A natamicina é um composto antifúngico bastante utilizado na indústria alimentar, pois é seguro para o consumo e não afeta a qualidade dos alimentos. Recentemente surgiu uma preocupação em relação ao seu uso aditivo em bebidas e iogurtes, uma vez que a natamicina poderia exercer pressão seletiva e desencadear o desenvolvimento de resistência aos polienos in vivo na microbiota comensal do hospedeiro. Diante dessa incerteza, abordamos o possível desenvolvimento da resistência contra a natamicina. Uma seleção de 17 isolados de Candida spp. foi submetida a concentrações crescentes de natamicina durante um tempo prolongado. A exposição à natamicina provocou um aumento de MIC em 14 dos 17 isolados testados e o desenvolvimento de resistência à natamicina foi evidenciado em 5 destes 14 isolados. Dezesseis isolados apresentaram aumento de MIC para anfotericina B e 4 destes isolados mostraram resistência à anfotericina B. A capacidade de formação de biofilmes desses isolados também foi realizada e 3 isolados apresentaram aumento da capacidade de formação de biofilmes após indução de resistência à natamicina. Foi possível evidenciar que a resistência adquirida à natamicina foi maior em isolados que apresentavam baixa suscetibilidade antes da exposição à natamicina. Em vista dos resultados acima mencionados, ressalta-se a importância do monitoramento da natamicina aditivada nos alimentos, pois seus níveis residuais em concentrações elevadas podem exercer uma pressão seletiva sobre as espécies de Candida constituintes da microbiota comensal humana gastrointestinal, no que tange a sua virulência e resistência. / Natamycin is a antifungal compound used in the food industry because it is safe for consumption and has no effect on quality of foods. Recently a concern has arisen over its additive use in beverages and yogurts since natamycin could exert selective pressure and trigger the development of polyene resistance in vivo in the commensal microbiota of host. In view of this uncertainty, we address the possible development of resistance against the natamycin. A selection of 17 isolates of Candida spp. was subjected to increasing concentrations of natamycin for prolonged time. The natamycin-exposure caused an increase of M.I.C. in 14 out of 17 tested isolates and the development of natamycin resistance was evidenced in 5 of these 14 isolates. Sixteen isolates showed increased of M.I.C to amphotericin B and 4 of these isolates showed resistance to amphotericin B. The biofilm forming capacity of the isolates also was performed and 3 isolates presented increasing the capacity to form biofilms after induction of natamycin resistance. It was possible to show that acquired natamycin resistance was increased in isolates that showed low susceptibility before natamycin exposure. In view of the aforementioned results, the importance of the monitoring of natamycin in food is highlighted, since its residual levels in high concentrations may exert a selective pressure on Candida species constituting the gastrointestinal human commensal microbiota, in relation to its virulence and resistance.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6739_DISSERTAÇÃO Aline Dias Ribeiro.pdf: 1995821 bytes, checksum: 257ebf9537bf0f4881b2a7d2bf130050 (MD5) Previous issue date: 2013-08-09 / INTRODUÇÃO: Infecções de corrente sanguínea por fungos têm se destacado principalmente pelo crescente número de casos de candidemia (infecções por Candida spp neste sítio). Atualmente, este fungo figura como um dos sete patógenos mais comuns em infecções nosocomiais, apresentando taxas de mortalidade bruta entre 40 e 70% e atribuída, de 50%. Formação de biofilme é frequentemente associada a persistente infecção por Candida spp. e dificulta o tratamento devido à elevada resistencia que as células fúngicas adquirem a drogas antifungicas, nestas circunstâncias. OBJETIVOS: Determinar a incidência de candidemias no Hospital Universitário Cassiano Antônio de Moraes (HUCAM), entre 1º de março de 2011 a 30 de dezembro de 2012; determinar as taxas de prevalência das espécies de Candida spp.e testar a potencial atividade das drogas anfotericina B e voriconazol na inibição de formação de biofilme pelas espécies isoladas. MATERIAIS e MÉTODOS: Informações sobre o número total de admissões e de pacientes-dia, na UTI e UTIN do HUCAM foram fornecidos pelo setor de estatística e as 32 cepas de Candida spp., obtidos de sangue, urina e ponta de cateter foram isoladas no laboratório de Análises Clínicas deste hospital. Para as análises de inibição de formação de biofilme foram utilizados os testes estatísticos de Wilcoxon, de Sinais e de Mann-Whitney. RESULTADOS: O setor do HUCAM com maior incidência de candidemia foi a UTIN (8,6/10.000 pacientes-dia e 14,2/1.000 internações). Candida spp foi 5º microrganismo mais isolado das ICS, com predomínio de espécies não-albicans (81%), sendo C. parapsilosis a espécie mais frequente. Na UTIN, a frequência de candidemia por C. albicans foi de 67% e a única espécie não-albicans isolada foi Candida parapsilosis. Na avaliação da inibição de formação de biofilme foi constatado que as concentrações de anfotericina B estatisticamente significantes foram: 128 µg/mL para as epécies C. albicans, C parapsilosis e C tropicalis e 64 µg/mL para as espécies agrupadas em outros. Voriconazol foi capaz de inibir formação de biofilme apenas para isolados da espécie C. albicans e na maior concentração testada (16 µg/mL). CONCLUSÕES: A maior incidência de candidemia no HUCAM foi encontrada para recém-nascidos internados na UTIN. A distribuição das espécies de Candida variou de acordo com setores do hospital, mas sofreu pouca alteração em relação ao período estudado. No geral, anfotericina B foi mais eficaz que voriconazol na inibição de formação de biofilme por espécies de Candida.

Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2013-03-13T21:50:01Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeVitro.PDF: 1286315 bytes, checksum: 4d1c857679d9f07646fb49d7ee1eb83d (MD5) / Approved for entry into archive by Neide Nativa (neide@sisbin.ufop.br) on 2013-03-15T16:01:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeVitro.PDF: 1286315 bytes, checksum: 4d1c857679d9f07646fb49d7ee1eb83d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-15T16:01:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoAtividadeVitro.PDF: 1286315 bytes, checksum: 4d1c857679d9f07646fb49d7ee1eb83d (MD5) Previous issue date: 2007 / Com o número crescente de pacientes sob imunossupressão induzida por doenças ou fármacos, as infecções fúngicas disseminadas estão se tornando problemas sérios de saúde, principalmente em ambiente hospitalar, e novas abordagens para a terapia antifúngica precisam ser investigadas. Grande parte das infecções disseminadas é provocada pela espécie Candida albicans sendo o fluconazol o fármaco de escolha, mas o surgimento de fenômenos de resistência fúngica tem sido relatado. Com o intuito de investigar o efeito do fluconazol associado a nanoestruturas sobre espécies de Candida, neste trabalho foram desenvolvidas nanoemulsões e nanocápsulas de poli-e- caprolactona contendo fluconazol. Análises morfológicas e físico-químicas das nanoestruturas foram realizadas revelando formato esférico e tamanho médio variando de 136,5 a 180,2 nm para as nanoemulsões (NE) e de 203,6 a 213,6 nm para as nanocápsulas (NC). Ambas as dispersões apresentaram características homogêneas e demonstraram estruturas monodispersas. O percentual de encapsulação do fluconazol nas NE e NC foi de 49,2 ± 0,65 e 45,6 ± 0,52, respectivamente. Procedimentos de purificação por diálise direta foram efetuados e as nanoestruturas foram testadas contra suspensões celulares de Candida albicans e Candida parapsilosis e seus efeitos avaliados por turbidimetria, contagem de células, teste de viabilidade celular por colorimetria com o reativo Brometo de 3-[4,5-dimetiltriazol-2-il]-2,5 difeniltetrazólio (MTT) e por quantificação de ergosterol utilizando fármaco livre, nanoemulsões e nanocápsulas de fluconazol submetidas ou não aos procedimentos de purificação. Os resultados demonstraram diferentes efeitos ocasionados pela presença das nanoestruturas contra C. albicans e C. parapsilosis quando comparados aos efeitos do fármaco livre. As nanoestruturas purificadas por diálise apresentaram um efeito com perfil de dose dependência frente à inibição do crescimento de Candida. Os resultados variaram segundo os métodos e as análises estatísticas não demonstraram correlação entre as diferentes metodologias. As duas espécies de Candida parecem se comportar de forma diferente quando expostas às nanoestruturas de fluconazol ou à presença de nanoestruturas livres de fármaco. Entretanto, muitos estudos ainda são necessários para se evidenciar o efeito das nanopartículas sobre o fenômeno de resistência das espécies de Candida testadas frente às nanoemulsões e nanocápsulas de fluconazol. ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Nosocomial fungal infections are becoming serious health problems due to the growing number of patients under natural or induced immunossupression and there is a need for new approaches on antifungal therapy. The great part of disseminated fungal infections is related to Candida spp. and in many cases the drug of choice is fluconazole, which broad use has been related to fungal resistance emergence. Little is known about the activity of antifungal drugs associated to drug delivery systems in resistance phenomena. In this work we developed fluconazole nanoemulsions and poly-e- caprolacton nanocapsules by polymer interfacial deposition followed by solvent displacement in order to investigate the effect of fluconazole associated to nanostructures against Candida spp. The nanostructures were tested against Candida albicans and Candida parapsilosis cells suspensions and their effect was evaluated by turbidimetric, colorimetric and ergosterol quantification assays. Morphological and physical-chemical analysis of the nanostructures revealed spherical shape and mean size varying from 136,5 to 180,2 nm for nanoemulsions (NE) and from 203,6 to 213,6 nm for nanocapsules (NC). Both dispersions have presented homogeneous and monodisperse. The drug loading for fluconazole in NE and NC was 49,2 ± 0,65 and 45,6 ± 0,52, respectively. The susceptibility assays were carried out with the free drug, the nanoemulsions and the nanocapsules underwent or not to dialysis purification. The results showed different effects caused by the presence of nanostructures against C. albicans and C. parapsilosis when compared to the free drug. The dialyzed nanostructures showed results of dose dependent profile in Candida growing inhibition. Comparisons between the results obtained using the different methods were made and they revealed variations. The two species seem to behave differently when exposed to fluconazole-loaded or unloaded nanostructures. Further studies are necessary in order to elucidate the effect of nanostructures in Candida fluconazole-resistance phenomena.

Made available in DSpace on 2016-04-01T17:54:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-10. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-01T18:00:37Z : No. of bitstreams: 1 000860697.pdf: 1733916 bytes, checksum: 319f98dc74fda5996433b386d24f96c0 (MD5) / A alta incidência de candidoses causadas por Candida albicans e a capacidade de adaptação desta espécie, assim como resistência aos antifúngicos impulsionam o desenvolvimento de pesquisas com terapias alternativas para controle dessa infecção. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência de Lactobacillus rhamnosus e produtos do seu metabolismo contra C. albicans, avaliando-se a patogenicidade e a expressão de genes que regulam a formação do biofilme de C. albicans, in vitro e in vivo em modelo invertebrado de Galleria mellonella. Foram utilizadas cepas de C. albicans ATCC 18804 e L. rhamnosus ATCC 9595 (provenientes do Laboratório de Microbiologia do Instituto de Ciências e Tecnologia de São José dos Campos / UNESP). Para o estudo foram preparadas duas suspensões de L. rhamnosus, uma contendo a porção celular e a outra com o sobrenadante da cultura, livre de células. O estudo da patogenicidade in vitro de C. albicans foi avaliado pelos testes de formação de biofilme e quantificação de UFC/mL de C. albicans, análise da atividade metabólica pelo método do XTT e filamentação de C. albicans. A análise da curva de sobrevivência de Galleria mellonella foi utilizada para a avaliação in vivo da influência de L. rhamnosus na infecção causada por C. albicans. Os genes, BCR1, EFG1, CPH1, HWP1, ALS1 e ALS3 de C. albicans foram quantificados pela RT-PCR após a interação em modelo de biofilme. No estudo in vitro L. rhamnosus foi capaz de inibir a formação do biofilme, filamentação e reduzir a atividade metabólica de C. albicans. Esses efeitos também foram observados quando utilizado a suspensão do sobrenadante da cultura de L. rhamnosus, apontando possível produção de substâncias com efeito inibitório. Os resultados obtidos in vivo apontam que L. rhamnosus e seu sobrenadante protegeram G. mellonella da infecção por C. albicans, porém a suspensão do sobrenadante apresentou melhores resultados, visto.... / The high incidence of candidiasis caused by Candida albicans and the adaptability of this species, as well as resistance to antifungal drive the development of research on alternative therapies to control this infection. The aim of this study was to evaluate the influence of Lactobacillus rhamnosus and products of their metabolism against C. albicans, evaluating the pathogenicity and the expression of genes that regulate the formation of C. albicans biofilms in vitro and in vivo in invertebrate model Galleria mellonella. Strains of C. albicans ATCC 18804 and L. rhamnosus ATCC 9595 were used (from the Microbiology Laboratory of the Institute of Science and Technology of São José dos Campos / UNESP). For the study were prepared from L. rhamnosus two suspensions, one containing the serving cell and the other with the culture supernatant free cells. The study of in vitro pathogenicity of C. albicans was assessed by biofilm formation testing and quantitation of CFU / ml of C. albicans, analysis of metabolic activity by XTT method and C. albicans filamentation. The analysis of the Galleria mellonella survival curve was used to evaluate in vivo the influence of L. rhamnosus in infection caused by C. albicans. Genes, BCR1, EFG1, CPH1, HWP1, ALS1 and ALS3 of C. albicans were quantified by RT-PCR after interacting in biofilm model. In vitro evaluation L. rhamnosus was able to inhibit biofilm formation, filamentation and reduce the metabolic activity of C. albicans. These effects were also observed when using the suspension culture supernatant of L. rhamnosus, indicating the possible of production substances with inhibiting effect. The results obtained in vivo indicate that L. rhamnosus and its supernatant protected G. mellonella of C. albicans infection, but the suspension of the supernatant showed better results, as it increased the survival caterpillar G. mellonella. The results of gene expression have shown that ....

No description available.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-03-30Bitstream added on 2014-06-13T20:25:45Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_apd_dr_arafo.pdf: 832813 bytes, checksum: 759c5af5e6cd507196080c8dc6e34faa (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Esta investigação teve os seguintes objetivos: 1. avaliar in vitro o efeito da Terapia Fotodinâmica (PDT) utilizando diferentes concentrações de curcumina e doses de luz LED na inativação de suspensões planctônicas de S. aureus resistente (MRSA) e susceptível à meticilina (MSSA) e a citotoxicidade dos parâmetros antimicrobianos dessa terapia em cultura celular de fibroblastos; 2. o efeito fotodinâmico da cloro-alumínio ftalocianina (ClAlFt) veiculada em nano-emulsão catiônica e aniônica e comparar com ClAlFt diluída em solvente orgânico na inativação da C. albicans quando em suspensão planctônica e organizados em biofilmes; 3. o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica utilizando a cloroalumínio ftalocianina em sistema de nanoemulsão em culturas planctônicas e biofilmes de bactérias gram-positivas (MSSA e MRSA). No primeiro estudo, suspensões de MSSA e MRSA foram tratadas com diferentes concentrações de curcumina (entre 0,1 a 20,0 μM) e expostas a diferentes fluências de LED azul (18; 25 e 37,5 J/cm2). Em seguida, diluições seriadas foram obtidas e alíquotas de 25 μl de cada diluição foram plaqueadas em meio de cultura Mannitol Salt Agar. Após o período de incubação de 48 horas a 37°C, as unidades formadoras de colônias foram determinadas (UFC/mL). Para as células L929, essas foram incubadas por 20 minutos com curcumina e irradiadas em seguida com LED (37,5 J/cm2). A viabilidade celular após a PDT foi avaliada utilizando o teste de MTT e as alterações morfológicas foram avaliadas pela microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os resultados foram submetidos à análise descritiva, Análise de Variância (ANOVA) e post hoc de Tukey (α= 5%). As concentrações de 5, 10 e 20 μM resultaram em completa inativação do MSSA quando associadas a qualquer fluência de energia... / The aim of this investigation was to evaluate: 1. the Photodynamic Therapy (PDT) mediated by curcumin for in vitro inactivation of methicillin-resistant S. aureus (MRSA) and susceptible S. aureus (MSSA) and its citotoxic effects against L929 fibroblasts; 2. the photodynamic potential of aluminum-chloride-phthalocyanine (ClAlPc) entrapped in cationic and anionic nanoemulsions (NE) to inactivate C. albicans planktonic and biofilm cultures compared with free ClAlPc; 3. the photodynamic effect of ClAlPc encapsulated in NE on methicillin susceptible and resistant S. aureus suspensions and biofilms. In the first study, suspensions of MSSA and MRSA were treated with different concentrations of curcumin and exposed to LED. Serial dilutions were obtained from each sample, and colony counts were quantified. For fibroblasts, the cell viability subsequent to the curcumin-mediated photodynamic therapy was evaluated using the MTT assay and morphological changes were assessed by SEM analysis. Curcumin concentrations ranging from 5.0 to 20.0 μM in combination with any tested LED fluences resulted in photokilling of MSSA. However, only the 20.0 μM concentration in combination with highest fluence resulted in photokilling of MRSA. This combination also promoted an 80% reduction in fibroblast cell metabolism and morphological changes were present, indicating that cell membrane was the main target of this phototherapy. In the second study, fungal suspensions were treated with different types of delivery systems containing ClAlPc. After 30 minutes, the drug was washed-out and samples were illuminated with LED source (660 ± 3 nm). Negative control samples were not exposed to ClAlPc or light. For planktonic suspensions, colonies were counted (CFU/ml) and cell metabolism was evaluated by XTT assay. (Kruskal-Wallis and... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-17. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:47:09Z : No. of bitstreams: 1 000843223.pdf: 1441368 bytes, checksum: c87084a3d4f9e2c1fd32be68729a4c4b (MD5) / Streptococcus sanguinis e Streptococcus mitis são colonizadores pioneiros do biofilme bucal e podem causar endocardite bacteriana. Candida albicans está presente na cavidade bucal de forma comensal, possui capacidade de formar biofilme e causar candidose bucal. O objetivo desse trabalho foi avaliar as interações entre C. albicans com S. sanguinis e S. mitis em biofilmes e suas influências in vivo em modelo experimental de invertebrado Galleria mellonella. Para o estudo da interação de C. albicans (ATCC 18804) com S. sanguinis (ATCC 7073) e S. mitis (ATCC 4945) foram formados biofilmes monoespécie e multiespécies de C. albicans com os micro-organismos (na concentração de 107 células/mL) em fundo de placa de 96 poços por 48 h, incubados em estufa a 37 °C com 5% CO2. Após crescimento, os biofilmes foram desprendidos e obtidas diluições decimais as quais foram semeadas em meios seletivos. Após incubação por 48 h/37 °C foi obtida a contagem de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL). Em paralelo, foram realizados ensaios colorimétricos com o sal XTT, a fim de mensurar a atividade metabólica de C. albicans nos biofilmes isolados e associados, seguindo de leitura a 492 nm, e o resultado expresso em absorbância (Abs). No estudo in vivo, primeiro foram determinadas as concentrações subletais dos micro-organismos, e inoculadas em G. mellonella, e observado o efeito de C. albicans, S. mitis e S. sanguinis nas lagartas, avaliando se curva de sobrevivência. Avaliação morfológica dos biofilmes foi realizada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os dados de contagem de UFC/mL e da atividade metabólica foram submetidos à análise de normalidade, e como foi observada distribuição normal, os resultados foram analisados estatisticamente pelos testes t de Student (para duas variáveis) e Tukey (para três ou mais variáveis), considerando-se diferença estatística quando p <0,05. Os dados obtidos na curva de.. / Streptococcus sanguinis and Streptococcus mitis are pioneering colonizers of oral biofilm and can cause bacterial endocarditis. Candida albicans is present in the oral cavity in a commensal manner and also has the ability to form biofilm and cause oral candidiasis. The aim of this study was to evaluate the interactions between C. albicans with S. sanguinis and S. mitis biofilms and their influences in vivo on an experimental invertebrate model of Galleria mellonella. To study the interaction of C. albicans (ATCC 18804) with S. sanguinis (ATCC 7073) and S. mitis (ATCC 4945) monospecies and multispecies biofilms were formed of C. albicans and with micro-organisms (a concentration of 107 cells/ml) in the bottom of a 96-well plate for 48 h, incubated at 37 °C with 5% CO₂. After growth, biofilms were detached, and decimal dilutions were plated on selective media. After incubation for 48 h/37 °C the count of colony forming units per milliliter (CFU/mL) was obtained. Alongside, XTT salt colorimetric assays were carried in order to measure the metabolic activity of isolated and associated C. albicans biofilms, following reading at 492 nm, and the result expressed in absorbance (Abs). In the in vivo study, first the sublethal concentrations of microorganisms were determined, and inoculated into G. mellonella, and the effect of C. albicans, S. mitis and S. sanguinis in caterpillars was observed, evaluating the survival curve. Morphological evaluation of the biofilms was performed by scanning electron microscopy (SEM). The count of CFU/mL and metabolic activity were submitted to normality analisis, and as a normal distribution was observed, the results were statistically analyzed by Student's t test (for two variables) and Tukey (for three or more variables) considering statistical difference at p < 0.05. The G. mellonella survival curves data were analyzed by log-rank method. Streptococci influenced the reduction of biofilms of C. albicans and ....

