INTRODUÇÃO: a incidência de esofagite fúngica tem se elevado nos últimos anos, com diversos casos sendo relatados em indivíduos sem qualquer fator de risco. Embora Candida albicans seja o principal agente etiológico da esofagite fúngica, outras espécies como C. tropicalis, C. krusei e C. stellatoidea têm sido implicadas como agentes etiológicos. OBJETIVO: descrever as espécies de fungos causadores de esofagite em nosso centro durante um período de 18 meses; avaliar os fatores de risco para candidose esofágica; comparar as condições predisponentes para diferentes espécies de Candida; analisar a suscetibilidade das espécies às drogas antifúngicas e avaliar a prevalência de outros gêneros fúngicos em pacientes com esofagite MÉTODOS: de janeiro de 2005 a julho de 2006, foram realizadas 21.248 endoscopias digestivas altas na Santa Casa Complexo Hospitalar (Porto Alegre, RS Brasil), sendo diagnosticada esofagite fúngica em 159 pacientes. Os espécimes clínicos obtidos através de biópsia ou escovado esofágico foram encaminhado para exame micológico direto e cultivo. A identificação das espécies foi realizada pela formação de tubo germinativo e através do sistema automatizado VITEK ID 32C (bioMérieux Marcy l’Etoile, França). Os testes de suscetibilidade ao fluconazol foram realizados utilizando ensaios de microdiluição, de acordo com a metodologia recomendada pelo CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute), documento M27-A. RESULTADOS: A prevalência de candidose esofágica foi de 0,74% (n=158). C. albicans foi a espécie causadora da maioria das infecções (96,2%), seguida por C. tropicalis (2,5%), C. lusitaniae (0,6%) e C. glabrata (0,6%). Houve apenas um caso (0,63%) de esofagite por outro gênero. Lesões orais compatíveis com candidose foram concomitantemente documentadas em 10,8% (n=17). Cerca de um quinto dos pacientes não teve qualquer fator de risco identificável para candidose esofágica. Exceto por um isolado de Candida, todos os demais foram considerados sensíveis ao fluconazol. Em função do pequeno número de pacientes infectados por espécies não-C. albicans, não foi possível determinar fatores de risco para estas infecções. CONCLUSÕES: C. albicans foi o principal agente etiológico de esofagite fúngica, sendo que esofagite causada por outros gêneros de fungos foram pouco freqüentes. Resistência aos antifúngicos imidazólicos não foi observada. / INTRODUTION: the incidence of fungal oesophagitis has increased in the last years, with many cases occurring in patients without any identifiable risk factor. Although Candida albicans is the main cause of fungal oesophagitis, other species such as C. tropicalis, C. krusei and C. stellatoidea have also been implicated. OBJETIVE: to describe the fungal species causing oesophagitis in our medical centre over an 18-month period; to evaluate the risk factors for Candida oesophagitis; to describe predisposing conditions for oesophageal candidosis caused by different Candida species; to evaluate the prevalence of non-C. albicans species as the cause of fungal oesophagitis; and to analyse the susceptibility of Candida species to antifungal agents. METHODS: During January 2005 and July 2006, a total of 21,248 upper gastroscopies were performed in Santa Casa Complexo Hospitalar (Porto Alegre, Brazil). Fungal oesophagitis was diagnosed in 159 patients. Samples were sent in saline solution to the mycology laboratory. The germ tube test was used to differentiate C. albicans from other Candida species, which were identified at the species level with ID 32C kit (bioMérieux Marcy l’Etoile, France). Susceptibility testing to antifungal drugs was performed by microdiluition, according to the document M27-A (CLSI, Clinical and Laboratory Standards Institute). RESULTS: The prevalence of Candida oesophagitis was 0.74% (n=158). The vast majority of infections were caused by C. albicans (96.2%), followed by C. tropicalis (2.5%), C. lusitaniae (0.6%) and C. glabrata (0.6%). All but one case of fungal oesophagitis were caused by Candida species. There were 81 women (51.3%) and 77 men (48.7%). Oral candidosis was diagnosed in 10.8% of patients (n=17). Around one fifth of patients had no identifiable risk factors for oesophageal candidosis. All but one isolate were fluconazole-sensitive. Statistical analyses were hampered by the limited number of oesophagitis caused by non-C. albicans species. CONCLUSION: C. albicans was to be the main aetiology of fugal oesophagitis in our medical centre, with other fungi being uncommonly implicated. Resistance to triazolic antimicotic drugs was not observed.

