Orientador: Henrique Nunes de Oliveira / Coorientador: Iara Del Pilar Solar Diaz / Coorientador: Fabio Ricardo Pablos de Souza / Banca: Lúcia Galvão de Albuquerque / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Guilherme Costa Venturini / Banca: Wilson Malago Junior / Resumo: Características reprodutivas, como a idade à puberdade, são economicamente relevantes para sistemas de produção de carne. A ocorrência de prenhez precoce aos 16 meses (OPP) é considerada um indicador da idade à puberdade e pode ser utilizada como critério de seleção. A busca por mutações potencialmente causais em genes candidatos pode ajudar a melhorar a acurácia de predição genômica se forem inseridas em painéis de marcadores genéticos. O objetivo desse estudo foi identificar polimorfismos potencialmente causais em genes candidatos associados a características reprodutivas em novilhas, por meio de dois ensaios. No primeiro, foram sequenciadas regiões dos genes PPP3CA e FABP4 em 380 amostras de DNA provenientes de novilhas Nelore, por meio de equipamento MiSeq® (Illumina, Inc). Nestas sequências foram detectadas duas mutações na região do gene PPP3CA e 13 no gene FABP4. Dentre elas, 14 eram SNP e uma era deleção, sendo esta última homozigota em todas as amostras sequenciadas, o que nos leva a acreditar que possa ser uma mutação fixada na raça Nelore. Um haplótipo constituído por quatro SNP no gene FABP4 não teve efeito significativo ao nível de p<0,05 sobre a característica OPP. Todos os SNP que passaram pelo controle de qualidade também foram analisados, porém nenhum teve efeito significativo sobre a característica OPP (p>0,05). No segundo ensaio, foram analisadas sequências de amostras de RNA de novilhas Brangus com o objetivo de identificar polimorfismos nas regiões de 62... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fertility traits such as age at puberty are economically important for meat production system. Occurrence of early pregnancy (OPP) is considered a good indicator of age at puberty and can be used as selection criteria. The search for causal mutations in candidate genes can helpful to improve the accuracy of genomic prediction if used to design low-density chips. The objective of this study was to identify polymorphism in candidate genes associated with puberty in heifers. DNA sequences were obtained from 380 Nellore heifers from exons sequencing of PPP3CA and FABP4 genes through MiSeq® equipment (Illumina, Inc.). From these sequences were found two SNP in the region of PPP3CA gene and 13 variations in the gene FABP4. Among these 15 variations 12 were SNP and one was a deletion, and this deletion was detected in all samples sequenced, which leads us to conclude that this may be a variation between Nellore and Hereford. One haplotype consisting of four SNP located in the FABP4 and nine SNP, that were analyzed separately, had not a significant effect at the p <0.05 on OPP characteristic. Also were analyzed RNA sequences from Brangus heifers in 62 candidate genes associated with puberty with the aim to discovery SNP in these regions. Were detected 1157 SNP in the region of 46 gene. These SNP were compared with SNP detected from RNA sequences from four breeds, Angus, Brahma, Nellore and Holstein. One hundred and seventy-two SNP were matched in all breeds. From Brangus RNA sequence... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Cláudia Lima Verde Leal / Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da inibição da meiose com inibidores farmacológicos ou biológicos durante o transporte de oócitos bovinos por 6 horas sobre: 1) progressão da maturação nuclear; 2) maturação citoplasmática e 3) competência no desenvolvimento e qualidade dos embriões produzidos. Para tanto, o meio de transporte de oócitos foi suplementado com butirolactona-I (BL), milrinona (MR), IBMX e forskolina (CL) ou fluido folicular puro (FF) e o meio de maturação somente do grupo transportado com IBMX e forskolina foi suplementado com cilostamida. Os oócitos foram incubados em incubadora portátil (Minitub®) para simulação de transporte, durante 6h. Posteriormente, foram submetidos à maturação in vitro (MIV) até completar 24h e, em seguida, foram fecundados e