seu receptor Tir, o qual é translocado por um sistema de secreção tipo III (SSTT) e em LEE 4 são codificadas as proteínas secretadas EspA,B e D. Em EHEC O157:H7 são descritos muitos fatores de virulência, codificados em ilhas de patogenicidade, no cromossomo e no megaplasmídio pO157. Bovinos são o principal reservatório deste patógeno e alimentos de origem bovina e produtos contaminados com fezes de bovinos são causadores de surtos epidêmicos. Em nosso país EHEC O157:H7 é isolada do reservatório animal mas é muito rara a sua ocorrência em doença humana. Notamos que nas cepas bovinas predomina Stx2c, enquanto nas cepas humanas predomina o perfil toxigenico Stx2/Stx2c. Quanto a interação com enterocitos humanos cultivados in vitro (linhagem Caco-2), verificamos que tanto cepas bovinas quanto humanas mostram idêntica capacidade de invadir e persistir no compartimento intracelular das células Caco-2. No entanto, em comparação com as cepas humanas, as cepas bovinas mostram uma reduzida capacidade de produzir lesões A/E. Empregamos qPCR para aferir a transcrição de três diferentes locus (eae, espA e tir) situados nos operons LEE4 e LEE5 de cepas bovinas e humanas, durante a infecção de células Caco-2. Verificamos diferenças na expressão dos genes, especialmente espA, entre cepas bovinas e humanas com maior expressão para estas ultimas, em linha com os achados dos testes FAS. Através de clonagem e expressão de proteínas recombinantes, purificamos as proteínas Eae, EspA e Tir e obtivemos anticorpos específicos, empregados para acompanhar a sua expressão ao longo da infecção de células Caco-2, por imunofluorescencia. Verificamos que as três proteínas são detectadas tanto em cepas bovinas quanto humanas, mas nestas ultimas, a marcação é precoce e torna-se mais intensa com o avanço da infecção. Nossos resultados indicam que cepas EHEC O157:H7 isoladas do reservatório bovino em nosso país apresentam diferenças importantes em relação ao perfil toxigenico e a capacidade de indução de lesões A/E, características apontadas na literatura como relevantes para a virulência do micro-organismo. Por outro lado, nossos achados quanto a capacidade de invadir e multiplicar-se no interior de enterócitos pode explicar a persistência do patógeno no reservatório animal e a sua capacidade de transmissão horizontal. / Recognized in 1982 as a human pathogen, enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) causes bloody diarrhea, hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome (HUS). EHEC belonging to serotype O157:H7 are mostly important in North America, United Kingdom and Japan. Shiga toxin (Stx) is the critical factor of STEC. Stx is capable to interrupt the protein synthesis of the eukaryotic cell. Two subgroups of Stx are known, Stx1 and Stx2. Two variants of Stx1 are known (Stx1c and Stx1d), but several Stx2 variants have been described. Epidemiological studies suggest that STEC/EHEC strains carrying the toxigenic profiles Stx2 or Stx2/Stx2c are more frequently associated to HUS. Besides the expression of Stx, EHEC O157:H7 colonize the intestinal mucosa inducing the formation of characteristic histopathological lesions denominated attaching/effacing (A/E). To the production of A/E lesions, it is necessary the presence of a pathogenicity island called LEE (locus of enterocyte effacement), composed by five operons, LEE 1 to LEE5. An outer membrane adhesin (intimin) and its receptor Tir, which is translocated by a type three secretion sytem (TTSS), are both codified in LEE5 while the secreted proteins EspA, B and D, that constitute part of the SSTT, are codified in LEE4. Cattle are the main reservoir of this pathogen and foods of bovine origin and products contamined with bovine feces are common causes of epidemic outbreaks. In Brazil, EHEC O157:H7 can be isolated from the animal reservoir . Stx2c prevails among the bovine strains, while the toxigenic profiles Stx2 or Stx2/Stx2c are found among the human strains. Concerning the bacterial interaction with human enterocytes cultivated in vitro (Caco-2) we verified that both bovine and human strains showed almost identical ability to invade and to persist in the intracellular compartment of the Caco-2 cells. However, in comparison with the human strains, the bovine strains showed a reduced capacity to produce A/E lesions according to the FAS test. A quantitative FAS test confirmed the relative inefficiency of bovine strains to induce A/E lesions. We also used qPCR to follow the transcription of three genes (eae, espA and tir) of selected bovine and human strains, during the infection of Caco-2 cells. We verified differences in the gene expression, especially for espA, between bovine and human strains and these latter showed a larger expression, in line with the findings of the actin-aggregation tests. Through cloning and expression of recombinant proteins, we purified the Eae, EspA and Tir proteins and obtained specific antibodies, employed to follow the expression of those proteins, by immunofluorescence, along the infection of Caco-2 cells. We found that all proteins are detected both in bovine and human strains, but on these protein labeling occurs early and becomes more intense with the progress of the infection. Our results indicate that EHEC O157:H7 strains isolated from the bovine reservoir in Brazil shows, in comparison to strains isolated from human disease, important differences in relation to the toxigenic profile and the ability to induce A/E lesions. Our findings concerning the ability of the microorganism to invade and to multiply inside enterocytes can explain the persistence of the pathogen in the animal reservoir and its ability of horizontal transmission.