Orientador: Jose Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: Ky Garrett Pohler / Banca: Gustavo Resende Siqueira / Banca: Ocilon Gomes de Sá Filho / Resumo: Os hormônios metabólicos IGF-1, GH e leptina são alterados de acordo com o status nutricional dos animais. O objetivo desse trabalho foi determinar as concentrações desses hormônios em vacas paridas e novilhas Nelore entre 12 e 16 meses de idade e seus efeitos na reprodução nos experimentos do Capítulo 2. No Capítulo 3, vacas primíparas, multíparas e novilhas Nelore de dois anos foram suplementadas ou não com milho moído durante o protocolo de IATF até o diagnóstico de gestação com o intuito de avaliar a alteração nos hormônios metabólicos e seus impactos na reprodução. No Capítulo 4, multíparas Nelore de duas fazendas foram suplementadas ou não com virginiamicina adicionada ao sal mineral. Em todos os experimentos as fêmeas foram submetidas a protocolos de IATF e colocadas com touro até o fim da estação de monta, sendo que apenas nos experimentos do Capítulo 3, as fêmeas receberam segunda IATF caso estivessem vazias antes da entrada dos touros. No experimento 1 do Capítulo 2 e no experimento 1 do Capítulo 3 houve efeito linear positivo da concentração de IGF-1 no dia da inseminação na probabilidade de prenhez a IATF. Em todos os experimentos realizados, também houve efeito linear positivo da concentração de IGF-1 no dia da inseminação na probabilidade de prenhez ao final da estação de monta, exceto no experimento 2 do capítulo 2. A concentração de IGF-1 no diagnóstico de gestação apresentou efeito linear negativo na probabilidade de prenhez em quatro estudos. O efeito do GH ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The metabolic hormones IGF-1, GH and leptin change according to nutritional managmentof the herd. The aim of these trials was to measure the concentration of these metabolic hormones in 12-16 months old Nellore heifers and multiparous cows and associate with the reproduction performance in experiments of Chapter 2. In Chapter 3, 2-years old heifers, primiparous and multiparous Nellore cows received or not ground corn starting in the begginning of TAI protocol until pregnancy check on day 30 to associate with metabolic hormones and reproduction. In Chapter 4, multiparous Nellore cows of two farms were supplemented or not with virginiamycin in mineral salt and the association with metabolic hormores and reproduction was evaluated. In all studies TAI was performed and bulls stayed from 7 days after TAI until the end of breeding season, except on trials of Chapter 3, which second TAI was performed in open cows before being exposed to bulls. In experiment 1 of Chapter 2 and experiment 1 of chapter 3 there was a linear positive effect of IGF-1 concentration on day of insemination on TAI pregnancy rate. In all trials, IGF-1 concentrations on insemination had a linear positive effect on pregnancy rate in the end of breeding season, except in experiment 2 of chapter 2. The IGF-1 concentrations on pregnancy rate had a linear negative association with TAI pregnancy rate in 4 studies. Concentraions of GH and leptin had no consistent association with reproduction rates. Corn supplementation did not alter TAI pregnancy rate, but tended to improve pregnancy rate on second AI and increased final pregnancy rate in primiparous cows, reduced final pregnancy rate in multiparous cows and increased weaning rate of primiparous calves supplemented with corn. Virginiamycin supplementation did not increase TAI and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2016-02-05T18:29:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-04-30. Added 1 bitstream(s) on 2016-02-05T18:33:47Z : No. of bitstreams: 1 000855269_20160630.pdf: 286543 bytes, checksum: 5020c7c1a34954f8c74ab47264e00554 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-07-01T13:02:22Z: 000855269_20160630.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:03:18Z : No. of bitstreams: 1 000855269.pdf: 729163 bytes, checksum: e2cf9859667e5147b04332c894c07c5a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O fator de crescimento semelhante à insulina-1 recombinante-3 (IGF-LongR3), um análogo sintético do IGF-1 de maior biodisponibilidade, ainda não foi utilizado no meio de maturação in vitro (MIV) de complexos cumulus-oócito (CCOs). Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar e comparar os efeitos da adição de IGF-LongR3 e do fator de crescimento semelhante à insulina-1 (IGF-1) na MIV de CCOs bovinos, sobre a progressão meiótica, apoptose e expressão de genes nos oócitos (GDF9, BMP15, BAX, BCL2, OOSP1, IGFBP2, IGBFP4 e IGFBP5) e respectivas células do cumulus (AREG, EGFR, FSHR, COX2, BAX, BCL2, IGFBP2, IGFBP4 e IGFBP5). Ovários bovinos foram coletados em abatedouro, sendo selecionados 739 CCOs após aspiração de folículos de 2-8mm de diâmetro. A MIV foi realizada em meio base de maturação contendo IGF-1 (100ng/mL), IGF-LongR3 (100ng/mL), e dois grupos controles: 0,1% de álcool polivinílico (PVA) ou 10% de soro fetal bovino (SFB), durante 22-24 horas em estufa a 38,5ºC e 5% de CO2. Posteriormente os oócitos foram desnudados e preparados para a técnica de TUNEL, coloração Hoechst 33342 e RT-qPCR, intencionando-se avaliar a apoptose, maturação nuclear e a expressão gênica, respectivamente. A análise estatística foi realizada por um modelo linear de efeitos mistos, o qual relacionou a mudança de estádio de metáfase 1 para metáfase 2 e a ausência de apoptose entre os grupos experimentais, pelo programa lmer4. Os testes ANOVA e Tukey foram utilizados para análise dos resultados obtidos pelo RT-qPCR. Ao final de dez réplicas de MIV foram avaliados 339 (n= 5 réplicas) oócitos quanto à progressão meiótica e apoptose e 400 (n= 5 réplicas) quanto à expressão gênica. Não foi observada diferença significativa (P<0,05) entre os grupos experimentais com relação à progressão meiótica e apoptose. Foi possível detectar a expressão de mRNA para todos os genes avaliados nos oócitos e respectivas células... / The insuline like growth factor-1 recombinant-3 (LongR3-IGF-1) a synthetic analogue of IGF-1 with greater bioavailability has not yet been used in in vitro maturation medium of cumulus-oocyte complexes (COCs). Therefore the aim of this study was to evaluate and compare the effects of LongR3-IGF-1 and insulin-like growth factor-1 (IGF-1) addition in the IVM of bovine oocytes on meiotic progression, apoptosis, and genic expression COCs (GDF9, BMP15, BAX, BCL2, OOSP1, IGFBP2, IGBFP4 e IGFBP5) and their respectively cumulus cells (AREG, EGFR, FSHR, COX2, BAX, BCL2, IGFBP2, IGFBP4 e IGFBP5). Bovine ovaries were collected in slaughterhouse being selected 739 oocytes after aspiration of follicles from 2-8mm diameter. In vitro maturation (IVM) was performed on basic maturation medium containing IGF-1 (100 ng/ml), LongR3-IGF-1 (100ng/ml), and two control groups: 0.1% polyvinyl alcohol (PVA) or 10% fetal bovine serum (FBS), for 22-24 hours in an incubator at 38.5°C and 5% CO2. Subsequently oocytes were denuded and prepared for TUNEL technique, staining Hoechst 33342 and RT-qPCR, intending to evaluate apoptosis, nuclear maturation and gene expression, respectively. Statistical analysis was performed using a linear mixed effects model, which correlated the change in metaphase stage 1 to 2 and the absence of apoptosis among the experimental groups. ANOVA and Tukey tests were used to analyze the results obtained by RTqPCR. After ten replicas of IVM, 339 oocytes (n=5 pools) were evaluated for meiotic progression and apoptosis and 400 (n=5 pools) for gene expression. There was no statistical difference (P>0,05) between the experimental groups with respect to meiotic progression and apoptosis. It was possible to detect mRNA expression of all evaluated genes in the oocyte and its cumulus cells in all experimental groups. There was statistical difference between the group 10% FBS and IGF-1 and LongR3-IGF-1 groups for the expression of gene IGFBP4 in ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-25Bitstream added on 2014-06-13T20:13:50Z : No. of bitstreams: 1 rosa_fs_me_botib.pdf: 208583 bytes, checksum: 815e421ed7e171ad3f2ddc3c714c6710 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / The protocol called P-36 has been broad/y used to induce multiple ovulations, due to the fact that it allows fixed-time artificial insemination (FTAI), and facilitates embryo donors handling. Recent studies with P-36 protocol, have shownthat replacement of the last two doses of FSH by eCG improves embryo yield. However, after consecutive use, eCG may induce antibody and decrease bovine embryo production. The objective of the present study is to verify the efficiency of protocol P-36/eCG in Angus breed, and to test the replacement of eCG by LH in the last day of superestimulatory treatment. In experiment 1, 22 