Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a associação de células derivadas de periósteo autógeno (CDPA) e xenoenxerto de hidroxiapatita e colágeno I (HA/Col) no reparo de defeito crítico de crânio de ratos. CDPA de 10 ratos Wistar foram semeadas na densidade de 1,0x106 células sobre discos de HA/Col (8x2mm) em DMEM:HAMF12 com 10% soro fetal bovino e dexametazona, ácido ascórbico e glicerofosfato por 6 dias. Ensaio funcional comparou efeito de coágulo sanguíneo (G1), osso autógeno (G2), HA/Col (G3) e HA/Col+CDPA (G4) preenchendo defeito de 8 mm de crânio de ratos (n=40) em 1 e 3 meses. A análise radiográfica não exibiu variação temporal, tendo G1 e G2 discreto novo osso marginal; radiopacidade dos materiais em G2, G3 e G4 impediu confirmar osteogênese central. A análise histológica dos grupos mostrou em G1 tecido conjuntivo denso e ilhas de ossificação (1-3m), em G2 coalescência do material e osteogênese (1-3m), em G3 ossificação intramembranosa (1m) e novo osso homogêneo ao redor e substituindo HA (3m) e em G4 abundante tecido conjuntivo frouxo permeando material (1m) e novo osso heterogêneo (3m); não houve necrose, inflamação crônica ou exuberância de células gigantes tipo corpo estranho. As análises histomorfométrica e estatística mostraram diferença signif icativa (p<0,05) para biomaterial (1m) de G2 (23,3%) com G3 (44,6%) e G4 (47,5%) e para ganho ósseo (3m) de G2 (10,9%) com G1 (4,6%) e G4 (5,1%), tendo G3 (8,5%) neoformação óssea próxima a G2. Conclui-se que CDPA não aumentam formação óssea se associadas a HA/Col. / Abstract: The aim of this study was evaluate the association of autogenous periosteum derived cells (APDC) and xenograf t made up hydroxyapatite and collagen I (HA/Col) in repair of critical size defect in rat calvaria. APDC of 10 Wistar rats were seeded with density of 1,0x106 cells above discs of HA/Col (8x2mm) in DMEM:HAMF12 with 10% fetal bovine serum and dexamethasone, ascorbic acid and glicerophosphate until 6 days. Functional assay compared ef fect of blood clot (G1), autogenous bone (G2), HA/Col (G3) and HA/Col+CDPA (G4) f illing the 8mm-defect in rat skull (n=40) at 1 and 3 months. Radiographic analysis did't have time variation, with G1 and G2 showing mild peripheral new bone; radiopacity of materials in G2, G3 and G4 didn't enable to conf irm central osteogenesis. Histologic analysis of groups showed in G1 dense connective tissue and bone islets (1-3m), in G2 fusion of material and osteogenesis (1-3m), in G3 intramembranous ossification (1m) and homogeneous new bone around and substitute HA (3m) and in G4 abundant loose connective tissue permeating the material (1m) and heterogeneous new bone (3m); there is not necrosis, chronic inf lammation or exuberance of giant cell like foreign body reaction. Histomorphometric and statistic analysis showed signif icative dif ferences (p<0.05) for biomaterial (1m) f rom G2 (23,3%) to G3 (44,6%) and G4 (47,5%) and for bone gain (3m) f rom G2 (10,9%) to G1 (4,6%) and G4 (5,1%), with G3 (8,5%) showing new bone formation closer to G2. It's possible to conclude that APDC don't increase bone formation if associate to HA/Col. / Orientador: Idomeo Bonetti Filho / Coorientador: José Mauro Granjeiro / Banca: Mário Tanomaru Filho / Banca: Fábio Luiz Camargo Villela Berbert / Banca: Manoel Eduardo de Lima Machado / Banca: Arlindo Di Spagna Souza / Doutor

Orientador: Beatriz Maria Machado de Medeiros / Banca: Beatriz Maria Machado de Medeiros / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Cleni Mara Marzocchi Machado / Banca: Fernanda de Freitas Anibal / Resumo: Yersinia pseudotuberculosis e Y. enterocolitica são patógenos que causam desordens gastrintestinais. Estudos utilizando infecção in vitro demonstraram que Y. enterocolitica pode ter como alvo as células dendríticas (DCs), afetando várias de suas funções, incluindo sua maturação e produção de citocinas, e, conseqüentemente, contribuindo para a diminuição da ativação de células T CD4+. O objetivo deste estudo foi investigar o papel das células dendríticas das placas de Peyer (PP) na determinação do padrão de resposta imune, Th1 e Th2, durante a infecção por via intragástrica de camundongos suscetíveis (BALB/c) e resistentes (C57BL/6) com a amostra virulenta de Y. pseudotuberculosis (YpIII pIB1 - Yp+) ou seu par isogênico, curado do plasmídeo de virulência (YpIII - Yp-). As DCs das PP foram obtidas no 1°, 3° e 5° dia pós-infecção, quantificadas e analisadas quanto às suas subpopulações, expressões de moléculas de superfície e capacidade imunoestimulatória por