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:25:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:48:42Z : No. of bitstreams: 1 000846451.pdf: 1430012 bytes, checksum: b36ec304aba3d25dcd4c3440e3fd6a9e (MD5) / Dental materials act as substrates for the adhesion of microorganisms, and consequently, for biofilm development. Given that the surface characteristics of materials may interfere in the initial adhesion, changes in these characteristics may inhibit or reduce the adhesion of bacteria and fungi, thus preventing the development of diseases. Another aspect to consider is that, in the oral cavity, surfaces are covered with saliva, forming a thin film referred to as acquired salivary pellicle. In order to simulate oral conditions, in vitro studies have used preconditioning in human saliva before biofilm formation. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of plasma polymerized films on the surface characteristics of dental materials (acrylic resin, titanium and zirconia), as well as on the biofilm formation on these materials, with and without preconditioning in human saliva. For this purpose, the monomer hexamethyldisiloxane HMDSO was used as precursor in the PECVD (Plasma Enhanced Chemical Vapor Deposition) process. Deposition parameters were varied to produce a range of films with hydrophobic or hydrophilic characteristics. Specimens of each material without film deposition were used as controls. Characterization of the films was performed by Fourier Transformed infrared spectroscopy (FTIR), scanning electron microscopy (SEM), contact angle measurements and surface free energy, X-ray photoelectron spectroscopy (XPS), and profilometry. To evaluate biofilm formation, half of the test specimens (10 × 2 mm) of the experimental and control groups were stored in previously prepared 16 human saliva and afterwards incubated with 1 × 107 cells/mL of both Candida albicans (for acrylic resin) and Porphyromonas gingivalis (for titanium and zirconia). Samples without preconditioning in saliva were also incubated in the respective microorganisms... (Complete abstract electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-16Bitstream added on 2014-08-13T17:59:37Z : No. of bitstreams: 1 000776405.pdf: 3048630 bytes, checksum: dd7162075858785d5b09e7766ce033f4 (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro e in vivo as interações entre as diferentes espécies de Candida por meio da formação de biofilme em placas de 96 poços, indução de candidose experimental em modelo de Galleria mellonella e de camundongos imunossuprimidos. Foram estudadas as cepas padrão das seguintes espécies: C. albicans (ATCC 18804), C. krusei (ATCC 6258) e C. glabrata (ATCC 90030). A partir de cada espécie, foram formados biofilmes monotípicos e heterotípicos no fundo da placa de 96 poços por 48 h. A seguir, a quantidade de biofilme formado foi analisada pela determinação do número de unidades formadoras de colônias (UFC/mL). G. mellonella foi inoculada com suspensões homotípicas e heterotípicas de Candida (105 células/mL) e incubadas a 37°C. Durante 5 dias, o número de lagartas mortas foi avaliado diariamente para análise da curva de sobrevivência. Em outro experimento, após 0, 2, 4, 8, 12 e 24 h da infecção por Candida, a hemolinfa das lagartas foi extraída para contagem das células fúngicas (UFC/mL). Para a indução da candidose bucal em camundongos, os animais foram inoculados com suspensões microbianas homotípicas ou heterotípicas contendo 108 células/mL. Após 48 h da última inoculação, amostras do dorso da língua foram coletadas e semeadas em ágar cromogênico HiCrome para contagem de UFC/mL recuperadas da cavidade bucal. Em seguida, os animais foram eutanasiados e as línguas retiradas para análise macroscópica e microscópica. A análise dos dados de UFC/mL dos biofilmes in vitro, de Candida na hemolinfa de G. mellonella e da recuperação dos camundongos foi feita por Análise de Variância, Teste de Tukey ou t de Student. A análise da curva de sobrevivência foi realizada utilizando o teste Log-rank (Mantel-Cox). Para avaliação dos escores obtidos na análise macroscópica e histológica foram aplicados os testes de Krusk-Wallis ou Mann-Whitney ... / The aim of this study was to evaluate in vitro and in vivo interactions between different Candida species through the formation of biofilms in 96-well plates, induction of experimental candidiasis in Galleria mellonella model and immunosuppressed mice. We studied the standard strains of the following species: C. albicans (ATCC 18804), C. krusei (ATCC 6258) and C. glabrata (ATCC 90030). Monotypic biofilms of each species and heterotypic biofilms were performed on the bottom of 96-well plate for 48 h. Then, the amount of biofilm was analyzed by determining the number of colony forming units (CFU/mL). The larvae of G. mellonella were inoculated with homotypic and heterotypic suspensions of Candida (105 cells/mL) and incubated at 37°C. For 5 days, the number of dead larvae was assessed daily for survival curve analysis. In another experiment, after 0, 2, 4, 8, 12 and 24 h of infection with Candida, hemolymph of worms was extracted for counting the fungal cells (CFU/mL). For induction of oral candidiasis in mice, the animals were inoculated with homotypic or heterotypic microbial suspensions containing 108 cells/mL. After 48 h of the last inoculation, samples of the tongue were collected and seed in HiCrome chromogenic agar for counting of CFU/mL recovered from the oral cavity. Then, the animals were euthanized and their tongues removed for macroscopic and microscopic analysis. The analysis of Candida biofilms in vitro CFU/mL, the hemolymph of G. mellonella and recovery of mice were made by ANOVA, Tukey test or Student’s t test. The analysis of the survival curve was performed using GraphPad Prism using the Log-rank test (Mantel - Cox). Kruskal-Wallis or Mann-Whitney were applied for evaluation scores of macroscopic and histological analysis (p≤0,05). The results of biofilms in vitro have demonstrated a lower number of CFU/mL of C. albicans biofilms in heterotypic biofilm compared ...

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:10:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2001-06-05Bitstream added on 2014-11-10T11:57:21Z : No. of bitstreams: 1 000134804.pdf: 2170606 bytes, checksum: a9bb17090b4e19e238785aceaee3fa1d (MD5) / O presente estudo teve como objetivo a produção de um anticorpo monoclonalreativo com leveduras do gênero Candida. Esplenócitos de camundongosBALB/c previamente imunizados com Candidaforam fusionados in vitro comcélulas de mieloma Sp2-0Ag14 e os híbridos resultantes mantidos em cultura a37°C com 5% de C02. Os sobrenadantes das células em crescimento foram testados por ELISA para a produção de anticorpos. Os pontos positivos {0,29%)foram clonados para obter-se o anticorpo monoclonal e posteriormenteexpandidos in vivo emperitônio de camundongo. O anticorpo produzido peloclone foi purificado e isotipado. O anticorpo monoclonal foi denominado 76C e éuma lgMK. O 76C é dirigido para um epítopo de mananoproteína da paredecelular de Candida, cuja natureza ainda não foi completamente elucidada. Oanticorpo 76C foi analisado por DOT SLOT contra diferentes cepas de Candidareagindo positivamente com 87,5% das amostras testadas. O anticorpomonoclonal (76C) será uma ferramenta útil no estudo sorológico de pacientescom candidose invasiva. / The aim of this study was to obtain a reactive monoclonal antibody against Candida albicans. Spleen celIs of BALB/c mice previously immunized withCandida were fused in vitro with mielorna cells Sp2-0Ag14. The resultant hybridcells were kept in culture medium at 5% C02.The suspension growing cells were tested by ELISA to check the antibodies titer. The positive colonies were cloned to achieve the monoclonal antibody and further expanded in mice peritoneum. The antibody produced was purified and isotope. The monoclonal antibody was denominated 76C. The 76C was directed against mannoprotein molecules from Candida cell surface, which has not yet been completely investigated to find outlhe specific nature of epitope. The antibody 76C was analyzed by DOT BLOTagainst different Candida species and there were positives results in 87,5% of the tested samples_ The monoclonal antibody 76C will be a useful tool to investigate oligomannoside epitope from mannan and could be applied in sera diagnosis in invasive candidiasis and in studies of glicidic epitope.