Angus cows were randomly allotted to 4 groups: LH60 (Control), LH60/eCG, LH60/LH and LH60/FSH+LH. Each donor was superovulated 3 times, in such a way that each animal received 3 of 4 treatments, totaling 17 cows in the first two groups and 16 in the others (incomplete block design). At a random stage of the estrous cycle (DO), the embryo donors received an intravaginal device (lVO) containing 1.0 9 of progesterone and estradiol benzoate (3.0 mg, i.m.). In the control group the animais were superestimulated with pFSH (i.m., total dose = 200 mg) twice a day in decreasing doses from 04 to 7, whereas in groups LH60/eCG and LH60/LH the last two doses of FSH were replaced by eCG (i.m, total dose = 400 lU) or LH (i.m., total dose = 2.0 mg), respectively. Finally, the cows trom group LH60/FSH+LH received two doses of 1.0 mg of LH simultaneously with the last two doses of FSH. Ali animais were treated with dc1oprostenol (150 mg, i.m.) on day 6, and the IVD was removed 36 h after PGF2a administration. Ovulation was induced with 12.5 mg of pLH (i.m.), on day 8, and the animais were FTAI 12 and 24 h after pLH. In experiment 2, 17 cows were randomly allocated in 3 groups: LH48, LH60 and LH48/FSH+LH. The difference between the first and the second experiment is that in groups LH48 and LH48/FSH+LH ... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-05Bitstream added on 2014-06-13T19:22:37Z : No. of bitstreams: 1 souza_wj_dr_jabo.pdf: 513241 bytes, checksum: 3c1539fc3f14169cf4056ce94931dea2 (MD5) / Este trabalho teve como objetivo analisar parâmetros clínicos, alterações sorológicas e qualidade do sêmen de touros jovens infectados experimentalmente com o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) entre os dias 0 e 49 pós-inoculação (PI), com o intuito de caracterizar as manisfestações que direcionam o diagnóstico, nas diversas fases de infecção. Neste experimento foram utilizados 12 touros com aproximadamente 30 meses de idade. Seis animais foram inoculados com a amostra padrão Nebraska do BoHV-1 pelas vias intranasal e intraprepucial com 10 mL de suspensão viral (107,0TCID50/mL) repartidos 5 mL em cada via. Os outros seis animais ficaram como grupo controle. Todos os touros inoculados com o BoHV-1 apresentaram edema e hiperemia no prepúcio entre o terceiro e o décimo sexto dia pi, dos quais dois também apresentaram exsudato nasal, detectado entre o terceiro e o oitavo dia PI. Nenhum dos animais do grupo controle manifestou sinais clínicos da doença. Por meio da técnica de virusneutralização (VN) foram detectados títulos de anticorpos com valores entre 4 e 512 em todos os animais inoculados, no período entre 14º e 49º dia PI. Em todos os animais inoculados foi constatada a presença de material genético do BoHV-1 nas amostras de sêmen analisadas por meio da técnica da reação em cadeia pela polimerase (PCR). Em quatro desses animais foi detectado o material genético viral aos 7,14 e 21 dias PI e em dois animais o material genético do vírus foi identificado por mais uma semana, ou seja, até o 28º dia PI. Todos os animais do grupo controle apresentaram resultados negativos nas técnicas de VN e PCR. Em relação à qualidade do sêmen, não foram observadas diferenças estatísticas (p≥0,05) entre o grupo de touros controle e o grupo de touros inoculados experimentalmente com o BoHV-1, por meio das... / This study aimed to analyze clinical parameters, serological alterations and quality from the semen of young bulls experimentally infected with type 1 bovine herpes virus (BoHV-1) between days 0 and 49 post-inoculation (P. I.), in order to characterize the manifestations that orientate diagnosis, in several phases of infection. Twelve bulls were used in this experiment, all being approximately 30 months old. Six animals were inoculated with the Nebraska standard sample of BoHV-1 through intranasal and intrapreputial routes, each with 10 ml of the viral suspension (total dosage of 107.0TCID50/ml) divided in 5 ml for each route. The other six animals were used as a control group. All bulls inoculated with BoHV-1 presented edema and hyperemia on the foreskin between the third and sixteenth days after the inoculation, from which two animals also presented nasal exudate, detected between the third and eighth days P. I. No animals from the control group manifested any clinical signs characteristic of the infection caused by BoHV-1. By means of the viral neutralization (VN) technique, antibody titers with values ranging from 4 to 512 were detected in all inoculated animals between days 14 and 49 after the inoculation. In all inoculated animals, genetic material of BoHV-1 was present in semen samples analyzed by means of the polymerase chain reaction (PCR) technique. In four of these animals, viral genetic material was detected on days 7, 14 and 21 P. I. and in two animals the genetic material of the virus was identified for one more week, until day 28 after the infection. All animals in the control group showed negative results for the previously mentioned VN and PCR techniques. Considering the quality of semen samples from experimental bulls, no statistical differences were observed (p ≥ 0.05) between the control group and the group... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:26:14Z : No. of bitstreams: 1 bertipaglia_eca_dr_jabo.pdf: 1381681 bytes, checksum: 745ba23720e8cec6ab76449426629614 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos das características do pelame e da taxa de sudação (TS) sobre o desempenho reprodutivo de vacas da raça Braford e estimar as herdabilidades e correlações genéticas destas características. Dados da TS, espessura da capa (E), refletância da superfície da capa (R), comprimento dos pêlos (C), diâmetro dos pêlos (D) e número de pêlos por unidade de área (N) foram observados. Ainda, foram avaliadas as seguintes variáveis da reprodução: intervalo de partos (IEP); dias para o parto (DPP); idade ao primeiro parto (IPP); taxa de detecção de cio (Dcio); taxa de gestação para a primeira inseminação (G1IA) e taxa de gestação para a estação de monta (GEM). Os dados de desempenho reprodutivo referem-se aos partos dos anos de 2003 e 2004. Foram avaliadas as inseminações referentes às gestações da estação de monta do período de outubro de 2003 a janeiro de 2004. Durante este período, foram observadas temperatura máxima do ar (Ta), pressão parcial de vapor (Pv) e carga térmica radiante (CTR). As variáveis contínuas (todas as características do pelame, TS, IEP, DPP e IPP) foram analisadas pelo método dos quadrados mínimos. Os seguintes efeitos fixos foram considerados no modelo de todas as características do pelame: pais; grupos de contemporâneos; mês da observação; genótipo e idade. O pai da vaca foi importante para todas as características do pelame, exceto para N. Grupos de contemporâneos afetou todas as variáveis, o mês afetou a variação do C e da R. O genótipo foi importante para C, D e R e a idade afetou R. Na análise da TS foram considerados: grupos de contemporâneos; pais; genótipo; E; C; D; N; R; hora da observação; idade; Ta; Pv e CTR. Todos os fatores meteorológicos e grupos de contemporâneos foram significativos... / This study deals with the effects of hair coat characteristics and sweating rate on reproduction of Braford cows and estimation of heritabilities and genetic correlations of these traits. Data on hair length (L), coat thickness (T), hair diameter (D), number of hairs per unit area (N), coat reflectance (R) and sweating rate (SR) were recorded. In addition, calving interval (CI); days to calving (DC); age at first calving (AFC); Estrous detection rate (EDR); conception rate at first insemination (CR1AI) and conception rate at breeding season (CBS) were evaluated. The continuous data were analyzed by least squares methods; considering the following fixed effects on the model for hair coat traits: sires and contemporary groups; month; genotype and age. The effect of sire was important for all hair coat traits, except for N; contemporary groups affected all hair coat traits; the effect of sampling month was important for L and R; genotype affected L, D and R; age was important only for R. The model of SR considered the following fixed effects: contemporary groups; sires; genotype; T, L, D, N, R; time of day, age, air temperature (Ta), partial vapour pressure (Pv) and radiant heat load (RHL). All the meteorological factors and contemporary groups were significant on SR. Age at calving, genotype, sire, R, T, L, N, D and SR were considered as fixed effects on analyses of CI. For the analyses of DC were considered: R, T, L, N, D, SR, genotype, age and sire. Age, genotype and SR were significant on CI and DC. Age at first calving of heifers born from January to March (AFC1) and from July to October (AFC2) were analyzed. Only sire was significant on AFC1; sire, E and D affected the variation of AFC2. The binary traits EDR; CR1AI and CBS were analyzed by logistic regression models...(Complete abstract, acess undermentioned eletronic address)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-06-30Bitstream added on 2014-06-13T20:46:12Z : No. of bitstreams: 1 gioso_mm_dr_botfmvz.pdf: 475750 bytes, checksum: 62611c7cad05a1587e0b6368d179605c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Vários produtos à base de GnRH são efetivos em protocolos de Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF). Entretanto, o Acetato de Fertirelina é um análogo deste hormônio cujas informações sobre sua ação na dinâmica folicular dos bovinos são poucas, principalmente nas condições brasileiras. Este trabalho teve como objetivo comparar a eficiência de duas doses de Acetato de Fertirelina para sincronização da emergência da onda de desenvolvimento folicular e ovulação, em vacas leiteiras submetidas ao protocolo Ovsynch. Utilizaram-se 77 vacas, a partir dos 60 dias pós-parto e escore corporal entre 2,5-4,0. Os animais apresentavam população folicular e corpo lúteo (CL) característico (Classe 1) ou ausência de CL, porém presença de pelo menos um folículo com diâmetro >10mm (Classe 2). As fêmeas foram distribuídas aleatoriamente em quatro tratamentos. Em conclusão, as concentrações séricas de progesterona e estradiol, taxas de sincronização, ovulação e prenhez demonstraram que o Acetato de Fertirelina foi eficiente em provocar a emergência da onda folicular e induzir a ovulação, nas doses de 50 ou 100mg, sugerindo que doses de 50mg de Fertirelina podem ser indicadas sem comprometimento nos resultados finais do programa. / Many similar products to GnRH are effective in protocols of fixed timed artificial insemination (FTAI). However, Fertirelin Acetate is an analog of this hormone whose information about action in the bovine follicular dynamics is inconsistent, mainly in brazilian conditions. Therefore, the objective of this work was to compare the efficiency of two doses of Fertirelin used for synchronization of follicular wave emergence and ovulation, in dairy cows submitted to Ovsynch protocol. Seventy seven lactating dairy cows, on over of 60 days postpartum and body score of 2.5 to 4.0. The animals presenting a reasonable number of follicles either a presence of CL (group 1) or without CL but at last =10 mm follicles (group 2). The females were randomly distributed in four treatments. The pregnancy rates were also similar (P>0.05) with mean of 28.37%. In conclusion, Progesterone and Estradiol concentrations, follicular wave synchronization, induction of ovulation and pregnant rates demonstrate that Fertirelin was efficient in inducing a new follicular wave emergency, as well as the induction of the ovulation at the end of the protocol, using the dose of either 50mg or 100 mg, suggesting that 50mg of Fertirelin can be useful without compromising the final results.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T18:46:34Z : No. of bitstreams: 1 nogueira_mfg_dr_botfmvz.pdf: 892396 bytes, checksum: 471e1cec0bdbf86073d92bc94c87f460 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Em células da teca e da granulosa, de folículos bovinos, foram detectados quatro transcritos alternativos do receptor do hormônio luteinizante (LHR). Apenas dois deles são traduzidos em proteínas funcionais com afinidades distintas em relação aos ligantes. Em humanos e símios, a isoforma completa (full-length) tem afinidade pelo LH e hCG, enquanto que a isoforma que apresenta deleção do exon 10 tem afinidade somente pelo hCG. Além disso, isoformas com deleção do exon 3 foram observadas em ratos, embora nenhum outro estudo tenha investigado essa região do gene bovino. Objetivouse com este trabalho caracterizar o padrão da expressão do gene do LHR nas células da teca e da granulosa de folículos antrais bovinos. Ovários foram coletados em matadouro, os folículos (5-14 mm) foram dissecados e as células da teca e da granulosa separadas para extração de RNA total com Trizol. As concentrações de esteróides no fluido folicular foram determinadas por radioimunoensaio (RIE). A expressão gênica do LHR foi mensurada por RTPCR semiquantitativo com oligonucleotídeos iniciadores (primers) específicos para amplificar o fragmento entre o final da região extracelular e o final da intracelular (LHRBC; primers posicionados nos exons 9 e 11). A ocorrência de transcritos alternativos