citometria de fluxo, e quanto à secreção de citocinas (IL-4, IL-10, IL-12 e TNF-α) por ELISA. Os linfócitos das PP também foram obtidos no mesmo período e tiveram suas sub-populações e o padrão de citocinas intracelulares Th1/Th2 (IL-2, IL-4, IL-10 e IFN-γ) analisado por citometria de fluxo. A infecção por Yp+ reduziu o número de DCs no 1° dia pós-infecção e aumentou, no período inicial, a expressão de B7.1 e B7.2 nos camundongos BALB/c. Nos camundongos C57BL/6 reduziu o número de DCs durante todo o período analisado, aumentou a expressão de B7.1 e B7.2 no período inicial e a expressão de ICAM-1. A infecção por ambas as amostras provocou redução da sub-população CD8α+ e da expressão de MHC II nas duas linhagens de animais, aumentou a sub-população CD11b+ nos animais suscetíveis e diminuiu nos animais resistentes. Os animais estudados não apresentaram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Yersinia pseudotuberculosis and Y. enterocolitica are pathogens that cause gastrointestinal disorders. Studies using in vitro infection demonstrated that Y. enterocolitica can have as a target dendritic cells (DCs), affecting several of its functions, including their maturation and production of cytokines, and, consequently, contributing to the diminished activation of the T CD4+ cells. The aim of this study was to investigate the role of dendritic cell from Peyer's patches (PP) in determining of immune response pattern, Th1 and Th2, during infection by the intragastric route in susceptible (BALB/c) and resistant (C57BL/6) mice with a virulent sample of Yersinia pseudotuberculosis (YpIII pIB1 - Yp+) or its isogenic pair, cured of the virulence plasmid (YpIII - Yp-). The PP DCs were obtained on the 1st, 3rd and 5th days postinfection, quantified and analyzed as far as their subpopulations, expressions of surface molecules and immunostimulatory capacity by flow cytometry, and the cytokines secretion (IL-4, IL-10, IL-12 and TNF-α) by ELISA. The PP lymphocytes were also obtained in the same period, and had their subpopulations and the pattern of intracellular Th1/Th2 cytokines (IL-2, IL-4, IL-10 and IFN-γ) analysed by flow cytometry. The infection by Yp+ reduced the number of DCs on the 1st day post-infection and increased, in the initial period, the expression of B7.1 and B7.2 in BALB/c. In C57BL/6 mice reduced the number of DCs throughout the study period, increased the expression of B7.1 and B7.2 in the initial period and the expression of ICAM-1. The infection by both samples reduced CD8α+ subpopulation and expression of MHC II in both animals, increased CD11b+ sub-population in susceptible animals and reduced the same sub-population in resistant animals. The studied animals did not present important differences as far as secretion of cytokines by the DCs of PP and both... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Aparecida Marin-Morales / Banca: Carmem Silvia Fontanetti Christofoletti / Banca: Bruna de Campos Ventura Camargo / Resumo: Os problemas que mais afetam a qualidade da água de rios e lagos estão associados com os descartes realizados nestes ambientes, principalmente, os de esgotos domésticos e industriais tratados de forma inadequada ou não tratados. Esses efluentes podem conter compostos químicos perigosos pela sua potencialidade em induzir efeitos citotóxicos e genotóxicos à biota exposta. Neste sentido, o presente trabalho teve por objetivo verificar o possível potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico de químicos presentes nas águas do ribeirão Tatu, Limeira/SP, provenientes de descartes ilegais de pequenas indústrias e esgotos domésticos por meio do teste de aberrações cromossômicas (ACs) e micronúcleo (MN) em Allium cepa e ensaio do cometa em células de mamíferos. Foram realizadas coletas sazonais em cinco diferentes pontos do ribeirão, entre os anos de 2008 e 2009. As análises físicoquímicas das amostras de água mostraram uma grande degradação na qualidade da água do ribeirão, decorrente dos descartes de esgotos domésticos e industriais, de águas pluviais contaminadas e escoamento da agricultura. Os dados referentes ao bioensaio com A. cepa mostram que os períodos de seca são os mais críticos, pois levaram as respostas mais severas de indução de ACs e de MN no organismo teste utilizado. Em relação ao ensaio do cometa com as células HTC, as amostras de água coletadas no período de chuva intensa, apresentaram maior genotoxicidade, principalmente nos pontos mais impactados pelo recebimento dos efluentes, devido, possivelmente, ao carreamento de contaminantes para o leito do rio, promovido pelo escoamento da água das chuvas / Abstract: The issues that most affect the water quality of rivers and lakes are associated with discharges in these environments, especially those of domestic and industrial sewage inadequately or not treated. These effluents may contain hazardous chemical compounds for their ability to induce cytotoxic and genotoxic effects to the biota exposed. In this sense, the present study aimed to determine the potential cytotoxic, genotoxic and mutagenic of chemicals present in the waters of the ribeirão Tatu, Limeira / SP, from illegal discharges from small industries and domestic sewage through the test of chromosomal aberrations (CAs) and micronucleus (MN) in Allium cepa and comet assay in mammalian cells. Five seasonally collections were performed at five different places of the river in 2008 and 2009. The physical-chemical analysis of water samples showed a large degradation in water quality of the stream, resulting from discharges of municipal and industrial wastewater, storm water and contaminated runoff from agriculture. The data on A. cepa bioassay show that the droughts are the most critical because the answers led to more severe induction of CAs and MN in the test organism used. Concerning the comet assay with HTC cells, water samples collected during the period of strong rain, had higher genotoxicity, especially at points of most impacted by the receipt of effluents, due possibly to the carrying of contaminants to riverbed, sponsored by runoff from rainfall / Mestre

Orientador: Paulo Noronha Lisboa Filho / Banca: Caue Ribeiro de Oliveira / Banca: Cyro Ketzer Saul / O Programa de Pós Graduação em Ciência e Tecnologia de Materiais, PosMat, tem caráter insitucional e integra as atividades de pesquisa em materiais de diversos campi / Resumo: As alterações climáticas, em grande parte, proveniente da emissão de CO2 derivado da queima de combustíveis fósseis para produção de energia, têm incentivado a pesquisa e o desenvolvimento de novas fontes alternativas de energia menos pulentes e que produzam pouco impacto ambiental. Uma das alternativas energéticas mais promissoras é a energia gerada pelo sol, principalmente em países onde há um alto índice de incidência de radiação solar. O óxido de zinco (ZnO) apresenta transmitância óptica na região do visível acima de 80% e baixa resistividade elétrica. Este material tem sido estudado como candidato para substituir o In2O3:Sn (ITO) em aplicações como eletrodos de células solares, pois além de ser economicamente viável, é atóxico e possui alta estabilidade química. Neste trabalho filmes finos de ZnO puro foram depositados pelas técnicas de spin, dip-coating e evaporação por feixe de elétrons (EBE). As resinas precursoras de ZnO foram sintetizadas pelo método dos precursores poliméricos utilizando diferentes precursores de Zn (acetato, óxido ou nitrato de zinco), com a finalidade de investigar as propriedades estruturais e ópticas dos filmes finos de ZnO preparado por diferentes técnicas e diferentes precursores. Os filmes foram caracterizados por difração de raios-X (DRX), medidas de espectro na região do UV-vi e microscopia de força atômica (AFM). Todas as amostras obtidas através das diferentes técnicas de deposição apresentaram alto grau de transmitância óptica (80%) e o mesmo valor de energia de gap (3,28 e V). Também foram obtidas amostras na forma de pó, sintetizado com os três diferentes precursores, visando um estudo aprofundado da influência do precursor utilizado nas propriedades do material. As amostras foram caracterizadas por difração de raios X, análises... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Climate changes are mainly due to the increasing CO2 atmospheric concentration caused by the burning of fossils fuels. In this context, researh and development of alternative sources of renewable energy have been encouraged for energy production. One of most promising alternative for energy production is Solar Energy, especially in countries with high incidence of solar radiation. Zinc oxide thin films usually have high transmittance in the visible range and low resistivity. This material has been studied as a candidate to replace In2O3:Sn(ITO) in applications such as electrodes in solar cells due of the righ cost of indium and its limited availability. Furthermore ZnO is chemically stable and non-toxic. In this work undoped zinc oxide thin films were deposited by the techniques of spin-coating, dip-coating and Electron beam evaporation (EBE). Resins of ZnO