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE ALANA ROMANI.pdf: 1045802 bytes, checksum: f2ca493c65e73360592831be5ef56fb6 (MD5) Previous issue date: 2012-09-21 / The locally adapted breeds to different Brazilian ecosystems characterized as an alternative to food production, for presenting, among other characteristics, greater resistance to diseases.The main objective of this study was to evaluate the epidemiological situation of brucellosis and leptospirosis in nucleus of in situ conservation of Curraleiro and Pantaneiro bovine breeds in Cerrado and Pantanal biomes by serological and molecular diagnosis of these diseases in the livestock. We analyzed serum of 1,280 Curraleiro and 248 Pantaneiro animals on convenience sampling. We employed microscopic agglutination test, for the diagnosis of leptospirosis and the buffered acidified antigen test (Rose Bengal plate test) for brucellosis and 2-mercaptoethanol test for confirmation. The frequency of brucellosis in Curraleiro was 0.7% for animals and 25% for herds. In Pantaneiros, all animals tested were negative for Brucella abortus. The frequency of anti- Leptospira antibodies was 44.8% in Curraleiro and 51.2% in Pantaneiros, and 100% of the herds of both breeds showed positive animals. The factors associated with leptospirosis were access to wetland, abortions, vaccination against leptospirosis and practice of slaughtering in the propertyfor Curraleiro breed; and sex and age, with the highest risk for females aged between 12 and 24 months for Pantaneiro breed. Serological methods were employed above and polymerase chain reaction (PCR) for detecting infection by Brucella spp. and Leptospira spp. in cattle, to evaluate the concordance of the results of such tests. Brucellosis shows low frequency in Curraleiro cattle and is controlled in Pantaneiro. Leptospirosis was widely disseminated in nucleus of in situ conservation. In both breeds the serovars Hardjo and Wolffi were the most prevalent, which reinforce the function of bovine as a source of infection in the herd. However, the presence of reactions to serovars characteristic of wild animals suggests the involvement of local wildlife in the epidemiology of bovine leptospirosis in these nuclei of in situ conservation. The correlation of results obtained by serology and PCR to identify infection by Brucella spp. and Leptospira spp. was weak, which reinforces the idea that the diagnosis is more reliable when more than one method is employed. / As raças bovinas localmente adaptadas aos diferentes ecossistemas brasileiros caracterizam-se como uma alternativa para produção de alimentos, por apresentarem entre outras características, maior resistência a enfermidades. O objetivo geral foi avaliar a situação epidemiológica da brucelose e da leptospirose em núcleos de conservação de bovinos Curraleiros Pé Duro e Pantaneiros no Cerrado e Pantanal, utilizando métodos sorológicos e moleculares no diagnóstico de rebanho destas enfermidades. Foram testados soros de 1.280 bovinos Curraleiros e 248 bovinos Pantaneiros em amostragem de conveniência. Para diagnóstico de leptospirose empregou-se a soroaglutinação microscópica (SAM) e para brucelose adotou-se o teste de antígeno acidificado tamponado (AAT) e confirmação pelo teste de soroaglutinação lenta e 2 mercaptoetanol (2 - ME). Além dos métodos sorológicos descritos, foi empregada a reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção de infecção por Brucella spp. e Leptospira spp. em bovinos Curraleiros Pé Duro, para avaliar a concordância dos resultados de tais testes. A frequência de brucelose em bovinos Curraleiros foi de 0,7% para animais e 25% para rebanhos, enquanto os Pantaneiros foram soronegativos para Brucella abortus. A frequência anticorpos anti-Leptospira em bovinos Curraleiros foi de 44,8% e em Pantaneiros 51,2%. 100% dos rebanhos apresentaram animais soropositivos. Os fatores associados à leptospirose em bovinos Curraleiros foram acesso à área alagadiça, ocorrência de abortos, vacinação contra leptospirose e prática de abate na propriedade. Para bovinos Pantaneiros os fatores associados foram sexo e idade, com maior risco para fêmeas na faixa etária entre 12 e 24 meses. Conclui-se que a brucelose apresenta baixa frequência em bovinos Curraleiros Pé Duro e está controlada em Pantaneiros. A leptospirose revelou-se amplamente disseminada nos núcleos de criação de bovinos de raças localmente adaptadas. Nas duas raças os sorovares mais prevalentes foram Hardjo e Wolffi reforçando o papel dos bovinos como fonte de infecção no rebanho. A ocorrência de positividade para sorovares adaptados à fauna silvestre local sugere a participação da mesma na epidemiologia da leptospirose bovina nos núcleos de conservação das raças. A concordância dos resultados obtidos pela PCR em amostras sanguíneas e pela sorologia para identificação da infecção por Brucella spp. e Leptospira spp. foi fraca, o que reforça da necessidade de validação da PCR tendo em vista que o diagnóstico é mais confiável quando obtido por meio de vários métodos.