oriundos do início da região extracelular (LHRA; primers posicionados nos exons 2 e 9) foi investigada mediante amplificação por RT-PCR. Como controle interno no PCR, utilizou-se a expressão da GAPDH. Paralelamente, células da granulosa cultivadas in vitro foram tratadas com 1 ou 10 ng de FSH no meio de cultura. Mediante RT-PCR, foi investigada a expressão das isoformas do LHRBC nas células da granulosa cultivadas e tratadas com FSH... / Growth of dominant follicle in the absence of circulating FSH and the events following the LH surge that culminate in ovulation, are dependent on the interaction between LH and its receptor (LHR). Four LHR alternative transcripts were described in theca and granulosa cells from bovine follicles. Only two of them can be translated to functional proteins (receptors coupled with G protein) with different affinities to their ligands. In humans and marmosets, the full-length isoform has affinity to both LH and hCG molecules, whereas the isoform with deletion of only exon 10 has affinity to hCG exclusively. Additionally, isoforms with deletion of exon 3 were observed in rats, although no previous report have investigated this region of the bovine gene. The objective of this study was to characterize the pattern of gene expression of the LHR in theca and granulosa cells from bovine antral follicles. Additionally, LHR expression was determined in cultured granulosa cells under FSH treatment. From ovaries collected in abattoir, antral follicles were dissected (5 to 14mm of diameter), and samples of theca and granulosa cells were obtained to total RNA extraction (Trizol protocol). Steroids concentrations in the follicular fluid were determined by RIA. Gene expression of LHR was measured by semiquantitative RT-PCR with specific primers to amplify part of extracellular region (LHRA; primers annealing on exons 2 and 9) and the fragment from the end of extracellular region, including the transmembrane domain and finishing near the end of intracellular region (LHRBC; primers annealing on exons 9 and 11). As internal control of the PCR, it was used GAPDH expression. Cultured granulosa cells were treated with 0, 1 or 10 ng of FSH (3 replicates each dose). As in vivo and positive control, theca cell sample was utilized to comparison... (Complete abstract, access undermentioned electronic address)

Resumo: Está sendo amplamente difundida no Brasil e no mundo a sexagem de sêmen bovino através de citometria de fluxo. Considerando que não só o processo de criopreservação como também o processo de separação causam danos às células, esses danos têm sido amplamente estudados buscando-se alcançar maior proteção para o sêmen sexado durante a congelação. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma metodologia de congelação de sêmen sexado bovino com a utilização de dois diferentes diluentes. Para isso, 2 ejaculados de 10 touros em idade reprodutiva foram coletados em vagina artificial, avaliados e preparados para a separação por citometria de fluxo. Após a passagem pelo citômetro, as amostras foram divididas em 3 grupos (diferentes metodologias). Todos os grupos foram divididos em 2 subgrupos (diferentes diluentes: TRIS meio extensor padronizado pelo laboratório em questão e o diluente Botu- Bov®, meio extensor comercializado no Brasil Biotech Botucatu). Para o grupo 1 (GI) a medotologia utilizada foi a mesma padronizada pelo protocolo Sexing Technologies do Brasil; para o grupo 2 (GII), foi utilizado glicerol para o inicio da refrigeração; e para o grupo 3 (GIII) a glicerilização foi realizada a 18ºC e não a 5ºC como no controle (GI). A avaliação do sêmen foi realizada através de análise computadorizada (CASA) e por sondas fluorescentes para função mitocondrial e integridade da membrana plasmática e acrossomal. Para análise estatística utilizou-se o método Tukey com nível de significância p<0,05...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The sexed semen using flow citometry has been widely spread in Brazil and all over the world. The damage caused by the process of cryopreservation and separation is well known. Therefore, the sexed semen needs a higher protection during freezing process. The aim of the present study was to develop a bovine sexed semen freezing methodology with two different extenders. Thus 2 ejaculates of 10 bulls in reproductive age were collected with artificial vagina, analyzed and than prepared for the separation with flow citometry. After this procedure the samples were divided in 2 groups (different methodologies) and both groups were divided in 2 subgroups (different extenders: TRIS and Botu- Bov®). For group 1 (GI) the methodology applied was the same standardized by the protocol of Sexing Technologies of Brazil; for group 2 (GII) it was used glycerol for the beginning of the freezing and for group 3 (GIII) addition of glycerol was made at 18°C. The semen evaluation was made through CASA and fluorescent probes for the plasmatic and acrossomic membrane integrity and mitochondrial function. The statistic analysis was achieved using the Tukey method with significant level p < 0,05. There was no significant statistic difference for the analyzed parameters in regard to the methodology used; only the percentual of intact plasmatic membrane from GII with TRIS presented a smaller value compared to the other groups, also using TRIS. A significant difference between the extenders occurred in the main parameters evaluated, and Botu-bov® presented better results. The Botu-Bov® extender presented higher motility and higher number of cells after percoll...(Complete abstract, click electronic address below) / Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Coorientador: José Antonio Dell'Aqua Junior / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: Frederico Ozanam Papa / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:38:44Z : No. of bitstreams: 1 freitas_cp_me_botfmvz.pdf: 357251 bytes, checksum: 6d07b31986079df6a989f919c5fd3069 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Está sendo amplamente difundida no Brasil e no mundo a sexagem de sêmen bovino através de citometria de fluxo. Considerando que não só o processo de criopreservação como também o processo de separação causam danos às células, esses danos têm sido amplamente estudados buscando-se alcançar maior proteção para o sêmen sexado durante a congelação. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma metodologia de congelação de sêmen sexado bovino com a utilização de dois diferentes diluentes. Para isso, 2 ejaculados de 10 touros em idade reprodutiva foram coletados em vagina artificial, avaliados e preparados para a separação por citometria de fluxo. Após a passagem pelo citômetro, as amostras foram divididas em 3 grupos (diferentes metodologias). Todos os grupos foram divididos em 2 subgrupos (diferentes diluentes: TRIS meio extensor padronizado pelo laboratório em questão e o diluente Botu- Bov®, meio extensor comercializado no Brasil Biotech Botucatu). Para o grupo 1 (GI) a medotologia utilizada foi a mesma padronizada pelo protocolo Sexing Technologies do Brasil; para o grupo 2 (GII), foi utilizado glicerol para o inicio da refrigeração; e para o grupo 3 (GIII) a glicerilização foi realizada a 18ºC e não a 5ºC como no controle (GI). A avaliação do sêmen foi realizada através de análise computadorizada (CASA) e por sondas fluorescentes para função mitocondrial e integridade da membrana plasmática e acrossomal. Para análise estatística utilizou-se o método Tukey com nível de significância p<0,05... / The sexed semen using flow citometry has been widely spread in Brazil and all over the world. The damage caused by the process of cryopreservation and separation is well known. Therefore, the sexed semen needs a higher protection during freezing process. The aim of the present study was to develop a bovine sexed semen freezing methodology with two different extenders. Thus 2 ejaculates of 10 bulls in reproductive age were collected with artificial vagina, analyzed and than prepared for the separation with flow citometry. After this procedure the samples were divided in 2 groups (different methodologies) and both groups were divided in 2 subgroups (different extenders: TRIS and Botu- Bov®). For group 1 (GI) the methodology applied was the same standardized by the protocol of Sexing Technologies of Brazil; for group 2 (GII) it was used glycerol for the beginning of the freezing and for group 3 (GIII) addition of glycerol was made at 18°C. The semen evaluation was made through CASA and fluorescent probes for the plasmatic and acrossomic membrane integrity and mitochondrial function. The statistic analysis was achieved using the Tukey method with significant level p < 0,05. There was no significant statistic difference for the analyzed parameters in regard to the methodology used; only the percentual of intact plasmatic membrane from GII with TRIS presented a smaller value compared to the other groups, also using TRIS. A significant difference between the extenders occurred in the main parameters evaluated, and Botu-bov® presented better results. The Botu-Bov® extender presented higher motility and higher number of cells after percoll...(Complete abstract, click electronic address below)

