Orientador : Ronei Jesus Poppi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T22:49:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barboza_FernandoDias_M.pdf: 2749955 bytes, checksum: f845a9faf1d618a6a9f090127652761e (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de modelos de calibração utilizando-se a espectroscopia no infravermelho próximo de ondas curtas e a aplicação de técnicas para a transferência da calibração. Para os estudos pretendidos, foram utilizados três tipos de amostras: cachaça, xarope de refrigerantes e gasolina. Na primeira aplicação, desenvolveuse um modelo de calibração para determinação do teor alcoólico em cachaça, a uma temperatura de 20°C, com posterior utilização de técnicas de transferência de calibração para a previsão de amostras em outras temperaturas (15, 25, 30 e 35°C). O modelo de calibração apresentou erros da ordem de 0,12 % v/v de teor alcoólico, e após a aplicação dos métodos de transferência, os erros de previsão dos teores alcoólicos para as amostras nas demais temperaturas apresentaram resultados semelhantes. Na segunda aplicação, utilizando-se um espectrofotômetro HP 8453, foi desenvolvido um modelo de calibração para determinação do °Srix em amostras de xarope de refrigerantes. Para a previsão de amostras medidas em outro instrumento HP 8453, a partir do modelo previamente construido, foram utilizados modelos para a transferência de calibração. Resultados comprovaram a eficácia do procedimento, com erros de previsão da ordem de 0,20 °Srix. Por fim, foi estudada a transferência de calibração entre diferentes instrumentos, com diferentes configurações ópticas e diferentes detectores. Para isso, foi desenvolvido um modelo de calibração para determinação de etanol em gasolina utilizando-se um instrumento CARY UVNIS/NIR 5G, com posterior transferência deste modelo para um instrumento HP 8453. Os erros após a transferência de calibração, que foram de 0,4 %vlv de etanol em gasolina, são semelhantes aos erros obtidos pela previsão do teor de gasolina através do modelo construido a partir dos espectros obtidos pelo instrumento HP 8453, que foi de 0,55 %v/v / Abstract: The aim of this work was the development of calibration models using short wave near infrared and the application of calibration transfer techniques in analytical chemistry. In this studies were used three kinds of samples: cachaça, syrup's soft drinks and gasoline. In the first application, have been developed a calibration model to quantifying, in the temperature at 20 DC, the alcoholic grade in cachaça. To correct predict samples in another temperatures (15, 25, 30 e 35 DC), was necessary the utilization of transfer calibration techniques, such as DS, PDS, OSC and global model. The RMSEP found to alcoholic grade model at 20DC was 0.12 %v/v and after application of transfer calibration procedures at other temperatures (15,25,30 and 35DC) using the model built at 20 DC errors in the same order were obtained. In the second one, was developed a model to measure the °Brix's quantity in soft drink syrup using a HP 8453 spectrophotometer. For use this model to predict samples measured in another HP 8453 spectrophotometer, were employed transfer calibration methods. Good results were obtained, with error of prediction around of 0.2 °Brix. The last study was the transfer calibration between different instruments, with different optical configuration and different detectors. To get this objective, was fitted a calibration model to determination of ethanol in gasoline using a Cary UVNIS/NIR 5G instrument to predict samples measured in a HP 8453 spectrophotometer. After using transfer calibration techniques, the error of prediction presented results in the same order in relation to the calibration with samples measured in HP 8453 instrument / Mestrado / Quimica Analitica / Mestre em Química

Orientadores: Marcelo Menossi, Jorg Kobarg / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:20:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Schlogl_PauloSergio_D.pdf: 5951962 bytes, checksum: bdf64acf2c8429332036b3bff568f4f5 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Os fatores de transcrição bZIP ligam-se como dímeros a seqüências de DNA específicas presentes nas regiões promotoras, atuando como moduladores da expressão de vários genes em eucariotos. O conjunto completo e não redundante dos fatores de transcrição bZIP de Arabidopsis thaliana foi agrupado em 13 sub-famílias filogenéticas. Essa classificação permitiu organizar 85 clusters de cana-de-açúcar que codificam bZIPs, obtidos no projeto SUCEST. As sub-famílias IV e XIII de A. thaliana não foram encontradas em cana de açúcar, provavelmente devido ao baixo nível de expressão destas sub-famílias em cana-de-açúcar. As análises filogenéticas com as bZIPs da sub-família Opaco2 suportam um modelo de evolução que envolve a duplicação de dois genes homólogos antes da separação das monocotiledôneas e dicotiledôneas. Expansões posteriores resultaram em três duplicações gênicas nas monocotiledôneas e uma nas plantas dicotiledôneas. Assim, a proteína Opaco2 provavelmente é o resultado de uma duplicação específica das plantas monocotiledoneas e representa uma especialização restrita a essas plantas. Uma proteína bZIP de cana-de-açúcar, SCbZIP I, foi clonada e caracterizada bioquimicamente. Ensaios de mobilidade eletroforética mostraram que a proteína SCbZIP I liga-se fortemente a sondas de DNA do tipo G-box, C-box e Hex. A fosforilação por CKII reduz sua afinidade pelo DNA. SCbZIP I foi capaz de produzir homodímeros e também heterodímeros com duas formas truncadas de Opac02. O gene é ativo nos estágios iniciais do desenvolvimento de plântulas, sendo expresso nas gemas laterais e também nas flores. o perfil de expressão dos 85 genes que codificam as bZIPs de cana-de-açúcar foi avaliado com maCrOaITanjos de DNA. Sete genes foram diferencialmente expressos durante o desenvolvimento de plântulas e outros oito foram modulados pelos hormônios ácido abscísico ou metil jasmonato / Abstract: bZIP transcriptional factors bind as dimers to specific DNA targets present in the promoter regions of their target genes and act as modulators of gene expression in eukaryotes. The complete set of Arabidopsis thaliana bZIPs was grouped in thirteen phylogenetic sub-families. This classification allowed the organization and identification of 85 sugarcane clusters from SUCEST project. Sub-families IV and XIII were not found in sugarcane, probably due to the low level of expression of these sub- families. Phylogenetic analysis of the Opaque2 subfamily support a model of evolution that involves a duplication of two homologues before the separation of monocot and dicot plants. Subsequent expansions resulted in three gene duplications in monocots and one in dicots. Opaque2 is probably the result of one specific duplication of monocots and represents a restrict specialization in these plants. A sugarcane bZIP, SCbZIPI was cloned and biochemically characterized. Electrophoretic mobility shift assays showed that SCbZIP I binds tightly to G- and C-boxes, Hex motifs, and phosphorylation of SCbZIPI by CKII decreases its DNA affinity. SCbZIPI underwent homodimerization and heterodimerization with truncated Opaque 2 from Coix. SCbZIPI mRNA is expressed in early stages of development and in lateral buds and flowers. The pattem of expression of 85 sugarcane bZIP genes was evaluated by cDNA arrays. Seven genes were differentially expressed during plantlet development and eight were modulated by Abscisic acid or Methyl-jasmonate / Doutorado / Genetica Vegetal e Melhoramento / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Orientador: Jose Teixeira Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Agricola / Made available in DSpace on 2018-07-25T04:44:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves_EvandroLutero_M.pdf: 4413087 bytes, checksum: c8c2f41988543a40b7a63956305eb6a3 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Devido às necessidades de se medir a transpiração, no intuito de fazer estudo sobre o balanço hidrológico e a necessidade hídrica da cultura, este trabalho mostra o desenvolvimento de um Sistema de Medição do Fluxos de Transpiração Líquida para a Cultura de Cana-de-Açúcar a partir do Fluxo de Seiva, que possa ser aplicado de forma confiável e prática. Utilizou-se o método termoelétrico de fluxo de calor constante. O trabalho consiste na montagem de equipamentos para medir o fluxo de seiva através do método de balanço de energia com aquecimento constante. As medidas realizadas graças a estes equipamentos foram aferidas a um fluxo de água conhecido forçado a passar por segmentos de caule de cana-de-açúcar. Em seguida validou-se a correlação com comparação de medidas obtidas por evapotranspirômetros e com o Sistema de Medição do Fluxos de ranspiração Líquida para a Cultura de Cana-de-Açúcar a partir do Fluxo de Seiva. O valor das transpirações máximas medidas se aproximarams a 200glh. O sistema apresentou uma boa sensibilidade nas variações dos fluxos de transpiração liquida acompanhando as variações ocorridas da radiação solar global / Mestrado / Mestre em Engenharia Agrícola

Orientador: Marcelo Menossi Teixeira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T02:01:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CostaNetto_AntonioPaulinoda_D.pdf: 960397 bytes, checksum: 250e582a4c1b0747546c9f611a5248d2 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O óxido nítrico (NO) é uma espécie reativa de nitrogênio relativamente instável e possui grande versatilidade. Ele atua como mensageiro secundário, sendo inclusive citotóxico dependendo da sua concentração. Ações do NO como mensageiro secundário são descritas na neurotransmissão, regulação da circulação sanguínea e de processos inflamatórios, principalmente em mamíferos onde a enzima NO-sintase (NOS) foi descoberta. Em plantas, o NO possui importante papel na interação planta-patógeno, na expansão foliar e redução da velocidade de amadurecimento ou senescência de frutos e flores e no processo de apoptose, entre outros. Recentemente duas isoformas de NOS de plantas foram caracterizadas em Arabidopsis thaliana e pouco se sabe da modulação da expressão gênica por NO em plantas. Este trabalho relata a clonagem e caracterização de um gene que codifica uma NOS de A. thaliana e a modulação da expressão gênica em cana-deaçúcar em resposta GSNO, um doador de NO. partir de seqüências depositadas no banco de dados do NCBI, foram sintetizados oligonucleotídeos específicos. A partir de reações de transcrição reversa e PCR o gene foi clonado e seqüenciado, sendo denominado HHP. O gene é mais expresso em folhas e flores e é induzido quando plantas de A. thaliana são submetidas a baixa temperatura. A localização subcelular da proteína foi determinada via fusão com GFP, sendo predominantemente plastídica. Plantas de A. thaliana superexpressando o gene HHP apresentaram uma melhora acentuada na resposta ao frio. O efeito do NO na expressão gênica em cana-de-açúcar foi avaliado empregando macroarranjos de DNA. Foi detectado um aumento na expressão de alguns genes como por exemplo minotransferases e peroxidases, além de proteínas com função ainda desconhecidas. Foi também demonstrada a influência dos plásticos que selam membranas com macroarranjos de DNA, onde compostos a partir de polietileno podem bloquear a emissão de radiação e diminuir o número de spots detectados, o que significa um menor número de genes avaliados / Abstract: Nitric oxide (NO) is a reactive nitrogen species relatively unstable that has great versatility. NO acts as a secondary messenger and may be even cytotoxic, depending on its concentration. Actions of the NO as secondary messenger have been described in neurotransmission, regulation of the blood circulation and inflammatory processes mainly in mammals where the enzyme NO-synthase (NOS) was discovered. In plants, NO has important role in plant-pathogen interactions, in foliar expansion and in the maturation and sencescence of fruits and flowers. Recently two NO isoforms have been characterized in Arabidopsis thaliana, but we are far from a complete understanding of the NO effects on gene expression. This work reports the cloning and characterization of a NOS isoform from A. thaliana and the modulation of gene expression in sugarcane by NO donors. Gene-specific oligonucleotides were designed based on the sequence of an animal NO-synthase deposited in the NCBI. After reverse-transcription and PCR the open reading frame was cloned and the gene was named HHP. The highest levels of gene expression were observed in leaves and flowers. HHP was induced by cold stress. The subcelular localization of the protein, determined using a GFP fusion, was predominantly plastidic. Transgenic A. thaliana superexpressing the HHP gene were more tolerant to cold stress. The effect of NO on sugarcane cells was evaluated using DNA macroarrays. Several genes were found to be modulated by NO, such as those encoding an aminotransferase and a peroxidase. Surprisingly, most of them encode proteins with unknown function. The influence of plastics used to seal macroarray membranes was also evaluated. It was found that some of them block the radiation transmittance, reducing the number of detected spots and consequently the number of genes evaluated in the assay. These findings indicate that the choice of the sealing plastic is very important to obtain the maximum information from nylon arrays / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Jorge Vega / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-31T18:41:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_MarcosCesar_D.pdf: 7477372 bytes, checksum: 67894da464a7b2387385005c386575c0 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O vírus do amarelecimento foliar da cana-de-açúcar, Sugarcane yellow leaf vírus (ScYL V) constitui atualmente um grande problema nos principais países produtores de cana-de-açúcar. Este vírus possui diversas características físicas e biológicas, como tamanho e morfologia da partícula, reações serológicas, alterações morfológicas no hospedeiro e aspectos de transmissão, comuns aos membros da família Luteovírídae. As informações da sequência genõmica do isolado brasileiro obtidas nesse trabalho, referentes às regiões codificantes para capa protéica do vírus (CP), proteína de movimento (17 kOa ou MP) e parte da RNA polimerase dependente de RNA (RdRp), mostram um alto grau de identidade e similaridade de aminoácidos com sequências de luteovirus conhecidos. Isso permite estabelecer o ScYLV como um membro definitivo da família Luteovíridae. Análises filogenéticas empregando as sequências deduzidas de aminoácidos da CP e da região C-terminal da RdRp do ScYL V sugerem diferentes afinidades taxonõmicas desse vírus dentro da família Luteovírídae, de maneira similar ao que acontece com o Soybean dwarf vírus (SOV). Análises comparativas de seqüência entre o isolado brasileiro e um isolado norte-americano revelaram diferenças de apenas dois nucleotídeos nas posições 4201(G por T) e 4232 (A por C) do genoma do ScYLV, correspondentesrespectivamente à região codificadora da proteína P17 e CP. Os dados de seqüência obtidos neste trabalho foram usados no desenvolvimento de um método sensível de diagnóstico baseado na combinação da técnica de amplificação isotérmica de ácidos nucléicos NASBA (nucleic acid sequence based amplification) e "molecular beacons", denominado AmpliOet RNA. Esse sistema de detecção foi altamente específico e ofereceu uma sensibilidade de aproximadamente 100 fg de vírus purificado, permitindo a detecção em plantas com baixos níveis de infecção viral e em um único pulgão virulífero. Os membros da família Luteoviridae são transmitidos por afídeos de uma maneira circulativa e não-propagativa. Após a aquisição, o vírus permanece no corpo do inseto por várias semanas, graças a associação com a proteína GroEL, produzida por um endossimbionte primário do pulgão. As partículas de vírus purificadas apresentam dois tipos de proteína, a proteína principal da capa protéica de 22 kDa e menores quantidades de outro componente do capsídeo, a proteína de transleitura ou "readthrough" (RTD) de 54 kDa. A protéina RTD contém determinantes responsáveis pela transmissão e acúmulo do vírus em plantas agroinfectadas. O Potato leafroll vírus (PLRV) é uma espécie do gênero Polerovirus dentro da família /,..uteoviridae. Clones infectivos de cDNA do PLRV e um mutante deletério da proteína RTD foram usados para estudar as interações moleculares entre esse luteoviruse seu afídeo vetor Myzus persicae. O mutante do PLRV, no qual a proteína RTD estava inteiramente ausente, não foi transmissível por M. persicae e não se ligou a proteína GroEL. Adicionalmente, esse mutante mostrou-se significativamente menos persistente na hemolinfa do afídeo do que as partículas não modificadas do vírus / Abstract: Sugarcane yellow leaf vírus (ScYL V) is widely distributed in Brazil and other sugarcane producing countries causing significant yield losses. This virus shares biological features typical of the luteovirids. Comparisons of the coat protein (CP), 17 kDa protein and C-terminus of the RNA-dependent RNA polymerase coding regions showed that the deduced amino acid sequences of the Brazilian isolate share a considerable degree of identity and similarity with corresponding sequences of known luteovirids, thus clearly establishing ScYL V as a member of the family Luteovíridae. Phylogenetic analyses also suggest that the 5' and 3' coding blocks of the ScYLV genome possess different taxonomic affinities within the Luteovíridae family, as for the genome of Soybean dwarf vírus (SDV). Our results were published simultaneously as the sequence of a North American strain of ScYL V. Comparative analyses between the deduced peptides of Brazilian and North American strains revealed two nucleotide substitutions at positions 4201 (G_ T) and 4232 (A_C) of the ScYLV genome, corresponding to P17 and CP proteins coding regions, respectively. Our sequence data were used to develop a highly sensitive detection method based on the combination of isothermic nucleic acid sequence based amplification (NASBA) and molecular beacons, named AmpliDet RNA. This system offered a sensitivity of about 100 fg of purified virus and could detect ScYL V in plant samples with low virus titer and in one single aphid. Members in the Luteovírídae are transmitted by aphids in a circulative, nonreplicative manner. After acquisiton, luteovirus particles persist in the aphid's hemolymph for several weeks in association with a GroEL homolog, produced by the primary endosymbiont of the aphid. Luteovirus purified particles contain two types of proteins; a major 22 kDa coat protein (CP) and the minor capsid component of 54 kDa, the readthrough protein (RTD). The RTD contains determinants responsible for virus transmission and accumulation in agroinfected plants. Potato leafroll virus (PLRV) is a member of the genus Po/erovírus in the family Luteovíridae. An infectious cDNA fuI! length clone of PLRV and a mutant devoid of the RTD were used to study and better understanding the molecular interactions between this luteovirus and its aphid vector Myzus persícae. The PLRV mutant lacking the entire RTD protein was not transmissible by M. persícae and did not bind to Buchnera GroEL. Furthermore, the mutant was significantly less persistent in the aphid's hemolymph than the wild type virus. These data corroborate previous observations with Beet westem yellow vírus (BWYV) and Bar/ey ye//ow dwarf vírus (BYDV) that the RTD domain is involvedin luteovirus transmission and persistence in the aphid's body / Doutorado / Doutor em Biologia Vegetal

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-04-18T18:04:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Rafael Barros de Souza.pdf: 1547796 bytes, checksum: f616604f41e0fde5d0278a8232ac2c12 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T18:04:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Rafael Barros de Souza.pdf: 1547796 bytes, checksum: f616604f41e0fde5d0278a8232ac2c12 (MD5) Previous issue date: 2012-08-24 / CNPQ / Apesar dos grandes avanços para melhorar as características das variedades de cana-de-açúcar, pouco se sabe sobre o impacto da qualidade do caldo da cana-de-açúcar no processo de fermentação industrial, mais especificamente sobre o metabolismo fermentativo da levedura. No presente trabalho analisamos a relação entre a variação da composição mineral do caldo de cana e a capacidade fermentativa das células de Saccharomyces cerevisiae, determinando a cinética de consumo de sacarose e produção de etanol e glicerol, bem como o efeito cumulativo desses minerais ao longo de reciclos fermentativos. Foram utilizados meios de fermentação suplementados com os principais macro e micronutrientes encontrados no caldo de cana de açúcar. Entre os minerais avaliados todos os meios suplementados apresentaram um resultado superior ao meio padrão (meio controle), exceto o meio com cobre. Os meios com maior influência no rendimento em etanol foram os meios com ureia, magnésio e manganês que apresentaram um aumento de 18,4% em relação ao meio padrão. O meio com cobre apresentou o menor valor em comparação a todos o meios analisados, contudo, sem diferenciar na viabilidade celular. Esses resultados sugerem que de fato os minerais desempenham importantes papeis no metabolismo fermentativo das células de S. cerevisiae e que determinados minerais como nitrogênio na forma de ureia, magnésio e manganês são mais significativos para o aumento do rendimento em etanol do que os outros minerais. / Despite great advances to improve the characteristics of the varieties of sugar cane, less is known about the impact of the sugar cane juice quality in the fermentation industry, more specifically on the fermentative metabolism of yeast. In this study we analyzed the relationship between variation of mineral composition of sugarcane juice and fermentative ability of Saccharomyces cerevisiae cells, determining the kinetics of sucrose intake and ethanol and glycerol production, as well as the cumulative effect of these minerals along recyclings fermentation. Fermentation media were supplemented with the main macro and micro nutrients found in sugar cane juice. Among the minerals examined all media supplemented showed a superior result to the standard medium (control medium), except the medium with excess copper. The medium with the greatest influence on the yield of ethanol was medium with urea, magnesium and manganese in which showed an 18.4% increase over the standard medium. The medium with copper with the lowest value compared to all the medium types, however, no difference in cell viability. These results suggest that in fact the minerals play important roles in the fermentative metabolism of the S. cerevisiae cells and that certain minerals, such as nitrogen as urea, magnesium and manganese are the most significant increase in ethanol yield than other minerals.

Orientador: Caio Glauco Sanchez / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica / Made available in DSpace on 2018-07-23T21:02:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Neiva_AntonioCarlosdeBarros_M.pdf: 9171826 bytes, checksum: ddcee8709f78e05876ceed0da26d7990 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Os sistemas de alimentação de sólidos granulares em reatores atmosféricos normalmente compõe-se de silos destinados a armazenamento de uma quantidade de produto, que permitem a homogeneidade do escoamento do material para a etapa seguinte, e de transportadores que transferem de modo apropriado o conteúdo do silo ao reator. Investigar o escoamento do material do silo e o desempenho do transportador são elementos básicos deste estudo, complementado com a investigação de problemas na interface silotransportador. As caracteristicas de escoamento do sólido granular em estudo, o bagaço de cana de açúcar, foram determinadas experimentalmente, assim como o desempenho do sistema de alimentação de um gaseificador de biomassa. Foi feita a comparação dos resultados dos ensaios do sistema de alimentação com o resultado previsto teoricamente, segundo três autores, utilizando as características de escoamento obtidas nos ensaios de determinação de propriedades do material. A partir da análise dos resultados e das dificuldades encontradas apresentam-se um novo projeto de roscas dosadoras para o sistema de alimentação estudado e sugestões para futuros trabalhos / Abstract: The feeding systems for granular materiaIs into an atmospheric reactor normally are attained with silos that hold an ammount of product in order to achieve steady flow to the next step, and feeders that transfer the material into the target vessel in a proper way. The investigation of the material's flow and the behavior ofthe feeder are the basis ofthis study, complemented with the investigation of problems on the silo-feeder interface. The flow characteristics of the bulk solid under study, the sugarcane bagasse, were experimentally determined, as well as the performance ofthe feeding system of a biomass gasifier. The results of the essays with the feeding system were compared with the theorically previewed results, according to three different authors, and using the values attained in the essays of determination of the material's characteristics. From the analysis of the results and from the difficulties found, suggestion for further work is made, a new project of screw feeders is presented for the system studied. / Mestrado / Termica e Fluidos / Mestre em Engenharia Mecânica

Orientador: Octavio Henrique de Oliveira Pavan / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T10:37:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cavallaro_AngelaCristina_M.pdf: 1926502 bytes, checksum: 187a7aee90427f890120838056b65bb0 (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: Este trabalho objetivou a padronização de técnicas visando a caracterlzação de proteínas do Vírus de Granulose de Diatraea saccharalis (VGDs). Várias metodologias de purificação foram testadas para oVGDs, até a definição do padrão ideal a ser seguido, para se obter o vírus livre de contaminantes. Algumas variações experimentadas mostraram-se ineficientes, pois não oi obtido o vírus puro. A purificação do VGDs através de centrifugação diferencial apresentou, como contaminantes, restos de tecidos e células de lagartas e, algumas vezes, bactérias.O emprego de triton X-100, como detergente, fez com que a cápsula protéica do VGDs se solubiliasse durante os passos de sua purificação. O esquema de purificação que se mostrou mais eficiente foi aquele em que o macerado de lagartas passou por um ciclo de centrifugação diferencial, seguida de centrifugação em colchão e gradiente de sacarose e, neste último, coletando-se a banda mais próxima à concentração de 58 %. A observação das amostras de VGDs em microscópio eletrônico mostrou que estas, quando ressuspendidas em tampão Tris-HCI 0,1 M pH 7,8, apresentavam as partículas virais agregadas, e separadas e nítidas quando ressuspendidas em água destilada. O emprego de soluções alcalinas na solubilização da cápsula protéica do VGDs não apresentou o resultado esperado, ou seja, a obtenção da granulina. Mesmo variando-se o tempo e a temperatura de lncubação das amostras, a concentração de proteínas apresentou-se sempre muito baixa.A solubilização do VGDs com TCA apresentou uma concentração de proteínas maior, possibilitando o reconhecimento da granulina, quando as amostras foram corridas em eletroforese. Foi testada a solubilização com TCA em vírus que já tinham o peso molecular de suas respectivas proteínas da matriz conhecido através de solubilização alcalina (VPNAc, VPNAg, VPNHz e VPNTn). Houve uma pequena variação que não pode ser atribuída ao método de obtenção destas, e sim à variabilidade de metodologias empregadas em eletroforese. Dessa forma, pode-se concluir que com o emprego de TCA é possível obter-se as proteínas do vírus e também determinar o seus pesos moleculares. Em relação à metodologia de eletroforese, a que mostrou melhor resolução foi a de poliacrilamida e SDS sem o emprego de uréia. Através da análise de padrões eletroforéticos pode-se obter um padrão das proteínas do VGDs apresentando a granulina como principal componente com um peso molecular de 31500 d / Abstract: This study aimed a padronization of methodology envisaging the characterization of the proteins of the Diatrea saccharalis Granulosis Vírus (DsGV). Several methodologies for the purification of DeGV were tested, to obtain vírus free of contaminants. Some variations in the protocol experimented were not efficient resulting in contaminated preparatlons. The purification of DsGV through differential centrifugation showed tissue and cells debris and bacteria as contaminants. The use of triton X-100 as detergent solubilized the proteic capsule of DsGV during the purification steps. The most effective metodologiy for purification was the homogenization of larvae followed by a cicle of differential centrifugation and by centrifugation in a sucrose cushion and gradient. The vírus band is found at the sucrose concentration of 58 %. The observation of the DsGV samples in eletron microscope showed that the samples in Tris-HCI buffers formed bundles wich were not formed when the samples where mantained in water. The use of alkaline solutions to dissolve the proteic capsule of DsGV did not presented the expected results in different Incubation times and temperatures resulting in all cases in lows concentration of the proteins. Better results were obtained with TCA which results in much higher yelds of total protein. To evaluate the method, a series of other baculoviruses were treated with TCA and the resulting protein profiles compared to those obtained by other authors using the alkaline treatment. The results were very similar showing that the method is a viable alternative procedure. The electrophoresis metodology showing the best resolution of the proteins was that with polyacrilamide and SDS without urea. The eletrophoretic profile of DsGV proteins has been obtained and the main component can be identifired as granulin having a molecular weight of 31500 d / Mestrado / Genetica / Mestre em Biologia

Orientador: Fumio Yokoya / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-18T14:14:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DiezJerez_MariaCristina_D.pdf: 4059904 bytes, checksum: 7fc63fb11ee18e7a96073e0fb2f039dc (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: Foi conduzido um estudo sobre métodos e condições de fermentação de melaço de cana-de-açúcar por Zymomonas mobilis CP4 e seu efeito sobre os parâmetros cinéticos de fermentação. Avaliou-se o efeito da temperatura, controle de pH e efeito de íons Ca++, K+ , Cl- e Mg ++ em meio de fermentação com sacarose. Em melaço de cana-de-açúcar foi estudado o efeito da clarificação e suplementação com nutrientes. Determinaram-se os parâmetros cinéticos de fermentação do melaço em processo descontínuo, descontínuo alimentado e contínuo em escala de laboratório; e descontínuo e descontínuo alimentado em fermentador piloto. Foram também realizados ensaios de fermentação em processo descontínuo, em escala de laboratório, utilizando caldo de cana-de-açúcar e HTM como substratos da fermentação. Determinou-se que a temperatura de 34°C é a mais apropriada para o crescimento e produção de álcool por Zymomonas mobilis CP4 em meio com sacarose e melaço; a produção de levana diminui com o aumento da temperatura e com o controle de pH durante a fermentação. Os tratamentos de clarificação do melaço, removeram Ca++ e K+, mas são aumentaram os rendimentos fermentativos. Ca ++, K+ e Cl- são inibidores do crescimento e fermentação de Zymomonas mobilis CP4, mas o Mg++ são apresentou efeito inibitório em nenhuma das condições. estudadas. A suplementação do melaço é necessária para aumentar os rendimentos fermentativos. Em processo descontínuo os melhores resultados foram em concentração de melaço de 108 g/l. A produtividade em processo contínuo foi superior a dos processos descontínuo e descontínua-alimentado. Em fermentador piloto os rendimentos fermentativos em processo descontínuo foram superiores aos do fermentado de laboratório, mas a produtividade foi menor. Em descontínuo alimentado os rendimentos foram superiores aos do ensaio em fermentador de laboratório. O melaço de cana-de-açúcar e o caldo de cana de açúcar são matérias-primas apropriadas para a fermentação, mas devem ser suplementadas para obter rendimentos fermentativos altos. / Abstract: This study was carried out to characterize the methods and parameters affecting the fermentation of Zymomonas mobilis CP4 on sugar cane molasses as sustrate. Temperature, pH, Ca++, K+, Mg++ and Cl- were the experimental variables using on a saccharose culture medium. Besides, the effects of clarification and nutrients suplementation of sugar cane molasses was studied. Kinetics parameters on sugar cane molasses were analyzed under different experimental conditions: a prototype lab fermenter was used in batch, fed-batch and continuous fermentations, and a pilot prototype scale was used for batch and fed-batch fermentations. At the same time, fermentation assays in a discontinuous process under laboratory scale procedures were carried out using sugar cane medium and HTM as the sustrate of the fermentation. Growth rate and ethanol production by Zymomonas mobilis CP4 in saccharose and molasses culture medium were optimum at 34 °C. Levan output decreased with increasing temperature and pH control during the fermentation. Clarification treatments in molasses decreased the amount of Ca++ and K+ but not better results in fermentation rate were observed, despite the fact that both ions and chlorides ions exert and inhibitory effect in growing and fermentation activities of Zymomonas mobilis CP4. No negative effect was observed concerning Mg ++. Besides, molasses suplementation with nutrients was necessary to increase yields. In' batch process better -kinetics results were obtained with molasses concentrations of 108 g/l. The productivity was higher in continuous process compared with batch and fed-batch processes. The fermentation output obtained with batch process were higher under pilot plant operation in contrait with laboratory scale models. Sugar cane molasses and. sugar cane culture medium were better nutritional products for fermentation purposes but most be supplemented to get better results. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador : Edward J. Baum / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-19T03:26:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fadanelli_Eliana_M.pdf: 3285824 bytes, checksum: 8fa60bd3b7f44d47fb6039250973acfa (MD5) Previous issue date: 1981 / Mestrado