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-11T13:33:41Z No. of bitstreams: 1 joaovitorpaesrettore.pdf: 1725080 bytes, checksum: 556b0f06a7899831fa634e0324dbc517 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-14T17:08:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 joaovitorpaesrettore.pdf: 1725080 bytes, checksum: 556b0f06a7899831fa634e0324dbc517 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-14T17:08:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 joaovitorpaesrettore.pdf: 1725080 bytes, checksum: 556b0f06a7899831fa634e0324dbc517 (MD5) Previous issue date: 2013-09-09 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A clonagem de animais representa um grande avanço tecnológico, mas ainda é uma técnica em experimento que necessita de aperfeiçoamento para que possa realmente ser difundida no meio agropecuário e social. Entre essas técnicas, uma que tem merecido destaque é a Clonagem por Transferência Nuclear (NT) pelo seu uso em técnicas de transgênese, entre outros, tornando-se uma alternativa viável frente aos métodos convencionais, como a microinjeção pró-nuclear. Porém, um problema frequentemente associado à NT é a baixa eficiência do processo, sendo pequena a proporção de embriões viáveis que são reconstruídos a partir de células somáticas como doadoras de núcleo. Muitos fatores podem influenciar nessa baixa taxa de sucesso, entre eles a incompleta reprogramação do núcleo da célula somática doadora, podendo levar a uma expressão anormal de importantes genes relacionados ao desenvolvimento do embrião. Isso significa que, para a clonagem funcionar, o núcleo da célula doadora precisa ser totalmente reprogramado após sua transferência, cessando sua programação própria de expressão gênica. O grau de diferenciação celular e comprometimento epigenético da célula doadora pode comprometer esse processo, levando-se a pensar na utilização de células menos comprometidas a fim de obter-se uma maior eficiência, tais como as células-tronco adultas. No presente trabalho isolamos, caracterizamos e testamos o potencial de diferenciação de células-tronco isoladas a partir do tecido adiposo da glândula mamária bovina (CTGMB), e sua caracterização semelhante a células-tronco mesenquimais torna interessante o potencial dessas células para terapia celular em bovinos, ou mesmo para clonagem por transferência nuclear, já que sua aplicação na técnica pode contribuir para aumentar sua eficiência, por se tratarem de células mais progenitoras. Além disso, por não terem comprometimento com um dado tipo celular, talvez possam contornar problemas epigenéticos. O know-how e os dados aqui apresentados são inéditos e inovadores, pois na literatura não há registro de algum grupo de pesquisa que tenha chegado a tal caracterização com riqueza de detalhes em células bovinas, e tais protocolos para obtenção das CTGMB podem ser patenteados. / Animal cloning represents a major technological breakthrough, but.it is still an experimental technique and needs some improvement so it can truly be diffused in the agricultural and social environment. Among these techniques, one that has been highlighted is Cloning by nuclear transfer (NT) because of its use in transgenesis techniques, among others, becoming one viable alternative compared to the conventional methods such as pro-nuclear microinjection. However, the low efficiency of the process is a common problem associated with NT, being small the proportion of viable embryos that are reconstructed using somatic cells as nuclear donors. There are many factors playing roles on this low success rate, one of them being the incomplete reprogramming of donor’s somatic cell nucleus, leading to an abnormal expression of important genes related to embryo development. So, for the cloning to work properly, the donor cell nucleus must be completely reprogrammed after its transfer, ceasing its own gene expression programme. The actual stage of cell differentiation and epigenetic commitment of the donor cell may compromise the process, leading to think of using less committed cells in order to obtain a higher efficiency, such as adult stem cells. In the present work we isolate, characterize and test the differentiation potential of stem cells isolated from the adipose tissue of bovine mammary gland (CTGMB), and their characterization as similar to mesenchymal stem cells make interesting their potential use on cattle cell therapy, or even nuclear transfer cloning, once their application in such technique could help increasing its efficiency because CTGMB are more progenitor cells. Furthermore, since they are not committed to a specific cell type, they may be able to bypass epigenetic issues. The know-how and data presented here are novel and innovative, since in literature there is no record of any research group that has come to reach such a detailed characterization in bovine cells, and such protocols for obtaining CTGMB are patentable.

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