Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_11373_Tese_Nayara Gusmão Tessarollo.pdf: 2230740 bytes, checksum: 9ce20c30d9eff4b27ec5d25382ea2559 (MD5) Previous issue date: 2017-07-20 / O câncer de ovário (CAOV) configura a principal causa de morte entre os tumores ginecológicos. Apesar dos avanços significativos nas pesquisas a respeito deste tumor, o tratamento do CAOV ainda enfrenta importantes desafios, dentre eles a quimiorresistência. Dentre os potenciais alvos no tratamento do CAOV, destaca-se a fosfodiesterase 7-A (PDE7-A). Esta enzima tem como função a degradação de monofosfato de adenosina cíclico para monofosfato de adenosina. Neste contexto, este trabalho apresenta como objetivo geral investigar o papel e os possíveis mecanismos de ação da PDE7 no carcinoma ovariano. Dados prévios de RNA-seq mostraram maior expressão da enzima PDE7-A em carcinoma ovariano seroso comparado à tuba de falópio. À luz do exposto, ensaios de viabilidade celular metabólica (VCM) foram conduzidos em duas linhagens de CAOV, A2780 e OVCAR3, utilizando o inibidor seletivo da isoforma da PDE7, denominado BRL50481, em monoterapia e em associação aos quimioterápicos cisplatina (CISP) e paclitaxel (PTX). Nossos resultados mostraram que o uso do inibidor BRL50481, em monoterapia, reduziu a VCM das células A2780 em torno de 60% de modo dosedependente no tempo de tratamento de 48h. Embora o tratamento com BRL50481 em monoterapia na linhagem OVCAR3 não tenha alterado a VCM, sua associação à CISP promoveu redução da VCM na referida linhagem em 48h de tratamento. Já a associação de BRL50481 e PTX promoveu inibição da VCM em ambas as linhagens analisadas. Observou-se ainda um aumento na potência de PTX na politerapia, aspecto verificado com a diminuição da IC50 do mesmo em relação à monoterapia. Verificou-se ainda a cronologia do tratamento na sobrevivência celular. Assim, o prétratamento da linhagem A2780 com 200 μM de BRL50481, seguido do tratamento associado de BRL50481 e PTX proporcionou redução na VCM em torno de 70% comparado ao tratamento com PTX em monoterapia. Para OVCAR3, o prétratamento com 400 μM de BRL50481 proporcionou uma redução da VCM em torno de 20%. Dessa forma, nossos dados mostraram o efeito benéfico da associação entre o inibidor de PDE7 e PTX, o que possibilitou uma redução da concentração de PTX utilizada nas linhagens A2780 e OVCAR3 em cerca de 82,7x108 e 80,4x103 vezes, respectivamente. Ademais, investigou-se os possíveis mecanismos de ação envolvidos na inibição da PDE7. Foi observado que a inibição de PDE7 não afeta a progressão do ciclo celular. Ainda, a combinação de BRL50481 e PTX promoveu o aumento da necrose celular em OVCAR3. Além disso, o pré-tratamento da OVCAR3 com BRL50481 modulou a expressão gênica das citocinas IL-6, IL-1α e IL-1β, bem como aumentou a secreção de IL-6. A combinação de BRL50481 e PTX ainda modulou negativamente a via de sinalização celular PI3K/AKT/mTOR em ambas as linhagens estudadas. Adicionalmente, o pré-tratamento da A2780 aumentou a expressão da proteína pró-apoptótica Bax. Verificou-se ainda que a morte celular pode estar relacionada à indução de autofagia nos dois modelos de estudo. Também foi observado que a expressão de CLDN-16 é modulada pelas vias de PKC, PI3K/AKT e PKA e, inibindo PDE7, observou-se uma maior expressão de CLDN-16. Análises de imunohistoquímica revelaram que 80% dos casos analisados superexpressam esta proteína. Interessantemente, trata-se de uma expressão anômala posto que, todos os casos que apresentam expressão da CLDN-16, a mesma encontra-se restrita ao citoplasma das células. Estes estudos contribuíram para o melhor entendimento dos mecanismos envolvidos na proliferação celular do CAOV, possibilitando a exploração de novas estratégias terapêuticas.

Dissertação de Mestrado apresentado ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC para a obtenção do titulo de Mestre em Ciências da Saúde. / Objective: We performed a systematic review and a meta-analysis to estimate the prevalence of human papillomavirus (HPV) in ovarian cancer. Methods: A comprehensive search of the Cochrane Library, MEDLINE, CANCERLIT, LILACS, Grey literature and EMBASE was performed for papers published from January 1990 to March 2012. The following Medical Subject Headings (MeSH) terms were searched: “ovarian tumor”or “ovarian cancers” and “HPV” or “human papillomavirus”. Was included case-control and cross-sectional studies, prospective or retrospective, that evaluated clinical ovarian cancer and provided a clear description of the use of in situ hybridization (ISH), Southern blot hybridization (SBH) and Polymerase chain reaction (PCR). The statistical analysis was performed using REVMAN 5.0. Results: In total, twenty four primary studies were included in this meta-analysis. Studies from eleven countries on three continents contained data on HPV and ovarian cancer, including 889 subjects. Overall, the HPV prevalence in patients with ovarian cancer was 17.5 (95% CI, 15.0-20.0%). HPV prevalence ranged from 4.0% (95% CI, 1.7-6.3%) in Europe to 31.4% (95% CI, 26.9-35.9%) in Asia. An aggregate of four case-control studies from Asia showed an OR of 2.48 (95% CI, 0.64 - 9.57). Conclusion: We found a high prevalence of HPV-positive DNA in ovarian cancer cases, but remains inconclusive, the role of HPV in ovarian cancer. Further studies are needed to control case to answer this question. / Objetivo: Foi realizada uma revisão sistemática e uma metanálise para estimar a prevalência do Papilomavírus humano (HPV) em câncer de ovário. Métodos: Foi feita uma pesquisa abrangente da Biblioteca Cochrane, MEDLINE, CANCERLIT, LILACS, Grey literatura e EMBASE para artigos publicados a partir de janeiro de 1990 a março de 2012. Os seguintes termos (Medical Subject Headings (MeSH)) foram pesquisados: "tumor de ovário" ou "câncer de ovário" e "HPV" ou "papilomavirus humano". Foram incluídos estudos caso-controle e transversais, prospectivos ou retrospectivos, que avaliassem a presença de HPV no câncer de ovário e fornecessem uma descrição clara dos métodos laboratoriais utilizados: hibridização In situ (ISH), Southern blot (SBH) ou reação em cadeia da polimerase (PCR). A análise estatística foi realizada usando RevMan 5.0. Resultados: No total, vinte e quatro estudos primários foram incluídos nesta metaanálise. Estudos de onze países em três continentes continham dados sobre o HPV e câncer de ovário, incluindo 889 mulheres. A prevalência de HPV em pacientes com câncer de ovário foi de 17.5 (IC 95%, 15.0-20.0%).A prevalência de HPV variou de 4.0% (95% IC, 1.7-6.3%) na Europa para 31.4% (IC 95%, 26.9-35.9%), na Ásia. Um total de quatro estudos casocontrole da Ásia mostrou um OR de 2.48 (95% IC, 0.64-9.57). Conclusão: Foram encontramos uma alta prevalência de HPV-DNA positivo em casos de câncer de ovário, mas permanece inconclusivo, o papel do HPV no câncer de ovário. Mais estudos de caso-controles são necessários para determinar a associação do HPV com câncer de ovário.

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12338_Tese - Paulo Cilas Morais Lira Junior.pdf: 2589044 bytes, checksum: 296741ac94e07c977802b7850599cabc (MD5) Previous issue date: 2018-03-19 / O câncer de ovário (CaOV) configura como um câncer letal. Fatores genéticos contribuindo para o risco de desenvolvimento do CaOV têm sido investigados através dos estudos de associação ampla do genoma (GWAS), identificando loci de risco em diferentes regiões dos cromossomos, dentre eles o locus 8q21. Nesse estudo, realizamos uma análise funcional sistemática de nove SNPs candidatos para a causalidade ao CaOV no locus proximal ao gene CHMP4C. Após a caracterização da região para prováveis elementos regulatórios e genes associados, testamos os nove SNPs candidatos para atividade alelo específica para regiões com atividade de enhancer, como também testes para identificar prováveis fatores de transcrição. O SNP candidato localizado na região codificante do gene CHMP4C foi testado para instabilidade da proteína. Três SNPs foram identificados com funcionalidade alelo específica: rs35094336, rs137960856, rs1116683632. Este estudo elucidou o campo funcional da região 8q21 associado ao CaOV e identificou SNPs funcionais como possíveis mecanismos de associação ao risco de desenvolvimento da doença.

Introdução: O câncer de ovário é considerado a primeira causa de óbito entre os tumores ginecológicos. Entretanto, com os avanços nos tratamentos as pacientes com câncer de ovário apresentam uma sobrevida maior, sendo fundamental discutir sua qualidade de vida. Objetivos: Validar e analisar a confiabilidade de dois questionários existentes na literatura, a saber: EORTC-OV28 e FACT-O e avaliar a compreensão, preferência e aceitação dos mesmos. Metodologia: O estudo foi realizado nos Ambulatórios de Ginecologia Oncológica e Oncologia Clínica do Hospital do Câncer AC Camargo São Paulo. Foram analisadas 114 mulheres com diagnóstico de câncer de ovário, em qualquer estádio da doença. Para cada questionário foi analisada a consistência interna (alpha de Cronbach), a validade de constructo convergente (coeficiente de correlação de Spearman com os domínios do questionário SF-36 e HADS), a validade de constructo discriminante (comparação das médias dos escores, segundo estadiamento inicial (I e II) x avançado (III e IV), Karnosfky (80-100 por cento x 5070 por cento ), doença atual (sem evidência de doença X com evidência de doença) e tratamento atual (em tratamento e pós tratamento)) e analisado o grau de compreensão dos mesmos. A reprodutibilidade foi verificada após duas semanas e foi analisada por meio da comparação de médias (Wilcoxon), coeficiente de correlação intra-classe e gráficos de Bland-Altman. Resultados: As escalas de sintomas dos questionários EORTC-OV28 e bem estar familiar do FACT-O, respectivamente, apresentaram valor de alpha de Cronbach 0,85 e 0,79. A maioria das escalas apresentou correlação significativa com os domínios do SF-36 e HADS e foi capaz de discriminar entre os grupos de comparação. Ambos apresentaram boa compreensão. Quanto ao tempo de preenchimento o questionário EORTC-OV 28 apresentou menor média (5,10 min.). Todos os questionários apresentaram bons índices de reprodutibilidade. Conclusões: O questionário EORTC OV 28 apresentou melhores parâmetros de validade, mas as demais análises foram muito semelhantes entre os questionários. A escolha do questionário a ser aplicado pelo pesquisador dependerá dos aspectos considerados por ele relevantes na pesquisa / Introduction: Ovarian cancer is considered the main cause of death among gynecological tumors. Therefore, ovarian cancer patients have presented higher survival rates due to advances in treatments and it becomes necessary to discuss quality of life. Aim: Validate and analyze the reliability of two questionnaires in the literature, namely OV28-EORTC and FACT-O and assess comprehension, preference and acceptance. Methodology: This study was conducted in outpatient clinics of Gynecology Oncology and Medical Oncology at the Cancer Hospital AC Camargo - São Paulo. The total amount of subjects analyzed was 114 women diagnosed with ovarian cancer at any stage of the disease. Moreover, in each questionnaire, internal consistency (Cronbach\'s alpha), the convergent construct validity (Spearman correlation coefficient with domains of the SF-36 and HADS), the discriminant construct validity (comparison of mean scores of the second stage initial (I and II) x advanced (III and IV), Karnosfky (80-100 per cent vs. 50-70 per cent ), current disease (without evidence of disease X with evidence of disease), current treatment (treatment and post treatment) and degree of understanding were analysed. Reproducibility was checked after 2 weeks and analyzed by comparing means (Wilcoxon), coefficient of intraclass correlation and Bland-Altman. Results: The prognostic scales of the EORTC questionnaires OV28-and family welfare of the FACTO, had a Cronbach alpha value of 0.85 and 0.79, respectively. The majority of scales correlated significantly with the SF-36 and HADS; nonetheless, the ability of differentiation between comparison groups could be realised; therefore. both have presented good understanding. The questionnaire EORTC OV-28 had a lower average (5.10 min) in relation to the time spending to complete it. Furthermore, all questionnaires showed good levels of reproducibility. Conclusions: To sum up, the questionnaire EORTC OV 28 presented the best validity parameters, although the analysis were very similar between the questionnaires. Therefore, the investigator should firstly, consider which are the required aspects to evaluate to be able to make the correct choice

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2018. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-05-04T17:05:06Z No. of bitstreams: 1 2017_BarbaraYasminGarciaAndrade.pdf: 5450012 bytes, checksum: 8be71c305259f744cf3f0d62389cd15b (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-05-29T20:33:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_BarbaraYasminGarciaAndrade.pdf: 5450012 bytes, checksum: 8be71c305259f744cf3f0d62389cd15b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-29T20:33:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_BarbaraYasminGarciaAndrade.pdf: 5450012 bytes, checksum: 8be71c305259f744cf3f0d62389cd15b (MD5) Previous issue date: 2018-05-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / O câncer epitelial de ovário aparece como o tipo de câncer ginecológico com maior mortalidade em todo o mundo. Atualmente, o tratamento padrão é baseado na combinação de cisplatina com um taxano, porém tem como principal obstáculo para sua eficiência o desenvolvimento de resistência aos tratamentos pelas células tumorais. O docetaxel é um importante antineoplásico hidrofóbico amplamente utilizado na clínica no tratamento de tumores como mama, ovário, próstata e outros.Entretanto, sua toxidade sistêmica é alta devido ao solvente utilizado na administração, o Tween 80, responsável por agravar os efeitos adversos e provocar reações alérgicas. A associação do docetaxel com nanopartículas lipídicas sólidas mostra-se como uma opção para diminuir os problemas relacionados à aplicação biológica do docetaxel, pois permite um maior nível de absorção pelas células tumorais, além de protegê-lo da degradação dentro do organismo antes que chegue ao alvo. Esse trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antitumoral de duas formulações de nanopartículas lipídicas sólidas (NLS) associadas ao docetaxel (DTX) nas linhagens de carcinoma de ovário humano sensível A2780 e resistente ao docetaxel A2780-MDR#2 e A2780-MDR#3. Para obtenção das linhagens resistentes A2780-MDR#2 e A2780-MDR#3 foi feito a transdução das células A2780 com VLP contendo o plasmídeo retroviral com gene MDR (pHaMDR). As linhagens obtidas possuem morfologia alterada, com células maiores e crescimento em colônias, características diferentes da linhagem parental e apresentam sensibilidadereduzida ao DTX. Foi avaliado a ação citotóxica de três nanoformulações: (1) NLS-BRANCA, para verificação da citotoxidade do sistema; (2) NLS-DTX-1, formulação contendo 1 mg/mL de docetaxel; (3) NLS-DTX-2, formulação contendo 2 mg/mL de docetaxel. Como controle positivo foi utilizado o DTX livre. Com os resultados obtidos foi possível observar que as NLS-DTX-1 e NLS-DTX-2 possuem atividade citotóxica a partir de 10 ng/mL nos tempos de tratamento de 24, 48 e 72 horas e seu veículo, a NLS-BRANCA, não apresentou toxicidade significativa tanto na linhagem tumoral sensível (A2780) como nas resistentes à docetaxel (A2780-MDR#2 e A2780-MDR#3). Por microscopia de luz foi possível visualizar que o tratamento com as NLS-DTX alterou a morfologia das células A2780, tornando-as arrendondadas e menores, além de desorganizar o citoesqueleto das células, causando danos aos microtúbulos, fato esse observado por microscopia confocal a laser. Esses danos a morfologia e ao citoesqueleto se dá pela atividade estabilizadora de microtúbulos de docetaxel, o que promove a desorganização do citoesqueleto. Foi avaliado a capacidade clonogênica das células A2780 após 24 horas de tratamento com as NLS-DTX e foi visto que as células não foram capazes de se proliferar e formar colônias como ocorre naturalmente a essa linhagem. A atividade antimitótica de DTX presente nas formulações foi observada pelo impedimento da progressão do ciclo celular em G2/M. A interrupção do ciclo celular levou as células A2780 a morte celular. Portanto, com esse trabalho foi possível concluir que a associação de DTX com o nanossistema NLS é eficiente pois mostrou ação citotóxica em células de carcinoma de ovário sensíveis e resistentes à docetaxel, além de preservar a atividade antimitótica característica do fármaco. / The epithelial ovarian cancer is the most common cause of women deaths among gynecological cancers worldwide. Currently, the standard treatment is based on the combination of cisplatin with a taxane, however the efficacy of this combination faces a main obstacle: the development of resistance to treatments by tumor cells. Docetaxel is an important hydrophobic antineoplastic applied in clinical treatment for breast, ovary, prostate and solid tumors in general, but it shows high systemic toxicity due to the utilization of Tween 80 as solvent. The use of Tween 80 is responsible to increase the side effects and to cause allergic reactions. The association of docetaxel with solid lipid nanoparticles is shown as an option to enhance biological application of docetaxel, because it provides a better absorption by the tumor cells besides preventing the drug degradation within the organism before it arrives at the target. The aim of this study was to evaluate the antitumor activity of two solid lipid nanoparticle (NLS) formulations associated with docetaxel (DTX) in sensitive human ovary carcinoma A2780 cell line and resistant to docetaxel A2780-MDR#2 and A2780-MDR#3 strains. A2780-MDR#2 and A2780-MDR#3 strains were generated by transduction of A2780 cells with VLP containing retroviral plasmid with MDR gene (pHaMDR). Transduced cell lines showed altered morphology presenting bigger cells growing in colonies, different from the parental cells and were less sensitive to DTX. Cytotoxicity assay for three nanoformulations was performed: (1) NLS-WHITE, to evaluate cytotoxicity caused by the system; (2) NLS-DTX1, formulation with 1mg/mL of docetaxel; (3) NLS-DTX-2, formulation with 2 mg/mL of docetaxel. Free docetaxel was used as a positive control. The results demonstrated that NLS-DTX-1 and NLS-DTX-2 have cytotoxic activity beginning from 10 ng/mL concentration within 24, 48 and 72 hours of treatment and their vehicle, NLS-WHITE showed no significant toxicity both in the sensitive (A2780) and in resistant cell lines (A2780-MDR#2 e A2780-MDR#3). Also, the treatment with NLS-DTX altered the morphology of A2780 cells, making them rounded and smaller. This morphology damage is due to the stabilization of microtubules by the DTX, which promotes the cytoskeleton disorganization, observed by confocal microscopy. Clonogenic assay was performed with A2780 cell after 24h of treatment with NLSDTX and it was seen that these cells were not able to proliferate and make colonies, as naturally occurs in this cell line. The antimitotic activity of DTX present in the NLSDTX formulations was observed by the prevention of cell cycle progression in G2/M leading cells to death. Finally, it was possible to conclude that the association of DTX with the NLS nanosystem is an efficient treatment since it shows cytotoxic activity in sensitive ovarian tumor cells as well as in docetaxel resistant cells and keeps the antimitotic activity presented by free docetaxel.

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, para obtenção do título de Doutor em Ciências da Saúde. / The ovary cancer is the main reason for gynecological malicious disease, since its diagnostic is usually late. The study of biomarkers is an alternative for its early diagnostic. Among the biomarkers on study, comes up the mesothelin, that is a protein which is found in the serum and urine. To obtain more evidences about this matter and other medicine subjects, the Systematic Review takes place. Systematic Reviews associated to metanalysis are scientifc methods that present higher evidence over some clinical question. However, to make inferences one should take into account the existing heterogeneity among studies. The heterogeneity statistics in a metanalysis should be evaluated to avoid the production of false evidences about Health matters. The objective of the current study was to investigate the metanalysis about risk or treatments, published with high heterogeneity, just as much to evaluate the accuracy of mesothelin as a biomarker for the ovary cancer. A exaustive search was performed of scientific papers published in the year of 2012 which had significant effects and high heterogeneity, just like a search of scientific papers published between January of 1990 and June of 2015 about the mesothelin as a biomarker for the ovary cancer. To perform the quantitative systematic review, the studies should had measured the levels of mesothelin in the serum in at least two histological diagnostics: ovary cancer (ovary cancer or neighboring ones) versus beneficial or normal ovary. The quality of the studies was evaluated accordingly the QUADAS-2 analysis. The statistical analysis was performed using the statistical programs Stata 11.0, Meta-Disc® 1.4 and RevMan 5.2. It was found just one study with high heterogeneity and statistical significance. The heterogeneity's cause was the reunion of distinct methodological studies. After the reanalysis of the data from the main paper, the initial results lost statistical significance and the heterogeneity was reduced to not so important levels. In what refers to the mesothelin, twelve studies were analysed, which included 1.561 women. The pooled sensibility was 0.62 (CI 95 % 0.58-0.66) and the specificity was 0.94 (CI 95 % 0.92-0.95). The Diagnostic Odds Ratio was 38.92 (CI 95 % 17.82-84.99). Thenceforth, our systematic review showed that the mesothelin cannot suit as an isolated biomaker for the ovary cancer, and that the heterogeneity statistcs should be carefully evaluated by researchers that disclose metanalysis. / O câncer de ovário é a principal causa de morte por doenças malignas ginecológicas, uma vez que seu diagnóstico é geralmente tardio. O estudo de biomarcadores é uma alternativa para o seu diagnóstico precoce. Dentre os biomarcadores em estudo, apresenta-se a mesotelina, que é uma proteína encontrada no soro sanguíneo e na urina. Para se obter maiores evidências sobre este e outros temas da área da saúde, procede-se a realização de Revisões Sistemáticas. Revisões sistemáticas associadas à meta-análise são métodos de pesquisa que apresentam maior evidência sobre alguma questão clínica. No entanto, para a realização de inferências deve-se levar em conta a heterogeneidade existente entre os estudos. As estatísticas de heterogeneidade em uma meta-análise devem ser avaliadas para que não sejam produzidas falsas evidências sobre temáticas em saúde. O objetivo do presente estudo foi investigar meta-análises de risco ou tratamento publicadas com alta heterogeneidade e avaliar a acurácia da mesotelina como um biomarcador para o câncer de ovário. Foi realizada uma busca exaustiva de artigos científicos publicados no ano de 2012 que tiveram efeitos significativos e alta heterogeneidade, bem como uma busca de artigos científicos publicados entre janeiro de 1990 e junho de 2015 sobre a mesotelina como biomarcador para câncer de ovário. Para a realização da revisão sistemática quantitativa, os estudos deveriam ter medido os níveis de mesotelina no plasma sanguíneo em pelo menos dois diagnósticos histológicos: câncer de ovário (câncer de ovário ou limítrofe) versus ovário benigno ou normal. A qualidade dos estudos foi avaliada de acordo com a análise QUADAS-2. A análise estatística foi realizada usando-se os programas estatísticos Stata 11.0, Meta-Disc® 1.4 e RevMan 5.2. Foi encontrado apenas um estudo com alta heterogeneidade e significância estatística. A hipótese da causa da heterogeneidade foi a reunião de estudos metodologicamente distintos. Após a reanálise dos dados do artigo original, os resultados iniciais perderam a significância estatística e a heterogeneidade foi reduzida para níveis não importantes. Quanto à mesotelina, doze estudos foram analisados, que incluíram 1.561 mulheres. A sensibilidade agrupada foi de 0,62 (IC 95 % 0,58-0,66) e a especificidade foi de 0,94 (IC 95 % 0,92-0,95). A razão de chances diagnóstica foi 38,92 (IC 95 % 17,82-84,99). Portanto, nossa revisão sistemática mostrou que a mesotelina não pode servir como um biomarcador isolado para o câncer de ovário e que as estatísticas de heterogeneidade devem ser cuidadosamente avaliadas por pesquisadores que publicam meta-análises.

Introdução: O câncer de ovário é considerado a primeira causa de óbito entre os tumores ginecológicos. Entretanto, com os avanços nos tratamentos as pacientes com câncer de ovário apresentam uma sobrevida maior, sendo fundamental discutir sua qualidade de vida. Objetivos: Validar e analisar a confiabilidade de dois questionários existentes na literatura, a saber: EORTC-OV28 e FACT-O e avaliar a compreensão, preferência e aceitação dos mesmos. Metodologia: O estudo foi realizado nos Ambulatórios de Ginecologia Oncológica e Oncologia Clínica do Hospital do Câncer AC Camargo São Paulo. Foram analisadas 114 mulheres com diagnóstico de câncer de ovário, em qualquer estádio da doença. Para cada questionário foi analisada a consistência interna (alpha de Cronbach), a validade de constructo convergente (coeficiente de correlação de Spearman com os domínios do questionário SF-36 e HADS), a validade de constructo discriminante (comparação das médias dos escores, segundo estadiamento inicial (I e II) x avançado (III e IV), Karnosfky (80-100 por cento x 5070 por cento ), doença atual (sem evidência de doença X com evidência de doença) e tratamento atual (em tratamento e pós tratamento)) e analisado o grau de compreensão dos mesmos. A reprodutibilidade foi verificada após duas semanas e foi analisada por meio da comparação de médias (Wilcoxon), coeficiente de correlação intra-classe e gráficos de Bland-Altman. Resultados: As escalas de sintomas dos questionários EORTC-OV28 e bem estar familiar do FACT-O, respectivamente, apresentaram valor de alpha de Cronbach 0,85 e 0,79. A maioria das escalas apresentou correlação significativa com os domínios do SF-36 e HADS e foi capaz de discriminar entre os grupos de comparação. Ambos apresentaram boa compreensão. Quanto ao tempo de preenchimento o questionário EORTC-OV 28 apresentou menor média (5,10 min.). Todos os questionários apresentaram bons índices de reprodutibilidade. Conclusões: O questionário EORTC OV 28 apresentou melhores parâmetros de validade, mas as demais análises foram muito semelhantes entre os questionários. A escolha do questionário a ser aplicado pelo pesquisador dependerá dos aspectos considerados por ele relevantes na pesquisa / Introduction: Ovarian cancer is considered the main cause of death among gynecological tumors. Therefore, ovarian cancer patients have presented higher survival rates due to advances in treatments and it becomes necessary to discuss quality of life. Aim: Validate and analyze the reliability of two questionnaires in the literature, namely OV28-EORTC and FACT-O and assess comprehension, preference and acceptance. Methodology: This study was conducted in outpatient clinics of Gynecology Oncology and Medical Oncology at the Cancer Hospital AC Camargo - São Paulo. The total amount of subjects analyzed was 114 women diagnosed with ovarian cancer at any stage of the disease. Moreover, in each questionnaire, internal consistency (Cronbach\'s alpha), the convergent construct validity (Spearman correlation coefficient with domains of the SF-36 and HADS), the discriminant construct validity (comparison of mean scores of the second stage initial (I and II) x advanced (III and IV), Karnosfky (80-100 per cent vs. 50-70 per cent ), current disease (without evidence of disease X with evidence of disease), current treatment (treatment and post treatment) and degree of understanding were analysed. Reproducibility was checked after 2 weeks and analyzed by comparing means (Wilcoxon), coefficient of intraclass correlation and Bland-Altman. Results: The prognostic scales of the EORTC questionnaires OV28-and family welfare of the FACTO, had a Cronbach alpha value of 0.85 and 0.79, respectively. The majority of scales correlated significantly with the SF-36 and HADS; nonetheless, the ability of differentiation between comparison groups could be realised; therefore. both have presented good understanding. The questionnaire EORTC OV-28 had a lower average (5.10 min) in relation to the time spending to complete it. Furthermore, all questionnaires showed good levels of reproducibility. Conclusions: To sum up, the questionnaire EORTC OV 28 presented the best validity parameters, although the analysis were very similar between the questionnaires. Therefore, the investigator should firstly, consider which are the required aspects to evaluate to be able to make the correct choice

O câncer de ovário (OvCa) se destaca dentre as neoplasias ginecológicas por ser um dos mais letais e de difícil diagnóstico. O OvCa ocorre devido ao acúmulo de alterações celulares progressivas promovidas por mutações no genoma de uma célula que, consequentemente, alteram as complexas vias de regulação celular que respondem a fatores internos, como reprogramação genética, ou externos, como a resposta a fatores de crescimento, que juntamente com outras alterações moleculares favorecem a progressão e a metástase. Uma importante etapa da cascata metastática é a transição epitélio-mesenquimal (EMT), um processo bem orquestrado que resulta na perda do fenótipo epitelial e aquisição do fenótipo mesenquimal pelas células tumorais, que adquirem um caráter mais invasivo e migratório, além de se tornarem mais resistentes às drogas. A desregulação de fatores de transcrição como ZEB1, TWIST e SNAI1, vias de sinalização, microRNAs e fatores de crescimento incluindo EGF, TGF? e HGF podem desencadear a EMT. Após a eficiente indução da EMT com EGF na linhagem epitelial de adenocarcinoma de ovário humano Caov-3, foi realizada a análise proteômica quantitativa detalhada, baseada na análise de frações subcelulares enriquecidas em proteínas de membrana, citosol e núcleo, obtidas por centrifugação diferencial e subsequente fracionamento de proteínas por SDS-PAGE, a fim de compreender mais profundamente os mecanismos moleculares modulados pela EMT no OvCa. A partir da análise dos dados coletados em um sistema de espectrometria de massas de alta resolução acoplados a cromatografia líquida (LCMS/MS) e com o auxílio da bioinformática foram identificadas redes de interação proteína-proteína diferencialmente expressas, relacionadas principalmente com a regulação do ciclo celular e do metabolismo. A indução da EMT por EGF resultou na ativação de importantes vias de sinalização, tais como PI3K/Akt/mTOR e Ras/MAPK Erk, além da parada do ciclo celular na fase G1 regulada pelo aumento dos níveis de p21Waf1/Cip1, independentemente de p53, e diminuição de proteínas checkpoint. Através da proteômica dirigida, o monitoramento de reações múltiplas (MRM) revelou que, após a indução da EMT por EGF, o metabolismo das células Caov-3 foi alterado de uma maneira bastante peculiar. O estudo proteômico descrito permitiu a correlação entre processo da EMT induzido por EGF com o controle translacional, a regulação do ciclo celular e a alteração do metabolismo energético. / Ovarian cancer (OvCa) stands out among gynecological malignancies for being one of the most lethal and difficult to diagnose. OvCa occurs due to the accumulation of progressive cell changes promoted by mutations in the cell genome which, consequently, alter the complex cellular regulation pathways that respond to internal factors, such as genetic reprogramming, or external, such as response to growth factors, which together with other molecular changes favor the progression and metastasis. An important step of the metastatic cascade is the epithelial-mesenchymal transition (EMT), a well-orchestrated process that results in the loss of epithelial phenotype and acquisition of mesenchymal phenotype by tumor cells that acquire a more invasive and migratory character, and become more resistant to drugs. Deregulation of transcription factors such as ZEB1, TWIST and SNAI1, signaling pathways, microRNAs and growth factors including EGF, TGF? and HGF can trigger EMT. After an efficient EMT induction by EGF in the epithelial cell line of human adenocarcinoma ovarian Caov-3, detailed quantitative proteomic analysis was performed based on analysis of subcellular fractions enriched in proteins from membrane, cytosol and nucleus, obtained by differential centrifugation and subsequent fractionation of proteins by SDS-PAGE, in order to understand deeply the molecular mechanisms modulated by EMT in OvCa. From the analysis of data collected in a highresolution mass spectrometry system coupled to liquid chromatography (LC-MS/MS) and with the aid of bioinformatics were identified protein-protein interaction networks differentially expressed, mainly related to regulation cell cycle and metabolism. EGF induced-EMT resulted in the activation of major signaling pathways such as PI3K/Akt/mTOR and Ras/MAPK Erk, in addition to G1 phase cell cycle arrest regulated by increased levels of p21Waf1/Cip1, regardless of p53, and reduction of checkpoint proteins. Through the targeted proteomics, multiple reaction monitoring (MRM) showed that after EGF induced-EMT, Caov-3 cells metabolism was changed in a very particular way. The proteomic study described allowed the correlation between EMT process induced by EGF with translational control, regulation of cell cycle and the change in the energy metabolism.

O câncer de ovário (OvCa) se destaca dentre as neoplasias ginecológicas por ser um dos mais letais e de difícil diagnóstico. O OvCa ocorre devido ao acúmulo de alterações celulares progressivas promovidas por mutações no genoma de uma célula que, consequentemente, alteram as complexas vias de regulação celular que respondem a fatores internos, como reprogramação genética, ou externos, como a resposta a fatores de crescimento, que juntamente com outras alterações moleculares favorecem a progressão e a metástase. Uma importante etapa da cascata metastática é a transição epitélio-mesenquimal (EMT), um processo bem orquestrado que resulta na perda do fenótipo epitelial e aquisição do fenótipo mesenquimal pelas células tumorais, que adquirem um caráter mais invasivo e migratório, além de se tornarem mais resistentes às drogas. A desregulação de fatores de transcrição como ZEB1, TWIST e SNAI1, vias de sinalização, microRNAs e fatores de crescimento incluindo EGF, TGF? e HGF podem desencadear a EMT. Após a eficiente indução da EMT com EGF na linhagem epitelial de adenocarcinoma de ovário humano Caov-3, foi realizada a análise proteômica quantitativa detalhada, baseada na análise de frações subcelulares enriquecidas em proteínas de membrana, citosol e núcleo, obtidas por centrifugação diferencial e subsequente fracionamento de proteínas por SDS-PAGE, a fim de compreender mais profundamente os mecanismos moleculares modulados pela EMT no OvCa. A partir da análise dos dados coletados em um sistema de espectrometria de massas de alta resolução acoplados a cromatografia líquida (LCMS/MS) e com o auxílio da bioinformática foram identificadas redes de interação proteína-proteína diferencialmente expressas, relacionadas principalmente com a regulação do ciclo celular e do metabolismo. A indução da EMT por EGF resultou na ativação de importantes vias de sinalização, tais como PI3K/Akt/mTOR e Ras/MAPK Erk, além da parada do ciclo celular na fase G1 regulada pelo aumento dos níveis de p21Waf1/Cip1, independentemente de p53, e diminuição de proteínas checkpoint. Através da proteômica dirigida, o monitoramento de reações múltiplas (MRM) revelou que, após a indução da EMT por EGF, o metabolismo das células Caov-3 foi alterado de uma maneira bastante peculiar. O estudo proteômico descrito permitiu a correlação entre processo da EMT induzido por EGF com o controle translacional, a regulação do ciclo celular e a alteração do metabolismo energético. / Ovarian cancer (OvCa) stands out among gynecological malignancies for being one of the most lethal and difficult to diagnose. OvCa occurs due to the accumulation of progressive cell changes promoted by mutations in the cell genome which, consequently, alter the complex cellular regulation pathways that respond to internal factors, such as genetic reprogramming, or external, such as response to growth factors, which together with other molecular changes favor the progression and metastasis. An important step of the metastatic cascade is the epithelial-mesenchymal transition (EMT), a well-orchestrated process that results in the loss of epithelial phenotype and acquisition of mesenchymal phenotype by tumor cells that acquire a more invasive and migratory character, and become more resistant to drugs. Deregulation of transcription factors such as ZEB1, TWIST and SNAI1, signaling pathways, microRNAs and growth factors including EGF, TGF? and HGF can trigger EMT. After an efficient EMT induction by EGF in the epithelial cell line of human adenocarcinoma ovarian Caov-3, detailed quantitative proteomic analysis was performed based on analysis of subcellular fractions enriched in proteins from membrane, cytosol and nucleus, obtained by differential centrifugation and subsequent fractionation of proteins by SDS-PAGE, in order to understand deeply the molecular mechanisms modulated by EMT in OvCa. From the analysis of data collected in a highresolution mass spectrometry system coupled to liquid chromatography (LC-MS/MS) and with the aid of bioinformatics were identified protein-protein interaction networks differentially expressed, mainly related to regulation cell cycle and metabolism. EGF induced-EMT resulted in the activation of major signaling pathways such as PI3K/Akt/mTOR and Ras/MAPK Erk, in addition to G1 phase cell cycle arrest regulated by increased levels of p21Waf1/Cip1, regardless of p53, and reduction of checkpoint proteins. Through the targeted proteomics, multiple reaction monitoring (MRM) showed that after EGF induced-EMT, Caov-3 cells metabolism was changed in a very particular way. The proteomic study described allowed the correlation between EMT process induced by EGF with translational control, regulation of cell cycle and the change in the energy metabolism.

Submitted by ALINE EVANGELISTA SANTIAGO null (evalineva@hotmail.com) on 2017-12-19T17:39:39Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO PDF (1).pdf: 6165905 bytes, checksum: 0fe2e6627556b7a80341cb2a27e96540 (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2017-12-20T13:25:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santiago_ae_me_bot.pdf: 6165905 bytes, checksum: 0fe2e6627556b7a80341cb2a27e96540 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-20T13:25:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santiago_ae_me_bot.pdf: 6165905 bytes, checksum: 0fe2e6627556b7a80341cb2a27e96540 (MD5) Previous issue date: 2017-11-24 / Introdução: A concentração plasmática de citocinas, quimiocinas e micropartículas (MPs) em mulheres com câncer de mama e de ovário é uma forma não invasiva de avaliar a resposta inflamatória/regulatória sistêmica associada a esses tumores e o papel do microambiente formado na resposta pró e antitumoral na paciente. Portanto, o objetivo deste estudo foi comparar o perfil da resposta inflamatória sistêmica do câncer epitelial de ovário (CEO) e do câncer de mama através da medição de citocinas, quimiocinas e MPs, para assim avaliar se existe ou não diferença nesse padrão de resposta inflamatória sistêmica. Métodos: Noventa e quatro mulheres sem evidência de malignidade (n = 30), com câncer de mama (n = 38) ou câncer de ovário epitelial (n = 26) foram avaliadas. Foram coletadas amostras plasmáticas e de tecido tumoral. A avaliação dos marcadores inflamatórios foi realizada pela dosagem de citocinas (IL-1, IL-2, IL-6, IL-10, IL-12, IL-17A, TNF-α e IFN- ), quimiocinas (CXCL8, CXCL -9, CXCL 10, CCL 2, CCL5) e MPs (neutrófilos, leucócitos, monócitos, eritrócitos, células endoteliais, plaquetas e linfócitos) por citometria de fluxo / Cytometric Bead Array. As diferenças entre os grupos foram avaliadas por Kruskal-Wallis. As diferenças com p<0,05 foram consideradas significantes. Resultados: Os níveis plasmáticos das citocinas pró-inflamatórias IL-6 (p=<0,001), TNF-α (p=0,004) e IL-12 (p=0,0019) foram significativamente maiores em pacientes com câncer de ovário em comparação com as mulheres com câncer de mama e com o grupo controle. Pacientes com câncer de ovário foram também associadas a maiores níveis de IL-10 (p<0,001) e das quimiocinas CXCL-9 (p<0,001) e CXCL-10 (p<0,001) em comparação aos outros grupos. Os níveis de MPs derivados de neutrófilos aumentaram significativamente em amostras plasmáticas de pacientes com CEO em comparação com mulheres com câncer de mama e do grupo controle (p<0,001). Em contraste, as MPs derivadas de células endoteliais foram menores nas pacientes com CEO em comparação com os demais grupos (p=0,0491). Houve um equilíbrio entre citocinas, quimiocinas e MPs nos grupos de câncer de mama e controle. A rede de citocinas e quimiocinas inflamatórias/regulatórias em pacientes com CEO apresentou maior complexidade em relação aos demais grupos e com fortes interações nas redes entre fatores inflamatórios e imunológicos plasmáticos. Esta rede incluiu mais biomarcadores associados com correlações negativas e positivas entre eles. Conclusão: Este estudo é uma pesquisa promissora e original. Os resultados podem refletir as discrepâncias entre a carcinogênese no câncer de ovário e de mama, sugerindo um padrão inflamatório sistêmico maior no CEO. MPs podem servir como uma nova fonte de informação relacionada à doença. / Introduction: The plasma concentration of cytokines, chemokines and microparticles (MPs) in women with breast and ovarian cancer is a noninvasive way of assessing the systemic inflammatory / regulatory response associated with these tumors and the role of the microenvironment formed in the pro and antitumor response in the patient. Therefore, the objective of this study was to compare the profile of the systemic inflammatory response of epithelial ovarian cancer (EOC) and breast cancer by measuring cytokines, chemokines and MPs, in order to evaluate whether or not there is a difference in this pattern of inflammatory response systemic. Methods: Ninety-four women with no evidence of malignancy (n = 30), breast cancer (n = 38) or epithelial ovarian cancer (n = 26) were evaluated. Plasma samples and tumor tissue were collected. The evaluation of inflammatory markers was performed by the measurement of cytokines (IL-1, IL-2, IL-6, IL-10, IL-12, IL-17A, TNF-α and IFN-), chemokines (CXCL8, CXCL -9, CXCL 10, CCL 2, CCL 5) and MPs (neutrophils, leukocytes, monocytes, erythrocytes, endothelial cells, platelets and lymphocytes) by flow cytometry / Cytometric Bead Array. The differences between the groups were assessed by Kruskal-Wallis. Differences with p <0.05 were considered significant. Results: Plasma levels of the proinflammatory cytokines IL-6 (p = 0.001), TNF-α (p = 0.004) and IL-12 (p = 0.0019) were significantly higher in ovarian cancer patients compared to women with breast cancer and the control group. Patients with ovarian cancer were also associated with higher levels of IL-10 (p <0.001) and CXCL-9 (p <0.001) and CXCL-10 (p <0.001) chemokines compared to the other groups. Levels of MPs derived from neutrophils increased significantly in plasma samples of EOC patients compared to women with breast cancer and the control group (p <0.001). In contrast, MPs derived from endothelial cells were lower in patients with EOC compared to the other groups (p = 0.0491). There was a balance between cytokines, chemokines and MPs in the breast cancer and control groups. The network of inflammatory / regulatory cytokines and chemokines in patients with EOC presented greater complexity in relation to the other groups and with strong interactions in the networks between inflammatory and immunological plasmatic factors. This network included more biomarkers associated with negative and positive correlations between them. Conclusion: This study is a promising and original research. The results may reflect the discrepancies between carcinogenesis in ovarian and breast cancer, suggesting a higher systemic inflammatory pattern in the EOC. MPs can serve as a new source of disease-related information.