Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-17T11:35:25Z No. of bitstreams: 1 Tese Danielle Versao Final.pdf: 5521521 bytes, checksum: bcd4e1200342929a6452f7261e7193ee (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-17T11:35:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Danielle Versao Final.pdf: 5521521 bytes, checksum: bcd4e1200342929a6452f7261e7193ee (MD5) Previous issue date: 2011-08-31 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Estudos anteriores demonstraram que macrófagos de pacientes lepromatosos possuem um fenótipo regulador que contribui para a imunossupressão observada na hanseníase. IDO, CD86 e HLA-DR são moléculas altamente expressas por macrófagos de pacientes lepromatosos, como também o receptor “scavenger” CD163, regulado pela IL-10. Este trabalho foi realizado com o intuito de analisar a expressão de CD163 nas lesões cutâneas de pacientes polares da hanseníase e em monócitos infectados pelo Mycobacterium leprae (ML). Observamos um aumento de macrófagos CD163+IDO+ nas lesões e nas células isoladas do infiltrado inflamatório de pacientes LL. Ademais, durante o período de cultura de 6 dias dos macrófagos isolados das lesões lepromatosas, houve uma gradativa redução da expressão gênica de CD163, IDO e IL-10, assim como dos receptores de superfície CD163, CD209, HLA-DR, CD86 e CD14 observada por citometria de fluxo, fato que ocorreu concomitantemente com a saída de ML destas células. A expressão de células CD163+IDO+CD209+ aumentou em monócitos de indivíduos saudáveis, estimulados com ML irradiado obtido de extratos de lesão. Adição de citocalasina B na cultura de monócitos reduziu a expressão de CD163 nessas células, e, na presença de anti- CD163, a entrada de bactérias nos monócitos também foi reduzida. A adição da anti- IL-10 em cultura de monócitos de indivíduos sadios reduziu a expressão de CD163 até mesmo na presença do ML. Além disso, os níveis séricos de sCD163, IL-10 e heme estavam aumentados nos pacientes lepromatosos, em comparação com pacientes tuberculóides e indivíduos sadios, assim como os depósitos intracelulares de ferro. Estes resultados sugerem que o perfil de expressão de CD163 é importante na endocitose e sobrevivência do ML no polo lepromatoso da hanseníase. / According to prior studies, macrophages from lepromatous patients present a regulatory phenotype that contributes to the immunosuppression observed in the disease. IDO, CD86, and HLA-DR molecules are highly expressed by macrophages from lepromatous patients, as well the scavenger receptor CD163, regulated by IL- 10. The purpose of this study was to analyze CD163 expression on polar leprosy skin lesions and monocytes infected by Mycobacterium leprae. We observed an increased number of CD163+IDO+ in the lesions and cells isolated from the inflammatory infiltrate of LL patients. Moreover, during the 6-day culture of macrophages isolated from lepromatous lesions, the gene expression of CD163, IDO and IL-10 and the surface receptors CD163, CD209, HLA-DR, CD86, CD14 presented a gradual decrease, as shown by flow cytometry, simultaneously with the output of ML from these cells. The expression of IDO+CD163+CD209+ cells was augmented in monocytes from healthy individuals, stimulated with irradiated ML, obtained from extracts of lesion. The addition of cytochalasin B to monocyte culture reduced the expression of CD163 in these cells, and, in presence of anti-CD163, the bacterial input into monocytes was also reduced. The addition of anti-IL-10 in monocyte culture from healthy individuals led to a decrease at the expression of CD163, even in presence of ML. Besides, serum levels of sCD163, IL-10 and heme were increased in lepromatous patients, when compared to tuberculoid patients and healthy controls, while intracellular iron deposits were also augmented. These results suggest the relevance of CD163 expression profile for endocytosis and also for the survival of ML itself in lepromatous patients.

Submitted by Rafael Vieira (vieira.rafa1986@gmail.com) on 2016-01-06T18:57:51Z No. of bitstreams: 1 dissertacao final rafael.pdf: 11211535 bytes, checksum: e982b9dd12cb7bf43a451db3f5e30076 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-01-06T19:24:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vieira_r_me_araiq_par.pdf: 1125273 bytes, checksum: 201f41df3c870e0118ce7d37d6eca396 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-06T19:24:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vieira_r_me_araiq_par.pdf: 1125273 bytes, checksum: 201f41df3c870e0118ce7d37d6eca396 (MD5) Previous issue date: 2015-12-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho de mestrado tem, como foco principal, analisar o comportamento do fungo Xylaria sp. perante variações físico-químicas, através da abordagem OSMAC (One Strain, Many Compounds). Para realizar tais induções e explorar a variabilidade da rede metabólica deste micro-organismo, um planejamento fatorial foi desenhado visando induzir a variabilidade (ou a potencialização) de metabólitos. Diante de respaldos quimiométricos, induções planejadas foram impostas ao micro-organismo e observou-se variações no perfil químico nos extratos brutos. Somado a isso, técnicas de desreplicação foram usadas a fim de estudar quimicamente as matrizes complexas produzidas por este fungo visando a produção de metabólitos de alto valor agregado e determinou-se condições específicas para produção de moléculas de citocalasina D e de griseofulvina. / This work has as its main focus, analyze the behavior of the fungus Xylaria sp. before physicochemical variations via the OSMAC approach (One Strain, Compounds Many). To achieve such induction and exploit the variability of the metabolic network of this micro-organism, a factorial design was designed to induce variability (or potentiating) metabolites. Before chemometric backrests, planned inductions were imposed on the micro-organism and it was observed variations in the chemical profile in crude extracts. Added to this, dereplication techniques were used to study the chemically complex matrices produced by this fungus aimed at producing high added value and metabolites was determined specific conditions for the production of molecules cytochalasin D and griseofulvin.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Aquicultura, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T03:07:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 297103.pdf: 207947 bytes, checksum: eaca0841bbea8b409ef58133cad20397 (MD5) / Três métodos de indução à triploidia (3N) foram testados em ostras diplóides (Crassostrea gigas), sendo dois químicos, Citocalasina-B (CB) e 6-dimetilaminopurina (6-DMAP) e um físico de temperatura. O objetivo foi avaliar uma tecnologia de indução à triploidia apropriada às características peculiares do Laboratório de Moluscos Marinhos da UFSC. Três experimentos foram realizados separadamente, a 25º C, e em todos foram obtidas larvas triplóides viáveis. No experimento-I avaliou a eficiência de indução à triploidia com a CB [0,5 mg L-1] e 6-DMAP [390 µmols L-1], sendo o tratamento com CB (57% 3N) estatisticamente mais eficiente que a 6-DMAP (22,32% 3N). No experimento-II, testou a eficiência de indução à triploidia com a CB [0,5 mg L-1] e 6-DMAP [450 µmols L-1], não havendo diferença entre os tratamentos (CB - 55% 3N e 6-DMAP - 56% 3N). No experimento-III a eficiência de indução à triploidia com CB [0,5 mg L-1] e com choque de temperatura (25º-36º C), sendo que os tratamentos não tiveram diferença significativa (CB - 57,31% 3N e Temperatura - 45,29% 3N). Em ambos os experimentos foi observada uma alta mortalidade nos tratamentos com os químicos, em especial a CB. A partir desses resultados, a substituição da CB por outros métodos de indução demonstrados é necessária, tendo em vista seu alto custo de aquisição, e ainda a alta toxicidade da substância, tanto ao meio ambiente quanto ao operador.

Escherichia coli enterohemorrágicas (EHEC) que possuem a Ilha de Patogenicidade LEE são importantes patógenos humanos. A habilidade de adesão, invasão e perfil genético têm sido estudados, já que sorotipos que não possuem LEE tem sido isolados de pacientes com doença severa e intracelularmente. Das nove amostras relacionadas com doença, quatro (44.5%) apresentaram stx2+. Todas foram positivas para o gene lpfA e iha, e negativas para toxB. Três (33,3%) apresentaram saa e cinco hly. A maioria apresentou padrão de adesão difusa e invasão negativa em células HEp-2. Em CaCO-2 apresentaram aderência com variados graus de intensidade, e a maioria das amostras testadas apresentou invasão maior que 3,3%. Frente ao inibidor de polimerização de actina citocalasina D, houve significativa redução nos níveis de invasão, sugerindo que estas amostras utilizam um mecanismo da célula hospedeira para internalização, e que provavelmente, fatores de virulência como adesinas, favorecem a adesão das mesmas, compensando a ausência do LEE, e facilitando a instalação da infecção. / Enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) that possess the pathogenic island LEE are important human pathogens. The adhesion ability, invasion and genetic profile have been studied, since serotypes that do not possess LEE have been isolated from humans with severe disease and found intracellular. Nine strains related with SHU, four (44,5%) were stx2+. All strains were positive for IpfA and iha genes and negative for toxB. Three (33,3%) showed saa and five hly. The most strains showed a diffusely adhesion pattern and negative invasion in HEp-2 cells. It presented various degrees of adhesion, and the most tested strains showed invasion high than 3,3% in CaCO-2. That was a significant reduction of invasion in the presence of actin polymerization inhibitor Citochalasin D, suggesting that these strains use a host cell mechanism to invade, and probably virulence factors, like adhesins, favors this adhesion and compensate LEE absence, promoting the installation of infection.

Escherichia coli enterohemorrágicas (EHEC) que possuem a Ilha de Patogenicidade LEE são importantes patógenos humanos. A habilidade de adesão, invasão e perfil genético têm sido estudados, já que sorotipos que não possuem LEE tem sido isolados de pacientes com doença severa e intracelularmente. Das nove amostras relacionadas com doença, quatro (44.5%) apresentaram stx2+. Todas foram positivas para o gene lpfA e iha, e negativas para toxB. Três (33,3%) apresentaram saa e cinco hly. A maioria apresentou padrão de adesão difusa e invasão negativa em células HEp-2. Em CaCO-2 apresentaram aderência com variados graus de intensidade, e a maioria das amostras testadas apresentou invasão maior que 3,3%. Frente ao inibidor de polimerização de actina citocalasina D, houve significativa redução nos níveis de invasão, sugerindo que estas amostras utilizam um mecanismo da célula hospedeira para internalização, e que provavelmente, fatores de virulência como adesinas, favorecem a adesão das mesmas, compensando a ausência do LEE, e facilitando a instalação da infecção. / Enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) that possess the pathogenic island LEE are important human pathogens. The adhesion ability, invasion and genetic profile have been studied, since serotypes that do not possess LEE have been isolated from humans with severe disease and found intracellular. Nine strains related with SHU, four (44,5%) were stx2+. All strains were positive for IpfA and iha genes and negative for toxB. Three (33,3%) showed saa and five hly. The most strains showed a diffusely adhesion pattern and negative invasion in HEp-2 cells. It presented various degrees of adhesion, and the most tested strains showed invasion high than 3,3% in CaCO-2. That was a significant reduction of invasion in the presence of actin polymerization inhibitor Citochalasin D, suggesting that these strains use a host cell mechanism to invade, and probably virulence factors, like adhesins, favors this adhesion and compensate LEE absence, promoting the installation of infection.