Orientador: Samir Issa Samara / Coorientador: Carlos Frederico Martins / Coorientador: José Robson Bezerra Sereno / Banca: Luis Antonio Mathias / Banca: Iveraldo dos Santos Dutra / Banca: Karen Martins Leão / Banca: Bruna Alexandrino / Resumo: Este trabalho teve como objetivo analisar parâmetros clínicos, alterações sorológicas e qualidade do sêmen de touros jovens infectados experimentalmente com o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) entre os dias 0 e 49 pós-inoculação (PI), com o intuito de caracterizar as manisfestações que direcionam o diagnóstico, nas diversas fases de infecção. Neste experimento foram utilizados 12 touros com aproximadamente 30 meses de idade. Seis animais foram inoculados com a amostra padrão Nebraska do BoHV-1 pelas vias intranasal e intraprepucial com 10 mL de suspensão viral (107,0TCID50/mL) repartidos 5 mL em cada via. Os outros seis animais ficaram como grupo controle. Todos os touros inoculados com o BoHV-1 apresentaram edema e hiperemia no prepúcio entre o terceiro e o décimo sexto dia pi, dos quais dois também apresentaram exsudato nasal, detectado entre o terceiro e o oitavo dia PI. Nenhum dos animais do grupo controle manifestou sinais clínicos da doença. Por meio da técnica de virusneutralização (VN) foram detectados títulos de anticorpos com valores entre 4 e 512 em todos os animais inoculados, no período entre 14º e 49º dia PI. Em todos os animais inoculados foi constatada a presença de material genético do BoHV-1 nas amostras de sêmen analisadas por meio da técnica da reação em cadeia pela polimerase (PCR). Em quatro desses animais foi detectado o material genético viral aos 7,14 e 21 dias PI e em dois animais o material genético do vírus foi identificado por mais uma semana, ou seja, até o 28º dia PI. Todos os animais do grupo controle apresentaram resultados negativos nas técnicas de VN e PCR. Em relação à qualidade do sêmen, não foram observadas diferenças estatísticas (p≥0,05) entre o grupo de touros controle e o grupo de touros inoculados experimentalmente com o BoHV-1, por meio das... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to analyze clinical parameters, serological alterations and quality from the semen of young bulls experimentally infected with type 1 bovine herpes virus (BoHV-1) between days 0 and 49 post-inoculation (P. I.), in order to characterize the manifestations that orientate diagnosis, in several phases of infection. Twelve bulls were used in this experiment, all being approximately 30 months old. Six animals were inoculated with the Nebraska standard sample of BoHV-1 through intranasal and intrapreputial routes, each with 10 ml of the viral suspension (total dosage of 107.0TCID50/ml) divided in 5 ml for each route. The other six animals were used as a control group. All bulls inoculated with BoHV-1 presented edema and hyperemia on the foreskin between the third and sixteenth days after the inoculation, from which two animals also presented nasal exudate, detected between the third and eighth days P. I. No animals from the control group manifested any clinical signs characteristic of the infection caused by BoHV-1. By means of the viral neutralization (VN) technique, antibody titers with values ranging from 4 to 512 were detected in all inoculated animals between days 14 and 49 after the inoculation. In all inoculated animals, genetic material of BoHV-1 was present in semen samples analyzed by means of the polymerase chain reaction (PCR) technique. In four of these animals, viral genetic material was detected on days 7, 14 and 21 P. I. and in two animals the genetic material of the virus was identified for one more week, until day 28 after the infection. All animals in the control group showed negative results for the previously mentioned VN and PCR techniques. Considering the quality of semen samples from experimental bulls, no statistical differences were observed (p ≥ 0.05) between the control group and the group... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor