O teste do micronúcleo (MN) vem sendo utilizado omo indicador de exposição genotóxica uma vez que sua ocorrência está associada às aberrações cromossômicas. Comparou-se a frequência de MN de 30 pacientes alcoólicos crônicos portadores de carcinomas orais e orofaríngeos, nos quais o consumo de álcool variou de quatro à 59 anos, com a de 30 indivíduos abstinentes de semelhante nível sócio-econômico. A diferença (14,5 anos) entre a média da idade dos pacientes (52,9 ± 1,6) e a dos controles (38,4 ± 1,5) foi estatisticamente significante (P< 0,0001). A pesquisa consiste na análise de 2000 células de escamação da mucosa oral de três regiões distintas da boca de pacientes e controles: ao redor da lesão (B), na região contra-lateral à lesão (A) e na região fundo de saco gengivo-labial superior (C), previamente considerada controle devido à baixa incidência de tumores. As células foram fixadas, coradas e analisadas em "teste cego" através de técnica modificada e adaptada aos requisitos específicos da pesquisa. O número de MN por 2000 células por indivíduo nos pacientes, assim como nos controles mostrou uma distribuição de Poisson com dispersão assimetricamente positiva, e aumento da variância nos pacientes. A distribuição de anomalias metanucleares também exibiu desvios significantes da dispersão normal. A heterogeneidade da frequência de MN nas três regiões orais dos pacientes, avaliada através do teste de Kruskal-Wallis, mostrou-se extremamente significante (P = 0,005). Enquanto a comparação entre as regiões B vs C foi estatisticamente significante (P < 0,01), as comparações entre as regiões A vs B ou A vs C (P > 0,05) não revelaram diferenças estatisticamente significante através do teste de comparação múltipla de Dunn. As comparações das diferençasnas frequências de MN resultantes do emparelhamento entre as três regiões orais (A-B, A-C, BC), aumentou o nível de significância dos resultados quanto à heterogeneidade regional (P = 0,0003) e tornou a comparação A vs C estatisticamente significante. Entretanto, a análise da variância não paramétrica da distribuição de MN nas três regiões orais dos controles não indicou heterogeneidade (P = 0,943). As frequências de MN e de células metanucleadas nas regiões orais dos pacientes também foram comparadas à dos controles através do teste de Mann-Whitney. A diferença na região tumoral foi extremamente significante (P < 0,001) e, significante na região oposta à lesão (P = 0,03) porém não significante na região fundo de saco gengivo-labial superior (P = 0,44). Esses resultados indicam um aumento de sete vezes na frequência de MN ao redor da lesão, três vezes na região oposta à lesão e duas vezes, embora não estatisticamente significante, na região fundo de saco gengivo-labial superior, revelando um gradiente na frequência de MN no sentido C -> A -> B. Comparações das frequências de células metanucleadas: binucleadas (BI), cariorréxes (CR), cariólises (CL) e broken egg (BE) nas três regiões orais de pacientes e controles, revelaram diferenças extremamente significantes, com exceção apenas de BE, em todas as regiões orais e de CR na região fundo de saco gengivo-labial superior. As comparações dicotômicas das variáveis independentes não paramétricas com a frequência de MN através dos testes de contingência e Mann-Whitney, não foram estatisticamente significantes ao nível de 5% de probabilidade, com exceção de uma única questão do questionário de diagnóstico do alcoolismo CAGE, que confirmou o efeito do álcool. Ao contrário dos resultados esperados, as frequências de MN e anomalias metanucleares não mostraram associações significantes com a idade tanto nos pacientes como nos controles. Ainda mais, a análise de regressão múltipla escalonada da frequência de células com MN ou anomalias metanucleares sobre fatores intervenientes, como idade, fim e tempo de consumo de álcool e tempo de uso de tabaco, nos pacientes, revelou coeficientes de regressão pequenos e negativos, mas significantes. Já os coeficientes de regressão da variável CL sobre o consumo de álcool foi significantemente pequeno, mas positivo, com ou sem transformação das frequências das variáveis dependentes através da raiz quadrada. Entretanto, os resultados da análise de regressão dos pacientes, aparentemente contraditórios, podem ser explicados supondo-se que as frequências de MN, durante a exposição crônica ao álcool, teriam um forte aumento inicial, diminuindo posteriormente até um nível significantemente maior que aquele no início do consumo de álcool; por outro lado, a frequência de CL aumentaria inversamente como resultado da transformação de MN durante o processo de reparo. Pode-se deduzir a partir resultados da presente pesquisa que a análise de células com MN e anomalias metanucleares devem levar em consideração critérios de padronização citológicos rígidos. O número de células a ser contado deve ser fixo e superior a 2000 de modo que inclua a variabilidade normal (espontânea) da distribuição de MN e, ainda, eliminar viéses estatísticos na estimativa de suas frequências. Ainda, o tamanho da amostra deve ser superior à 30 indivíduos, a fim de assegurar a representatividade estatística. A significância das diferenças inter-grupais deve ser estimada através de testes não paramétricos. Além disso, análises intra-individuais (ou inter-regionais) bem como a utilização de controles específicos inter-individuais pareados quanto aos fatores intervenientes (sexo, idade, grupo étnico, nível sócio-econômico, etc.) deveriam ser práticas metodológicas usuais. Como conclusão, o teste do MN deve ser considerado como uma técnica de triagem simples, prática, econômica e não invasiva para a prevenção e monitoramento clínicos de indivíduos sob risco carcinogênico, após exposição à agentes ou situações genotóxicas, como consumo crônico e abusivo de álcool, tabaco e/ou outras drogas mutagênicas, ou ainda, manipulação profissional de derivados de petróleo e outras substâncias tóxicas industriais. No contexto da presente investigação, o teste do MN deve ser particularmente indicado para monitoramento da evolução clínica de indivíduos com tumores ou lesões leucoplásicas curadas ou removidas cirurgicamente ou após tratamentos quimo ou radioterápicos, através de comparações intra e interindividuais. / Micronucleus (MN) test has been used as an indicator of genotoxic exposition since it is associated with the occurrence of chromosomal aberrations. The frequency of MN among 30 subjects with oral and oropharyngeal carcinomas, whose alcohol consumption varied from four to 59 years, was compared to that of 30 healthy control individuals, abstinent for alcohol and matched for social-economic status. Difference (14.5 years)between average age of patients (52.9 ± 1.6) and that of controls (38.4 ± 1.5) was statistically significant (P <0.0001). The investigation includes the examination of 2000 cells per individual from each of three distinct areas in the mouth of patients and controls: around the lesion (B), opposite to the lesion (A) and in the upper gengivo-labial gutter (C) taken as control site because of its low tumour occurrence. The cells were fixed, dried and analyzed under "blind test", according to the technique of Sarto, modified and fitted strictly to the requirements of the research. The number of MN per 2000 cells per individual among patients as well as controls showed a Poisson distribution with a positively asymmetric dispersion and an increased variance among patients. Distribution of metanucleated cells also departed significantly from normal dispersion. The heterogeneity of MN in the three oral regions of patients, evaluated through Kruskal-Wallis test, was highly significant (P = 0.005) and pairwise comparison B vs C was statistically significant (P < 0.01) but not comparisons between A vs B or A vs C (P > 0.05), through Dunn´s multiple comparison test. Comparisons of pairwise inter-regional oral differences of MN frequencies (A-B, A-C, B-C), increased the significance levels of the results for regional heterogeneity (P =0.0003) becoming also the comparison A vs C statistically significant. Otherwise, non parametric analysis of variance of the MN distribution in the three oral regions of the controls indicated great statistical homogeneity (P = 0.943). Frequencies of MN and metanucleated cells in the oral regions of patients were also compared to those of controls, through Mann-Whitney test. Differences were highly significant (P< 0.001) for tumoral region and significant for the region opposite to the lesion (P = 0.03) but not for the upper gengivo-labial gutter (P = 0.44). These results indicated a seven-time increase in the frequency of MN in the region around the lesion, a three-time increase in the opposite region and a two-time but non significant increase in the upper gengivo-labial gutter, revealing a gradient frequency in the way C -> A -> B. Comparisons of frequencies of metanucleated cells: binucleated (BI), cariorrhexis (CR), cariolisis (CL) and broken egg (BE) in the three oral regions, between patients and controls, showed highly significant differences, except for BE frequencies in all oral regions and for CR frequency in the upper gengivo-labial gutter. Dichotomous comparisons of non parametric independent variables, with MN frequencies, through contingency and Mann-Whitney tests, were not significant at 5% level of probability, except for CAGE diagnosis of alcoholism, which confirmed the alcohol effect. Contrary to the expected results, sistematically frequencies of MN and metanucleated cells were not significantly correlated to age among patients as well as controls. Moreover, stepwise multiple regression analysis of MN and metanucleated cells in the patients revealed small negative,but significant, regression coefficients upon intervinient factors such age, end and time of alcohol consumption and time of tobacco usage, but regression coefficients of CL, upon alcohol consumption, were significantly small, but positive, before or after square root transformation of dependent variables. However, the apparently contradictory results from analysis of regression among patients could be explained by the assumption that frequencies of MN, under alcohol exposure, had a early strong increase, but decreased, afterwards, to a level significantly greater than that before alcohol consumption, while CL frequency conversely increased significantly as a result from MN transformation, during the repair process. It could be stated from the results of the present research that examination of cells with MN and metanucleated anomalies should follow critical and strict cytological criteria of standardization. The number of cell counts should be fixed and above 2000 in order to include normal (spontaneous) variability in the distribution of MN and, therefore, to prevent biases in the estimation of its frequencies. Also, sample size should be above 30 individuals, so that the statistical representativity be assured and significance of intergroup differences, could be estimated through non parametric tests. Moreover, intra-individual (or intra-regional) examinations and specific interindividual controls matched for intervinient factors (sex, age, etnic group, socio-economic level,etc.) should be an usual methodological practice. As a conclusion, it must to be considered that MN test is a simple, practical, non-expensive and non-invasive screening technique of diagnosis for clinical prevention and management of subjects under carcinogenic risks, after exposition to genotoxical agents or situations, such as abusive and chronical consumption of alcohol, tobacco and/or other mutagenic drugs or professional manipulation of derivatives of petroleum and other toxical industrial substances. In the context of the present investigation, the MN test must particularly be indicated for monitoring the clinical evolution of subjects with healed or surgically removed tumours or leukoplasic lesions, after chemio or radiotherapic treatments, by means of intra and inter-individual cellular comparisons.

O carcinoma oral de células escamosas (OSCC Oral Squamous Cell Carcinoma) é o câncer de cabeça e pescoço mais comum. Somente no Brasil, foram estimados 14.160 novos diagnósticos para o ano de 2009. O HPV está associado com o aumento no risco do câncer oral, mas seu papel na carcinogênese ainda é controverso. A BubR1, uma proteína importante para o checkpoint de fuso mitótico (SAC Spindle Assembly Checkpoint), tem sido associada com algumas proteínas codificadas por espécies virais e com o câncer. O objetivo do presente estudo foi avaliar a expressão de BubR1 em lesões orais benignas e amostras de OSCC com e sem metástase associadas com infecção pelo HPV. Nós realizamos imunoistoquímica para BubR1 em 16 biópsias de lesão oral benigna e em 70 biópsias de OSCC divididas em três grupos (tumores in situ, tumores invasivos sem metástase e tumores invasivos com metástase), com os respectivos linfonodos das amostras com metástase. A técnica de Nested PCR foi realizada com finalidade de detectar DNA do HPV. Nas lesões malignas, foi observada uma significante superexpressão de BubR1 associada com menor sobrevida (p = 0.0479). Houve também correlação significante (r = 1.000) de BubR1 entre as lesões com metástase e seus respectivos linfonodos. Noventa por cento dos OSCC e 100% das lesões benignas foram HPV positivos. HPV 16 e HPV 18 foram detectados em, respectivamente, 13% e 24% das amostras com OSCC HPV-positivas. O HPV teve maior prevalência (76%) nas amostras com alta expressão de BubR1 e a ausência de DNA viral não influenciou no padrão de expressão de BubR1. Esses resultados sugerem uma provável associação do HPV com a superexpressão de BubR1 em OSCC, o que não se aplica para lesões orais benignas. / Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the most common head and neck cancer. Only in Brazil, the estimate is that 14,160 new diagnoses will be made in 2009. HPV is associated with increasing risk of oral cancer, but its role in carcinogenesis is still controversial. BubR1, an important protein in the mitotic Spindle Assembly Checkpoint (SAC), has been associated with some virus-encoded proteins and cancer. The aim of the present study was to evaluate the expression of BubR1 in non-malignant oral lesions and OSCC with and without metastasis associated with HPV infection. We performed immunohistochemistry for BubR1 in 16 non-malignant oral lesion biopsies and in 70 OSCC biopsies divided into three groups (in situ tumors, invasive tumors without metastasis and invasive tumors with metastasis) with their respective lymph nodes from samples with metastasis. Nested PCR was performed in order to detect HPV DNA. Significantly higher BubR1 expression associated with shorter survival (p = 0.0479) was observed in malignant lesions. There was also a significant correlation (r = 1.000) with BubR1 expression in lesions with metastasis and their lymph nodes. Ninety percent of OSCC and 100% of benign lesions were HPV positive. HPV 16 and HPV 18 were present in 13% and 24% of HPV-positive OSCC samples, respectively. HPV was more prevalent (76%) in samples with high BubR1 expression and the absence of viral DNA had no influence on BubR1 expression. These findings suggest that HPV could be associated with overexpression of BubR1 in OSCC, but not in benign oral lesions.

O carcinoma oral de células escamosas (OSCC Oral Squamous Cell Carcinoma) é o câncer de cabeça e pescoço mais comum. Somente no Brasil, foram estimados 14.160 novos diagnósticos para o ano de 2009. O HPV está associado com o aumento no risco do câncer oral, mas seu papel na carcinogênese ainda é controverso. A BubR1, uma proteína importante para o checkpoint de fuso mitótico (SAC Spindle Assembly Checkpoint), tem sido associada com algumas proteínas codificadas por espécies virais e com o câncer. O objetivo do presente estudo foi avaliar a expressão de BubR1 em lesões orais benignas e amostras de OSCC com e sem metástase associadas com infecção pelo HPV. Nós realizamos imunoistoquímica para BubR1 em 16 biópsias de lesão oral benigna e em 70 biópsias de OSCC divididas em três grupos (tumores in situ, tumores invasivos sem metástase e tumores invasivos com metástase), com os respectivos linfonodos das amostras com metástase. A técnica de Nested PCR foi realizada com finalidade de detectar DNA do HPV. Nas lesões malignas, foi observada uma significante superexpressão de BubR1 associada com menor sobrevida (p = 0.0479). Houve também correlação significante (r = 1.000) de BubR1 entre as lesões com metástase e seus respectivos linfonodos. Noventa por cento dos OSCC e 100% das lesões benignas foram HPV positivos. HPV 16 e HPV 18 foram detectados em, respectivamente, 13% e 24% das amostras com OSCC HPV-positivas. O HPV teve maior prevalência (76%) nas amostras com alta expressão de BubR1 e a ausência de DNA viral não influenciou no padrão de expressão de BubR1. Esses resultados sugerem uma provável associação do HPV com a superexpressão de BubR1 em OSCC, o que não se aplica para lesões orais benignas. / Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is the most common head and neck cancer. Only in Brazil, the estimate is that 14,160 new diagnoses will be made in 2009. HPV is associated with increasing risk of oral cancer, but its role in carcinogenesis is still controversial. BubR1, an important protein in the mitotic Spindle Assembly Checkpoint (SAC), has been associated with some virus-encoded proteins and cancer. The aim of the present study was to evaluate the expression of BubR1 in non-malignant oral lesions and OSCC with and without metastasis associated with HPV infection. We performed immunohistochemistry for BubR1 in 16 non-malignant oral lesion biopsies and in 70 OSCC biopsies divided into three groups (in situ tumors, invasive tumors without metastasis and invasive tumors with metastasis) with their respective lymph nodes from samples with metastasis. Nested PCR was performed in order to detect HPV DNA. Significantly higher BubR1 expression associated with shorter survival (p = 0.0479) was observed in malignant lesions. There was also a significant correlation (r = 1.000) with BubR1 expression in lesions with metastasis and their lymph nodes. Ninety percent of OSCC and 100% of benign lesions were HPV positive. HPV 16 and HPV 18 were present in 13% and 24% of HPV-positive OSCC samples, respectively. HPV was more prevalent (76%) in samples with high BubR1 expression and the absence of viral DNA had no influence on BubR1 expression. These findings suggest that HPV could be associated with overexpression of BubR1 in OSCC, but not in benign oral lesions.

O teste do micronúcleo (MN) vem sendo utilizado omo indicador de exposição genotóxica uma vez que sua ocorrência está associada às aberrações cromossômicas. Comparou-se a frequência de MN de 30 pacientes alcoólicos crônicos portadores de carcinomas orais e orofaríngeos, nos quais o consumo de álcool variou de quatro à 59 anos, com a de 30 indivíduos abstinentes de semelhante nível sócio-econômico. A diferença (14,5 anos) entre a média da idade dos pacientes (52,9 ± 1,6) e a dos controles (38,4 ± 1,5) foi estatisticamente significante (P< 0,0001). A pesquisa consiste na análise de 2000 células de escamação da mucosa oral de três regiões distintas da boca de pacientes e controles: ao redor da lesão (B), na região contra-lateral à lesão (A) e na região fundo de saco gengivo-labial superior (C), previamente considerada controle devido à baixa incidência de tumores. As células foram fixadas, coradas e analisadas em "teste cego" através de técnica modificada e adaptada aos requisitos específicos da pesquisa. O número de MN por 2000 células por indivíduo nos pacientes, assim como nos controles mostrou uma distribuição de Poisson com dispersão assimetricamente positiva, e aumento da variância nos pacientes. A distribuição de anomalias metanucleares também exibiu desvios significantes da dispersão normal. A heterogeneidade da frequência de MN nas três regiões orais dos pacientes, avaliada através do teste de Kruskal-Wallis, mostrou-se extremamente significante (P = 0,005). Enquanto a comparação entre as regiões B vs C foi estatisticamente significante (P < 0,01), as comparações entre as regiões A vs B ou A vs C (P > 0,05) não revelaram diferenças estatisticamente significante através do teste de comparação múltipla de Dunn. As comparações das diferençasnas frequências de MN resultantes do emparelhamento entre as três regiões orais (A-B, A-C, BC), aumentou o nível de significância dos resultados quanto à heterogeneidade regional (P = 0,0003) e tornou a comparação A vs C estatisticamente significante. Entretanto, a análise da variância não paramétrica da distribuição de MN nas três regiões orais dos controles não indicou heterogeneidade (P = 0,943). As frequências de MN e de células metanucleadas nas regiões orais dos pacientes também foram comparadas à dos controles através do teste de Mann-Whitney. A diferença na região tumoral foi extremamente significante (P < 0,001) e, significante na região oposta à lesão (P = 0,03) porém não significante na região fundo de saco gengivo-labial superior (P = 0,44). Esses resultados indicam um aumento de sete vezes na frequência de MN ao redor da lesão, três vezes na região oposta à lesão e duas vezes, embora não estatisticamente significante, na região fundo de saco gengivo-labial superior, revelando um gradiente na frequência de MN no sentido C -> A -> B. Comparações das frequências de células metanucleadas: binucleadas (BI), cariorréxes (CR), cariólises (CL) e broken egg (BE) nas três regiões orais de pacientes e controles, revelaram diferenças extremamente significantes, com exceção apenas de BE, em todas as regiões orais e de CR na região fundo de saco gengivo-labial superior. As comparações dicotômicas das variáveis independentes não paramétricas com a frequência de MN através dos testes de contingência e Mann-Whitney, não foram estatisticamente significantes ao nível de 5% de probabilidade, com exceção de uma única questão do questionário de diagnóstico do alcoolismo CAGE, que confirmou o efeito do álcool. Ao contrário dos resultados esperados, as frequências de MN e anomalias metanucleares não mostraram associações significantes com a idade tanto nos pacientes como nos controles. Ainda mais, a análise de regressão múltipla escalonada da frequência de células com MN ou anomalias metanucleares sobre fatores intervenientes, como idade, fim e tempo de consumo de álcool e tempo de uso de tabaco, nos pacientes, revelou coeficientes de regressão pequenos e negativos, mas significantes. Já os coeficientes de regressão da variável CL sobre o consumo de álcool foi significantemente pequeno, mas positivo, com ou sem transformação das frequências das variáveis dependentes através da raiz quadrada. Entretanto, os resultados da análise de regressão dos pacientes, aparentemente contraditórios, podem ser explicados supondo-se que as frequências de MN, durante a exposição crônica ao álcool, teriam um forte aumento inicial, diminuindo posteriormente até um nível significantemente maior que aquele no início do consumo de álcool; por outro lado, a frequência de CL aumentaria inversamente como resultado da transformação de MN durante o processo de reparo. Pode-se deduzir a partir resultados da presente pesquisa que a análise de células com MN e anomalias metanucleares devem levar em consideração critérios de padronização citológicos rígidos. O número de células a ser contado deve ser fixo e superior a 2000 de modo que inclua a variabilidade normal (espontânea) da distribuição de MN e, ainda, eliminar viéses estatísticos na estimativa de suas frequências. Ainda, o tamanho da amostra deve ser superior à 30 indivíduos, a fim de assegurar a representatividade estatística. A significância das diferenças inter-grupais deve ser estimada através de testes não paramétricos. Além disso, análises intra-individuais (ou inter-regionais) bem como a utilização de controles específicos inter-individuais pareados quanto aos fatores intervenientes (sexo, idade, grupo étnico, nível sócio-econômico, etc.) deveriam ser práticas metodológicas usuais. Como conclusão, o teste do MN deve ser considerado como uma técnica de triagem simples, prática, econômica e não invasiva para a prevenção e monitoramento clínicos de indivíduos sob risco carcinogênico, após exposição à agentes ou situações genotóxicas, como consumo crônico e abusivo de álcool, tabaco e/ou outras drogas mutagênicas, ou ainda, manipulação profissional de derivados de petróleo e outras substâncias tóxicas industriais. No contexto da presente investigação, o teste do MN deve ser particularmente indicado para monitoramento da evolução clínica de indivíduos com tumores ou lesões leucoplásicas curadas ou removidas cirurgicamente ou após tratamentos quimo ou radioterápicos, através de comparações intra e interindividuais. / Micronucleus (MN) test has been used as an indicator of genotoxic exposition since it is associated with the occurrence of chromosomal aberrations. The frequency of MN among 30 subjects with oral and oropharyngeal carcinomas, whose alcohol consumption varied from four to 59 years, was compared to that of 30 healthy control individuals, abstinent for alcohol and matched for social-economic status. Difference (14.5 years)between average age of patients (52.9 ± 1.6) and that of controls (38.4 ± 1.5) was statistically significant (P <0.0001). The investigation includes the examination of 2000 cells per individual from each of three distinct areas in the mouth of patients and controls: around the lesion (B), opposite to the lesion (A) and in the upper gengivo-labial gutter (C) taken as control site because of its low tumour occurrence. The cells were fixed, dried and analyzed under "blind test", according to the technique of Sarto, modified and fitted strictly to the requirements of the research. The number of MN per 2000 cells per individual among patients as well as controls showed a Poisson distribution with a positively asymmetric dispersion and an increased variance among patients. Distribution of metanucleated cells also departed significantly from normal dispersion. The heterogeneity of MN in the three oral regions of patients, evaluated through Kruskal-Wallis test, was highly significant (P = 0.005) and pairwise comparison B vs C was statistically significant (P < 0.01) but not comparisons between A vs B or A vs C (P > 0.05), through Dunn´s multiple comparison test. Comparisons of pairwise inter-regional oral differences of MN frequencies (A-B, A-C, B-C), increased the significance levels of the results for regional heterogeneity (P =0.0003) becoming also the comparison A vs C statistically significant. Otherwise, non parametric analysis of variance of the MN distribution in the three oral regions of the controls indicated great statistical homogeneity (P = 0.943). Frequencies of MN and metanucleated cells in the oral regions of patients were also compared to those of controls, through Mann-Whitney test. Differences were highly significant (P< 0.001) for tumoral region and significant for the region opposite to the lesion (P = 0.03) but not for the upper gengivo-labial gutter (P = 0.44). These results indicated a seven-time increase in the frequency of MN in the region around the lesion, a three-time increase in the opposite region and a two-time but non significant increase in the upper gengivo-labial gutter, revealing a gradient frequency in the way C -> A -> B. Comparisons of frequencies of metanucleated cells: binucleated (BI), cariorrhexis (CR), cariolisis (CL) and broken egg (BE) in the three oral regions, between patients and controls, showed highly significant differences, except for BE frequencies in all oral regions and for CR frequency in the upper gengivo-labial gutter. Dichotomous comparisons of non parametric independent variables, with MN frequencies, through contingency and Mann-Whitney tests, were not significant at 5% level of probability, except for CAGE diagnosis of alcoholism, which confirmed the alcohol effect. Contrary to the expected results, sistematically frequencies of MN and metanucleated cells were not significantly correlated to age among patients as well as controls. Moreover, stepwise multiple regression analysis of MN and metanucleated cells in the patients revealed small negative,but significant, regression coefficients upon intervinient factors such age, end and time of alcohol consumption and time of tobacco usage, but regression coefficients of CL, upon alcohol consumption, were significantly small, but positive, before or after square root transformation of dependent variables. However, the apparently contradictory results from analysis of regression among patients could be explained by the assumption that frequencies of MN, under alcohol exposure, had a early strong increase, but decreased, afterwards, to a level significantly greater than that before alcohol consumption, while CL frequency conversely increased significantly as a result from MN transformation, during the repair process. It could be stated from the results of the present research that examination of cells with MN and metanucleated anomalies should follow critical and strict cytological criteria of standardization. The number of cell counts should be fixed and above 2000 in order to include normal (spontaneous) variability in the distribution of MN and, therefore, to prevent biases in the estimation of its frequencies. Also, sample size should be above 30 individuals, so that the statistical representativity be assured and significance of intergroup differences, could be estimated through non parametric tests. Moreover, intra-individual (or intra-regional) examinations and specific interindividual controls matched for intervinient factors (sex, age, etnic group, socio-economic level,etc.) should be an usual methodological practice. As a conclusion, it must to be considered that MN test is a simple, practical, non-expensive and non-invasive screening technique of diagnosis for clinical prevention and management of subjects under carcinogenic risks, after exposition to genotoxical agents or situations, such as abusive and chronical consumption of alcohol, tobacco and/or other mutagenic drugs or professional manipulation of derivatives of petroleum and other toxical industrial substances. In the context of the present investigation, the MN test must particularly be indicated for monitoring the clinical evolution of subjects with healed or surgically removed tumours or leukoplasic lesions, after chemio or radiotherapic treatments, by means of intra and inter-individual cellular comparisons.

Background: Oral Tongue Squamous Cell Carcinoma (OTSCC) is the most frequent and aggressive carcinoma in the head and neck region. Its incidence has increased during the last decades, especially in young patients (≤40 years) mainly female. These young patients have either not been exposed to the traditional risk factors for this disease, or have a much reduced duration of exposure than the typical OTSCC patient. The reasons behind this increasing incidence remain unknown. The aims of this thesis were to analyse the presence and possible role of human papillomavirus (HPV) in oral tongue cancer in correlation with its surrogate marker p16 and its receptor syndecan-1. Other aims were to evaluate expression of EMT (epithelial to mesenchymal transition) - related markers, such as E-cadherin, β-catenin, CK5 and CK19, and to address the potential predictive role of podoplanin in the loco-regional metastatic process. Clinical parameters including age, sex, geographical distribution, relapse, tumour staging and grading were also investigated for a possible correlation with biomarker expression and prediction of survival rate and therapeutic strategy. Materials and methods: More than one hundred samples of OTSCC coming from two University Hospitals of two different countries (Sweden and Italy) were analysed. HPV presence was evaluated by in situ hybridisation for detection of the high-risk HPV 16 and indirectly by immunohistochemistry (IHC) of its surrogate marker p16. Expression of the HPV receptor syndecan-1 and the EMT biomarkers E-cadherin, β-catenin, CK5, CK19 were also evaluated by immunohistochemistry. Samples were scored using a quick score (QS), taking both number and intensity of cells stained into account. Podoplanin expression was investigated at both protein and RNA level. Results: Tumour size and lymph node metastasis correlated to both overall and disease-free survival. Despite variable expression of the syndecan-1 receptor, HPV 16 was not detected in any sample analysed, excluding a possible association with p16, which was expressed in 33% of the cases. All EMT-related markers were commonly expressed in tongue cancer. Data showed E-cadherin to be an independent prognostic factor with higher expression associated with poor overall survival. Notably, E-cadherin, β-catenin and CK5 directly correlated to each other. Multivariate analysis of clinical data demonstrated that age of the patient is an independent prognostic factor with younger patients showing a worse survival rate. Patients younger than 40 years also showed significantly higher expression of podoplanin. Data for geographic distribution revealed a difference in expression of E-cadherin between Swedish and Italian patients. Conclusions: In contrast to SCC of the base of the tongue and the tonsil, HPV is not present in OTSCC, excluding HPV infection as a risk factor. Higher levels of E-cadherin and young age is associated with poor survival in OTSCC patients. The different frequency of EMT markers seen between Swedish and Italian patients suggests an important role for the environment and the geographical area in the onset of different molecular patterns of OTSCC.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-08-18T12:37:51Z No. of bitstreams: 1 PDF - Arlley de Sousa Leitão.pdf: 2597615 bytes, checksum: 0a6b3ab14e5990ad23636f3f5b717799 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-18T12:37:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Arlley de Sousa Leitão.pdf: 2597615 bytes, checksum: 0a6b3ab14e5990ad23636f3f5b717799 (MD5) Previous issue date: 2015-07-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is more than 90% of malignant tumors of the oral mucosa, with infiltrative feature, aggressive clinical course and poor prognosis. A factor that can interfere in the OSCC prediction consists of the components of the tumor microenvironment. Tumor associated macrophages (TAMs) represent a portion of this cell population and are divided according to their state of polarization: M1 subtype that exerts anti-tumor properties and the M2 subtype that has anti-inflammatory activity. The list of TAMs with OSCC in young patients still unknown. The present study analyzed, through immunohistochemistry, the presence of subpopulations M1 and M2 of TAMs in a number of cases of squamous cell carcinoma of tongue (SCCT). Histological sections obtained from 44 cases of SCCT divided into two groups (11 cases of young patients ≤ 45, and 33 cases of elderly patients ≥ 60 years) were evaluated, thus being certain histopathological grades of malignancy. The material was subjected to double staining technique for the anti-CD68 monoclonal antibody, anti-CD163 and anti-HLA-DR, obtaining the distinction between TAMs M1 (CD68 / HLA-DR) and M2 (CD68 / CD163). Cases of SCCT analyzed in this study, compared to age 11 (25.0%) patients were young while 33 (75.0%) were elderly. For histopathological grading of malignancy proposed by WHO, the assessment of TAMs M1 showed medians of 12.3 in well-differentiated tumors; 5.8 in the moderately differentiated tumors and 5.8 in poorly differentiated lesions. For TAMs M2, lesions classified as well differentiated revealed a median of 10.7; moderately differentiated lesions exhibited a median of 2.7 and poorly differentiated tumors showed a median of 6.85. Regarding the histological grade of malignancy proposed by Bryne, the evaluation of TAMs M1 showed medians of 11.3 in tumors classified as low-grade and 5.55 in the highly malignant tumors. For TAMs M2, low-grade malignant lesions revealed a median of 8.7 and high-grade lesions exhibited a median of 4.00. This study suggests that the tumor microenvironment has a direct participation in the progression of the disease. / Carcinoma de células escamosas oral (CCEO) representa mais de 90% dos tumores malignos da mucosa oral, apresentando característica infiltrativa, curso clínico agressivo e prognóstico desfavorável. Um fator que pode interferir no prognóstico do CCEO consiste nos componentes do microambiente tumoral. Os macrófagos associados a tumores (MATs) representam uma parcela desta população celular e são divididos de acordo com seu estado de polarização: subtipo M1 que exerce propriedades anti-tumorais e o subtipo M2 que apresenta atividade anti-inflamatória. A relação dos MATs com o CCEO em pacientes jovens ainda não é conhecida. O presente estudo teve por objetivo analisar, por meio de técnica imunoistoquímica, a presença das subpopulações M1 e M2 de MATs em uma série de casos de carcinoma de células escamosas de língua (CCEL). Cortes histológicos obtidos de 44 casos de CCEL divididos em dois grupos (11 casos de pacientes jovens ≤ 45 anos e 33 casos de pacientes idosos ≥ 60 anos) foram avaliados, sendo assim determinadas as gradações histopatológicas de malignidade. O material foi submetido à técnica de dupla coloração para os anticorpos monoclonais anti-CD68, anti-CD163 e anti-HLA-DR, obtendo a distinção entre os MATs M1 (CD68/HLA-DR) e M2 (CD68/CD163). Os MATs M1 e M2, quando comparados, apresentaram contagens semelhantes no que diz respeito ao tamanho do tumor, presença de metástase linfonodal, presença de metástase à distância e gradação histopatológica de malignidade, no entanto observou-se uma maior contagem de MATs M1 em pacientes diagnosticados com T1 (6,85), e uma maior contagem de M2 em casos T4 (4,55), sugerindo que a maior presença de M1 pode estar relacionada com lesões de tamanho reduzido enquanto que uma maior presença de M2 pode estar relacionada com lesões mais expansivas. Observou-se, também, que em lesões pobremente diferenciadas a contagem de M2 (6,85) foi mais expressiva que a de M1 (4,55), sugerindo que a maior presença de M2 pode estar relacionada com lesões de morfologia mais indiferenciada.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-24 / Objetivos: este trabalho teve como objetivo investigar mutacoes nos exons 1 e 2 do Hras e K-ras, bem como, a imunoexpressao do H-ras, Ki-67, alfa-SMA, metaloproteinases 2 e 9 (MMP-2 e MMP-9) e a via Wnt/ƒÀ-catenina (Wnt1, Frizzled-1, Wnt5a, Frizzled-5 e ƒÀ-catenina) durante a carcinogenese bucal quimicamente induzida pela 4-nitroquinolina 1-oxido (4NQO) em ratos. Material e Metodos: Ratos Wistar machos foram distribuidos em tres grupos de 10 animais cada e tratados com 50 ppm de 4NQO, via bebedouro, durante 4, 12 e 20 semanas. Dez animais foram utilizados como controle. Resultados: apesar da ausencia de alteracoes histopatologicas no epitelio apos 4 semanas de exposicao ao cancerigeno, Ki-67 e Wnt1 mostraram alta expressao no epitelio oral gnormal h; expressao de Ki-67, MMP-2 e MMP-9 foi detectada tanto nas lesoes pre-neoplasicas quanto nos carcinomas espinocelulares bem diferenciados induzidos apos 12 e 20 semanas de tratamento com a 4NQO, respectivamente; alfa-SMA revelou-se diferencialmente expressa nos carcinomas espinocelulares. Nenhuma diferenca significativa (p>0.05) foi encontrada na expressao de H-ras, Frizzled-1, Frizzled-5 e ƒÀ-catenina, em todos os momentos avaliados. Do mesmo modo, nenhuma mutacao foi encontrada nos genes H-ras e K-ras. Conclusoes: de acordo com os resultados encontrados, o aumento do status proliferativo a partir do Ki-67 e expressao de Wnt1, MMP-2 e MMP-9 estao associados ao risco e a progressao do cancer bucal, enquanto que mutacoes no gene Ras parecem nao estar envolvidas na carcinogenese lingual induzida pela 4NQO. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-11-03Bitstream added on 2014-06-13T20:14:35Z : No. of bitstreams: 1 polachini_gm_me_sjrp.pdf: 1649993 bytes, checksum: 7bfc3ef81e6bc4cacef121f7c1fc4715 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço é um tumor agressivo e está relacionado com a exposição ao tabaco e ao álcool. A recorrência elevada, a variação na agressividade e as taxas baixas de sobrevivência dessa doença requerem nossos esforços para compreender a sua patogênese e para desenvolver melhores estratégias terapêuticas. No presente estudo, foi investigado se a análise proteômica pode identificar diferenças na expressão protéica entre carcinomas de cabeça e pescoço de diferentes graus de estadiamento. Para alcançar este objetivo, foram otimizados protocolos para extração de proteínas e a técnica de eletroforese bidimensional (2D) foi implantada no laboratório. Os padrões de perfil protéico obtidos foram analisados em oito amostras de carcinoma oral e duas de orofaringe (oito procedentes de tumores com metástases em linfonodos regionais e dois sem metástases) e em 17 amostras aparentemente normais de margens cirúrgicas. As variações qualitativas e quantitativas detectadas nos perfis protéicos de ambos os grupos foram consistentes e oito proteínas foram identificadas após análise por espectrometria de massa por dessorção/ionização a laser assistida por matriz (MALDI-TOF-TOF). Foram elas: albumina, alfa enolase, calgranulina B, galectina 7, mioglobina, miosina (cadeia leve 1), miosina (cadeia leve 2) e tropomiosina 2 (beta). Estas proteínas têm sido detectadas com expressão alterada por diferentes autores em carcinomas da cabeça e pescoço e também em outros tumores. Após validação, as proteínas identificadas podem revelar novos biomarcadores de prognóstico e alvos terapêuticos para tumores de cabeça e pescoço. / Head and neck squamous cell carcinoma is an aggressive cancer. It is closely related to the practice of tobacco smoking and alcohol abuse. The high recurrence, heterogeneous biological aggressiveness and low survival rates of this group of cancer require our efforts to understand the pathogenesis of the disease and to develop better therapeutic strategies. In the present study, we investigated whether proteome analysis can identify differences in protein expression between low and high stage head and neck carcinomas. To reach this aim we optimized protocols for protein extraction and established two-dimensional electrophoresis in the laboratory. Proteome profiling patterns were analyzed in eight oral and two oropharyngeal tumor samples (eight from carcinomas presenting lymph node metastasis and two from carcinomas with no regional metastasis) and in 17 apparently normal surgical margins. Qualitative and quantitative variations in both groups were consistent and eight proteins were identified by matrix assisted laser desorption/ionization - time of flight - time of flight (MALDI-TOFTOF) mass spectrometry. These proteins were: albumin, alpha enolase, calgranulin B, galectin 7, myoglobin, myosin (light chain 1), myosin (light chain 2) and tropomyosin beta chain. These proteins have shown to be with altered expression by different studies in head and neck cancers and also in other tumors. After validation, the proteins identified here could be novel biomarkers for prognosis and rational targets for head and neck tumors.

Made available in DSpace on 2014-06-12T22:57:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4010_1.pdf: 1042636 bytes, checksum: dd90fd89cd91f71c437dc0e9f827f6fd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Introdução: O papilomavírus humano (HPV) é o principal agente etiológico de lesões malignas de colo uterino, pênis e possivelmente um dos co-fatores implicados na etiopatogênese do carcinoma oral de células escamosas (OSCC). Objetivos: O presente estudo teve o objetivo de avaliar a transmissão e concordância genotípica do papilomavírus humano (HPV) entre parceiros sexuais da Cidade do Recife em diferentes sítios de coleta (pênis, vagina/colo uterino e boca). Métodos: A amostra foi composta por trinta e um casais heterossexuais residentes na Cidade do Recife e Região Metropolitana. Os indivíduos do sexo masculino da pesquisa foram submetidos a um questionário para avaliar as condições sócioeconômicas, hábitos gerais e sexuais, e história prévia de doenças sexualmente transmissíveis (DSTs), seguido da coleta de esfregaço peniano de lesões malignas e/ou potencialmente malignas possivelmente associadas ao HPV. As respectivas parceiras foram convidadas e também submetidas ao mesmo questionário, seguido da coleta de esfregaço de vagina/colo uterino, exame de colposcopia e citologia cervical, exame clínico e coleta de esfregaço de mucosa oral. A pesquisa do HPVDNA foi realizada através da reação da cadeia de polimerase (PCR) com a utilização dos primers MY09 e MY11 e a identificação da concordância genotípica entre os HPVs foi realizada através da análise do polimorfismo dos fragmentos de DNA (RFLP) obtido pelas enzimas de restrição DdeI e RsaI. Resultados: Foi amplificado HPV-DNA a partir de esfregaço de pênis (P) de 22/31 indivíduos (71%); 18/31 (58,1%) das amostras de vagina/colo (V) e 17/31 (54,8%) de mucosa oral (B). 16/31 (51,6%) casais apresentaram HPV-DNA pelo menos dois sítios anatômicos. Após a análise do padrão de polimorfismo do HPV-DNA obtida através da RFLP foi possível avaliar observar HPV-DNA concordância em 14/31 (45,2%) casais. 5/6 casais (83,3%) que praticam intercurso vaginal sem preservativo apresentaram concordância genotípica entre HPV peniano e vagina/colo uterino; 7/8 (87,5%) casais que relataram uso do preservativo foram PV HPV discordantes (OR=11,67 p=0,039). Similarmente, 8/11 (72,7%) casais que negaram o uso do preservativo durante a prática da felação foram HPV concordantes, enquanto 4/4 casais (100%) que relataram o uso do preservativo durante sexo oral, apresentaram diferentes tipos de HPV peniano e HPV oral (p= 0,025). Conclusão: Baseado nos achados clínicos e laboratoriais foi possível concluir que houve transmissão e concordância genotípica entre parceiros infectados, quando da não utilização de preservativos. A prática da não utilização de barreiras físicas pode contribuir para a etiopatogênese de lesões malignas e/ou potencialmente malignas

As neoplasias de cabeça e pescoço constituem um importante problema de saúde pública devido à alta incidência e alguns tipos estão associados a fatores comportamentais como consumo de álcool e tabaco. Apesar desses dados, a doença, especialmente em sua fase inicial, pode ser curada e alguns tipos podem ser prevenidos. Portanto, existe a necessidade de identificar e validar novos biomarcadores em câncer de cabeça e pescoço com aplicação em prognóstico e seleção de terapias mais adequadas. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi validar o perfil de três proteínas, SET, hnRNP K e MARK3 em tumores de cabeça e pescoço, e verificar a potencial aplicação como marcadores de diagnóstico e prognóstico em HNSCC, bem como propor um papel para estas proteínas na tumorigênese. Foram analisadas 22 amostras de tumores de cabeça e pescoço por western blotting (WB) e 96 amostras (91 tumores, 4 biópsias e 1 controle) dispostas em duplicata em lâmina de tissue microarray, obtidas no Brasil e cedidas pelo Grupo GENCAPO, por imunohistoquímica (IHC). Os dados obtidos foram correlacionados com todos os parâmetros clínicos e patológicos e com prognóstico do paciente com HNSCC por um período de 48 meses. Os resultados obtidos por WB e IHC mostraram acúmulo e fragmentação da SET e acúmulo nuclear e citoplasmático da hnRNP K nos tumores comparado a respectiva margem cirúrgica e tecido normal. A hnRNPK mostrou valor prognóstico sendo associada a sobrevida global do paciente. A proteína c-Myc e a sua forma fosforilada foram analisadas nas amostras de tumores e suas respectivas margens cirúrgicas devido a sua relação com SET, PP2A e hnRNP K. Os resultados mostraram acúmulo da c-Myc fosforilada e total nas amostras tumorais, o que coincidiu com aumento de SET e hnRNP K. Com relação à proteína MARK3, observou-se sua redução no tumor e menor sobrevida livre de doença. Foi realizado ensaio de RNA de interferência (RNAi) contra hnRNP K e SET em linhagem de carcinoma oral (HN13). A redução da proteína SET por RNAi levou a redução significativa da hnRNP K, enquanto a hnRNP K gerou menor efeito na proteína SET, sugerindo um efeito regulatório na expressão ou manutenção da hnRNP K pela SET na célula tumoral. A interferência contra a hnRNP K também reduziu a proliferação celular tumoral. Em conclusão, o aumento da proteína SET está associado à desmoplasia em HNSCC e pode ser um potencial marcador específico para essa condição. hnRNP K e MARK3 podem servir como potenciais marcadores em HNSCC e ajudar a identificar um subgrupo de pacientes com pobre prognóstico. A hnRNPK exerce efeito positivo na proliferação da célula tumoral. SET e hnRNP K podem atuar como fatores oncogênicos favorecendo o aumento de c-Myc. / The head and neck cancers constitute a major public health problem due to the high incidence and some types are associated with behavioral factors such as consumption of alcohol and tobacco. Despite these data, the disease, especially in its early stage can be cured and some types can be prevented. Therefore, there is a need to identify and validate new biomarkers in head and neck cancer, with applications in prognosis and selection of therapies most appropriate. Accordingly, the objectives of this study were validation of the profile of three proteins, SET, hnRNP K and MARK3 in tumors of head and neck, and verify the potential application as markers for diagnosis and prognosis in HNSCC, and suggest a role for these proteins in tumorigenesis. We analyzed 22 samples of head and neck tumors by western blotting (WB) and 96 samples (91 tumors, 4 biopsies and 1 control) arranged in duplicate in the tissue microarray slide, obtained in Brazil and assigned by the GENCAPO Group, by immunohistochemistry (IHC). The data were correlated with all clinical and pathological parameters and prognosis of patients with HNSCC for a period of 48 months. The results obtained by WB and IHC showed the SET accumulation and fragmentation and hnRNP K nuclear and cytoplasmic accumulation in tumor compared to the surgical margin and normal tissue. The hnRNPK prognostic value has been associated with overall survival of patients. The c-Myc protein and its phosphorylated form were analyzed in tumor and surgical margins samples due to its relationship with SET, PP2A and hnRNP K. The results showed accumulated total and phosphorylated c-Myc in tumor samples, which was coincided with increase in SET and hnRNP K. Regarding the protein MARK3 was observed its reduction in tumor and lower disease-free survival. RNA interference (RNAi) against hnRNP K and SET were performed in oral squamous cell carcinoma line (HN13). SET protein reduction by RNAi led to significant reduction of hnRNP K, and hnRNP K showed a minor effect on SET protein, suggesting a regulatory effect on expression or maintenance of hnRNP K by SET in tumor cells. Interference against hnRNP K also reduced tumor cell proliferation. In conclusion, increased SET protein is associated with desmoplasia in HNSCC and may be a potential specific marker for this condition. hnRNP K and MARK3 can serve as potential markers in HNSCC and help identify a subgroup of patients with poor prognosis. The hnRNPK must act a positive effect on cell proliferation of the tumor. SET and hnRNP K may act as oncogenic factors contributing for c-Myc activity.