os prováveis zigotos foram cultivados in vitro durante 7 dias. Foram feitos dois grupos controle no experimento I: MIV em 5% de CO2 em ar por 24h (C1); MIV por 6h na transportadora e mais 18h em 5% de CO2 em ar (C2). No experimento II foram feitos três grupos controle: MIV com 10% de SFB (Contr SFB); MIV com 0,6% de BSA (Contr BSA); MIV por 6h na transportadora e mais 18h em 5% de CO2 em ar (Contr Transp) No primeiro experimento foi avaliada a cinética da maturação nuclear após o transporte e durante a MIV, quando também foi avaliada a expansão das células do cumulus. As avaliações da maturação citoplasmática após o transporte e ao final da MIV foram feitas pelos seguintes parâmetros: avaliação do posicionamento de mitocôndrias, do potencial de membrana mitocondrial, do posicionamento dos microfilamentos de actina, da taxa de apoptose e do conteúdo intracelular de espécies reativas do oxigênio. No experimento 2, foi feita a avaliação da taxa de clivagem (72 hpi) e do desenvolvimento embrionário até a fase de blastocistos (168 hpi), sendo que a qualidade dos embriões foi avaliada pela contagem do número total de... / Abstract: The aim of this trial was to evaluate the effects of meiotic inhibiton with biological and pharmacological inhibitors during transportation of bovine oocytes for 6 hours in: 1) nuclear maturation progress; 2) cytoplasmic maturation and 3) embryo development and quality. Thus, the transportation media were supplemented with butyrolactone-I, milrinone, IBMX and forskolin or follicular fluid. Oocytes were transported during 6 hours and then submitted to in vitro maturation (IVM) until completing 24 hours, then they were fertilized and the presumptive zygotes cultured during 7 days. There were made two control groups in the first experiment: 24h IVM in 5% CO2 in air (C1); 6h IVM in transport and 18h more in 5% CO2 in air (C2). In the second experiment there were made three control groups: IVM with 10% FCS (Contr FCS); IVM with 0,6% BSA (Contr BSA); 6h IVM in transport and 18h more in 5% CO2 in air (Contr Transp). Experiment 1 evaluated nuclear maturation kinetics and cumulus cell expansion. Cytoplasmic maturation was also evaluated after transport and after IVM through the evaluation of mitochondria position and membrane potential, actin microfilaments distribution. Apoptotic rates and intracellular measurement of reactive oxygen species were evaluated as well. Experiment 2 evaluated cleavage (72 hpi) and blastocyst (168 hpi) rates and embryo quality by total cell number, apoptosis and caspases activity. In experiment 1 no differences (P>0.05) were observed between treatments in metaphase II rates after 24h IVM (61.2%-74.7%). Cumulus cells expansion was higher (P<0.05) in FF group after 6h and there were no differences (P>0.05) between treatments after IVM (4.8- 5.0). Actin microfilaments distribution was higher (P<0.05) in MR group for diffuse category (37.4%) after 6h IVM when compared to immature (6.4%) and FF groups (8.1%), but it was predominantly in normal category and did not differ (P>0,05) between groups after IVM ... / Mestre

Orientador: Claudia Maria Bertan Membrive / Banca: Daniel de Jesus Cardoso de Oliveira / Banca: Ricardo da Fonseca / Resumo: Na IATF e TETF o uso da gonadotrofina coriônica eqüina (eCG) é recomendado com o objetivo de incrementar as concentrações plasmáticas de progesterona (P4) e as taxas de concepção. A hipótese do presente estudo é que em fêmeas tratadas com eCG maiores concentrações de P4 são observadas no D5 e D7 (D0 = dia da IATF) em fêmeas prenhes após à IATF e no D5 e D7 (D0 = dia esperado para o estro) em receptoras prenhes submetidas à TETF. No Experimento 1, fêmeas bovinas tratadas ou não com 300UI de eCG e submetidas à IATF, tiveram as concentrações de P4 mensuradas nos dias 0, 3, 5, 7 e 10 após a IATF. No Experimento 2, todas as fêmeas foram tratadas com 300UI de eCG e submetidas à IATF, sendo mensuradas as concentrações de P4 nos dias 3, 5, 7, 12 e 17 após a IATF. No Experimento 3, receptoras tratadas com 300UI de eCG, foram submetidas à TETF, após a observação da presença ou não de estro e as concentrações de P4 foram avaliadas nos dias 5 e 7, após o dia esperado do estro. A dosagem de P4 foi realizada pela técnica de radioimunoensaio e o diagnóstico de gestação através da ultrassonografia. No Experimento 1, observou-se que animais tratados com eCG apresentaram maior concentração de P4 nos dias 0, 7 e 10. No Experimento 2, não houve diferença significativa na concentração de P4 nos dias 3, 7 e 12, entre os animais prenhes e não prenhes, entretanto no dia 17 os animais não prenhes tiveram menor concentração de P4. No Experimento 3, maiores concentrações de P4 no D7 foram observadas em animais que não apresentaram estro e maiores concentrações de P4 foram detectadas em animais prenhes no D7. Conclui-se que em fêmeas tratadas com eCG maiores concentrações de P4 não foram observadas no D5 e D7 (D0 = dia da IATF)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In FTET and FTAI the use of eCG is recommended in order to increase the synthesis of P4 and the conception rates. The hypothesis of this study is that females treated with eCG higher concentrations of P4 are observed on the D5 and D7 (D0 = day of FTAI) in pregnant females after the FTAI and on the D5 and D7 (D0 = day of expected estrus) in pregnant recipients submitted to FTET. In Experiment 1, cows treated or not with 300 IU of eCG and submitted to FTAI had the concentration of P4 measured on days 0, 3, 5, 7 and 10 after FTAI. In Experiment 2, all females were treated with 300 IU of eCG and submitted to FTAI, being measured the concentration of P4 on days 3, 5, 7, 12 and 17 after FTAI. In Experiment 3, recipients treated with 300 IU of eCG were submitted to FTET, after observation the presence or absence of estrus and measured the concentration of P4 on days 5 and 7 after the expected day of estrus. The P4 assay was performed by radioimmunoassay and pregnancy diagnosis by ultrasonography. In Experiment 1 was observed that animals treated with eCG showed higher concentration of P4 on days 0, 7 and 10. In Experiment 2 there was no significant difference in the concentration of P4 on days 3, 7 and 12 between non-pregnant and pregnant animals, since the day 17 non-pregnant animals had lower concentration of P4. In Experiment 3 highest concentrations of P4 in D7 were observed in animals that did not show estrus and higher concentrations of P4 were detected in pregnant animals on D7. It is concluded that in females treated with eCG higher concentrations of P4 were not observed in D5 and D7 (D0 = day of FTAI) in the pregnant after FTAI, however, the pregnancy rate in FTET embryos produced in vitro was... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: José Antônio Dell'Aqua / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Lucilene Delazari dos Anjos / Resumo: A sexagem de espermatozoides, para a obtenção de doses de sêmen com alta percentagem de gametas portadores do cromossomo X ou Y, torna ainda mais relevante o papel da inseminação artificial na maximização do progresso genético entre gerações, na produtividade e retorno econômico em algumas atividades pecuárias, na reprodução assistida em mamíferos e no aconselhamento genético da espécie humana. Várias são as técnicas descritas na tentativa de separar os espermatozoides por sexo, porém todas ainda estão em processo de adequação e nenhuma oferece 100% de acuidade. Baseando-se na hipótese que durante o processo de espermatogênese existem proteínas que se expressam diferentemente na membrana de espermatozoides portadores do cromossomo X ou Y, a técnica por separação utilizando anticorpos sexo-específicos vem sendo bastante estudada. Dessa forma este trabalho objetivou em estudar as proteínas de membrana expressas nos espermatozoides sexados e não sexados / Abstract: The sexing of sperm, to obtain doses of semen with a high percentage of gametes carrying the X or Y chromosome, even more relevant the role of artificial insemination in maximizing the genetic progress between generations, productivity and economic returns in some farming activities; in assisted reproduction in mammals, and in genetic counseling of the human species. Several techniques are described in an attempt to separate the sperm by sex, but all are still in process and no fitness offers 100% accuracy. Based on the hypothesis that during the process of spermatogenesis there are proteins that are differently expressed in the sperm membrane carrying the X or Y chromosome the separation technique using sex-specific antibodies have been extensively studied. Thus this work aimed to study membrane proteins expressed in sexed sperm and not sexed / Mestre

Orientador: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Coorientador: Rubens Paes de Arruda / Coorientador: Ricarda Maria dos Santos / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Sony Dimas Bicudo / Banca: Ed Hoffmann Madureira / Banca: Eneiva Carla Carvalho Celeghini / Resumo: Tem sido frequentemente demonstrado que variadas taxas de concepção podem ser obtidas de acordo com o sêmen utilizado, evidenciando uma importante variabilidade individual do reprodutor com relação à fertilidade. Além disso, as grandes dimensões dos rebanhos, associado ao intenso e crescente uso dos protocolos de IATF no Brasil, tem estimulado, cada vez mais, a prática do descongelamento simultâneo de diversas palhetas de sêmen em um mesmo descongelador. Entretanto, sob essas condições, o banho-maria do descongelador poderia atuar como ambiente de incubação para o sêmen, o que poderia influenciar a viabilidade do espermatozoide. Assim, o presente estudo teve por objetivos: 1) determinar o efeito da sequência de inseminação, após descongelamento simultâneo de diversas palhetas de sêmen, na taxa de concepção e na qualidade seminal; 2) investigar a fertilidade in vivo, bem como diversas características espermáticas in vitro, do sêmen de diferentes reprodutores utilizados no mesmo programa de IATF; 3) identificar, dentre as diversas análises laboratoriais realizadas, o grupo de características espermáticas consideradas importantes na predição da taxa de concepção. Para tal, o presente experimento foi realizado em duas etapas. A primeira etapa consistiu em um estudo a campo delineado para determinar a taxa de concepção após IATF de fêmeas pós-parto da raça Nelore (n=947), utilizando sêmen de três partidas de cada um dos três touros da raça Angus (n=9). A segunda etapa consistiu em um estudo laboratorial delineado para investigar diversas características espermáticas das doses de sêmen utilizadas no respectivo programa de IATF, utilizando as mesmas condições de descongelamento do estudo a campo. As seguintes análises laboratoriais foram realizadas: análise computadorizada do movimento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: It has been reported that different conception rates can be obtained according to the semen used, indicating a significant variability regarding sire fertility. Furthermore, the large size of reproductive herds associated with the intense use of Timed-AI protocols in Brazil, has stimulated the routine practice of simultaneous thawing of multiple semen straws in the same thawing-bath. However, under these conditions, the thawing-bath could act as an incubator environment for the semen, which could influence the sperm viability. Thus, this study aimed to: 1) determine the effect of sequence of insemination after simultaneous thawing of multiple semen straws on conception rate and semen quality; 2) investigate the in vivo fertility, as well as several in vitro sperm characteristics, from different sires used in the same Timed-AI program; 3) identify, among the several in vitro sperm variables evaluated in laboratory, the group of sperm characteristics considered important in the prediction of conception rate. Hence, this study was conducted in two experiments. The first experiment was a field study designed to determine conception rate after Timed-AI of suckled multiparous Nelore cows (n = 944) using three semen batches from three Angus bulls (n = 9). The second experiment was a laboratory study designed to investigate several sperm characteristics of semen used in the Timed-AI program, using the same thawing conditions applied in the field experiment. The following laboratory analyses were performed: computer assisted semen analysis, hypo-osmotic swelling test, sperm resistance after 2 hours of thermal incubation, sperm morphology, integrity of plasma and acrosomal membranes, plasma membrane stability, lipid peroxidation, sperm morphology and chromatin condensation. According to the present experiment, it was concluded that... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ciro Moraes Barros / Banca: Fabíola Freitas de Paula Lopes / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Resumo: Existem evidências de que os efeitos deletérios do estresse térmico calórico (ETC) sobre a fertilidade são menos pronunciados em raças tolerantes ao calor devido primariamente às diferenças na capacidade de termorregulação. Experimentos in vitro têm demonstrado que embriões zebuínos (Bos indicus) são mais resistentes ao ETC quando comparados a taurinos (Bos taurus). A fim de melhor compreender as diferenças entre zebuínos e taurinos em relação à resistência ao choque térmico, objetivou-se com o presente trabalho verificar se a resistência ao ETC é resultado da contribuição genética do oócito, do espermatozóide ou de ambos e se o intervalo de tempo entre o abate dos animais e a aspiração do oócito influencia o desenvolvimento do embrião. No experimento 1 oócitos de vacas das raças Nelore e mestiças com fenótipo predominante da raça Holandesa preto e branco (mHPB) foram coletados em frigorífico, maturados e fertilizados com espermatozóide de touros das raças Nelore (N), Angus (An), Brahman (Bra) e Gir (Gir). No experimento 2 oócitos de vacas das raças Nelore e HPB puras foram coletados em frigorífico, aspirados 4 e 6:30 horas após o abate dos animais, maturados e fertilizados com espermatozóide de touros das raças N, Gir e HPB. Em ambos os experimentos, noventa e seis horas pós-inseminação (hpi), os embriões com mais de 16 células foram separados ao acaso em dois grupos: controle e ETC. Os embriões do grupo controle foram cultivados a 39 oC continuamente e do grupo ETC expostos a 41 oC por 12 horas, retornando a seguir para 39 oC. No experimento 1 não foi observado efeito do ETC nas várias raças estudadas, não havendo portanto, redução nas taxas de blastocisto e blastocisto eclodido. As taxas de clivagem e mórula dos embriões mHPB x Gir foram inferiores (p<0,05) as das demais raças. As raças mHPB x N apresentaram taxas de blastocisto ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: There are evidences that deleterious effects of heat stress (HS) on fertility are less pronounced in breeds tolerant to high temperatures, due mainly to differences on their thermoregulatory capacity. In vitro experiments have shown that Bos indicus embryos are more resistant to HS when compared to Bos taurus. In order to better understand the differences related to heat shock resistance between Bos indicus and Bos taurus, the main objective of this study was to determine if tolerance to HS is cause by genetic contribution from the oocyte, spermatozoa or both. Additionaly, the influence of the time, between collection of ovaries in the abattoir and oocyte aspiration in the laboratory, on early embryo development was ascertained. In experiment 1, oocytes from Nellore and crossbreed Holstein cows (cHST), were collected in a local abattoir, matured and fertilized using semen from Nellore (N), Angus (An), Brahman (Bra) and Gir (Gir) bulls. In experiment 2, oocytes from Nelore and Holstein (HST) cows were collected in an abattoir and the oocytes were aspired in the laboratory 4 or 6:30 h afterwards, matured and fertilized using semen from N, Gir and HST. In both experiments, 96 h post insemination (hpi), embryos with 16 cells were separated in two groups: control and HS. In the control group the embryos were cultured at 39 oC, whereas in the HS group the embryos were submitted to 41 oC during for 12 h, and then returned to 39 oC. In experiment 1, there was no effect of HS on blastocyst and hatched blastocyst rates in all breeds studied.. The percentage of oocytes that cleaved and reached the morula stage was significantly lower (p<0.05) in cHST x Gir as compared to the other breeds. Additionaly, blastocyst rate was higher in cHST x N than in cHST x An and cHST x Gir (P<0.05). In experiment 2, cleavage, morula and blastocyst rates of Group 4 h were higher (P<0.05) as compared to Group ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Vera Fernanda Martins