Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2002. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 101-123).

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2000. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 89-114).

University, Diss., 2005--Würzburg. / Erscheinungsjahr an der Haupttitelstelle: 2005.

Thesis (Ph. D.)--University of Virginia, 2007. / Includes bibliographical references. Also available online through Digital Dissertations.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-08-18T18:02:06Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Evelin Santos Oliveira.pdf: 2781526 bytes, checksum: f26492951c1ef37ba0aa040dae349a10 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-18T18:02:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_Evelin Santos Oliveira.pdf: 2781526 bytes, checksum: f26492951c1ef37ba0aa040dae349a10 (MD5) / Introdução. A tuberculose (TB) é uma doença crônica infecto-contagiosa, presente nos principais casos de morbidade-mortalidade nos países em desenvolvimento. Estima-se que 2 bilhões de pessoas no mundo estão infectadas pelo Mycobacterium tuberculosis e cerca de 10% destes tem risco de desenvolver a doença. Desde 1921, a única vacina utilizada contra tuberculose é o Bacilo de Calmette-Guérin (BCG) e mesmo com o uso, a TB ainda é uma das principais causas de morte por agentes patogênicos. A imunidade celular adquirida após vacinação com BCG é mais efetiva contra a infecção disseminada do que contra a doença pulmonar. São poucas as pesquisas que avaliam a resposta a revacinação e geralmente esses estudos são de acompanhamento ou abrange pequeno número de voluntários. A pesquisa de novas vacinas vem sendo comprometida pelas poucas correlações da imunidade protetora, por isso, a avaliação de marcadores que possam correlacionar com a proteção contra a doença pode facilitar a identificação de novos candidatos vacinais contra TB. Objetivo. Neste trabalho, nós avaliamos a produção de citocinas potencializadoras da resposta imune celular, nomeadamente o IFN-g e o TNF, a produção de citocinas modulatórias como a IL-10 e a geração de células TCD8+IFN-g+ como potenciais marcadores imunológicos de proteção contra a TB. Metodologia. Voluntários entre universitários da área de saúde, submetidos ao teste tuberculínico (TST), e que foram previamente vacinados com BCG. Após consentimento informado, voluntarários TST negativos foram divididos em dois grupos: 50 estudantes foram revacinados com BCG e 30 foram controles. Foram coletados vinte mililitros de sangue nos tempo 0, 2 e 12 meses após revacinação. As culturas foram mantidas por 72h com ou sem 10 ug/ml de antígenos do lisado de Mycobacterium tuberculosis a 370C, 5% CO2. Os sobrenadantes foram avaliados para medir os níveis de citocinas usando citometria de fluxo bem como as frequências de células TCD8+IFN-g+. Resultados e discussão. Foram observados aumento dos níveis de IFN-g nos revacinados quando comparados aos controles 2 meses e 1 ano após a intervenção, semelhantes aos resultados encontrados em trabalho anterior do grupo. Não foram observadas diferenças entre o produção de TNF e IL-10 entre os grupos. Indivíduos do mesmo grupo revacinado apresentaram melhor resposta à revacinação, observados através da alta produção de IFN-g e expansão de células TCD8+IFN-g+ um ano pós- BCG, mostrando também, persistência da resposta. Houve pequena correlação entre tamanho da cicatriz e expansão de células TCD8+ produtoras de IFN-g+. Conclusão. A revacinação é capaz modular a resposta imune aumentando a produção de IFN-g. Neste trabalho, ainda identificamos a persistência da resposta através da expansão de células TCD8+ produtora de IFN-g. Sugerimos que novos modelos vacinais sejam desenvolvidos levando em consideração o importante papel das células CD8+IFN-g+, além do conhecimento de que a resposta é diferenciada na população, portanto, é necessário desenvolver uma vacina que possa abranger indivíduos com infecção latente, já sensibilizados anteriormente com cepa vacinal ou micobactérias atípicas ou ainda com alguma suscetibilidade genética.