were synthesized by the polymeric precursor method using different zinc precursors (zinc acetate, oxide or nitrate) in order to study the structural and optical properties of thin films prepared by different techniques and using different precursors. The prepared samples were characterized by X-ray diffraction measurements (XRD), UV-vis spectra, and atomic force microscopy (AFM). All samples prepared by different deposition techiniques present transmition larger than 80% in the visble range and band gap of 3,28 eV. Also were obtained powder or ZnO synthesized using three different precursor in order to study the influence of precursor utilized in properties of material. The powder were characterized by X-ray diffraction (XRD), photoluminescence (PL) spectroscopy, field emission scanning microscopy (FE-SEM), thermogravimetry (TG) and differential thermal analysis (DTA). Through these characterization techniques it was showed that the polymeric precursor... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientadora: Márcia Rita Fernandes Machado / Banca: José Antonio Thomazini / Banca: Luiza da Silva Lopes / Banca: Áureo Evangelista Santana / Banca: Marcos Lania de Araujo / Resumo: Diversos estudos mostraram que a ingestão de dieta com níveis inadequados de ferro pode causar, no sistema nervoso central (SNC) de ratos, alterações morfológicas, bioquímicas e comportamentais no animal. Esses estudos têm ainda indicado que animais deficientes em ferro apresentam redução no número de lamelas de mielina e prejuízos na aprendizagem. A deficiência de ferro é uma das mais comuns desordens nutricionais em pacientes pediátricos e adultos e atinge cerca de 2,5 a 5 bilhões de pessoas em todo mundo. A consequência mais explícita da deficiência de ferro é a anemia. O ferro está relacionado ao desenvolvimento de fibras nervosas mielínicas, as quais constituem mais de 80% do nervo óptico. Objetivou-se, na presente investigação, avaliar com o auxílio de microscopia eletrônica de transmissão, os possíveis efeitos da anemia ferropriva na estrutura do nervo óptico de ratos Wistar durante os períodos de lactação e pós-lactação. Os animais foram divididos em 2 grupos: Controle e Anêmico. Os anêmicos receberam uma dieta com 4 mg de ferro/Kg, e os controle, uma dieta com 35 mg de ferro/Kg. Avaliações do peso corpóreo, hemoglobina e hematócrito foram feitas para checar os efeitos da deficiência de ferro. Os animais foram anestesiados com cloridrato de quetamina IM (22 mg/Kg) e então sacrificados por perfusão transcardíaca com PBS 0,05M, pH 7,4, seguido da mistura fixadora paraformaldeído 2% e glutaraldeído 1% diluída em tampão fosfato. Um segmento do nervo óptico foi retirado e pós-fixado em solução de tetróxido de ósmio a 1% por duas horas a 4ºC, desidratado em acetona e incluído em araldite. Cortes ultra-finos com 60 nanômetros de espessura foram montados em grades de cobre, contrastados com acetato de uranila e citrato de chumbo, observados e fotografados ao microscópio eletrônico de transmissão para detalhada análise ultraestrutural... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Several studies showed that ingestion of diets with inadequate iron levels can cause morphological, biochemical and behavioral changes in the central nervous system (CNS) of rats. These studies have also shown that iron-deficient animals have reduced number of myelin lamellae and prejudice on learning. Iron deficiency is one of the most common nutritional disorders in pediatric patients and adults and affects about 2.5-5 billion people around the world. The most explicit result of iron deficiency is anemia. The iron is related to the development of myelinated nerve fibers, which constitute more than 80% of the optic nerve. The aim of this research is to evaluate, with transmission electronic microscopy, the possible effects of iron deficiency anemia in Wistar rats optic nerve structure during lactation and pos-lactation period. The animals were divided into 2 groups: Control and Anemic. The anemic group received 4 mg iron/Kg, the control group received 35 mg iron/Kg. Evaluation of body weight, hemoglobin and hematocrit were made to check the iron deficiency effects. The animals were anesthetized with ketamine 22 mg/Kg and then sacrificed by transcardiac perfusion with PBS 0.05 M, pH 7.4, followed by paraformaldehyde fixative mixture 2% and 1% glutaraldehyde. An optic nerve segment was removed and post-fixed in a solution of osmium tetroxide for two hours at 4°C, dehydrated in acetone and embedded in Araldite. Ultrathin sections with 60 nanometers thick were mounted on copper grids, contrasted with uranyl acetate and lead citrate, observed and photographed by transmission electronic microscope for detailed ultrastructural analysis of nerve fibers, blood vessels and glial cells. Both hematological and body weight were smaller in the anemic group. The ultrastructural analysis showed damaged myelinated and unmyelinated fibers, and glial cells of the anemic animals when compared with... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Alexandre Lima de Andrade / Banca: Adriana Morales / Banca: Renée Laufer Amorim / Resumo: As células-tronco (stem cells) têm um papel fundamental nos processos reparativos e regenerativos da córnea. A exata localização destas é bem conhecida no olho do homem, bem como as suas funções. Entretanto, as mesmas ainda não foram descritas em medicina veterinária, sequer a sua localização em olhos de animais de companhia, tratando-se assim, de assunto que merece novas e originais investigações. Anticorpos monoclonais que reagem superficialmente com as citoqueratinas são empregados para determinar este tipo celular presente nos tecidos, no entanto, existem outros marcadores capazes de reagir antigenicamente com núcleos celulares. Entre eles, o PCNA (antígeno nuclear de proliferação celular) e o Ki-67 (antígeno de proliferação Ki-67) são capazes de marcar células em proliferação. Uma vez que isso nunca fora descrito anteriormente, e considerando-se a necessidade e importância científica em se determinar a localização de células em proliferação na superfície ocular de cães, o presente estudo teve por objetivos: 1) determinar a expressão de células em proliferação pela marcação imunoistoquímica com anticorpos monoclonais anti-PCNA e anti-MIB-1 (anticorpo monoclonal anti-Ki-67), bem como, sua localização na superfície ocular; 2) comparar se há diferença estatística significante na marcação dessas células em diferentes idades. Para tanto, foram utilizados 24 cães jovens e adultos, sadios, dos quais o bulbo ocular esquerdo foi removido, fixado e corado pela H.E. (hematoxilina e eosina), além da imunoistoquímica empregando-se os anticorpos monoclonais anti-PCNA e anti-MIB-1. Concluiu-se que a presença de células em proliferação imunomarcadas pelo PCNA e pelo MIB-1 foi observada em diferentes tecidos da superfície ocular de cães, sendo os tecidos mais marcados: o limbo e o epitélio da córnea...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The stem-cells has a fundamental paper in process of cornea’s tissue repair and regeneration. In man, the well-know localization and functions had been descriebed a long time ago, however the same ones had not yet been descriebed in veterinary medicine, at least your localization in eyes of company animals, what deserve new and original inquiries. Monoclonais antibodies that react superficially with the cytokeratins are used to determine this cell type presence in ocular surface. However, exist another markers capable to react with cell nucleoli, for example, PCNA and MIB-1 are capable to mark proliferation cells. Considering the necessity and scientific importance to determining the localization of proliferation cells on dog’s ocular surface, a time that, never was descriebed previously, the present study had for objectives: 1) determineted the expression of proliferation cells immunohistochemically by PCNA and MIB-1 and its localization in ocular surface; 2) compare if has statistically significant difference in immunoexpression of proliferation cells in different ages. In the study was used 24 healthy dogs, young and adults, witch had the left eyes removed, fixed in buffered formalin and stained with H.E. (hematoxilin and eosin) and with monoclonal antibodies anti-PCNA and anti-MIB-1. The presence of immunostained cells was most observed in corneal ephithelium and limbo. Probably the immunostained cells are stem-cells in dog’s ocular surface, however for such evidence it is necessary ...(Complete abstract click electronic address below) / Mestre

Orientador: Dimas Tadeu Covas / Banca: Dimas Tadeu Covas / Banca: Rodrigo Alexandre Panepucci / Banca: Haroldo Wilson Moreira / Resumo: A maior expressão de alvos transcricionais e componentes da via NFkB é uma característica distintiva das células-tronco hematopoéticas (CTH) CD34+ de sangue de cordão umbilical (SCU) comparadas às CTH CD34+ de medula óssea (MO) e pode estar relacionada com o estado mais primitivo das CTH dos neonatos. No entanto, as células CD34+ são um grupo heterogêneo de célulastronco (CT) e progenitoras em diferentes estágios de maturação e diferenças na composição celular entre MO e SCU poderiam contribuir para os resultados mencionados. Estudos recentes têm identificado o marcador de superfície CD133, como um marcador de CT mais primitivas, expresso em uma subpopulação de células CD34bright, com um sugestivo potencial de hemangioblasto. Com o objetivo de caracterizar a composição celular de MO e SCU e identificar mecanismos moleculares envolvidos com a maior primitividade das células CD133+, propusemos avaliar o perfis imunofenotípico (quanto à expressão de CD34 e CD133) por citometria de fluxo e de expressão gênica de células CD34+ e células CD133+ selecionadas imunomagneticamente, de ambas as fontes, pelas técnicas de microarray e PCR em tempo real. Nossos resultados revelaram que enquanto a maioria das células CD133+ são CD34+, independente da fonte, as células CD34+ de SCU possuem uma porcentagem significativamente maior de células CD133+ do que às células CD34+ de MO. A análise de clusterização revelou que as células CD133+ de MO se agrupam com as células de SCU (CD34+ e CD133+), enquanto as CD34+ de MO aparecem como um grupo distinto. A comparação dos perfis de expressão gênica entre as células CD133+ e as células CD34+, revelou a hiper-expressão... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: A higher expression of transcription targets and components of the NF-kB pathway is a distinctive feature of umbilical cord blood (UCB) CD34+ hematopoietic stem cells (HSC) when compared to bone marrow (BM) CD34+ HSC and this could be related to the more primitive state of the newborn's HSC. However, CD34+ cells represent a heterogeneous group of cells composed by stem and progenitors cells in different developmental stages, and differences in cellular composition between both sources could contribute for these finding. The surface marker CD133 has been identified as a very primitive marker, expressed in a subpopulation of CD34bright, with a proposal hemangioblast potential. Thus, in attempt to better characterize the cellular composition of UCB and BM and to identify molecular mechanisms related to the more primitive characteristics of CD133+ cells, we proposed to evaluate the immunophenotypic profile (expression of CD34 and CD133) by flow-cytometry and the gene expression profiles of immunomagnetically selected CD34+ and CD133+ cells, from both sources, by microarray and Real time PCR. Our results highlighted that, while almost all CD133+ cells are CD34+ independently of the evaluated source, the UCB CD34+ cells showed a significantly higher proportion of CD133 expression, compared to BM CD34+ cells. After obtaining the expression profiles from distinct HSC pooled samples generated by microarrays, cluster analysis showed that BM CD133+ cells preferentially grouped with UCB cells (CD34+ and CD133+) instead of BM CD34+ cells, which appeared as a very distinct profile The comparison between CD133+ and CD34+ samples revealed the over-expression of 47 transcriptional factors (TF) in CD133+ cells, many of them well-known and related... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Fábio Luiz Camargo Villela Berbert / Banca: Lizeti Toledo de Oliveira Ramalho / Banca: Idomeo Bonetti Filho / Banca: Denise Bertulucci Rocha Rodrigues / Banca: Yara Teresinha Correa Silva Sousa / Resumo: O objetivo do presente estudo foi realizar uma avaliação histológica do efeito do laser de baixa intensidade (LBI) na resposta do tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos ao implante dos tubos contendo cimento de óxido zinco e eugenol (OZE) Endofill, que foram irradiados imediatamente e 24 horas após o implante dos tubos. Foram utilizados sessenta camundongos (Mus muscullus albinus), distribuídos em 3 grupos (n=20): GI (controle), os animais receberam implante do tubo de polietileno com Endofill e não receberam a irradiação LBI; GII implante do tubo com Endofill e irradiação LBI vermelho (InGaAlP), λ685ηm, D=72J/Cm2, E=2J, T=58s, P=35mW; GIII implante do tubo com Endofill e irradiação LBI infravermelho (AsGaAl), λ830ηm, D=70J/Cm2, E=2J, T=40s, P=50mW. Os animais foram mortos nos períodos de 7 e 30 dias, os blocos de tecido foram seccionados com de 6μm de espessura e as lâminas foram coradas com: Hematoxilina e Eosina/Tricrômico de Masson, com o propósito de verificar as reações teciduais; Picrosírius para identificar o padrão de fibrose e Azul de Toluidina para quantificar os mastócitos. Os resultados foram analisados ao microscópio optico comum e de luz polarizada para a fibrose. A análise estatística realizada foi quali-quantitativa. A ação do LBI sobre o tecido conjuntivo diminuiu o efeito irritante oferecido pelo cimento Endofill, no período pós-operatório de 7 dias (P>0,05). Aos 30 dias ocorreu reparo tecidual, independente da irradiação do LBI. A irradiação LBI não ofereceu melhoria no padrão de fibrose, e proporcionou queda significativa de mastócitos independente do período estudado. / Abstract: The aim of the present study was to perform a histological evaluation of the effect of the low level laser therapy (LLLT), in the response of the subcutaneous conjunctive tissue of mice to the tubes implant with to the zinc oxide and eugenol sealer (ZOE) Endofill, that were immediately irradiated and again 24h after the implant of the tubes. Sixty mice (Mus muscullus albinus) were used, distributed into 3 groups (n=20): GI (control), the animals received the polyethylene tube implant with the Endofill and no LLLT irradiation; GII, tube implant with the Endofill and red LLLT irradiation (InGaAIP), λ685ηm, D=72J/Cm2, E=2J, T=58s, P=35mW; GIII, tube implant with the Endofill and infrared LLLT irradiation (AsGaAl), λ830ηm, D=70J/Cm2, E=2J, T=40s, P=50mW. The animals were killed after 7 and 30 days; the blocks of tissue were cut into serial 6μm thick sections and glass slides were stained with: Hematoxylin and Eosin/with Masson Trichrome, in order to verify the tissue reactions; Picrosírius, to identify the fibrosis rate and Toluidine Blue, to quantify mast cells (MC). The results were analyzed through the normal use optical microscope and a polarized light one for fibrosis. The statistical analysis carried out was quali-quantitative. The action of the LLLT on the connective tissue reduced the irritating effect produced by the Endofill sealer, at the post-operative period of 7 days (P>0,05). In 30th days there was tissue repair independent of the irradiation of LLLT. The LLLT irradiation didn't offer an improvement of the fibrosis rate, and provided a significant fall in the concentration of MC independent of the studied period. / Doutor

Orientador: Roberto da Silva / Banca: Crispin Humberto Garcia Cruz / Banca: Aneli de Melo Barbosa / Resumo: O uso de células microbianas imobilizadas para aumentar a produção de metabólitos fúngicos em processos fermentativos tem mostrado altos rendimentos. Nesse trabalho foi avaliado pela primeira vez, a imobilização de células do Botryosphaeria rhodina, um fungo ligninolitico produtor constitutivo de lacases. Três suportes foram avaliados: Fibra Acrílica Fina (FAF); Espuma de Poliuretano Expandido (EPE); Espuma de Poliuretano Fibroso (EPF). O EPF foi o melhor suporte por ter mostrado uma imobilização mais homogenia das células. Um planejamento fatorial foi desenvolvido para otimizar a produção de lacases por células livres, na presença de álcool veratrílico (AV). A análise da superfície de resposta mostrou que 18mM como a melhor concentração de AV para a produção de lacases, usando-se 3 mL de homogeinato de células como inóculo (DOλ400nm 0.4-0.6) para 25 mL de meio de cultura em frascos de 125mL, a 180 rmp, durante 126 horas a 28ºC. O perfil de crescimento do fungo, associado a produção de lacase foram comparados na presença e na ausência de AV, usando-se células livres e células imobilizadas do B. rhodina. A imobilização aumentou aproximadamente 3 vezes a produção de lacases e manteve estável o nível de produção durante 6 reciclos. A imobilização de células do B. rhodina mostrou-se útil uma vez que economizou 72horas para atingir a maior produção de lacase, quando comparada com células livres e também aumentou a tolerância do fungo a concentrações mais altas de AV (500mM) / Abstract: The use of microbial immobilized cells to increase the production of fungal metabolites in fermentation processes has showed higher yields. This work evaluated by the first time, the immobilization of Botryosphaeria rhodina cells, a ligninolytic fungus that produces laccase. Three carriers were evaluated: acrylic fine fiber (FAF), expanded polyurethane foam (EPE), and fiber polyurethane foam (EPF). The EPF was the best carrier because showed a homogeneous immobilization cells. A factorial design was developed in order to optimize the laccase production by free cells in the presence of the laccase inducer veratryl alcohol (VA). The analysis by response surface answer showed 18 mM as the best VA concentration to produce laccase using 3 mL of a cell homogenate (ODλ400nm 0.4-0.6) as inoculum, to 25 mL of culture medium in shaked flasks (125 mL) at 180 rpm, during 126 hours at 28 °C. A growth profile for laccase and fungal biomass production were compared with and without VA using free and immobilized cells of B. rhodina. The cell immobilization increased approximately 3 folds the laccase production and maintained it stable during 6 consecutive recycles. The cell immobilization of B. rhodina showed to be useful once saved 72 hours to achieve the higher laccase production when compared to the one with free cells, and also increased the fungal cell tolerance at higher VA concentrations (500 mM) / Mestre

Resumo: O diabetes tipo I, causado pela destruição das células beta do pâncreas, promove alterações metabólicas que podem ser acompanhadas de prejuízos em órgãos e tecidos específicos. O intestino delgado é um órgão que apresenta uma série de alterações, principalmente de caráter morfológico e funcional. A atividade física regular por sua vez, pode contribuir para o controle desta situação, sendo um fator importante, já que grande parte da população mundial sofre com esta doença. Este trabalho teve como objetivo analisar os aspectos morfológicos e histoquímicos do intestino delgado e a ultra-estrutura de células caliciformes de ratos diabéticos, a fim de se observar possíveis alterações causadas pela doença. Além disso, este trabalho buscou avaliar de que maneira o exercício físico pode interferir nestas modificações e contribuir para o controle do estado diabético. Neste estudo, ratos Wistar foram distribuídos em 4 grupos: controle sedentário (CS), controle treinado (CT), diabético sedentário (DS) e diabético treinado (DT). O diabetes foi induzido por aloxana monoidratada Sigma (35 mg/kg de peso corporal). Os grupos treinados realizaram um protocolo de exercícios físicos, que consistiu em natação com cargas acopladas ao corpo. Durante o período experimental, foram realizadas avaliações de peso corpóreo e ingestão hídrica e alimentar. Após o período experimental, o sangue dos animais foi coletado para análise de glicemia. Os intestinos delgados dos animais foram retirados, pesados e o comprimento foi medido. Amostras de duodeno, jejuno e íleo foram processadas e analisadas para a microscopia de luz e para a microscopia eletrônica de transmissão. O diabetes causou um aumento geral do intestino delgado, também devido à alteração de características histomorfométricas, tais como aumento de vilosidades e da espessura da camada mucosa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Type I diabetes, caused by pancreatic beta cells destruction, promotes metabolic changes that may be accompanied by losses in specific organs and tissues. The small intestine is an organ that shows several changes, mainly of morphological and functional aspects. Regular physical activity can contribute to control this situation being an important factor, since most of the world population suffers from this disease. This study aimed to analyze the morphological and histochemical aspects of the small intestine and goblet cells ultrastructure in diabetic rats, in order to observe possible changes caused by the disease. In addition, this study aimed to evaluate how exercise can interfere on these changes and contribute to control the diabetic state. In this study, Wistar rats were divided into 4 groups: sedentary control (SC), trained control (TC), sedentary diabetic (SD) and trained diabetic (TD). Diabetes was induced by alloxan monohydrate Sigma (35 mg/kg body weight). Trained groups performed an exercise protocol, which consisted of swimming with loads attached to the body. During the experimental period, assessments were made on body weight, water and food intake. After the trial period, the animals' blood was collected for glucose analysis. The small intestines of the animals were removed, weighed and the length was measured. Samples of duodenum, jejunum and ileum were processed and analyzed for light microscopy and for transmission electron microscopy. Diabetes caused a general increase in the small intestine, also due to changes on histomorphometric features, such as increased villi and increased thickness of the mucosa. In addition, the disease promoted histochemical changes as demonstrated by reduced amounts of collagen fibers, reticular fibers and general proteins, and increased amounts of neutral polysaccharides and general nucleic acids. About goblet cells, diabetes increased... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Flávio Henrique Caetano / Coorientador: Ricardo José Gomes / Banca: Dimitrius Leonardo Pitol / Banca: Cláudia Helena Pellizzon / Mestre