Orientadora: Débora Barros Barbosa / Coorientadora: Aline Satie Takamiya / Banca: Douglas Roberto Monteiro / Banca: Margarete Teresa Gottardo de Almeida / Resumo: O objetivo geral desse estudo foi sintetizar e caracterizar nanobiomateriais compostos por nanopartículas de prata (AgNP) e glicerofosfato de cálcio (CaGP) sintetizados por rotas químicas utilizando - se borihidreto de sódio ou citrato de sódio e fitoquímica por meio de extrato da casca de romã, e avaliar seu efeito antimicrobiano contra cepas de referência de Cand ida albicans (ATCC 10231) e Streptococcus mutans (ATCC 25175) e sua citotoxicidade em células de fibroblastos (L929). Além do agente redutor, para as sínteses químicas variou - se a concentração de prata (1 ou 10%), a apresentação do CaGP (micro ou nanoparti culado), o solvente utilizado na síntese (água deionizada ou isopropanol) e a forma dos nanocompostos (em suspensão, seco em estufa ou liofilizado). Para a síntese fitoquímica utilizou - se o extrato da casca desidrata da romã, obtido por percolação em etano l (70%) e com os compostos totais fenólicos expressos em ácido gálico e a concentração de ácido elágico quantificados respectivamente por método colorimétrico e HPLC. A caracterização dos nanocompostos e dos controles contendo somente AgNP foi feita por UV - Vis, MEV, e EDX. A ação antimicrobiana foi avaliada por meio da mínima contração inibitória de acordo com o método da microdiluição (CLSI M27 - A2 e M07 - A9), enquanto que a viabilidade celular dos fibroblastos foi quantificada utilizando - se método fluorimét rico (Alamar Blue). Esses experimentos foram realizados em triplicata em três ocasiões diferentes e os dados de porcentagem de viabilidade celular foram analisados pela A NOVA de um fator seguido do teste de Bonferroni (α=5%). Para todas as sínteses houve formação de AgNP associadas ao CaGP. Contudo pela microscopia somente na concentração de 10% de prata visualizou - se as AgNP decorando... / Abstract: The aim of this study was to synthesize and characterize nanomaterials compounds by silver nanoparticles (AgNP) and calcium glycerophosphate (Ca GP) synthesized by chemical route using sodium borihidreto or sodium citrate, and phytochemical through pomegranate peel extract, and evaluate its antimicrobial effect against reference strains of Candida albicans (ATCC 10231) and Streptococcus mutans (ATCC 25175) and its cytotoxicity in fibroblast cells (L929) . Besides, reducing agent for chemical syntheses, is varied the silver concent ration (1 or 10%), the form of CAGP (micro or nanoparticulate), the solvent used in synthesis (deionized water or isopropanol) and the form of the nanocomposite ( suspended, d ry in incubator or lyophilized). For the phytochemical synthesis, utilized the pe el extract of pomegranate obtained by percolation in ethanol (70%) and total phenolic compounds was expressed in gallic acid standard and ellagic acid concentration respectively quantified by colorimetric method HPLC . The characterization of nanocomposites and controls containing only AgNP was made by UV - Vis spectroscopy, SEM and EDX. The antimicrobial activity was evaluated by the minimum inhibitory concentration according to the microdilution method (CLSI M27 - M07 - A2 and A9), whereas fibroblast cell viability was quantitated using fluorimetric method (Alamar Blue). These experiments were performed in triplicate on three different occasions and the cell viability percentage data were analyzed by one - way ANOVA followed by Bonferroni test ( α = 5%). For all syntheses were associated between AgNP and CaGP. However only by microscopy at a concentration of 10% silver visualized the AgNP decorating the surface of CaGP (synthesis with sodium borihidreto and isopropanol) shrouded... / Mestre

Orientador: Luis Vitor Silva do Sacramento / Banca: Taís Maria Bauab / Banca: Dulce Helena Siqueira da Silva / Resumo: Cordia verbenacea DC. pertence à família Boraginaceae que contém aproximadamente 100 gêneros, com mais de 2000 espécies distribuídas em todo o planeta. Ocorre ao longo de todo litoral brasileiro, sendo considerada, também, uma planta comum na Floresta Tropical Atlântica, possuindo vários nomes populares como maria-preta, maria-milagrosa e catinga-de-barão, sendo o mais comum erva-baleeira, ou simplesmente baleeira. É amplamente utilizada para tratar processos inflamatórios sendo geralmente aplicada topicamente nas áreas atingidas. Foi utilizada pelo laboratório Aché para o desenvolvimento do Acheflan®, primeiro medicamento fitoterápico 100% nacional com registro na Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), utilizado para o tratamento de tendinites crônicas e dores miofaciais. Este trabalho objetivou: traçar um perfil físico-químico da droga vegetal oriunda das partes aéreas de Cordia verbenacea; realizar