A person is exposed to many pathogens throughout their lifetime, and with the resolution of each infection, there remains a pool of pathogen-specific immune cells that protect that person from re-infection with the same pathogen. However, there is a great deal of evidence to suggest that the pool of pathogen-specific memory cells can also participate in the immune response to future infections with unrelated pathogens. Many believe T cells to be cross-reactive in nature because of their interaction with self antigens during development in the thymus and their interaction with foreign antigens once in the periphery. There are many features of the interaction between a T cell and its ligand that facilitate this cross-reactive nature. Based on solved crystal structures, relatively few contacts are required for a stable interaction, and that interaction is often mediated by the flexible CDR3 loops of the T cell receptor that accommodate ligands of various structure. There is also evidence in the murine and human systems that subsets of virus-specific memory CD8 T cells take on an activated phenotype upon infection with an unrelated virus. In murine models, these memory T cell subsets could kill target cells, secrete several cytokines, and proliferate in response to a cross-reactive stimulation, suggesting that a cross-reactive T cell response could impact the outcome of a viral infection. In fact, upon heterologous infection, mice immune to a previous virus were often protected, having lower titers of the second unrelated virus, their epitope-specific and T cell receptor repertoires were often skewed, and they were more prone to immune-mediated pathologies. All of these observations coincided with the presence of cross-reactive T cell responses. Thus, we define heterologous immunity as changes in viral replication and the disease pathology associated with that viral infection as a result of the host's history of infection, and this can be mediated, in part, by cross-reactive CD8 T cell responses. Since many human viral infections are associated with a wide range of disease states, we questioned whether cross-reactive CD8 T cell responses occurred as commonly as they appeared to occur in the murine models and whether they influenced the outcome of such infections. Epstein-Barr virus (EBV) infects over 90% of the U. S. population and has a large genome with the capacity to encode a multitude of T cell epitopes. The first part of this thesis research focuses on the identification of cross-reactive CD8 T cell responses with specificity for known epitopes derived from EBV, a common human virus. We directed our study to HLA-A2-restricted responses because of the common expression of this MHC Class I allele in the U. S. population. This study resulted in the detection of cross-reactive responses with five different specificities that involved either the immunodominant lytic EBV-BMLF1280 epitope or the latent EBNA 3A596epitope. Three of the cross-reactive responses had specificity for epitopes derived from another unrelated, but common, human virus, influenza A virus (IV). Each of these cross- reactive responses had the potential to participate in the collective immune response to acute EBV infection. EBV is also well-suited as a model system to study heterologous immunity in humans, as infection at an early age is frequently asymptomatic, while the same infection during adolescence often results in an immune-mediated syndrome, infectious mononucleosis (IM). Since older individuals have presumably been exposed to more pathogens in their lifetime and, therefore, would have memory CD8 T cell pools with more extensive specificities, we hypothesized that acute EBV infection activated cross-reactive memory CD8 T cell responses that promoted the development of IM. In order to determine if the cross-reactive responses we identified above contributed to the immune response to acute EBV infection, we first screened the blood of IM patients for cross-reactive T cells with specificity for EBV-BMLFl280 and IV-M158. The total number of M1-specific T cells of 5 of 8 patients was increased at presentation with IM, which was suggestive of their specific activation during the EBV infection since a bystander mechanism would have resulted in 8 out of 8 patients having increased numbers of M1-specific T cells. Our hypothesis was further supported by the fact that we clearly detected cross-reactive T cells capable of recognizing both BMLF1 and M1 epitopes in the blood of 2 of the 5 IM patients with an augmented M1-specific T cell frequency. Furthermore, the M1-specific TCR repertoires of those two patients were dramatically skewed, which was an indication of cross-reactive M1-specific T cell expansions and, therefore, participation in the lymphoproliferation characteristic of IM. In addition, T cell lines derived from 3 out of 8 healthy donors with previous exposure to both viruses contained a subset of T cells that responded to both BMLF1 and M1 epitopes, suggesting that these cross-reactive cells are often maintained in memory. These cross-reactive T cells were cytotoxic and produced MIP-1β, IFNγ, and TNFα, functions which could potentially promote the symptoms of IM and, indeed, may have been contributed to the severe case of IM noted in one patient. The final part of this thesis research focused on defining the structure of the cross-reactive TCR that recognized both BMLF1 and M1 epitopes, which have only 33% sequence similarity. In addition, we examined the cross-reactive TCR repertoire organization of multiple individuals to determine the breath and, therefore, the likelihood that this cross-reactive T cell response will occur. These studies revealed that a wide range of Vα and Vβ families can mediate interaction with both epitopes and that the cross-reactive TCR repertoire was unique to each individual, relying heavily on the T cell clones present in that individual's private BMLF1- and M1-specific repertoires. We also observed an increased frequency of TCRs with longer CDR3 regions within the cross-reactive repertoire, which were often extended by non-bulky amino acid residues that could provide these TCRs with more flexibility in order. to accommodate the two different epitope structures. Given that we detected a cross-reactive T cell response with specificity for two immunodominant epitopes derived from two of the most common human viruses among people that share one of the most common MHC Class I alleles in the U. S. population, we predict that cross-reactive T cells are common components of human immune responses. The variability in the magnitude and specificity of each cross-reactive T cell response is dependent on each individual's unique history of infection and th,eir unique TCR repertoire, and such responses likely represent one of many factors that could explain the individual variability in disease severity associated with EBV and many other human viral infections.

Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-03-13T17:57:30Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ERICA FARIAS DE OLIVIERA.pdf: 902019 bytes, checksum: 5d6bde605ed80c34917bea18bd246d17 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-03-23T13:38:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ERICA FARIAS DE OLIVIERA.pdf: 902019 bytes, checksum: 5d6bde605ed80c34917bea18bd246d17 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T13:38:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ERICA FARIAS DE OLIVIERA.pdf: 902019 bytes, checksum: 5d6bde605ed80c34917bea18bd246d17 (MD5) / CAPES / INTRODUÇÃO: A expressão de marcadores de ativação, tais como CD38 e HLA-DR, é frequentemente observada na infecção pelo HIV-1 e tem sido proposto como um marcador de progressão da infecção. OBJETIVO: Analisar os níveis de ativação celular através das frequências destes marcadores em portadores do HIV-1 e coinfecções virais. MATERIAL E MÉTODOS: Foram incluídos 129 pacientes HIV positivos e distribuídos em quatro grupos classificados como, virgem de tratamento (VT), e três diferentes grupos em tratamento e com supressão viral estável, de acordo com o nível de restauração imune: completa (RC, CD4>500 e r CD4/8 >1), parcial (RP, CD4>500 e r<1) e inadequada (RI, CD4<500 e r<1). Indivíduos soronegativos para HIV, HTLV, HBV, HCV e sífilis foram definidos como grupo controle (GC). A frequência de ativação imune celular foi avaliada por citometria de fluxo a partir da expressão dos marcadores CD38 e HLA-DR pelas células TCD4+ e CD8+. Foram realizadas sorologias para CMV e EBV nas amostras de todos os indivíduos, bem como HTLV, HBV, HCV e sífilis nos pacientes infectados pelo HIV-1. RESULTADOS: Os achados demonstraram maior expressão do HLA-DR (17,12%) em comparação ao CD38 (2,02%). Os níveis do HLA-DR foram mais elevados no grupo VT (26,56%) do que no GII (13,01%, p = 0,000), no grupo controle (9,92%, p = 0,000) e no GI (5,40%, p = 0,000). CD38+ esteve aumentado no GII (5,0%), no GC (3,92%) e no GIII (3,14%) comparado ao GI (1,70%, p = 0,007, p = 0,004 e p = 0,029 respectivamente. Células T CD8+ mostraram maior ativação por HLA-DR do que as células T CD4+, enquanto que para o CD38 não houve correlação estatisticamente significante. O resultado mais expressivo das sorologias foi para EBV e CMV, inclusive no GC, seguido por sífilis e HCV nos pacientes. O CONCLUSÃO: Nosso trabalho indica que a razão CD4/CD8 pode ser um bom marcador de ativação imune, em associação ao HLA-DR. / INTRODUCTION: The expression of activation markers, such as CD38 and HLA-DR, is regularly observed in HIV-1 patients and has been proposed as a marker of progression of the infection. OBJECTIVE: Analyze cellular activation levels by measuring the frequencies of these markers among HIV-1 patients. MATERIAL E METHODS: Were included 129 HIV positive patients and divided into four groups classified as virgin treatment (VT) and three different treatment groups and with stable viral suppression, according to the level of immune restoration: full (RC, CD4>500 and r CD4/8>1), partial (RP, CD4>500 and r <1) and inadequate (RI, CD4<500 and r<1). Serum negative individuals for HIV, HTLV, HBV, HCV and syphilis were defined as the control group (GC). The frequency of activated immune cells was assessed by flow cytometry and indicted by expression of CD38 + and HLA-DR markers in CD4 + and CD8 + cells. Foram realizadas sorologias para CMV e EBV nas amostras de todos os indivíduos, bem como HTLV, HBV, HCV e sífilis nos pacientes infectados pelo HIV-1. RESULTS: Results demonstrate a higher expression frequency of HLA-DR (17,12%) compared to CD38 (2,02 %). HLA-DR levels are significantly higher in VT group (26,56%) than in GII (13,01%), p = 0,000, in the control group (9,92%, p = 0,000) and GI (5,40%, p = 0,000). CD38+ presents an increased B group (5,0%), in the control group (3,92%) and in the group C (3,14%) compared to group A (1,70%, p = 0,007, p = 0,004 and p = 0,029 respectively). CD8 T cells showed greater activation by HLA-DR than CD4 cells, whereas for CD38 revealed no statistically significant correlation. The most significant result was the serology for EBV and CMV infections, including GC, followed by syphilis and HCV in patients. CONCLUSION: Our data indicates that the CD4/CD8 ratio may be a good marker of immune activation, in association to marker HLA-DR.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Programa Nacional de DST/Aids / O estudo da infecção recente pelo HIV-1 tem papel fundamental para o entendimento da patogênese da imunodeficiência causada por este vírus. Para tanto, foi estabelecida em 2002 uma coorte na UNIFESP em colaboração com a Prefeitura de São Paulo, com pacientes com infecção recente pelo HIV-1, diagnosticados pelo método de dupla testagem sorológica, o STAHRS. Até o fechamento dos dados para este trabalho foram incluídos 207 voluntários com infecção recente pelo HIV-1, 191 homens (92,27%), 173 deles referem realizar sexo com homens (HSH, 83,98%). Entre todos os participantes, 123 são brancos (59,79%) com média de idade igual a 32,09 anos (extremos de 18,13 e 70,41 anos). Todos os voluntários referem ter contraído o vírus por via sexual. Dentre os parâmetros demográficos pudemos demonstrar a relação entre maior idade no momento da infecção e menor tempo para progressão para imunodeficiência (p=0,02). A mediana do resultado da contagem de linfócitos T CD4+ na primeira coleta de sangue do estudo foi de 529 células/μL (interquartil 25-75% [IQ], 403–698), de linfócitos T CD8+ foi 907 células/μL (IQ 607–1.194) e a mediana da carga viral 21.100 cópias/mL (IQ 4.392-72.025), que em escala logarítmica na base 10 (log10) corresponde a 4,32/mL (IQ 3,64–4,86). Compareceram à consulta clínica inicial 196 pacientes, 66 (33,67%) referiram sintomas, com duração de 15 dias em média, sendo febre o mais freqüente (84,85%), seguido de intensa indisposição ou fraqueza (65,15%), aumento do volume de gânglios (45,45%), dores pelo corpo (36,36%) e dor de garganta (16,66%), além de emagrecimento, diarréia, cefaléia, dor abdominal, úlceras esofágicas e meningite viral. Não houve diferença no tempo de progressão entre os que descreveram sintomas ou não. Os dados sugerem, portanto, não existir relação entre a apresentação clínica inicial e o tempo para imunodeficiência. Observamos ainda que os pacientes que apresentaram sintomas sugestivos de infecção aguda apresentaram maior valor de linfócitos T CD8+ (p=0,003) e de carga viral (p=0,046). Este estudo fortemente sugere que a presença de sintomas na infecção aguda pelo HIV-1 não prediz menor ou maior tempo para imunodeficiência, mas pacientes sintomáticos mantiveram carga vira e contagem de linfócitos T CD8+ elevados durante todo o período de acompanhamento. Estes achados reforçam a importância de estudos de coorte com pacientes com infecção recente pelo HIV-1, para a busca de fatores imunológicos que expliquem estes achados. / Studies of recently HIV-1-infected subjects are important for the pathogenesis understanding of the disease. Therefore, a cohort was started in 2002 at UNIFESP, in collaboration with the City of São Paulo, with recently HIV-1-infected patients identified by the dual testing approach, also known as STARHS. By the time of database locking for this analysis, 207 volunteers were included, 191 men (92.27%), 173 of those reporting sex with men (83.98%). Among the participants, 123 are white (59.79%) with age average of 32.09 years-old (extremes of 18.13 and 70.41). All the volunteers referred sexual acquisition of HIV infection. Among the demographic variables we were able to demonstrate an association between higher age and time for progression to immunodeficiency (p=0.02). The median values for laboratory findings at baseline were CD4+ T of 529 cells/μl (interquartile range 25-75% [IQ], 403–698), CD8+ T of 907 cells/μl (IQ 607–1.194) and viral load of 21,100 copies/ml (IQ 4,392-72,025), translated into 4.32 log10/ml (IQ 3.64–4.86). One hundred, ninety six volunteers came for the first clinical appointment, 66 33.67%) of those describing symptoms compatible with acute HIV infection, on average for 15 days, with fever as the most frequent (84.85%), followed by significant malaise and fatigue (65.15%), lymphnode enlargement (45.45%), body pain (36.36%), and sore throat (16.66%), besides weight loss, diarrhea, headache, abdominal pain, esophageal ulcers, and viral meningitis. We could not detect differences in the time for progression among those who described symptoms or not. Therefore, these data suggest the lack of association between acute HIV-1 infection syndrome and time of progression to immunodeficiency. We could also observe that patients who referred symptoms had higher CD8+ T lymphocyte counts (p=0.003) and higher viral load (p=0.046). This study has strongly suggested that the presence of symptoms during acute HIV-1 infection does not predict faster or slower progression to immunodeficiency, but those patients with acute syndrome maintained higher CD8+ T cell counts and higher viral loads during their follow-up. These findings support the importance of cohort studies in recently HIV-1-infected subjects to better understand the immunological mechanisms to explain these findinds. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:41:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) lucia_souza_ioc_dout_2003.pdf: 5283705 bytes, checksum: 3ff6e75b4851261d3314516984337e50 (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Células CD8+ participam do controle da infecção pelo HIV-1 através de atividades citolítica e supressora da replicação viral (não-citolítica). Contudo, durante a progressão da infeção, são observadas alterações em sua diferenciação e função. Várias razões para tal são postuladas, incluindo a suscetibilidade do próprio linfócito T CD8+ à infecção pelo HIV-1. Neste estudo, analisamos os efeitos da infecção in vitro pelo HIV-1 sobre o fenótipo de células CD8+. Comparado às culturas não-infectadas, observamos aumento de células CD8+ CD57+ e CD45RO+, bem como daquelas de estágio intermediário, enquanto a expressão de CD28 e o fenótipo naive diminuem, sem que haja aquisição do fenótipo efetor, padrão este mais evidente em culturas infectadas por vírus X4 que R5, e semelhante ao que é encontrado in vivo. A função da população expandida CD8+CD57+ foi avaliada e parece inibir a proliferação celular, e desse modo, a replicação viral. Nosso terceiro estudo objetivou analisar se a infecção produtiva de células CD8+ pelo HIV-1 afetaria resultados de ensaios de supressão viral in vitro. Nestes experimentos, utilizamos citocinas gc que apresentam-se alteradas na infecção pelo HIV-1, como IL-2, IL-7 e IL-15, e paradoxicalmente, IL-2 e IL-15 modulam ambos os papéis exercidos por células CD8+ na infecção: alvos e supressoras de replicação viral. Em parte, isto se explica pela cinética mais lenta do vítus nestas células, tornando-as reservatórios me potencial. Ainda, como células dendríticas (DC) produzem IL-15, avaliamos se esta citocina, endógena ou exógena, afetaria a susceptibilidade e atividade antiviral de células CD8+ frente ao HIV-1 em co-cultura com DC autólogas. De fato, IL-15 parece ser um importante estímulo para a atividade supressora de células CD8+ mesmo neste modelo mais fisiológico de replicação viral, embora também promova a infecção das mesmas células CD8+. Esta infeção após contato com DC autólogas HIV-1-pulsadas pode ser explicada pela co-expressão de CD4 e CXCR4, provavelmente facilitada pela interação CD28/B7, já que células CD8+CD28+ apresentam maiores níveis de expressão destes receptores, bem como de produtividade do HIV-1. Portanto, terapias que utilizem as gc-cytokines IL-2 ou IL-15 devem levar em consideração não só a ativação de reservatórios de células CD4+, mas também de células CD8+. / CD8+ T cells contribute to con trol HIV - 1 infection via cytotoxic and non - lytic suppressor activities. However, during progression of disease, it is observed that CD8+ T cells present impairment of differentiation and function. Many reasons for this disturbance in the physiology of CD8+ cells are discussed, including their own susceptibility to HIV - 1 infection. In this study, we analysed the effects of in vitro HIV - 1 infection on phenotype of CD8+ cells. Compared to non - infected cultures, there was an increase of CD57+ and CD45RO+ CD8+ T cells, with diminished expression of the naïve phe notype. On the other hand, the activated/memory as well as the intermediary subset were augmented, without acquisition of the effector phenotype, a pattern similar to that observed in vivo , and more clear ly seen in cultures infected by X4 than R5 virus. We then evaluated in a second study the function of the expanded CD8+CD57+ subset . We found that these cells were able to inhibit cell proliferation and , thus, viral replication. Our third work was aimed to investigate if productive infection of CD8+ T cells may affect the outcome of suppressor assays in vitro . We analysed the effects of  c - cytokines altered during HIV - 1 infection, like IL - 2, IL - 7 and IL - 15 . P aradoxically , IL - 2 and IL - 15 modulated both roles of CD8+ T cells in HIV - 1 infection: targets and suppressors of viral replication. This may in part be explained by the slower kinetics of viral production by CD8+ T cells compared to CD4+ T cells, what may make them potential virus reservoirs. Since virus - stimulated dendritic cells are able to produce IL - 15, which we demonstrated to promote productive HIV - 1 infection of CD8+ T cells as well as their non - cytolytic antiviral function, we also evaluated in a fourth study , the role of endogenous and exogenous IL - 15 on X4 HIV - 1 production in co - cultures with autologous DC. Indeed, IL - 15 seems to be an important stimulus for CD8+ antiviral activity, albeit it promotes productive HIV - 1 infection in DC/CD8+ co - cultures. Infection of CD8+ cells in contact to autolog ous DC could be explained by their co - expression of CD4 and CXCR4, probably supported by CD28/B7 interaction, since in our studies we found that CD8+CD28+ cells presented higher levels of expression of co - receptors and HIV - 1 productivity than CD8+CD28 - cel ls. Thus, therapies using either  c - cytokines IL - 2 or IL - 15 in HIV - 1 infection might consider the activation not only of CD4+ T cells reservoirs, but also of CD8+ T cells

Made available in DSpace on 2016-03-10T13:18:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 fernanda_cortes_ioc_dout_2014.pdf: 5719125 bytes, checksum: 6db914d863efd13cbfcacc7296b02027 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-01-13 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A pandemia do HIV-1 é a infecção emergente mais importante das últimas décadas. O desenvolvimento de uma vacina é colocado como a melhor estratégia para o controle da pandemia. No entanto, entre os candidatos vacinais que evoluíram para testes clínicos de eficácia, apenas um mostrou resultados positivos, mas com uma modesta eficácia (31,2%). Além da busca por uma vacina eficiente contra a infecção pelo HIV-1, o desenvolvimento de estratégias para se atingir a cura também é essencial. Considerando esses dois objetivos principais, diversos fatores são colocados como obstáculos, sendo a enorme diversidade genética do HIV-1 e a falta de correlatos de proteção contra a doença ou a infecção, os pontos centrais e nos quais focamos nossa atenção. No primeiro trabalho, foi avaliada a resposta de células T frente a peptídeos derivados de sequências consensos e sequências de isolados virais mais próximos ao consenso (CVI) dos três subtipos prevalentes no Brasil, B, C e F1 e do grupo M. O estudo incluiu 32 indivíduos infectados com o HIV-1, subtipo B (n = 13), subtipo C (n = 11) e subtipo F1 (n = 8). As respostas específicas frente a Gag e Nef foram avalidas usando o ensaio de ELISpot IFN-\03B3. Peptídeos baseados nas sequências CVI apresentaram capacidade de redução da distância genética e de detecção da resposta de células T similar ao observado para as sequências consenso Em geral, o nível de reatividade cruzada entre os subtipos B e F1 foi maior do que entre os subtipos B e C ou entre os subtipos C e F1. Esses resultados sugerem que o obstáculo imposto pela diversidade genética no desenho de vacinas é dependente dos subtipos envolvidos. No segundo trabalho foi avaliada a resposta de células T de indivíduos controladores da replicação viral frente aos peptídeos consenso, derivados do primeiro estudo. Além disso, foi feita uma avaliação de fatores genéticos e imunológicos nesse grupo de controladores. O estudo incluiu três grupos de controladores: 1) Controladores de Elite (EC, n=7) com carga viral (CV) <80 cópias/mL em todos os pontos; 2) Controladores de Elite com Blips (EEC, n=5) com CV>80 cópias/mL em apenas 30% dos pontos e 3) Controladores Virêmicos (VC, n=7) com CV <5.000 cópias/mL e >80 cópias/mL em mais de 30% dos pontos. Indivíduos infectados pelo HIV-1 não tratados (NC) ou em tratamento antirretroviral (HAART) e indivíduos não infectados pelo HIV-1 foram analisados como controles. A coorte de controladores foi enriquecida em alelos protetores HLA-B, B*27 e B*57, mas não foi observada diferenças significativas entre os três grupos de controladores. O DNA viral circular (2-LTR) foi detectado nos EEC (3/5) e nos VC (6/7), mas não nos EC Uma frequência maior de células T CD8+ ativadas foi observada em EEC e VC quando comparada a indivíduos não infectados. Os EC demonstraram uma resposta de células T de menor magnitude frente a Gag/Nef e uma proporção de anticorpos IgG anti-HIV significativamente menor (P < 0,05) que os grupos de EEC, VC e NC. Esses resultados demonstram que EEC e VC são capazes de montar uma resposta imune específica mais forte frente a estímulos do HIV-1, mas paralelamente, apresentam maiores níveis de ativação imune, translocação microbiana e maior reservatório viral, quando comparados aos EC. Esses resultados destacam a heterogeneidade dos indivíduos capazes de controlar a replicação viral e reforçam a necessidade de uma classificação mais precisa de indivíduos infectados pelo HIV-1 com diferentes níveis de controle / The HIV - 1 pandemic bas been the most relevant infections that has emerged in the last decades. V accine developmen t has been considered as the best strategy to control th is pandemi c, h owever, the candidate vaccines that have evolved to the stage of efficacy clinical trials , only one presented positive results and even that with very modest efficacy (31,2%). As such, s trategies to find a cure is essential though has been hindered by several obstacles such as t he enormous genetic diversity of HIV - 1 and lack of correlates of protection against disease or infection . These two obstacles were investigated in the present stu dy by evaluating the T cell response against peptides based on consensus and closest viral isolate sequences (CVI) from the three prevalent subtypes in Brazil, B, C and F1 and from group M consensus. The study included 32 subjects infected with HIV - 1 subty pe B (n = 13), C (n = 11), and F1 (n = 8). Gag and Nef - specific T cell responses were evaluated by IFN - γ - ELISpot assay. Peptides based on CVI sequences were similar to consensus in both reducing genetic distance and detecting T cell responses . Overall, the level of cross - subtype response between su btypes B and F1 was higher than between subtype C and B or C and F1. Our results suggest that the barrier of genetic diversity in HIV - 1 group M for vaccine design may be dependent on the subtypes involved. The second study evaluated the T cell response fr om controllers against peptides derivate d from the first study. In addition , we performed an evaluation of the genetics and immunologic patterns in this cohort of controllers. The study included three controller groups: 1) Elite Controllers (EC, n = 7) wit h VL <80 copies/mL in all determinations; 2) Ebbing Elite Controllers (EEC, n = 5) with transient viremia (blips); and 3) Viremic Controllers (VC, n = 7) with plasma viremia <5,000 copies/mL. HIV - 1 infected subjects u ntreated non - controllers (NC), patients under suppressive HAART and HIV - 1 negative healthy individuals were also analyzed as controls. This cohort was enriched by the protective HLA - B alleles B*27 and B*57, but no significant differences were observed among distinct groups of controllers. 2 - LTR circles were detected in EEC (3/5) and VC (6/7) , but not in EC. A higher frequency of activated CD8 + T cells was observed in EEC and VC than in HIV negative subjects. EC displayed a weaker Gag/Nef IFN - γ T cell response and a significantly lower proportion (p < 0.05) of anti - HIV IgG antibodies than EEC, VC and NC groups. These data showed that EEC and VC are able to mount a stronger HIV - specific immune response, but experience increases in the level of immune activation, microbial translocation and size of the HIV - 1 DNA reservoir compared to EC. These results highlight the heterogeneity of the HIV controllers and reinforce the needs for a precise classification of patients with different levels of viral suppression.