Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Agropecuarias, Mención Producción Frutícola

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-16Bitstream added on 2014-06-13T19:23:49Z : No. of bitstreams: 1 000739516.pdf: 1650325 bytes, checksum: a1b57134d48fa771d7c3cfd4a0dce580 (MD5) / As espécies de Trichoderma spp. e Clonostachys rosea são bastante estudadas atualmente para o controle biológico de doenças de plantas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial dos antagonistas, Trichoderma asperellum (LQC96) e Clonostachys rosea (LQC62), no controle biológico das principais doenças fúngicas de begônia (mofo cinzento, mancha de Mirotécio e podridão do colo). A etiologia da podridão do colo em begônias foi estudada por meio das análises de suas características morfológicas e moleculares. Foram realizados ensaios in vitro a fim de verificar os mecanismos envolvidos no controle biológico dessas doenças, avaliados por meio da produção de compostos voláteis e compostos solúveis com ação inibitória aos patógenos, além da capacidade hiperparasítica dos antagonistas. A metodologia para avaliar os compostos voláteis consistiu em posicionar dois fundos de placas de Petri sobrepostas, contendo em uma delas cultura do antagonista e em outra, do patógeno. Para avaliar os compostos solúveis, foram utilizadas duas metodologias, o método em cultivo sobre o papel celofane para LQC96 e o método do filtrado da cultura líquida para LQC62. O hiperparasitismo foi avaliado por meio de culturas pareadas. Verificou-se a colonização e a supressão da esporulação em discos e em hastes de begônias. Após a análise do potencial in vitro, foram realizadas ensaios em casa de vegetação, a fim de verificar o controle dessas doenças em cultivo comercial de begônia. Nos ensaios in vitro, verificou-se que os antagonistas tiveram atividade antagônica contra esses patógenos, com a produção de compostos voláteis e solúveis, além de demonstrar a capacidade hiperparasítica de ambos antagonistas. Ambos agentes de controle biológico avaliados foram capazes de colonizar os discos e hastes de begônia e a aplicação preventiva na concentração de... / Currently the species of Trichoderma spp. and Clonostachys rosea are widely studied for biological control of plant diseases. The aim of this study was to evaluate the potential of these isolates these antagonists (T. asperellum LQC96 and C. rosea LQC62) in the biological control of major fungal diseases of begonia (gray mold, Myrothecium leaf spot and stem rot). The etiology of stem rot was studied using morphological and molecular analysis. In vitro assays were performed to verify the mechanisms involved in the biological control of these diseases, measured by the production of volatile and soluble compounds with an inhibitory effect on pathogens and the ability of antagonist hyperparasitism. The methodology for assessing the volatiles consisted of placing two Petri dishes superimposed on one culture containing the antagonist and another pathogen. To evaluate soluble compounds, two methods were used, the cultivation on cellophane for LQC96 and and the culture liquid filtrate method for LQC62. The hyperparasitism was assessed using paired cultures. There colonization and suppression of sporulation was evaluate on leaf disks and stem of begonias. After analysis of the potential in vitro assays, were performed in a greenhouse in order to verify the control of these diseases in commercial cultivation of begonia. In vitro assays was found that the antagonists were antagonistic activity against these pathogens, producing volatile and soluble compounds, and demonstrate the ability of hyperparasitism. Both biocontrol agents evaluated were able to colonize the leaf discs and stem of begonia and preventive application in concentration of 1x107 conidia mL-1 proved to be the most effective in suppressing pathogen sporulation on leaf discs and stem of begonia. The essay on commercial cultivation decreased the incidence of diseases with weekly application of antagonists. For control of gray mold and ...

Orientador: Antonio de Goes / Coorientador: Marcelo Augusto Boechat Morandi / Coorientador: Káthia Fernandes Lopes Pivetta / Banca: Rita de Cássia Panizzi / Banca: Edson Luiz Furtado / Banca: Adelmo Golynski / Banca: Helson Martins do Vale / Resumo: As espécies de Trichoderma spp. e Clonostachys rosea são bastante estudadas atualmente para o controle biológico de doenças de plantas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial dos antagonistas, Trichoderma asperellum (LQC96) e Clonostachys rosea (LQC62), no controle biológico das principais doenças fúngicas de begônia (mofo cinzento, mancha de Mirotécio e podridão do colo). A etiologia da podridão do colo em begônias foi estudada por meio das análises de suas características morfológicas e moleculares. Foram realizados ensaios in vitro a fim de verificar os mecanismos envolvidos no controle biológico dessas doenças, avaliados por meio da produção de compostos voláteis e compostos solúveis com ação inibitória aos patógenos, além da capacidade hiperparasítica dos antagonistas. A metodologia para avaliar os compostos voláteis consistiu em posicionar dois fundos de placas de Petri sobrepostas, contendo em uma delas cultura do antagonista e em outra, do patógeno. Para avaliar os compostos solúveis, foram utilizadas duas metodologias, o método em cultivo sobre o papel celofane para LQC96 e o método do filtrado da cultura líquida para LQC62. O hiperparasitismo foi avaliado por meio de culturas pareadas. Verificou-se a colonização e a supressão da esporulação em discos e em hastes de begônias. Após a análise do potencial in vitro, foram realizadas ensaios em casa de vegetação, a fim de verificar o controle dessas doenças em cultivo comercial de begônia. Nos ensaios in vitro, verificou-se que os antagonistas tiveram atividade antagônica contra esses patógenos, com a produção de compostos voláteis e solúveis, além de demonstrar a capacidade hiperparasítica de ambos antagonistas. Ambos agentes de controle biológico avaliados foram capazes de colonizar os discos e hastes de begônia e a aplicação preventiva na concentração de ... / Abstract: Currently the species of Trichoderma spp. and Clonostachys rosea are widely studied for biological control of plant diseases. The aim of this study was to evaluate the potential of these isolates these antagonists (T. asperellum LQC96 and C. rosea LQC62) in the biological control of major fungal diseases of begonia (gray mold, Myrothecium leaf spot and stem rot). The etiology of stem rot was studied using morphological and molecular analysis. In vitro assays were performed to verify the mechanisms involved in the biological control of these diseases, measured by the production of volatile and soluble compounds with an inhibitory effect on pathogens and the ability of antagonist hyperparasitism. The methodology for assessing the volatiles consisted of placing two Petri dishes superimposed on one culture containing the antagonist and another pathogen. To evaluate soluble compounds, two methods were used, the cultivation on cellophane for LQC96 and and the culture liquid filtrate method for LQC62. The hyperparasitism was assessed using paired cultures. There colonization and suppression of sporulation was evaluate on leaf disks and stem of begonias. After analysis of the potential in vitro assays, were performed in a greenhouse in order to verify the control of these diseases in commercial cultivation of begonia. In vitro assays was found that the antagonists were antagonistic activity against these pathogens, producing volatile and soluble compounds, and demonstrate the ability of hyperparasitism. Both biocontrol agents evaluated were able to colonize the leaf discs and stem of begonia and preventive application in concentration of 1x107 conidia mL-1 proved to be the most effective in suppressing pathogen sporulation on leaf discs and stem of begonia. The essay on commercial cultivation decreased the incidence of diseases with weekly application of antagonists. For control of gray mold and ... / Doutor

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo / El control de enfermedades de poscosecha es una problemática constante en la producción de uva de mesa, siendo Botrytis cinerea y Penicillium expansum, dos de los patógenos más importantes. El cuestionamiento a la cantidad máxima de residuos de agroquímicos permitidos en la fruta en los mercados de destino y la acotada cantidad de fungicidas disponibles en el mercado, han llevado a la búsqueda de alternativas a los fungicidas sintéticos, la cual se ha enfocado a productos naturales, amigables con el medio ambiente y libres de residuos. El principal objetivo de este estudio fue evaluar la actividad de 15 extractos de macrohongos en el control de ambos patógenos. Los macrohongos fueron colectados desde su ambiente natural, posteriormente secados, triturados y macerados en alcohol al 95%, y los extractos resultantes fueron utilizados en bioensayos de inhibición in vitro e in vivo. Para el control in vitro se enmendó agar papa dextrosa con cada extracto en etanol al 1% donde se sembró micelio y conidias de los patógenos. El control in vivo se realizó sobre bayas de uva de mesa del cv. Red Globe sometidas o no a desinfección previa con NaClO (0,5%). A las bayas se les realizó una herida y luego se aplicaron los extractos 1 y 24 horas antes de la inoculación con conidias de los patógenos. Los extractos con mayor efectividad inhibitoria in vitro del crecimiento miceliar de B. cinerea fueron Suillus luteus, Agarical sp. y Amanita sp. los que inhibieron en un 92,9, 71,0 y 69,4%, respectivamente. Para el control in vitro de P. expansum los dos extractos que tuvieron un mayor efecto fueron los de Agarical sp. y Agaricus arvensis con un 35,3 y 34,6% de inhibición del crecimiento miceliar, respectivamente. Los extractos con mayor efectividad en la inhibición de la germinación de conidias fueron: Agarical sp. y Macrolepiota rhacodes, para B. cinerea, y Agaricus arvensis y Laetiporus sulphureus para P. expansum. En el control in vivo solo el extracto de Amanita sp. tuvo un efecto en la inhibición de la pudrición causada por B. cinerea sobre las bayas, aplicado 24 horas antes de la inoculación, e igualmente en bayas sin desinfectar inoculadas con P. expansum. / Postharvest rots of table grapes are a constant problem for the industry with Botrytis cinerea and Penicillium expansum as the most important pathogens. Restrictions on the maximum amount of pesticide residues allowed on the fruit, and the limited number of fungicides registered in the markets have prompted the look for alternatives to the traditional chemical fungicides, focusing mainly on natural products environmentally friendly and free from residue restrictions. This study was aimed to evaluate the activity of 15 extracts of mushrooms in the control of both pathogens. The mushrooms were collected from their natural sources, dried, grounded and macerated in ethanol 95%, and the extracts obtained were evaluated in vitro and in vivo. Potato dextrose agar media was amended with the ethanol extracts at a rate of 1%, for the in vitro tests with mycelia or conidia of the pathogens. In vivo assays were conducted on Red Globe berries that were surface disinfected with NaOCl (0,5 %) or not disinfected at all. The berries were wound inoculated with a spore suspension of each pathogen 1 or 24 hours after the extracts treatments. The extracts that gave the greatest inhibition of the mycelial growth of B. cinerea were those of Suillus luteus, Agarical sp. and Amanita sp, which gave a 92.9, 71.0 and 69.4 % inhibition, respectively. While the extracts with the higher inhibition of the mycelial growth of P. expansum were those of Agarical sp. and Agaricus arvensis with 35.3 and 34.6 % inhibition, respectively. The extracts with the higher inhibition of the conidia germination were those of Agarical sp. and Macrolepiota rhacodes, for B. cinerea, and Agaricus arvensis and Laetiporus sulphureus for P. expansum. Only the extract of Amanita sp. reduced the rot caused by B. cinerea when applied 24 hours before berry inoculation and the rot caused by P. expansum on berries that were not disinfected.

Memoria para optar al Título Profesional de: Ingeniero Agrónomo / El control químico para la pudrición gris es la principal herramienta para reducir su incidencia que puede ser lograda por medio de diversos compuestos fungicidas. El fludioxonil, ciprodinil y fenhexamid son moléculas con actividad botriticida y fueron desarrolladas a partir de los años 90. Sin embargo su eficacia se ha visto fuertemente afectada por la aparición de resistencia debido a su uso reiterado. Por otro lado algunos ingredientes activos utilizados en determinadas concentraciones suelen alterar el metabolismo de las plantas. El objetivo de este estudio fue evaluar el efecto de dos fungicidas aplicados al follaje de plantas jóvenes de Vitis vinifera, variedades Thompson Seedless y Chardonay sobre la actividad fotosintética. Las mediciones fueron realizadas 5 veces a lo largo del día durante 5 días. Se evaluaron los parámetros de fotoinhibición de la fotosíntesis, contenido de clorofilas, tasa de asimilación de CO2 y permeabilidad relativa de membranas. Para ello se realizaron dos ensayos consistentes en 4 tratamientos más un testigo (T1= ciprodinil (375g/kg) & fludioxonil (250g/kg), 60gr/hL; T2= ciprodinil (375g/kg) & fludioxonil (250g/kg), 120gr/hL agua; T3= fenhexamid (500g/L) 72,5cc/hL; T4= fenhexamid (500g/L) 145cc/hL agua). Los resultados no mostraron diferencias significativas entre tratamientos a lo largo del ensayo, indicando que los fungicidas no alteraron los parámetros fisiológicos registrados de las plantas. / Chemical control for gray mold is the principal tool to reduce its occurrence and it can be achieved with a number of different fungicide compounds. Fludioxonil, ciprodinil and fenhexamid are molecules with botriticide activity and were developed from the ’90s. However their efficacy has been seen to be markedly affected by the development of resistance due to repeated use. Moreover some active ingredients used in certain concentrations often alter plants’ metabolism. The aim of this study was to assess the effects of two fungicides applied to the leaves of young plants from Vitis vinifera varieties Thompson Seedless and Chardonnay on their photosynthetic activity. The measurements were carried out five times a day for five days. The variables that were tested were photoinhibition of photosynthesis; Chlorophylls content; Carbon dioxide assimilation and Membrane permeability. Two experiments were performed, consisting of four treatments and a control (T1= ciprodinil (375g/kg) & fludioxonil (250g/kg), 60gr/hL; T2= ciprodinil (375g/kg) & fludioxonil (250g/kg), 120gr/hL agua; T3= fenhexamid (500g/L) 72,5cc/hL; T4= fenhexamid (500g/L) 145cc/hL agua). The results did not show differences between plants subject to the different treatments over the course of the experiments, suggesting that fungicides do not affect the plants physiology.

Memoria para optar al título profesional de: Ingeniero Agrónomo Mención: Sanidad Vegetal / La pudrición gris, causada por el hongo Botrytis cinerea, corresponde al principal problema fitopatológico que enfrentan los productores de uva de mesa, puesto que limita su producción y exportación al desarrollarse pudriciones incluso en almacenaje. Para su control, se integran diferentes medidas entre las cuales el uso de fungicidas específicos es la base de los programas utilizados. Actualmente, la creciente preocupación por la presencia de residuos de fungicidas en la fruta y el riesgo ambiental asociado a su uso, además del desarrollo de resistencias en Botrytis a estas moléculas, han complicado su empleo como estrategia de control. Ante el cual se han aplicado métodos alternativos como la intensificación de prácticas culturales que disminuyan las condiciones predisponentes de la enfermedad, junto a herramientas naturales que incluyen el uso de extractos de cítricos y controladores biológicos como Trichoderma. Por otro lado, recientemente se ha elaborado un biofungicida con la bacteria antagonista Serratia plymuthica cepa CCGG2742, un controlador biológico de B. cinerea, que en este ensayo se ha probado su sensibilidad frente a fungicidas de uso común en vid, con el objeto de conocer su compatibilidad en un posible programa de control que integre estas estrategias. Se evaluaron los ingredientes activos boscalid, ciprodinil + fludioxonil, fenhexamida, iprodione, kresoxim methyl, pyrimethanil, tebuconazole y extracto de cítrico en concentraciones que fluctuaron entre 0 y 5.000 µg i.a. ∙ mL-1 y se calculó la EC50. Los valores de EC50 obtenidos fueron: 6,00∙104 ; 3,18∙107 ; 7,04∙1012 y 1,38∙1018 µg i.a. ∙ mL-1 , para fenhexamida, extracto de cítrico, tebuconazole y boscalid respectivamente, mientras que con iprodione, kresoxim methyl, pyrimethanil y la mezcla de c+f, no se obtuvieron valores de EC50 positivos, ni indicios de inhibición in vitro. De acuerdo a estos resultados, el uso de dosis comerciales de fungicidas no altera el desarrollo de la cepa CCGG2742. / Gray mold induced by Botrytis cinerea, is the most important disease of table grapes that causes significant losses to grape growers. Its ability to attack in the orchard and its ability to develop under conditions prevailing during storage, shipment and marketing make its control a challenge. Control programs have relied mainly on chemical strategies using specific fungicides. However, the growing public concern about fungicide residues in fruit, and the environmental risk associated to fungicide use, in addition to pathogen’s resistance development, have created a complicated situation for the continuous use of fungicides. Therefore, alternative methods have been developed for non-chemical control, such as cultural practices, and the use of natural products including citrus extracts and biological controls agents, as Trichoderma. Serratia plymuthica, antagonistic to B. cinerea, is a new biocontrol agent, and in this study the sensitivity of the strain CCGG2742 to fungicides commonly used in vineyards was tested, in order to know their compatibility for possible control programs that integrate these tools. Boscalid, ciprodinil + fludioxonil, fenhexamida, iprodione, kresoxim methyl, pyrimethanil, tebuconazole and citric extract were tested at concentrations ranging between 0 and 5,000 µg i.a. ∙ mL-1 . EC50 values obtained ranged between 5.48∙104 and 1.38∙1018 µg i.a. ∙ mL-1 . According to these results, commercial rates of the fungicides tested do not affect the development of S. plymuthica strain CCGG2742.

Submitted by VANESSA VOIGT PALARETTI (van_voigt@yahoo.com.br) on 2018-06-14T01:09:15Z No. of bitstreams: 1 TESE.vanessapalaretti.pdf: 4088105 bytes, checksum: 442eb1364fba0bb29cde74e7b9f5b3f1 (MD5) / Approved for entry into archive by Neli Silvia Pereira null (nelisps@fcav.unesp.br) on 2018-06-14T12:10:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 palaretti_vv_dr_jabo_int.pdf: 4088105 bytes, checksum: 442eb1364fba0bb29cde74e7b9f5b3f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-14T12:10:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 palaretti_vv_dr_jabo_int.pdf: 4088105 bytes, checksum: 442eb1364fba0bb29cde74e7b9f5b3f1 (MD5) Previous issue date: 2018-05-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As doenças fúngicas são as principais causas de perdas na pós-colheita do tomate, e são controladas por manejo cultural e fungicidas aplicados na pré-colheita. O tratamento hiperbárico na pós-colheita é um métodos físico, com potencial uso comercial na redução da deteriorização por fungos. Neste trabalho, a eficiência das pressões hiperbáricas para controlar o desenvolvimento das podridões de Botrytis cinerea e Alternaria sp. in vitro e em tomates ‘Débora’ foram avaliadas, bem como a atividade das enzimas antioxidantes e as relacionadas a defesa do vegetal. Os experimentos foram realizados em um sistema de pressão hiperbárica do Laboratório de Tecnologia Pós-colheita da FCAV-UNESP, Câmpus de Jaboticabal, utilizando as pressões de 100 (controle), 200, 400, 600 e 800 kPa à temperatura de 23±1°C, durante 3 e 6 dias. No ensaio in vitro as placas com os fungos permaneceram nas pressões e depois foram incubadas até que a colônia do controle atingisse a borda. No experimento in vivo, tomates inoculados com os fungos foram mantidos por 3 e 6 dias sob o tratamento nas pressões, com posterior armazenamento por mais 2 e 4 dias em condição de ambiente (23 °C, 50% UR, 100 kPa) para simular a comercialização. Avaliou-se o crescimento micelial, a taxa de germinação dos conídios dos fungos, incidência e severidade das podridões nos frutos, o metabolismo antioxidante (teor de licopeno e polifenóis totais) e a atividade das enzimas relacionadas à defesa dos tomates (peroxidase (POD), fenilalanina-amônia-liase (PAL), β 1,3 glucanase (GLU), superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT). As pressões hiperbáricas não apresentaram efeito fungistático sobre os patógenos, entretanto, houve redução no crescimento micelial e na taxa de germinação de B. cinerea após 3 dias na pressão de 800 kPa. As pressões elevadas de 600 e 800 kPa durante 3 dias reduziram a incidência (25%) e a severidade do mofo cinzento (68%), após 4 dias de armazenamento (3+4 dias). Enquanto a incidência e severidade da mancha de Alternaria (Alternaria sp.) não tiveram redução expressiva em ambos os períodos. Na pressão de 800 kPa, os frutos inoculados com B. cinerea e Alternaria sp. apresentaram um retardo no amadurecimento, evidenciado pelo menor conteúdo de licopeno e menor atividade da enzima POD, a qual está relacionada à senescência dos frutos. As pressões elevadas (600 e 800 kPa) promoveram a atividade das enzimas PAL, GLU e CAT dos tomates inoculados de ambos os patógenos por 3 dias, mantendo tendência similar após as condições de ambiente. Os frutos tratados com as pressões elevadas apresentaram incremento no conteúdo de polifenóis totais em relação ao controle, durante os períodos de armazenamento. As pressões não influenciaram a atividade da enzima SOD dos tomates, após os períodos de tratamentos. As pressões hiperbáricas de 600 e 800 kPa foram eficientes na redução de doenças na pós-colheita de tomates e também podem ter induzido a atividade de enzimas envolvidas na resistência às doenças. / Fungal rots are one of the major causes of postharvest losses in tomatoes, and they are controlled by cultural management and fungicidal applied in preharvest. The postharvest hyperbaric treatment is a physical method that it have potential to be used in commercial for reducing fungal decay. In this work, the efficiency of hyperbaric pressures to control rot development of Botrytis cinerea and Alternaria sp. in vitro and ‘Debora’ tomatoes were evaluated, also the activity of antioxidant and defense-related enzymes.The experiments were carried out in a hyperbaric pressure system at FCAV-UNESP Postharvest Technology Laboratory, Campus de Jaboticabal, using the pressures of 100 (control), 200, 400, 600 and 800 kPa at a temperature of 23 ± 1 ° C for 3 and 6 days. In vitro assay the Petri dishes with the fungi were kept at pressures after they were incubated until the control colony reached the edge. In vivo assay, tomatoes inoculated with the fungus were kept at 3 and 6 days under the treatment pressures, after they were stored for more 2 and 4 days at ambient conditions (23 °C, 50% RH, 100 kPa) to simulate the commercialization. It was evaluated the mycelial growth, germination rate of fungal conidia, incidence and severity of fruit rot, antioxidant metabolism (lycopene content and total polyphenols) and activity of defence-related enzymes (eroxidase (POD), phenylalanine ammonia-lyase (PAL), β 1,3 glucanase (GLU), superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT)). The hyperbaric pressures had no fungistatic effect on the pathogens, however, there was a reduction in mycelial growth and in the germination rate of B. cinerea after 3 days at 800 kPa. High pressures of 600 and 800 kPa for 3 days reduced the incidence (25%) and gray mold severity (68%) after 4 days of the storage (3 + 4 days). While the incidence and severity of black rot (Alternaria sp.) didn´t decrease significantly in both periods. At the pressure of 800 kPa, the fruits inoculated with B. cinerea and Alternaria sp. demonstrated a delay in ripening, as evidenced by the lower lycopene content and lower activity of the POD enzyme, which is related to fruit senescence. The high pressures (600 and 800 kPa) promoted the activity of the PAL, GLU and CAT enzymes of the tomatoes inoculated from both pathogens for 3 days, maintaining a similar trend after the ambient conditions. The fruits treated with high pressures demonstrated an increase in the total polyphenols content in relation to the control during storage periods. The pressures didn´t influence the activity of the SOD enzyme of the tomatoes, after the periods of treatments. Hyperbaric pressures of 600 and 800 kPa were efficient in reducing diseases in postharvest tomatoes and they must have induced the activity of enzymes involved in resistance to diseases.

Diversos estudos vêm demonstrando o potencial de plantas medicinais no controle de fitopatógenos, tanto por sua ação fungistática direta, quanto pela capacidade de induzir a defesa das plantas, indicando a presença de moléculas com características elicitoras. Nesse sentido foram desenvolvidos três experimentos no ano de 2009 e 2010, na Universidade Tecnológica Federal do Paraná – Campus de Dois Vizinhos, com objetivos de avaliar o potencial de preparados a base de calêndula (Calendula officinalis L.) na indução de fitoalexinas em cotilédones de soja, na indução de resistência em frutos de morango e o efeito fungistático sobre Botrytis cinerea in vitro. O delineamento experimental utilizado para os experimentos foi inteiramente casualizado com 15 tratamentos resultantes da combinação de três formas de extração (extrato alcoólico, infusão e maceração) e cinco concentrações (zero; 1,25; 2,5; 5 e 10%), sendo a concentração zero água destilada, em arranjo fatorial (3 x 5) com 4 repetições. O primeiro experimento avaliou o potencial fungistático dos preparados sobre B. cinerea in vitro. Em placas de Petri® foram adicionados no meio de cultura BDA (Batata Dextrose Ágar) os preparados nas diferentes concentrações. Após a solidificação, um orifício de 8 mm foi realizado no centro da placa e introduzindo-se 2μL da suspensão de conídios de B. cinerea. As placas foram mantidas em câmara de crescimento durante 7 dias a 25ºC, e no sétimo dia mediu-se o diâmetro do halo de crescimento do fungo. O segundo experimento avaliou a indução de fitoalexinas em cotilédones de soja em resposta aos preparados à base de calêndula. Sementes de soja foram semeadas em areia autoclavada e mantidas em temperatura ambiente por 10 dias. Em seguida os cotilédones das plântulas foram removidos e na face abaxial destes foram aplicados os tratamentos. Após seguir os procedimentos metodológicos da técnica de extração, obteve-se via espectrofotometria a quantificação da fitoalexina gliceolina. O terceiro experimento avaliou o efeito dos preparados a base de C. officinalis sobre os parâmetros físico-químicos e bioquímicos de frutos de morango relacionados com a indução de resistência. Os frutos foram acondicionados em bandejas plásticas e pulverizados com os diferentes tratamentos. Após 6 horas da pulverização dos preparados foi pulverizada solução contendo cerca 104 conídios do fungo B. cinerea. As avaliações foram realizadas após 3 dias da implantação do experimento. Os parâmetros avaliados foram: perda de massa, incidência de podridões, acidez titulável, firmeza de polpa e sólidos solúveis totais, e as bioquímicas foram: açúcares totais, antocianinas, flavonóides e atividade da enzima fenilalanina amônia-liase (FAL). Os resultados demonstraram que a maceração em todas as suas concentrações inibiu o crescimento do fungo B. cinerea in vitro, sendo que a partir de 2,5% observou-se inibição total. O tratamento com infusão na sua maior concentração (10%) também apresentou resposta positiva na inibição do crescimento de B. cinerea. Os preparados de C. officinalis apresentaram capacidade de indução das fitoalexinas gliceolinas em cotilédones de soja. Na aplicação dos preparados em pós-colheita de morangos, não ocorreu influência dos tratamentos sobre perda de massa, incidência de podridões, firmeza de polpa, acidez titulável, sólidos solúveis totais, açúcares totais e antocianina. Para flavonóides o extrato alcoólico em todas as concentrações e a infusão a partir de 5% estimularam sua produção. A atividade da enzima FAL foi estimulada pela aplicação dos extratos. / Several studies have demonstrated the potential of medicinal plants in the pathogens control, through its direct fungistatic action or its ability to induce plant defense, it suggesting the presence of molecules with characteristics elicitors. Three experiments were carried out on 2009 and 2010, in the Universidade Tecnológica Federal do Paraná, Dois Vizinhos city (PR – Brazil). The aim of this work was to evaluate prepared caledula (Calendula officinalis L.) potential for phytoalexins induction in the soybean cotyledons, resistance induction in the strawberry fruits and fungistatic effect of Botrytis cinerea in vitro. The experimental design was completely randomized with 15 treatments resulting from the combination of three forms of extraction (alcohol extract, infusion and maceration) and five concentrations (zero, 1.25, 2.5, 5 and 10%), with zero concentration distilled water in a factorial (3 x 5) with four replications the distilled water was used as control. The first experiment evaluated the potential fungistatic preparations in the B. cinerea control. The preparations with the different concentrations were put in Petri dishes with BDA culture media. After the media solidification, a hole of 8 mm was punched in the dishes Petri center and in this hole was introduced 2μL of spore B. cinerea suspension. The Petri dishes were kept in growth chamber for 7 days at 25°C. In the seventh day, the halo diameter fungus growth was evaluated. The second experiment evaluated the phytoalexins induction in the soybean cotyledons soybean as result of C. officinalis derivatives. Soybean seeds were sown in sterilized sand and it were kept at room temperature during 10 days. Then, the seedlings cotyledons were removed and on the abaxial part it was applied the treatments. After methodological procedures of extraction technique, it was obtained the phytoalexins glyceolin quantification by for spectrophotometry. The third study evaluated the C. officinalis solutions effect on the strawberry fruits physic-chemical and biochemical characteristics. The fruits were packed in plastic trays and it sprayed with different treatments. After six hours of the treatments spraying, it was sprayed a solution containing about 10-4 spore of B. cinerea fungus. After 3 days, it was realized the evaluations. The mass loss, rots incidence, titratable acidity, flesh firmness, total soluble solids, totals sugars, anthocyanins, flavonoids and activity of phenylalanine-amonialiase (PAL) were evaluated. The results showed that the maceration with all over the concentrations used, it inhibited of the B. cinerea fungus in vitro growth. Concentrations higher that 2.5%, presented total inhibition ability. Treatment with infusion using the highest concentration (10%) also showed positive response for B. cinerea growth inhibiting. The C. officinalis solutions presented induction capacity of the phytoalexins glyceolin in soybean cotyledons. It was observed that the solutions applied during the strawberry postharvest didn’t influence in the physico-chemical characteristics (mass loss, rots incidence, titratable acidity, flesh firmness and total soluble solids). In the biochemical analyzes for totals sugars and anthocyanins wasn’t observed statistical difference among the treatments. The alcoholic extract all over the concentrations and the infusion with concentrations higher than 5% stimulated the flavonoids productions. The PAL enzyme activity was stimulated by the application of extracts.

Diversos estudos vêm demonstrando o potencial de plantas medicinais no controle de fitopatógenos, tanto por sua ação fungistática direta, quanto pela capacidade de induzir a defesa das plantas, indicando a presença de moléculas com características elicitoras. Nesse sentido foram desenvolvidos três experimentos no ano de 2009 e 2010, na Universidade Tecnológica Federal do Paraná – Campus de Dois Vizinhos, com objetivos de avaliar o potencial de preparados a base de calêndula (Calendula officinalis L.) na indução de fitoalexinas em cotilédones de soja, na indução de resistência em frutos de morango e o efeito fungistático sobre Botrytis cinerea in vitro. O delineamento experimental utilizado para os experimentos foi inteiramente casualizado com 15 tratamentos resultantes da combinação de três formas de extração (extrato alcoólico, infusão e maceração) e cinco concentrações (zero; 1,25; 2,5; 5 e 10%), sendo a concentração zero água destilada, em arranjo fatorial (3 x 5) com 4 repetições. O primeiro experimento avaliou o potencial fungistático dos preparados sobre B. cinerea in vitro. Em placas de Petri® foram adicionados no meio de cultura BDA (Batata Dextrose Ágar) os preparados nas diferentes concentrações. Após a solidificação, um orifício de 8 mm foi realizado no centro da placa e introduzindo-se 2μL da suspensão de conídios de B. cinerea. As placas foram mantidas em câmara de crescimento durante 7 dias a 25ºC, e no sétimo dia mediu-se o diâmetro do halo de crescimento do fungo. O segundo experimento avaliou a indução de fitoalexinas em cotilédones de soja em resposta aos preparados à base de calêndula. Sementes de soja foram semeadas em areia autoclavada e mantidas em temperatura ambiente por 10 dias. Em seguida os cotilédones das plântulas foram removidos e na face abaxial destes foram aplicados os tratamentos. Após seguir os procedimentos metodológicos da técnica de extração, obteve-se via espectrofotometria a quantificação da fitoalexina gliceolina. O terceiro experimento avaliou o efeito dos preparados a base de C. officinalis sobre os parâmetros físico-químicos e bioquímicos de frutos de morango relacionados com a indução de resistência. Os frutos foram acondicionados em bandejas plásticas e pulverizados com os diferentes tratamentos. Após 6 horas da pulverização dos preparados foi pulverizada solução contendo cerca 104 conídios do fungo B. cinerea. As avaliações foram realizadas após 3 dias da implantação do experimento. Os parâmetros avaliados foram: perda de massa, incidência de podridões, acidez titulável, firmeza de polpa e sólidos solúveis totais, e as bioquímicas foram: açúcares totais, antocianinas, flavonóides e atividade da enzima fenilalanina amônia-liase (FAL). Os resultados demonstraram que a maceração em todas as suas concentrações inibiu o crescimento do fungo B. cinerea in vitro, sendo que a partir de 2,5% observou-se inibição total. O tratamento com infusão na sua maior concentração (10%) também apresentou resposta positiva na inibição do crescimento de B. cinerea. Os preparados de C. officinalis apresentaram capacidade de indução das fitoalexinas gliceolinas em cotilédones de soja. Na aplicação dos preparados em pós-colheita de morangos, não ocorreu influência dos tratamentos sobre perda de massa, incidência de podridões, firmeza de polpa, acidez titulável, sólidos solúveis totais, açúcares totais e antocianina. Para flavonóides o extrato alcoólico em todas as concentrações e a infusão a partir de 5% estimularam sua produção. A atividade da enzima FAL foi estimulada pela aplicação dos extratos. / Several studies have demonstrated the potential of medicinal plants in the pathogens control, through its direct fungistatic action or its ability to induce plant defense, it suggesting the presence of molecules with characteristics elicitors. Three experiments were carried out on 2009 and 2010, in the Universidade Tecnológica Federal do Paraná, Dois Vizinhos city (PR – Brazil). The aim of this work was to evaluate prepared caledula (Calendula officinalis L.) potential for phytoalexins induction in the soybean cotyledons, resistance induction in the strawberry fruits and fungistatic effect of Botrytis cinerea in vitro. The experimental design was completely randomized with 15 treatments resulting from the combination of three forms of extraction (alcohol extract, infusion and maceration) and five concentrations (zero, 1.25, 2.5, 5 and 10%), with zero concentration distilled water in a factorial (3 x 5) with four replications the distilled water was used as control. The first experiment evaluated the potential fungistatic preparations in the B. cinerea control. The preparations with the different concentrations were put in Petri dishes with BDA culture media. After the media solidification, a hole of 8 mm was punched in the dishes Petri center and in this hole was introduced 2μL of spore B. cinerea suspension. The Petri dishes were kept in growth chamber for 7 days at 25°C. In the seventh day, the halo diameter fungus growth was evaluated. The second experiment evaluated the phytoalexins induction in the soybean cotyledons soybean as result of C. officinalis derivatives. Soybean seeds were sown in sterilized sand and it were kept at room temperature during 10 days. Then, the seedlings cotyledons were removed and on the abaxial part it was applied the treatments. After methodological procedures of extraction technique, it was obtained the phytoalexins glyceolin quantification by for spectrophotometry. The third study evaluated the C. officinalis solutions effect on the strawberry fruits physic-chemical and biochemical characteristics. The fruits were packed in plastic trays and it sprayed with different treatments. After six hours of the treatments spraying, it was sprayed a solution containing about 10-4 spore of B. cinerea fungus. After 3 days, it was realized the evaluations. The mass loss, rots incidence, titratable acidity, flesh firmness, total soluble solids, totals sugars, anthocyanins, flavonoids and activity of phenylalanine-amonialiase (PAL) were evaluated. The results showed that the maceration with all over the concentrations used, it inhibited of the B. cinerea fungus in vitro growth. Concentrations higher that 2.5%, presented total inhibition ability. Treatment with infusion using the highest concentration (10%) also showed positive response for B. cinerea growth inhibiting. The C. officinalis solutions presented induction capacity of the phytoalexins glyceolin in soybean cotyledons. It was observed that the solutions applied during the strawberry postharvest didn’t influence in the physico-chemical characteristics (mass loss, rots incidence, titratable acidity, flesh firmness and total soluble solids). In the biochemical analyzes for totals sugars and anthocyanins wasn’t observed statistical difference among the treatments. The alcoholic extract all over the concentrations and the infusion with concentrations higher than 5% stimulated the flavonoids productions. The PAL enzyme activity was stimulated by the application of extracts.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-09-19T17:34:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 672894 bytes, checksum: 1244927f20e5eed71f3171916884e265 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-19T17:34:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 672894 bytes, checksum: 1244927f20e5eed71f3171916884e265 (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Botrytis cinerea, o agente etiológico do mofo cinzento, é um patógeno importante em morangueiros. Clonostachys rosea é efetivo no biocontrole dessa doença em diversas culturas, em condições controladas e de campo. O antagonista pode, ainda, promover o crescimento, aumentar a produção e induzir respostas de defesa nas plantas. Objetivando-se investigar os efeitos da aplicação do antagonista na população do patógeno e no metabolismo da planta, estudou-se a interação entre C. rosea, B. cinerea e morangueiros com base na dinâmica populacional dos fungos e no perfil metabólico do hospedeiro. Avaliou-se a colonização foliar de ambos os fungos e a sobrevivência epifítica de C. rosea em folhas, em câmara de crescimento e em cultivos comerciais. O antagonista se estabeleceu e reduziu a colonização por B. cinerea, principalmente quando aplicado semanalmente. A população de C. rosea diminuiu com o tempo após a aplicação, e a intensidade de colonização pelo patógeno foi inversamente proporcional à do antagonista. Em câmara de crescimento, a população epifítica do antagonista reduziu-se substancialmente aos 3 dias da aplicação. Em condições de campo, onde o intervalo mínimo entre a última aplicação e coleta de folhas foi de 7 dias, não foi possível quantificar a população epifítica do antagonista. Comparou-se o perfil metabólico de morangueiros tratados com C. rosea em intervalos de 7, 14 ou 28 dias ao de morangueiros não tratados, e verificou-se que a aplicação semanal alterou o perfil metabólico. Aumentos significativos nos níveis de citrato e succinato, compostos intermediários do ciclo de Krebs, de alguns fitoesteróis, fitoestrogênios, cafeína e piceatanol foram observados. Tais alterações podem estar relacionadas à promoção de crescimento e ativação do sistema de defesa. Concluiu-se que C. rosea afetou a dinâmica populacional de B. cinerea em tecidos assintomáticos e alterou o perfil metabólico de morangueiros. Esses resultados subsidiam estudos subsequentes para elucidar o modo de ação de agentes de biocontrole. / Botrytis cinerea, the causal agent of gray mold, is an important pathogen of strawberry plants. Clonostachys rosea is effective in the biocontrol of gray mold in several crops, in growth chamber or field conditions. The antagonist may also promote growth, increase the production and induce defense responses of plants. Aiming to investigate the effects of antagonist application on pathogen population and plant metabolism, we studied the interaction of C. rosea, B. cinerea and strawberry plants based on the population dynamics of both fungi and metabolic profile of the host. We assessed leaf colonization of both fungi and the epiphytic survival of C. rosea on leaves, under growth chamber and in commercial cultivations. The antagonist established in leaves and reduced the colonization by B. cinerea, mainly when applied weekly. The population of C. rosea decreased over time after the application and tissue colonization by the pathogen was inversely proportional to the colonization by the antagonist. Under growth chamber the antagonist population was substantially reduced 3 days after applied. Under field conditions, which the minimal interval between last application and the collection of leaves was 7 days, it was not possible to quantify the epiphytic population of the antagonist. We compared the metabolic profiles of strawberry plants treated with C. rosea at intervals of 7, 14, or 28 days with the profiles of untreated plants, and found that weekly applications altered the metabolic profiles. There was a significant increase in the levels of citrate and succinate, intermediate compounds in the Krebs cycle, some phytosterols, phytoestrogens, caffeine, and piceatannol. These changes may be related to growth promotion and activation of plant defense system. In conclusion, C. rosea affected the population dynamics of B. cinerea in symptomless tissues and changed the metabolic profile of strawberry plants. These results can support subsequent studies aiming to elucidate the action mode of biocontrol agents.