um estudo anatômico e histoquímico do limbo; realizar um estudo fitoquímico preliminar traçando um perfil do extrato bruto e de suas frações, bem como verificar seus respectivos potenciais anti-Candida. Tricomas tectores e glandulares, estômatos anomocíticos e idioblastos contendo areia cristalina destacam-se como marcadores anatômicos. O estudo histoquímico revelou a ocorrência de lipídios totais, óleos essenciais, terpenoides com grupo carbonila, compostos fenólicos, flavonoides e pectinas. A droga vegetal estudada apresentou resultados favoráveis ao estabelecimento de parâmetros físico-químicos , tais como, perda por dessecação (8,40%), cinzas totais (17,40%) e cinzas insolúveis em ácido (1,02%), com perfil fitoquímico preliminar apontando ocorrência de saponinas, flavonoides, alcaloides, terpenos e taninos. O estudo em CCD foi confirmativo para flavonoides, terpenos e taninos. O extrato bruto e suas frações (aquosa, hexano, n-butanol e acetato de etila) apresentaram resultados ... / Abstract: Cordia verbenacea DC. belongs to the Borraginaceae family, which contains approximately 100 genera and over 2000 species distributed across the planet. This species occurs all along the Brazilian coast, and it's also considered a common plant in the Atlantic Rainforest, having many popular names like maria-preta, maria-milagrosa e catinga-de-barão, the most common erva-baleeira, or simply baleeira. It is widely used to treat inflammatory processes and it's usually applied topically on the affected areas. It was used by the Aché laboratories for the development of Acheflan®, it was the first national herbal medicine registrated in the Brazilian Regulatory Agency for Sanitary Surveillance (ANVISA), indicated for the treatment of chronic tendinitis and myoface pain. The aim of this work is to obtain a physical-chemical profile of the plant drug derived from branches of Cordia verbenacea; develop a morphological and histochemical study of limbo; develop a preliminary phytochemical study outlining a profile of the crude extract and its fractions, as well as checking their anti-Candida potential. Tector trichomes, glandular trichomes, anomocytic stomats and idioblasts with crystal sands stand out as anatomical markers. The histochemical study revealed the occurrence of lipids, essential oils, terpenoids with the carbonyl group, phenolic compounds, flavonoids and pectins. The drug studied showed favorable results to the establishment of physico-chemical parameters, such as loss on drying (8.40%), total ash (17.40%) and acid insoluble ash (1.02%), and a preliminary phytochemical profile that points occurrence of saponins, flavonoids, alkaloids, terpenes and tannins. The CCD study was confirmatory for flavonoids, terpenes and tannins. The crude extract and its fractions (aqueous, hexane, n-butanol and ethyl acetate) showed interesting results when compared with the results of the essential oil of Cordia verbenaceae literature. The minimum ... / Mestre

Orientador: Eduardo Bagagli / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Leonardo Nimrichter / Banca: Carlos Henrique Camargo / Banca: Radames J. B. Cordeiro / Resumo: Nas últimas décadas, a epidemiologia das infecções por Candida spp. e o perfil de susceptibilidade a drogas vêm sofrendo importantes alterações. A emergência dessas espécies, como agente de infecções invasivas, tem se destacado principalmente entre pacientes imunocomprometidos. O principal objetivo desse estudo foi avaliar a epidemiologia das infecções por Candida spp. no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP, e auxiliar no suprimento de dados para o melhor controle da infecção hospitalar. Os objetivos específicos incluíram a comparação entre as metodologias tradicional, automatizada e molecular de identificação em nível de espécie atualmente disponíveis nesta instituição, avaliar o perfil de susceptibilidade aos antifúngicos, bem como a produção de biofilme por estes isolados e caracterizar, utilizando ferramentas de biologia molecular, genes envolvidos na produção de biofilme de C. albicans e C. parapsilosis e o emprego dos introns do grupo I para genotipagem de C. albicans. Um total de 196 isolados de Candida spp. provenientes de hemocultura de pacientes foram avaliados. As espécies mais frequentes foram C. albicans (39,3 44,4%) e C. parapsilosis (33,2-42,3%). Foi observada boa correlação (>80%) entre os métodos de identificação avaliados - fenotípico tradicional, automatizado e molecular; e a caracterização dos introns do grupo I detectou predominância de C. albicans genótipo A (74%). O método tradicional é o mais simples e de baixo- custo, e o método automatizado mais rápido na liberação do resultado, quando comparados às técnicas moleculares, as quais apresentam maior poder discriminatório. Sugere-se a utilização do meio cromogênico, em paralelo ao método de identificação selecionado, para auxiliar na interpretação dos resultados, principalmente nas espécies mais frequentes. O método empregado em laboratórios de rotina deve ser considerado quando ... / Abstract: Over the last decade, there have been important changes in the epidemiology of Candida infections and antifungal agents used to treat these infections. In recent years, Candida species have emerged as important causes of invasive infections mainly among immunocompromised patients. The principal aim of this study was to evaluate the epidemiology of infectious Candida species isolated in our hospital and accordingly supply data for hospital infection control The other aims were to compare the traditional, automated and molecular methods used to identify Candida isolates to the species level current available in the Clinical Hospital of the Boucatu Medical School, UNESP, to evaluate the drug susceptibility as well as to biofilm production by this yeasts and to characterize, by molecular tools, several genes involved in biofilm production of C. albicans and C. parapsilosis and the use of group I introns to genotype the species C. albicans. A total of 196 Candida strains that were isolated from blood specimens of hospitalized patients were included in the study. The most common Candida species identified were C. albicans (39,3-44,4%) and C. parapsilosis (33,2-42,3%). According to the insertion of group I introns, the genotype A of C. albicans were the most frequent (74%). The evaluation of traditional phenotypic methods, the automated and some molecular revealed good agreement (>80%) and since both phenotypic methods were simple and cost effective and automated were few time-consuming when compared to molecular techniques, they should be considered in the routine lab identification of Candida species. The chromogenic media must be employed to avoid misinterpretations, independently of the method used. Antifungal susceptibility testing was performed by the reference microdilution method (CLSI) and all strains showed good susceptible against the drugs evaluated (fluconazole, voriconazole, anidulafungin and ... / Doutor

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Co-orientador: Cristiane Aparecida Pereira Correia / Banca: Silvia Maria Rodrigues Querido / Banca: Luciane Dias de Oliveira / Resumo: Streptococcus sanguinis e Streptococcus mitis são colonizadores pioneiros do biofilme bucal e podem causar endocardite bacteriana. Candida albicans está presente na cavidade bucal de forma comensal, possui capacidade de formar biofilme e causar candidose bucal. O objetivo desse trabalho foi avaliar as interações entre C. albicans com S. sanguinis e S. mitis em biofilmes e suas influências in vivo em modelo experimental de invertebrado Galleria mellonella. Para o estudo da interação de C. albicans (ATCC 18804) com S. sanguinis (ATCC 7073) e S. mitis (ATCC 4945) foram formados biofilmes monoespécie e multiespécies de C. albicans com os micro-organismos (na concentração de 107 células/mL) em fundo de placa de 96 poços por 48 h, incubados em estufa a 37 °C com 5% CO2. Após crescimento, os biofilmes foram desprendidos e obtidas diluições decimais as quais foram semeadas em meios seletivos. Após incubação por 48 h/37 °C foi obtida a contagem de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL). Em paralelo, foram realizados ensaios colorimétricos com o sal XTT, a fim de mensurar a atividade metabólica de C. albicans nos biofilmes isolados e associados, seguindo de leitura a 492 nm, e o resultado expresso em absorbância (Abs). No estudo in vivo, primeiro foram determinadas as concentrações subletais dos micro-organismos, e inoculadas em G. mellonella, e observado o efeito de C. albicans, S. mitis e S. sanguinis nas lagartas, avaliando se curva de sobrevivência. Avaliação morfológica dos biofilmes foi realizada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os dados de contagem de UFC/mL e da atividade metabólica foram submetidos à análise de normalidade, e como foi observada distribuição normal, os resultados foram analisados estatisticamente pelos testes t de Student (para duas variáveis) e Tukey (para três ou mais variáveis), considerando-se diferença estatística quando p <0,05. Os dados obtidos na curva de.. / Abstract: Streptococcus sanguinis and Streptococcus mitis are pioneering colonizers of oral biofilm and can cause bacterial endocarditis. Candida albicans is present in the oral cavity in a commensal manner and also has the ability to form biofilm and cause oral candidiasis. The aim of this study was to evaluate the interactions between C. albicans with S. sanguinis and S. mitis biofilms and their influences in vivo on an experimental invertebrate model of Galleria mellonella. To study the interaction of C. albicans (ATCC 18804) with S. sanguinis (ATCC 7073) and S. mitis (ATCC 4945) monospecies and multispecies biofilms were formed of C. albicans and with micro-organisms (a concentration of 107 cells/ml) in the bottom of a 96-well plate for 48 h, incubated at 37 °C with 5% CO₂. After growth, biofilms were detached, and decimal dilutions were plated on selective media. After incubation for 48 h/37 °C the count of colony forming units per milliliter (CFU/mL) was obtained. Alongside, XTT salt colorimetric assays were carried in order to measure the metabolic activity of isolated and associated C. albicans biofilms, following reading at 492 nm, and the result expressed in absorbance (Abs). In the in vivo study, first the sublethal concentrations of microorganisms were determined, and inoculated into G. mellonella, and the effect of C. albicans, S. mitis and S. sanguinis in caterpillars was observed, evaluating the survival curve. Morphological evaluation of the biofilms was performed by scanning electron microscopy (SEM). The count of CFU/mL and metabolic activity were submitted to normality analisis, and as a normal distribution was observed, the results were statistically analyzed by Student's t test (for two variables) and Tukey (for three or more variables) considering statistical difference at p < 0.05. The G. mellonella survival curves data were analyzed by log-rank method. Streptococci influenced the reduction of biofilms of C. albicans and .... / Mestre

Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: José Eduardo Cezar Sampaio / Banca: Juliana Rico Pires / Resumo: A periodontite é uma doença infecciosa caracterizada pela secreção de uma variedade de mediadores inflamatórios que levam a destruição dos tecidos de suporte dental, incluindo o osso alveolar e possível perda dos dentes, em associação com a infecção por múltiplas espécies de bactérias gram-negativas. Estima-se que mais de 400 espécies microbianas colonizam o biofilme dental e algumas das espécies bucais relacionadas à doença periodontal apresentem-se no biofilme subgengival incluindo Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola. Entretanto, outros microrganismos podem também estar relacionados a patologia desta doença, como Filifactor alocis, Prevotella tannerae e Candida albicans. Estes microrganismos juntamente com seus subprodutos como as endotoxinas liberadas no meio extracelular levam ao estímulo da glicoproteina Indutora de Metaloproteinases (EMMPRIN-CD147) a qual estimula a liberação de metaloproteinases da matriz (MMPs) pelas células do hospedeiro, por exemplo, fibroblastos e células endoteliais levando assim a destruição tecidual. Com o objetivo de detectar novos patógenos relacionados à doença periodontal como F. alocis, P. tannerae, C. albicans e T. denticola e também avaliar a glicoproteína EMMPRIN (CD- 147) e sua correlação com MMP-2 e MMP-9 em amostras de fluido subgengival de pacientes com periodontite crônica, foram coletadas amostras de fluido subgengival de sítios sadios e doentes de 20 indivíduos com periodontite crônica antes do tratamento periodontal básico, e após um período de 60 dias do tratamento foi realizada nova coleta de sítios sadios e doentes. Os respectivos DNAs foram extraídos e trechos do gene 16S foram amplificados e posteriormente realizados PCR convencional para a análise microbiológica dos microrganismos em estudo. Para a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Periodontitis is an infectious disease characterized by the secretion of a variety of inflammatory mediators that lead to destruction of tooth supporting tissues, including the possible loss of alveolar bone and teeth, in association with infection with multiple species of gram-negative bacteria. It is estimated that more than 400 species of microorganisms colonize the biofilm and some oral species related to periodontal disease is present in the subgingival including Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia and Treponema denticola. However, other organisms may also be related to pathology of this disease, as Filifactor allocis, Prevotella tannerae and Candida albicans. These microorganisms along with subproducts such as endotoxins released into the extracellular lead to the stimulation of metalloproteinase inducer glycoprotein (EMMPRIN, CD-147), which stimulates the release of MMPs by host cells, like fibroblasts and endothelial cells, thus leading to tissue destruction . The objective of this study was to detect new pathogens relationed with periodontal disease such as F. allocis, P. tannerae, C. albicans, T. denticola and also the glycoprotein EMMPRIN (CD-147) and its correlation with MMP-2 and MMP-9 in subgingival fluid samples of patients with chronic periodontitis. Fluid were collected from healthy and disease subgingival sites of 20 healthy individuals with chronic periodontitis before basic periodontal treatment, and after a period of 60 days of treatment was performed new collection of healthy and diseased sites. Their DNAs were extracted and portions of the 16S gene were amplified and subsequently performed conventional PCR for the microbiological analysis of the microorganisms this study. For immunological analysis and quantification of EMMPRIN (CD-147), MMP-2 and MMP-9 was used... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-23Bitstream added on 2014-06-13T20:57:37Z : No. of bitstreams: 1 toledo_fa_me_arafo.pdf: 482803 bytes, checksum: fe7932ab1cc5d556039baeb6cb760c08 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A periodontite é uma doença infecciosa caracterizada pela secreção de uma variedade de mediadores inflamatórios que levam a destruição dos tecidos de suporte dental, incluindo o osso alveolar e possível perda dos dentes, em associação com a infecção por múltiplas espécies de bactérias gram-negativas. Estima-se que mais de 400 espécies microbianas colonizam o biofilme dental e algumas das espécies bucais relacionadas à doença periodontal apresentem-se no biofilme subgengival incluindo Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema denticola. Entretanto, outros microrganismos podem também estar relacionados a patologia desta doença, como Filifactor alocis, Prevotella tannerae e Candida albicans. Estes microrganismos juntamente com seus subprodutos como as endotoxinas liberadas no meio extracelular levam ao estímulo da glicoproteina Indutora de Metaloproteinases (EMMPRIN-CD147) a qual estimula a liberação de metaloproteinases da matriz (MMPs) pelas células do hospedeiro, por exemplo, fibroblastos e células endoteliais levando assim a destruição tecidual. Com o objetivo de detectar novos patógenos relacionados à doença periodontal como F. alocis, P. tannerae, C. albicans e T. denticola e também avaliar a glicoproteína EMMPRIN (CD- 147) e sua correlação com MMP-2 e MMP-9 em amostras de fluido subgengival de pacientes com periodontite crônica, foram coletadas amostras de fluido subgengival de sítios sadios e doentes de 20 indivíduos com periodontite crônica antes do tratamento periodontal básico, e após um período de 60 dias do tratamento foi realizada nova coleta de sítios sadios e doentes. Os respectivos DNAs foram extraídos e trechos do gene 16S foram amplificados e posteriormente realizados PCR convencional para a análise microbiológica dos microrganismos em estudo. Para a... / Periodontitis is an infectious disease characterized by the secretion of a variety of inflammatory mediators that lead to destruction of tooth supporting tissues, including the possible loss of alveolar bone and teeth, in association with infection with multiple species of gram-negative bacteria. It is estimated that more than 400 species of microorganisms colonize the biofilm and some oral species related to periodontal disease is present in the subgingival including Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia and Treponema denticola. However, other organisms may also be related to pathology of this disease, as Filifactor allocis, Prevotella tannerae and Candida albicans. These microorganisms along with subproducts such as endotoxins released into the extracellular lead to the stimulation of metalloproteinase inducer glycoprotein (EMMPRIN, CD-147), which stimulates the release of MMPs by host cells, like fibroblasts and endothelial cells, thus leading to tissue destruction . The objective of this study was to detect new pathogens relationed with periodontal disease such as F. allocis, P. tannerae, C. albicans, T. denticola and also the glycoprotein EMMPRIN (CD-147) and its correlation with MMP-2 and MMP-9 in subgingival fluid samples of patients with chronic periodontitis. Fluid were collected from healthy and disease subgingival sites of 20 healthy individuals with chronic periodontitis before basic periodontal treatment, and after a period of 60 days of treatment was performed new collection of healthy and diseased sites. Their DNAs were extracted and portions of the 16S gene were amplified and subsequently performed conventional PCR for the microbiological analysis of the microorganisms this study. For immunological analysis and quantification of EMMPRIN (CD-147), MMP-2 and MMP-9 was used... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:32:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:06:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 17895.pdf: 786964 bytes, checksum: 781fa1b1bc7332a3c1c707115a8e0243 (MD5) / Dissertacao (Mestrado Profissionalizante em Lasers em Odontologia) / IPEN/D-MPLO / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP; Faculdade de Odontologia, Universidade de São Paulo, São Paulo