Hossepian de Lima / Banca: Claudia Lima Verde Leal / Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar a ação da demecolcina na composição de microtúbulos, maturação e desenvolvimento in vitro de oócitos bovinos, submetidos ao tratamento em metáfase I (MI) e metáfase II (MII). No experimento I, observamos que a concentração 0,05æg/mL foi a mais eficaz na indução de enucleação no grupo MI (15,2%) e na formação de protrusão no grupo MII (55,1%). No experimento II, verificamos manifestações da demecolcina em apenas 0,5 h de tratamento, pelo aumento significativo de categorias de oócitos sem microtúbulos. Houve nova polimerização dessas estruturas, quando oócitos expostos à droga em MII, foram cultivados em meio livre desse agente. No experimento III, evidenciamos influência negativa da demecolcina na maturação nuclear de oócitos tratados em MI, durante 12 horas (4,9% de oócitos em MII) e um diferente comportamento quanto à distribuição de grânulos corticais (GC); enquanto no grupo MI houve tendência à antecipação na migração de GC para a periferia, após 2 horas de exposição à droga, no grupo MII, observou-se nesse momento, ação prejudicial da mesma. Ainda, verificamos incompleta expansão das células do cumulus em oócitos expostos à demecolcina por 12 horas. No experimento IV, obtivemos alta eficácia da técnica de enucleação (90,6%) e grande variação quanto ao desenvolvimento até o estádio de blastocisto (12,5 a 47%), não verificando-se ação prejudicial da droga no desenvolvimento embrionário. / Abstract: The aim of this study was to evaluate demecolcine action on microtubules composition, maturation and in vitro development of bovine oocytes, submitted to the treatment in metaphase I (MI) and metaphase II (MII). In the experiment I, we observed that 0.05æg/mL was the most efficient concentration to induce the enucleation in group MI (15.2%) and protrusion formation in group MII (55.1%). In experiment II, we verified demecolcine manifestations already after 0.5 hour of treatment, supported by the significant increase of categories of oocytes without microtubules. There was new polymerization of these structures when oocytes exposed to the drug in MII were cultured in agent-free medium. In experiment III, we evidenced negative influence of demecolcine on nuclear maturation of oocytes treated on MI for 12 hours (4.9% of oocytes in MII) and a different behavior for cortical granules (CG) distribution; while in MI group there was a tendency for the anticipation of CG migration to periphery, after 2 hours of drug exposition, in the MIII group, was observed a harmful effect of the drug. Moreover, we verified incomplete expansion of cumulus cells in oocytes exposed to demecolcine for 12 hours. In experiment IV, we got high effectiveness of enucleation technique (90.6%) and wide variation for development to the blastocyst stage (12.5 to 47%), and no harmful effects of the drug on embryonic development were observed. / Mestre

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Rubens Paes de Arruda / Resumo: Recentemente, tem-se dado atenção crescente aos efeitos deletérios dos radicais livres sobre os oócitos e embriões cultivados in vitro em mamíferos. No entanto, poucos estudos foram conduzidos sobre a ação desses agentes sobre a interação entre o espermatozóide-oócito durante a fertilização in vitro (FIV). Com o intuito de melhorar os resultados da produção in vitro de embriões bovinos, este trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos da suplementação do meio de fecundação in vitro com antioxidantes cisteamina (Cist) e 2-Mercaptoetanol (2-ME) sobre a capacitação espermática, fecundação, qualidade dos zigotos e competência no desenvolvimento embrionário. Os espermatozóides apresentaram o DNA íntegro quase na totalidade entre os diferentes tratamentos e durante o tempo no processo da FIV. / Abstract: Recently, deleterious effects of free radicals over oocytes and embryos cultivated in vitro in mammals have received increasing attention. Nonetheless, few studies were conducted about the action of those agents over the interaction between the sperm-oocyte during in vitro fertilization (IVF). Aimed at improving results of in vitro production of bovine embryos, this work had as objective to evaluate the effects of supplementation of the in vitro fertilization environment with antioxidants cisteamine (Cist) and 2-Mercaptoethanol (2-ME) over the spermatic capacitation, fertilization, quality of zygotes and competency in the embryonic development. Spermatozoas exhibited an integral DNA almost in the totality of the different treatments and along the time in the IVF process. / Mestre

Orientador: Mateus José Rodrigues Paranhos da Costa / Banca: Pietro Sampaio Baruselli / Banca: Rui Machado / Banca: Alex Sandro Campos Maia / Banca: Maurício Mello de Alencar / Resumo: Esta pesquisa foi dividida em três estudos: O estudo 1 teve como objetivo avaliar o efeito do condicionamento operante com reforço positivo no temperamento de novilhas da raça Nelore. Foram utilizadas 170 novilhas da raça Nelore com idade média de 20,0±2,6 meses. Foram realizadas três avaliações, a primeira antes de iniciar o protocolo de condicionamento e após 60 (quando o protocolo de condicionamento foi finalizado) e 74 dias. A reatividade dos bovinos foi avaliada com o escore de tronco (ET) e a velocidade de fuga (VF). Foi realizada também a avaliação qualitativa do comportamento (QBA). Com base em ET foram definidas quatro classes de aprendizagem, quais sejam: (1) desejável, (2) aceitável, (3) inconstante e (4) indesejável. A VF média na primeira avaliação foi de 4,02±1,00 m/s, reduzindo para 2,88±0,6 e 2,90±1,07m, na segunda e terceira avaçiações, respectivamente. ET apresentou o mesmo padrão de distribuição que VF, com médias de 3,12±0,05; 2,92±0,05; 2,88±0,05; para cada uma das três avaiações. Não foi encontrado efeito das classes de aprendizagem na expressão dos descritores da análise qualitativa do comportamento (QBA). Concluiu-se que o protocolo de condicionamento foi eficiente em diminuir a reatividade dos animais. O objetivo do segundo estudo foi avaliar o efeito do condicionamento com reforço positivo no temperamento e na taxa de prenhez de novilhas. Foram utilizadas 46 novilhas, sendo 24 da raça Nelore e 22 cruzadas, com idade média de 24,94±3,49 meses. As novilhas foram distribuidas em dois grupos experimentais - condicionadas (C) e não condicionadas (NC). Para este estudo foram utilizados três escores visuais para avaliação do temperamento - movimentação (MOV), tensão (T) e ET, além da VF. Os testes foram aplicados em cinco momentos distintos: antes do início do protocolo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This research was divided in three studies: The first one aimed to evaluate the effect of operant conditioning with positive reinforcement on the Nellore heifers temperament; the study was.carried out with 170 Nellore heifers with 20.0±2.6 months of age, on average. Three assessments were realized, before start the conditioning protocol, and after 60 (when the conditioning protocol was finished) and 74 days. Cattle reactivity was assessed by measuring the crush score (CS) and flight speed (FS). A qualitivative behavior assessment (QBA) was also conducted. Based on the values of CS four classes of learning were defined, as follow: (1) desirable, (2) acceptable, (3) inconsistent and (4) undesirable. The FS average at the first evaluation was 4.02±1.00 m/s, decreasing to 2.88±0.6 and 2.90±1.07m, in the second and third assessments, respectively. There was effects of classes of learning on the expression of the descriptors of the qualitative behavior assessement (QBA) was not found. It was concluded that the operant condicioning protocol was effective in decreasing the animals' reactivity. The second study aimed to evaluate the effect of operant conditioning with positive reinforcement in the temperament and pregnancy rates of heifers; 46 heifers were used, being 24 Nellore, 22 crossed breeding with average age of 24.94 ± 3.49 months. The heifers were distributed into two treatments - conditioned (C) and non-conditioned (NC). For this study was used three scores for visual assessment of temperament - movement (MOV), tension (TENS), crush score (CS), to discrete measurements was used the flight speed (FS). The test was applied five times at distincts moments: before starting the operant conditioning protocol and four times after it, during the application of the fixed time artificial insemination (FTAI)... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Eunice Oba / Banca: Yeda Watanabe / Banca: Mayra D'Avila Assumpção / Banca: Fernanda Landim Alvarenga / Banca: Sony Dimas Bicudo / Resumo: Uma variedade de fatores extrinsecos como ions organicos, tampoes, composicao atmosferica gasosa, aminoacidos, fatores de crescimento, vitaminas, a acao de proteinas e macromoleculas desconhecidas podem afetar a viabilidade embrionaria. A implantacao de um sistema artificial de manutencao e desenvolvimento embrionario que simule um ambiente compativel com o fisiologico ainda e o objetivo de diversos grupos de pesquisa. O tamponamento dos meios e dependente da composicao gasosa da atmosfera de cultivo e o desenvolvimento embrionario, principalmente na fase de cultivo, sofre com as variacoes de pH verificadas durante as manipulacoes realizadas fora da estufa. Os experimentos desenvolvidos tiveram como objetivo avaliar diferentes sistemas de tamponamento para os meios de cultivo, comparando-os entre si quanto a capacidade de proporcionarem maior estabilidade de pH aos embrioes produzidos in vitro. As modificacoes propostas na composicao dos meios de cultivo foram avaliadas em duas atmosferas gasosas. Um total de 3200 ovocitos foram maturados em gotas de 100 ÊL cobertas com oleo mineral por periodo de 24 horas, agrupados em numero de 20 ovocitos por gota de meio TCM-199 com sais de Hankfs (Sigma Aldrich.), acrescido de 0,5 Êg/mL de FSH e 0,03 UI/mL de LH, 10% SFB, 20mM HEPES e antibioticos. Apos a fertilizacao, os possiveis zigotos foram submetidos ao cultivo e distribuidos de acordo com os seguintes tratamentos (T): T1: grupo controle com sistema tampao de bicarbonato de sodio do meio HTF Irvine Scientific. acrescido de aminoacidos; T2: meio SOFaa com sistema tampao composto de 25 mM de bicarbonato de sodio; T3: meio SOFaa modificado pela associacao do sistema tampao com 9 mM de bicarbonato de sodio e 4 mM de HEPES e T4: meio SOFaa modificado pela associacao do sistema tampao com 9 mM de bicarbonato de sodio e 12 mM de fosfato de sodio. Os embrioes dispostos nos (Resumo completo, clicar acesso eletronico abaixo) / Abstract: A variable interation of intrinsic and extrinsic factors such as organics ions, buffers, atmosphere composition, aminoacids, growth factors, vitamins, proteins and other unknown components may play an important role increasing the developmental potential of in vitro produced bovine embryos. The importance of the development of an artificial system to maintain embryo viability, similar and comparable with physiologic environment, has been the objective of several studies. Therefore, the majority of those studies that focus on culture media formulations were based on the physiology of in vivo produced embryo. However, the development of commercial protocols that ensure embryo quality after in vitro production (IVP) demands some adaptations while considering the differences between in vivo and in vitro produced embryos. Media buffering depends on the gaseous atmosphere utilized during culture and embryo development is sensitive to pH variation during culture, especially in manipulations in the bench. The aim of the present study was to investigate the effect of different buffer systems in the pH stability of culture medium and in the developmental capacity of IVP embryos. 3200 COCs were cultured for 24h, using 20 oocytes per 100£gL droplet in TCM 199 (with HanksLOEsalts: Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA), containing 10% fetal bovine serum, 20mM HEPES and antibiotics under sterile paraffin oil. After fertilization, the zygotes were cultivated according with treatments (T): T1- control group with NaHCO3 (sodium bicarbonate) in medium HTF Irvine ScientificãÊ; T2- group with 25 mM NaHCO3 in medium SOFaa; T3 LV group with 9mM NaHCO3 and 4 mM HEPES in medium SOFaa and T4 LV group with 9mM NaHCO3 and 12 mM sodium phosphate in medium SOFaa. The embryos were exposed in two ambient: atmosphere with 5% CO2 + 5% O2 + 90% N2 at 39ØX C ...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor