Orientador: Kátia Cristina Kuppper / Coorientador: Eduardo da Silva Martins / Banca: Flavia Rodrigues Alves Patricio / Banca: Margarete Camargo / Resumo: A cultura da laranja no Brasil é afetada por várias doenças, como a gomose, causada por Phytophtora nicotianae Breda de Haan (synonymous whit P. parasítica Dast.), cujo controle é comumente realizado com aplicações de fungicidas e medidas de exclusão. Porém, devido aos custos financeiros e problemas ambientais ocasionados pelo uso intenso destas aplicações, faz-se necessário a busca por métodos alternativos de controle. Este trabalho teve por objetivo avaliar 50 isolados de Trichoderma spp. como antagonista de P. nicotianae, sendo que os isolados foram avaliados, através da produção de compostos antimicrobianos por meio destes microrganismos, além da realização de um bioensaio com plântulas de alfafa. No cultivo pareado observou-se que todos os isolados inibiram o crescimento micelial do fitopatógeno. Na produção de compostos antimicrobianos, 41 isolados produziram compostos voláteis utilizando dextrose como fonte de carbono. No entanto, em estudos posteriores, foi verificado que a utilização de sacarose ou maltose como fontes de carbono, aumentou a produção destes compostos. Sete isolados de Trichoderma produziram compostos termoestáveis e 14 produziram compostos antimicrobianos livres de células do antagônico. No bioensaio com plântulas de alfafa foi observado que quatro isolados de Trichoderma inibiram a formação de esporângios e de micélios do fitopatógeno. Diante dos resultados obtidos, concluiu-se que as avaliações in vitro com relação à produção de compostos antimicrobianos pelos isolados de Trichoderma e o bioensaio com plântulas de alfafa mostraram capacidade para selecionar isolados com potencial para o controle de P. nicotianae. Os isolados TB12, TB14, TB28 e TB 30 foram os que proporcionaram maior controle da doença / Abstract: - Orange crops in the Brazil are affected by various diseases such as gummosis caused by Phytophtora nicotianae Breda de Haan (synonymous whit P. parasítica Dast.), which is controlled by chemical fungicides. However, the high costs and environmental problems caused by the intensive use of these fungicides have led to the search for alternative methods of control. The objective of this study was to evaluate the antagonistic activity of 50 Trichoderma spp. isolates against P. nicotianae by the production of antimicrobial compounds and an alfalfa seedling bioassay. The paired culture showed that all isolates tested inhibited the mycelial growth of the pathogen. In the production of antimicrobial compounds, 41 isolates produced volatile compounds using dextrose as carbon source; however, further assays showed that the use of sucrose or maltose as carbon source increases the production of these compounds. Seven isolates of Trichoderma spp. produced thermostable compounds and 14 isolates produced cell-free culture antimicrobial compounds of the antagonist. In the alfalfa seedling bioassay, four isolates of Trichoderma spp. inhibited the formation of sporangia and mycelia growth. The evaluation in vitro concerning to the antimicrobial compound production by the Trichoderma spp. isolates and the alfalfa seedling bioassay both were able to select biocontrol agents to control of P. nicotianae. The Trichoderma spp. isolates, TB12, TB14, TB28, and TB30 presented the best disease control / Mestre

Orientador: Katia Cristina Kupper / Banca: Sérgio Florentino Pascholati / Banca: João Martins Pizauro Junior / Banca: Rita de Cássia Panizzi / Banca: Sandra Regina Ceccato Antonini / Resumo: The biocontrol efficiency of Aureobasidium pullulans strain ACBL-77 was evaluated against Geotrichum citri-aurantii, the causal agent of sour rot in citrus, and their interactions were studied in vitro and in vivo. For this purpuse, were evaluated (i) the biocontrol efficiency of A. pullulans ACBL-77 against the pathogen; (ii) the effect of different culture media on the production of yeast cells; (iii) the incorporation of nutritional sources in optimizing the antagonistic activity; (iv) the competition for nutrients between the microorganisms; (v) the effect of nutrients on yeast cell and biofilm production and their relation in the biocontrol of disease; (vi) the survival of yeast in citrus fruits; (vii) the interaction between the microorganisms by scanning electron microscopy; (viii) the effect of A. pullulans applications in the citrus fruits quality; (ix) the effect of ACBL-77 in the activity of the enzymes possibly involved with resistance induction. In the results this study, were verified that in the fruits treated with A. pullulans ACBL-77, preventively, the control percentage was higher than the curative treatment. The potato-dextrose-agar medium promoted the highest amount of yeast cells. The incorporation of micronutrients, such as boric acid, cobalt chloride and ammonium molybdate (1 mM), favoured the antagonistic action of A. pullulans in vitro. Ammonium sulphate 1mM and sucrose 0.5% favoured the yeast during the competition between the microorganisms. However... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The biocontrol efficiency of Aureobasidium pullulans strain ACBL-77 was evaluated against Geotrichum citri-aurantii, the causal agent of sour rot in citrus, and their interactions were studied in vitro and in vivo. For this purpuse, were evaluated (i) the biocontrol efficiency of A. pullulans ACBL-77 against the pathogen; (ii) the effect of different culture media on the production of yeast cells; (iii) the incorporation of nutritional sources in optimizing the antagonistic activity; (iv) the competition for nutrients between the microorganisms; (v) the effect of nutrients on yeast cell and biofilm production and their relation in the biocontrol of disease; (vi) the survival of yeast in citrus fruits; (vii) the interaction between the microorganisms by scanning electron microscopy; (viii) the effect of A. pullulans applications in the citrus fruits quality; (ix) the effect of ACBL-77 in the activity of the enzymes possibly involved with resistance induction. In the results this study, were verified that in the fruits treated with A. pullulans ACBL-77, preventively, the control percentage was higher than the curative treatment. The potato-dextrose-agar medium promoted the highest amount of yeast cells. The incorporation of micronutrients, such as boric acid, cobalt chloride and ammonium molybdate (1 mM), favoured the antagonistic action of A. pullulans in vitro. Ammonium sulphate 1mM and sucrose 0.5% favoured the yeast during the competition between the microorganisms. However, the addition of ammonium sulphate at 1% in the yeast culture stimulated biofilm production and consequently increased the antagonistic activity against the pathogen in vivo. The application of A. pullulans to fruits allowed the better survival of yeast in wounded sites of citrus fruit. The yeast was found to be able to form biofilm on citrus, deforming the ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Marcelo da Costa Ferreira / Banca: Ana Lúcia Paschoa B. Barbosa / Banca: Otávio Jorge Grigoli Abi-Saab / Banca: Rita de Cássia Panizzi / Banca: Raphael de Campos Castilho / Resumo: O setor produtivo da citricultura brasileira, maior do mundo em laranjas e em suco de laranja concentrado, enfrenta intensa ocorrência de pragas e doenças. Visando manter a sua produtividade os produtores recorrem à utilização intensa de agrotóxicos nas áreas de produção. O local de ocorrência, os graus de infestação e de movimentação das pragas têm grande interferência no tratamento fitossanitário, cuja eficácia depende da distribuição do produto pela copa das plantas. São várias as causas que levam ao insucesso do tratamento fitossanitário na cultura de citros. Entre as principais, os equipamentos mal calibrados e mal dimensionados em relação ao porte das plantas de citros, associados ao projeto dos pulverizadores que proporcionam dificuldades para direcionar melhor o jato de calda às plantas. Além destes, há também consequências econômicas e ambientais relacionadas às perdas por escorrimento e por deriva da calda aplicada, verificadas até maiores do que 50% do volume aplicado. Desta forma, elaborou-se o presente projeto com o objetivo de avaliar um pulverizador envolvente, desenvolvido com base na taxa de aplicação, distribuição da calda para avaliar a deposição de calda em diferentes posições das plantas de laranja, a mortalidade do ácaro-da-leprose dos citros Brevipalpus phoenicis (Geijskes, 1939) e o controle do fungo causador da mancha preta dos citros Guignardia citricarpa Kiely [Phyllosticta citricarpa (McAlp.) van der Aa.]), definidos em função de se constituírem nos principais componentes individuais dos atuais custos de produção da citricultura paulista e por serem considerados entre os principais problemas fitossanitários da cultura na atualidade. Para as avaliações serão utilizados dois modelos de pulverizadores de arrasto tratorizados, sendo um o modelo Arbus 2000® fabricado por Máquinas Agrícolas Jacto S.A., de uso corrente na citricultura nacional, considerado ... / Abstract: The productive sector of the Brazilian citrus industry, the largest at the world in oranges and concentrated citrus juice, faces intense occurrence of pests and diseases. In an attempt to maintain its productivity it makes intense use of pesticides on orchards areas. Place to occurrence, degree of infestation and pest movement have a great influence to crop protection, which the efficiency depends on of distribution of pesticides around canopy. There are many causes that lead to failure of the treatment plant in citrus. Among the main of that the equipment poorly calibrated and rated in terms of size of citrus trees, associated with the project from the sprayers that provide difficulties to better direct sprays to plants. In addition, there are also economic and environmental consequences related to losses by runoff and drift of spraying applied, and sometimes we lose more than 50% of the volume applied. Due that, we elaborate this study to evaluate a surrounding sprayer developed in bases of application rate, spraying distribution and control of Brevipalpus phoenicis (Geijskes, 1939) and fungus Guignardia citricarpa Kiely [Phyllosticta citricarpa (McAlp.) van der Aa .]) at different positions of citrus trees, chosen to constituted greater crop protection problems and to be among the main components in current production costs of citrus in São Paulo. To evaluations will be used two models of tractor-sprayer, a model Arbus 2000® manufactured by Máquinas Agrícolas Jacto S.A., commonly used in citrus in Brazil, considered in this project as the default system (control applied), and another of model Topspray®, manufactured by Herbicat Ltda. equipment, recently launched and developed in a joint with the company and researchers including the authors of this project. The surrounding sprayer brought with it enough characteristics to be considered a viable alternative to use / Doutor

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-19Bitstream added on 2015-04-09T12:48:25Z : No. of bitstreams: 1 000819205.pdf: 7820938 bytes, checksum: b4045f963c89f07ea3405904f9001074 (MD5) / O cancro cítrico, causado pela bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), é uma das principais doenças que acometem a citricultura mundial e ataca uma ampla gama de espécies comerciais de citros, causando perdas significativas nos países produtores. A espécie de laranja doce Hamlin (Citrus sinensis) é suscetível ao cancro cítrico, enquanto a espécie de tangerina Satsuma (Citrus unshiu) é resistente. Para compreender os mecanismos moleculares relacionados aos sistemas de defesa ativados pela planta é importante identificar as alterações transcricionais de cada espécie vegetal sob estresse fitopatogênico, a fim de desvendar os elementos moleculares que são específicos de cada espécie. O objetivo do presente trabalho foi realizar uma análise comparativa temporal do transcriptoma de duas espécies cítricas contrastantes em resposta à Xac, pela técnica do RNA-Seq (Illumina). Um total de 5.673 e 6.231 transcritos diferencialmente expressos foi induzido nos tempos 24, 48 e 72 horas após a inoculação de Xac em Satsuma e Hamlin, respectivamente, enquanto 3.982 e 7.944 transcritos foram reprimidos. Deste total, 52 transcritos foram induzidos em comum, nas duas espécies, em todos os tempos de inoculação. Estes genes estão relacionados com a defesa basal da planta contra o ataque de Xac, pois apresentam genes que participam na percepção e reconhecimento do patógeno, genes que codificam fatores de transcrição e genes que participam na defesa da planta, como glucanases e proteinases. Entre os genes induzidos exclusivamente na espécie resistente Satsuma destacou-se uma proteinase aspártica. Esta proteína apresentou a maior expressão gênica no tempo 24 horas e pode estar envolvida na resistência desta espécie, visto que na espécie suscetível Hamlin, a expressão desta proteína foi menos expressiva e tardia, no tempo 48 horas. Outra resposta oposta entre as espécie foi na expressão de genes relacionados à ... / Citrus canker, caused by Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), is a one of the most important disease affecting citrus production worldwide and attacks a wide range of commercial species of citrus trees, causing significant losses in producing countries. Hamlin sweet orange (Citrus sinensis) is canker-sensitive, while Satsuma mandarin (Citrus unshiu) is canker-resistant. To understand the molecular mechanisms underlying the differences in responses to Xac, transcriptional profiles of these two genotypes following Xac attack were compared by RNA-Seq (Illumina). The purpose of this study was to examine simultaneous changes in gene expression profile during the early stages (24, 48 and 72 hpi) of citrus canker infection in Satsuma and Hamlin. A total of 5673 and 6231 up-regulated transcripts were identified at 24, 48 and 72 hpi in Satsuma and Hamlin, respectively, while 3982 and 7944 were down-regulated. Of these, 52 transcripts were up-regulated in common between both genotypes. These genes in common are related to basic defense against Xac, because there are genes involved in patogen perception and recognition, transcription factors and genes related to plant defense, such as glucanases and proteinases. Among up-regulated genes expressed only in Satsuma, aspartic proteinase was highlighted. This protein presented the highest gene expression 24 hpi and it can be involved in Satsuma resistance, since the expression of this protein was less pronounced and delayed in Hamlin. Another opposite response between these two genotypes was the expression of genes related to cell wall. Such genes were pectato lyase, extensin, cellulose sinthase, and xiloglucano endotransglycosilase. The genes were up-regulated in Satsuma, while in Hamlin, they were down-regulated. For genes related to plant defense, both genotypes up- regulated pathogenesis-related proteins, especially 72 hpi. However, the expression of these genes did not prevent the symptoms in ...

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-28Bitstream added on 2015-04-09T12:48:21Z : No. of bitstreams: 1 000818168.pdf: 338028 bytes, checksum: e610bbb669509fc3b15eadffe717b866 (MD5) / A Podridão floral dos citros (PFC), ocasionada por Colletotrichum acutatum e C. gloeosporioides, reduz consideravelmente a produção de citros nas principais áreas produtoras e a utilização de fungicidas ainda é a estratégia de controle mais eficaz. No ano de 2012 os benzimidazóis, grupo químico que por muitos anos foi importante no controle de PFC, tiveram seu uso suspenso em pomares de citros destinados à produção de suco para exportação, uma exigência de adequação aos padrões de qualidade dos EUA, principal comprador. Em decorrência disso, fez-se necessária a busca por novos fungicidas, que apresentassem boa eficiência agronômica e que atendessem às taxas de resíduos permitidas. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar novos grupos químicos de fungicidas, isoladamente ou em combinação, bem como reguladores de crescimento, indutores de resistência e fertilizantes químicos no controle da PFC, em pomares comerciais, nas safras 2012/13 e 2013/14. Os experimentos foram realizados em plantas de laranjeira „Pera‟ localizadas nos municípios paulistas de Itapetininga (IT), Santa Cruz do Rio Pardo (SC) e Casa Branca (CB). O delineamento experimental utilizado foi o de blocos casualizados (DBC), com cinco repetições. Dentre as novas estratégias de manejo foram avaliadas: i) Fungicidas dos grupos das estrobilurinas em combinação com outros grupos químicos; ii) Reguladores de crescimento aplicados isoladamente ou em combinação com reguladores hormonais e fungicidas; iii) Eficiência de misturas de estrobilurinas e triazóis, aplicadas em conjunto com reguladores hormonais e fertilizantes químicos; iv) Eficiência de clorotalonil combinado a estrobilurinas e triazóis, e v) Eficiência de Stimulate combinado a Hold e fungicida. Observou-se que fungicidas do grupo das estrobilurinas em combinação com triazóis ou clorotalonil, bem como a utilização de biorreguladores e indutores ... / The postbloom fruit drop (PFD), caused by Colletotrichum acutatum and C. gloeosporioides, considerably reduces citrus production in the main producing areas and the use of fungicides is still the most effective control strategy. In 2012 benzimidazoles, chemical group which, for many years, was important in controlling PFD, have had their use suspended in citrus orchards for the production of exportation juice, an adaptation requirement to the quality standards of the USA, the main buyer. As a result, it was made necessary to search for new fungicides enhancing good agronomic efficiency and heeding the rate of waste allowed. Thus, the aim of this study was to evaluate new chemical groups of fungicides, alone or in combination, as well as growth regulators, resistance inducers and chemical fertilizers to control PFC in commercial orchards, during 2012/13 and 2013/14 crop seasons. The experiments were performed with sweet orange 'Pera' trees located in the municipalities of Itapetininga (IT), Santa Cruz do Rio Pardo (SC) and Casa Branca (CB). The experimental design was a randomized block design (RBD) with five replications. Among the new management strategies were evaluated: i) fungicides of the strobilurin group in combination with other chemical groups; ii) growth regulators applied alone or in combination with hormonal regulators and fungicides; iii) efficiency of strobilurin and triazole mixtures applied in conjunction with hormonal regulators and chemical fertilizers; iv) efficiency of strobilurins and triazoles combined with chlorothalonil, v) efficiency Stimulate® combined to Hold® and fungicide. It was observed that fungicides of the strobilurin and triazoles groups or in combination with chlorothalonil, as well as the use of bioregulators e resistance inducers are efficient alternative preventive control of the PFC

Orientador: Katia Cristina Kupper / Banca: Ben-Hur Mattiuz / Banca: Sérgio Florentino Pascholati / Resumo: Dentre as principais doenças que ocorrem na pós-colheita em citros destacam-se o bolor verde, bolor azul e a podridão azeda, ocasionadas pelos fungos Penicillium digitatum, P. italicum e Geotrichum candidum, respectivamente. Uma alternativa para o controle destas doenças se dá por meio da utilização de leveduras. Sendo assim, objetivou-se no presente estudo isolar, selecionar e identificar leveduras de solos, folhas, flores e frutos de citros de diferentes regiões produtoras do estado de São Paulo, com potencial de aplicação como agentes de biocontrole aos fitopatógenos de pós-colheita. Foram obtidos 95 isolados de leveduras de 14 municípios do estado de São Paulo, sendo o filoplano a fonte de 90,5% dos isolados. Nos ensaios in vitro realizados com G. candidum, o ACBL-77 proporcionou o maior valor de inibição do crescimento micelial do fungo (35%) e os isolados ACBL-68 e ACB-K1 (Saccharomyces cerevisiae), os que proporcionaram maiores valores de inibições na germinação de conídios, 83 e 82%, respectivamente. Quando se avaliou o controle da podridão azeda em frutos de Laranja Pêra, três isolados (ACBL-23, ACBL-44 e ACBL-77) foram os mais eficientes no controle da doença de maneira preventiva e curativa. Em ensaios realizados in vitro com P. digitatum, cinco isolados de levedura (ACBL-76, ACBL-82, ACBL-84 e ACBL-87) proporcionaram valores de inibições do crescimento da colônia do fungo acima de 80%. Entretanto, in vivo somente dois isolados (ACBL-82 e ACBL-86) foram capazes de controlar o progresso e também a incidência da doença, quando utilizados preventivamente. Na avaliação da inibição do crescimento micelial in vitro do P. italicum, oito isolados proporcionam valores de inibições acima de 80%, sendo que o ACBL-04 proporcionou 100% de controle. Nos ensaios in vivo, quatro isolados (ACBL-04, ACBL-05, ACBL-08 e ACBL-11) foram eficientes na diminuição ... / Abstract: Among the major diseases that occur in citrus post-harvest stand out green mold, blue mold and sour rot, caused by Penicillium digitatum, Penicillium italicum and Geotrichum candidum, respectively. An alternative for the control of these diseases is through the use of yeasts. Thus, the aim of the present study was to isolate, select and identify yeasts from soil, leaves, flowers and fruits of different citrus producing regions of the São Paulo State, with potential application as biocontrol agents for postharvest pathogens. Ninety-five yeast isolates were obtained from 14 counties in the São Paulo State. The phylloplane was the source of 90.5% of the isolates. Tests conducted in vitro, with G. candidum showed that ACBL-77 presented the highest inhibition of mycelial growth (35%) and both strains ACBL-68 and ACB-K1 (Saccharomyces cerevisiae), provided the highest values of inhibitions of conidia germination, 83 and 82%, respectively. When the control of sour rot in fruits of 'Pera' sweet Orange was evaluated, three isolates (ACBL-23, ACBL-44 and ACBL-77) were the most effective in controlling the disease in a preventive and curative way. In in vitro assays with P. digitatum, five yeast strains (ACBL-76, ACBL-82, ACBL-84 and ACBL-87) inhibited the mycelial growth with values above 80%. However, when the ability of yeast to control green mold was evaluated on orange fruits, only two isolates (ACBL-82 and ACBL-86) were able to decrease the progress and also the incidence of the disease when used preventively. Eight isolates inhibited the mycelial growth of P. italicum above 80%, and the isolate ACBL-04 provided 100% of inhibition. In in vivo assays, four isolates (ACBL-04, ACBL-05, ACBL-08 and ACBL-11) were effective in reducing the progress of blue mold as well as in inhibiting the incidence of disease when applied preventively / Mestre

Orientador: Alessandro de Mello Varani / Coorientador: Rafael Marini Ferreira / Banca: Henrique Ferreira / Banca: Daniel Guariz Pinheiro / Resumo: Xanthomonas citri subsp. citri 306 (XccA) é o agente causal do cancro cítrico (CC), doença endêmica que afeta a citricultura. Durante a interação patógeno-hospedeiro o sistema de secreção tipo três (SST3) codificado pela XccA age na translocação de efetores e no estabelecimento da doença. A montagem do aparato de SST3 depende da síntese, remodelagem e degradação da parede celular bacteriana, sendo este processo realizado pela ação enzimática de transglicosilases líticas de mureína (LTs). XccA codifica diversas LTs, porém, pouco é conhecido sobre a diversidade de famílias e relação com a virulência. Dentre as LTs com provável relação com a virulência, duas ORFs parálogas presentes no cromossomo e plasmídeo pXAC64, respectivamente; são genes passageiros do TnXax1, um transposon da família Tn3, relacionado a evolução e emergência da patogenicidade nas Xanthomonadales. Portanto, este estudo objetivou elucidar o provável papel e diversidade das LTs presentes no genoma de XccA, caracterizando funcionalmente as LTs presentes em TnXax1 pela técnica de mutação sítio dirigida. Foram identificadas no genoma de XccA 13 LTs, sendo 12 pertencentes às famílias: 1A, 1B, 1C, 1D, 1F, 1G, 3A, 3B (2 cópias), 5A e 6A, e uma não classificada. A LT não classificada, é exclusiva do gênero Xanthomonas e relacionada à família 3B, porém contém um domínio adicional relacionado ao metabolismo de carboidratos. As LTs classificadas em famílias apresentam provável função relacionada com a remodelagem da par... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Xanthomonas citri subsp. citri 306 (XccA) is a causal agent of type A citrus canker (CC), one of the most devastating citriculture diseases. Type 3 Secretion Systems (T3SS) play a fundamental role in XccA pathogenicity. T3SS components are embedded in the bacterial inner and outer membrane and act as a channel for injection of effector proteins directly into the plant host cell cytosol. T3SS assembly and installation relies on bacterial cell wall synthesis, remodeling and degradation. Murein lytic transglycosylases (LT) are important in this process and are responsible for peptidoglycan cleavage and its remodeling. Information about the XccA LT arsenal is scarce: little is known about family diversity, their exact role and their connection to virulence in this bacterium. Among the LTs with probable relation to virulence, two paralogue ORFs (one in chromosome, one in pXAC64 plasmid) are passenger genes of the Tn3 family transposon TnXax1, known to play a significant role for evolution and emergence of pathogenicity in Xanthomonadales. This study addresses LT diversity in the XccA genome and examines the role of plasmid and chromosomal TnXax1 LT passenger genes using site-directed deletion mutagenesis and functional characterization. We identified 13 XccA LTs: 12 belong to families 1A, 1B, 1C, 1D (2 copies), 1F, 1G, 3A, 3B (2 copies), 5A, 6A and one which is non-categorized. This noncategorized gene, is exclusive to the Xanthomonas genus and related to the 3B family but contain... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:21:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-28. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:25:26Z : No. of bitstreams: 1 000858045.pdf: 980954 bytes, checksum: 6bcdb403af4689c3a8fd68979044e591 (MD5) / Huanglongbing (HLB) doença dos citros emergiu como a principal ameaça à produção de citros no mundo, associado com a bactéria (Candidatus Liberibacter asiaticus - Las) limitada ao floema e ao vetor (Diaphorina citri). No Brasil, o HLB foi relatado pela primeira vez em 2004 e rapidamente se espalhou para todas as regiões geográficas do Estado de São Paulo (SPS), Paraná (PR) e Minas Gerais (MG). No entanto, informações sobre a diversidade genética desta bactéria são pouco conhecidas. Aqui nós testamos a hipótese H0: ambas as regiões geográficas diferentes e espécies de citros não moldam a diversidade genética de populações de Las do Brasil. Para comprovar a hipótese, DNA de 199 amostras de plantas cítricas com sintomas de HLB foram amplificados com 9 conjuntos de iniciadores microssatélites, sendo os iniciadores diretos marcados com corantes fluorescentes. Níveis moderadamente baixos de diversidade genética (HNei = 0,11 - 0,26) foram observados em todas as populações desta bactéria. Com uso da estatística F de Wright (FST), nenhuma diferença estatística foi observada entre populações de Las de todas as sete subdivisões das regiões geográficas do SPS e de MG (FST <0,095). Mas, valores significativos de diferenciação entre populações (FST = 0,118 - 0,191) foram obtidos para populações de Las do PR comparado com as do SPS e MG. Também, valores ainda mais altos e significativos (FST = 0,275 - 0,445) foram observados comparando populações de Las em laranjeiras doce do SPS, MG e PR com as populações de diferentes espécies de citros cultivados na região Sudeste do SPS. Por meio de métodos de agrupamento realizados por estatística Bayesiana e de coordenada principal pode-se agrupar todos os isolados estudados em três populações geneticamente distintas: 1. Um grupo contempla todas as estirpes das regiões do SPS mais MG, 2. Um segundo contendo somente as estirpes de Las do PR, 3. E... / Citrus huanglongbing (HLB) disease emerged as a primary threat for citrus production worldwide, associated with the phloem and vectored (Diaphorina citri) limited - bacterium Candidatus Liberibacter asiaticus (Las). In Brazil, HLB was first reported in 2004 and quickly spread for all geographic regions of the States of Sao Paulo (SP), Parana (PR) and Minas Gerais (MG). However, information about genetic diversity of this bacterium is poorly known. Here we tested the hypothesis H0: different geographic regions and citrus species have no influence on genetic diversity of Las populations in Brazil. To test this hypothesis, total DNA from 199 samples from citrus plants with symptoms of HLB was amplified by 9 sets of forwardfluorescent microsatellites primers. Moderately low levels of genetic diversity (HNei = 0,11 to 0,26) were observed through all populations. By Wright's F-statistics (FST), no statistic difference was observed among Las populations from all the seven previously subdivided geographic regions of SP and MG (FST <0,095). But significant FST values (0,118 to 0,191) were obtained for Las population from PR compared to SP and MG. On the other hand, highest and significant values for FST index (0,275 to 0,445) were observed comparing Las populations from sweet orange trees from SP, MG, and PR and the populations from different citrus species grown at the Southeast region of SP. By Bayesian statistics and principal coordinate analysis all isolates studied were clustered in three genetically different populations: 1. a group that includes all strains from SP regions and MG, 2. A second composed only by Las strains from PR, and 3. a third where strains from different citrus species were grouped. In conclusion, after 10 years of the HLB first report in Brazil, that genetically homogeneous populations of Las infecting sweet orange are present at different geographic regions sampled, with the exception of the populations ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-15Bitstream added on 2014-06-13T19:33:26Z : No. of bitstreams: 1 dallacqua_fc_me_jabo.pdf: 321125 bytes, checksum: 095ba41139dc507b26139c5c4897dd6c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As bactérias pertencentes ao gênero Xanthomonas constituem um dos grupos de fitopatógenos mais importantes na natureza, com capacidade de infectar aproximadamente 120 tipos diferentes de plantas monocotiledôneas e 270 dicotiledôneas. A bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc) é o agente causal do cancro cítrico, uma das principais doenças dos citros. Restrita à Flórida, a mancha bacteriana dos citros, causada por Xanthomonas alfalfae subsp. citrumelonis (Xacm), afeta principalmente o citrumelo ‘Swingle’. A bactéria Xanthomonas fuscans subsp. aurantifolii (Xfa) é o agente causal das cancroses B e C, encontradas apenas na América do Sul. As técnicas mais utilizadas na diferenciação e caracterização dos patógenos bacterianos, hibridização DNA-DNA (DDH) e sequenciamento da região do DNA que codifica o RNA ribossomal 16S (rRNA 16S), são onerosas, trabalhosas, lentas e de resultados restritos, não permitindo a comparação dos resultados obtidos entre diferentes estudos laboratoriais. Por isso, a técnica de análise de sequências multilocus (MLSA), considerada rápida, barata e confiável, tem sido recomendada para a caracterização e delimitação de espécies de patógenos bacterianos, tais como as do gênero Xanthomonas, permitindo o estabelecimento das relações filogenéticas por meio de genes housekeeping. Portanto, o objetivo do trabalho foi caracterizar os isolados de Xanthomonas (Xcc-A, Xfa-B, Xfa-C e Xacm) por meio da técnica MLSA. Foram utilizados 27 isolados de Xanthomonas patogênicas a citros, sendo quatro de X. citri subsp. citri (Xcc), três de X. fuscans subsp. aurantifolli B (Xfa-B), dezenove de X. fuscans subsp. aurantifolli C (Xfa-C) e um de X. alfalfae subsp. citrumelonis (Xacm). Os genes atpD, dnaK e fusA foram utilizados como genes housekeeping e para a reação da PCR... / Bacteria belonging to the genus Xanthomonas are one of the main groups of phytopathogens in nature, capable to infecting about 120 different monocots and 270 dicots plants. Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc) is the causal agent of bacterial citrus canker, one of the major diseases of citrus. Restricted to Florida, citrus bacterial spot, caused by Xanthomonas alfalfae subsp. citrumelonis (Xacm), affects mainly citrumelo 'Swingle'. Xanthomonas fuscans subsp. aurantifolii (Xfa) is the causal agent of canker B and C, found only in South America. The most widely used techniques for the differentiation and characterization of bacterial pathogens, DNA-DNA hybridization (DDH) and analysis of DNA sequences coding for small subunit ribosomal RNAs (16S rRNA), are costly, cumbersome, slow and give limited results, do not allowing the interlaboratorial comparisons of the results. Therefore, the technique of multilocus sequence analysis (MLSA), which is considered fast, cheap and reliable, has been recommended for characterization and delineation of species of bacterial pathogens, such as the genus Xanthomonas, allowing the establishment of phylogenetic relationships between them through housekeeping genes. Therefore, the objective of this study was to characterize strains of Xanthomonas (Xcc-A, Xfa-B, Xfa-C and Xacm) using the MLSA technique. We used 27 strains of Xanthomonas pathogenic to citrus, being four Xcc, three Xfa-B, 19 Xfa- C and one Xacm. The PCR reaction was performed using the specific primers to amplify the atpD, dnaK and fusA genes. PCR products were purified, sequenced and the sequences were analyzed using the software CodenCode Aligner version 3.7.1. Phylogenetic analysis was performed using Maximum Likelihood based on the model of Tamura-Nei and using the software MEGA 5. Analyses ... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-29Bitstream added on 2014-06-13T19:42:22Z : No. of bitstreams: 1 andrade_dj_dr_jabo.pdf: 855007 bytes, checksum: 3075b77cbb230dea543d70a9287b1789 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do trabalho foi avaliar a viabilidade técnico-econômica da poda associada ao controle químico no manejo da leprose. Visou também, investigar as relações entre leprose e características da planta, bem como o efeito de sucessivas aplicações de calda sulfocálcica sobre propriedades químicas do solo. O experimento foi conduzido de 2003 a 2010, totalizando sete safras, em um pomar de laranja „Pera‟ localizado no município de Reginópolis-SP. Neste pomar foram realizadas podas severas e leves, e replantio, e aplicações de acaricidas para controlar do ácaro vetor Brevipalpus phoenicis. Realizaram-se levantamentos populacionais do B. phoenicis e de ácaros predadores, quantificação da produção, incidência e severidade da leprose, assim como a viabilidade de cada estratégia empregada foi calculada. Nas duas últimas safras do experimento realizaram-se avaliações das características físico-químicas dos frutos, análises foliares e de solo. Após as sete safras, verificou-se que a poda utilizada isoladamente não foi suficiente para o controle da leprose, sendo necessária a associação de outras táticas. A poda leve associada a acaricidas específicos foi à tática mais eficiente e viável economicamente. Os parâmetros físico-químicos de frutos não foram afetados pela alta severidade leprose na planta, indicando que os frutos que permanecem na planta até a colheita apresentam características idênticas às plantas isentas de leprose. Entretanto, embora a leprose não afete a qualidade do suco, afeta significativamente a produtividade da planta, podendo reduzi-lá a zero. As plantas com maior severidade da leprose apresentaram menores teores foliares de cálcio e maiores teores de potássio, fósforo e nitrogênio. As várias aplicações de calda sulfocálcica sobre as plantas proporcionaram maior teor de enxofre no solo nas camadas de 0-20 cm e de 20-40 cm / The aim of this work was to evaluate the technical and economic feasibility of pruning associated with chemical control in citrus leprosis management. And also investigate the relationship among the disease and properties plant, as well as the effect of successive applications of lime sulfur on chemical properties of soil. The study was conducted from 2003 to 2010, totaling seven seasons in an orange plantation of the „Pear‟ variety in the city of Reginópolis-SP. In the orchard were realized severe and light pruning over citrus trees and replanting and pesticide spraying to control Brevipalpus phoenicismite, the disease vector. There had been performed B. phoenicis and predator mite population surveys, yield evaluation, leprosis incidence, as well as the variability of each strategy was also measured. By the two last seasons during the experiment was carried out fruit physical and chemical properties evaluation, leaf and soil analysis. After seven seasons period, it was observed that the pruning only is not able to control leprosis by itself, being necessary another strategy associated. The light pruning associated to the specific acaricide application was the more efficient and economically viable. The main fruit physical and chemical parameters were not affected by the leprosis incidence, what shows that the fruit that remain on the plant until the harvest have identical characteristics to that plant free from the disease. However, although the leprosis not affect juice quality, the disease reduces production significantly. The plant presenting higher leprosis severity present lower leaf calcium content and higher potassium, phosphorus and nitrogen contents.The various lime sulfur spray on the plant had provided a highersulfur content at 0 - 20 cm and 20 - 40 cm soil depth