Submitted by Ana Paula Miranda Vieira (anapaula.mvieira@hotmail.com) on 2018-03-18T23:25:55Z No. of bitstreams: 1 Ana Paula Miranda Vieira - Mestrado.pdf: 1718785 bytes, checksum: f8a4ee381763d62564106bf81536ad0b (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Rimoli de Oliveira null (anapaula@foa.unesp.br) on 2018-03-19T12:15:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vieira_apm_me_araca_int.pdf: 1718785 bytes, checksum: f8a4ee381763d62564106bf81536ad0b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-19T12:15:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vieira_apm_me_araca_int.pdf: 1718785 bytes, checksum: f8a4ee381763d62564106bf81536ad0b (MD5) Previous issue date: 2018-02-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Objetivo: Este estudo sintetizou um novo nanosistema carreador de clorexidina (CLX) baseado em nanopartículas magnéticas de óxido de ferro (NMOFs) e quitosana (QS), e avaliou seu efeito antimicrobiano sobre biofilmes de Candida albicans e Streptococcus mutans: Metodologia: O nanosistema NMOFs-QS-CLX foi preparado pela interação de CLX sobre NMOFs revestidas com QS, e caracterizado por difração de raios X, espectroscopia de absorção na região do infravermelho médio com transformada de Fourier, microscopia eletrônica de transmissão e dispersão dinâmica de luz. A concentração inibitória mínima (CIM) do nanosistema NMOFs-QS-CLX capaz de inibir as cepas no estado planctônico foi determinada de acordo com o método de microdiluição em caldo. Na sequência, biofilmes simples e mistos de C. albicans e S. mutans foram formados durante 24 horas em poços de placas de 96 poços na presença do nanosistema contendo CLX a 39 (NMOFs-QS-CLX39) ou 78 μg/mL (NMOFs-QS-CLX78). Ainda, biofilmes pré-formados (24 horas) foram tratados durante 24 horas com o nanosistema nas mesmas concentrações. O efeito antibiofilme foi avaliado através da contagem do número de células cultiváveis, quantificação da biomassa total e avaliação da atividade metabólica. Controles apropriados foram incluídos em todas as análises. Os dados foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis e por ANOVA a um critério, seguidos dos testes Student-Newman-Keuls e Holm-Sidak, respectivamente (α = 0,05). Resultados: Os resultados de caracterização confirmaram a formação do nanosistema NMOFs-QS-CLX, sem alteração das propriedades cristalinas das NMOFs. Além disso, as bandas de absorção características de cada composto foram identificadas no espectro do infravermelho, e o diâmetro médio do nanosistema foi menor que 40 nm. Os resultados de CIM mostraram que o nanosistema foi ligeiramente mais efetivo do que a CLX na inibição do crescimento dos microrganismos testados. Biofilmes formados na presença do nanosistema NMOFs-QS-CLX39 atingiram patamares quantitativos similares àqueles observados para CLX a 78 µg/mL. Ainda, para os biofilmes simples e mistos, o nanosistema NMOFs-QS-CLX78 mostrou efeitos redutores superiores ou similares àqueles encontrados para CLX a 78 µg/mL e NMOFs-QS-CLX39. Conclusão: O nanosistema NMOFs-QS-CLX foi efetivo tanto na inibição da formação de biofilmes como sobre biofilmes pré-formados de C. albicans e S. mutans em culturas simples ou mistas. O desenvolvimento desse nanosistema instaura inúmeras possibilidades para exploração de terapias baseadas em nanopartículas magnéticas como carreadoras de drogas usadas na área médico-odontológica. / Aim: This study synthesized a new chlorhexidine(CHX)-carrier nanosystem based on iron oxide magnetic nanoparticles (IONPs) and chitosan (CS), as well as evaluated its antimicrobial effect on biofilms of Candida albicans and Streptococcus mutans. Method: The IONPs-CS-CHX nanosystem was prepared by CHX interaction to CS-coated IONPs and characterized by X-ray powder diffraction, Fourier transform infrared spectroscopy, transmission electron microscopy and dynamic light scattering. Minimum inhibitory concentration (MIC) of the IONPs-CS-CHX nanosystem was determined according to the broth microdilution assay. After, mono- and dual-species biofilms of C. albicans and S. mutans were formed for 24 hours into wells of 96-well plates in the presence of the nanosystem containing CHX at 39 (IONPs-CS-CHX39) or 78 μg/mL (IONPs-CS-CHX78). Moreover, pre-formed biofilms (24 h) were treated for 24 h with the nanosystem at the same concentrations. The antibiofilm effect was determined by quantification of cultivable cells, total biomass and metabolic activity. Appropriate controls were included in all analyzes. Data were analyzed by Kruskal-Wallis’ test and one-way ANOVA, followed by Student-Newman-Keuls and Holm-Sidak tests (α = 0.05). Results: Characterization results confirmed the nanosystem formation without altering the crystalline properties of the IONPs. In addition, the characteristic absorption bands of each compound were identified in the infrared spectrum, and the mean diameter of the nanosystem was lower than 40 nm. MIC results showed that the nanosystem was slightly more effective than CLX in inhibiting the growth of the microorganisms tested. Biofilms formed in the presence of IONPs-CS-CHX39 attained similar quantitative levels to those observed for CHX at 78 μg/mL. Further, for mono- and dual-species biofilms, IONPs-CS-CHX78 showed similar or superior antibiofilm effects when compared with IONPs-CS-CHX39 and free CHX at 78 μg/mL. Conclusion: The IONPs-CS-CHX nanosystem was able to reduce biofilm formation and pre-formed biofilms of C. albicans and S. mutans in single or mixed cultures. The development of this nanosystem establishes several possibilities for exploration of magnetic nanoparticle-based therapy as drug carrier used in health area. / 16-18/404721

Orientador: Ana Claudia Pavarina / Banca: Ana Lúcia Machado / Banca: Francisco de Assis Nollo Junior / Banca: Helena de Freitas Oliveira Paranhos / Banca: Soraya Coelho Leal / Resumo: Esta investigação teve os seguintes objetivos: 1. avaliar in vitro o efeito da Terapia Fotodinâmica (PDT) utilizando diferentes concentrações de curcumina e doses de luz LED na inativação de suspensões planctônicas de S. aureus resistente (MRSA) e susceptível à meticilina (MSSA) e a citotoxicidade dos parâmetros antimicrobianos dessa terapia em cultura celular de fibroblastos; 2. o efeito fotodinâmico da cloro-alumínio ftalocianina (ClAlFt) veiculada em nano-emulsão catiônica e aniônica e comparar com ClAlFt diluída em solvente orgânico na inativação da C. albicans quando em suspensão planctônica e organizados em biofilmes; 3. o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica utilizando a cloroalumínio ftalocianina em sistema de nanoemulsão em culturas planctônicas e biofilmes de bactérias gram-positivas (MSSA e MRSA). No primeiro estudo, suspensões de MSSA e MRSA foram tratadas com diferentes concentrações de curcumina (entre 0,1 a 20,0 μM) e expostas a diferentes fluências de LED azul (18; 25 e 37,5 J/cm2). Em seguida, diluições seriadas foram obtidas e alíquotas de 25 μl de cada diluição foram plaqueadas em meio de cultura Mannitol Salt Agar. Após o período de incubação de 48 horas a 37°C, as unidades formadoras de colônias foram determinadas (UFC/mL). Para as células L929, essas foram incubadas por 20 minutos com curcumina e irradiadas em seguida com LED (37,5 J/cm2). A viabilidade celular após a PDT foi avaliada utilizando o teste de MTT e as alterações morfológicas foram avaliadas pela microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os resultados foram submetidos à análise descritiva, Análise de Variância (ANOVA) e post hoc de Tukey (α= 5%). As concentrações de 5, 10 e 20 μM resultaram em completa inativação do MSSA quando associadas a qualquer fluência de energia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this investigation was to evaluate: 1. the Photodynamic Therapy (PDT) mediated by curcumin for in vitro inactivation of methicillin-resistant S. aureus (MRSA) and susceptible S. aureus (MSSA) and its citotoxic effects against L929 fibroblasts; 2. the photodynamic potential of aluminum-chloride-phthalocyanine (ClAlPc) entrapped in cationic and anionic nanoemulsions (NE) to inactivate C. albicans planktonic and biofilm cultures compared with free ClAlPc; 3. the photodynamic effect of ClAlPc encapsulated in NE on methicillin susceptible and resistant S. aureus suspensions and biofilms. In the first study, suspensions of MSSA and MRSA were treated with different concentrations of curcumin and exposed to LED. Serial dilutions were obtained from each sample, and colony counts were quantified. For fibroblasts, the cell viability subsequent to the curcumin-mediated photodynamic therapy was evaluated using the MTT assay and morphological changes were assessed by SEM analysis. Curcumin concentrations ranging from 5.0 to 20.0 μM in combination with any tested LED fluences resulted in photokilling of MSSA. However, only the 20.0 μM concentration in combination with highest fluence resulted in photokilling of MRSA. This combination also promoted an 80% reduction in fibroblast cell metabolism and morphological changes were present, indicating that cell membrane was the main target of this phototherapy. In the second study, fungal suspensions were treated with different types of delivery systems containing ClAlPc. After 30 minutes, the drug was washed-out and samples were illuminated with LED source (660 ± 3 nm). Negative control samples were not exposed to ClAlPc or light. For planktonic suspensions, colonies were counted (CFU/ml) and cell metabolism was evaluated by XTT assay. (Kruskal-Wallis and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor